Secme-17579 1

Universidad Autónoma del Estado de México
Facultad de Química
Licenciatura en Química Farmacéutica Biológica
MANUAL DE PRÁCTICAS DE LABORATORIO DE

BIOQUÍMICA METABOLICA
M. en P. E. Ana Margarita Arrizabalaga Reynoso

Dr. Enrique Morales Ávila
QFB. Cynthia Elena Enríquez García
Toluca de Lerdo; Estado de México. 1 de Febrero de 2018

Fecha de Aprobación
20 de Septiembre de 2018
Sesión Ordinaria de los H. H. Consejo Académico y de Gobierno
1
INDICE
Página
Presentación 3
Propósito general del curso 4
Introducción 5
Sistema de Evaluación 9
Reglamento de Laboratorio de la Bioquímica Metabólica 10
Programa de Prácticas de Laboratorio 12
1. Propiedades fisicoquímicas de los L ípidos 13
2. Separación de Fosfolípidos por cromatografía en capa
24
fina
3. Hidrólisis enzimática de los L ípidos de la leche 34
4. Determinación de la actividad de las T ransaminasas 41
5. Determinación de Urea 47
6. Extracción y purificación de Ácido Desoxirribonucleico
52
de chícharos
7. Aislamiento y purificación de Ácido Ribonucleico de
58
levadura de panificación
8. Determinación de F ósforo en Ácido Ribonucleico 63
Bibliografía 70
Anexos 71
Anexo núm.1 Preparación de reactivos especiales 72
Anexo núm.2 Lineamientos de Laboratorio 74
Anexo núm.3 Reglamento Interno de Laboratorios 77
Anexo núm.4 Formato del Reporte de Laboratorio
2
PRESENTACION
La B I O Q U Í M I C A se def inirse como la ciencia que estudia los f undament os
quím icos de la vida (Harper, 201 0). Considerando a la célula (del lat ín
cellula, diminutivo de cella, ‘hueco’) como la unidad morf ológica y f uncional
de todo ser vivo; la B I O Q U Í M I C A es la ciencia de los const ituyentes quím icos
de las células, de las reacciones y de los procesos que experimentan.
El pr incipal objet ivo de la B I O Q U Í M I C A es la comprensión, en el nivel
molecular, de todos los procesos quím icos relacionados con las células. Para
lograr este objet ivo los bioquím icos han buscado aislar las numerosas
moléculas que se encuentran en las células, determ inar su estruct ura y
analizar su f unción.
El conocim iento de la B I O Q U Í M I C A es esencial para todas las ciencias de
la vida. Por ejemplo, la B I O Q U Í M I C A de los Ácidos Nucleicos ocupa un lugar
f undamental justo en el corazón de la Genética; a su vez, el uso de métodos
genéticos ha sido crucial par a dilucidar muchas áreas de la B I O Q U Í M I C A . La
Fisiolog ía, el estudio de la f unción del cuerpo, se superpone con la
B I O Q U Í M I C A casi por complet o. En la Inmunolog ía se emplean muchas
técnicas bioquím icas y numerosos métodos inmunológicos han encontrado
amplio uso por investigadores bioquím i cos. La Farmacolog ía y la Farmacia s e
f undamentan en un solo conocimiento de la B I O Q U Í M I C A y de la Fisiolog ía, en
particular, casi t odos los f ármacos son metabolizados media nte reacciones
catalizadas por E nzimas. Los venenos actúan sobre reacciones o proce sos
bioquím icos; lo cual representa el objet o de estudio de la Toxicolog ía. Los
métodos bioquím icos cada vez reciben un uso más amplio en la investigación
relacionada con los aspect os básicos de la Patolog ía (el estudio de la
enf ermedad), como la inf lamaci ón, la lesión celular y el cáncer. Muchos
investigador es en Microbiolog ía emplea n métodos bioquímicos de manera
casi exclusiva para la identif icación de m icroorganismos .
Estas relaciones no sorprenden porque la vida como se le conoce
depende de reaccione s y procesos bioquím icos. De hecho las ant iguas
barreras entre las ciencias de la vida están derrumbándose y la B I O Q U Í M I C A
está llegando a ser, cada vez de maner a más f recuente, su lenguaje común.
Ahora bien, una relación recíproca entr e la B I O Q U Í M I C A y la Medicina
han estimulado avances mutuos. Las dos preocupaciones más importantes
para los invest igador es en las ciencias de la salud - y en particular para los
médicos- son tanto el entendim ient o y el mant enimiento de la salud, como la
comprensión y el trat amient o ef ectivo de las enf ermedades. La B I O Q U Í M I C A
tiene enormes reper cusiones sobre estas dos preocupaciones f undamentales
de la medicina y del estudio de aspectos relacionados con la salud y la
enf ermedad (Harper, 2010).
3
PROPÓSITO DEL CURSO
Involucrar al estudiante en el estudio de los f enómenos bioquímicos, a través

del método cient íf ico para ref orzar los conocimientos de la teor ía, analizando
las reacciones quím icas implícitas en las rutas metabólicas , de tal maner a
que sea capaz de aplicar y vincular concept os para adquirir habilidades y
competencias básicas dentro de un labor atorio de B I O Q U Í M I C A .
La enseñanza de la unidad de aprendizaje de B I O Q U Í M I C A se realiza

empleando act ividades estratégic as en donde el prof esor toma un papel más
direct i vo al inicio del curso, proporcionando un cont e xt o de apoyo
(andam iaje) amplio; a medida que aum enta la competencia del alumno en
este dom inio, se reduce la participación del prof esor. Dur ante todo este
proceso el alumno debe manif estar un alto nivel de co mpromiso en la
ejecución de las act ividades diseñadas en este manual .
El programa de est udios de la unidad de aprendizaje de B I O Q U Í M I C A

M E T AB Ó L I C A incluye la descr ipción de las biomoléculas com o los l ípidos, las
proteínas y los ácidos nucleicos; los proc esos m etabólicos para el
aprovecham iento y síntesis de los lípidos y de las proteínas, así como los
mecanismos de replicación, transcr ipción, traducción del ADN y la
participación del ARN en la sínt esis de proteínas. Los contenidos f ueron
seleccionados par a proporcionar al estudiante aprendizajes teór ico –
metodológicos, además de desarrollar las habilidades, actitudes y valores
necesarios para proceder cient íf icament e en el manejo de inf ormación tanto
analógica ( libros, revistas, publicaciones) como digita l (bases de datos,
internet) requeridos para su desempeño prof esional como Quím ico
Farmacéut ico Biólogo acorde a lo que demanda su entorno social.
La unidad de aprendizaje de B I O Q U Í M I C A M E T A B Ó L I C A Y L A S P R Á C T I C A S
DE L A B O R AT O R I O ,
se ubican en el cuarto per iodo escolar del Proyecto
Curricular 2015 de la Licenciatura e n Quím ica Farmacéutic a Biológica de la
Facultad de Química de la Universidad Autónoma del Estado de México y
está enf ocada básicamente al estudio de las propiedades y métodos de
identif icación de los lípidos, proteínas y ácidos nucleicos. Los procedim ient os
aquí utilizados no son excluyentes de otros que pudieran ensayarse, los que
aquí se presentan fueron elegidos con base en su f actibilidad técnica, en
recursos hum anos y económ icos, así como e n tiempo, ajustándose a los
objetivos que marca el programa de la unidad de aprendizaje .
4
INTRODUCCION
La B I O Q U Í M I C A es la ciencia que estudia las bases moleculares de la vida;
por lo que se ocupa de la composición quím ica de la materia viva, la relación
estructura-f unción de las moléculas caracter ísticas de los seres vivos
(biomoléculas), así como de las transf ormaciones quím icas que se llevan a
cabo en dichos organismos (metabolism o) y los mecanismos moleculares que
inter vienen en la reg ulación de tales transf ormaciones.
La B I O Q U Í M I C A es una ciencia relat ivam ente nueva, ya que se reconoce

como tal a inicios del siglo XX y de hecho el térm ino B I O Q U Í M I C A se empleó
por vez pr imera en el año 1903. La B I O Q U Í M I C A ha contribuido al desarrollo
de otras especialidades biológicas, particularmente las biom édicas.
Numerosos aportes de la B I O Q U Í M I C A han desempeñado un papel

destacado en los logros exper imentados en las ciencias médicas, entre est os
la compr ensión completa de las causas moleculares de numerosas
enf ermedades, el desarrollo de variadas técnicas para el diagnóst ico, así
como el f undament o para la elabor ación de ciertos medicamentos en el
tratamiento de deter minadas af ecciones son ejemplos de la aplicación directa
de la B I O Q U Í M I C A a la Medicina. De ahí la importancia de su estudio para los
prof esionales de las ciencias médicas.
Cua dr o n úm . 1
Al gu no s u so s de l a s inv e st i ga ci on es b ioq uím ic a s y pr ue ba s de l abo r ato rio con
re l ac ión a l a s enf e rm ed ad es
Uso Ejemplo
R e ve l a r l a s c a u s a s y l o s m e c a n i s m o s D e m o s t r a c i ó n d e l a n a t u r a l e za d e l o s
fundamentales de enfermedades defectos genéticos en la fibrosis quística
Sugerir tratamientos racionales de Prescripción de una dieta con bajo
enfermedades con base en los resultados contenidos de fenilalanina para el
del inciso anterior tratamiento de la fenilcetonuria
A yu d a r en el diagnóstico de Uso de las concentraciones plasmáticas de
enfermedades específicas troponina I o T en el diagnóstico del infarto
al miocardio
Actuar como pruebas de detección para U s o d e l a m e d i c i ó n d e l a t i r o xi n a o d e u n a
el diagnóstico temprano de ciertas h o r m o n a e s t i m u l a n t e d e l a t i r o i d e s ( TH S ) e n
enfermedades la sangre en el diagnóstico neonatal de
hipotiroidismo congénito
A yu d a r a vi g i l a r el progreso U s o d e l a e n zi m a p l a s m á t i c a A l a n i n a
(recuperación, empeoramiento, remisión A m i n o t r a n s f e r a s a ( A L T ) e n l a vi g i l a n c i a d e l
o recaída) de ciertas enfermedades progreso de hepatitis infecciosa
A yu d a r e n l a e va l u a c i ó n d e l a r e s p u e s t a Uso de la medición del antígeno
de enfermedades a la terapia carcinoembrionario (CEA) en la sangre en
ciertos pacientes que han recibido
tratamiento para cáncer de colon
Fuente: Harper, 2010.
5
La B I O Q U Í M I C A com o una disciplina cient íf ica que aborda el estudio de
las biomoléculas y los biosist emas integ ra de esta f orma la s leyes quím ico –
f ísicas y la evolución biológica que af ecta a los sistemas biológicos y a sus
componentes. Lo hace desde un punto de vist a molecular y t rata de entender
y aplicar su conocim iento a amplios sect ores de la M edicina (terapia génica y
biomedi cina), la agr oalimentación, la F armacolog ía, entre otr os.
Const ituye un pilar f undamental de la Biotecnolog ía y se ha consolidado

como una disciplina esencial para abordar los grandes problemas y
enf ermedades actuales y del f uturo, tales como el cambio climát ico , la
escasez de recursos agroalimentarios ante el aumento de la población
mundial, el agotamiento de las r eser vas de com bustibles f ósiles, la aparición
de nue vas alergias, el aumento del cáncer, las enf ermedades genéticas , la
obesidad, etc.
La B I O Q U Í M I C A es una ciencia experiment al y por ello recurrir á al uso de

numerosas técnicas instrumentales propias y de otros campos, pero la base
de su desarrollo parte del hecho de que lo que ocurre en vivo a nivel
subcelular se mantiene o se cons er va tras el f raccionamiento celular y a
partir de ahí pode r estudiarlo y obtener conclusiones.
El pilar f undamental de la investigación de la B I O Q U Í M I C A C L Á S I C A se

centra en las pr opiedades de las proteínas, muchas de las cuales
son enzimas. Sin embargo, exist en otras disciplinas que se centran en las
propiedades biológicas de los carbohidr atos (Glucobiología) y lípidos
(Lipobiolog ía).
Por razones histór icas la B I O Q U Í M I C A del metabolism o de la célula ha

sido intensament e estudiada, en importantes líneas de investigación actuales
(como el Proyecto Genoma Humano, cuya f unción es identif icar y registrar
todo el material genético humano), las cuales se dir igen hac ia la
investigación del Ácido Desoxirribonucleico , el Ácido Ribonucleico, la
síntesis de proteínas, la dinám ica de la membrana celular y los ciclos
energéticos.
La B I O Q U Í M I C A M E T A B Ó L I C A es un área de la B I O Q U Í M I C A que pret ende

conocer los dif erentes tipos de rutas metabólicas a nivel celular y su contexto
orgánico, par a lo cual son esenciales conocimientos de Enzimolog ía y
Biolog ía Celular. Esta rama de la B I O Q U Í M I C A estudia todas las reacciones
bioquím icas celular es que posibilitan la vida, así como los índices
bioquím icos orgánicos saludables, las bases moleculares de las
6
enf ermedades metabó licas o los f lujos de intermediar ios m etabólicos a nivel
global.
De aquí surgen disciplinas académicas como la Bioenergética (estudio

del f lujo de energ ía en los or ganismos vivos), la Bioquímica N utr icional
(estudio de los pr ocesos de nutrición asociados a rutas metabólicas) y la
Bioquímica Clínica (estudio de las alteraciones bioquím icas en estado de
enf ermedad o traum atismo). En este sentido se ha def inido l a M E T AB O L Ó M I C A
como el conjunto de ciencias y técnicas dedicadas al estudio completo del
sistema f ormado por el conjunto de moléculas que constit uyen los
intermediar ios metabólicos, metabolitos primarios y secundar ios que se
pueden encontrar en un sistema biológico.
Una caracter ística del metabolismo es la sim ilitud de las rutas

metabólicas básicas i ncluso entre especies muy dif erentes. Por ejemplo: la
secuencia de pasos quím icos en una vía metabólica c omo el Ciclo de Krebs
es universal entre células vivient es tan diversas como la bacteria unicelular
Escher ichia coli y or ganismos plur icelulares como e l elef ante. Esta estruct ura
metabólica compart ida es muy probablemente el result ado de la alta
ef iciencia de estas rutas y de su temprana apar ición en la historia evolutiva.
La unidad de aprendizaje de B I O Q U Í M I C A M E T AB Ó L I C A incluye la revisión

de las caracter íst icas de los lípidos, los cuales constituyen más del diez por
ciento del peso corporal de un individuo adulto normal y aporta
aproximadamente el cuarenta por cient o de las calor ías de la alimentación
diar ia, en promedio. Los lípidos se consideran im portantes porque son una
f uente de energ ía; un manto térmico, ya que aísla al cuer po contra la pé rdida
de calor; f orman parte de la estructura de las membranas biológicas ; son una
"almohada" protectora para muchos t ejidos y órganos, f orma parte de la
estructura de caracteres sexuales secundarios. Además de f uente de energ ía
(9 calor ías por gramo), la f unción mas importante de los lípidos se relaciona
con el hecho de que un buen número de ellos, son moléculas anf ipát icas que
en presencia de agu a se asocian f ormando bicapas. É stas const ituyen la
base sobre la cual se organiza la complicada estruct ura de las membranas
celulares.
Además la unidad de aprendizaje de B I O Q U Í M I C A M E T A B Ó L I C A incluye la

revisión del metabolismo de las proteínas. L as proteínas son comp uestos
altament e polimer izados, que están f ormados por aminoácidos. También se
unen a componentes no proteicos. Las proteínas se encuentran entre los
nutrientes más importantes, junto con los lípidos y los carbohidr atos. Además
de su f unción energética ( 1 g de proteína propor ciona 4,1 Kcal al organismo),
dada su nat uraleza nitrogenada, son necesar ias para la sínt esis de
compuestos propios del organismo im plicados en la est ructura de las
7
membranas junto con los lípidos, como glicoproteínas en f unciones de
lubr if icación y como nucleídos que posibilit an la síntesis de otras proteínas
propias del organismo, así como la f ormación de los cromosomas y la
división celular .
Finalmente el programa de la unidad de aprendizaje abor da lo

relacionado con l a inf ormación g enética que era considerada inher ente a una
sustancia quím ica intracelular, hecho descrito por pr imera vez en 1928 por
Griff ith, ahora es evidente que la inf ormación genética reside en la estructur a
del Ácido Desoxirr ibonucleico , muchos de los exper imentos realizados
durante las últ imas décadas así lo conf ir man.
Los ácidos nucleicos son moléculas polianiónicas de alto peso molecular

compuestas por una secuencia específ ica de subunidades o monómeros
llamados nucleót idos; la totalidad se le denom ina polinucl eótidos, los ácidos
nucleicos s e dividen en dos categor ías el Ácido D esoxirr ibonucleico (ADN) y
el Ácido Ribonucleico (ARN). El ADN se encuentra pr incipalmente en el
núcleo de la célula , mientras que el 90% del ARN se encuentra en el
citoplasma, el 10% r es tante se encuentr a en el núcleo. El ADN cont iene las
bases púricas (a denina y guanina) y las pir imidí nicas (citosina y timina),
mientras que en el ARN en las pir imidinas existe en lug ar de t imina el
uracilo. La secuencia de los nucleót idos en las cadenas d e ADN y ARN
permite a las células sintet izar proteínas con amplia diversidad de f unciones ;
como por ejemplo , su actividad enzimática, de def ensa, hormonal , entre
otras, de gran import ancia para el desarr ollo de las células.
Los conocimientos metodológicos para estudiar las biomoléculas avanza

a grandes pasos y en la mayor ía de las ocasiones se requieren reactivos y
equipos cost osos, por lo que es más que imposible abarcar la extensa gama
de conocim ient os relacionados con protocolo bioquímicos.
El manual de prácticas de labor atorio de B I O Q U Í M I C A M E T A B Ó L I C A se

integra por prácticas sencillas y r epresentat ivas, que intentan explicar
algunas de las propiedades de la biomoléculas y las técnicas para
estudiar las. Se espera que el estudiante adquiera los conocim ientos
necesarios que per mitan ilustrar y complementar concept os o mecanismos
moleculares complejos de la quím ica de los ser es vivos que se asocian a la
estructura y a la dinámica del f uncionam iento celular y de tej idos.
8
SISTEMA DE EVALUACION
La eva luación del curso de la unidad de apr endizaj e de Bioquímica

