Manual Control Calidad Microbiologia

www.monografias.
com
Manual de control de calidad en microbiología

Eric Caballero J. - [email protected]
1. Introducción
2. Preparación de las muestras clínicas
3. Control de calidad de equipos y materiales de trabajo
4. Control de calidad de equipos automatizados
5. Control de calidad en mycobacteriología
6. Control de calidad en micología
7. Control de calidad de fórmulas lácteas y mamaderas
8. Control de calidad del agua destilada
9. Control de calidad de la sangre de carnero
10. Supervisión del personal
11. Proformas de reporte del control de calidad
12. Glosario de términos
13. Bibliografía de referencia
Introducción
El laboratorio clínico de microbiología moderno, requiere para su correcto funcionamiento de un adecuado y
constante control de calidad sobre todas las etapas operativas que incluyen materiales, insumos, reactivos,
equipos, metodología, y por supuesto todo lo que implica el recibo, manejo y reporte de los especimenes
clínicos.
En general este control debe identificar, monitorear, evaluar y aprobar metodologías relativas al cuidado del
paciente. En este contexto el control de calidad en microbiología clínica envuelve el monitoreo de los
medios de cultivos, reactivos, instrumentos, procedimientos y el personal, para asegurar una adecuada
práctica en el aislamiento, identificación y caracterización de agentes etiológicos y su correspondiente
prueba de susceptibilidad como una guía de la terapia.
El programa evalúa y documenta el desempeño de todos los aspectos de un procedimiento. Esto
incluye la calidad del espécimen, la eficiencia de los reactivos, medios e instrumentos y verifica los
resultados del test por errores. La colección y transporte de la muestra es esencial para una buena calidad
de los resultados microbiológicos.
El más importante factor en la generación de reportes microbiológicos de calidad corresponde al personal.
El personal del laboratorio de microbiología debe ser escogido en base a sus cualidades académicas y
personales. Debe poseer habilidad para ejecutar pruebas complejas, la mayoría de las veces manuales,
interés en mantenerse al día en las ejecutorias y taxonomía bacteriana, excelente concepto de protección
de grupo y bioseguridad en general y la suspicacia de saber que está trabajando con microorganismos
vivos que pueden modificar su conducta mediante mutaciones, con diferentes requerimientos de crecimiento
y muchos altamente patógenos.
Es por ellos que muchos expertos consideran que el control de calidad en microbiología, es mas un arte
que una ciencia.
El control de calidad en resumen, es un elemento vital en el laboratorio, ya que ayuda en la confiabilidad de
las pruebas, su reproducibilidad, asegura la calidad de los materiales, reactivos y equipos empleados,
mejora la auto confianza del personal, detecta fallas que pueden reflejarse en el informe de muestras
clínicas y en general provee un entorno de excelencia en todos los aspectos del trabajo.
Por lo anterior, ponemos a la consideración de todos los colegas el siguiente Manual de Control de Calidad
en Microbiología, el cual esperamos llene las expectativas y necesidades en nuestro laboratorio.
Lic. Eric Caballero J.
Preparación de las muestras clínicas

1. CRITERIOS PARA LA OBTENCION, TRANSPORTE Y
RECIBO DE MUESTRAS CLINICAS:
En términos de la efectividad del laboratorio de microbiología, nada es más importante que la apropiada
selección, colección y transporte de las muestras clínicas.
Por ello todo el personal que tiene que ver con estas responsabilidades, debe comprender lo determinante
que es el mantenimiento de la calidad de la muestra, en la evaluación e informe de un espécimen clínico. Es
responsabilidad del laboratorio proveer ésta información en forma clara y que sea fácilmente incorporada en
Para ver trabajos similares o recibir información semanal sobre nuevas publicaciones, visite www.monografias.com 0
www.monografias.com
la metodología de trabajo de todas las salas de atención y hospitalización, el cual debe estar siempre
accesible al personal de enfermería y médicos como una referencia.
Independientemente del hecho de que algunos tipos de muestras requieren metodologías de colección muy
especiales, podemos enumerar algunos aspectos generales que deben ser tenidos en cuenta al coleccionar
las muestras clínicas:
 Cuando se va a proceder a tomar un espécimen clínico, es importante evitar la contaminación
con microorganismos saprofitos del área. Esta flora normal puede interferir con la interpretación
del cultivo y enmascarar la presencia del verdadero agente etiológico de la enfermedad.
 Seleccione el tipo anatómico correcto donde se obtendrá el espécimen, y utilice la técnica
apropiada y los instrumentos o elementos adecuados para su obtención.
 En el caso de investigar microorganismos anaeróbicos, la biopsia y el aspirado con aguja, son

las muestras de elección. Los hisopos y sistemas tipo Culturette son los menos deseables para
este fin.
Nunca refrigere una muestra por anaerobios.
 Coleccione un apropiado volumen de muestra.
Insuficiente material puede ser causa de resultados falso-negativo.
Procedencia, tipo de muestra, fecha de colección e iniciales del funcionario que tomó la
muestra.
 Coloque la muestra en un receptáculo adecuado para su transporte con el fin de asegurar la
sobre vivencia del posible agente infeccioso, evitar derrame del espécimen y mantener las
medidas de bioseguridad apropiadas.
TRANSPORTE DE LA MUESTRA
1. La mayoría de las especies bacterianas son vulnerables a demoras en
su procesamiento, cambios de temperatura, humedad, etc. Durante el transporte las bacterias de
rápido crecimiento, pueden crecer sobre los patógenos más fastidiosos y de crecimiento lento o
con requerimientos especiales, por lo que es vital en el éxito del cultivo que la muestra sea
transportada y procesada con la celeridad necesaria.
2. Todas las muestras deben ser enviadas inmediatamente al laboratorio después de colectadas.
Se debe instruir al personal médico, de enfermería y mensajeros en la importancia de un
transporte expedito de las muestras clínicas.
2. CRITERIOS DE RECHAZO DE MUESTRAS CLINICAS :
El personal del laboratorio debe tener siempre presente que los especímenes clínicos que son enviados
para su evaluación, representan elementos de suma importancia en la detección, evaluación y control de
enfermedades potencialmente activas que aquejan al paciente y que la rapidez y eficiencia con que se logre
obtener información de utilidad clínica de las mismas, tendrá repercusiones directas en la salud del
paciente, el manejo racional y adecuado de los recursos del laboratorio, la seguridad del resto de los
pacientes y el personal que allí labora, el control de los antibióticos, el tiempo de hospitalización,
disminución de costos de operaciones y en general la credibilidad del laboratorio y el hospital en general.
Por todo lo anterior las muestras que son recibidas por el laboratorio, deben ser apropiadamente
colectadas, transportadas y procesadas. Estas muestras deben representar la causa probable de
infección, de lo contrario el procesamiento y reporte de muestras no adecuadas puede proveer información
equivocada, lo cual puede llevar a un mal diagnóstico y por consiguiente fallas en el tratamiento que
pueden poner en peligro la vida del paciente. Si recibimos basuras, reportaremos basura!!
Consecuentemente, el laboratorio debe poner en ejecución una política estricta de aceptabilidad y rechazo
de muestras clínicas.
Causales de rechazo de muestras clínicas:
a) Muestras no rotuladas o sin identificación.
b) Discrepancia en la identificación del paciente y la muestra.
c) Inapropiado envase o inapropiado medio de transporte.
d) Demora prolongada en enviar la muestra al laboratorio.
e) Duplicación de muestra del mismo paciente dentro de 24h,
excepto sangre.
f) No indicar tipo de muestra o procedencia.
g) No indicar tipo de examen en la orden.
h) Muestra con preservativos.
i) Muestra derramada o rotura del envase.
j) Hisopos secos.
www.monografias.com
k) Un solo Culturette con múltiples ordenes.

l) Muestra para anaerobios en envase inapropiado.
m) Cultivo por anaerobios de muestras con flora anaeróbica normal.
n) Frotis de Gram por N. gonorrhoeae de muestras de cérvix, vagina y cripta anal.
o) Cultivo por anaerobios de orina colectada por vaciado directo.
p) Orina colectada de la bolsa del catéter.
q) Saliva.
r) Frotis directo por Gram de hisopos.
s) Volumen inadecuado.
j) Contaminación obvia de la muestra.
3. MUESTRAS DESAPROBADAS DEBIDO A SU CUSTIONABLE INFORMACION CLINICA :

a) Hisopo superficial oral.
b) Hisopo de decúbito.
c) Hisopo de úlceras varicosas.
d) Hisopo de lesión superficial gangrenosa.
e) Contenido de vejiga.
f) Vómito.
g) Punta de catéter Foley.
h) Descarga de colestomía.
i) Loquios.
j) Aspirado gástrico de recién nacido.
k) Frotis faríngeo o nasal.
Muestras no adecuadas para cultivo por anaerobios:
a) Lavado bronquioalveolar desprotegido.
b) Hisopo cervical.
c) Aspirado endotraqueal.
d) Loquios.
e) Hisopo nasofaríngeo / Secreción faríngea.
f) Líquido seminal o prostático.
g) Esputo por expectoración o inducido.
h) Heces o muestra rectal.
i) Secreción uretral / hisopo vaginal o vulvar.
j) Orina por vaciado directo o catéter.
4. PRIORIDAD DE LAS MUESTRAS:
Todas las muestras deben ser procesadas lo más rápidamente posible al llegar al laboratorio. Sin embargo,
su manejo puede ser clasificado de la siguiente manera, independientemente de su orden.
MUESTRAS URGENTES
 Sangre.
 LCR. (Su estudio tiene Prioridad sobre cualquier otra muestra o trabajo).
 Aspirado Transtraqueal
 Líquido pericardico.
 Líquido amniótico.
 Tracto respiratorio inferior.
 Muestras quirúrgicas de la sala de CIC.
 Líquido articular (Artritis séptica).
 Biopsia de Pulmón.
MUESTRAS DE RUTINA
 Boca.
 Líquido pleural.
 Quemaduras.
 Ocular.
 Orina.
 Genitales (Mujer).
 Muestras quirúrgicas.
 Líquido peritoneal.
MUESTRAS ELECTIVAS
www.monografias.com
 Líquido ascítico.
 Bilis.
 Líquido articular (No artritis).
 Líquidos intravenosos.
 Genitales (Hombres).
 Nasal.
 Oído.
 Nasofaríngeo.
 Rectal.
 Ulceras, vesículas.
 Piel.
 Post Mortem.
CONTROL DE CALIDAD
1. CONTROL DE CALIDAD DE LOS MEDIOS DE CULTIVO:
a) Los medios de cultivo deshidratados son higroscópico y la absorción de agua del exterior, así como
la formación de agua dentro de la botella como consecuencia de las fluctuaciones de temperatura
en el ambiente, favorecen el crecimiento bacteriano. Esto puede conducir al consumo de nutrientes,
variaciones de Ph y cambios en el color del medio. Además la exposición a la luz puede llevar a
importantes alteraciones en los constituyentes del medio de cultivo.
b) Tomando en cuenta los factores antes señalados, los medios de cultivo deshidratados deben
almacenarse siempre en lugares frescos, a temperatura ambiente y protegidos contra la humedad y
la luz. La mayoría de los suplementos se guardan en refrigeración. Utilizando condiciones de
almacenamiento adecuadas, los medios elaborados en polvo tienen una vida útil de al menos 3
años. Algunos autores señalan que no es necesario el control de calidad de rutina de los medios
comerciales en polvo, a menos que circunstancias durante su empleo lo sugieran. El material que
ha sufrido cambios substanciales, tales como hidratación, endurecimiento y cambio de color, deben
descartarse.
Se debe mantener un registro de cada frasco de medio de cultivo deshidratado, con el nombre del
producto, nombre y número telefónico de la casa proveedora, número de control del frasco, fecha de
recibo, fecha de expiración, número de lote y fecha en que se abrió el frasco.
c) El grado de disolución de un medio deshidratado, así como la eficacia del mismo ya preparado,
depende en gran medida del procedimiento empleado en la rehidratación. Se recomienda utilizar
agua recién destilada o completamente desmineralizada y un erlenmeyer con capacidad del doble
del medio que se quiere preparar. Si el medio va a distribuirse en tubos, debe agitarse
constantemente para asegurar una adecuada homogenización al momento de servirlos.
d) Cuando se va a esterilizar, debe asegurarse en seguir las instrucciones de
tiempo, presión y temperatura para la obtención de medios de cultivo óptimos.
Una temperatura de 121 °C , presión de 15 libras y un tiempo de esterilización
de 15 minutos, son suficientes para la mayoría de los medios. Si no se dispone
de autoclave, es posible esterilizar en marmita de vapor a 100 °C por 30 mts.
En tal caso la esterilización debe repetirse durante 3 días consecutivos.
5) El medio esterilizado debe ser enfriado a 45°-60°C en un baño maría, para
evitar la formación de agua de condensación. Al ser vertidos en las placas Petri,
evitar la formación de burbujas y coágulos. Durante el proceso de servida, debe
tomarse una muestra del medio para realizar el control de calidad por esterilidad
y eficiencia.
6) El medio de cultivo reconstituido tiene una vida útil limitada. Si no se emplea
de inmediato, debe almacenarse bajo condiciones apropiadas para garantizar su
utilidad durante un periodo de tiempo.
El almacenamiento a 4°C es el mejor para la mayoría de los medios,
sin embargo, aquellos que contienen Tioglicolato, deben guardarse a
temperatura ambiente.
7) Los medios deben mantenerse preferiblemente en sitios oscuros, ya que la luz puede afectar
algunos de sus componentes. Para evitar la desecación se aconseja que se guarden en bolsas
plásticas bien cerradas. Las placas Petri almacenadas así, deben mantenerse con el fondo hacia
arriba.
8) Dado que los medios almacenados en refrigeración, cuando pasan a temperatura ambiente tienden
a formar agua de condensación en la superficie, se recomienda poner los platos Petri en la
www.monografias.com
incubadora a 35°C por 2 horas, colocándolos con el fondo hacia arriba para obtener una superficie
seca. Esto es particularmente importante para que el agua no afecte la individualidad de las
colonias en el
aislamiento o en los casos de pruebas de sensibilidad a los antibióticos en los
que el exceso de agua puede afectar la dilución de las colonias y por ende la
lectura del halo de inhibición.
9) Cada lote preparado de medio de cultivo se prueba antes de su uso rutinario, por
eficiencia o calidad, mediante la inoculación de microorganismos cuyo
comportamiento conocemos, tanto para reacciones positivas como negativas.
Puede utilizarse para ello cepas bacterianas domésticas o cepas control
comerciales ( ATCC ).
Se debe guardar un libro de registro de los resultados obtenidos.
10) Evite el congelamiento de los medios preparados o la sangre de carnero.
11) Al colocar en la refrigeradora los medios preparados, debe colocar los de más reciente preparación
al fondo y los mas viejos adelante.
12) Rotular todos los medios preparados, tanto en platos Petri como en tubos, indicando además, la
fecha de preparación y expiración.
PRUEBAS BASICAS DE CONTROL DE CALIDAD DE MEDIOS PREPARADOS:
(a) Ph
(b) Esterilidad
(c) Capacidad de crecimiento y reacción
(d) Estabilidad
CRITERIOS DE CALIDAD DE LOS MEDIOS PREPARADOS:
(a) Rajadura del plato o envase.
(b) Rajadura en la superficie del medio.
(c) Variaciones en el volumen del medio.
(d) Hemólisis.
(e) Cristales en el medio.
(f) Presencia de burbujas.
(g) Presencia de coágulos.
(h) Cambio de color normal.
(i) Contaminación.
(j) Falla en la inhibición de microorganismos saprófitos.
FALLAS Y CAUSAS EN LA PREPARACION DE MEDIOS DE CULTIVO:
Valor de Ph incorrecto:
 Medir el Ph por encima de los 25°C.
 Sobrecalentamiento en la esterilización, vuelta a fundir o calentamiento prolongado a 50°C.
 Solución incompleta del medio.
 Mala calidad del agua.
 Recipiente mal lavado o con residuos químicos.
 Mala conservación del medio deshidratado o vencido.
Turbidéz o precipitación:
 Mala calidad del agua.
 Sobrecalentamiento.
 Ph incorrecto.
 Solución incompleta.
Oscurecimiento:
 Solución incompleta.
 Alteración del Ph.
Gel blando :
 Bajo porcentaje de agar en el medio.
 Errores en la pesada del medio deshidratado o en los suplementos.
 Mala homogenización del medio.
 Exceso de agua.
Crecimiento bacteriano pobre:
 Exceso de calentamiento.
www.monografias.com
 Substancias inhibidoras en el agua o en el recipiente.

 Alteración en el Ph.
EVALUACION DE LA EFICIENCIA DE LOS MEDIOS DE CULTIVO

PREPARADOS:
MEDIO DE CULTIVO ORGANISMO CONTROL REACCION ESPERADA
TSI E. coli ácido/ácido

TSI Shigella flexneri alcalino/ácido
TSI Pseudomona aeruginosa alcalino/alcalino
SIM Proteus mirabilis movilidad positiva

SIM K. Pneumoniae movilidad negativa
Citrato de Simmons K.pneumoniae color azul. Crece

Citrato de Simmons E. coli color verde. No crece.
Caldo de urea Proteus mirabilis Rojo-Morado. Positivo.

Caldo de urea E. coli color Naranja. Negativo.
Agar sangre Estr.Betahem.Grupo B Crece. Betahemólisis.

Agar sangre S. pneumoniae Crece. Alfahemólisis.
Agar sangre K.pneumoniae Crece. No hemolítico.
McConkey E. coli Crece. Colonias moradas.

McConkey Proteus sp Crece. Colonias claras.
McConkey Estafilococos No crece.
McConkey Sorbitol E.coli 0157:H7 Colonias claras. Sorbitol negativo

McConkey Sorbitol Proteus sp Colonias claras. Sorbitol negativo
McConkey Sorbitol Klebsiella sp Colonias rosadas. Sorbitol positivo
EMB E. coli Brillo metálico

EMB Proteus colonias Claras
Manitol Sal Estafilococos Colonias amarillas

Manitol Sal E. coli No crece.
SS agar Salmonella sp Crece. Colonias claras con H2S
MEDIO DE CULTIVO ORGANISMO CONTROL REACCION ESPERADA
SS agar E. coli No crece.
Agar alcohol-fenil etílico Estafilococos Crece.

