Para PDF 2018 - Curso Formato - Chile - Recetas para Un Hemograma Bien Hecho
Para PDF 2018 - Curso Formato - Chile - Recetas para Un Hemograma Bien Hecho
Para PDF 2018 - Curso Formato - Chile - Recetas para Un Hemograma Bien Hecho
bien hecho
1. Introducción
2. Parámetros y Tecnologías
4. Conclusión
• Gran cantidad de
parámetros
• Diferentes metodologías
• Varios interferentes
Calidad
Parámetros del hemograma
• WBC
• NEUT%, LYMPH%, MONO%, EO%, BASO%, NRBC%
Serie
blanca • NEUT#, LYMPH#, MONO#, EO#, BASO#, NRBC#
• PLT-I, PLT-O
Plaquetas • VPM, PDW, PCT, P-LCR
Recetas antiguas
• Entrenamiento mínimo
Buenos tiempos...
Escenario actual
• Fuerte competencia
• Enfocada en la capacitación
de los profesionales
Nada es muy fácil...
Ingredientes actuales
• Interferentes
Tecnología
Libro
de • Conocimiento
Recetas Analistas bien • Perfil adecuado
preparados
• Educación
• Optimizadas
Empresas
competentes • Costo ajustado
• Calidad
Evolución de la automatización en
Hematología
Evolución de la Automatización en
Hematología
XN-3100 con
o sin DI 60
XN-2000
XN-1000
XN-550
XN-450
XN-350
• CellaVision
DM9600
¿Qué es Morfología Digital
Automatizada?
COMPONENTES INTERNOS
Camara Bolsa de
aceite
Relay Tube 1.0X
10X lente
2D Lector de
100X lente CB
LED box
Sensor de gota
de aceite
• Líquido - LCR
• Fluidos corporales
– Peritoneal
– Pleural
– Sinovial
• Conteo Diferencial:
– Polimorfonucleares
– Mononucleares
Análisis de líquidos biológicos
Procedimiento
manual
Diferencial de 2-partes
HF-BF
WBC-
BF
MN
PMN
EO-
BF
Parámetros reportáveis
Parámetros de pesquisa
Alarme
Células Mononucleares
Linfo
Mono
Histiócitos
Células Polimorfonucleares
Neutro
Eosino
Baso
Células Mesoteliais
Outras (células blásticas)
400x
Parámetros reportáveis
Parámetros de pesquisa
Alarma
Células Mononucleares
Linfo
Mono
Histiócitos
Células Polimorfonucleares
Neutro
Eosino
Células tumorales Baso
Células Mesoteliais
Outras
• Revisión de proceso
– Evaluar el flujo de trabajo
PDA
= Procedimento manual :
Atenção!
Procesos optimizados
• Revisión de proceso
– Evaluar el flujo de trabajo
– Buscar alternativas
HST - 402 HST – 402
= Procedimiento
= Procedimiento manual
manual : Atención!
Post-implementación
2 CellaVision DM96
– Buscar alternativas
• Revisión de proceso
– Evaluar el flujo de trabajo
– Buscar alternativas
Procesamiento
Colocar frotis en
los coradores
Juntar las OS con
los frotis corados
11 etapas
Revisar la
Buscar los tubos
identificación del
Fin
em las estantes
tubo con la del OS
Colocar las OS
lado a lado en la Limpiar los frotis
bancada
Procesos optimizados
• Revisión de proceso
– Evaluar el flujo de trabajo
– Buscar alternativas
11 etapas
0 etapas
Colocar frotis en Juntar las OS con
Procesamiento los coradores los frotis corados
Revisar la
Buscar los tubos
identificación del
Fin
em las estantes
tubo con la del OS
Colocar las OS
lado a lado en la Limpiar los frotis
bancada
Procesos optimizados
• Atención constante
• Proceso continuo
Proteínas
Globulinas
Iones
cualitativa y cuantitativamente
Glucosa
Fibrinógeno
Plasma Moléculas
orgánicas
los elementos celulares deLípidos
la sangre
Elementos traza Residuos
y vitaminas nitrogenados
Sangre Gases
Linfocitos
Eritrocitos Monocitos
Elementos Neutrófilos
celulares Leucocitos
Eosinófilos
Plaquetas Basófilos
Células sanguíneas
Leucocito
Eritrocito
Plaquetas
Células sanguíneas
Linfocito B1 Mieloblasto
Linfocito T1 Megacarioblasto
Monocito en tejido
Proeritroblasto
Promielocito
Imuno - Centro- Imuno- Célula reticulada
blasto T blasto blasto B Megacariocito
Eritroblasto Mielocito
PolicromáticoBasó-
Eosinó
0 filo Neutrófilo filo Monoblasto
Plasmoblasto
Reticulocitos
Eritroblasto
Plasmocito 1
Centrocito Ortocromático
Plasmo-
Metamielocito
cito Sangre-barreira médula ósea
2
3 Banda
Linfocito B2
Linfocito T2 4
Reticuloc.