Metabólica se integra de la siguiente f orma:
Evaluación Valor ponderado

Primer Examen Parcial 40%
Segundo Examen Parcial 40%
Evaluación de Pr ácticas de 20%
Laborat orio
Si el alumno en es t a ponderación alcanza una evaluación igual o

mayor a 8.0 puntos, estará exento de pr esentar el Examen Final;
si la evaluación obtenida en est a ponderación es menor de 8.0
puntos y m ayor o igual a 6.0 puntos, el alumno tendrá que
presentar el Examen Final.
Examen Final 100%
La evaluación integral del curso de prácticas de laborator io comprende

los siguientes parámetros:
Parámetro de la evaluación Porcentaje

Presentación de seminario 15%
Bitácora de trabajo 15%
Trabajo en el laboratorio: trabajo en equipo, organización, 25%
manejo correcto de material y muestras, desarrollo de
habilidades, actitudes y valores durante la realización de cada
práctica
Informes o reportes de la práctica 15%
Examen 30%
Total 100%
9
REGLAMENTO PARA EL LABORATORIO DE BIOQUÍ MICA
METABOLICA
1. Para estar inscr ito en l a unidad de aprendizaje de Bioquímica Metabólica

y a cursar las prácticas de labor atorio, el discente debe presentar el
recibo de pago que lo acredite como alumno del cuarto periodo escolar del
programa educat ivo d e la licenciatura e n Química Farmacéutica Biológica.
2. Deber de tener derecho a cu rsar la unidad de aprendizaje de Bioquím ica
Metabólica.
3. La asistencia es obli gatoria, porque el alumno debe de adquirir y/ o
desarrollar las habilidades para el trabaj o exper imental en el labor atorio .
4. El alumno que tenga meno s del 80% de asistencia t endrá una calif icación
de 2.9 en el laboratorio , con lo cual automáticamente debe rep etir el curso
de práct icas de laboratorio; tal como lo establece el Reglamento Interno
de la Facultad de Química de la Universidad Autónoma del Estado de
México.
5. El alumno debe de contar con el manual de prá cticas de laborator io de
Bioquímica Metabólica, ya que en é l se encuentran todas las instrucciones
que se desarrollaran durante el curso .
6. La bitácora es un cuaderno de trabajo en el cual los estudiantes deben
explicar la secuencia de la práct ica de laborator io, para lo cual deberán
elaborar un diagrama de f lujo de la metodolog ía a seguir en la práctica.
Esta bitácor a deber á ser entregada de f orma individual con base en los
lineam ient os que el prof esor indique.
7. Las práct icas de laboratorio se iniciarán a la hora indicada en los horar ios
publicados por la Subdirección Académica de la Facult ad , con una
tolerancia de 5 m inutos a la entrada, no habrá retardos.
8. El registro de la asistencia a las prácticas de laboratorio se llevará a cabo
cinco minutos después de la hor a indicada para el inicio de la sesión de
prácticas de laborat orio.
9. No se permitir á el acceso al labor atorio sin portar adecuadamente la bata;
es decir, la bata debe estar limpia y abotonada.
10. El alumno debe llevar al laborator io todos los materiales solicitados en
cada práctica, un trozo de f rane la, un marcador indeleble y masking tape.
11. No se permit irá salir y entrar innumerables veces del laboratorio para
completar el material y/o equipo requerido para el desarrollo de la
práctica.
12. Los labor atorios son espacios de trabajo , por lo que cualquier i ndisciplina
será sancionada con base al Reglamento Interno de la Faculta de Quím ica
y la normativa correspondiente de la Univer sidad Autónoma del Estado de
México.
10
13. Durante el desarrollo de las práct icas queda estrict amente prohibida la
entrada de personas ajenas al grupo.
14. También q ueda estrictamente prohibido salir del laborator io sin causa
justif icada.
15. Está rigurosamente prohibido sentarse en las mesas de t rabajo , en el
piso y cualquier espacio dentro del laboratorio; para ello se encuentran
los bancos cor respondientes .
16. Por razones de seguridad, queda estrictamente prohibido comer dentro
del laborator io.
17. El material y equipo prestado por la inst ituci ón par a el desarrollo de las
prácticas de labor atorio que sea roto o descompuesto deber á ser repuesto
o reparado inmediatamente, por el responsable direct o o po r el equipo de
alumnos que estén ef ectuando la prá ctica.
18. El inf orme o reporte de la práctica del laborator io deberá de entregarse
de acuerdo con las instrucciones del prof esor .
19. La evaluación de las práctic as del laboratorio corresponde a l 20% de la
evaluación f inal de la unidad de aprendizaje de Bioquím ica Metabólica .
20. Los alumnos asistentes a la práct ica de laboratorio tendrán un visto
bueno, el cual lo obtendrá n cuando se discuta y entreguen los resultados
de la m isma.
21. El alumno que no t enga visto bueno en su bitácor a no acreditar a su
asistencia a la práct ica de labor atorio.
22. Antes de desechar los productos obtenidos en la práct ica, deberán de ser
tratados y dispuestos adecuadamente par a evitar al máximo
contaminación.
23. Los alum nos que pr esenten el seminario tienen la obligación de indicar
cual es el tratamiento f inal que deberá de darse a los pr oductos
generados durante la prá ctica.
24. Además de estas pautas de comportamiento en el laborator io de
Bioquímica Meta bólica se aplicarán los Lineamient os de Laboratorios de
la Facultad de Química (Versión vigente núm. 01 de f echa 30 de Junio de
2016) y el Reglamento Interno de Laborat orios de la Facultad de
Química de la UAEM (Versión vigente núm. 01 de f echa 18 de abr il de
2016), los cuales se encuentran en el ANEXO del presente manual de
prácticas de laborat orio.
25. Lo no previsto en este reglamento será sancionado por el Consejo
Académico y el de Gobierno de la Facult ad de Quím ica de la UAEM.
11
PROGRAMA DE PRÁCTICAS
1. Propiedades fisicoquímicas de los lípidos
2. Separación de fosfolípidos por cromatografía en capa fina
3. Hidrólisis enzimática de los lípidos de la leche
4. Determinación de la actividad de las T ransaminasas
5. Determinación de Urea
6. Extracción y purificación de ADN de chícharos
7. Aislamiento y purificación de ARN de levadura de panificación
8. Determinación de fósforo en ARN
12
Práctica núm. 1
PROPIEDADES FISICOQUÍMICAS DE LOS LÍPIDOS
INTRODUCCIÓN
El t érmino lípido se ref iere a cualq uier sustancia natural no polar que sea
casi o totalmente insoluble en agua, pero soluble en solventes no polares
como el clorof ormo, el disulf uro de car bono, el éter y el alcohol caliente.
Debido a su divers idad, tanto estructur al como f uncional, esta def inición es
necesariam ente vaga y muy general . Sin embargo, una propiedad de los
lípidos en su naturaleza no polar , que se debe, en la mayor ía de los casos, a
la presencia de uno o más residuos de ácidos grasos.
Los lípidos se han clasif icado de acuerdo a su complejidad estructural

como:
1. Lípidos simples: Este grupo incluye a los ésteres de ácidos grasos y el
glicerol.
2. Lípidos compuestos: Son aquellos que cont ienen otras sustan cias
además de un alcohol y de un ácido graso (carbohidr atos , f osf ato,
compuesto s nitrogenados).
3. Lípidos der ivados: Aquí se incluyen cualquier mater ial que concuer de con
la def inición general de un lípido, pero que no pueda clasif icar en los dos
grupos anter iores ; por ejemplo los esteroides, los carotenoides y las
vitaminas insoluble s en agua.
Para la caract erización y análisis de los lípidos se precisa de utilizar

más de un a técnica: índice de saponif icación, grado de insat uración,
contenido de f ósf oro, nitrógeno, etc. Es común, en la actua lidad, ef ectuar una
hidr ólisis ácida o alcalina e identif icar posteriormente los productos de la
hidr ólisis. Esta ident if icación se ha f acilitad o por la i ntroducción de técnicas
como la cromatograf ía en papel, en columna o en f ase de vapor ( Mckee,
2014).
13
PROPÓSITO
Al término de la pr áctica el al umno tendrá la habilidad de ident if icar en el
laborator io a los lípidos y las propiedades f isicoquím icas más comunes de los
mismos.
TIEMPO DE RE ALIZACIÓN
Dos hor as
FUNDAMENTO TEÓRICO
Los lípidos, son un grupo heterogéneo de compuestos, de naturaleza
anf ipática, es decir que contienen regiones hidrof óbicas y regiones
hidr of ílicas. La mayor parte de los lípidos abundantes en la naturaleza
(triacilglicer oles), están f ormados por ácidos grasos de cadenas
hidr ocarbonada con número par de átomos de carbono , saturados o
insaturados. Los lípidos llevan a cabo múltiples f unciones en el organismo,
como: almacenamiento de energ ía, de transporte, f unciones hormonales,
actuar como vitaminas, f ormar par te de las membranas celulares
conf iriéndoles la propiedad de pe rmeabilidad select iva, al permitir el paso o
no de algunas sust ancias y en determ inada dirección, así como la conducción
ner viosa y el transporte activo como la bomba de Na + /K + . A dif erencia de los
carbohidr atos, prot eínas y ácidos nucleicos, no f orman pol ímeros, son
moléculas pequeñas que presentan una f uerte tendencia a asociarse
mediante f uer zas no covalentes. Algunas de las propiedades de los lípidos
pueden ser usadas para su reconocimiento, ya que pueden reaccionar con
una var iedad de ag entes or iginánd ose productos color idos, desprendim ient o
de vapores, f ormación de jabones , entre otros.
14
Ácido Graso Ácido Graso
Acilglicérido
Saturado Insaturado
Fuente: Nelson, 2015.
Las pr incipales car a cter íst icas de los lípidos son: biomoléculas muy
diversas; están f ormados por cadenas alif áticas sat uradas o insaturadas, en
general lineales, per o algunos tienen anillos aromát icos ; otros son f lexibles,
mientras que unos más son r íg idos o semif lexibles ha sta alcanzar casi una
total f lexibilidad molecular; algunos comparten carbonos libr es y otros f orman
puentes de hidrógeno.
La mayor ía de los lípidos t iene algún tipo de carácter polar, además de

poseer una gran par te apolar o hidrof óbica ("que le teme al agua" o "rechaza
al agua"), lo que sig nif ica que no interactúa bien con solvent es polares como
el agua. Otra parte de su estructura es polar o hidr of ílica (que tiene af inidad
por el agua) y tenderá a asociarse con solvent es polares como el agua;
cuando una molécula tiene una región hidróf oba y otra hidróf ila se dice que
tiene car ácter anf ipático. La región hidr óf oba de los lípidos es la que
presenta solo át omos de carbono unidos a átomos de hidrógeno, como la
larga "cola" alif ática de los ácidos grasos o lo s anillos de esterano del
colesterol; la región hidróf ila es la que posee grupos polar es o con cargas
eléctricas, como el hidr oxilo (–OH) del colesterol, el carbonilo ( –COO – ) de
los ácidos grasos, el f osf ato ( –PO 4 – ) de los f osf olípidos, etc. La estructura
quím ica que presentan los lípidos es la responsable de las propiedades
f isicoquím icas de ellos, como la solubilidad en solventes polares, la
15
insaturación y la conf iguración de la m olécula (cis o trans) , la f ormación de
emulsiones y la per meabilidad de las bicapas de las membranas celular es.
Los lípidos son sustancias que no se disuelven en agua, por eso es

necesario emulsif ica rlos. Una emulsión esta compuesta por una f ase dispersa
(que ser ía, por ejemplo, la grasa en la mayonesa), una fase dispersante
(puede ser agua) y un emulsif icant e. La f unción del agente emulsif icante es
como si se tuvieran muchas gotit as de grasa suspendidas en el agua ,
entonces el emulsif icante lo que hace es mantener esas gotitas separadas,
ya que t iene una estructura química que tiene af inidad tanto con el agua
como con la grasa. Otros ejemplos de emulsif ica ciones ser ían la crema de
leche, que es una emulsión de grasa en agua; la manteca que es una
emulsión de agua en grasa; la leche, que también t iene lípidos en emulsión.
En el cuerpo humano las sales biliares son emulsif icantes de las grasas que
consum imos; f orman pequeñas gotitas de grasa, par a que las enzimas las
puedan digerir.
La grasa se almacena en el tejido adiposo, donde también sir ve como

un aislante térmico de los tej id os subcutáneos y alrededor de ciertos
órganos. Los lípidos no polares actúan como aisladores eléctricos, lo que
permite la propagación rápida de las ondas de despolarización a lo largo de
ner vios mielinizados. Las combinaciones de lípido y prot eína (lipopr oteínas)
sir ven como el medio para transportar lípidos en la sangre. El conocim iento
de las propiedades bioquím icas de los lípidos es necesario para entender
muchas áreas biomédicas importantes, como obesidad, diabetes mellitus,
aterosclerosis y la función de diversos ácidos grasos poliinsaturados en la
nutrición y la salud ( Harper, 2009; Str yer , 2013).
16
MATERI AL Y RE ACTIVOS
Material Reactivos
Tubos de ensayo Éter anhidro
Gradilla Clorof ormo
Baño de hielo Carbonato de Sodio al 1%
Bulbo de hule Alcohol et ílico
Pipetas de 1, 5 y 10 mL Tetracloruro de Carbono
Solución de Albúm ina al 1%
Material Biológico Solución de Extran 100 a 1%
Aceite de Ajonjolí Solución de Tween 80 al 1%
Aceite de Algodón Ácido Nítr ico concentrado
Aceite de Linaza Ácido Oleico saturado en Butanol
Aceite de Cártamo Ácido Est eárico saturado en Butanol
Aceite de Ricino Sales Biliares al 5%
Aceite de Maíz Cobre metálico
Bromo en Tetracloruro de Carbono al 5%
Fosf olípidos ( lecitina de huevo) 4% en Butanol
Colesterol (4% en Butanol)
Butanol
Azul de Metileno al 0.025% en Butanol
Éter Et ílico
PROCEDIMIENTO
Propiedad núm. 1: Solubilidad
La solubilidad es una medida de la capacidad de disolverse de una
determinada sustancia (soluto) en un determinado medio ( disolvente). Uno
de los cr iterios par a def inir a los lípidos es su solubilidad en disolventes
orgánicos no polares , por lo que es conveniente comprobarlo y analizar a que
se debe esta propiedad común de los lípidos.
Técnica
Agregar 5 gotas de una muestra de aceite en un tubo de ensayo, adicionar 1
mL del solvente por probar y anotar sus obser vaciones en el cuadro :
17
Alcohol Alcohol Tetracloruro
Aceite Agua Éter
frío caliente de carbono
Cártamo
Ajonjolí
Linaza
Ricino
A n o t e e n e l c u a d r o s u s c o n c l u s i o n e s a c e r c a d e l a s o l u b i l i d a d d e a c u e r d o a l o q u e o b s e r vó .
Propiedad núm. 2: Emulsificación