Agar alcohol-fenil etílico E. coli No crece.
Thayer-Martin N. Gonorrhoeae Crece.

Thayer-Martin E. coli No crece.
www.monografias.com
OF – medio E. coli Amarillo ambos tubos. Fermentador

OF – medio Pseudomona sp Un tubo amarillo. Oxidativo
OF – medio Moraxella sp Ningún tubo amarillo. Inerte
Lysina decarboxylasa Citrobacter freundii alcalino/ácido H2S +

Lysina decarboxylasa Proteus vulgaris Rojo/ácido H2S -
Lysina decarboxylasa Salmonella arizonae Alcalino/alcalino H2S +
Bili-Esculina Streptococcus mitis Incoloro

Bili-Esculina Enterococcus faecalis Negro
Caldo Malonato Klebsiella pneumoniae Azul

Caldo Malonato E. coli No cambia el color
NaCl 6.5% Streptococcus mitis No crece

NaCl 6.5% Enterococcus faecalis Crece
Sabouraud-Dextrosa agar Levaduras Crece

Sabouraud-Dextrosa agar Dermatofitos Crece
Sabouraud-Dextrosa agar Estafilococos Crece
Mycosel agar Levaduras Crece
Tioglicolato Flora mixta Crece
Selenita Flora mixta Crece en menos de 24h
Caldo Cerebro-Corazón Flora mixta Crece
2. CONTROL DE CALIDAD DE LOS SUPLEMENTOS:

1. Es importante tener en cuenta que los suplementos de los medios de cultivo,
pudieran confrontar problemas de eficiencia o inhibición, ya que como todo
producto pudiera no haber sido almacenado y/o transportado adecuadamente.
Solo el uso rutinario de los medios de cultivo preparados con éstos
suplementos, pudieran darnos la alarma de problemas en los mismos.
2. Muchos suplementos son sensibles al calor, por ello se añaden al medio después de la
esterilización para evitar su deterioro.
3. Los medios preparados con la mezcla inhibidora VCN , deben ser utilizados
dentro de los 8 días siguientes a su preparación ya que la eficacia de la mezcla
decrece muy rápidamente. La misma advertencia es aplicable a los frascos de
VCN rehidratados, por lo que conviene guardarlos congelados si no se va a
usar de inmediato. No sobrepasar los 15 días,
4. En el caso de la sangre de carnero para la preparación del agar sangre, es
Importante cada vez que se reciba un nuevo lote, anotar su apariencia, observar por presencia de
coágulos, hemólisis, número de lote, fecha de recibo y expiración, hacerle una determinación de
hemoglobina, la cual debe medir entre los 13.0 - 15.0 g/dl, y por supuesto se debe tomar con
una jeringuilla una pequeña muestra del vial para sembrarla en agar sangre y tioglicolato para
determinar su esterilidad. Los laboratorios que cuenten con los Sistemas Computarizados para
hemocultivos, como BacT/alert y Bactec, pueden utilizar sus frascos para analizar la esterilidad de
la sangre de carnero, utilizando de 2.0 a 3.0 ml de sangre e incubar por 48 horas. También se
debe examinar el agar sangre preparado con sangre de carnero, por adecuada formación de
hemólisis, especialmente utilizando Estreptococos hemolíticos.
3. CONTROL DE CALIDAD DE REACTIVOS:
Un elemento fundamental en el trabajo diario del laboratorio, lo constituyen los reactivos, tanto comerciales
como de preparación doméstica, que son utilizados en la caracterización de microorganismos. Estos
reactivos merecen una especial atención, toda vez que fallas en su funcionamiento pueden generar en
identificaciones equivocadas.
www.monografias.com
Es recomendable que los reactivos comerciales sean examinados inmediatamente cuando se abre un
nuevo lote o vial y llevar un registro de su funcionamiento.
REACTIVO MICROORGANISMO REACCION ESPERADA
Coagulasa Staphylococcus aureus Coágulo. Coagulasa positiva

Coagulasa Cepa ATCC Coágulo. Coagulasa positiva
Coagulasa Stafilococcus epidermidis Inerte. Coagulasa negativa
Oxidasa Pseudomona aeruginosa Negro. Oxidasa positiva

Oxidasa E. coli Inerte. Oxidasa negativa
Catalasa Staphylococcus sp Burbujas. Catalasa positiva

Catalasa Streptococcus sp Inerte . Catalasa negativa
Betalactamasa S. aureus ATCC 29213 Rojo. Positiva

Betalactamasa H. influenzae ATCC 10211 Inerte. Negativa
Optoquina S. pneumoniae Halo de >/= 12 mm
ONPG E. coli Amarillo. Positivo

ONPG Proteus sp Incoloro. Negativo
Ehrlich E. coli Anillo rojo. Indol positivo

Ehrlich K .pneumoniae Incoloro. Indol negativo
Cloruro férrico Proteus sp Verde. Fenilalanina positivo

Cloruro férrico E. coli Incoloro. Fenilalanina negativo
Sobres de Anaerobiosis Bacteroides sp Crecimiento en Anaerobiosis
Suero para tubos germinales Candida albicans Tubos germinales positivo
4. CONTROL DE CALIDAD DE LOS TINTES :

La clasificación correcta de las bacterias, de acuerdo a las reacciones con las substancias químicas,
dependen de la pureza, reactividad y estabilidad de los reactivos. La concentración de las soluciones por
efecto de la evaporación de los solventes o las variaciones introducidas en los métodos recomendados,
puede afectar los resultados de modo adverso. Este es el caso de las tinciones para diferenciar bacterias
por su reacción al Gram y la morfología bacteriana, tintes para cápsulas, esporas, etc.
El control de calidad de éstos tintes debe realizarse primero con cada nuevo lote preparado; luego basta
con un control cada semana para mantener un grado de seguridad apropiado en su uso.
En el caso de la tinción de Gram, sin lugar a dudas una de las herramientas más importantes del
microbiólogo, se recomienda tener especial cuidado con la mezcla de alcohol-acetona para decolorar la
placa. Es posiblemente éste reactivo el que produce mayores problemas ya sea por decoloración excesiva o
por débil decoloración de los microorganismos. Es también la etapa de la Tinción de Gram en la que el
tiempo de exposición es más determinante.
Para facilitar el control de los tintes, se recomienda preparar placas con microorganismos aislados en el
trabajo rutinario, utilizando cepas frescas, tomando en cuenta aquellos que pudieran ser más útiles según la
tinción a evaluar.
Algunos ejemplos son:
TINCION MICROORGANISMO REACCION ESPERADA
Gram Estafilococo sp Morado. Gram-Positivo.

Gram E. coli Rosado. Gram-Negativo.
Gram Mezcla de ambos Mezcla de ambas colores.
Zielh-Neelsen Mycobacterium sp Rosadas. BAAR positivo
www.monografias.com
Zielh-Neelsen E. coli Azul. BAAR negativas.
Kellung S. pneumoniae Detección de cápsula positiva

Kellung E. coli Detección de cápsula negativa
ALGUNAS CAUSAS DE ERROR DURANTE LA TINCION:

Verde malaquita Clostridium sp Espora de color verde.
Resto de la célula rosada.
Verde malaquita E. coli Célula completa rosada.
1. El Violeta Cristal tiende a hacer precipitación, lo cual puede ser causa de observación de estructuras en
el frotis. Si se observa precipitación, proceda a filtrar el tinte.
2. La evaporación puede ser causa de mal funcionamiento de los tintes.
3. Las placas que no han sido previamente limpiadas o con restos de grasa, pueden ser causa de mala
fijación de la muestra / tinción.
4. Sobrecalentamiento de la placa durante la fijación. El exceso de calor provoca un daño físico en la
pared celular de las bacterias que puede afectar la retención de los colorantes.
5. Lavado muy fuerte de la placa durante la tinción.
6. Proporción no adecuada de los componentes de la tinción.
7. Algunos tintes como Safranina y Fucsina básica pueden contaminarse. Si se sospecha esto, cultive 1
ml en Tioglicolato, o descarte el tinte.
8. La tinción de Zielh-Neelsen tiene sus limitaciones en cuanto a no ser específica para micobacterias y su
baja sensibilidad, ya que el nivel de detección es de 5,000 a 10,000 bacilos por mililitro de esputo.
Esto debe ser tenido en cuenta al evaluar una placa.
9. Una Cepa Control positiva, debe ser teñida cada vez que un nuevo lote de tintes para Zielh-Neelsen es
preparado y cuando se reciba un nuevo pedido de tintes y reactivos. Se puede utilizar la cepa de
Mycobacterium tuberculosis ATCC 25177 como control positivo.
5. CONTROL DE CALIDAD DE ANTISUEROS :
El mundo de la microbiología ha sido inundado cada vez más por productos comerciales hechos con el
objetivo de detectar agentes etiológicos de enfermedades en el menor tiempo posible, con el mayor grado
de especificidad , sensibilidad y algunos de ellos con la intención de eliminar el cultivo bacteriano como
única forma diagnóstica. Estos sistemas actúan algunos con solo la muestra del paciente y otros requieren
de la cepa aislada o detectan sus metabolitos. Estos sistemas se han convertido en un arma imprescindible
para el microbiólogo y en muchos casos dan confianza en la seguridad del diagnóstico y en otras se utilizan
en la detección de microorganismos difíciles de cultivar.
Estos productos para la detección directa del espécimen o la cepa bacteriana, son considerados exámenes
bacterianos y no test serológicos. En forma general estos kit deben ser probados cada vez que se recibe un
nuevo lote y cada vez que se utilicen, se le deben correr sus controles positivo y negativo que vienen con
cada kit.
CONSIDERACIONES GENERALES EN EL USO DE ANTISUEROS:
1) Los sistemas son para uso exclusivo de diagnóstico in vitro.
2) Conservar todos los reactivos en refrigeración.
3) Colocar la fecha en que se abre el kit.
4) No congelar los reactivos.
5) No utilizar los reactivos si se sospecha deterioro de los mismos, tales como si se observa cambio de
color, autoaglutinación en el envase, no producen la reacción esperada con los controles respectivos,
reactivos contaminados o con signos de evaporación.
6) El personal de laboratorio calificado, debe utilizar las técnicas asépticas y las precauciones habituales
para protegerse de los agentes infecciosos.
7) Nunca pipetear con la boca las muestras y/o los reactivos.
8) No utilizar reactivos de lotes diferentes.
9) No utilizar los reactivos después de la fecha de caducidad.
10) Después de sacar los reactivos de la refrigeradora, dejarlos a temperatura ambiente antes de utilizar.
11) Todos los productos inoculados deben ser considerados como potencialmente infecciosos.
12) No volver a utilizar las tarjetas desechables, después de haber sido utilizadas.
13) Algunas pruebas deben estar precedidas por su apropiado cultivo, aislamiento y pruebas bioquímicas
preliminares, antes de realizar métodos serológicos y una identificación final.
www.monografias.com
14) Al terminar la prueba, todo el material sucio y productos inoculados deben ser sometidos a esterilización
por autoclave, incinerados o sumergidos en un desinfectante germicida adecuado, antes de su
eliminación.
15) La interpretación de los resultados debe ser hecha por personal calificado, que tomará en cuenta el
contexto clínico, el origen de la muestra, los aspectos macro y microscópico y su experiencia.
Aglutinación por Antígenos de Estreptococos:
 Un test positivo está indicado por la aparición de una aglutinación nítida de látex en 2 minutos
en un círculo, lo cual permite la identificación de grupo.
 No tomar en cuenta las aglutinaciones débiles que pudieran aparecer en otros círculos.
 Una aglutinación intensa en varias suspensiones de látex, representa una mezcla de grupos o
una cepa autoaglutinable. Volver a hacer el aislamiento de la colonia y el test de látex.
 Una vez a la semana verificar la reactividad de las suspensiones bacterianas. Para ello seguir la
técnica y reemplazar la cepa a analizar, por el control positivo. Debe aparecer una aglutinación en
cada suspensión látex.
 También la especificidad del test se puede analizar utilizando cepas control como el
Streptococcus pyogenes ATCC 19615 ó seguir la técnica sin emulsionar colonias en la enzima de
extracción, o mezclar los reactivos de látex con una gota de NaCl 0.15 mol/l. No debe aparecer
aglutinación en las suspensiones de látex.
 Pueden aparecer resultados falsamente negativos si se estudia una cantidad insuficiente de
colonias
 Cuando se utiliza el método de detección directa de antígenos en el tracto respiratorio superior,
hay que tener en cuenta la baja sensibilidad del test, por lo que todo resultado negativo debe ser
seguido por su correspondiente cultivo para verificar.
17) Detección de antígenos asociados a meningitis bacteriana:
 El antígeno de N.meningitidis grupo B es más difícil de detectar, ya que está relacionado
estructural e inmunologicamente con el antígeno de E.coli K1. Por ello una reacción positiva con
éste antisuero en LCR de recién nacido o prematuro, indica en la mayoría de los casos la
presencia de E.coli K1. En un sujeto de más edad, si puede indicar la presencia de N. meningitidis
grupo B.
 La sensibilidad de éste látex de aglutinación tiene un rango entre 65% para S. pneumoniae
y 95% para H. influenzae.
 Como otras pruebas de látex, un valor positivo depende del nivel de antígenos detectable. Este es
un test de descarte, que no reemplaza al cultivo.
 Cada laboratorio debe evaluar la sensibilidad, especificidad y valor predecible para su población
de pacientes.
18) Aglutinación por Salmonella sp:
 Sea estricto en el tiempo de la reacción.
 Miembros del grupo Salmonella están antigenicamente relacionados a
Citrobacter y Arizona. Antígenos de éstos microorganismos tienen similar fórmula antigénica, por
lo que puede haber reacciones cruzadas.
Por esto es importante que la prueba de aglutinación por Salmonella solo se realice a aquellas
cepas que muestran patrón bioquímico del género Salmonella.
6. CONTROL DE CALIDAD DE LA PRUEBA DE SENSIBILIDAD
A LOS ANTIBIÓTICOS MEDIANTE DISCO:
Hemos querido resaltar los aspectos de control de calidad de la prueba de sensibilidad a los antibióticos por
difusión simple en agar, utilizando discos de sensibilidad, ya que es la prueba de mayor utilidad en nuestro
medio.
Es importante tener presente que ésta prueba a sido designada exclusivamente para examinar
microorganismos de rápido crecimiento, utilizando la normativa del Clinical and Laboratory Standards
Institute ( Antes NCCLS ) CLSI M100-S16 – 2006, vol.26, No. 3.
El método de difusión simple en agar es sin lugar a dudas el sistema de mayor uso para la realización de la
sensibilidad bacteriana. Hay que tener en cuenta el gran valor de ésta prueba en la detección temprana de
multiresistencia, escogencia y valoración de un antibiótico frente a un microorganismos patógeno,
protección de infección, estudios epidemiológicos, etc.
La prueba de sensibilidad a los antibióticos consta de varios elementos que deben ser tenidos en cuenta: El
medio de cultivo, inoculo, incubación, lectura e interpretación y el reporte.
www.monografias.com
La NCCLS establece que “El control de calidad de las pruebas de susceptibilidad con cepas ATCC no
garantiza la precisión de los resultados en cepas aisladas de pacientes: es importante revisar los resultados
obtenidos frente a cada antimicrobiano antes de informar”. Por tanto hay que revisar:
1. Los resultados corresponden a lo esperado para la bacteria en estudio.
2. Los resultados de las drogas pertenecientes a un grupo siguen el
Comportamiento establecido (Ej: Cefalosporina de 3ª > Cefalosporina de 1ª
frente a Enterobacterias).
3. La bacteria es sensible a los antibióticos frente a los cuales no se ha
documentado resistencia.
a) Control de calidad del medio de cultivo:
1. Utilizar agar de Mueller-Hinton.
2. La calidad del agua es determinante, ya que la misma debe estar libre de iones metálicos.
Las variaciones de cationes divalentes, principalmente
calcio y magnesio, afectará los resultados con aminoglicósidos, tetraciclina y colistina,
cuando se prueban ante cepas de Ps. Aeruginosa. Un contenido excesivo en catión,
reducirá la zona de inhibición, mientras que un escaso contenido en catión, puede dar un
inaceptable aumento en el tamaño de la zona.
3. Servir en platos Petri grandes de 150 x 15 mm preferiblemente o
100 x 15 mm, con una profundidad de 4 a 5 mm
4. Aproximadamente se utilizan 25 cc para platos de 100 mm y 60 cc para
platos de 150 mm.
5. Volúmenes mayores de medio provocan disminución en el tamaño del
halo de inhibición, y volúmenes menores halos más pequeños.
6. Se deben seguir las normas generales establecidas para almacenamiento
del medio de cultivo.
7. Los platos Petri deben ser colocados en la incubadora para secarlos de
restos de agua producto de la condensación, antes de ser utilizados para
no diluir el inoculo bacteriano.
b) Control de calidad de los discos de sensibilidad:
Las metas de un programa de control de calidad van destinadas a monitorear:
La precisión y exactitud del procedimiento de la prueba de susceptibilidad, el comportamiento de los
reactivos utilizados en la prueba y la actuación de las personas que llevan a cabo las pruebas y sus
resultados.
1. Los discos deben ser almacenados a un temperatura entre –20 y +8°C.
Algunos discos, especialmente los de antibióticos ß-lactámicos deben guardarse
congelados a -20°C. Solo los viales en uso deben mantenerse a temperatura de
refrigeración.
2. Al sacarlos de la refrigeradora para su uso, espere a que los viales
alcancen la temperatura ambiente por 1 a 2 horas.
3. Siempre utilice primero los viales con fecha de caducidad más próxima.
4. Siempre que un cartucho ha sido extraído del paquete, éste debe guardarse en un
desecador que cierre perfectamente.
5. Cuando se utilice el aparato dispensador que contiene los discos deberá mantenerse
siempre refrigerado.
6. Los discos son colocados en el medio a una distancia de más de 24 mm del centro de uno
al centro del otro. En todo caso no colocar más de 12 discos en una placa de 150 mm, ni
más de 5 discos sobre la placa de
100 mm.
7. Procurar no colocar discos de antibióticos bactericidas ( Ej. Penicilina,
Cefalosporinas, Aminoglicósidos, Vancomicina) al lado de antibióticos bacteriostáticos (Ej.
Cloranfenicol, Tetraciclina, Sulfonamidas) para evitar el antagonismo antibiótico.
8. Colocar las placas en la incubadora dentro de los 15 primeros minutos
después de su aplicación.
9. Para verificar el estado de los discos de sensibilidad, utilice cepas control ATCC, las cuales
son seleccionadas por su estabilidad genética y por su utilidad en el método utilizado.
Estas cepas se corren como una muestra más y se correlaciona el tamaño de los halos de
inhibición con las medidas expresadas en los Manuales NCCLS M2-A6.
Entre las cepas ATCC (American Type Culture Collection) recomendadas están:
www.monografias.com
Streptococcus pneumoniae ATCC 49619