4 Monocito
Sangre periférica Plaquetas Eritrocitos Granulocitos segmentados
Análisis de sangre
periférica
• Proporciona información*:
1. Si la médula ósea está Leucocito Eritrocito
produciendo un número suficiente
de células maduras de diferentes Plaquetas
linajes
2. Si los procesos de proliferación,
diferenciación y adquicisión de
funciones de cada tipo celular se
están llevando a cabo de manera
adecuada en todas las líneas
*Interpretación clínica del hemograma –
celulares Dra. Helena Z. W. Grotto
Parámetros del hemograma
• WBC
• NEUT%, LYMPH%, MONO%, EO%, BASO%, NRBC%
Serie
blanca • NEUT#, LYMPH#, MONO#, EO#, BASO#, NRBC#
• PLT-I, PLT-O
Plaquetas • VPM, PDW, PCT, P-LCR
Parámetros clínicos avanzados
• Contenido de hemoglobina de
Ret-He los reticulocitos
• Conteo de granulocitos
IG inmaduros
Basophil
Erytroblast Promyelocyte
T-Immuno- Centro- B-Immuno- Reticulum cell
blast blast blast Megakaryocyte
Polychr. Myelocyte
Erythroblast Baso-
Eosino-
0 phil Neutrophil phil Monoblast
Reticulocytes
Plasmoblast
Orthochr.
Plasma cell 1 Erythroblast
Centrocyte
Blood-bone marrow barrier Metamyelocyte
2
Plasma cell
3 Bands
B2-Lymphocyte
T2-Lymphocyte
4 Monocyte
Peripheral Blood Thrombo Erythrocytes Segmented Cells
Eritropoyesis
http://2.bp.blogspot.com
Eritroblasto
Proeritroblasto policromatófilo Reticulócito
De Diggs
Parámetros de la serie roja
Rbc
MCH MCHC
MCV
Cálculo de los índices eritrocitarios
VCM HCM
Anemia
disminuido disminuido
microcítica/hipocrómica
Anemia
normal normal
normocítica/normocrómica
Anemia
aumentado normal
macrocítica/normocrómica
Impedancia
Histograma PLT
Apertura
Electrodo
externo
Discriminador inferior Discriminador superior
2 -6 fL 12-30 fL
Histograma RBC
Vacio
Discriminadores flotantes
RBC
PLT
20%
PL PU RL RU
100%
RBC
20%
PLT
Dilución conocida
y
Volumen conocido de
muestra
Señales
producidas
por las
células
Impedancia vs. impedancia
con enfoque hidrodinámico
Eritrocitos normocrómicos:
Eritrocitos hipercrómicos
Rango de
CHCM
CHCMs bajos
Referencia: B.Bull, The Validity of the MCHC as Measured By Various Analyzers, presented at
AACC, July 1992.
850 donadores de sangre
Frecuencia
CHCM
Referencia: B.Bull, The Validity of the MCHC as Measured By Various Analyzers, presented at
AACC, July 1992.