Una emulsión es una mezcla de dos líq uidos inmisc ibles de manera más o
menos homogénea : Un líquido (la f ase dispersa) es adicionado en otro ( la
f ase continua o f ase dispersante). Muchas emulsiones son de ac eite/agua,
empleando aceit es o grasas alimenticias como uno de los tipos más comunes
de agentes dispersantes encontrados en la vida diar ia. El objetivo de esta
prueba es comprender esta propiedad en los lípidos y los f actores que la
modif ican.
Técnica
En tubos de ensayo debidamente et iquetados adicione 5 gotas de una
muestra de aceite y 2 mL del emulsificante en cada uno, anotando sus
obser vaciones en el cuadro siguiente:
Sales
Albúmina Extran al Na 2 Co 3
Muestra Agua Alcohol Biliares
al 1% 1% al 1%
al 5%
Ajonjolí
Algodón
Ricino
Linaza
Anote en el cuadro el tiempo que tarda en romperse la emulsión. Puede utilizarse Tween
80 al 1% y otros aceites que disponga el profesor .
18
Propiedad núm. 3: Insaturación
Una sustancia orgánica insaturada es aquella que cont iene al menos
un doble enlace entr e átomos de carbono. Particularmente, s e piensa que la
saturación de las grasas determ ina su capacidad para bloquear la circulación
de la sangre dentro del cu erpo. Esta prueba nos permite com prender el grado
de instauración de los ácidos grasos constituyentes de los lípidos, basándose
en la propiedad que tienen los dobles enlaces de adicionar halógenos ;
utilizando para ello una solución de B r omo en Tetraclor uro de Carbono al 5%,
obser vado la desaparición de la coloración caf é de esta solución ‚ por la
adición de Bromo al doble enlace, siendo la intensidad del color proporcional
a la sat uración del lípido o ácido graso, e inverso a la instauración.
Técnica
Esta prueba se ef ectúa en tubos de ensayo secos, utilizando 5 gotas de la
muestra lipídica (aceite) y siguiendo las indicaciones del siguiente cuadro:
Aceite de Acido Acido

Reactivo Ajonjolí Linaza Testigo
Maíz Oleico Esteárico
Éter anhidro Adicionar 5 mL, tap ar y enf riar en hielo por 10 minut os
React ivo de Adicionar 0.5 mL a t odos los tubos con MUCHO CUI D ADO EN L A
Bromo al 5% C AMP AN A DE EXTRACCIÓ N
Tiempo de
Dejar reposar una hora en baño de hielo
reacción
Grado de
instauración
De acuerdo con sus lecturas, indique si se trata de un lípido saturado, insaturado o
poliinsaturado.
19
Propiedad núm. 4: Isomería cis - trans
La isomer ía cis – trans (o isomer ía geométrica ) es un t ipo de e stereoisomer ía
de los alquenos y cicloalcanos. Se dist ingue entre el i sómero cis, en el que
los sustituyentes est án en el mismo lado del doble enlace o en la misma cara
del cicloalcano, y el isómero trans, en el que están en el lado opuest o del
doble enlace o en caras opuestas del cicloalcano. Ambos poseen la misma
f órmula, presentan dif erentes propiedades quím icas y f ísicas. La isómer a cis
- trans puede ser obser vada e n el Ácido O leico, ácido graso constit uido por
una cadena de 18 át omos de Carbono (C) con un doble enlace en el C -9; es
líquido a temperatur a ambiente (p. f . 13. 4 o C) que al ser tratado con C obre y
Ácido Nítr ico concentrado se tra sf orma en su isómero trans, el Ácido
Elaídico, que es sólido y de punto de f usión má s elevado (p. f . 44-45 o C).
Técnica
En un tubo de ensayo coloque 1 mL de Ácido Oleico, adicione 0.2 mL de
Ácido Nítr ico concentrado y un pequeño alambr e de C obr e en espiral. Tenga
MUCHO CUID ADO YA Q UE LA RE ACCIÓN ES VIOLENTA Y CON
DESPRENDIMIENTO DE G ASES. EFECTÚE ESTA PRUEB A EN LA
C AMP AN A DE EXTR ACCIÓN Y ENFRÍELO EN AG UA CON HIELO .
Transcurridos 15 m inutos, agregue 3 m L de agua dest ilada para diluir, pase
la f ase " oleosa" a ot ro tubo a gréguele 2 mL de E tanol y mezcle. Conser ve el
tubo en baño de hielo hast a la aparición de cristales de Ácido Elaí dico.
Propiedad núm. 5: Permeabilidad de una monocapa lipí dica

La permeabilidad selectiva es una propiedad de la membrana plasmática y de
otras membranas semipermeables que permiten el paso de solo ciertas
part ículas a través de ellas. De esta f orma, pueden entrar a la célula
aquellas part ículas que necesite la m ism a y se evita que ingresen las que no
le sean út iles. La membrana juega un papel muy importante en la integridad
celular, por lo que es conveniente comprender su composición y como es
af ectada su permeabilidad al m odif icar sus constit uyen t es lipídicos.
20
Técnica
Prepare una ser ie de cinco tubos de ensayo, siguiendo las instrucciones del
siguiente cuadro, colocando la solución de Butanol-Lípido-Azul de Met ileno
con mucho cuidado, dejando r esbalar por las paredes del tubo , logrando
f ormar las dos capas .
Tubo
Reactivo
1 2 3 4 Testigo
Agua dest ilada (mL) 2 2 2 2 2
Ácido Est eárico (mL) 2 0 0 0 0
Ácido Oleico (mL) 0 2 0 0 0
Fosf olípido (mL) 0 0 2 0 0
Colesterol (mL) 0 0 0 2 0
Azul de Metileno-But anol (mL) 2 2 2 2 2
Dejar en reposo a temperatura ambient e
Revisar a las 2 horas
Revisar a las 24 hor as
Observaciones
Tiempo Tubo
de reposo 1 2 3 4 Testigo
2 horas
24 horas
Justifique sus resultados en función de la estructura de cada lípido.
21
DISPOSICIÓN DE RESIDUOS
1. Pruebas de solubili dad: En el caso de los aceites con agua, separar la
parte oleosa y desechar el a gua en la t arja. Los tubos con Etanol y É ter
disponer los en el contenedor de residuos A (solventes orgánicos), los
tubos con Tetracloruro de Carbono en el contenedor B (solvent es
orgánicos con halógenos).
2. Emulsificación: Para los tubos con agua, Sales Biliares, Extrán, T ween
80 y Albúmina al 1%, separar la f ase oleosa y deseche el resto a la tarja.
Los tubos con Na 2 CO 3 disponer los en el contenedor D (sales inorgánicas),
los tubos con Etanol en el contenedor A.
3. Insaturación: Disponer el contenido de los tubos en el contenedor B.
4. Isomería: Neutralizar el contenido del tubo y verter lo a l contenedor D.
5. Permeabilidad: Separar la parte butanólica (f ase super ior) y verter la en
el contenedor A, desechar el resto (f ase acuosa) en la tarja.
CUESTIONARIO
1. ¿Cómo explica la dif erencia en la solubilidad con el alcohol f río y el
alcohol caliente ?
2. ¿Explique porqu é los aceites probados tuvieron dif erentes solubilidades
en los dif erentes disolvente s?
3. ¿Cómo se comportan los lípidos en presencia de un detergente, ante una
proteína y ant e un electrolito?
4. ¿De qué depende el grado de saturación o instauración de un lípido ?
5. ¿Qué es el índice de iodo para los lípidos?
EJERCICIO DE INTEGRACIÓN
Con base en la inf ormación sobre lípidos, conteste br eve y claramente el
siguiente problema , argumentando su r espuesta y haciendo ref erencia a la
bibliograf ía consultada.
Las lipopr oteínas plasmáticas son complejos macr omoleculares,

compuestos por proteínas (apo-lipoproteínas) y lípidos. La relación
22
cualitat iva y cuant it ativa de estos com ponentes determina el tamaño y la
densidad de las lipopr oteínas, caracter ísticas empleadas para la
clasif icación. Desde este punto de vista del transporte plasmático de
colesterol las lipopr oteínas de baja y alta densidad (LDL y HDL) tienen un rol
f undamental. Bajo condiciones normales la concentración plasmát ica de
colesterol unido a est as lipoproteínas guarda un f ino e quilibrio dependiente
entre otros f actores del control pr eciso de la síntesis de colesterol y del
número y f uncionalidad de los receptores de LDL. Se ha visto que la cant idad
de colesterol asociado a la lipoprot eína de alta densidad (HDLc) guarda
relación inversa con la cif ra de arteriopat ía cor onar ia. En cambio, el
colesterol unido a LDL (LDLc) aument ado en sangre constituye un importante
f actor de riesgo para la aterosclerosis coronar ia y tiene relación con el grado
de lesión arterial, lo que ha sido demost rado a través de diferentes estudios
epidemiológicos, experimentales y anatomoclínicos.
El cociente LDLc/ HDLc se emplea en la clínica como un índice de riesgo

de at erosclerosis. Numerosos estudios, incluyendo el Fr amingham Heart
Study y el Ensayo de Inter vención Múltiple sobre Factores de Riesgo, han
aportado la bas e para ensayos clínicos dir igidos a reducir los lípidos y
lipopr oteínas séricos. La d ism inución de estos f actores de riesgo reduce la
incidencia de enf ermedad coronar ia, accidente cerebro - vascular y otras
enf ermedades vasculares. El LDLc const ituye, entonc es, un f actor de riesgo
causal modif icable para la ateroscler osis coronar ia. La clasif icación de los
enf ermos con base en las caracter íst icas y tendencias de estos niveles
permite ident if icar las hiperlipoproteinem ias y las hipolipoprot einemias.
1. Descr iba un mét odo analítico empleado en el laborator io clínico para

determinar la concentración plasmática de Colesterol Total y el unido a
HDL y LDL; así como la interpret ación del cociente HDLc/LDLc .
2. ¿Por qué razón se designa como colesterol bueno y colester ol malo?
3. ¿Qué dif erencia existe entre ateroesclerosis y arter ioesclerosis?
4. Explique el modelo f isiopatológico más aceptado para la ateroesclerosis .
5. Realice un esquema que indique los destinos f inales del colesterol y la
f unción de cada uno de ellos.
23
Práctica núm. 2
SEPARACIÓN DE FOSFOLÍPIDOS POR CROMATOGRAFÍA
EN CAPA FINA
INTRODUCCIÓN
Los lípidos no poseen un grupo f uncional caracter íst ico como otros
compuestos orgánicos (alcanos, alquenos, aldehídos, cetonas, entre otros) o
como otras biomoléculas (carbohi dratos, proteínas, ácidos nucleicos). Su
única propiedad común es la solubilidad. Todos los lípidos son solubles en
disolventes orgánicos no polares como el Éter diet ílico, el Clorof ormo, el
Benceno, e insolubles en agua. Por tanto los lípidos son los comp uestos
orgánicos que pueden extraerse de las células y de los tejidos de los
organismos vivos mediante disolventes or gánicos no polares.
Su solubilidad los dif erencia de otr os dos grupos principales de

compuestos de importancia biológica, los carbohidrat os y las proteínas, que
son insolubles en solventes orgánicos debido a su car ácter f uertemente
polar. Las grasas, los aceit es vegetales y las ceras son ejemplos de lípidos
conocidos ampliamente.
Las estruct uras de los compuestos clasif icados como lípidos son muy
dif erentes, per o todas tienen algo en común: la porción principal de su
estructura es de naturaleza hidrocarbonada y por esta razón son solubles en
disolventes orgánicos. Los lípidos desem peñan diversas f unciones biológicas
de gran importancia, ya que constituyen la pr incipal reser va energética de los
seres vivos, f orman parte de las membranas celulares y regulan la act ividad
de las células y de los tejidos.
Los lípidos se han clasif icado de diver sas maneras, pero la

clasif icación más útil se basa en su com portamiento f rente a la hidrólisis en
medio alcalino, reacción que recibe el nombre de saponif icación. Así los
lípidos saponif icables son los que se hidrolizan en medio alcalino, mientras
que los lípidos insaponif icables son los q ue no exper iment an esta reacción.
24
Los lípidos f orman un grupo de biomoléculas que con f recuencia se
encuentran combinados , covalentement e o mediante enlaces débiles , con
miembros de otra clase de biomolé culas, constituye ndo moléculas tales
como: glicolípidos, los cua les contienen lípidos y glú cidos; lipoproteínas que
contienen lípid os y proteínas. En estas biomolé culas las propiedades
quím icas y f ísicas caracter ísticas de sus componentes están f usionada s para
cumplir f unciones biológicas especializadas.
Los lípidos s on un grupo de compuestos heterogéneo, que incluye

grasas, aceites, est eroides, cer as y compuestos relacionados más por sus
propiedades f ísicas que por sus propiedades quím icas. Los ésteres de
glicerol son los lípidos de mayor importancia en el aspecto cua nt itativo,
represent ados por los triacilgliceroles ( “grasa”), un constituyente importante
de lipopr oteínas y del almacén de líp idos en el tejido adiposo. Los
f osf oacilgliceroles son lípidos anf ipát icos y t ienen f unciones importantes:
como constituyentes pr incipales de membranas y la capa ext erna de
lipopr oteínas, como surf actantes en los pulmones, como precursor es de
segundos mensajeros y como const ituyentes del tej ido ner vioso.
Los glucolípidos también son const ituyentes important es del t ejido

ner vioso, como el cerebro y la car a externa de la m embrana celular,
f ormando parte de la bicapa lipídica de ellas; el glúcido de la molécula está
orientado hacia el exter ior de l a membr ana plasmát ica y e s un componente
f undamental del glicocalix, donde actúa en el reconocimient o celular y como
receptor ant igénico.
El colesterol, un lípido ant ipát ico, es un componente de las

membranas. Es la molécula or iginal a partir de la cual s e sint etizan todos los
otros esteroides en el cuer po, incluso hormonas impor tantes como las
hormonas adrenocor ticales y sexuales, vitaminas D y ácidos biliar es.
25
PROPÓSITO
Al f inalizar la práct ica el alumno compr obará que la cromat ograf ía en capa
f ina es una técnica que se ut iliza para la separación de f osf olípidos de la
yem a del huevo.
Cuatro horas
FUNDAMENTO TEÓRICO
La cromatograf ía es un proceso que conduce a la separación de mezclas por
desagregación de todos o algunos de sus c omponentes en zonas
concentradas o en f ases dif erentes de aquellas de las que se encontraban
originalmente. Independientemente de la natur aleza de las f uerzas que
provocan el paso de dichas sust ancias de una f ase a otra.
Los mecanismos que se llevan a cab o en la cromatog raf ía son

f undamentalmente:
 Partición entre solventes (f ase móvil o eluyente y f ase acuosa
estacionar ia) o crom atograf ía de reparto.
 Interacciones superf iciales f ísicas o cr omatograf ía de adsorción.
 Atracción electrostática de iones con car ga opuesta sobr e superf icie
polielectrolít ica o cr omatograf ía de inter cambio iónico.
En la práct ica, la mayor ía de las veces se trata de una combinación de

estos mecanismos. Part icularmente, e n la cr omatograf ía e n capa f ina la
separación se logra f undamen talment e debido a la adsorción de c ada
sustancia sobr e el g el de sí lica, distribuido en una placa de vidr io que f orma
una capa delgada . Los requerimientos esenciales son, pues, un adsorbente,
placas de vidrio, un disposit ivo que mantenga las placas durante la
ext ensión, otro para aplicar la capa de adsorbente, y una cámara en la que
se desarr ollen las placas cubiertas. Es preciso también poder guardar con
f acilidad las placas preparadas y una estuf a para activar las.
26
La f ase móvil es líquida y la f ase estac ionaria consiste en un sólido. La
f ase estacionar ia será un componente polar y el eluyente será por lo general
menos polar que la f ase estacionaria, de f orma que los com ponentes que se
desplacen con mayor velocidad serán los menos polares.
La cromatograf ía en capa f ina presenta una ser ie de ventajas frente a

