Actividad 04 - Técnicas de Tinciones Diferenciales

Laboratorio de microbiología
NRC 23634
Laboratorio de
microbiología
Vila Madrid Manuela Monserrat
Matricula 201958169
NRC 23634
BENEMÉRITA UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE PUEBLA
FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS
LABORATORIO DE MICROBIOLOGÍA NRC

23634 03L
MALDONADO CABRERA CARLOS
CUESTIONARIO III
TÉCNICAS DE TINCIONES DIFERENCIALES
VILA MADRID MANUELA MONSERRAT

MATRICULA 201958169
Matricula 201958169
NRC 23634
TÉCNICAS DE TINCIONES DIFERENCIALES

1. ¿Qué es un frotis y para qué se utiliza?
Un frotis a la extensión que se realiza sobre un portaobjetos de una muestra o cultivo

con objeto de separar lo más posible los microorganismos, ya que si aparecen
agrupados en la preparación es muy difícil obtener una imagen clara y nítida. Este
frotis debe ser posteriormente fijado al vidrio del portaobjetos para poder aplicar los
métodos habituales de tinción que permiten la observación al microscopio de las
bacterias sin que la muestra sea arrastrada en los sucesivos lavados. La fijación de
una extensión bacteriana hace que las bacterias queden inactivadas y adheridas al
vidrio alterando lo menos posible la morfología bacteriana y las posibles
agrupaciones de células que pudiera haber.

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NRC 23634
Extensión de una película delgada de una suspensión de microrganismos que se

realiza sobre un portaobjetos con el fin de teñir para observar morfología, ya que al
observar una imagen clara y nítida al microscopio para su identificación.
2. ¿Qué es un colorante? ¿Cómo está constituido? ¿Cómo es que se combina

con los diferentes componentes celulares?
Sustancia capaz de dar color a células, tejidos, fibras, etcétera. De acuerdo con su
origen, se pueden dividir en: colorantes naturales, los cuales son extraídos de
plantas o animales, y colorantes artificiales, que son aquellos de minerales
procesados y manipulados en el laboratorio. La molécula de un colorante tiene
normalmente dos componentes importantes: uno que aporta el color, denominado
cromógeno, y otro que posibilita la unión a elementos del tejido denominado
auxocromo. El cromóforo es la organización molecular dentro del cromógeno
responsable de la absorción de un espectro determinado de longitudes de onda. El
auxocromo que se une al cromógeno puede influir en su coloración y muchos
colorantes tienen más de un grupo auxocrómico. El auxocromo puede ser un grupo
ionizable, un grupo que reacciona covalentemente con iones metálicos (mordientes)
o puede reaccionar covalentemente con el sustrato, en este caso el tejido. Los
colorantes son normalmente hidrosolubles, aunque hay colorantes que carecen de
grupos ionizables y sirven para teñir sustancias grasas, como gotas de lípidos.
3. ¿Qué factores intervienen para que los colorantes se combinen con los
componentes celulares?
La mayoría de los colorantes son compuestos orgánicos que tienen alguna afinidad
específica por los materiales celulares. Muchos colorantes utilizados con frecuencia
son moléculas cargadas positivamente (cationes) y se combinan con intensidad con
los constituyentes celulares cargados negativamente, tales como los ácidos
nucleicos y los polisacáridos ácidos. Ejemplos de colorantes catiónicos son el azul
de metileno, el cristal violeta y la safranina. Otros colorantes son moléculas

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cargadas negativamente (aniones) y se combinan con los constituyentes celulares

cargados positivamente, tales como muchas proteínas. Esos colorantes incluyen la
eosina, la fucsina ácida y el rojo Congo. Otro grupo de colorantes son sustancias
liposolubles; los colorantes de este grupo se combinan con los materiales lipídicos
de la célula, usándose a menudo para revelar la localización de las gotículas
o depósitos de grasa. Un ejemplo de colorante liposoluble es el negro Sudán.
Casi todos los colorantes son sales, compuestos formados por iones cargados.
Colorantes básicos: son aquellos en los cuales el agente que tiñe es el ion cargado
positivamente (el cromóforo) y se combinan con los componentes ácidos de la célula
como ADN y ARN. Colorantes ácidos: es el ion cargado negativamente y se
combinan con los componentes básicos de la célula, como el citoplasma; es decir
se combinan con los componentes celulares en función de sus respectivas cargas;
por lo tanto, los factores como fuerza iónica, composición del medio, temperatura y
pH afectan las tinciones. Los mordientes, aunque no son colorantes, tienen gran
importancia en algunas técnicas de tinción. Los mordientes intensifican la tinción
porque aumentan la afinidad de la célula por el colorante. Se usa cuando la afinidad
química entre el componente celular y el colorante es baja; también se pueden
utilizar para producir un engrosamiento de ciertas estructuras celulares externas,
como los flagelos, que debido a su delgadez no podrían ser visualizados de otra
forma.
4. ¿Qué es un mordente? Menciona tres ejemplos.
Ion que une al tinte químico y lo mantiene presionando, utilizado para mantener las
moléculas del colorante en el microorganismo. Usualmente son iones metálicos o
iones de haluros, aunque puede ser cualquier molécula. Los mordientes intensifican
la tinción porque aumentan la afinidad de la célula por el colorante. También se
pueden utilizar para producir un engrosamiento de ciertas estructuras celulares