Haemophilus influenzae ATCC 49247 y 49766
Neisseria gonorrhoeae ATCC 49226
Escherichia coli ATCC 25922 y 35218
( La E coli 35218 como organismo de control para combinaciones con inhibidor de
betalactamasa, como aquellos que contienen ácido clavulánico, sulbactam o tazobactam ).
Staphylococcus aureus ATCC 25923 y 29213
Pseudomona aeruginosa ATCC 27853
Enterococcus faecalis ATCC 29212
(Para ser utilizado con discos de alto contenido de Aminoglicósidos).
c) Factores que influyen en la prueba de sensibilidad antibiótica por el método de difusión en
agar
Los resultados de una prueba de sensibilidad a los antibióticos por el método de la difusión del disco
pueden ser influenciados por una gran cantidad de variables. Algunos de los factores, tales como la
densidad del inóculo y la temperatura de la incubación son fáciles de controlar, pero el laboratorio debe
estar al tanto de otras variables que pueden afectar el resultado. Todo lo anterior justifica un estricto control
de calidad, el cual debe ser parte del procedimiento rutinario del laboratorio.
d) EL ESTANDAR McFARLAND:
 La densidad de la turbidez del Estándar McFarland deberá ser verificada utilizando un
espectrofotómetro con dirección de luz de 1 cm y cubetas adecuadas para determinar
www.monografias.com
absorbancia. Para realizar el control de un estándar McFarland de 0.5 , la absorbancia deberá

leer entre 0.08 a 0.10
a una longitud de onda de 625 nm.
 La suspensión de Sulfato de Bario deberá transferirse en alícuotas de 4 a 6 ml dentro de tubos
con rosca. Estos tubos deberán guardarse a temperatura ambiente en un lugar fresco y oscuro.
 Antes de ser usados, los patrones deberán agitarse para una adecuada homogenización.
 Mensualmente los patrones son descartados y vueltos a preparar, o en su defecto se debe
comprobar su densidad.
e) Control de calidad de la lectura e interpretación:
1. Cuando se va a determinar la sensibilidad del S. Pneumoniae a la
Penicilina, utilizar un disco de Oxacilina de 1 µg.
Las cepas de S. Pneumoniae con zonas de Oxacilina de >/- a 20 mm
son susceptibles a penicilina ( CIM </- 0.06 µg/ml ).
2. Las pruebas para detectar Estafilococos Meticilina Resistentes
( MRSA), deben incubarse a 35° C por 24 horas exactas.
3. Todo caso de Estafilococo resistente a la Vancomicina, debe ser
confirmado, enviado a un laboratorio de referencia e informar a las
Autoridades de Salud Pública.
4. Cuando se trata de Sulfonamidas, los microorganismos deben desarrollarse por varias
generaciones antes de que ocurra inhibición, por lo que se hace caso omiso del
crecimiento leve, al igual que de un vestigio de proliferación dentro del halo de
inhibición.
5. La prueba de la betalactamasa predice la resistencia a la Penicilina, Ampicilina y
Amoxicilina.
6. Las cefalosporinas pueden aparecer activas in vitro contra Listeria sp, pero no son
efectivas clínicamente y no deben ser informadas como susceptibles.
7. Los Enterococos sp las cefalosporinas, los aminoglicósido ( Excepto por resistencia de
nivel alto ), Trimethoprim/sulfametoxazole y la Clindamycina, pueden aparecer activos
in vitro pero no son efectivos clínicamente y éstas cepas no deben informarse como
susceptibles.
8. La susceptibilidad y resistencia a Azitromicina, Claritromicina y Diritromicina puede ser
interferida por la prueba de Eritromicina.
9. Para control de calidad de cepas de Estafilococos aureus VISA/VRSA utilizar las
siguientes cepas control :
E. faecalis ATCC 29212 Control sensible
E. faecalis ATCC 51299 Control resistente
Causas habituales de error en la prueba con disco:
a) Error administrativo en la transcripción de los datos del control de calidad.
b) Lectura errónea al medir el diámetro de la zona.
c) Contaminación u otros cambios en la cepa control.
d) Suspensión del inóculo demasiado fuerte o demasiado débil.
e) Mala agitación del estándar McFarland o estándar dañado.
f) Incorrecta temperatura, tiempo o atmósfera de incubación.
g) Perdida de la potencia del disco durante su transporte, su manejo o su almacenaje en el
laboratorio.
f) INTERPRETACIÓN DEL ANTIBIOGRAMA EN BASE A LAS RECOMENDACIONES DEL CLSI M100-
S15 –S16, DEL 2005 y 2006 :
1. Cepas de Salmonella sensibles a las Fluoroquinolonas
( Ciprofloxacina, Levofloxacina y Norfloxacina, etc ) que son
resistentes al Acido Nalidíxico, pueden estar asociados a fallas
clínicas o demora en la respuesta en pacientes con salmonellosis
extraintestinal.
2. Los aislamientos de Salmonella sp extraintestinal deben ser examinados y reportados
por Acido Nalidíxico, Cloranfenicol y cefalosporinas de 3ª generación
3. Los aislamientos de Salmonella aislados de sitios estériles con MIC a la Ciprofloxacina
de ≥ a 0.125 µg/ml ó resistentes al Acido Nalidíxico, deben ser considerados con
reducida sensibilidad a la Fluoroquinolona, y el médico debe ser notificado de fallas
clínicas o demora en la respuesta en el tratamiento de la infección.
www.monografias.com
4. Los aislamientos de Salmonella sp y Shigella sp en heces, deben ser examinados solo

por Ampicilina, quinolonas y Trimetho-Sulfa y reportados rutinariamente.
5. Realizar la prueba de D-Test a los Staphylococcus que son resistentes a la Eritromicina
y Sensibles a la Clindamicina. Para ello Se utiliza un disco de Eritromicina de 15 µg y
otro de Clindamicina de 2 µg. El achatamiento del halo de inhibición de la vancomicina
frente al disco de eritromicina, da positiva la prueba. El test es aceptable para todos
los Estafilococos , incluyendo los Oxacilina sensibles o resistentes.
6. La sensibilidad a la Ampicilina por el Enterococcus faecalis, puede ser usada para
predecir la sensibilidad al Imipenem.
7. En caso de ser requerido por el clínico, el E. faecalis Ampicilina sensible es Imipenem
sensible.
8. La resistencia mediada por mecA puede ser heterogenea en su expresión y dar valores
en la categoría de sensible, siendo resistente. Por lo anterior, cuando se utiliza el
método de difusión simple en agar, es posible utilizar el disco de Cefoxitina de 30 µg y
sus puntos de corte, para predecir la resistencia a la Oxacilina mediada por mecA. En el
resultado reportar como Oxacilina, no como Cefoxitina. Cuando se utiliza determinación
de CIM , continuar utilizando oxacilina y sus puntos de corte.
9. Puntos de corte para la detección de mecA en Estafilococos :
S. aureus R = ≤ 19 mm S = ≥ 20 mm
S. Lugdunensis R = ≤ 19 mm S = ≥ 20 mm
Estafilococos coagulasa negativa R = ≤24 mm S = ≥ 25 mm
Nota : Reportar como Oxacilina sensible o resistente.
10. Para el caso de los Estafilococos coagulasa negativa, los puntos de corte para oxacilina
(R, I, S) se correlacionan bien con la presencia o ausencia del gen mecA sólo en S.
epidermidis. En otras especies de SCoN (ej: S. lugdunensis, S. saprophyticus) los
puntos de corte actuales pueden inducir a error haciendo que cepas S (sin mecA)
aparezcan como R.
11. No informar los siguientes antibióticos en cepas aisladas de LCR porque pueden ser
clínicamente inefectivas : antimicrobianos exclusivos de vía oral, cefalosporinas de 1ª y
2ª generación, clindamicina, macrólidos, tetraciclinas y fluoroquinolonas.
12. El antibiograma del Haemophilus sp solo está estandarizado con el medio de HTM.
13. En Haemophilus, las cepas resistentes a Ampicilina no productoras de betalactamasa (
raras ), deben ser consideradas resistentes a Amoxicilina/Acido clavulánico,
Ampicilina/Sulbactam y Piperacilina/Tazobactam.
14. Enviar toda cepa de S. aureus con CIM a la Vancomicina ≥ 4 g/ml al laboratorio de
referencia.
15. Hacer CIM a S. aureus con halo de Vancomicina de ≤14 mm y enviar al laboratorio de
referencia.
16. En sensibilidad de S. aureus frente a la Vancomicina utilizar estos puntos de corte :
VSSA = ≤ 4 g/ml. VISA = 8-16 g/ml VRSA = ≥32 g/ml
15. Puntos de corte para B. Cepacia a la Ceftazidina ( CIM ) :
R = ≤4 g/ml I = 15-17 g/ml S = ≥18 g/ml
16. Puntos de corte para S. maltophilia y B. cepacia a Minociclina
(CIM ): R = ≤ 14 g/ml I = 15-18 g/ml S = ≥ 19 g/ml
17. Punto de corte para el S. aureus frente a la Vancomicina (CIM )
CLSI S = ≤ 2g/ml I = 4 - 8 g/ml R = ≥ 16 g/ml
FDA S = ≤ 4g/ml I = 8 – 16 g/ml R = ≥ 32 g/ml
No hay cambios para método de difusión.
No hay cambios para
Estafilococos coagulasa negativa.
18. Rango de temperatura de incubación para todas las bacterias, excepto Estafilococos y
N. gonorrhoeae : 35º C +/- 2º C.
Temperaturas arriba de 35º C podrían no detectar Estafilococos meticilina resistentes.
19. Al reportar Salmonellas y Shigellas, no reportar aminoglicósidos, cefalosporinas de 1ª
y 2ª generación y Cefamicina, ya que pueden aparecer efectivos in vitro , pero no en
la clínica, por lo que no deben ser reportados como sensibles.
20. Las cepas de Proteus mirabilis con las siguientes lecturas de sensibilidad, han de ser
consideradas ESBL positivas :
www.monografias.com
Droga Halo (mm) CIM (g/ml )

Ceftazidina ≤ 22 >1
Cefotaxime ≤ 27 >1
21. Puntos de corte para Polimixina B y Colistin frente a
Acinetobacter sp : S = ≤ 2 g/ml R= ≥ 4 g/ml.
22. Drogas para test de difusión en agar de N. meningitidis :
Penicilina, Ampicilina, Cefotaxime, Ceftriaxone, Meropenem,
Cloranfenicol.
23. Cepas ATCC recomendadas para control de calidad de
S. Maltophilia :
E. coli ATCC 25922
Ps. Aeruginosa ATCC 27853
E. coli ATCC 35218 ( Betalactamasa ).
24. CIM para S. maltophilia en sangre :
Droga CIM ( g/ml )
Ceftazidina 32 ( R )
Levofloxacina 2 (S)
Minocyclina 1 (S)
Ticarcilina/A. Clavul. 16 ( S)
Trimeth-Sulfa. 0.5/9.5 ( S )
25. Cualquier reporte de aislamiento de cepas VISA / VRSA , se recomienda informar al
CDC a la dirección : [email protected]
Verificación de antibiogramas atípicos:
a) Examine primero por errores de trascripción.
b) Reexamine el plato de sensibilidad.
c) Evalué reportes previos del paciente para observar su patrón de sensibilidad anterior.
d) Repita los test de identificación y sensibilidad a los antibióticos.
Condiciones sugeridas que requieren verificación del resultado de
Sensibilidad a los antibióticos:
17. S. aureus resistente a Oxacilina.
18. S. pneumoniae resistente a Penicilina.
19. Cefalosporinas de amplio espectro ( Cefotaxime, Ceftriaxone ) resistente a S.
pneumoniae.
20. Streptococcus viridans penicilina resistente o intermedio, aislados de áreas estériles del
cuerpo.
21. Estafilococos o Enterococos resitentes a la Penicilina o intermedio.
22. Enterococos con altos niveles de resistencia a la Gentamicina aislados de áreas
estériles del cuerpo.
23. Klebsiella sp o E. coli con potencial espectro de betalactamasa.
( Ej. Resistente a Ceftazidime ).
24. Bacilos Gramnegativos no fastidiosos resistentes a Gentamicina-
Tobramicina-Amikacina.
25. S. maltophilia resistente a Trimethoprim-Sulfametoxazole.
26. H. influenzae Ampicilina resistente y betalactamasa negativa.
27. Un aislamiento para el cual el antibiograma es atípico para la especie.
28. Ampicilina y/o Cefalotina susceptible para Enterobacter sp,
Citrobacter freundii, Serratia marcescen y Ps. Aeruginosa.
29. Klebsiella sp sensible a Ampicilina.
30. Bacilos Gramnegativos Imipenem resistentes o intermedio, excepto
S. maltophilia.
31. Bacilos Gramnegativos Ciprofloxacina resistente, excepto
S. maltophilia o B. cepacia.
g) CONTROL DE CALIDAD DEL ETEST:
Tiras de antibióticos a utilizar: Penicilina, Ceftriaxone, Vancomicina.
Cepa a utilizar: Staphylococcus aureus ATCC 29213
Frecuencia: Una vez a la semana o cuando se detecten problemas.
Procedimiento: Subcultive la cepa ATCC un día antes del test de control de calidad.
Siga los procedimientos normales para la prueba de sensibilidad por difusión en agar.
www.monografias.com
Valores esperados (MIC ):

Penicillin: 0.25-1.0 µg /mL
Cefatazidime: 4.0-16.0 µg/ml
Ceftriaxone: 1.0-8.0 / µg/m l
h) DETECCIÓN DE CEPAS PRODUCTORAS DE BETALACTAMASA DE ESPECTRO EXTENDIDO

(ESBL):
Utilice las siguientes cepas control
E. coli ATCC 25922 como control ESBL negativo
K. pneumoniae ATCC 700603 como control ESBL positivo
i) Control de calidad de la sensibilidad a los antibióticos en los sistemas computarizados:

Los Laboratorios de Microbiología modernos tienen a su alcance una creciente gama de sistemas
computarizados para la identificación de los microorganismos y su susceptibilidad a los antibióticos.
Algunos de estos sistemas traen consigo programas de computadora para ayudar a evaluar el control de
calidad de los mismos. En algunos casos, la computadora hace un control periódico de su funcionamiento
mediante comandos u ordenes preestablecidas.
Debido a que en nuestro medio existe solamente el Sistema Vitek de identificación microbiana, solo
haremos algunas observaciones relativas a éste sistema.
El Sistema Vitek utiliza una determinación turbidimétrica de la rapidez de crecimiento del microorganismo,
en presencia de agentes antimicrobianos para obtener un análisis de regresión lineal y posteriormente
determinar un algoritmo derivado de la concentración inhibitoria mínima (CIM).
Actualmente el laboratorio cuenta con un grupo limitado de tarjetas Vitek para la sensibilidad a los
antibióticos, tal como sigue:
Tarjetas de sensibilidad para Gramnegativos:

1. GNS-108
2. GNS-203
3. GNS-210
4. GNS-651
Tarjetas de sensibilidad para Grampositivos:

1. GPS-105
Al hacer el control de calidad de las tarjetas de sensibilidad a los antibióticos, se recomienda utilizar cepas
ATCC con CIM conocidas. Estas pruebas se pueden realizar una vez al mes durante 10 días seguidos, en
los cuales se aceptan no más de 2 valores de CIM para cada combinación de Antibiótico/Organismo fuera
del rango establecido.
Si se diera el caso de deben correr controles de calidad con cepas ATCC durante 30 días consecutivos, en
los cuales no se aceptan más de 3 valores fuera de rango. Si los hay, llamar al Departamento de Servicio
de Vitek para el chequeo correspondiente.
Para realizar los controles se recomiendan las siguientes cepas ATCC para las tarjetas respectivas:
Las tarjetas de sensibilidad a los antibióticos del Sistema Vitek, han sido comparado con los estándares de
la NCCLS, mediante las técnicas de microdilución para obtener la CIM; sin embargo, bioMérieux Vitek
recomienda la utilización de métodos alternos para confirmar la susceptibilidad a ciertos microorganismos
contra drogas específicas.
TARJETA ANTIBIOTICO MICROORGANISMO
www.monografias.com
GNS-108 Ampicilina A. junii, A. lwoffii, Aeromona sp,

Citrobacter sp
GNS-108 Ceftazidina Acinetobacter junni. A. lwoffi
GNS-108 Cefazoline Aeromonas. sp
GNS-108 Cefoxitin A.junii, A. lwoffii, Aeromona sp.
GNS-108 Imipenem Aeromona sp
GNS-108 Piperacilina A. jejunii, A. lwoffii. Aeromona sp.
GNS-108 Ticarcilina/A. Clavulánico Ps. Aeruginosa, Aeromonas sp
GNS-108 Trimeth/Sulfa A.junii. A. lwoffii, Aeromona sp
TARJETA ANTIBIOTICO MICROORGANISMO
GNS-203 Ampicilina A. jejunii, A. lwoffii, Aeromonas sp,

Citrobacter sp.
GNS-203 Acido nalidixico Pseudomona sp
GNS-203 Carbenicilina Acinetobacter junni, A. lwoffi
GNS-203 Cefalotina Aeromona sp
GNS-203 Cefazolina Aeromonas sp,
GNS-203 Cefuroxima A.jejunii. A. lwoffi. Aeromona sp
GNS-203 Norfloxacina Acinetobacter sp
GNS-203 Ticarcilina/Acido clavulánico Aeromona sp, Ps. aeruginosa
GNS-203 Trimetho/Sulfametoxazole A. jejunii, A. lwoffii, Aeromona sp
GNS-651 Ampicilina A. jejunii, A. lwoffii,

