Practica 10. Proteina Plasmaticas

UNIDAD DE CIENCIAS BÁSICAS
ASIGNATURA DE BIOQUÍMICA
GUÍA DE PRÁCTICAS
SEGUNDO AÑO
PRACTICA 10. ELECTROFORESIS DE

PROTEINAS PLASMATICAS
ELECTROFORESIS DE PROTEINAS PLASMATICAS
1. INTRODUCCION.
Las proteínas son compuestos orgánicos macromoleculares, constituidas por

secuencias de aminoácidos unidos por enlaces peptídicos. Todas las proteínas
tienen en su estructura los elementos carbono, oxigeno, hidrógeno y nitrógeno,
habiendo algunas que además tienen azufre, fósforo o yodo; son coagulables por el
calor y ácidos inorgánicos (clorhídrico, sulfúrico), insolubles en éter y alcohol.
Cumplen diversas funciones en el organismo humano tales como: estructurales,

catalíticas, transporte, hormonal, anticuerpo, etc.
En el plasma, las proteínas contribuyen a mantener el volumen del fluido circulante,

transportan sustancias relativamente insolubles y actúan en la inactivación de
compuestos tóxicos y en la defensa inmune.
Las proteínas del suero sanguíneo pueden separarse utilizando técnicas, como
electroforesis, ultracentrifugación, intercambio iónico, etc.; utilizando la técnica de
precipitación con sales neutras se pueden separar en dos grandes grupos de
proteínas: la albúmina y las globulinas. La albúmina es la proteína de mayor
concentración en suero, tiene como función transportar muchas moléculas
pequeñas (como bilirrubina, calcio, progesterona y drogas) y mantener la presión
osmótica del plasma. Las globulinas se pueden separar utilizando la electroforesis
en alfa 1, alfa 2, beta y gamma globulinas. La albúmina representa el 60% de las
proteínas que contiene el suero, el resto son las globulinas.
La determinación de proteínas totales se realiza para evaluar la posible presencia

de enfermedades nutricionales, enfermedades del riñón o del hígado. En
condiciones patológicas como pérdidas renales, desnutrición, infecciones
prolongadas, parasitosis, etc., suelen presentarse hipoproteinemias, mientras que
en otras como mieloma múltiple, endocarditis bacteriana y hemoconcentraciones de
diversos orígenes (ej. deshidratación) se observan hiperproteinemias.
2. OBJETIVO.
Conocer el proceso de la técnica de electroforesis de las proteínas plasmáticas.
Interpretar el proteinograma y las fracciones electroforéticas.
3. FUNDAMENTO DEL MÉTODO.
La electroforesis es un método muy utilizado para separar proteínas. Los

aminoácidos que las componen pueden llevar carga eléctrica, variable en función
de su grado de ionización, lo cual es a su vez función del pH. Las diferentes
proteínas tendrán diverso número de cargas y diferente peso molecular, por lo que
migrarán a velocidades diferentes en un campo eléctrico.
La separación electroforética de las proteínas del suero se lleva a cabo en una tira
de acetato de celulosa. Ésta, empapada en disolución tampón, cierra el circuito
eléctrico entre las dos cámaras con los electrodos. El tampón tiene la misión de
establecer ese contacto eléctrico, y de efectuar la electroforesis a un pH
determinado y constante, en nuestro caso 8.6. A este pH básico todas las proteínas
del suero presentan carga negativa.
Al terminar la electroforesis, se tiñen las proteínas con un colorante apropiado (rojo

Ponceau). La electroforesis separa las proteínas en cinco bandas o fracciones
principales: la albúmina se sitúa en el extremo anódico (+), seguida por las
fracciones de α 1 -globulinas, α 2 -globulinas, β-globulinas y γ-globulinas. Tras la
tinción, se inspecciona visualmente el gel y se mide el porcentaje que representa
cada banda mediante densitometría o empleando un escáner, y así se obtiene el
perfil del proteinograma.
4. EQUIPOS, MATERIALES, REACTIVOS Y MUESTRA.
4.1. EQUIPOS.
- Cubeta de electroforesis - Fuente de poder
- Estufa - Agitador
4.2. MATERIALES.
- Tiras de acetato de celulosa (Cellogel) - Aplicador
- Papel Mylar - Bandejas
- Puente de electroforesis - Papel de filtro
- Rodillo - Micropipetas y tips
4.3. REACTIVOS.
- Tampón Tris pH 8.6
- Colorante: rojo Ponceau
- Decolorante: ácido cítrico
- Aclarador
4.4. MUESTRA.
Se debe obtener suero de la manera usual. El paciente debe estar en ayuna de 8

horas.
5. PROCEDIMIENTOS.
Electroforesis.
5.1. Tomar una tira de Cellogel y sumergirla en una bandeja que contenga 100 ml
de tampón. Agitar en el agitador durante 10 minutos.
5.2. Rellenar completamente los 2 compartimentos de la cubeta de electroforesis

con tampón.
5.3. Pipetear 30 ul de muestra en los salientes del aplicador de muestras.
5.4. Sacar la tira de la cubeta y retirar el exceso de tampón poniéndola entre 2

láminas de papel de filtro.
5.5. Posicionar la tira Cellogel sobre el puente con la cara porosa hacia arriba.
5.6. Introducir el puente en el interior de la cámara.
5.7. Bajar el aplicador sobre las muescas varias veces para que se cargue
correctamente.
5.8. Descargar las muestras sobre un papel de filtro situado en la mesa, descartar.
5.9. Volver a cargar las muestras de nuevo y descargar las muestras sobre la tira
de acetato de celulosa.
5.10. La siembra se hace a 2 cm del cátodo (polo negativo). Mantener pulsado el

aplicador durante 10 segundos para cerciorarnos que la muestra penetre en la tira.
5.11. Se enciende la fuente de alimentación y se aplica un voltaje constante de 200