otros métodos crom atográf icos (en columna, en papel, en fase gaseosa) ya
que el mater ial que se requiere es más simple. El t iempo que se necesita
para conseguir las separaciones es mucho menor y la dis ociación es
generalment e mejor. Pueden usarse reveladores corrosivos, que sobre papel
destruir ían el crom atograma. El método es simple y los resultados son
f ácilmente repr oducibles, lo que hace que sea un método adecuado para
f ines analít icos.
Al realizar la elección del adsorbente se debe tener en cuenta el

tamaño de las part ículas del adsorbente, cuanto más f inamente dividido est é ,
mayor será su adhesión al soporte, aunque también se le puede añadir un
adherente. Algunos de los adsor bentes más utilizados son celulosa, a lmidón,
azúcares, gel de s ílice (sílicagel), óxido de a luminio (alúmina), carbón
activado (carbón en polvo), Kieselguhr . Los tres primeros se utilizan para
extraer componentes polif uncionales de plantas y animales.
Los productos a examina r deben disolverse , cuando sea posible, en un

solvente orgánico no polar que t enga un punto de ebullición lo
suf icientemente baj o para que se evapore después de la aplicación. Sin
embargo, a menudo se necesitan disolventes polares; la mezcla
clorof ormo:metanol (1:1) es ef ectiva. Frecuentement e se emplean
disoluciones al uno por ciento , de manera que al aplicar 2 µl resulta en la
carga 20 µg de pr oducto sólido. Muchos react ivos de r evelado llegan a
detectar 0.1 µg de material; por esto con esta carga puede l legarse a
obser var un cinco por ciento de impurezas.
27
El proceso de colocación de la muestra se realiza tocando con la punta
del capilar (m icropipeta, jeringuilla, etc.) sobre la placa pr eparada. Dejando
una distancia al bor de inf erior de un cent ímetro a pr oximadamente. El punto
de aplicación de la muestra se denomina toque. Una vez colocado el toque se
deja secar par a evaporar el disolvent e, de f orma que en la placa solo
quedará la muestra a analizar.
La elección del eluyente depender á lógicamente del co mponente que

se va a separar y del mater ial en que la separación se lleva a cabo. Los
principales eluyentes en orden creciente de polaridad son éter de petróleo,
éter diet ílico, ciclohexano, acetato de e t ilo, tetraclor uro de carbono, p ir idina,
benceno, etanol, clorof ormo, metanol, dicloromet ano, agua, á cido acét ico.
El desarrollo de los cromatogramas en capa f ina se realiza

normalmente por el método ascendente ; esto es, al permit ir que un eluyente
ascienda por una placa casi en vert ical, por la acción de la capilar idad. La
cromatograf ía se r ealiza en una cubeta. Para conseguir la m áxima saturación
posible de la atmósf era de la cámara, las pare des se tapizan con papel
impregnado del eluyente. A veces pueden obtenerse separ aciones mejores
sin poner papeles e n las par edes, cosa que no debe olvidar se.
Generalmente el eluyente se introduce en la cámara una hor a antes del

desarrollo, para permitir la saturación de la atmósf era. El tiempo de
desarrollo, por lo general, no llega a los 30 minutos. El tiempo de una
cromatograf ía cualit ativa suele ser de un par de minut os, mientras que el
tiempo de una cromatografía preparativa puede llegar a un par de
horas.
Las placas pueden desarrollarse durant e un tiempo pref ijado o hasta

que se alcance una línea dibujada a una distancia f ija desde el or igen. Esto
se hace para estandarizar los valores de R F . Frecuentement e esta distancia
es de 10 cm; parece ser la más conveniente par a medir valores de R F .
28
Después del desarr ollo, las placas pueden secar se rápidamente con una
corriente de aire caliente.
La mejor posición de desarrollo par a un componente es el punto medio

entre el or igen y el f rente del eluyente, ya que perm ite separ ar las impurezas
que se desplazan con mayor y menor velocidad. El f rente del eluyente nunca
debe lleg ar a tocar el borde de la placa. Si la placa se estropea por acción
del aire o de la luz, se secará en una cámara que contenga un gas inerte o
aislado de la luz.
Si los compuestos separados no son colori dos es necesar io revelar la

posición de dichos compu estos, para ello existen dos t ipos de métodos:
 Métodos químicos : Consisten en r ealizar una reacción química entre un
reactivo revelador y los componentes separados, par a ello se pulver iza la
placa con los react iv os revelador es, ayudándose de un pulverizado r de
vidr io y una pera de goma, o mediante un dispositivo que pr oporcione aire
comprimido. Es pref erible pulver izar con las placas en posición hor izontal.
Si el reactivo r evelador es peligroso o muy corrosivo, la pulver ización
deberá realizarse en una vit rina de gases bien ventilada. La pulverización
se realizará poco a poco. En cr omatograf ía en capa f ina no puede
realizarse el bañado del cromatograma (en cromatograf ía en papel sí).
Generalmente se u tiliza como reactivo revelador yodo, el cual f orma
complejos coloridos con los component es orgánicos (con t onos amarillo-
marrones), per o las manchas desaparecen con el tiempo con lo que es
conveniente señalar las manchas aparecidas. Otro reactivo reve lador
bastante ut ilizado es el á cido sulf úrico, que reacciona con los component es
orgánicos produciendo manchas negras. El tamaño de las m anchas no está
relacionado con la cantidad de componente separado. Además de estos
revelador es generales, existen otros específ icos: 2,4 - dinit rof enilhidr acina
(para aldehídos y c etonas), ver de de bromocresol (para ácidos
carboxílicos) , paradimetil aminobenzaldehido (p ara am inas), ninhidr ina
(para Aminoácidos).
29
 Métodos físicos : El más común consiste en añadir al adsorbente un
indicador f luorescente. De t al f orma que al colocar la placa bajo una
lámpar a ultravioleta, y dependiendo del indicador y de la longitud de onda,
aparecen manchas f luorescentes en las zonas en las que hay componentes,
o en otros casos aparece toda la placa f luorescent e excepto donde hay
componentes. Algunos compuestos poseen cierta f luorescencia (aunque no
es normal) con lo que pueden ser detect ados direct amente en una lámpara
de ultravioleta.
La constante RF ( Ratio of Front) es simplemente una manera de

expresar la posición de un compuesto sobre una placa como una f racción
decimal, mide la retención de un componente. Se def ine com o:
La distancia recorrida por el compuesto se mide generalment e desde el

centro de la mancha, los cálculos se simplif ican si el denominador es 10.
Para que los R F sean repr oduc ibles deben ser f ij adas una ser ie de
condiciones (e spesor de la placa, f ase móvil, f ase estacionaria, cantidad de
muestra). El máximo valor de R F que se puede alcanzar es de 1, lo ideal es
un R F entre 0.65 y 0.7.
Para aver iguar si dos compuestos son ig ual es, se colocan ambos sobre
la m isma placa y se desarrolla con var ios eluyentes. Una vez desarrollados
se calculan los R F y si son distintos, puede deducirse con toda seguridad que
no se trataba del mismo compuest o. Por el contrario si los R F son iguales lo s
compuestos pueden ser iguales o no serlo. Si se sospecha que dos
compuestos son muy parecidos se eluyen sobre la misma placa con el mismo
eluyente u otros de menor polar idad, hasta apreciar una separación m ínima.
En este caso no se pueden usar reveladore s quím icos, ya que alte rar ían los
compuestos, sino indi cador ultravioleta.
30
También se puede operar de la maner a siguiente: Se selecciona un
compuesto (X), que tenga una posición de desarrollo conveniente; todos los
demás compuestos sobre la placa se relac ionan con éste. De esta manera se
tiene el, RX, ya que:
Cámara cromatográf ica Cromatograf ía en capa f ina revelada

Fuente: www.uprm.edu, 2010
Materiales Reactivos
Equipo para cromatogr af ía Cloruro de Potasio 0.1M
Centr íf uga Solución de Clorof ormo - Metanol 2: 1 (V:V)
Tubos capilares React ivo de Bismuto
Papel f iltro React ivo de Molibdat o
Embudo de f iltración React ivo de Ninhidr ina
Eluyente: solución d e Clorof ormo - Metanol-
Material biológico Ácido Acético-Agua 65:25:8:4 en volumen.
Yema de huevo
PROCEDIMIENTO
Primera parte: Extracción de lípidos
1. Separ ar la yema del huevo y m ezclar la co n 30 mL de la solución de
clorof ormo-metanol 2:1 para extraer f osfolípidos y lípidos neutros.
2. Agitar aproximadamente 20 minutos.
31
3. Filtrar, agitar el f ilt rado claro con 20 mL de la solución de cloruro de
potasio 0.1M.
4. Centr if ugar a 2000 rpm, por 20 min ut os.
5. Separ ar la f ase acuosa super ior y usar la f ase clorof ó rmica inf erior para la
cromatograf ía.
Segunda parte: Cromatografía en capa fina

1. Aplicar tres muestr as del extr acto de lípidos aproximadamente de 30
microlitros en f orma equidistante.
2. Colocar el cromato gr ama en la cámara saturada con el eluyente.
3. Dejar desarrollar durante 90 min utos o hasta que alcanc e una alt ura de
12-15 cm.
4. Sacar la placa de la cámara y dejar secar .
Tercera parte: Revelado de cromatogramas

Revelar cada placa cromatográ f ica con un revelador distinto con el f in de
obtener las manchas caracte r ísticas de cada tipo de f osf olípidos.
NOTA: El cromatog rama revelado con el reactivo de ninhidr ina requiere
calentarse a 100 o C por 5 minutos.
RESULTADOS
Dibujar un esquema a escala de los cr omatogramas revelados, resaltando las
manchas que se hayan identif icado. Calcular los R F de cada una de las
manchas detectadas e identif icar los com puestos correspondientes.
1. Colocar en una char ola el residuo sólido que queda en el embudo Buchner
después de f iltrar al vacío y llevar lo a la campana de extracción para que
se evapore cualq uier remanente de solvente, poster iormente desechar en
la basura.
2. La f ase acuosa que se separ a posterior a la centrif ugación (KCl) se
dispone en el recipiente D.
32
CUESTIONARIO
1. Las proteínas, los carbohidratos y los á cidos nucleicos están agrupados
por caracter ísticas estructurales comunes a su clase de biomoléculas.
¿Cuál es la base pa r a agrupar compuestos como los l ípidos?
2. Menciona tres propi edades biológicas de los f osf olípidos.
3. Con base en las caracter íst icas d e la estructura quím ica de los l ípidos,
expliq ue cuál es más hidrof ílico, el colesterol o los f osf olípidos,
argumentando su respuesta.
4. ¿Cuáles son los l ípidos que se encuentr an en la yema de huevo?
5. La yema de huevo contiene una elevada cantidad de colesterol y t ambién
una elevada cantidad de lecit ina. Desde el punto de vista dietét ico y de
salud ¿Cómo se c om plementan est as dos moléculas ?
EJERCICIOS DE INTEGRACIÓN
Con base en el fundamento teórico de la cromatografía, conteste breve
y claramente las siguiente s preguntas, argumentando su respuesta y
haciendo referencia a la bibliografía consultada.
1. ¿Por qué se dice que la cromatografía en capa f ina es un criterio
parcial y no total de identificación?
2. ¿Cuál será el resultado de los siguientes errores en cromatografía en
capa fina: a. Aplicación de solución muy concentrada ; b. Utilización
de un eluyente de alta polaridad ; c. Empleo de gran cantidad de
eluyente en la cámara de cromatografía ?
3. ¿Qué tratamiento es necesario darle al gel de sílice para reutilizarl o?
4. Hay muchas razones por las que la cromat ografía en capa f ina
debería ser el principal método de análisis farmacológico. Enliste
cinco razones.
33
Práctica núm. 3
HIDRÓLISIS ENZIMÁTICA DE LÍPIDOS DE LA LECHE
INTRODUCCIÓN
Además de ser una fuente de combustible energético para nuestro organismo
(9 calor ías por gramo), los lípidos desempeñan otras f unciones
f undamentales par a el buen f uncionamiento de nuestro cuerpo: const ituyen
una reser va muy im portante de energ ía (tejido adiposo o graso), colaboran
en la regulación de la temperatura cor poral ( grasa subcut ánea), envuelven y
protegen órganos vitales como el corazón y riñones (grasa periviscer al), son
el vehículo de transporte de las vitaminas liposolubles (A, D, E, K) f acilitando
así su absorción; resulta imprescindible para la f ormación de deter m inadas
hormonas, suministran ácidos grasos esenciales ( linoleico y linolénico) para
nuestro organismo e inter viene en la buena palatabilidad de los alimentos
(sensación agradable que pr oducen los aliment os en la boca). Así m ismo
impiden que las prot eínas sean empleadas como f uente de energ ía y cumplen
una f unción estructural, estando presente en las membranas celulares
(f osf olípidos de mem brana y colesterol).
La digest ión de las grasas se inicia en la boca. Las par t ículas de

alimento se separan en otras más pequeñas mediante la masticación y act úa
una enzima, la lipasa lingual, que comienza la r uptura de los triglicér idos en
otras sustancias más sencillas (diglicéridos; molécula de glicerol unida a dos
ácidos grasos).
En el estómago act úa la lipasa gás trica y en él se absorben algunos

ácidos grasos de cadena corta y media (con relación al núm ero de carbonos
de los ácidos grasos; 4 -6 y 8-10 respectivamente). A nivel de duodeno y
yeyuno, porciones del intest ino delgado, gracias a la colecisto quinina, que
hace que la vesícula biliar se contraiga y libere bilis, se pr oduce la emulsión
de las grasas f acilit ada por los movimientos per istálticos. También actúa la
enzima lipasa pancreática y se obtienen f inalmente monoglicéridos (una
34
molécula de glicer ol unida a un ácido graso) y ácidos grasos, así como
glicerol libre y colesterol. Los ácidos grasos de cadena corta y media y el
glicerol, se absorben y pasan hacia la sangre y son transportados hacia el
hígado. Los ácidos grasos de cadena larga (de más de 12 carbon os) se
absorben y se resintetizan en triglicér idos en el ent erocito (células del
epitelio o revest imiento del intest in o delgado), f ormándose los quilo m icrones,
que también transportan una parte de f osf olípidos y colester ol. A través del
sistema linf ático l os quilomicrones pasan al torrente sanguíneo. El 97% del
total de los lípidos de la dieta son absorbidos y el resto se expulsan junto
con las heces. Los lípidos absor bidos serán transportados en sangre en
f orma de lipoproteínas.
Después de comer, es decir , en sit uación postprandial, los lípidos se

emplean como combustible energético o se almacenan en el tejido adiposo o
graso o bien pasan a f ormar parte de membranas celular es. En situación
interdigestiva o de ayuno, se produce la movilización de las grasas desde el
tejido adiposo, dando lugar a ácidos grasos, los cuales puede tener distintos
destinos metabólicos: ser empleados como f uente de energ ía en los tejidos
en general, en presencia de oxíg eno da n lugar a los cuerpos cetónicos (en
situación de ayuno y f alta de glucosa como sustrato energético) o bien
f orman parte de membranas de celulares.
PROPÓSITO
Al térm ino de la pr áctica el alumno habrá adquirido las habilidades en el
laborator io para det erminar una hidrólisis enzimát ica de los lípidos de la
leche.
Dos hor as
35
FUNDAMENTO TEÓRICO
Las lipasas y las estearasas son enzim as que catalizan la hidr ólisis de los
enlaces éster que se encuentran en un gran núm ero de lípidos
saponif icables. La reacción que se lleva a cabo es la siguie nt e:
F u e n t e : w w w . e q u i p o d i e t i s t a s . f i l e s . wo r d p r e s s . c o m , 2 0 1 0
Estas enzimas están ampliamente distribuidas en la natur aleza y son

especialmente importantes en el intestino delgado donde tien e lugar la
digestión y la absor ción de las grasas, debido a que los triacilgliceroles son
insolubles en agua y las enzimas digestivas son solubles en ella. La
digestión de los triacilgliceroles transcurr e en las interf aces lípido -agua;
consecuent emente los agentes emulsif icantes tales como las sales biliares
producen a menudo una estimulación marcada de la hidrólisis enzimática de
los lípidos.
En la leche homogenizada, los glóbulos de grasa se encuentran muy

f inamente divididos y este mater ial sir ve como u n sustrato excelente para las
lipasas.
36
La ident if icación de la act ividad de est as enzimas se realiza a través
de una t itulación ácido -base, ya que la acción de las lipasas sobre los lípidos
saponif icables liber a ácidos grasos que pueden ser cuantif icado s por la
valoración del grupo f uncional ácido carboxílico que los caracteriza.
La titulación es un método para determinar la cant idad de una

sustancia presente en solución. Una solución de concentración conocida,
llamada solución valorada, se agrega con una bureta a la solución que se
analiza. En el caso ideal, la adición se detiene cuando se ha agregado la
cantidad de reactivo determinada en f unción de un cambio de coloración en
el caso de ut ilizar un indicador inter no, y especif icada por la siguiente
ecuación de la titulación:
NA VA = NB VB
A este punto se le llama punto de equivalencia. En términos generales

la reacción entre cantidades equivalentes de ácidos y bases se llama
neutralización o reacción de neutralización, la caract er íst ica de una rea cción
de neutralización es siempre la combinación de hidr ogeniones que proceden
del ácido, con iones hidr oxilo procedentes de la base para dar moléculas de
agua sin disociar, con liberación de energ ía calor íf ica como calor de
neutralización y f ormación de una sal.
Una expresión general como la siguiente, resumen la ecuación de

neutralización:
Ácido + Base → Sal + Agua
Así pues, la titulación es un pr oceso en el cual la solución estándar