Determinación de la hemoglobina
• Espectrofotometría
• Método SLS-HGB
– Reactivo libre de cianuro
– Minimiza las
interferencias en las
muestras:
• Con lipemia
• Con leucocitosis
VCM: 99fL
63 eritroblastos/100 leuco
Clasificación laboratorial de las anemias
Normal o
Macrocítica Disminuido Elevado Normal Macrocitosis
elevado
Microcitosis,
Talasemia Elevado Disminuido Disminuido Normal hipocromia,
policromatofilia
Enfermedad Normocitosis y
Normal Normal Normal Normal
crónica normocromia
Alteraciones
Hemolíticas Elevado Variable Variable Variable
específicas
Eritropoyesis
• Etapa 0: eritroblasto ortocromático
Eritroblasto
Reticulocitos
Policromático
0
Eritroblasto
1
Ortocromático
• Recién nacidos
• Control de maduración
– Perdida
– Aceleración de producción: hipoxia
– Stress: lesión inflamatoria
• Situaciones especiales
– Gestación X Talasemia (traza beta-tal)
Mavrou A, Kolialexi A, Antsaklis A, Korantzis A, Metaxotou C
(2003) Identification of fetal nucleated red blood cells in the maternal
circulation during pregnancy using anti-hemoglobin-epsilon antibody. Fetal
Diagn Ther 18:309–313
NRBCs en la circulación periférica -
lo que es normal
RN de termino
Hasta 5 días después del nascimiento
3 a 10 NRBCs/ 100 leucocitos
RN prematuro
Hipóxia neonatal
Enfermedad hemolítica del RN
NRBCs
NRBCS en la circulación –
incremento de la actividad eritropoyética
Subjetivo Impreciso
Demorado Cansativo
• Interfieren en el conteo
total de leucocitos y en
el diferencial de los
linfocitos
Eritroblastos vs. linfocitos
Eritroblastos vs. linfocitos
Detección automatizada de los NRBCs
BASO
FSC
NRBC
WBC
Debris
SFL
© 2013 Sysmex Latin America & the Caribbean
All rights reserved
Análisis automatizado de los NRBCs
Benefícios
Oportunidades
▫ Reportado en todos los resultados
(en % e #)
▫ Sin costo adicional
▫ Conteo simultáneo a los leucocitos
▫ No necesita reactivo especial o
preparación previa de la muestra ▫ Reduce la repetición de conteos
▫ No necesita corrección del conteo de
leucocitos ▫ Mayor rapidez en la liberación del
▫ Lípidos y eritrocitos resistentes a la lisis resultado
no interfieren en el conteo de NRBC
▫ Gran precisión, incluso en los conteos
bajos
Reticulocitos
Etapa 0: eritroblasto ortocromático
Reticulocitos
Reticulocitos
Luz dispersa frontal
Volumen celular
Fluorescencia - Contenido de ADN/ARN
• Contenido de hemoglobina de
Ret-He los reticulocitos
• Contagem de
IG granulócitos imaturos
Deficiencia de
Deplección de hierro sin Anemia
reserva anemia ferropriva
ferritina sérica
(<12µg/L)
ST
↑ ZPP eritrocitario
Hb
VCM
↑% Hipo
↑ sTfR
Ret-He
• WBC
• NEUT%, LYMPH%, MONO%, EO%, BASO%, NRBC%
Serie
blanca • NEUT#, LYMPH#, MONO#, EO#, BASO#, NRBC#
Conteo total de leucocitos
• Diferentes metodologías:
– Impedancia
– Lisis específica
– Dispersión de luz
– Radiofrecuencia
Leucocitos en sangre periférica
Timo Ganglios Médula ósea
y bazo Pluripotente
Stem Cell Stem Cell
Linfocito T0 Linfocítica
Macrófago
Linfocito B1 Mieloblasto
Linfocito T1 Megacariobl
Basófilo en tejido
Proeritrobl Promielocito
Imuno - Centro- Imuno- Célula reticulada
blasto T blasto blasto B Megacariócito
Eritroblasto Mielócito
PolicromáticoBasó-
Eosinó
0 filo Neutrófilo filo Monoblasto
Plasmoblasto
Reticulócitos
Eritroblasto
1 Ortocromát.
Centrocito
Sangue-barreira medula óssea Metamielocito
2
Plasmocito
3 Banda
Linfocito B2
Linfocito T2
4
4 Monocito
• Citometría de flujo
– Impedancia
– Conductividad
– Citoquímica
– Láser
Citometría de flujo fluorescente
Contenido de ADN/RNA
Foto multiplicador
(fluorescencia)
Espejo dicróico Foto multiplicador
(luz dispersa
lateral)
Complejidad interna
Láser
semiconductor
(λ = 633 nm)
Celda de flujo
Foto diodo
(Luz dispersa frontal)
Tamaño
Citometría de flujo fluorescente
Neutrófilo ColoranteBasófilo
Eosinófilo polimetinaMonocito Linfocito
Canal DIFF
+ +
Análisis adaptativo de grupos
celulares - ACAS
Distancia
Mahalanobis
1era señal detectada
Centroide inicial
Monocitos
Centroide inicial
Linfocitos
Centroide inicial
Neutrófilos
Centroide inicial
Eosinófilos
Centroide inicial
Fantasmas
Luz dispersa lateral (estructura interna celular)
Análisis adaptativo de grupos
celulares - ACAS
Segundo centroide
Linfocitos
Linfocito
Segundo centroide
Tercer centroide
Linfocitos Linfocitos
Linfocito
Centroide inicial
Monocitos
Centroide inicial
Linfocitos
Centroide inicial
Neutrófilos
Centroide inicial
Eosinófilos
Centroide inicial
Fantasmas
Luz dispersa lateral (estructura interna celular)
Análisis adaptativo de grupos
celulares - ACAS
• Análisis inicial de x cantidad de células;
después el centroide es fijado
• Análisis de otro número de células con el
centroide fijo para optimizar el
posicionamiento del núcleo
• Repetición de los pasos 1 y 2 hasta 5 veces
• Determinación final de la discriminación
celular
• Análisis y diferenciación de gran cantidad de
células
Parámetros clínicos avanzados
• Conteúdo de
Ret-HE Hemoglobina dos
Reticulócitos
• Conteo de granulocitos
IG inmaduros
– Mielocitos
– Promielocitos
• Resultados reportados: IG % y #
• Sin reactivos o tiempo adicional
• Aprobado por FDA
Conteo diferencial de 6 partes
Recomendación
IG > 3%
FP= 5,8%
(6/103)
FN= 4,8%
IG: utilizar como alarma (5/103)
de la necesidad de
revisión de lámina
Bandas X IG
• Ardron MJ et al. Band neutrophil counts are unnecessary for the diagnosis of infection in patients with
normal total leukocyte counts. Am J Clin Pathol 1994;102(5):646-9. La presencia de
neutrófilos más inmaduros que las bandas y el conteo absoluto de
neutrófilos fueron los mejores parámetros para separar los pacientes
infectados de los normales.
• Gombos MM et al. The absolute neutrophil count: is it the best indicator for occult bacteremia in
infants? Am J Clin Pathol 1998;109(2):221-5. El conteo de bandas no es un indicativo
sensible y no agrega ningún valor preditivo.
• Kuppermann N & Walton EA. Immature neutrophils in the blood smears of young febrile children. Arch
Pediatr Adolesc Med 1999 Mar;153(3):261-6. El conteo de bandas en la sangre não
ayuda en la diferenciación entre infección bacteriana e infección
respiratoria viral en niños con fiebre.
• Ward MJ et al. The degree of bandemia in septic ED patients does not predict inpatient mortality. Am J
Emerg Med 2012;30(1):181-3. La cantidad de bandas encuentrada en el principio
de la sepsis no predice la mortalidad o la sobrevivencia de los pacientes.
No siempre un cuadro
infeccioso/inflamatorio
provee cantidad elevada
de granulocitos
inmaduros
Tener en cuenta
que...