Aeromona sp, Citrobacter sp
GNS-651 Ampicilina/Sulbactam Enterobacter sp, Aeromonas sp,
C.braakii, C.freundii, C. youngae
GNS-651 Cefepime Ps. Aeruginosa, Burkholderia cepacia
GNS-651 Cefalotina Aeromona sp
GNS-651 Ceftazidina Acinetobacter junii. A. lwoffi
GNS-651 Cotrimoxazole Acinetobacter junii. A. Lwoffi.
Aeromonas sp
GNS-651 Imipenem Aeromona sp
GNS-651 Meropenem Burkholderia cepacia
GNS-651 Piperacilina A. Junii. A. Lwoffi. Aeromonas sp
GNS-651 Piperacilina/Tazobactam Burkholderia cepacia, Enterobacter sp,
Pantoea ( Enterobacter) agglomerans
GPS-105 Eritromicina Enterococcus sp, Estreptococos grupo D

GPS-105 Tetraciclina Estafilococos coagulasa negativa,
Enterococcus sp, Estreptococos grupo B,
Estreptococos grupo D.
GPS-105 Gentamicina Enterococcus sp. Estreptococos B y D
j) CONSIDERACIONES GENERALES:
a) Se debe tener especial cuidado en la preparación del inóculo. Fallas en su preparación, tienen
efecto sobre el funcionamiento de todo el instrumento.
b) Siempre tener presente que el sistema no puede examinar todos los grupo
relevantes de bacterias.
c) El uso de colonias absolutamente aisladas es clave en el aprovechamiento
los sistemas computarizados. Algunos de los organismos sugeridos por el
fabricante para control de calidad, podrían no detectar deterioro en el
instrumento o la calidad de los reactivos.
d) Es relevante utilizar métodos alternos de sensibilidad a los antibióticos en aquellos casos en
que la literatura que acompaña las tarjetas indique que el sistema falla en detectar resistencia.
e) Se han reportado casos de falsa sensibilidad o resistencia, particularmente debido al lector del
instrumento o a un corto periodo de incubación durante la prueba de sensibilidad. Un periodo
www.monografias.com
de 3.5 a 6 horas podría no ser adecuado para expresar todos los mecanismos de resistencia
de las bacterias.
Tal es el caso de algunos bacilos Gramnegativos que inducen resistencia mediada por ß-
lactamasa a algunos antimicrobianos enzimáticamente lábiles a la ß-lactamasa, como ocurre
con el Citrobacter freundii, Enterobacter sp, Serratia sp, Morganella morganii, Providencia sp y
Ps. aeruginosa.
f) Se ha observado una falsa resistencia a Aztreonam, especialmente por Proteus y Morganella sp
por problemas de detección fotométrica del crecimiento.
g) Se han reportado falsa resistencia a Imipenem para varias especies en periodos largos y cortos
de incubación. Esto no es común y se debe a la degradación del antibiótico o la concentración
de Zinc en el medio.
h) Una baja o moderado nivel de resistencia a la Vancomicina frente a Enterococcus sp se ha
detectado, especialmente del tipo VanB, ya que podría no ser detectado en periodos cortos de
incubación.
i) Se han observado o problemas en la detección de resistencia a altos niveles de Gentamicina o
Estreptomicina frente a Enterococcus sp en incubaciones largas y cortas.
j) Tener presente colocar las marcas externas en la tarjeta, antes de meterla a la
incubadora/lector.
k) No deje pasar más de 15 minutos después de prepara el inóculo, para llenar las tarjetas y
colocarla en la incubadora.
l) Chequear la solución salina por esterilidad. Para ello inocule en caldo de cultivo e incube a 35°C
por 24 horas.
m) Con cada lote de preparación de inóculo, estandarizar primero el calorímetro.
n) Haga que el Departamento de Servicio técnico de Vitek revise periódicamente el lector del
aparato para calibrarlo.
o) Lleve un récord de cualquier discrepancia en la identificación de cepas estándar de control.
Igualmente el tipo de tarjeta, lote, fecha de expiración, etc.
k) CEPAS ATCC RECOMENDADAS PARA CONTROL DE CALIDAD DE TARJETAS DE

IDENTIFICACIÓN POR METODOS SEMIAUTOMÁTICOS :
API® 20E QC Set
Enterobacter cloacae ATCC® 13047
Escherichia coli ATCC® 25922
Klebsiella pneumoniae ATCC® 35657
Stenotrophomonas maltophilia ATCC® 51331
Proteus mirabilis ATCC® 35659
API® An-IDENT QC Set
Actinomyces odontolyticus ATCC® 17929
Bacteroides fragilis ATCC® 23745
Bacteroides ovatus ATCC® 8483
Clostridium histolyticum ATCC® 19401
Clostridium perfringens ATCC® 13124
API® 20C Clinical Yeast QC Set
Candida glabrata ATCC® 15126
Candida guilliermondii ATCC® 6260
Cryptococcus laurentii ATCC® 18803
API® NH QC Set
Branhamella catarrhalis ATCC® 23246
Haemophilus influenzae ATCC® 10211
Haemophilus paraphrophilus ATCC® 49917
Neisseria gonorrhoeae ATCC® 31426
Sensibilidad al Kirby Bauer QC Set
Enterococcus faecalis ATCC® 29212
Pseudomonas aeruginosa ATCC® 27853
Staphylococcus aureus ATCC® 25923
www.monografias.com
Control de calidad de equipos y materiales de trabajo

Objetivo: Todos los instrumentos utilizados en el laboratorio clínico, deben estar amparados por un
programa de control de calidad y de mantenimiento preventivo, basados en las instrucciones del fabricante y
los procedimientos establecidos.
Validación de Equipos: Los nuevos equipos de mayor impacto en el cuidado del paciente (Vitek, Bactec,
BacT/Alert, MGIT, etc.) requieren estudios de validación para determinar que su funcionamiento es al
menos comparables a los equipos existentes o a métodos de referencia. Estos equipos son aceptados solo
si logran cumplir las metas mínimas de funcionabilidad y eficiencia al compararse con los existentes.
Este récord de validación debe mantenerse por toda la vida útil del equipo.
Calibración del Instrumento: Los equipos que requieren un exacto nivel de precisión para obtener un
resultado seguro, requieren de una calibración periódica. La fecha de la calibración, frecuencia y resultado,
deben ser mantenidos en un libro récord dentro del laboratorio.
Control de Calidad: Todo equipo debe ser evaluado por un programa de Control de Calidad en base a las
instrucciones del proveedor y las regulaciones internas del laboratorio. Debe mantenerse un libro récord de
todo lo realizado al respecto, con el nombre del instrumento, fecha, resultado y comentarios. En otro
capítulo se afianzarán los conceptos sobre éste tema.
Referencias y Lectura Suplementaria: El Laboratorio guardará en un fólder toda literatura extra que se
obtenga sobre un equipo, sus accesorios, materiales, estudios foráneos sobre su funcionamiento, etc.
a) Incubadoras:
a) Controle diariamente la temperatura de las incubadoras, antes de sacar los platos y anote en
una hoja control el resultado. Es altamente recomendable que la hoja en que se captura la
data de temperatura diaria, sea en formato semanal o mensual, ya que formatos con periodos
largos desmejoran la atención que debe darse al control y desviaciones de la temperatura.
b) Observe el termorregulador por cualquiera alteración en su posición preestablecida.
c) Coloque las muestras, platos y tubos, en una posición segura.
d) Un papel de filtro humedecido con agua en el fondo de la incubadora, es adecuado para
mantener la humedad requerida.
e) Las incubadoras de CO2 requieren medir el nivel de gas diariamente.
f) El jefe de sección debe ser notificado cuando una incubadora falla en mantener el rango de
temperatura aceptable.
g) Observe macroscopicamente los platos Petri para observar desecación.
h) En incubadoras de CO2 , se puede colocar un cultivo de N. gonorrhoeae ATCC 43069 ,
subcultivandola cada día, para observar su óptimo crecimiento, ya que es un microorganismo
que necesariamente requiere CO2 para crecer.
i) Todas las incubadoras deben ser limpiadas mensualmente y llevar un récord de mantenimiento
preventivo.
b) Autoclaves:
Control de calidad del autoclave:

Para controlar la eficiencia del autoclave, recomendamos utilizar la cepa control Geobacillus (antes
Bacillus ) stearothermophilus ATCC 7953.
También puede utilizarse otros controles comerciales, tales como las tiras reactivas, tapes para autoclave,
cápsulas spot, etc.
De no contarse con ninguna de las anteriores, un método cualitativo consiste en colocar una cepa de
Bacillus subtilis en un Tioglicolato. Incubar por 24 horas a 35ºC y posteriormente colocar el tubo durante la
www.monografias.com
rutina de trabajo del autoclave. Luego de la esterilización, se transfiere con un hisopo a un agar sangre el
cual se incuba a 35ºC por 24 horas. No debe haber crecimiento en el agar sangre, si la autoclave a
trabajado adecuadamente.
c) Cámaras de bioseguridad:
a) Apague la lámpara Ultravioleta antes de comenzar a trabajar.
b) Prenda el blower 15 minutos antes de utilizar.
c) Observe que no se obstruye el flujo de aire.
d) Si hay derrame dentro de la cabina, limpie con un desinfectante apropiado, manteniendo apagada
la cabina.
e) Evite el uso de mecheros de flama dentro de la cabina.
f) Lleve un control de la medida del flujo de aire.
g) Lleve un control de la calibración del flujo de aire.
h) Lleve un control del reemplazo de los filtros.
i) Compruebe los sistemas de alarma de funcionamiento.
j) La superficie interior de la mesa de trabajo de la cabina, puede ser cultivada semanalmente para
detectar contaminación.
k) Desinfecte la cabina antes y después de utilizar.
l) No utilice las cabinas biológicas para hacer mezclas de sustancias químicas y viceversa.
m) Cuando trabaje en la cabina, evite la entrada brusca de aire y el uso innecesario de las puertas del
área.
c1) Control de calidad de las cabinas de seguridad biológicas:
Es altamente recomendado controlar la calidad de la integridad operativa de las cabinas de seguridad
(CSB). Para ello es recomendable que las mismas sean certificadas al menos una vez al año, por un
certificador autorizado. Los test que a continuación se detallan, son aplicables a los 3 tipos de CSB:
 Test de velocidad del aire. Incluir la rata de aire expelida.
 Rata de flujo de aire en el perímetro de trabajo. Es bueno anotar que el test de humo es un
indicador de flujo de la dirección del aire, no de su velocidad.
 Test de integridad del filtro HEPA.
 Prueba de presión. Es para determinar fuga en la estructura de la cabina. Se debe realizar durante
la instalación inicial, después de ser movida de posición y/o después de reparación o cambio de
filtros.
 El test de seguridad, se realiza para verificar potenciales peligros en el sistema eléctrico, polaridad,
interruptores y resistencia de circuitos a tierra.
 Test de la intensidad de la luz durante la operación de la cabina.
 Test de vibración de la cabina.
 Test de ruido de la cabina. Estos últimos test, sirven para evitar fatiga en el operario.
 Test de la lámpara ultravioleta (UV). El método es como sigue :
 Encender la lámpara ultravioleta por 5 minutos.
 Colocar el sensor de medición de UV en el centro de la mesa de trabajo.
 La radiación medida no debe ser menor de 40 microwatts por cm² a 254 nanometros (nm).
d) Incinerador:
a) En condiciones normales el incinerador logra la temperatura óptima de esterilización (81.5 °C) 10
minutos después de haber sido encendido.
b) Bastan 5 segundos para lograr la destrucción de bacterias, hongos y micobacterias.
c) No es necesario observar incandescencia en el asa para lograr la esterilización.
d) Inspeccione la cerámica del incinerador por rajaduras.
e) Aleje el incinerador de elementos que puedan incendiarse por el calor generado.
e) Generadores de ambiente ( Sistema GasPak®) :
a) Mantenga los generadores de gas a temperatura ambiente y el sobre sellado.
b) Mantenga los catalizadores en lugar seco, a temperatura ambiente y las bolsas sellados.
c) Mantenga los indicadores de anaerobiosis a temperatura de refrigeración
(2-8°C).
d) El tiempo de generación de la atmósfera dentro de la jarra es de 30 minutos.
e) El indicador de anaerobiosis cambia de color azul a blanco dentro de la jarra en 4 a 5 horas.
f) Una evidencia sugestiva de ambiente anaerobio, es el cambio de color a rojo vino del agar sangre.
g) Algunos microbiólogos utilizan un agar inoculado con Clostridium novyi B
(ATCC 19402) como indicador de ambiente anaerobio, ya que el mismo es anaerobio estricto.
www.monografias.com
h) Los catalizadores de Paladio, pueden ser regenerados colocándolos en horno a 160 °C por 2
horas. Guardar los pellets en envase cerrado.
i) Control biológico de crecimiento:
f) Refrigeradoras:
a) Control diario de la temperatura en hoja de formato mensual.

b) Coloque los platos Petri en posición invertida con la tapa hacia abajo.
c) Mantenga la temperatura entre 4 – 8 ° C.
d) Utilice refrigeradoras que no hacen escarcha.
e) No coloque medios de cultivo aún ligeramente calientes dentro de la refrigeradora.
f) Evite abrir con frecuencia la puerta de la refrigeradora.
g) Lleve un registro de problemas de funcionamiento, causa y solución.
h) No guarde alimentos en refrigeradoras para especímenes clínicos.
g) Microscopios:
h) Centrífugas:
Problemas y Limitaciones:
1) Vibración
a) Chequear por balance apropiado.
b) Chequear tamaño de los tubos.
www.monografias.com
c) Mirar si la centrífuga está sobre una superficie plana.

2) Rotura
a) Chequear tamaño de los tubos.
b) Balance correcto.
c) Verificar el interior de los portatubos
3) Desprendimiento de tapas:
a) Utilice tapas de rosca.
b) Si no es posible, use Parafilm sobre los tapones de caucho.
c) Siempre que sea posible utilice tubos de plástico.
4) No centrifuge grandes volúmenes de líquidos inflamables, los cuales pueden
producir vapores que pueden incendiarse durante la operación del equipo.
d) La concentración de materiales infecciosos para cultivo puede realizarse en el área rutinaria de
cultivo, siempre y cuando los tubos estén bien cerrados.
e) No colocar las tazas o los portatubos en el horno o autoclave para descontaminar.
f) Evitar utilizar para la limpieza soluciones que contengan cloro o sal, ya que son altamente
corrosivas.
Control de calidad de equipos automatizados

El laboratorio de microbiología moderno se auxilia de equipos computarizados para ayudar en la
rapidez y precisión del diagnóstico etiológico. En la sección de Microbiología del Laboratorio Clínico
del C.H.M,Dr. A.A. Madrid contamos hasta la fecha de 4 sistemas computarizados: BacT/Alert y
Bactec para los hemocultivos, Vitek System para la identificación y antibiogramas y el Bactec
MGIT 960 para la detección de micobacterias.
Cada uno de éstos equipos, consta de sus propios sistemas para el control de calidad. A continuación
presentamos algunas observaciones relativas al control de calidad de los referidos equipos:
a) BacT/Alert ®:
El sistema BacT/Alert es utilizado para la detección temprana de microorganismos en hemocultivos u otros
fluidos corporales. El sistema utiliza un sensor colorimétrico y una luz reflejada para monitorear la presencia
y producción de CO2 disuelto en el medio de cultivo. Si existen microorganismos en la muestra, se genera
CO2 cuando los microorganismos metabolizan los substratos del medio de cultivo. Si el crecimiento de los
microorganismos genera CO2, el color del sensor gas-permeable instalado en el fondo de cada frasco de
cultivo cambia de verde a amarillo.
Cada equipo trae consigo un kit de reflectancia estándar para los procedimientos de control de calidad y de
calibración. Además, de un software para ayudar en pantalla a realizar el mismo. A parte de esto, cada
lote de frascos de cultivo es suministrado con un Certificado de Análisis de control de calidad de fábrica.
El BacT/Alert utiliza 3 determinantes de control de calidad: Control de calidad de las celdas, Calibración de
las celdas y Calibración de la temperatura del equipo.
La opción Control de Calidad de las Celdas es utilizada para asegurar que las celdas del instrumento
están en su óptima capacidad de detección. Este control debe ser parte del mantenimiento normal del
sistema. Un kit estándar de reflectancia es proporcionado con cada instrumento para los procesos de
control de calidad y calibración. Son dos estándares de reflectancia en cada kit, sin embargo, el proceso de
control de calidad solo utiliza el estándar de reflectancia B. El anillo al final de los estándares identifica su
número estándar de reflectancia. Cuando el control de calidad de una celda falla y no es recalibrada, ésta
automáticamente es inactivada.
Generalmente el periodo de control de calidad para cada celda está configurado en 30 días en base al
menú Editar Configuración del Sistema del capítulo Mantenimiento de Funciones del Sistema. Este
control solo se puede realizar en celdas vacías. Al final de que todas las celdas han sido evaluadas, puede
obtenerse por impresión un reporte del estado de las Celdas, luego de lo cual el instrumento retorna
automáticamente al menú Funciones de Mantenimiento del Instrumento.
La opción Calibración de Celdas, es utilizada para recalibrar cualquier celda que haya fallado el control de
calidad. El kit viene con dos estándares de reflectancia. El procedimiento utiliza ambos. El instrumento
automáticamente recalibra la celda una vez se ha introducido el estándar cuando lo indique el instrumento.
Si la calibración de la celda falla, el instrumento automáticamente inactiva la celda. Al final se puede obtener
un reporte del estado del instrumento y la pantalla retorna automáticamente al menú de Funciones de
Mantenimiento del Instrumento.
La opción Calibración de la Temperatura, es utilizada para calibrar la temperatura dentro del instrumento.
Primero se mide la temperatura interna del instrumento utilizando el proceso descrito en Verificación de la
www.monografias.com
Temperatura del capítulo Mantenimiento Preventivo. Solo utilice ésta opción si hay discrepancia entre la
temperatura marcada por el equipo y la temperatura óptima preestablecida.
1) En el Menú principal ir a Otras Funciones BacT/Alert.
2) Mantenimiento del Instrumento.
a1) Control de calidad.
b1) Control de calidad de celdas.
c1) Lista de Celdas
d1) Seleccionar la tecla F9
f1) Introducir los estándares de calibración de celdas siguiendo las
instrucciones de la pantalla.
a2) Calibrar celdas.
b2) Quiere calibrar la celda “x “
c2) Si
d2) Introducir el estándar I en la celda “x”
a3) Calibrar temperatura