(del patrón primar io) se combina con una solución de concentración
desconocida para determinar dicha concentración.
37
Material Reacti vos

Siet e matraces Er lenmeyer de 125 mL Etanol al 95 %
Dos bur etas de 25 mL Fenolf taleína
Pinzas para buret a Sales biliares al 1%
Soporte universal Hidróxido de Potasio 0.05N
Termómetro Pancreatina al 1 % en agua
Mechero
Baño Mar ía a 37 o C
Dos pipet as de 1mL, 5 mL y 10 mL.
Seis pipetas volumét ricas de 10 mL.
Material biológico
Un litro de leche homogeneizada
PROCEDIMIENTO
1. Identif icar los matraces colocándoles los números del uno al cinco y uno
con el número tres prima ( 3').
2. Medir cuidadosamente con una pipet a volumétr ica 5 mL de leche
homogenizada y ver terlos en cada uno de los seis matraces Erlenmeyer
de 125 mL.
3. Adicionar a cada matra z 1.5 mL de extracto neutro de P ancreatina al 1% .
4. Pipetear en el matr az marcado tres pr ima ( 3') 1.0 mL de la solución de
sales biliares al 1% .
5. Colocar todos los m atraces en un baño Mar ía a 37 o C.
6. Después de 15 minutos, retirar del baño Mar ía el matraz identif icado con
el numero 1 y adicionar le 12.5 mL de Etanol tit ulando enseguida con la
solución de KO H 0. 05N usando Fenolf taleína como indicador. Agitar el
matraz durante la tit ilación, tan vigorosamente como sea posible ya que la
proteína precipitada puede enmascarar los ácidos grasos libr es.
38
Dispositivo par a la t itulación
7. Titular tan rápido como sea posible debido a que la digestión realizada
por la enzima cont inúa durante la titu lación.
8. Repet ir el pr ocedim iento anterior, sacan do el matraz 2 a los 30 minutos, el
3 y 3' a los 45 min, el 4 a los 60 m in y el 5 a los 75 minutos.
9. Preparar un test igo de la siguiente manera : Añadir en un matraz de 125
mL 5 mL de la leche homogenizada y 1.5 mL de la solución de Pancreatina
her vida pr evi amente durante tres minutos . Agregar enseguida 12.5 mL de
Etanol, la Fenolf taleína y titular inmediatamente con KOH 0.5 N restar est e
valor a los problemas.
RESULTADOS
Construir una gráf ica usando tiempo de hidr ólisis en el eje de las abscisas y
los mililitros de Hidróxido de Potasio (KOH) gastados en el eje de las
ordenadas, restando el volumen obtenido en el matraz que contiene el test igo
al volumen obtenido en todos los matraces. Concluya de manera
f undamentada los resultados obtenidos en la gráf ica.
Verter los residuos neutralizados al recipiente A, ya que contienen Etanol.
39
CUESTIONARIO
1. Explicar el ef ecto de la adicción de sales biliares sobre la actividad
enzimática suponiendo que la grasa de l a leche es T riest earina.
2. Calcular el número de miligramos de T riestearina hidrolizada por la lipasa
en una hora, basándose en la cantidad de ácido liberado durante ese
inter valo.
3. Escribir las f órmulas de los siguientes compuestos: Lecitina,
Glucosilceram ida y Fosf atidilet anolam ina; i ndicando el tipo de Lípidos al
que pertenece.
4. Descr ibir la composición de la leche.
5. ¿Qué tipos de deter gentes biológicos existen en el hombre ?
Con base en el f undamento teór ico de la Hidrólisis Enzimática de la Lipasa,
conteste breve y claramente las siguientes preguntas, ar gumentando su
respuest a y haciendo ref erencia a la bibliograf ía consultada.
1. Con base en los cálculos de las concentraciones de ácidos grasos
liberados por acción de la Lipasa Pancreática, elabore la representac ión
doble r ecíproca de Lineweaver y Burk y obtenga el Km y la Vmax de la
cinética enzimática (reporte todos los cálculos realizados).
2. ¿Por qué es útil g raf icar los datos de velocidad para las reacciones
enzimáticas como una línea recta más que como una cur va?
3. ¿Bajo qué condiciones se puede asumir que el Km indica la af inidad de la
unión de la enzima con el sustrato?
4. Interprete el valor de Km y Vmax obtenidos en la gráf ica.
40
Práctica núm. 4
DETERMINACIÓN DE LA ACTIVIDAD DE LAS ENZIMAS
TRANSAMINASAS
INTRODUCCIÓN
En el metabolism o de los aminoácidos se incluyen reacciones de
Transaminación, en las que hay una transf erencia de un grupo am ino de un
alf a-aminoácido a un alf a -cetoácido con la f ormación de un nuevo alf a -
aminoácido y cet oá cido, las enzima s que cat alizan esta reacción se llaman
Transaminasas o llamadas también Aminotransf erasa s, las cuales ut ilizan
como coenzima al Fosf ato de Pir i doxal derivado de la V itam ina B-6
Fuente: Nelson, 2015
En la reacción de Transaminación el F osf ato de Piridoxal actúa como

un portador int ermediar io del grupo am ino transf erido.
Dentro de las T ransaminasas má s estudia das están la T ransaminasa

Glutámico Pirúvica y a la Transam inasa Glutám ico Oxalacét ica, TGP y TGO
respect ivament e , su cuant if icación es utilizada para conocer el
f uncionam iento hepático, junto con otras enzimas.
PROPÓSITO
El alumno desarrollará su capacidad para determinar la actividad de la
enzima Transaminasa Glutámico Pirú vica en suero humano.
41
Dos hor as
FUNDAMENTO TEÓRICO
La Aspart ato Aminotransferasa (AST), inicialmente llamada Transaminasa
Glutámico O xalacética (GOT), cataliza la transf erencia revers ible de un grupo
amino, aspartato al α -cetoglutarato con f ormación de glutamat o y
oxalacetat o. El o xalacetato producido es reducido a m alato en presencia de
la enzima Malato Deshidr ogenasa ( MDH) y Nicot ín Adenin Dinucleótido
reducido ( NADH):
Fuente: Lehninger, 2007
La velocidad de la dism inución de la concentración del NADH en el

medio, determinada f otocolor imétricamente, es proporcional a la
concentración catalít ica de la enzima Aspartato Am inotransf erasa (AST) en la
muestra ensayada.
Por otra parte, la Alanina Aminotransferasa (ALT), inicialment e

llamada Transam inasa Glutámico Pirúvica ( TGP), cataliza la transf erencia
reversible de un grupo am ino de la L-alanina al α -oxoglutarat o con f ormación
de L-glutamato y p iruvato. El oxalacetat o producido es r educido a l actato en
presencia de la enzima Lactato Deshidrogenasa y Nicot ín Adenin
Dinucleót ido reducido (NADH):
42
Este es un método estándar optimizado según las recomendaciones de

la IFCC (Internacional Federat ion of Clinical Chemistry and Laborator y
Medicine) .
Material Reacti vos

Centr íf uga Kit par a determinar GOT(AST), el cual incluye :
Guantes de látex 1. R 1 : TRIS pH 7.8 (80mmol/L)
Jeringa de 3 mL 2. L- Aspartato (200 m mol/L)
Dos tubos de ensaye Kit par a determinar GPT(ALT), el cual incluye :
Micropipet as de 100 y 1. R 1 : TRIS pH 7.8 (80mmol/L)
1000L Hepar ina
Termobaño Solución de Cloruro de Sodio 0.9%
Espectrof otómetro
Celdas
PROCEDIMIENTO
1. Extraer 2 a 3 ml de sangre venosa y colocarla en un tubo de ensayo sin
anticoagulante . Los donant es no requier en estar en ayuno. La sangre se
deja reposar en el tubo durante unos minutos; se produce la coagulación
de la muestra, obteniéndose dos f racciones: a. El coágulo, constituido
principalmente por las células y b. El líquido excluido del coágulo
denom inado suero. El suero se dif erencia del plasma porq ue car ece de
f ibrinógeno (que ha sido convertido en la f ibrina del coágulo), protrombina
y otros f actores de la coagulación consumidos durante dicho proceso, y
por contener además, en baja concentraci ón, sustancias de importancia
43
f isiológica liberadas por las plaquetas durante la coagulación, por
ejemplo, el f actor de crecimiento derivado de las plaquetas ( PDGF) .
2. Centr if ugar 15 minutos a 2000 rpm con el propósito de obtener el suero de
la sangre.
3. Reconstituir el react ivo del Kit con 2mL de la solución buf f er.
4. Preparar la muestra directam ente en la celda:
Plasma 100 µL
React ivo 1000 µL
5. Incubar exactamente un minuto a 30°C

6. Pasado el tiempo de incubación, leer la absorbancia inicial en el
espectrof ot ómetro a 340nm .
7. Al cabo de 1, 2 y 3 minutos leer nuevamente . En est e tiempo la celda
permanecerá dentro del espectrof otómetro.
8. Observar si la variación de la absorbancia por minuto es menor a 0.16; en
caso contrar io, diluir 0.1 m l de suero con 0.9 m l de NaCl 0.9% y repetir la
prueba.
RESULTADOS
1. Aplicar la siguiente f órmula para calcular la act ividad de la ALT:
U/L = ∆A x 1746
(R ANDOX)*
En donde ∆A es el promedio de la dif erencia de las absorbancias. Usar
solo los valores obtenidos durante los 2 primer os minutos.
2. Aplicar la siguiente f órmula para calcular la act ividad de la AST:
U/L = ∆A x 1750
(SPINRE AC T)*
En caso de haber diluido el suero, multiplicar el resultado por 10.
44
3. La unidad internacional ( U) es la cant idad de enzima que convierte 1µmol
de substrato por m inuto en condiciones estándar. La concentración se
expresa en unidades por litro ( U/L)
4. Reportar
Resultados
Nombre del paciente
Sexo
Valores de Alanina Aminotransf erasa ( ALT) obtenidos
Valores de Aspartato Aminotransf erasa ( AST) obtenidos
Ref erencia de valor es normales a 30°C
Nota: La marca del kit puede cambiar, así que es necesario verificar el F ACTOR
por el que se debe multiplicar ∆A en el inserto del mismo
Inactivar con Hipoclorito de Sodio y desechar en la tarja.
CUESTIONARIO
1. Escriba la reacción de la Transaminasa Glutámica Pirúvica ( TGP)
2. ¿Cuáles son los valor es de ref erencia de la Transam inasa G lutámica
Pirúvica ( TGP)?
3. ¿Cuál es el f undamento de la reacción ?
4. ¿Dónde se encuentr an la Transaminasa Glutám ico Pirúvica ( TGP) en el
organismo humano ?
5. ¿Qué signif icado t iene una elevación en la concentr ación de la
Transaminasa Glutámico Pirúvica ( TGP)?
Ejercicios de integración
Con base en el f undamento teórico de la Determ inación de la Act ividad de las
Enzimas Transam inasas , conteste br eve y claramente las siguient es
preguntas, argumentando su respuesta y haciendo ref erencia a la bibliograf ía
consultada.
45
1. En la pr áctica clínica diar ia cuál es el propósito de realizar la
determinación de la actividad de las enzimas Transaminasas.
2. Haga un diagrama en el que exponga la participación de la G lutamato
deshidrogenasa y la Glutamino sintetasa para pr oducir Glutamina a part ir
de Amoniaco y  Cet oglutarato.
3. Enliste los aminoácidos que son esenciales y los no esenciales para los
seres humanos. En este sentido indique los am inoácidos esenciales para
un adulto f enilcetonúrico y compárelos con los requer imientos de un
adulto normal.
4. ¿Cuántos am inoácidos part icipan en el Ciclo de la Urea?
5. Con base en la r espuesta ant erior ¿Cuánt os pueden usarse para la
síntesis de proteínas?
46
Práctica núm. 5
DETERMINACIÓN DE UREA
INTRODUCCIÓN
Cuando los am inoácidos de la dieta exceden los requer imientos para la
síntesis proteica y otra vía anabólica, el exces o es catabolizado para
producir ATP o es convertido a substratos para la síntesis de ácidos grasos.
Es importante tomar en cuenta que só lo los esq ueletos de carbono de

los am ino ácidos y no los grupos amino pueden ser usados en el proceso
antes mencionado.
La eliminación del nitrógeno de los amino ácidos es una parte

importante en el catabolismo de los m ismos, ya que es tóxico pa ra el cerebro
en f orma de amonio, por lo que el organismo humano l o debe de elim inar en
f orma de urea, compuesto no tóxico , soluble en agua cuya única f unción en
el metabolismo es la excr eción de n itróg eno.
La urea es uno de los constituyentes nit rogenado s no proteicos (NNP)

más abundantes en el cuerpo; los demás son la creatinina, el ácido úrico, el
amonio y los aminoácidos.
Estructura de la Urea
La urea es el principal pr oducto nitrogenado de desecho del

metabolismo de las proteínas y sólo se sintet iza en el hígado. Su
concentración es igual en todos los líquidos corporales, con excepción de la
sangre enter a debido a la dif erencia de valo res q ue exist e entre el suero y
los er itrocitos. Por lo tanto, se pref iere el suero o plasma a la sangre entera
para analizar el nitrógeno de la urea.
47
El Ciclo de la Urea es el pr oceso que consiste en la f ormación de urea
a partir de amoníaco. Esta es lle vada a través de la sangre a los riñones, los
cuales f iltran la urea de la sangre y la depositan en la or ina. Un hombre
adulto elim ina aproximadamente unos 28 g de urea por día.
La urea puede det erminarse en el hombr e en muestras como: la sangre

o la orina, por dif erentes métodos , los más usados son los métodos
enzimáticos.
PROPÓSITO
Al t érmino de la pr áctica el alumno tendrá la capacidad para cuant if icar ur ea
en muestras biológicas humanas como la orina o la sangre.
Dos hor as
FUNDAMENTO TEÓRICO
La urea se hidroliza en presencia de agua y ureasa para producir amoniaco y
dióxido de car bono. El amoniaco producido en la pr im era reacción se
combina como α-oxoglutarato y NADH en presencia de la enzima Glutamato
Deshidr ogenasa par a producir glutamato y NAD + .
Urea + H 2 O Ureasa 2 NH 3 + CO 2
2α-Oxoglutarato + 2NH 4 + 2NADH + GLDH

2L-glutamato + 2NAD + +2H 2 O
La muestra puede ser suero, plasma hepar inizado, EDTA pl asma u

orina (Diluir la or ina 1: 20 con agua dest ilada ).
48
Valores normales :
Suero 1.7 - 8.3 mmol/l 10 – 50 mg/dl