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externas, como los flagelos, que debido a su delgadez no podrían ser visualizados
de otra forma.
Lugol: son sustancias que aumentan la afinidad de la célula por el colorante. Suelen
añadirse después del colorante en determinadas tinciones diferenciales.
Es una disolución de yodo molecular I2 y yoduro potásico KI en agua destilada. Se

preparó por primera vez en 1829 y recibe su nombre en honor al
médico francés Jean Guillaume Auguste Lugol. Se emplea en la tinción de
Gram para retener el colorante cristal violeta. El I2 entra en las células y forma con
el colorante cristal violeta un complejo insoluble en agua.
Acido tánico: Se trata de un ácido compuesto de glucosa y ácidos fenólicos cuya

fórmula exacta es C76H52O46. Este compuesto, que se puede elaborar
artificialmente, en la antigüedad se extraía de la naturaleza acumulado en las
cortezas y raíces de frutos y plantas, y pueden detectarse también en sus hojas,
aunque en menor proporción.
Se usa durante la tinción de flagelos de procariotas antes de realizar la tinción

propiamente dicha con rosanilina y después de haber fijado con formaldehído
debido a la fragilidad del flagelo.
5. ¿Cuál es el objetivo de calentar en la tinción de esporas?
Fijar el extendido, puesto que ayuda al colorante a atravesar la pared de la

endospora.
La espora es una estructura deshidratada que contiene un 15 % de calcio y ácido

dipicolínico. Por ello, la mayoría de las técnicas de coloración de esporas se basan
en la aplicación de calor para que el colorante pueda penetrar la gruesa estructura.

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Bibliografía
Corrales Ramírez, L. C., & Caycedo Lozano, L. (2020). Principios
fisicoquímicos de los colorantes utilizados en microbiología Principios
fisicoquímicos de los colorantes. Nova, 18(33).
https://doi.org/10.22490/24629448.3701
Granados R, Villaverde C. Microbiología: Tomo I. Madrid: Parainfo; 2003.
López-Jácome LE, Hernández-Durán M, Colín-Castro CA,. (2014). Las

tinciones básicas en el laboratorio de microbiología. Investigación en Discapacidad.
3(1):10-18.
Megías M, Molist P, Pombal MA. (2019). Atlas de histología vegetal y animal.

Técnicas histológicas. Recuperado (13/02/2021) de:
http://mmegias.webs.uvigo.es/6-tecnicas/1-introduccion.php
Willey JM, Sherwood LM, Woolverton CJ. Microbiología de Prescot, Harley y

Klein. 7a ed. Madrid: McGraw-Hill Interamericana; 2009.

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Un frotis a la extensión que se realiza sobre un portaobjetos de una muestra o cultivo

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Extensión de una película delgada de una suspensión de microrganismos que se

2. ¿Qué es un colorante? ¿Cómo está constituido? ¿Cómo es que se combina

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cargadas negativamente (aniones) y se combinan con los constituyentes celulares

4. ¿Qué es un mordente? Menciona tres ejemplos.

Vila Madrid Manuela Monserrat

Es una disolución de yodo molecular I2 y yoduro potásico KI en agua destilada. Se

Acido tánico: Se trata de un ácido compuesto de glucosa y ácidos fenólicos cuya

Se usa durante la tinción de flagelos de procariotas antes de realizar la tinción

5. ¿Cuál es el objetivo de calentar en la tinción de esporas?

Fijar el extendido, puesto que ayuda al colorante a atravesar la pared de la

La espora es una estructura deshidratada que contiene un 15 % de calcio y ácido

Vila Madrid Manuela Monserrat

Granados R, Villaverde C. Microbiología: Tomo I. Madrid: Parainfo; 2003.

López-Jácome LE, Hernández-Durán M, Colín-Castro CA,. (2014). Las

Megías M, Molist P, Pombal MA. (2019). Atlas de histología vegetal y animal.

Willey JM, Sherwood LM, Woolverton CJ. Microbiología de Prescot, Harley y

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