b3) Seleccionar y ajustar la temperatura del equipo.
Observaciones y Limitaciones del Test:
1) En cada frasco se debe anotar su número de laboratorio y la casilla asignada.
2) Colocar los frascos hasta el fondo de la celda.
3) No aerear los frascos anaerobios.
4) Todo frasco con frotis negativo, debe ser colocado nuevamente en el aparato.
5) Ciertas variantes de H. influenzae, N. Meningitidis, N. Gonorrhoeae y
P. anaerobius, pueden ser sensibles al anticoagulante ( SPS ) lo que resulta en una falta de
crecimiento o baja producción de CO2.
6) En el caso de cultivo de otros fluidos corporales, se requiere agregar sangre
u otro suplemento al frasco si se intenta recuperar organismos tales como H. influenzae y N.
gonorrhoeae.
7) En contadas ocasiones pueden presentarse BacT/Alert positivos, con frotis y subcultivos
negativos, debido a una excesiva cantidad de glóbulos blancos en la muestra de sangre.
8) Se recomienda quitar del aparato, aquellos frascos considerados positivos por el BacT/Alert,
para evitar cultivos no viables debido a autolisis, especialmente en microorganismos fastidiosos
como el S. pneumoniae.
b) BACTEC 9240 ®:
El sistema Bactec 9240 es utilizado para la detección temprana de microorganismos en hemocultivos por el
método de la fluorescencia.
Cada frasco contiene un sensor que puede detectar aumentos del CO2 producido por el crecimiento de los
microorganismos. Cada 10 minutos el instrumento verifica el aumento de la fluorescencia del sensor, la que
se relaciona con la cantidad de CO2 presente.
Observaciones y limitaciones del test:
1. No utilice frascos con signos evidentes de deterioro.
2. No utilice frascos de cultivo después de la fecha de caducidad.
3. Los frascos inoculados deben ponerse en el instrumento tan pronto como sea posible.
4. Si se ha tardado en colocar un frasco inoculado en el instrumento, y se puede ver crecimiento, el
frasco no debe colocarse en el instrumento, sino subcultivarse y hacer placa por Gram,
considerándolo como un frasco presuntamente positivo.
5. Se recomienda analizar el rendimiento de cada lote de frascos recibidos, utilizando un control positivo
y uno negativo. El frasco positivo debe inocularse con 1.0 ml de una suspensión de E. coli o S.
aureus con un estándar McFarland de 0.5.
El control negativo está constituido por un frasco sin inocular.
6. Dado que la sangre puede neutralizar la acción tóxica del anticoagulante SPS
sobre algunas Neiserias y cocos Grampositivos anaerobios, se recomienda utilizar volúmenes de
sangre no menores a 1.0 ml para facilitar el crecimiento.
7. Ciertos organismos exigentes como el H. influenzae requieren para su crecimiento de elementos que
se encuentran en la sangre como el factor V. Si la muestra de sangre es reducida, es posible que se
requiera agregar éstos suplementos al frasco si se sospecha de éstos microorganismos.
8. Puede darse casos de falso positivo en pacientes con un conteo de leucocitos muy elevado.
c) Sistema Vitek ®:
www.monografias.com
El control de calidad, es un subsistema del Vitek, que examina la seguridad de sus tarjetas. El control de
calidad opera similarmente a la evaluación de exámenes clínicos: El test clínico identifica el organismo, el
examen de control de calidad valida el test.
Realizar control de calidad a toda nueva tarjeta de identificación o de sensibilidad, una vez se ha recibido
en el laboratorio. No se requiere ningún otro control de calidad si todos los resultados están dentro de los
límites esperados. Realizar control de calidad por 5 días consecutivos si se observan resultados fuera de
control.
INTERFERENCIAS:
a) No utilice tarjetas Viek vencidas debido a que pueden causar resultados con lectura errónea.
b) El mantenimiento inapropiado de las cepas control, subcultivos y mal llenado de las tarjetas, puede
resultar en inconsistencias o bipatrones erróneos.
ALMACENAMIENTO DE LAS TARJETAS:
Las tarjetas Vitek deben ser mantenidas a 2 – 5 ºC. Si la temperatura de las tarjetas está comprometida, las
tarjetas deben ser descartadas.
Consideraciones específicas:
1. El programa de control de calidad evalúa el kit del Vitek y los
organismos de control de calidad listados en el paquete.
2. Las tarjetas de control de calidad utilizan 7 dígitos ( formato : 000000-0 ) compuestos de 2 partes:
Los primeros 6 dígitos identifican el tipo de tarjeta y un organismo ATCC.
El séptimo dígito identifica el número de lote y es asignado automáticamente.
3. Cada número predefinido de referencia en el control de calidad significa un tipo
de test y un organismo. Un número de referencia de control de calidad es más
que un número de identificación de tarjeta. Cada uno de éstos números significa
la paridad de un tipo de tarjeta con un organismo. Así por ejemplo el número de
referencia 900101 corresponde al Proteus mirabilis ( ATCC 7002 ) y el 900102
a la Ps. aeruginosa ( ATCC 27853 ).
4. Un campo para control de calidad demográfico está accesible para la información del lote de la
tarjeta.
5. El control de calidad provee su propio set especial de reporte.
6. El flujo de operación del control de calidad es idéntico al flujo de una muestra clínica.
7. Los resultados de control de calidad se transfieren de la incubadora/lector a la base de datos, si la
opción de transferir la tarjeta finalizada está activa.
8. Todos los resultados se mueven a través del manejador de desviaciones del control de calidad, el
cual compara los resultados actuales con los conocidos.
9. El programa de control de calidad Vitek permite ver los resultados del control en pantalla., los
cuales aparecen en 3 diferentes formatos: Resultado de la identificación, resultado de la sensibilidad
a los antibióticos y resultado de la identificación de urocultivos. La pantalla nos indica :
 La identificación del organismo esperado ( ATCC ).
 Resultado de la identificación actual.
 Lote de la tarjeta.
 Fecha del test.
 Fecha de expiración de la tarjeta.
 Reacciones bioquímicas esperadas y de la prueba actual. Cada uno de los test
bioquímicos son señalados tanto en lo esperado como en el resultado actual, y se
genera una lista de los test que se han desviado del resultado esperado.
 Igual patrón al anterior muestra la tarjeta de sensibilidad a los antibióticos.
 Todos los resultados de control de calidad pueden ser impresos guardar en un libro
récord.
10. La base de datos de los equipos de identificación computarizados, deben ser frecuentemente
revisados para actualizarlo en lo referente a los cambios taxonómicos que ocurran. Igualmente se
debe prestar atención a la información proveniente de la casa manufacturera acerca del producto y
las investigaciones que con el equipo aparezcan en la literatura especializada.
11. Los informes de control de calidad y reporte de desviaciones, son mantenidos en el Libro de control
de calidad del Vitek.
12. El sistema Vitek también cuenta con un programa que ayuda a evaluar los resultados, minimizando
los errores de interpretación. Se trata del bioMérieux Vitek Expert System. Los sistemas expertos
se basa en marcadores fenotípicos y el uso de categorías de susceptibilidad ya definidas, que
interpretan los resultados basados en criterios locales y mundiales. El sistema experto trabaja con
www.monografias.com
una selección determinada de antibióticos e implica la alimentación de bases de datos donde los
géneros y especies bacterianas se agrupan en fenotipos caracterizados por un perfil global de
susceptibilidad producto de mecanismos intrínsecos y extrínsecos de resistencia a través de los
cuales se optimiza la identificación y el informe microbiológico. Estas bases de datos se construyen
amparadas en un extenso conocimiento de las distribuciones de las
concentración inhibitorias mínimas (CIM) a numerosos antibióticos y los
fenotipos caracterizados dentro de cada especie bacteriana. Cuando un perfil
fenotípico se valida se está comparando ese perfil específico contra los perfiles
de las bases de datos, permitiendo deducir resultados de los fenotipos observados, corregir resultados y
finalmente, realizar recomendaciones sobre las bases de un consenso general y de acuerdo con los
parámetros internacionales que se adopten. El sistema experto ayuda a realizar un control de calidad
de los resultados de laboratorio pues encuentra resultados inusuales y plantea, mediante alarmas, las
correcciones o verificaciones oportunas. El programa puede detectar:
 Identificaciones que son inconsistente con los resultados de sensibilidad.
 Errores técnicos
 Fenotipos raros o improbables.
 Expresiones de resistencia incompleta.
 Resistencia cruzada.
13. El sistema también permite la adición de reglas ( CAR ) en la que se establecen parámetros que
debe cumplir el reporte antes de su impresión.
14. El nuevo sistema informático COPERNICO, permite integrar los equipos Vitek, BacT/ALERT y mini
API, para transformar la data analítica en valores clínicamente útiles. El Programa trata de superar
las limitaciones del Sistema Informático del laboratorio ( LIS ) en el campo de la microbiología.
i ) Cepas ATCC recomendadas para control de calidad de tarjetas de identificación y sensibilidad
con métodos automatizados :
BioMerieux Vitek® Tarjeta para identificación de Gram Negativos (GNI) QC Set
Acinetobacter baumannii ATCC® 19606
Bordetella bronchiseptica ATCC® 10580
Klebsiella pneumoniae ATCC® 13883
Proteus mirabilis ATCC® 7002
Serratia odorifera ATCC® 33077
Yersinia kristensenii ATCC® 33639
BioMerieux Vitek® Tarjeta para identificación de Gram Positivos (GPI) QC Set
Enterococcus durans ATCC® 6056
Erysipelothrix rhusiopathiae ATCC® 19414
Staphylococcus xylosus ATCC® 29971
Streptococcus bovis ATCC® 9809
Streptococcus equi ATCC® 9528
Streptococcus pyogenes ATCC® 19615
BioMerieux Vitek® Tarjetas para sensibilidad de Gram Negativos (GNS) QC Set
BioMerieux Vitek® Tarjetas para sensibilidad de Gram Positivos (GPS) QC Set
Staphylococcus aureus ATCC® 29213201-126
BioMerieux Vitek® Levaduras (YBC) QC Set
Cryptococcus humicolus ATCC® 9949
Candida albicans ATCC® 14053
Cryptococcus albidus ATCC® 34140
Yarrowia lipolytica ATCC® 9773
d) Sistema Bactec MGIT 960 ® :
www.monografias.com
El sistema Bactec MGIT 960 es utilizado para la detección temprana de micobacterias en especimenes
clínicos. El control de calidad del instrumento es automático y está activo continuamente para asegurar la
operación confiable del sistema.
El reporte de control de calidad suministra una lista del estado de todos los detectores del instrumento con
la fecha y hora de la última verificación, e incluso la lista de las celdas bloqueadas, temperatura de cada
incubadora, estado de los sensores, etc.
Control diario del Equipo:
c) Verificar la operación de las gavetas/incubadoras y las lámparas indicadoras de estación.
d) Realizar test de las luces LED indicadoras ( Verde y Roja ).
e) Chequear el termómetro apretando el botón de test.
Cada vez que se recibe un lote nuevo de tubos MGIT , se sugiere control de
calidad de cepas ATCC en caldo Middlebrook 7H9.
Control de Calidad Negativo:

f) Utilice un frasco MGIT con solución descontaminante MycoPrep kit y PANTA ( Mezcla
antimicrobiana ). colóquelo en la incubadora/detector.
g) Colocar un frasco de MGIT sin muestra y sin descontaminante y colóquelo en la
incubadora/detector.
h) Inocule una suspensión de E. coli dentro de un tubo MGIT y colóquelo dentro de la
incubadora/detector.
Control de Calidad Positivo:
a. Inocule un frasco de MGIT con una cepa control doméstica de Mycobacterium tuberculosis
o una cepa control de M. Tuberculosis ATCC 25177 o M. Intracellulare ATCC 13950 y
colóquelo en la incubadora.
b. Es importante comprobar que el agua, reactivos de tinción, suplementos, etc, están libres
de contaminación por micobacterias ambientales especialmente M. Gordonae y M.
Terrae.
Control de calidad en mycobacteriología

El programa de aseguramiento de la calidad en Mycobacteriología, consta de tres componentes:
confirmación diagnóstica, rondas de evaluación externa del desempeño e inspecciones de calidad.
La confirmación diagnóstica y las rondas de evaluación externas del desempeño evalúan al personal que
realiza y tiñe los frotis y al microscopista que reporta los resultados. Esto constituye la piedra angular de la
Red de laboratorios contra la tuberculosis. La primera modalidad permite conocer los resultados del trabajo
diario del laboratorio; la segunda modalidad evalúa al microscopista que reporta y aporta información sobre
el desempeño de toda la Red. En éste sentido, el control de calidad se inicia con una adecuada muestra, y
el resto del trabajo a realizar depende directamente de ésta etapa inicial.
Las inspecciones de calidad permiten conocer el entorno en el que se desenvuelve el microbiólogo, el cual
influye directamente en la calidad del trabajo efectuado. Por lo tanto, los tres componentes de este
programa son complementarios y conjuntamente brindan una visión integral de la calidad del laboratorio en
el diagnóstico de la tuberculosis.
Los indicadores de calidad son los porcentajes de falsos positivos y negativos de donde se deriva la
sensibilidad y especificidad, el valor predictivo positivo y negativo y la concordancia. Recomendamos el
seguimiento del protocolo de trabajo de la Red Nacional.
Por otro lado, los nuevos métodos de amplificación del ADN para detectar m. tuberculosis, se han
incrementado como un arma más del laboratorio en su diagnóstico. Sin embargo, la sensibilidad y
especificidad de éstas pruebas ha sido cuestionada, como la falta de reactivos estándar para su control de
calidad, por lo que se recomienda tomar las medidas de control requeridas.
www.monografias.com
Control de calidad en micología

El Control de calidad en micología a tomado gran impulso gracias entre otras cosas, por el interés de las
empresa productoras de materiales de laboratorio, por incursionar en un campo aún en desarrollo. Asi como
ejemplo, las siguientes marcas realizan esfuerzos en métodos para antifungigramas :
 Sensititree ( Izasa )
 Fungitest ( BioRad )
 ATB-Fungus ( Biomerieux )
 Candifast ( Oxoid )
 E-Test
Algunas cepas control ATCC para micología son :
 C. albicans ATCC 14053
 C. tropicales ATCC 66029
 C. parapsilosis ATCC 22019
 C. krusei ATCC 6258
 Aspergillus Níger ATCC 10428
 C. glabrata DMS 70614
 Mucor racemosus ATCC 42647
 Penicilium commune ATCC 10428
 Saccharomyces cereviseaea ATCC 9763
 Geotrichum candidum DMS 1240
 Microsporum gallinae ATCC 12108
a) Control de calidad de tinciones en micología :
a) Tinta China
Cryptococcus albidus : Presencia de cápsula
C. albicans : Negativo por cápsula
b) Hidróxiodo de potasio
Combinar con una muestra de esputo para confirmar que se disuelve
c) Lactofenol – azul de algodón
Penicillium sp : Se observa la pared celular de azul intenso
d) Calcoflúor
Candida albicans : Color azul brillante o verde
Control negativo : KOH mezclado con el blanco del calcoflúor
b) Control de calidad de procedimientos de identificación en micología :
a) Tubos germinales
Candida albicans ATCC 60193 : Control positivo. Tubos germinativos.
Candida tropicales ATCC 66029 : Control negativo. Ausencia de tubos
germinativos
b) Perforación de cabello
Trichophyton mentagrophytes : Control positivo. Perforación del cabello
Trychophiton rubrum : Control negativo. Ausencia de perforación
c) Conversión dimórfica
Histoplasma capsulatum : Crecimiento/conversión a levadura
Sin inóculo : No crecimiento
d) Termotolerancia
Aspergillus fumigatus : Control positivo. Crecimiento a 45-50°C
Aspergillus flavus : Control negativo. Ausencia de crecimiento
c) Control de calidad de pruebas bioquímicas en micología :

a) Levaduras - Asimilación de carbohidratos
MEDIO ORGANISMO RESULTADO ESPERADO
Control ( Libre ) Candida albicans ATCC 10231 No crecimiento

Celobiosa Cryptococcus laurentii ATCC 18803 Crecimiento
Candida krusei ATCC 6258 No crecimiento
www.monografias.com
Galactosa Cryptococcus laurentii ATCC 18803 Crecimiento

Glucosa Cryptococcus laurentii ATCC 18803 Crecimiento
Inositol Cryptococcus laurentii ATCC 18803 Crecimiento
Lactosa Cryptococcus laurentii ATCC 18803 Crecimiento
Maltosa Cryptococcus laurentii ATCC 18803 Crecimiento
Sucrosa Cryptococcus laurentii ATCC 18803 Crecimiento
Trehalosa Cryptococcus laurentii ATCC 18803 Crecimiento
b) Levaduras – Fermentación de carbohidratos
Control ( Libre ) Candida albicans ATCC 10231 Negativo. No gas

Celobiosa Candida lusitaneae ATCC 34449 Positivo. Gas.
Galactosa Candida kefyr ATCC 2512 Positivo. Gas
Cryptococcus laurentii ATCC 18803 Negativo. No gas
Glucosa Candida albicans ATCC 10231 Positivo. Gas
Lactosa Candida kefyr ATCC 2512 Positivo. Gas
Maltosa Candida albicans ATCC 10231 Positivo. Gas
Candida kefyr ATCC 2512 Negativo. No gas
Sucrosa Candida kefyr ATCC 2512 Positivo. Gas
Candida krusei ATCC 6258 Negativo. No gas
Trehalosa Candida tropicales ATCC 13803 Positivo. Gas
d) Control de calidad de medios de cultivo en micología :
Agar extracto de arroz Candida albicans ATCC 10231