Orina 333 – 583 mmol/24 hrs 20 – 35 g/24 hrs
Material Reacti vos

Centr íf uga Kit par a determinación de Ur ea:
Jeringa de 3 mL  Solución Tampón 150 mmol/L, pH
Dos tubos de ensay o 7.6
Micropipet as 10 y 1000 L  Enzima Ureasa, GLDH, NADH, ADP,
Espectrof otómetro -O xoglutarato
Dos celdas para el Espectrof otómetro  Solución patrón (ref erencia)
13.3 mmol/L (80mg/dL)
Guantes de látex
PROCEDIMIENTO
1. Reconstituir un vial de react ivo Enzima 2 con 15 m L de solución T ampón 1
(estable durante 4 semanas entre 2 y 8°C ó 2 días entre 15 y 25°C).
2. Siguiendo las instrucciones de la tabla, preparar un tubo de ensayo para
el blanco y calibrar el E spectrof otómetro a 340 nm. Posteriormente
preparar en otro tubo de ensayo la solución patrón ( ref erencia) y
terminadas las dos lecturas, preparar la muestra :
Reactivo blanco Patrón Muestra

Agua dest ilada 10 µL 0 0
Patrón 0 10 µL 0
Muestra 0 0 10 µL
React ivo 1000 µ L 1000 µ L 1000 µ L
Mezclar perf ectamente
Incubar exactamente 30 segundos a 37°C
Calibrar con el blanco
Leer la absorbanc ia de Patrón y Muestra a 340 nm.
Leer de nuevo al cab o de 1 minuto
49
RESULTADOS
Determine la concentración de u rea en la muestra problema, aplicando la
siguiente relación:
ΔA muestra
Concentración de Urea   Concentración del patrón
ΔA patrón
En caso de haber usado or ina diluida 1 :20, multiplicar el resultado por 21.
El método es lineal hasta 50 mmol/L ( 300 mg/dL) suero o plasma, y

1050 mmol/L (6300 mg/dL ) en orina. Par a concentraciones super iores diluir la
muestra 1 + 1 con una solución de NaCl al 0.9% y repetir la prueba,
multiplicar el resultado por 2.
1. Inactivar el plasma o su ero, as í como el paquete globular con Hipoclor ito
de Sodio y desechar en la tarja.
2. Disponer el contenido de las celdas (blanco, patrón y muestra) en
recipiente F.
CUESTIONARIO
1. ¿Explique que indica valores elevados de u rea?
2. ¿Explique que indica los valores bajos de urea?
3. ¿Qué papel juega el F enol en la determinación de la u rea?
4. Proponga otro m étodo de cuantif icación de la u rea.
5. Escriba el Ciclo de la Urea.
Con base en el f undamento teórico de la Determ inación de Urea , contest e
breve y claramente las siguientes preguntas, argumentando su respuesta y
haciendo ref erencia a la bibliograf ía consultada.
50
1. En la práct ica clínica diar ia cuál es la f inalidad de realizar la
Determinación de Ur ea.
2. Escriba una ecuación para la reacción neta del Ciclo de la Urea y
demuestre cómo est e ciclo se relaciona con el Ciclo de Krebs.
3. ¿Cuántos ATP se requieren para una vuelta del Ciclo de la Urea?
4. ¿En donde se utilizan estos ATP?
5. ¿En qué condiciones los aminoácidos son catabolizados, cuá les son los
productos f inales de las cadenas de carbono de los aminoácidos
glucogénicos? ¿Y para los am inoácidos cetogénicos?
51
Práctica núm. 6
AISLAMIENTO Y PURIFICACIÓN DEL ÁCIDO
DESOXIRRIBONUCLEICO DE CHÍCHAROS
INTRODUCCIÓN
El Ácido Desoxirribonucleico (ADN) es el material genético de todos los
sistemas vivos y de casi todos los virus. E l ADN lleva la inf ormación
necesaria para dir igir la síntesis de pr oteínas y la duplicación de la misma
molécula. Est a biomolécula f ue detectada en el núcleo celular por el
investigador F. Miesher en 1869 y desde los años cuarent a O. Aver y y sus
colaborados descubrieron que el mat er ial genét ico está f ormado de Ácido
Desoxirr ibonucleico .
El Ácido Desoxirr ibonucleico (ADN) es llamada también la molécu la de

la vida, está f ormada por nucleótidos del tipo desoxirr ibonucleico, que
contienen las bases nitrogenadas de Adenina, Guanina, Citosina y Tim ina. En
el ADN la secuencia de nucleótidos se conser va en este alfabeto de cuatro
letras; la inf ormación para la sínt esis de una proteína constituye el gen de
esta. De hecho, ningún gen es traducido directament e en proteína. Antes
debe ser transcrit o en Ácido Ribonucleico mensajero ( ARNm), que es
específ ico y complementario del gen. Este ARNm es traducido después en
proteína gracias a un diccionario bilingüe, “el código genét ico" a un grupo de
tres nucleótidos en el ARN y por consiguiente en el gen, correspondiendo a
un aminoácido deter minado.
Para est udiar el ADN es imprescindible aislar lo e ident if icarlo. Exis ten
dif erentes métodos de aislamiento, dependiendo del tipo de estudio o
investigación que se quiera realizar. Sin embargo, todos los métodos
comparten el hecho de que es una molécula situada al inter ior de estructuras
membranosas y est á asociada con pr ote ínas, entonces se requiere usar
sustancias adecuadas para obtener al ADN de la f orma más purif icada
posible.
52
PROPÓSITO
Al terminar la práctica el alumno habrá d esarrollado las habilidades de
extracción y aislamiento del Ácido Desoxirribonucleico de chí charos.
Cuatro horas
FUNDAMENTO TEÓRICO
La Biolog ía Molecular es una de las her ramientas más útiles que emplea hoy
en día la ciencia y la medicina moderna. La obtención de Ácido
Desoxirr ibonucleico (ADN), es el punto de part ida para la mayor ía de los
análisis genét icos; incluso contando con pequeñas cant idades de ADN es
posible amplif icar genes específ icos in vitro a través de la reacción en
cadena de la Polim erasa ( PCR por sus siglas en inglés: Polymerase Chain
React ion). Esta revol ucionaria técnica le valió a su invent or, Kar y B. Mullis,
el prem io Nobel de Química en 1993.
En algunas circunst ancias, cuando no es posible obtener muestras de

sangre, el ADN obtenido a part ir de cabellos o bulbos capilares puede ser
utilizado para anál isis genéticos. Tomar una muestra de cabello es sencillo,
permite el muestreo de un gran número de sujetos en menor tiempo, con un
m ínimo de af licción causada. Sin embar go , extraer un cabello (junto con el
bulbo capilar) puede ser doloroso en algunas sit ua ciones e imposible en
animales de labor atorio carentes de pelaj e.
La extracción de ADN de diversas f uent es celulares requier e una serie

de etapas básicas: En pr imer lugar tiene que romperse la pared celular y la
membrana plasmát ica para poder acceder al núcleo de la célula. A
continuación debe r omperse también la membrana nuclear para dejar libr e el
ADN. Los jabones utilizados como lavavajillas emulsionan los lípidos de las
membranas celulares y las rompen. La sal evita la unión de las proteínas al
53
ADN. Para aislar el ADN hay que hacer que precipite en alcohol. El ADN es
soluble en agua, pero cuando se encuentra en alcohol se desenrolla y
precipit a en la interf ase entre el alcohol y el agua. Además de permit irnos ver
el ADN, el alcohol separa el ADN de otr os componentes celular es, los cuales
son dejados en la solución acuosa.
La técnica utilizada en esta act ividad experiment al se basa , por un lado,

en el principio de que el componente f undamental de las membranas
plasmát ica y nuclear son los lípidos, en co nsecuencia, se utiliza un
detergente (surf actante) para r omper est as estructur as y per mitir la salida del
ADN. Por otro lado, el ADN de vegetales y animales se encuentra asociado a
proteínas de tipo histona, por lo tanto, al agregarle alcohol, se precipita n las
proteínas y de esta f orma se obtiene el ADN como una estructura más pur a.
Finalmente, como el ADN es una molécula de car ácter ácido es posible
identif icar lo con colorantes específ icos como el anaranjado de acridina.
Material Reactivos
3 vasos de precipitado de 100 ml  10 ml. de agua desionizada o
(en su caso uno de 100 ml y dos de destilada
50 ml)  20 ml. de Desoxicolato de Sodio (1 g
1 varilla de vidr io de Desoxicolato de Sodio en 6 0 ml
1 caja de Petri de agua destilada o desionizada) .
1 pipeta Pasteur N o t a : S e p u e d e s u s t i t u i r e l D e s o xi c o l a t o d e
1 mortero Sodio por detergente Roma
1 mortero  20 ml de Etanol absolut o o al 95%

1 Microscopio de Contrast e de FRIO (el alcohol debe est ar a 4°C
Fases por lo menos 1 hora antes de iniciar
1 portaobjetos la act ividad y perm anecer en hielo
1 cubreobjetos durante todo el experimento)
 Colorante Anaranjado de Acr idina
Material biológico
10 g de chícharos
R e c o m e n d a c i ó n : L a va r e l m a t e r i a l d e vi d r i o p e r f e c t a m e n t e s i s e u t i l i za r á m á s d e u n a ve z
p a r a e vi t a r c o n t a m i n a c i ó n e n e l p r o c e s o d e e xt r a c c i ó n y a i s l a m i e n t o .
54
PROCEDIMIENTO
1. Sacar los chícharos de su vaina.
2. Pesar en una caja de Petri 10 g de chícharos.
3. Triturar los chícharos en un mortero con 10 ml de agua desionizada o
destilada hast a que quede una masa homogénea y semilíquida.
4. Filtrar el sobrenadante obtenido en cada trituración en el vaso de
precipitados con ayuda de una coladera o a través de una gasa.
5. Verter el líq uido en otro vaso de precipitados, añadir 20 ml. de
desoxicolat o de sodio y agit ar SUAVEMENTE con la varilla de vidr io.
Anotar lo que sucede.
6. Incorporar LENTAMENTE 20 ml de etanol, resbalando por las paredes de
la probeta y esper ar por lo menos dos minutos para obser var unos
f ilamentos blanquecinos de “ADN” extr aíd o por esta técnica (Ver Figura A
y B), algunos de est os f ilamentos quedan adheridos a la varilla de vidrio.
SOLO SI ES NECESARIO, AGITAR LENTAMENTE EN FORMA
ROTATORIA Y EN LA MISMA DIRECCIÓN.
7. Tomar una muestra de los f ilamentos blanquecinos con la varilla de vidr io
o una pipet a Pasteur y colocarlos sobr e el portaobjetos.
8. Añadir una gota de colorante anaranjado de acridina y colocar el
cubreobjetos.
9. Reportar los f ilamentos obser vados al m icroscopio con los objetivos 10x y
20x
Extracción y aislamiento de ADN

Fuente: WordPress, 2017
Figura 1a Figura 1b
55
10. Obtenido el precipitado se saca con un agitador de vidrio con
movimientos circular es.
11. Disolver el DNA en 5 ml de agua y deter minar la absorbancia a 260 y 280
nm.
Resultados
Longitud de Onda Absorba ncia
260 nm
280 nm
La cuant if icación del ADN total extraído se realiz a por la medida de la

absorbancia a 260 nm, dado que una unidad de absorbancia equivale a una
concentración de 50 ng/μl. La medida de la pureza se realiz a m idiendo la
absorbancia a 280 nm, siendo el coef iciente de absorbancias 260/280 el que
indica la pureza de la solución. Un cociente de 1 .8 indica que la solución es
de ADN es puro, valores inf eriores indican una cont aminación por proteínas o
polif enoles mientras que si la relación es de 2.0 se trata de ARN puro ¿ De
acuerdo a las lecturas a 260 y 280 nm diga ust ed si el DNA obt enido es
puro?
CUESTIONARIO
1. Explique qué sucede en cada uno de los pasos de esta técnica
2. ¿Por qué las lect uras en el espectrof otómetro para determ inar la pur eza
del ADN se realizan a 260 y 280 nm?
3. ¿Cuál es la razón para emplear anaranj ado de acridina par a obser var los
f ilamentos de ADN en el micr oscopio?
4. ¿Cuál es la f unción del ADN en los sistemas vivos?
5. Explica en qué consiste la replicación del ADN
56
DISPOSICION DE RESIDUOS
1. Los residuos de la trituración de los chícharos se deben colocar en un
recipiente para desechar los materiales orgánicos.
2. Los sobrenadant es obtenidos que contiene Etanol se inact ivan con
Hipoclor ito de Sodio y se colocan en el recipi ent e A.
Con base en el f undamento teórico del Aislamiento y Pur if icación del Ácido
Desoxirr ibonucleico , conteste breve y clarament e las siguientes preguntas,
argumentando su respuest a y haciendo ref erenc ia a la bibliograf ía
consu ltada:
1. En la pr áctica clínica diar ia c uál es la f inalidad de ident if icar el ADN en
pruebas genéticas.
2. ¿Por qué se emplean muestras de ADN mitocondrial para las pruebas
genéticas?
3. ¿Por qué razón no se emplea el Ácido Ribonucleico para las pruebas
genéticas?
4. Desde el punto de vista biológico ¿T iene ventajas que el ADN sea
estable? Argumente porqué sí o porqué no .
5. ¿Por qué aumenta la abs orbancia cuando se desenrolla l a molécula de
ADN?
57
Práctica núm. 7
AISLAMIENTO Y PURIFICACIÓN DE ÁCIDO RIBONUCLEI CO
DE LEVADURA DE PANIFICACIÓN
INTRODUCCIÓN
Los Ácidos Desoxirr ibonucleico ( ADN) y Ribonucleico (ARN) son polímer os
de nucleót idos f ormados por un azúcar de cinco carbones ( Desoxirr ibosa en
el ADN y r ibosa en el ARN), una base nitrogenada (que puede ser Adenina,
Timina, Citosina, Guanina o Uracilo) y una molécula de f osfato. El ADN es la
macromolécula que contiene la inf ormación genética de las células
procar iontes, eucar iontes y de los adenovirus. El ARN está involucrado en la
síntesis de proteínas y con st ituye el material genético de los retrovirus
( Madigan et al., 2000).
La expresión de los genes es la base del metabolismo celular y por

ésta se ent iende que el ADN se transcr ibe en ARN, que a su vez se traduce
en proteínas. Esta secuencia ADN -ARN-prot eínas const ituye el “Dogma
Central de la Biolog ía Molecular”. Hay tres tipos de ARN:
 El ARN mensajero (ARNm), que se sintet iza durante la transcripción
gracias a la ARN polimerasa; est á conf ormado por codones, que son
secuencias de tres pares de bases que co dif ican un am inoácido.
 El ARN de transf erencia (ARNt) perm ite el vínculo entre el ARNt y los
aminoácidos, ya que en un extremo cuenta con un am inoácido y en el
otro, con una secuencia de tres pares de bases llamada anticodón, a la
que se une el codón del A RNm.
 El ARN ribosomal ( ARNr), que constituye la mayor parte del ARN en las
células, integra junt o con las proteínas a los ribosomas, facilitan do el
acoplam iento específ ico entre el ARNm y los ARNt para la traducción; los
ribosomas están compuestos por tres subunidades de ARNr de dif erentes
tamaños en los eucariontes (23S, 18S y 5S) y procar iontes (23S, 16S y
5S).
58
PROPÓSITO
Al f inalizar la práctica el alumno habrá desarrollado la habilidad par a extraer
y purif icar ARN de levadura de panif icación.
Cuatro horas
FUNDAMENTO TEÓRICO
Los ácidos nucleicos, debido a su interrelación con otras moléculas, resultan
bastante dif íciles de separar; por ejem plo, cuando los ácidos nucleicos se
encuentran unidos a las proteínas o a los polisacáridos se deben emplear
métodos suaves, ya que los tratam ientos drásticos alteran prof undamente su
estructura y caracter ística, por lo que a menudo se encuentra un
considerable grado de impurezas en las preparaciones no analíticas.
El ARN no t iene la estructura altamente regular que posee el ADN, ni

presenta la relación constante entre las bases que son caracter íst icas del
ADN. También es m ás dif ícil estudiar lo debido a que se pr esenta en varias
f ormas dif erentes en una m isma célula. La mayor variabilidad en la estructura
del ARN se debe, en parte, a la naturaleza m isma de los nucleótidos que lo
constit uyen. Los nucleótidos de r ibosa tienen dos grupos hidroxilos en el
azúcar en estado libre, mientras que los nucleótidos de desoxirribosa
presentan solo uno. Otro f actor que contribuye a la variabilidad en la
estructura del RNA es la mayor f recuencia de bases poco comunes tales
como Met ilcit osina y Metilguanina.
Los métodos de aislamiento, dependen del t ipo o condiciones en que

se requiere el ARN, los más usados son :
1. Extracción con Ácido Triclor oacét ico - Cloruro de Sodio: Consiste en la
precipit ación con Ácido Tricloroacético de moléculas cargadas, lavando
con acetona, par a eliminar lípidos y la extracción f inal del ARN con
59
Cloruro de Sodio (NaCl) al 10% y post eriorme nte precipitar con alcohol. El
ARN así obtenido está poco degradado y contiene trazas de ADN.
2. Extracción con f enol: Consiste en la ext racción con soluciones f enólicas
concentradas, desnaturalizando proteínas, rompim iento de la emulsión
Fenol-Agua por centr if ugación, cont eniendo en la f ase inf erior (f enólica) el
ADN y en la superior ( acuosa) ARN y carbohidratos con proteínas
desnat uralizadas en ambas f ases. Eliminación por cent rif ugación de
proteínas y precipitando con alcohol el ARN. El producto está
contaminado con polisacár idos, principalmente Glucógeno, pero libre de
ADN.
Material Reacti vos