Vamos a evaluar algunas células
LABORATORY BOTTLENECK
Segmentado –
aun sin un filamento visible, el núcleo está
doblado y puede estar escondiendo al filamento
Banda –
no tiene filamento y sin una parte más estrecha
del núcleo con aspecto de cromatina
Segmentado –
lóbulos doblados
Segmentado –
2 lóbulos pegados uno contra el otro - ver el
borde del núcleo alrededor del lóbulo
Segmentado –
lóbulo dudoso
Si usted no sabe que es esto...es
un segmentado
Serie plaquetaria
• PLT-I, PLT-O
Plaquetas • VPM, PDW, PCT, P-LCR
Linfócito B1 Mieloblasto
Linfócito T1 Megacarioblasto
Basófilo no tecido
Proeritroblasto
Promielócito
Imuno - Centro- Imuno- Célula reticulada
blasto T blasto blasto B Megacariócito
Eritroblasto Mielócito
Policromático
Basó- Eosinó
0 filo Neutrófilo filo Monoblasto
Plasmoblasto
Eritroblasto
Plasmócito 1
Centrócito Ortocromático
Sangue-barreira medula óssea Metamielócito
2
Plasmócito
3 3 Bastonete
Linfócito B2
Linfócito T2
4 4 Monócito
• Diámetro: 1.5 a 3 μm
• Grosor: ~ 1.0 μm
• Volumen: ~ 7.0 fL (2 a 20 fL)
• La vida media de las plaquetas es de 5
a 12 días con un valor medio de 7 días*
Histograma de plaquetas
Señal de células grandes
PL PU
100%
RBC
20%
PLT
PL PU RL RU
100%
RBC
20%
PLT
Canal RET
Eritrocitos Reticulocitos
Esquisocitos
Volumen celular
Plaquetas
Plaquetas maduras ópticas
Fluorescencia: contenido de ARN
Conteo de plaquetas ópticas
Canal PLT - Fluorescentes
Dispersograma normal
RBC IPF
PLT-F
Canal PLT-F
• VPM: 8.4 a 12 fL
• Evaluación detallada
• Conteúdo de
Ret-HE Hemoglobina dos
Reticulócitos
• Contagem de
IG granulócitos imaturos
ARN
Inmaduras
Megacariocito
Maduras
Plaquetas inmaduras
Canal de reticulocitos
Plaquetas ópticas
Volumen celular
IPF
Fluorescencia
Ejemplos de casos
Normal ITP/PREG
IPF
IPF
Platelets
Platelets
Ejemplos de casos
Procesos Procesos
manuales automatizados
Fase pre analítica
• Variaciones de resultados
– Tiempo de ayuno
• hemoglobina
– Hora de obtención de la muestra
• leucocitos mas bajos al despertar
– Posición del paciente
• HGB, HCT y WBC
– Actividad física
• aumento de leucocitos y neutrófilos
– Tiempo de aplicación del torniquete
• hemoconcentración
Fase pre analítica
– hemólisis acentuada
– mezcla insuficiente
Serie blanca
Rbc
MCH MCHC
MCV
¿Qué puede causar un
CHCM >37 ?
• Esferocitosis hereditaria
• Aglutinación de RBC
• Lipemia
• Hemólisis
• Sodio bajo
Esferocitosis hereditaria
Verificar el frotis al microscopio…
Aglutininas frías
• Interfieren en el conteo
total de eritrocitos e
índices eritrocitarios
• Calentar la muestra a
37ºC
• Repetir el análisis de la
muestra
• Interfiere en el resultado de
hemoglobina e índices
eritrocitarios (MCHC >37)
• Soluciones:
a) Reemplazar el plasma con
diluyente del analizador o con
solución salina
b) Cálculo matemático
VCM x RBC
Hb corrigida=
2.98 x 10
Línea de base
Señal de células pequeñas
• Leucocitosis acentuada
¿De dónde viene el conteo de leucocitos?
Lisis específica
Luz dispersa
frontal
Volume celular
Luz dispersa lateral
Complejidad interna
Minimiza interferentes en los
conteos de leucocitos
1. Cúmulos de
plaquetas
2. Eritrocitos
Normal resistentes a la
lisis
¿De dónde viene el conteo de leucocitos?
Fluorescencia x Complejidad interna
BASO
FSC
NRBC
WBC
Debris
SFL
Minimiza interferentes
FSC
SFL SFL
3. Eritroblastos - NRBC
• Interfieren en el conteo
de leucocitos y
diferencial de linfocitos
Eritroblastos (NRBC)
Histograma WBC
Resultados
WBC 56.1 x 109/L
WL* 42.7%
LYM%
WL* -.--- (x 1000)
MXD%
WL -.---
NEUT%
• Falsa disminución en
los conteos de WBC
• Interferencia en el
conteo del diferencial de
leucocitos automatizado
y manual
• Recolección en citrato
de Na
• Calentar a 37ºC
Leucocitosis acentuada
• Interfiere en la determinación de
hemoglobina debido a la turbidez
del plasma
• Cantidad de exámenes
• Requiere tiempo
• Entrenamiento y práctica
– variabilidad inter observadores
LABORATORY BOTTLENECK
• Selección inadecuada de los campos
• Calidad del frotis
• Baja reproducibilidad en conteos de 100 células
Reproducibilidad en los conteos del
diferencial leucocitario
Frotis sanguíneo
Granulocitos
inmaduros,
neutrófilos
• Distribución irregular y monocitos
• Calidad de la tinción
Situaciones comunes
¿Cuándo es realmente necesario el
conteo diferencial manual?