Crecimiento. Clamydosporas
Candida krusei ATCC 6258 Crecimiento.
No clamydosporas
Urea de Christensen Cryptococcus neoformans ATCC 66031 Positivo. Rosado
Candida albicans ATCC 60193 Ausencia de color
Agar dermatofitos Trichophyton mentagrophytes ATCC 9533 Crecimiento.
Rojo.
Candida albicans ATCC 10231 Crecimiento escaso
Aspergillus Níger ATCC 16404 Inhibición
Sabouraud dextrosa agar Candida albicans ATCC 10231 Crecimiento
Mycosel Candida albicans ATCC 10231 Crecimiento
e) Control de calidad de pruebas comerciales de identificación en micología :
PRUEBA MICROORGANISMO RESULTADO ESPERADO
Vitek ID-YST® Candida tropicales ATCC 201380 Identificación correcta
www.monografias.com
Candida kefyr ATCC 4135

Candida magnoliae ATCC 201379
Candida membranaefaciens ATCC 201377
Trichosporon mucoide ATCC 201382
API ID 32C® Candida glabrata ATCC 64677 Identificación correcta

Candida guillermondii ATCC 6260
Cryptococcus humicola ATCC 64676
Candida krusei ATCC 6258
BactiCard Candida® Candida albicans ATCC 10231 Identificación correcta

Cryptococcus neoformans ATCC 32045
RapID Yeast Plus System® Candida kegyr ATCC 2512 Identificación correcta
Candida glabrata ATCC 2001
MicroScan Rapid Yeast ID® Candida albicans ATCC 66027 Identificación correcta
Candida tropicalis ATCC 66029
Cryptococcus albidus ATCC 66030
Cryptococcus neoformans ATCC 66031
Candida glabrata ATCC 66032
Cryptococcus unigutulatus ATCC 66033
Control de calidad de fórmulas lácteas y mamaderas

El control de calidad de las fórmulas lácteas y mamaderas se realiza como un servicio al Departamento de
Neonatología del hospital. Básicamente éste control consiste en un recuento bacteriano de bacterias
mesófilas y recuento de bacilos coliformes.
Consideraciones referentes al control de calidad:
c) Mantener control sobre la esterilidad de los platos Petri y las pipetas.
d) Si al calentar los tubos para diluir el agar base o el Red Bile presentaran turbidez, descartar ya que
es signo de contaminación del medio.
e) Es preferible no mezclar por inversión la leche para homogenizar, ya que se puede salpicar la parte
interna de las mamaderas y si hubiera contaminación de la leche, ésta se puede extender a la
mamadera.
f) Servir 1.0 ml de la leche en un frasco con 50 ml de fosfato dipotásico estéril para hacer una dilución
1:100. Traspasar 1.0 ml de la dilución a 2 platos Petri.
g) Traspasar el mamón a un frasco con fosfato dipotásico estéril. Mezclar. Traspasar 1.0 ml de la
dilución a cada uno de 2 platos Petri esteriles.
h) Evitar servir los medios muy calientes al plato Petri con la muestra, ya que se pueden matar los
gérmenes potenciales. Una temperatura de aproximadamente 30-40 °C es apropiada, sin dejar
coagular el agar.
i) Mezclar homogéneamente el agar y la muestra rotando el plato y sin permitir la formación de
coágulos.
j) Incubar a 35ªC por 24 horas. Al final de la incubación se realiza la lectura, en la que si hay colonias
en la fórmula, se deben contar las colonias y multiplicar por 100. En el caso del mamón, las colonias
se multiplican por 50.
k) Las fórmulas lácteas solo pueden guardarse en refrigeración por un máximo de 48 horas antes de
ser procesadas.
l) En condiciones normales la leche y las mamaderas deben ser estériles.
m) Si repetitivamente se observa contaminación de la leche, solicitar a las nutricionistas encargadas de
la supervisión de la preparación de las fórmulas, una muestra de leche en polvo para un cultivo
directo y una muestra de agua, si fuera necesario.
NOTA: Solo como referencia se describen los grados de leche pasteurizada
www.monografias.com
establecidos en Panamá, mediante el decreto # 522 de 1957

Grado A : No debe exceder de 30,000 col/ ml.
Recuento de coliformes no mayor de 10 col/ml.
Grado B: No debe exceder de 50,000 col/ml.
Recuento de coliformes no mayor de 10 col/ml.
NOTA : Recomendamos utilizar este método como base si se requiere hacer control de calidad de
Componentes de Nutrición Enteral, para pacientes incapacitados de recibir sus requerimientos nutricionales
por vía oral.
Ref. Calidad microbiológica de una fórmula entera lista para usar.
Rev. Chil. Infect.Vol.21, No.4, Dic 2004.
Control de calidad del agua destilada

El agua destilada utilizada en la preparación de medios de cultivos y para reconstituir reactivos, debe
tener un control de calidad básico que incluye los parámetros químicos y bacterianos. A continuación se
describe un método cualitativo y muy práctico para su evaluación.
Control de Calidad Químico :
Este control puede ser realizado teniendo en cuenta una gran variedad de parámetros a evaluar, tales como
:
 Ph
 Conductividad
 Olor
 Color aparente
 Turbidez
 Alcalinidad
 Dióxido de carbono
 Dureza
 Iones
 Cationes
 Metales pesados
Sin embargo, dadas las limitaciones para realizar un estudio profundo, recomendamos el siguiente método
sencillo y apropiado para determinar la calidad del agua, aparte de la determinación de su Ph ( 5.0 – 5.5 ).
Reactivos:
a) Solución Acuosa de Nitrato de plata ( NO3Ag )
NO3Ag ......... 5.1 g
Agua destilada ............ 300 ml
b) Acido Nítrico
Método:
Colocar en un vaso químico limpio :
10 ml de agua destilada a examinar
2 gotas de ácido nítrico
1 ml de Solución de NO3Ag
Evaluación:
El agua deberá continuar completamente clara. Si aparece una ligera turbidez
blanquecina, indicará que la calidad es deficiente.
Ref: manual de Técnicas Básicas OPS/OMS N° 439, pag. 58
Control de Calidad Microbiológico del Agua destilada:
1) Agregar 1 ml de agua destilada a examinar, a un tubo de Tioglicolato.
1) Agregar 1 ml de agua destilada a examinar a un plato de agar sangre.
1) Incubar a 35.5 °C por 4 días.
1) Llevar un libro récord del control de calidad del agua.
Control de calidad de la sangre de carnero

Al ser recibida la sangre de carnero, se debe anotar los siguientes datos :
b) Fecha de recibo
www.monografias.com
c) Fecha de colección
d) Fecha de expiración
e) Número de lote
f) Aspecto ( Ej. Si hay evidencia de hemólisis ).
g) Hematocrito
Cada botella de sangre de carnero, debe ser evaluada por esterilidad. Para ello recomendamos utilizar
botellas de hemocultivos del Sistema Bactec o el BacT/Alert.
a) Identificar la botella con el número del lote de la sangre
b) Con una jeringuilla obtener 2.5 ml de la botella o bolsa con sangre de manera
aséptica y colocarla en la botella de hemocultivo.
c) Colocarla en el sistema automatizado inmediatamente.
La botella o bolsa origina de sangre ha de ser colocada en refrigeración de inmediato.
Después de su uso durante la preparación del medio, una pocas gotas de sangre son colocadas en un plato
de agar sangre e incubadas por 48 horas a 35ºC , para determinar contaminación durante la manipulación.
Los resultados de control de calidad de cada lote de sangre son guardados para llevar control de la calidad
de sangre proporcionada por el proveedor.
A- EL CEPARIO :
Los sistemas de Validación son los procesos que se requieren para asegurar que los parámetros de
funcionamiento de los test, tanto comerciales como los de uso domésticos, son los esperados y las
pruebas pueden ser utilizadas como métodos de diagnóstico en el laboratorio. La mayoría de los
procedimientos en Microbiología Clínica, dependen de que los microorganismos viables en el cultivo sean
capaces de mantener sus características morfológicas , fisiológicas y que sean típicas y reproducibles. Para
ayudar en este control, las Cepas Estándar de Control de Calidad, son un componente esencial de un
proceso de validación.
Existen varias colecciones de cepas utilizables para el control de calidad. Algunos ejemplos son:
ATCC : American Type Culture Collection- Rockville, USA

NCIC : National Collection of Industrial Bacteria- Survey, Inglaterra
JFCC: Japanese Federation of Culture Collection of Microorganism- Japón
CCTM : Colección Nacional – Lille, Francia
RIA: USSR Reseach Institute for Antibiotics- Moscú, Rusia.
NCIB : Colección Nacional industrial – Aberdeen, Escocia
DSM : Deutsche Sammlung von Mikroorganismen – Gottinger, Alemania.
Así, la E. coli ATCC 25922 es igual a la DSM 1103 y a la NCIB 12210.

Los organismos que han de ser utilizados en el control de equipos o sistemas de identificación,
generalmente son estipulados por los fabricantes o bien escogidos por el
usuario. Generalmente se utilizan cepas de referencia como las ATCC y si son cepas domésticas, es
necesario tener un historial del organismo que incluye nombre, área de aislamiento, reacciones bioquímicas
y patrón de sensibilidad a los antibióticos, forma de almacenaje, fecha de último transplante, etc
En todo caso, las cepas de referencia deben tener requisitos específicos:
 Características típicas.
 Características estables.
 Reproducibilidad
1. Métodos de Conservación de Cepas Bacterianas:
Los métodos de conservación de las cepas estándar de control de calidad, deben asegurar que las
mismas mantengan sus características típicas y que puedan ser reproducidas después. El medio utilizado
para su conservación debe mantener un mínimo de mutaciones. Estas mutaciones pueden evitarse
permitiendo también el mínimo crecimiento del microorganismo y aportando óptimas condiciones
ambientales para su sobrevivencia, con el menor número de subcultivos
Para una mejor clasificación de los métodos de conservación de cepas, los dividiremos en tres
categorías: Cultivos Stock, Semistock y Cultivos de Trabajo.
a) Cultivos Stock:
Estos representan el verdadero “ Banco de Cultivos” . Estos son mantenidos en un sistema cerrado de
conservación, minimizando su actividad genética y fisiológica,
para evitar su potencial mutación. Los dos más importantes métodos para conservación en Stock, son la
Liofilización y el Ultracongelamiento.
www.monografias.com
LIOFILIZACION: Se hace una suspensión fuerte de un cultivo puro y joven en leche estéril o similar, y se
coloca en tubos con rosca y se siguen las instrucciones del aparato liofilizador, que puede ser tan sencillo
como un simple bomba de vacío, hasta un sofisticado sistema. Durante este proceso evitar que el cultivo
se derrame dentro el aparato liofilizador y la formación de aerosoles
Este sistema tiene la ventaja de ser el que permite la sobrevivencia por un mayor periodo de tiempo y
mayores facilidades para el transporte de las cepas.
ULTRACONGELAMIETO: Hacer una suspensión fuerte de la colonia pura en caldo Brucella conteniendo
15% de glicerol o sustituto. Dispensar en pociones de 0.5 ml en pequeños tubos con rosca y coloque en lo
profundo del congelador a -45°C..
También se puede utilizar la modificación de Ultracongelamiento en Nitrógeno líquido, que consiste en
colocar en una ampolla especial dentro de un aparato específicamente designado para el mantenimiento
de cepas en nitrógeno líquido.
Ambos sistemas preservan las bacterias por largos periodos de tiempo.
b) Cultivos Semistock:
Este término se refiere al mantenimiento de cultivos por un periodo intermedio entre el relativamente
permanente cultivo en Stock y el cultivo de cepas control para el trabajo diario. De las 5 técnicas listadas a
continuación, solo la de congelamiento es utilizable para el mantenimiento de cepas de anaerobios.
b1) Congelamiento en congelador convencional :
Los congeladores convencionales pueden mantener una temperatura entre
-10 a –25°C. Los cultivos se preparan de la misma manera como en el caso de la
ultracongelación y son colocados en el congelador. El método permite la sobrevivencia de
bacterias y levaduras en algunos casos por años y en la mayoría de las veces por al menos de
6 a 12 meses.
b2) Cultivo en CTA:
Se preparan tubos con rosca conteniendo Cisteína- Tripticasa y Soya agar.
Inocular el cultivo puro y joven e incube por 18 a 24 horas para obtener un crecimiento
moderado, afloje la tapa y mantenga a temperatura ambiente o preferiblemente en refrigeración,
si es posible en la oscuridad. Microorganismos menos delicados sobreviven bien por un año y
los fastidiosos por 6 meses.
b3) Secado en discos con gelatina:
Este método es conocido también como método Stamp en honor de su creador. Corte
pequeños círculos de papel encerado y colóquelo en un plato Petri de vidrio. Esterilice en
autoclave por 15 minutos a 15 libras de presión.
Prepare una suspensión de caldo nutriente con 10% de gelatina en polvo
( Peso por Volumen ) y 0.25% de ácido ascórbico ( P x V ) y dispense en
tubos con rosca y esterilice en autoclave.
Haga una suspensión fuerte de un cultivo puro y joven y coloque una gota del
mismo con una pipeta estéril sobre uno de los discos de papel acerado
estéril en un plato Petri. Con una pinza estéril, transfiera el disco a un
desecador de vacío conteniendo Pentaóxido de fósforo. Evacue el desecador
con la bomba de vacío. Cuando el disco está seco, asépticamente introducir
en un tubo estéril con tapa de rosca y colocar en el refrigerador.
Para hacer un subcultivo del disco, asépticamente retire un círculo de papel
con las colonias y colocarlo en un tubo conteniendo un caldo de cultivo e
incubar por 24 horas a 35C y luego hacer transplante a agar sangre e incubar
nuevamente.
b4) Conservación en medio de cultivo inclinado con aceite mineral:
Es un método especialmente utilizado para hongos, pero es útil también para algunas bacterias.
En el caso de los hongos, se utiliza un cultivo joven y bien esporulado en un medio de cultivo
inclinado, tal como agar de Sabouraud-dextrosa. Cubrir completamente con aceite mineral
estéril. El aceite debe ser esterilizado a 15 libras de presión por 45 minutos, para asegurar su
esterilidad absoluta.
Para reactivar la cepa, colocar la boca del tubo cerca de la llama de un mechero o incinerador y
remueva una porción visible de crecimiento con una asa estéril larga o una aguja.
Este método permite la sobrevivencia por muchos años.
Si el método se va a utilizar para conservar bacterias, se utiliza Agar de Cerebro-Corazón o
agar Mueller-Hinton suplementados con hemoglobina al 2% e Isovitalex al 1%. Los medios se
sirven en tubos con rosca. Se esterilizan y luego se les hace coagular en forma inclinada.
www.monografias.com
Las bacterias son inoculadas en el medio e incubadas a 35°C por 24 horas, tomando en cuenta
sus requerimientos de oxígeno. Luego las cepas son cubiertas con aceite mineral estéril, hasta
1 cm por encima del final del inclinado. Los cultivos son viables por 2 años a temperatura
ambiente.
b5) Mantenimiento en tierra estéril:
Es utilizado primeramente para hongos y bacterias esporuladas.
Esterilice en autoclave tierra suelta en tubos con rosca a 15 libras de presión por 1 hora. Haga
una suspensión fuerte del microorganismo joven y esporulado y colóquelo en el tubo con tierra
estéril. Deje secar y colocarlo en un refrigerador.
b6) Cultivos de trabajo diario:
Los cultivos control para el trabajo diario, son una forma conveniente para realizar el control de
calidad de pruebas de uso frecuente y que requieren una lectura comparativa al momento de su
lectura. Tal es el caso de las pruebas de coagulasa y oxidasa, entre otras. Para éste propósito se
utilizan cultivos de 24 horas y son transplantados diariamente.
 Bacterias resistentes:
Tal es el caso de Estafilococos y Enterobacteriaceas. Se transfiere una colonia joven de un
cultivo en Stock o semistock y se transfiere a un tubo con agar nutritivo inclinado e incubar por
un mínimo de tiempo tal que haya crecimiento. Guardar en refrigerador. Los cultivos para
trabajo diario, son transferidos a otros tubos de agar inclinado cada mes por un intervalo de 6
meses. Después de éste tiempo, se debe volver a hacer otro pase del cultivo stock.
 Bacterias delicadas :
Los cultivos de trabajo diario de organismos delicados como
N. meningitidis, N. gonorrhoeae, S. pneumoniae y algunos menos delicados como el S.
pyogenes, son preparados a partir del stock e incubados por 24 horas en medios apropiados
como agar chocolate en ambiente de CO2 , para luego ser colocados en refrigeración.
Después de una serie de 6 transplantes consecutivos, se debe preparar otro cultivo para uso
diario a partir de la cepa en stock.
 Bacterias anaeróbicas:
Los cultivos para trabajo diario de la mayoría de las bacterias anaeróbicas, pueden ser
mantenidos en medio de carne cocida o en Tioglicolato con
0.5% de carbonato de sodio adicionado después de esterilizar por autoclave.
Los cultivos se incuban por 24 a 48 horas y guardados a temperatura ambiente.
 Hongos:
Los cultivos de uso diario de hongos, son mantenidos en tubos con agar Sabouraud o sustituto..
Los cultivos se incuban a temperatura ambiente hasta que haya crecimiento, y ocurra la
esporulación, para luego ser colocados en refrigeración. Los cultivos de trabajo deben ser
transferidos cada 2 meses . Pasado éste tiempo se debe preparar otro cultivo de trabajo a partir
de la cepa en stock.
 Cultivos de trabajo comerciales:
Son preparados por casa comerciales utilizando cepas conocidas como la ATCC.. Estas son
estables en refrigeración por un año. Tal es el caso de Bact-Chek de Roche Diagnostics, Bactrol
Disk de Difco, entre otras.
Para reactivar las cepas se colocan en un caldo nutritivo como el caldo de Tripticasa y Soya e
incubados por 24 horas a 35°C. Luego se hace un transplante a un medio de enriquecimiento o
a agar sangre.
 Almacenamiento de cepas VISA / VRSA :
Si el laboratorio detecta alguna cepa de Estafilococo aureus sospechosa de ser VISA ó VRSA,
se recomienda congelar la cepa a -60 °C / -70°C en medio líquido estándar con 15% de glicerol.
Si no se cuenta con el congelador, se puede colocar una cepa recién sembrada en un tubo
inclinado con tapa de rosca conteniendo medio inclinado de TSA . Incubar a 35°C por 24 horas
y luego apretar la tapa de rosca y mantener el tubo a 2 – 8°C. Repetir el subcultivo y todo el
proceso, para mantener un mínimo de almacenamiento.
2. Mantenimiento del Cepario:
Se debe tener especial cuidado en el mantenimiento del cepario, ya que el mismo constituye
una ayuda importante en la validación de equipos, materiales, reactivos y habilidad del personal.
Debe existir un programa metódico de transplantes de cepas , archivo de cada uno de los cultivos
con sus características bioquímicas, sensibilidad a los antibióticos, origen de la cepa, método de
identificación, fecha de siembra y próximo transplante, etc
www.monografias.com
3. Cepas ATCC:
En nuestro medio por situaciones muy especiales y altamente beneficiosas,
podemos tener acceso a las cepas control del American Type Culture
Collection ( ATCC ) , la colección más grande e importante del mundo. Estas
cepas bacterianas pueden ser utilizadas como control en una gran variedad de
utilidades, lo cual nos permite conocer el grado de confiabilidad de los productos
comerciales o elaborados en el laboratorio.
A continuación algunas referencias de las cepas ATCC:
Microorganismo ATCC Medio Característica
E. coli 25922 McConkey Colonia rosada