Vasos de precipitado de 150 ml Fenol al 90%( v/ v)
Probeta de 25 m l Agua dest ilada a 37°C
Agitador de vidrio Etanol absoluto f río
Pipeta Pasteur Solución de Acetato de Potasio al 20%
Baño Mar ía pH 5
Vidr io de reloj Éter et ílico
Caja Petr i desechable Solución de Etanol -Agua (3:1)
Pipetas de 10 ml
PROCEDIMIENTO
1. Pesar 5 g de levadura de panif icación.
2. Suspender la levadura en 20 m L de agua dest ilada a 37°C. Deje reposar
15 minut os a esta temperatura.
3. Agregar 25 m L de la solución de Fenol 90%. CUI D AD O EL FENOL
PRODUCE QUEM AD UR AS.
4. Agite mecánicament e la suspensión durante 30 m inut os a temperatura
ambiente.
5. Centr if ugar a 3000 rpm durante 1 5 minutos (de pref erencia a 5 o C) para
romper la emulsión.
60
6. Con la pipeta Pasteur remueva cuidadosament e la capa super ior
acuosa.
7. Colocar la f racción acuosa superior y capa intermedia en un tubo y
centrif ugar a 3000 r pm (de pref erencia a 5 o C), durante 15 min utos para
separar la proteína desnaturalizada.
8. Decantar y medir el volumen de sobr enadante obtenido. Añadir 1 m L de
Acetato de Potasio al 20% pH 5.0 por cada 10 ml de sobrenadante.
9. Enf riar en baño de hielo por espacio de una hora el sobrenadante y
precipit ar el ARN añadiendo 2 volúmenes de Etanol absoluto frío.
10. Centr if ugar a 2000 rpm. durante 5 minut os.
11. Suspender el precipitado en apr oximadamente 5 mL de Et anol -Agua
(3:1) a tem peratura ambiente y centrif ugar a 2000 rpm durante 5
minutos.
12. Repet ir el paso núm ero 12 con Etanol absoluto y después con Éter.
13. Secar al aire y pesar. (Nota: El contenido de ARN en levaduras es
alrededor del 4% de su peso seco)
1. La f ase f enólica post erior a la centrif ugación disponerla en recipiente F.
2. Las f ases etanólica y etérea obtenidas después de la centrif ugación
disponer las en contenedor A.
CUESTIONARIO
1. Calcular el rendimiento de la extracción de ARN
2. ¿Explicar cuál es la f unción de los siguientes react ivos en la práct ica
Fenol, Etanol absoluto y Ét er?
3. ¿De qué otras f uentes ser ía posible obtener ARN y que m odif icaciones
har ía en la técnica de identif icación y aislamiento?
61
1. Con base en el concepto de niveles de estructura (primar ia, secundaria,
terciar ia y cuaternar ia) como se d ef inen para las proteínas. ¿Qué nivel
muestra el ADN de doble cadena, el ARNm y el ARNt?
2. ¿Por qué el ARN es más vulnerable a la hidr ólisis alcalina que el ADN?
62
Práctica núm. 8
DETERMINACIÓN DE FÓSFORO EN ACIDO RIBONUC LEICO
INTRODUCCIÓN
El ADN y ARN se caracter izan por la posesión de un elevado númer o de
grupos f osf ato, que pueden ser liberados por hidrólisis y de t erminados
mediante la interacción con el Azul de Molibdeno. Esta es una aproximación
a la det erm inación d e los niveles de los ácidos nucleicos que só lo se puede
emplear en dis oluciones pur if icadas, otras pruebas m ás específ icas son la de
Dif enilalanina y del Orcinol, ut ilizables para la desoxirribosa y sus der ivados
y la r ibosa y sus derivados, respect ivam ent e. Aquí se utilizan reacciones de
sus componentes para la determ inación cuant ita tiva de los ácidos nucleicos,
con posibilidades, además, de dif erenciarlos con f acilidad ya que el DNA y
derivados no reaccionan con el Orcinol y el RNA y sus derivados no
reaccionan con la Dif enilalanina.
Por ejemplo, la het erogeneidad del RNA total obtenido de hígado de

rata, se puede poner de manif iesto por su resolución mediante una columna,
situación en la que se obtienen núme ros picos dist intos dependiendo de sus
pesos mo leculares y bajo condiciones muy controladas de extracción podr ían
ser vir para aislam iento parcialmente pur if icado de algunas clases de RNA de
bajo peso molecular.
Existen algunas pruebas color i das específ icas de las pur inas,
nucleósidos y nucleótidos que sir ven f undamentalment e par a reconocer a la
ribosa y a la desoxirribosa en muy pequeñas canti dades o en desarrollo
cromatográf ico, así también se puede identif icar elementos presentes ; como
por ejemplo el f ósf oro, la mayor ía de los mé todos par a el análisi s del f ósf oro
se basan en la ruptura del ortof osf ato, dando lugar a una f orma insoluble que
puede determinarse después por mé todos gravimétricos, nef elomé tricos o
polarográf icos.
63
PROPÓSITO
Al f inalizar la práctica el alumno habrá cuant if icado el f ósf oro presente en la
muestra obtenida de levadura de panif icación .
Cuatro horas
FUNDAMENTO TEÓRICO
El ió n f ósf oro es un elemento ampliamente distribuido en el cuerpo humano,
constit uye el pr incipal anión encontrado dentro de las células y se encuentra
f isiológicamente relacionado con diversas f unciones metabólicas im portantes.
Está involucrado en el metabolismo de los carbohidratos como intermediar io
f undamental y sir ve como donante de f osf atos de alta energía ( ATP) durante
la f osf orilació n oxidativa en la mitocondria. Esta f uente de energ ía mant iene
muchas f unciones f isiológicas como contract ilidad muscular, f unciones
neurológicas y transporte de electrolitos.
El f ósf oro, además es un componente estructural de otras sustancias

f isiológicamente importantes: ácidos nucleicos, f osf olípidos, nucleót idos
(NADP, NADPH), los cuales son impor tantes en sistemas enzimáticos. El
f ósf oro constituye un e lemento esencial en la membrana celular f osf olípidica,
en las f osf oproteínas, contr ibuye a mantener la concentración cr ít ica
intracelular y pr opor ciona sustrato para la mineralización de los huesos.
La determinación del f ósf oro inorgánico se ef ectúa con el empleo de

dif erentes métodos como son la titulación acidimétrica, procedimientos
enzimáticos, la det erminación f otométrica del compuesto no reducido a 340
nm, la determinación f otométrica en el espectro visible de la reacción del
f ósf oro con dif erentes compuestos cromogénicos entre el los el Ácido
Molibdivanadof osf órico, el compuesto f ormado con verde de malaquita, entre
otros.
64
De los métodos mencionados, el Método Ultravioleta (UV) presenta
mayor aceptación . Este método se basa en las modif icaciones hechas al
método propuesto por Daly y Ert ingshausen en 1972, el cual establece que la
mayor ía de los mét odos para la deter minación del Fósf oro inorgánico se
basan en la reducción de un complejo de Fosf omolibdato con un agente
reductor, dando por resultado la poster ior f ormación de azul de mol ibdeno.
Este método posee varias ventajas entre las que se incl uyen mayor
sensibilidad, est abilidad, simplicidad y rapidez.
El f undamento de la técnica se basa en la reacción de los molibdatos

con los f osf atos para f ormar compuestos como el Fosf omolibdato A mónico
((NH 4 ) 3 [ P( MO 3 O 1 0 ] 4 ) que presentan un máximo de absorci ón en la zona del
espectro ultravioleta , a una longitud de onda de 340 nm.
El f ósf oro inorgánico reacciona con el Molibdato de Amonio en

presencia de Ácido Sulf úrico para producir un complejo de Fosf omolibdato no
reducido. El incremento en la absorbancia a 340 nm es directament e
proporcional a la concentración de f ósf oro inorgánico en la muestra :
Fósforo inorgánico + Molibdato de Amonio Complejo de

Fosfomolibdato no reducido (compuesto amarillo)
PO 4 3 - + 3NH4 - + 12MoO 4 H 2 PO 4 (NH 4 ) 3 12MoO 3 + 12H 2 O.
65
Estructura del Ácido Ribonucleico de Transferencia
Fuente: Nelson, 2015
MATERI AL Y RE ACTI VOS
Material Reacti vos

Diez tubos de ensayo Ácido Sulf úrico 2.5M
Tres pipetas de 1.5 y 10 mL Ácido Sulf úrico 0.25M
Tres matraces de digestión Cloruro de Sodio 0. 15M
Dos matraces af orados de 10 mL Molibdato de Amonio al 5%
Digestor Ácido Am ino- Naf tol- Sulf ónico
Baño Mar ía a 37 °C Sulf ito de Sodio
Fotocolor ímetro Bisulf ito de Sodio
Termómetro Solución t ipo de Fósf oro (30 mg/ mL)
Solución de ARN obtenido de la
levadura de panif icación .
PROCEDIMIENTO
Primera Fase Digestión
1. Reconstituir la muestra de ARN obtenida en la práctica anterior con
dos mililitros de solución isotónica de Cloruro de Sodio y etiquetar
como “problema”
2. Etiquete los dos matraces de digestión : uno como "testigo" y otro
como problema.
3. En el matraz "testigo" coloque los siguientes reactivos: 1 m L de
Ácido Sulfúrico 2.5M y 0.2 mL de NaCl 0.15M; en el matraz
66
"problema" coloque 1 m L de Ácido Sulfúrico 2.5M y 0.2 mL de
solución de ARN de levadura de panificación .
4. Digerir las muestras durante 10 minutos, contando el tiempo al
iniciarse el desprendimiento de vapores blancos (hacerlo en
campana y digestor).
5. Terminada la digestión, enfriar los matraces y pasa r su contenido
cuantitativamente a un matraz aforado de 10 mL , haciendo lavados
repetidos al matraz de digestión con alícuotas de 1 mL de agua
destilada, pero s in llegar al volumen de aforo ( aproximadamente 3
mL menos).
6. Adicionar a cada m atraz, testigo y problema , 0.4 mL de molibdato de
amonio y 0.4 mL de solución reductora.
7. Aforar los matraces co n agua destilada y calentar a 37 o C en baño
María, durante 50 minutos
8. Leer en el f otocolorímetro con filtro rojo a 660 nm ajustando el
aparato con el blanco de la curva patrón.
Segunda Fase Curva tipo de calibración

Preparar 7 tubos de ensayo debidamente e tiquetados como lo indica la
siguiente tabla:
Molibdato
Solución Acido
de Solución
patrón de Sulfúrico
Tubo Amonio reductora
Fósforo 0.25 M
al 5 % (mL)
(mL) (mL)
(mL)
Blanco 0.0 9.2 0.4 0.4
1 0.1 9.1 0.4 0.4
2 0.2 9.0 0.4 0.4
3 0.4 8.8 0.4 0.4
4 0.8 8.4 0.4 0.4
5 1.2 8.0 0.4 0.4
6 1.5 7.7 0.4 0.4
67
Incubar la serie de 7 tubos a 37 0 C en baño María durante 5 0 minutos
enfriar y leer en el f otocolorímetro con filtro rojo (660 nm) . Calibrar el
equipo con el tubo etiquetado como BLANCO.
RESULTADOS
1. A partir de la solución patrón de Fósf oro realice los cálculos de la
concentración de Fósf oro correspondiente en cada tubo de la cur va de
calibración y registr e sus resultados en la siguiente tabla:
Tubo 1 2 3 4 5 6
Absorbancia
Concentración
de Fósf oro
2. Utilice los resultados de la tabla anterior par a elabor ar la gráf ica

correspondiente a Absorbancia contra Concentración de Fósf oro.
3. Calcule la concentración de Fósf oro de la sol ución problema interpolando
la absorbancia obtenida en la m isma. Resta r al problema el valor de
absorbancia del test igo.
Verif icar el pH del contenido de los tubos y neutralizar. Disponer en el
contenedor D.
CUESTIONARIO
1. Calcular el porcentaj e de F ósf oro en el pr oblema.
2. Calcular el porcentaj e de Fó sf oro respecto al peso inicial del hígado.
3. Mencione algunas pruebas específ icas para los otros compuestos que
contienen Ácidos N ucleicos.
4. En caso del que el RNA estuviera contaminado con carbohidratos ¿ Cuál
ser ía su inf luencia en los result ados?
68
1. Haga un esquema de una estruct ura t ípica en f orma de trébol del ARN de
transf erencia. Destaque cualquier sim ilit ud entre la f orma de trébol y la
estructura propuest a para el ARN ribosomal.
2. ¿Con base en el diagrama anterior, cuál consid era de las dos estructuras
(ARNt o ARNr) presenta mayor cantidad de puentes de Hidrógeno y por
qué?
3. ¿Explique por qué el ARNm y el ARNr se degradan con mayor rapidez en
la célula?
69
BIBLIOGRAFÍ A
1. Nelson L., D., Cox, M. M. (2015). Lehninger: Pr incipios de Bioquímica .
México: Omega.
2. Mathews, C. K., Van Holde, K. E., Appling, D. R., Anthony - Cahill, S.J.
(2013). Bioquímica. México: Pearson.
3. Stryer, L. (2013). Bioquímica. México: Reverte.
4. Voet, D., Voet, J. G., Pratt, Ch. ( 2016). Fundament os de Bioquímica .
España: Medica Panamericana.
5. Orten, J. M., Neuhaus, Otto W ., W asserman, A. V. (2003). Bioquímica
Humana. México: Panamericana.
6. Mendiola, R. G. 1999. Aislam iento del ADN en Células Animales y
Vegetales. Colegio de Ciencias y Huma nidades. Plantel Naucalpan.
UNAM.
7. Murray R. K., Bender, D. A., Bot ham, K. M., Kennelly, P. J. Rodwell, V.
W ., W eil, P. A. (2013). Bioquímica de Harper Ilustrada . México: McGraw
Hill Lange.
8. Mckee T, Mckee, B. J., (2014). Bioquímica. Las bases moleculares d e la
vida. México: McGraw- Hill.
9. Piña, G. E., Laguna, J. (2013). Bioquímica de Laguna . México. El Manual
Moderno.
10. Diaz, C., Juárez, M. (2007). Bioquímica. México. McGraw- Hill
interamer icana
11. Campbell, M. K, Farrell, S. O. (2016). Bioquímica. México: Cengage
Learning .
12. Velasco, S. J. y Mer chán, M. 1998. Biología y Ecolog ía. España: Editex.
70
ANEXOS
71
ANEXO núm. 1
Preparación de reactivos especiales para
Bioquímica Metabólica
72
Preparación de reactivos especiales para Bioquímica Metabólica
1. Reactivo de Molibdato : Pesar 68 g de Molibdato de Sodio y 0.4 de
Sulfato de Hidracina, disolver en 100 mL de agua. Añadir 100 mL de
Ácido Sulfúrico concentrado. Enfriar y aforar a un litro con agua.
2. Reactivo de Ninhidrina : Disolver 0.5 g de Ninhidrina en 100mL de
n-Butanol.
3. Reactivo de Bismuto :
4. Solución A: Disolver 1.7 g de Nitrato de Bismuto en 100 mL de
Ácido Acético al 20% en agua (v/v).
5. Solución B: Disolver 40 g de Yoduro de Potasio en 100 mL de agua
destilada.
6. Cuando se va a utilizar se mezclan 4 mL de solución A con 20 mL de
Ácido Acético al 20% y 1 mL de solución B.
7. Solución Reductora (para cuantificar fósforo): Mezclar 0.5 g de
Ácido 1-amino-2-Naftolsulfónico con 195 mL de Bisulfito de Sodio al
15% y adicionar 5 mL de Sulfito de Sodio al 20%. Calentar
ligeramente. Conservar en frasco ámbar, cerrado herméticamente.
73
ANEXO núm. 2
Lineamientos del Laboratorio
74
Lineamientos de Laboratorios
Subdirección Administrativa
Coordinación de Laboratorios
Versión Vigente No. 01 Fecha: 30/06/2016
1. Propósito
Establecer los lineamientos para salvaguardar la vida, salud e integridad de la comunidad así
como el cuidado de las instalaciones, dentro de los laboratorios de la Facultad de Química de
la Universidad Autónoma del Estado de México (UAEM).
2. Alcance
El presente lineamiento es aplicable a los laboratorios de la Facultad de Química, en sus tres