V, durante 35 minutos.
Revelado.
5.12. Transcurrido el tiempo desconectar la fuente de la red y sacar la tira Cellogel

del puente.
5.13. Trasladar la tira a una bandeja con el líquido colorante. Agitar durante 5
minutos.
5.14. Pasar la tira a una bandeja con líquido decolorante, agitar y hacer sucesivos
lavados hasta que quede el fondo completamente blanco.
5.15. Introducir la tira en el líquido aclarador. Agitar durante 30 seg.
5.16. Colocar la tira de Cellogel sobre un papel Mylar. Cortar los bordes y retirar el
exceso de disolución evitando la aparición de burbujas.
5.17. Colocar la película en el interior de una estufa a 80ºC durante 10 minutos.
5.18. Sacar de la estufa y dejar enfriar.
5.19. Escanear la película y realizar la densitometría con el programa informático

Scion.
6. RESULTADOS.
A continuación, se presenta los valores de las diferentes fracciones del proteínas

plasmáticas y el proteinograma, de una persona sana:
Proteína total: 7.0 g/dL Albumina: 60 %
Alfa-1: 4% Alfa-2: 10 %
Beta globulina: 12 % Gamma globulina: 14 %
Albumina alfa1 alfa2 beta gamma

7. VALORES REFERENCIALES.
Proteína total: 6.6 – 8.7 g/dL
Relativo Absolutos
(%) (g/dL)
Albumina 54.7 – 68.7 4.2 – 5.3
Alfa-1 3.7 – 7.8 0.3 – 0.6
Alfa-2 5.2 – 10.7 0.4 – 0.8
Beta globulina 8.6 – 13.7 0.7 – 1.0
Gamma globulina 10.7 – 19.3 0.8 – 1.5
Proteínas totales = albumina + globulinas
8. BIBLIOGRAFIA.
Alvaro Gonzales Hernandez. Principios de bioquímica clínica y patología molecular.

3ª ed. Elsevier España. 2019. Pagina 177-187.
https://www.clinicalkey.com/student/content/toc/3-s2.0-C20180005599
A. Cidoncha GA et al. El proteinograma en la práctica clínica. Medicina integral.

2001; 38 (3): 127-132. En:
https://www.elsevier.es/es-revista-medicina-integral-63-articulo-el-proteinograma-
practica-clinica-13016401

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UNIDAD DE CIENCIAS BÁSICAS

PRACTICA 10. ELECTROFORESIS DE

Las proteínas son compuestos orgánicos macromoleculares, constituidas por

Cumplen diversas funciones en el organismo humano tales como: estructurales,

En el plasma, las proteínas contribuyen a mantener el volumen del fluido circulante,

La determinación de proteínas totales se realiza para evaluar la posible presencia

Conocer el proceso de la técnica de electroforesis de las proteínas plasmáticas.

Interpretar el proteinograma y las fracciones electroforéticas.

3. FUNDAMENTO DEL MÉTODO.

La electroforesis es un método muy utilizado para separar proteínas. Los

Al terminar la electroforesis, se tiñen las proteínas con un colorante apropiado (rojo

- Cubeta de electroforesis - Fuente de poder

- Tiras de acetato de celulosa (Cellogel) - Aplicador

- Papel Mylar - Bandejas

- Puente de electroforesis - Papel de filtro

- Rodillo - Micropipetas y tips

- Tampón Tris pH 8.6

- Colorante: rojo Ponceau

- Decolorante: ácido cítrico

Se debe obtener suero de la manera usual. El paciente debe estar en ayuna de 8

5.2. Rellenar completamente los 2 compartimentos de la cubeta de electroforesis

5.3. Pipetear 30 ul de muestra en los salientes del aplicador de muestras.

5.4. Sacar la tira de la cubeta y retirar el exceso de tampón poniéndola entre 2

5.6. Introducir el puente en el interior de la cámara.

5.10. La siembra se hace a 2 cm del cátodo (polo negativo). Mantener pulsado el

5.11. Se enciende la fuente de alimentación y se aplica un voltaje constante de 200

5.12. Transcurrido el tiempo desconectar la fuente de la red y sacar la tira Cellogel

5.15. Introducir la tira en el líquido aclarador. Agitar durante 30 seg.

5.17. Colocar la película en el interior de una estufa a 80ºC durante 10 minutos.

5.18. Sacar de la estufa y dejar enfriar.

5.19. Escanear la película y realizar la densitometría con el programa informático

A continuación, se presenta los valores de las diferentes fracciones del proteínas

Proteína total: 7.0 g/dL Albumina: 60 %

Beta globulina: 12 % Gamma globulina: 14 %

Albumina alfa1 alfa2 beta gamma

Proteína total: 6.6 – 8.7 g/dL

Albumina 54.7 – 68.7 4.2 – 5.3

Alfa-1 3.7 – 7.8 0.3 – 0.6

Alfa-2 5.2 – 10.7 0.4 – 0.8

Beta globulina 8.6 – 13.7 0.7 – 1.0

Gamma globulina 10.7 – 19.3 0.8 – 1.5

Proteínas totales = albumina + globulinas

Alvaro Gonzales Hernandez. Principios de bioquímica clínica y patología molecular.

A. Cidoncha GA et al. El proteinograma en la práctica clínica. Medicina integral.

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