S. typhimurium 14020 McConkey Colonia incolora
P. mirabilis 12453 McConkey Colonia incolora
E. faecalis 29212 McConkey No crece
St. pyogenes 19615 Agar sangre ß-hemólisis
St. pneumoniae 6305 Agar sangre alfa-hemólisis

S. epidermidis 12228 Agar sangre no hemolítico
Candida albicans 60193 Agar sangre no hemolítica
Candida albicans 60193 Tubos germinales Positivo

Candida tropicalis 66029 Tubos germinales Negativo
S. aureus 25922 Manitol sal Colonia amarilla

S. epidermidis 12228 Manitol sal Colonia incolora
P. mirabilis 12453 Manitol sal No crece
M. tuberculosis (TBC) 2577 Low-Jensen Crece. Incoloro

M. kansazsi ( I ) 12478 Low-Jensen Crece. Amarillo + luz
M. scrofulaceum (II ) 19981 Low-Jensen Crece. Amarillo – luz
M. intracellulare ( III ) 13950 Low-Jensen Crece. Incoloro
M. fortuitum ( IV ) 6841 Low- Jensen Crece. < 7 días.
E. coli 25922 Low-Jensen No crece
LISTADO DE CEPAS ATCC SUGERIDAS PARA CONTROL DE CALIDAD

MICROORGANISMO ATCC
Campylobacter jejuni .............................................. 33290
Enterococcus faecalis ............................................... 29212
Escherichia coli......................................................... 25922
Escherichia coli ........................................................ 35218
Proteus vulgaris ....................................................... 8482
Pseudomona aeruginosa .......................................... 27853
Salmonella typhimurium ........................................ 14028
MICROORGANISMO ATCC
Shigella sonnei ........................................................ 9290
Shigella sonnei ........................................................ 25911
Shigella flexnerii ..................................................... 12022
Enterobacter aerogenes ........................................... 13048
Staphylococcus aureus ............................................ 25923
Staphylococcus aureus ............................................ 29213
Staphylococcus epidermidis .................................... 12228
Steptococcus pyogenes ............................................ 19615
Streptococcus pneumoniae ....................................... 6305
www.monografias.com
Streptococcus pneumoniae ....................................... 49619

Streptococcus faecalis ............................................... 19433
Haemophilus influenzae ............................................ 49247
Haemophilus influenzae ............................................ 49766
Neisseria gonorrhoeae ............................................... 49226
Escherichia coli 0157:H7 .......................................... 43894
Bacteroides fragilis .................................................... 23745
Clostridium perfringes ............................................... 3624
Clostridium sporogenes ........................................... 19404
Clostridium tertium ................................................... 19405
Clostridium novyi A .................................................19402
Fusobacterium necrophorum ......................................25286
Fusobacterium nucleatum ..........................................25586
4. Transporte de cepas bacterianas:

La mayoría de las naciones han implementado regulaciones internacionales para el empaque y transporte
de materiales biológicos potencialmente nocivos para el hombre o los animales. Estas reglas intentan
proteger al público de accidentes al tener contacto directo o indirecto con dichos productos. El personal que
prepara éste envío debe ser apropiadamente entrenado en las formas de empaque y en las regulaciones
internacionales que lo rigen.
Solo como una guía enumeraremos algunas regulaciones foráneas:
 U.S Public Health Service, 42 CFR part 72,
Interstate shipments of Etiologic Agents.
 International Air Transport Association.
Dangerous Goods Regulations.
 Unites Nations
Recommendations of the Committee of Experts on the Transportation of Dangerous
Goods.
 U.S Department of Labor, Occupational Safety and Health Administration, 29 CFR
Part 1910.1030, Bloodborne Pathogens.
Generalmente el transporte de agentes etiológicos requiere un doble o triple empaque, dependiendo de las
regulaciones del país de destino. Si la cepa está contenida en un tubo de vidrio, se recomienda que sea
pequeño y de vidrio grueso. Este a su vez debe estar inmerso en un envase de metal con material aislante
como el aserrín o foam desmenuzado. A éste envase se le puede adicionar otro que contenga igualmente
aserrín o foam , dependiendo de las regulaciones y por último la caja externa no porosa, con recubrimiento
de cera en su interior y a prueba de derrame. En ésta caja irán las etiquetas , guía aérea, etiquetas de
advertencia, números telefónicos para contactar en caso de emergencia, tanto en el país de origen como en
el de destino. Igualmente se etiquetará con un símbolo de material peligroso de color rojo.
Supervisión del personal

El personal es el factor más importante en la calidad del trabajo en el laboratorio de microbiología. Este
personal debe tener una dedicación y actitud positiva hacia el trabajo, capacidad académica, actualización
constante y contar con los elementos indispensables para su labor.
1. Evaluación del personal:
La competencia del personal de microbiología, debe ser certificada por la revisión de su hoja de trabajo, la
interpretación de muestras desconocidas , su habilidad técnica y exámenes escritos anuales. Se debe
llevar un registro profesional acerca de su evaluación académica, reporte sobre su capacidad de trabajo,
asistencia a programas de educación continuada, responsabilidad, asistencia, trabajos de investigación,
charlas, conferencias y su evaluación profesional anual.
Todo nuevo empleado que se adicione a la plantilla de la sección, debe ser documentado, evaluado y
certificado, incluyendo las fases pre-analíticas, analíticas y post-analíticas de funcionamiento del laboratorio.
2. Programa de docencia:
Un elemento fundamental en el mantenimiento apropiado de la competencia del personal es el programa
de educación continuada. Este programa mantiene al personal informado en los avances en la detección e
identificación de agentes etiológicos, nuevos test, equipos, cambios en la taxonomía bacteriana y la
evaluación correcta de las pruebas de sensibilidad a los antibióticos.
www.monografias.com
Este programa puede incluir charlas, mesas redondas, lecturas de artículos de interés, discusión de casos
clínicos, evaluación de nuevos test o equipos, revisión de la literatura sobre temas específicos, trabajos de
investigación, etc. Se debe llevar un control sobre la participación individual del personal en el programa,
su asistencia y actividad, lo cual formará parte de su evaluación anual.
3. Evaluación del informe final:

El resultado final de la evaluación de un espécimen clínico luego de cumplir con todas las etapas de
investigación, es el informe final que implica una identificación etiológica, si la hubiera, y su correspondiente
sensibilidad a los antibióticos. Para llegar a éste resultado, el laboratorio de microbiología debe haber
agotado todos los elementos diagnósticos de que dispone y hacer un juicio respecto a la posibilidad de que
dicho informe represente el potencial agente infeccioso, tomando en cuenta los factores que están
involucrados tales como el tipo de muestra, microorganismo aislado, edad del paciente, procedencia,
informes previos, frotis directo y el patrón de comportamiento frente a los antibióticos, entre otros.
En todo informe final debe prevalecer el concepto de rapidez y seguridad diagnóstica. Es recomendable y
así está establecido en manuales foráneos, que los resultados sean evaluados antes de su envío por un el
jefe del laboratorio de microbiología o en su defecto por un Supervisor con experiencia y capacidad
demostrada, con el fin de minimizar potenciales errores, omisiones o interpretaciones del informe final,
tomando en cuenta el valor que éste reporte tendrá en la evaluación, tratamiento y la salud del paciente.
Es importante en ésta etapa establecer los “ Valores de Alerta “ en microbiología, los cuales son aquellos
resultados de mayor preponderancia, ya sea por el tipo de microorganismo involucrado o por su significado
en el control de enfermedades de notificación obligatoria.
i) VALORES DE “ ALERTA “ EN MICROBIOLOGIA
* Detección de microorganismos en LCR

* Detección de antígenos de Cryptococcus
* Frotis BAAR positivos
* Cultivo de LCR positivo
* Aislamiento de Shigella dysenteriae
* Aislamiento de E. coli 0157:H7
* Aislamiento de Estafilococos con sensibilidad reducida a la Vancomicina.
* Aislamiento de agentes etiológicos de notificación obligatoria.
* Aislamiento de cepas productoras de betalactamasa de espectro extendido (ESBL).
* Tinta china positiva
* Detección de antígenos en LCR
* Hemocultivos positivos
* Aislamiento de M. tuberculosis multirresistente
* Aislamiento de typhi
* Aislamiento de Neisserias patógenas
* Aislamiento de microorganismos relacionados al bioterrorismo.
Cuando se observen “ Valores de Alerta “ , se debe notificar al jefe de la sección.

4. Control de calidad externo:
Es recomendable que los laboratorios de microbiología puedan participar en programas de evaluación
externa. Estos programas miden la capacidad del laboratorio para evaluar un desconocido y llegar a un
resultado seguro. Los mismos consisten en la identificación de muestras o microorganismos desconocidos
en los cuales se debe informar del resultado de la identificación, pruebas utilizadas para el diagnóstico
etiológico y sensibilidad a los antibióticos.
El Director del laboratorio debe escoger el programa que sea consistente con el nivel de calidad de su
laboratorio. Generalmente estos desconocidos vienen con un abstracto clínico y son recibidos al menos 2
veces al año. Los laboratorios que ofrecen éstos programas invalidan aquellos laboratorios que fallan en
responder el cuestionario, por lo que es necesario mantener un contacto muy especial para no perder éste
beneficio. Los resultados de la evaluación de los desconocidos deben ser discutidos por todo el personal
antes de su informe al laboratorio generador del programa.
Algunos laboratorios que ofrecen programas externos de evaluación de la calidad son :
1) Accutest:
www.monografias.com
POBox 999
Westford, MA 01886-0031
2) American Association of Bioanalysts Proficiency Testing Service
205 West Levee Street
Brownsville, TX 78520-5596
3) American Proficiency Institute
1159 Business Park Drive
Traverse City, MI 49686
4) The College of America Pathologists- Survey
College of American Pathologists
325 Waukegan Road
Northfield, Il 60093-2750
5) Idaho Bureau of Laboratories Proficiency Testing Program
2220 Old Penitenciary Rd.
Boise, ID 83712
6) Medical Laboratory Evaluation (MLE ).
2011 Pensnsylvania Av, NW, Suite 800
Washington, DC 20008-1808
7) New Jersey Department of Health Proficiency Testing Program, CN 360
Trenton, NJ 08625-0360
USA
8) Pacific Biometrics
110 Eastlake Avenue East
Seatle, WA 98109
9) Puerto Rico Department of Health
Laboratory Service Program
Department of Health of Puerto Rico, Bulding A
Call Box 70184
San Juan, Puerto Rico 00936
( Tel. (800)-769-7774 )
10) Universitair Ziekenhuis St. Rafael B-300
Bacteriologie
Leuven – Belgium
Att: Prof. Dr. J. Vandepitte
Prof. J. Verhaegen
Tel. 0032-16-332150
Fax. 0032-16-336321
5. Certificación del laboratorio de microbiología:

Un nuevo concepto en la organización de los laboratorios es la acreditación a Asociaciones especializadas
que promueven la excelencia en la calidad de los servicios de sus miembros. Esta calidad está enfocada no
solo en los aspectos técnicos, sino también en los administrativos, racionalización de recursos, planificación
gerencial, costos de operaciones, calidad de servicio al cliente, es decir, un enfoque de Calidad Total. En
los Estados Unidos éstas acreditaciones están validadas por asociaciones como la American Society for
Microbiology, College of American Pathologists, American Association of Bioanalysts, etc. En Latinoamérica
algunas asociaciones de laboratorios han creado comités de acreditación para laboratorios públicos y
privados.
El enfoque moderno en un mundo en que las distancias se han acortado y los conceptos de globalización
son una realidad, la acreditación proporciona a los miembros la posibilidad de comunicarse mejor con otros
laboratorios del mundo, lo cual permite un intercambio de experiencias en metodologías, compra de
equipos, entrenamiento de personal, etc
Los problemas legales y altos costos de operaciones, han obligado a los grandes laboratorios a encontrar
un modelo aún más complejo de aseguramiento de la calidad, con el fin entre otros, de bajar costos. La
Organización Internacional de Estándares ha desarrollado una guía llamada ISO 9000 que establece un
flujograma de trabajo en los programas de aseguramiento de la calidad y unifica los diferentes actividades
del control de calidad. La categoría apropiada para los laboratorios clínicos en general es el ISO 9002 el
cual comprende 18 elementos de control. Para que un laboratorio pueda ser certificado bajo la norma ISO,
debe cumplir con todos los elementos del estándar.
www.monografias.com
En éstos casos un equipo de Aseguramiento de la Calidad implementa las medidas en cada una de las
área con el fin de que cuando se esté listo, pueda pasar las pruebas a que es sometido todo el sistema por
parte de auditores certificados. La obtención de ésta certificación ISO 9002 , y especialmente la nueva
Norma 15189 , es el máximo galardón a la excelencia en control de calidad en los laboratorios clínicos.
Proformas de reporte del control de calidad
Se adjuntan a continuación las hojas proformas utilizadas para llevar el registro del control de calidad en
microbiología:
LABORATORIO CLINICO
CHMDrAAM,CSS
CONTROL DE TEMPERATURA
CONGELADORES
Mes : Año :
Congelador :
Día T° Firma Comentario Día T° Firma Comentario
1 17
2 18
3 19
4 20
5 21
6 22
7 23
8 24
9 25
10 26
11 27
12 28
13 29
14 30
15 31
16
www.monografias.com
Responsable :
COMPLEJO HOSPITALARIO METROPOLITANO

Dr. ARNULFO ARIAS MADRID, C.S.S
CONTROL DE CALIDAD EN MICROBIOLOGÍA
TEMPERATURA DE INCUBADORAS
AÑO :
MES:
INCUBADORA :
T °C 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31
40.0
39.5
39.0
38.5
38.0
37.5
37.0
36.5
36.0
35.5
35.0
34.5
34.0
33.5
33.0
32.5
32.0
31.5
31.0
OBSERVACIONES :
__________________________________________________________________________________________
www.monografias.com

ntrol de Esterilidad : Aprobado Material : Medios en Plato Petri

ntrol de Eficiencia :
Aprobado Fecha :
ntrol de Eficiencia : No
aprobado Firma del Responsable :
MEDIO 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 15 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30
ar sangre
cConkey
.S agar
Chocolate
yer-Martin
Mueller-
Hinton
AP
bouraud
Mycosel
Reb Bile
gar base
gon agar
difásico
Agar
ampylo.
cSorbitol
L-J
E.M.B

ntrol de Esterilidad : Aprobado Material : Medios en Tubos

ntrol de Eficiencia :
Aprobado Fecha :
www.monografias.com
ntrol de Eficiencia : No
aprobado Firma del Responsable :
MEDIO 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 15 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30
oglicolato
T.S.I
rato Sim.
Urea
nilalanina
Lisina
-Esculina
Selenita
bouraud
BHI
alonato
na 0.85%
ina 6.5%
aldo MH
F Medio
utoclave
Humana
Carnero
CHMDrAAM, CSS
LABORATORIO CLINICO
MICROBIOLOGÍA
CONTROL DEL CEPARIO
NÚMERO DE MICROORGANISMO FECHA FECHA CEPA TIPO DE OBSERVACIONES

CEPA INGRESO TRANSPLANTE ATCC MUESTRA
www.monografias.com
CHMDrAAM, CSS
LABORATORIO CLINICO
MICROBIOLOGÍA
CONTROL DE CALIDAD DE SANGRE DE CARNERO
PROVEEDOR NUMERO FECHA FECHA FECHA VOLUMEN ASPECTO HEMATOCRITO ESTERILIDAD