1. Blastos
• Conteos
diferencial manual
Leucemia de células peludas
(Hairy Cell Leukemia)
¿Cuándo es realmente necesario el
conteo diferencial manual?
1. Blastos
3. Granulocitos inmaduros
Granulocitos inmaduros
Lo que es importante analizar
Conteo automatizado de
granulocitos inmaduros
Parámetro IG
• Cuantifica células inmaduras de linaje mieloide
– Metamielocitos
– Mielocitos
– Promielocitos
• Resultados reportados: IG % y #
• Sin reactivos o tiempo adicional
Problemas en los conteos de plaquetas
Conteo manual de
plaquetas
CV= 10 a 25%
CV >30%
Hospital Aliança, 2009
Conteo automatizado
• Impedancia: CV < 3 - 4%
• Plaquetas pasan por orificio alterando la corriente
eléctrica y generando pulsos
• Número de pulsos = número de células
• Tamaño del pulso proporcional al tamaño de la célula
• Discriminadores flotantes
Plaquetas RBC
• Amplia linealidad
– Hasta 5,000,000/mm³
Interferencias en los conteos
automatizados de plaquetas
Trombocitosis
acentuada
Eritrocitos y plaquetas
Discriminadores flotantes
PL PU RL RU
100%
RBC
20%
PLT
• Adhesión de las
plaquetas a los
neutrófilos
• Conteo de plaquetas
falsamente disminuido
• Incidencia en 0.1% de
los pacientes
hospitalizados
• Ocurre in vitro al
contacto con el
anticoagulante EDTA
Filamentos de fibrina o
microcoágulos
• Interfieren en el conteo
global de leucocitos y
plaquetas
• Problemas en la
recolección u
homogeneización
inadecuada
• Evaluar cantidad e
impacto en el resultado
Trombocitosis acentuada
Confirmación Menor de
Procedimiento 100,000/mm³
obligatoria por
microscopía
Verificar examen
Conteo de anterior
plaquetas fuera
de los límites
Verificar la
Alarmas de presencia de
plaquetas en los coagulo y fibrina en
resultados el tubo
automatizados
Verificar presencia
Gran variación del de interferencias
resultado anterior
Fase post analítica
Liberación de resultados
Problemas en la liberación de resultados
• Analizador en condiciones
adecuadas
• Interface bidireccional
• Criterios y reglas de liberación
en el analizador y en LIS
• Alta sensibilidad en la
generación de alertas
Criterios de revisión
• Alarmas
1. Cuantitativos
• Valores del usuario
2. Cualitativos
• Aviso de alteraciones del analizador
Alarmas cuantitativas (-) y (+)
Eosinofilia
Manual:
Segs 41
Linf 10
Mono 4
Eos 36
Baso 5
Linf atip 4
Blastos y Granulocitos inmaduros
Desviación a la izquierda
Linfocitos Atípicos
Otras condiciones esenciales
• Viabiliza la rutina
• Reducción :
– error
– costos
Plaquetas >600.000
<100.000 Chequear
< 50.000 Confirmar el conteo
VCM >105
< 75
CHCM > 36,4
< 30,0
RDW >18
!
ATENCIÓN
• De literatura
– Valor más amplio
• Entrenamiento
Educación • Reciclaje
continua • Actualización
Perfil adecuado
Diferencial competitivo en análisis clínicos
• Capital humano
– Profesionales con conocimiento sólido y global
• “o conocemos un asunto o sabemos donde encontrar
información sobre el”...Samuel Johnson
• Habilidades personales:
– Relacionamiento interpersonal
– Flexibilidad/negociación
– Trabajo en equipo
– Habilidad gerencial
– Pro actividad /iniciativa
– Saber aprender
Diferencial competitivo en análisis clínicos
• Conocimiento de:
– Informática
– Idiomas
– Técnico-científico
Yo se como
operar
instrumentos
Yo entiendo
de Citología
Yo se
aprender
Muchas gracias por su atención!