unidades: Colón, Cerrillo y Rosedal, donde se realice trabajo experimental, sea de docencia,
servicios o de investigación. Estos sitios, para efectos del presente documento, serán
denominados “laboratorios” y su observancia es obligatoria para personal académico
(docentes, investigadores y jefes de departamento), administrativos, alumnos y visitantes.
3. Normas de disciplina y organización
 Durante la estancia en el laboratorio, independiente de la actividad que se realice y por

seguridad de la comunidad de la Facultad de Química, TODA PERSONA debe de
utilizar: bata de manga larga (preferentemente de algodón y abrochada), cabello
recogido y zapato cerrado.
 Queda prohibido: introducir y/o consumir alimentos y/o bebidas, fumar, mascar chicle,
usar lentes de contacto, perforaciones faciales (pearcings), zapatos altos de tacón,
sandalias o zapato abierto, utilizar audífonos, gorra, correr, empujar y jugar dentro del
laboratorio.
 Al escuchar la sirena de alarma de la Facultad o voz de emergencia, inmediatamente
cerrar las llaves de gas, aire, agua, vacío, apagar todo equipo eléctrico, atender las
instrucciones de los brigadistas y de manera ordenada y rápida salir del laboratorio (no
correr, no gritar y no empujar), siguiendo los señalamientos de ruta de evacuación
para dirigirse al punto de reunión.
 Nunca deberá estar una persona sola trabajando en los laboratorios, mínimo deberán
de estar dos personas; una de ellas deberá ser el docente responsable.
 En periodos vacacionales se deberá solicitar vía oficio la autorización para el ingreso a
los laboratorios; especificando el día y el horario con el Visto Bueno del docente
responsable. Es importante mencionar que el profesor responsable deberá estar
presente en la fecha y horario indicados en el oficio.
75
4. Con aplicación especial en las prácticas de docencia
 Los reactivos con los que se cuenten en los laboratorios de docencia son para uso
exclusivo de las prácticas, no deberán ser utilizados para proyectos de posgrado o de
investigación.
 El documento Manual de prácticas de laboratorio de la asignatura deberá ser entregado
con una anticipación de 30 días a la coordinación de laboratorios (en forma física o
electrónica) para poder hacer uso de las instalaciones.
 Es obligación del docente la actualización del documento Manual de prácticas de
Laboratorio de su asignatura.
 En las situaciones de las prácticas dirigidas a “Proyectos” se deberá establecer una
lista de los reactivos a los cuales los estudiantes tendrán acceso para su
experimentación, la cual no se podrá modificar durante el semestre y se tendrán que
adaptar los proyectos a esta.
 El desarrollo de prácticas de laboratorio debe realizarse en presencia del docente
titular de la práctica. Quedando prohibido que los estudiantes permanezcan sin
supervisión durante esta.
 Para utilizar los reactivos, el personal académico deberá solicitarlo al personal técnico
de laboratorio, entregando una identificación actualizada (Credencial de elector o de la
Facultad).
76
ANEXO núm. 3
REGLAMENTO INTERNO DE
LABORATORIOS
77
Reglamento Interno de Laboratorios
Subdirección Administrativa
Coordinación de Laboratorios
Versión Vigente No. 01 Fecha: 18/04/2016
1. Propósito
Establecer la reglamentación para salvaguardar la vida, salud e integridad de la comunidad así

como el cuidado de las instalaciones, dentro de los laboratorios de la Facultad de Química de
la Universidad Autónoma del Estado de México (UAEM).
2. Alcance
El presente reglamento es aplicable a los laboratorios de la Facultad de Química, en sus tres

unidades: Colón, Cerrillo y Rosedal, donde se realice trabajo experimental, sea de docencia,
servicios o de investigación. Estos sitios, para efectos del presente documento, serán
denominados “laboratorios” y su observancia es obligatoria para personal académico
(docentes, investigadores y jefes de departamento), administrativos, alumnos y visitantes.
3. Normas de disciplina y organización
 Durante la estancia en el laboratorio, independiente de la actividad que se realice y por

seguridad de la comunidad de la Facultad de Química, se debe de usar: bata de manga
larga (preferentemente de algodón y abrochada), cabello recogido y zapato cerrado.
En forma adicional, el personal académico define el uso de: lentes de seguridad,
careta y demás Equipo de Protección Personal (E.P.P.).
 Queda prohibido: introducir y/o consumir alimentos y/o bebidas, fumar, mascar chicle,
usar lentes de contacto, perforaciones faciales (pearcings), zapatos altos de tacón,
sandalias o zapato abierto, utilizar audífonos, gorras, correr, empujar y jugar dentro
del laboratorio.
 Los reactivos, indicadores y medios de cultivos, deben ser manejados y almacenados
según el documento: Procedimiento específico de seguridad para el riesgo y
almacenamiento de reactivos, indicadores y medios de cultivo, que se encuentra en
los cubículos de los laboratorios.
 Cuando se presente un derrame de un producto químico es importante avisar de
inmediato al personal académico y al técnico(a) del laboratorio, para que en conjunto
se proceda a su neutralización, recolección, registro y disposición, utilizando los
materiales de contención apropiados, por ejemplo: material para contención de
derrames, cal y/o arena.
78
 Se prohíbe regresar a los envases originales los remanentes de los reactivos utilizados
y se debe tener la precaución de utilizar pipetas o espátulas limpias y secas para su
manejo.
 Se prohíbe utilizar reactivos sin identificación, inhalar directamente los reactivos
químicos, pipetear con la boca cualquier sustancia (se deberán utilizar perillas) y
mover los reactivos del lugar que le fue asignado.
 Se debe de utilizar papel para pesaje o vidrio de reloj para pesar sustancias en la(s)
balanza(s) analítica (s) o granataria(s).
 Se prohíbe tirar reactivos, Residuos Peligrosos (RP) químicos o Biológico-
Infecciosos (RPBI) en los lavabos, tarjas o al bote de basura.
 En la preparación de soluciones ácidas, se recomienda verter el ácido al agua y no a la
inversa.
 Deberá usarse la campana de extracción cuando se empleen sustancias que desprendan
humos o vapores tóxicos o irritantes.
 Para la disposición de residuos químicos peligrosos y/o biológicos infecciosos, el
personal académico indicará su sistema de tratamiento, registrando al término de cada
práctica en la Bitácora de residuos los datos requeridos y únicamente serán
depositados en los recipientes adecuados según la Tabla de Clasificación de
Contenedores para Residuos Químicos. Para su posterior envió al almacén general de
residuos químicos y finalmente a disposición final.
 Al escuchar la sirena de alarma de la Facultad o voz de emergencia, inmediatamente
cerrar las llaves de gas, aire, agua, vacío, apagar todo equipo eléctrico, atender las
instrucciones de los brigadistas y de manera ordenada y rápida salir del laboratorio (no
correr, no gritar y no empujar), siguiendo los señalamientos de ruta de evacuación
para dirigirse al punto de reunión.
 En caso de existir un accidente dentro del laboratorio, informar inmediatamente al
personal docente y al técnico(a) de laboratorio. Específicamente en caso de incendio
y/o quemadura, utilizar los sistemas de seguridad con los que cuentan los laboratorios
como: extintores, regaderas, lavaojos, material para contención de derrames y mantas
apaga-fuegos.
 Nunca deberá estar una persona sola trabajando en los laboratorios, mínimo deberán
de estar dos personas; una de ellas deberá ser el profesor responsable.
 Al terminar la actividad en el laboratorio, antes de retirarse, deberá dejar limpia la
mesa de trabajo y se deben cerrar las llaves de agua, aire, vacío y gas.
 En periodos vacacionales se deberá solicitar vía oficio la autorización para el ingreso a
los laboratorios; especificando el día y el horario con el Visto Bueno del docente
responsable. Es importante mencionar que el profesor responsable deberá estar
presente en la fecha y horario indicados en el oficio.
 En cualquier situación no especificada en el presente Reglamento consultar el
documento, Lineamientos de Laboratorios de Facultad de Química y hablarlo con las
autoridades correspondientes.
4. Con aplicación especial en las prácticas de docencia

 Las prácticas de docencia se llevarán a cabo conforme a lo establecido en los
documentos: Manual de prácticas de laboratorio de la asignatura, al horario de
79
actividades y a los espacios asignados a tal propósito. Salvo casos previamente
concertados con las autoridades correspondientes.
 La entrada al laboratorio correspondiente se deberá hacer en el horario asignado con
una tolerancia de 10 minutos máximo, y la salida deberá ser 5 minutos antes de la hora
programada, comprometiéndose a dejar las instalaciones limpias y para su óptimo uso
posteriormente.
 Durante las prácticas de laboratorio, el personal académico es responsable de aplicar
lo establecido en el presente documento. El desarrollo de prácticas de laboratorio debe
realizarse en presencia del docente titular de la práctica.
 Para pedir los reactivos, el personal académico deberá solicitarlo al personal técnico
de laboratorio, entregando una identificación actualizada (Credencial de elector o de la
Facultad).
 Para solicitar material de apoyo como: material de vidrio, equipo (ejemplo: parrillas)
para realizar la práctica de laboratorio, se debe pedir al personal técnico de
laboratorio, entregando una identificación actualizada (Credencial de elector o de la
Facultad).
 Al terminar la práctica, el usuario se compromete en regresar al personal técnico el
material, equipo y reactivos en óptimas condiciones y limpios, a la entrega
correspondiente se le devolverá su identificación.
 En caso de deterioro de material y equipo el usuario deberá reparar el daño físico o
adquirir uno nuevo por su cuenta para recuperar su identificación, a la brevedad
posible.
80
Anexo núm. 4
Formato del Reporte de Laboratorio
81
Laboratorio de Bioquímica Metabólica
Práctica núm. ESCRIBIR NÚMERO Y

NOMBRE DE LA PRÁCTICA
Grupo
Núm. de Equipo ESCRIBIR NÚMERO
Integrantes
ESCRIBIR NOMBRES
FECHA DE REALIZACIÓN DE LA
Toluca de Lerdo México, Estado de México; a
PRÁCTICA
82
Práctica núm. ANOTAR NÚMERO Y NOMBRE
OBJETIVO
HIPÓTESIS
MARCO TEÓRICO (FUNDAMENTO DE LA PRÁCTICA. MÁXIMO UNA

CUARTILLA)
83
DIAGRAMA DE FLUJO DEL PROCEDIMIENTO
84
RESULTADOS Y OBSERVACIONES
CONCLUSIONES
85
CUESTIONARIO
EJERCICIOS DE INTEGRACION
86
REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS
87

Secme-17579 1

Cargado por

Copyright:

Formatos disponibles

Secme-17579 1

Cargado por

Información del documento

Descripción original:

Título original

Derechos de autor

Formatos disponibles

Compartir este documento

Compartir o incrustar documentos

Opciones para compartir

¿Le pareció útil este documento?

¿Este contenido es inapropiado?

Copyright:

Formatos disponibles

Secme-17579 1

Cargado por

Copyright:

Formatos disponibles

Universidad Autónoma del Estado de México

MANUAL DE PRÁCTICAS DE LABORATORIO DE

M. en P. E. Ana Margarita Arrizabalaga Reynoso

Toluca de Lerdo; Estado de México. 1 de Febrero de 2018

Involucrar al estudiante en el estudio de los f enómenos bioquímicos, a través

La enseñanza de la unidad de aprendizaje de B I O Q U Í M I C A se realiza

El programa de est udios de la unidad de aprendizaje de B I O Q U Í M I C A

La B I O Q U Í M I C A es una ciencia relat ivam ente nueva, ya que se reconoce

Numerosos aportes de la B I O Q U Í M I C A han desempeñado un papel

Const ituye un pilar f undamental de la Biotecnolog ía y se ha consolidado

La B I O Q U Í M I C A es una ciencia experiment al y por ello recurrir á al uso de

El pilar f undamental de la investigación de la B I O Q U Í M I C A C L Á S I C A se

Por razones histór icas la B I O Q U Í M I C A del metabolism o de la célula ha

La B I O Q U Í M I C A M E T A B Ó L I C A es un área de la B I O Q U Í M I C A que pret ende

De aquí surgen disciplinas académicas como la Bioenergética (estudio

Una caracter ística del metabolismo es la sim ilitud de las rutas

La unidad de aprendizaje de B I O Q U Í M I C A M E T AB Ó L I C A incluye la revisión

Además la unidad de aprendizaje de B I O Q U Í M I C A M E T A B Ó L I C A incluye la

Finalmente el programa de la unidad de aprendizaje abor da lo

Los ácidos nucleicos son moléculas polianiónicas de alto peso molecular

Los conocimientos metodológicos para estudiar las biomoléculas avanza

El manual de prácticas de labor atorio de B I O Q U Í M I C A M E T A B Ó L I C A se

La eva luación del curso de la unidad de apr endizaj e de Bioquímica

Evaluación Valor ponderado

Si el alumno en es t a ponderación alcanza una evaluación igual o

Examen Final 100%

La evaluación integral del curso de prácticas de laborator io comprende

Parámetro de la evaluación Porcentaje

1. Para estar inscr ito en l a unidad de aprendizaje de Bioquímica Metabólica

Los lípidos se han clasif icado de acuerdo a su complejidad estructural

Para la caract erización y análisis de los lípidos se precisa de utilizar

La mayor ía de los lípidos t iene algún tipo de carácter polar, además de

Los lípidos son sustancias que no se disuelven en agua, por eso es

La grasa se almacena en el tejido adiposo, donde también sir ve como

Propiedad núm. 2: Emulsificación

Aceite de Acido Acido

Propiedad núm. 5: Permeabilidad de una monocapa lipí dica

Las lipopr oteínas plasmáticas son complejos macr omoleculares,

El cociente LDLc/ HDLc se emplea en la clínica como un índice de riesgo

1. Descr iba un mét odo analítico empleado en el laborator io clínico para

Su solubilidad los dif erencia de otr os dos grupos principales de

Los lípidos se han clasif icado de diver sas maneras, pero la

Los lípidos s on un grupo de compuestos heterogéneo, que incluye

Los glucolípidos también son const ituyentes important es del t ejido

El colesterol, un lípido ant ipát ico, es un componente de las

Los mecanismos que se llevan a cab o en la cromatog raf ía son

En la práct ica, la mayor ía de las veces se trata de una combinación de

La cromatograf ía en capa f ina presenta una ser ie de ventajas frente a

Al realizar la elección del adsorbente se debe tener en cuenta el

Los productos a examina r deben disolverse , cuando sea posible, en un

La elección del eluyente depender á lógicamente del co mponente que

El desarrollo de los cromatogramas en capa f ina se realiza

Generalmente el eluyente se introduce en la cámara una hor a antes del

Las placas pueden desarrollarse durant e un tiempo pref ijado o hasta

La mejor posición de desarrollo par a un componente es el punto medio

Si los compuestos separados no son colori dos es necesar io revelar la

La constante RF ( Ratio of Front) es simplemente una manera de

La distancia recorrida por el compuesto se mide generalment e desde el