LOTE RECIBIDO VENCIMIENTO USO %
www.monografias.com

CONTROL DE TEMPERATURA DE REFRIGERADORAS
Año : Mes :
Refrigeradora :
Día T °C Firma Desviación Día T °C Firma Desviación
1 17
2 18
3 19
4 20
5 21
6 22
7 23
8 24
9 25
10 26
11 27
12 28
13 29
14 30
15 31
16
Comentarios :
Responsable :
www.monografias.com
CHMDrAAM,CSS
CONTROL DE CALIDAD
FORMATO DE AUDITORIA INTERNA
SECCIÓN:
FECHA :
AUDITADO POR :
AREA SUPERVISADA
DOCUMENTACIÓN
Libros de reporte
Libros de trabajo diario
Reportes de control de calidad
Reporte de control de equipos
Manuales
Número de pruebas al mes
BIOSEGURIDAD
Procedimientos seguros
Vestimenta
Equipo de protección
Descarte de desechos peligrosos
TECNICAS DE TRABAJO
Habilidad
Procedimientos validados
PERSONAL
Número de técnicos
Turnos
www.monografias.com
Observaciones :
LABORATORIO CLÍNICO, CHMDrAAM,CSS
REPORTE DE CONTROL DE CALIDAD DE MEDIOS DE CULTIVO, SANGRE Y SUPLEMENTOS
REPORTE DE NO CONFORMIDAD
PRODUCTO :
a) Medios de cultivo en plato
b) Medios de cultivo e identificación en tubo
c) Medios líquidos
d) Sangre de carnero
e) Sangre humana
f) Suplementos
g) Autoclave
h) Otros
Fecha de producción :
Fecha de reporte de control de calidad :
Reporte de control de calidad :
----------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------- -------------------
------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------
----------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------- -------------------
------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------
----------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------- -------------------
--------
Firma :
Glosario de términos
a) GLOSARIO DE TERMINOS DE CALIDAD :
1. Administración de la Calidad
Aspecto de la función general de la gestión que determina y aplica la Política de la Calidad.
2. Aseguramiento de la Calidad
Conjunto de acciones planificadas y sistemáticas que son necesarias para proporcionar la confianza
adecuada de que un producto satisfará los requisitos de calidad esperados.
3. Auditoría de calidad
Examen metódico e independiente que se realiza para determinar si las actividades y los resultados
relativos a la calidad satisfacen las disposiciones previamente establecidas, y para comprobar que estas
disposiciones se llevan realmente a cabo y que son adecuadas para alcanzar los objetivos previstos.
4. Calibración
Conjunto de operaciones encaminadas a determinar el valor del error de medida de un instrumento de
medida.
5. Calidad
Conjunto de propiedades y características de un producto o servicio que le confieren su aptitud para
satisfacer unas necesidades expresadas o implícitas.
6. Especificación
Documento que establece los requisitos con los que un producto debe estar conforme.
7. Incertidumbre
Valor del intervalo, dentro del cual se encuentra con alta probabilidad el valor real de la magnitud medida.
8. Inspección
www.monografias.com
Acción de medir, examinar, ensayar o verificar una o varias características de un producto y de compararlas
con los requisitos especificados, con el fin de establecer su conformidad.
9. Instrucciones de trabajo
Describen las operaciones que hay que realizar en cada proceso o en cada puesto de trabajo. Es un
conjunto muy amplio de documentos que debe ser revisado cada vez que se modifica un proceso o un
método de trabajo.
10. Instrumento de Medida
Equipo empleado para indicar la magnitud que se quiere controlar.
11. Manual de calidad
El manual de Calidad es un documento que, debidamente autorizado, formaliza la Política de la empresa
relativa a la Administración de la Calidad, definiendo las normas y los procedimientos operativos de
referencia, los objetivos de calidad, el sistema de responsabilidad y las normas internas. Se trata de una
recopilación estructurada de todas las normas, los criterios, las instrucciones y las recomendaciones que
aseguran la calidad del bien o servicio, teniendo como fin los objetivos fijados por la Dirección.
12. No conformidad
Falta de cumplimiento de los requisitos especificados.
13. Periodo de calibración
Es el plazo de tiempo definido para un equipo, durante el cual el instrumento se encuentra en estado de
uso.
14. Política de Calidad
Directrices y objetivos generales de una empresa, relativos a la calidad, expresados formalmente por la
Dirección General.
15. Procedimiento
Forma específica de llevar a cabo una actividad.
16. Reclamación
Queja oral o escrita relativa a problemas de Calidad, realizada por un Cliente en base a una No
Conformidad detectada.
17. Registros
Documento que proporciona evidencia objetiva de actividades realizadas o de resultados obtenidos.
18. Revisión del Sistema de Calidad
Evaluación formal, realizada por la Dirección, del estado en que se encuentra el Sistema de Calidad y de su
adecuación a lo que establece la Política de Calidad y a los nuevos objetivos que se deriven de la evolución
de circunstancias cambiantes.
19. Sistema de Calidad
Conjunto de la estructura de organización, de responsabilidades, de procedimientos, de procesos y de
recursos que se establecen para llevar a cabo la Administración de la Calidad.
20. Trazabilidad
Capacidad para reconstruir el historial de la utilización o la localización de un artículo o de una actividad,
mediante una identificación registrada.
b) GLOSARIO DE TERMINOS ESTADISTICOS:
1. Azar: Condición de desorden sin predicción de los resultados individuales.
2. Coeficiente de Confianza: Oportunidad que tiene un intervalo de confianza de ser incluido en el valor
universal.
3. Desviación Promedio: Es la desviación dividida por el número de determinaciones. Es un método que
permite determinar la magnitud de la desviación estándar cuando se corren muchas pruebas.
4. Desviación Estándar: Raíz cuadrada del promedio de las desviaciones al cuadrado de una media
aritmética.
5. Distribución de Frecuencia: Agrupa los valores de una variable en orden de tamaño.
6. Distribución Normal: Distribución de datos en una frecuencia de tabulación que semeja una curva de
campana.
7. Duplicados: Unidad o espécimen que se ha producido bajo las mismas condiciones.
8. Exactitud: Desviación de un valor estimado, del valor real.
9. Especificidad : Confirmación que un determinado procedimiento ha sido repetidamente verificado,
habiéndose obtenido los resultados esperados.
Especificidad = Verdaderos (-) / ( Falsos(+) + Verdaderos (-) ) X 100
10. Error Experimental: Desviación del valor esperado, debido a las limitaciones de la metodología o de la
producción.
www.monografias.com
11. Error Relativo: Error medio en una serie de pruebas, que representan un porcentaje del valor
verdadero.
12. Error Estándar: Error alrededor de la media de una serie de pruebas.
13. Error medio: Diferencia entre el resultado verdadero y la media obtenida.
14. Error mayor ( error mayor ) : Cuando por un método o sistema a evaluar se informa un resultado que
al compararse con un método de referencia resulta ser completamente distinto.
15. Factor de Corrección: Es una constante aplicada a valores observados en muestreos pequeños, con
el fin de obtener un mejor ajuste de datos a la distribución teórica chi cuadrado ( xª ).
16. Factores Fijos: Factores, variables o efectos que son constantes o iguales para todas las muestras.
17. Grado de Libertad: Es el número de diferencias independientes o variaciones posibles en las
observaciones individuales. Si solo hay una observación, entonces hay un grado 0 de libertad, ya que
no hay otra observación para comparar.
18. Histograma: Diagrama de barras que representan la frecuencia de distribución.
19. Homocentesis: Distribución uniforme a ambos lados de la media.
20. Interacción: Tendencia a la combinación de dos variables de manera que el resultado difiere de la
suma de sus actividades independientes.
21. Límite de Confianza: Límite alto y bajo de un intervalo de confianza.
22. Muestra: Grupo de datos o elementos utilizados en el estudio.
23. Mediana: Línea de igualdad que divide la distribución en igual número de casos por encima o por
debajo de la línea.
24. Media Aritmética: Suma de una serie de pruebas dividido por el número total.
25. Modo: Tipo de dato que tiene la mayor frecuencia, lo que indica el punto central de la tendencia.
26. Parámetro: Constante de un universo que describe una característica individual.
27. Prevalencia : Frecuencia con que está presente una enfermedad en una población.
28. Probabilidad: Frecuencia relativa al azar. Varía del cero al uno.
29. Precisión: Exactitud en las determinaciones repetidas de una prueba. A menor desviación estándar,
mayor precisión. Es sinónimo de reproducibilidad.
30. Punto Fuera ( Outlier ): Valor ubicado en una posición extrema, fuera de los límites aceptables.
31. Rata : Total de casos positivos / Casos totales
32. Reproducibilidad: habilidad para repetir el mismo resultado en diferentes ocasiones.
33. Rango: Es la medida más sencilla de la variabilidad general que describe la diferencia entre el valor
máximo y el mínimo.
34. Sensibilidad : Es la probabilidad que a un individuo enfermo, le dé la prueba positiva.
Sensibilidad = Verdaderos (+) / ( Verdaderos (+) + Falsos (-) ) X 100
35. Significativo: Resultados de la prueba que se salen de los límites de confianza.
36. Universo: La totalidad de los elementos del cual se toman las muestras para su tabulación.
37. Variabilidad: Es el cuadrado de la desviación estándar.
38. Valor predictivo positivo : Es la probabilidad que un resultado positivo indique con seguridad la
presencia de una enfermedad.
VPP = Verdaderos (+) / ( Verdaderos (+) + Falsos positivos ) X 100
39. Valor predictivo negativo : Es la probabilidad de que los que tengan la prueba negativa, no tengan la
enfermedad.
VPN = Verdaderos negativos / ( Falsos (-) + Verdaderos (-) ) X 100
Bibliografía de referencia
1. Current Concepts and Approaches to Antimicrobial Agent Susceptibility
Testing. Cumitech # 25
Cumulative Techniques and Procedures in Clinical Microbiology.
John McGowan – Coordinating Editor
A.S.M Press, American Society for Microbiology,
Washington DC
2. New Developments in Antimicrobial Agent Susceptibility Testing: A
Practical Guide. Cumitech # 6ª.
John McGowen – Coordinating Editor
Washington DC.
www.monografias.com
4. Verification an d Validation of Procedures in the Clinical Microbiology

Laboratory. Cumitach # 31.
Brenda McCurdy – Coordinating Editor
A.S.M Press, American Society for Clinical Microbiology,
Washington DC.
5. Quality and Quality Assurance Practices in Clinical Microbiology.
Cumitech # 3 A.
Cumulative Techniques and Procedures in Clinical Microbiology,
Alice Weisfeld – Coordinating Editor.
Washington DC.
6. A Guide to Specimen Management in Clinical Microbiology.
J. Michael Miller.
A.S.M Press, 1998, American Society for Microbiology.
Wsahington DC
7. Essential Procedures for Clinical Microbiology.
Henry Isenberg - Editor in Chief.
A.S.M Press, 1998, American Society for Microbiology,
Washington DC
8. Manual of Clinical Microbiology.
7 Edition, 1999,
Patrick Murray – Editor in Chief.
Washington DC.
9. Manual of Industrial Microbiology and Biotechnology.
A. Demian and N. Solomon.
A.S.M Press, 1997, American Society for Microbiology,
Washington, DC
10. Food Microbiology: Fundamentals anf Frontiers.
M. Doyle, L. Beuchat and T. Montuille.
A.S.M Press, 1998, American Society for Microbiology.
Washington, DC
11. Quality Assurance in the Clinical Microbiology: Applying ISO 9000
Quality Standars.
A. Seidenfeld, C. Glidden and D. Henrickson
Clinical Laboratory News, 1997 ; 23 (8), 11-15.
The American Association for Clinical Chemistry,
Washington DC.
12. Normativa para la Puesta en Práctica de Estudios de la Sensibilidad
Antimicrobiana Mediante Discos.
Sexta Edición, Approved Standard
NCCLS - Comité Nacional para Normas de Laboratorio Clínico.
M2 – A6 . Vol. 13, N°24.
The National Committee for Clinical Laboratory Standard Press,
Pennsilvania, USA
13. Bacteriología Diagnóstica: Tinciones, Medios de Cultivos y Pruebas
Diagnósticas.
F. Guerrero, M. Gamboa, J. Mora y E. Rodríguez.
Oficina de Publicaciones, Facultad de Microbiología,
Universidad de Costa Rica.
14. Normativa para la Puesta en Práctica del Estudio de Susceptibilidad
Antimicrobiana.
Octavo Suplemento Informativo.
NCCLS , M100 –S8 , Vol. 17, N° 2
Pennsilvania, USA.
15. Manuales Técnicos:
Merck, Menarini, Oxoid, Difco, BBL, Vitek, Biomerieux, Gibco y Sigma.
www.monografias.com
16 Clinical and Laboratory Standards Institute. 2005. Performance standards for antimicrobial
susceptibility testing. Fifteenth international supplement M100-S15. Clinical and Laboratory
Standards Institute, Wayne, Pa
17. Competency Assessment in the clinical microbiology laboratory.

Cumitach # 39. Cumulative Techniques and Procedures in Clinical
Microbiology. B. Laurel Elder and Susan Sharp - Coordinating Editor
Washington DC.
18. Control de Calidad en Micología. María del Pilar Arévalo, Alvaro Torres Lana y Delia Cárdenas. En
Guía practica de identificación y diagnóstico en micología clínica. J. Pemám, E. Martín, MC Rubio
Calvo – Editores. Revista Iberoamericana de micología, Asociación Española de Micología,
Bilbao, España, 2001.
19. Caballero E. Manual de control de calidad en microbiología. 1993. http://www.ilustrados .com
20. Quality assurance in bacteriology and immunology. WHO.
http://www.whosea.org/bct/book28/5h.htm
21. Coffey J and Crawford. L. Guidance for laboratory Quality Manual. Ontario laboratory
accreditation division (OLA). May 2003.
22. Donna F, et al. Quality assurance / Quality control manual. April 2005. Ohio Water microbiology
laboratory.
23. Yuan S, et al. Clinical impact associated with corrected results in clinical microbiology testing.
Journal fo Clinical Microbiology. May 2005. Vol.43, No.5, P. 2188-2193.
24. Dybkaer R. Metrological traceability in laboratory medicine. Accred Qual Assur. ( 2003 ), 8:46-52.
25. Health Protection Agency (2004). Monitoring, maintenance and calibration
of autoclaves (for the purposes of UKAS accreditation). National Standard
Method QSOP 6 Issue 3.
http://www.hpastandardmethods. org.uk/pdf_sops.asp.
26. Quality systems in the clinical microbiology laboratory.
Cumitech # 3 B.
Cumulative Techniques and Procedures in Clinical Microbiology,
D. Sewell – Coordinating Editor.
A.S.M Press, American Society for Microbiology, 2005.
Washington DC.
27. Detection and prevention of clinical microbiology laboratory – associated errors. Cumitech
# 41. Cumulative Techniques and Procedures in Clinical Microbiology, James Snyder –
Coordinating Editor. A.S.M Press, American Society for Microbiology, 2004. Washington DC.
28. CLSI – Performance standards for antimicrobial susceptibility testing; Nineteenth Informational
Supplement. M100 – S19, Vol.29, No.3, January 2009.
29. CLSI – Performance standards for antimicrobial susceptibility tests; Approved standard- Tenth
edition. M02-A10, Vol.29, No.1, January 2009.
Autor:
Lic. Eric Caballero J.
[email protected]

Manual Control Calidad Microbiologia

Cargado por

Copyright:

Manual Control Calidad Microbiologia

Cargado por

Información del documento

Título original

Derechos de autor

Compartir este documento

Compartir o incrustar documentos

Opciones para compartir

¿Le pareció útil este documento?

¿Este contenido es inapropiado?

Copyright:

Manual Control Calidad Microbiologia

Cargado por

Copyright:

www.monografias.

Manual de control de calidad en microbiología

Preparación de las muestras clínicas

 En el caso de investigar microorganismos anaeróbicos, la biopsia y el aspirado con aguja, son

k) Un solo Culturette con múltiples ordenes.

3. MUESTRAS DESAPROBADAS DEBIDO A SU CUSTIONABLE INFORMACION CLINICA :

 Substancias inhibidoras en el agua o en el recipiente.

EVALUACION DE LA EFICIENCIA DE LOS MEDIOS DE CULTIVO

MEDIO DE CULTIVO ORGANISMO CONTROL REACCION ESPERADA

TSI E. coli ácido/ácido

SIM Proteus mirabilis movilidad positiva

Citrato de Simmons K.pneumoniae color azul. Crece

Caldo de urea Proteus mirabilis Rojo-Morado. Positivo.

Agar sangre Estr.Betahem.Grupo B Crece. Betahemólisis.

McConkey E. coli Crece. Colonias moradas.

McConkey Sorbitol E.coli 0157:H7 Colonias claras. Sorbitol negativo

EMB E. coli Brillo metálico

Manitol Sal Estafilococos Colonias amarillas

SS agar Salmonella sp Crece. Colonias claras con H2S

MEDIO DE CULTIVO ORGANISMO CONTROL REACCION ESPERADA

SS agar E. coli No crece.

Agar alcohol-fenil etílico Estafilococos Crece.

Thayer-Martin N. Gonorrhoeae Crece.

OF – medio E. coli Amarillo ambos tubos. Fermentador

Lysina decarboxylasa Citrobacter freundii alcalino/ácido H2S +

Bili-Esculina Streptococcus mitis Incoloro

Caldo Malonato Klebsiella pneumoniae Azul

NaCl 6.5% Streptococcus mitis No crece

Sabouraud-Dextrosa agar Levaduras Crece

Mycosel agar Levaduras Crece

Tioglicolato Flora mixta Crece

Selenita Flora mixta Crece en menos de 24h

Caldo Cerebro-Corazón Flora mixta Crece

2. CONTROL DE CALIDAD DE LOS SUPLEMENTOS:

REACTIVO MICROORGANISMO REACCION ESPERADA

Coagulasa Staphylococcus aureus Coágulo. Coagulasa positiva

Oxidasa Pseudomona aeruginosa Negro. Oxidasa positiva

Catalasa Staphylococcus sp Burbujas. Catalasa positiva

Betalactamasa S. aureus ATCC 29213 Rojo. Positiva

Optoquina S. pneumoniae Halo de >/= 12 mm

ONPG E. coli Amarillo. Positivo

Ehrlich E. coli Anillo rojo. Indol positivo

Cloruro férrico Proteus sp Verde. Fenilalanina positivo

Sobres de Anaerobiosis Bacteroides sp Crecimiento en Anaerobiosis

Suero para tubos germinales Candida albicans Tubos germinales positivo

4. CONTROL DE CALIDAD DE LOS TINTES :

TINCION MICROORGANISMO REACCION ESPERADA

Gram Estafilococo sp Morado. Gram-Positivo.

Zielh-Neelsen Mycobacterium sp Rosadas. BAAR positivo

Zielh-Neelsen E. coli Azul. BAAR negativas.

Kellung S. pneumoniae Detección de cápsula positiva

ALGUNAS CAUSAS DE ERROR DURANTE LA TINCION:

Streptococcus pneumoniae ATCC 49619

absorbancia. Para realizar el control de un estándar McFarland de 0.5 , la absorbancia deberá

4. Los aislamientos de Salmonella sp y Shigella sp en heces, deben ser examinados solo

Droga Halo (mm) CIM (g/ml )

Valores esperados (MIC ):

h) DETECCIÓN DE CEPAS PRODUCTORAS DE BETALACTAMASA DE ESPECTRO EXTENDIDO

i) Control de calidad de la sensibilidad a los antibióticos en los sistemas computarizados:

Tarjetas de sensibilidad para Gramnegativos:

Tarjetas de sensibilidad para Grampositivos:

TARJETA ANTIBIOTICO MICROORGANISMO

GNS-108 Ampicilina A. junii, A. lwoffii, Aeromona sp,