19/5/2021 Electroforesis en gel (artículo) | Khan Academy

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Ciencia Biología avanzada Ciencia · Biología avanzada (AP Biology)

(AP Biology) Expresión y · Expresión y regulación génica · Biotecnología
regulación génica
Biotecnología Electroforesis en gel
Biotecnología Una técnica que se usa para separar fragmentos de ADN y
polimerasa (PCR) otras macromoléculas por tamaño y carga.

Reacción en cadena de la
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polimerasa (PCR)
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Electroforesis en gel

Puntos más importantes:

Electroforesis en gel
La electroforesis en gel es una técnica u lizada
secuenciación del ADN
para separar fragmentos de ADN según su
tamaño.
secuenciación del ADN
Las muestras de ADN se cargan en pozos
Aplicaciones de las (ranuras) en un extremo de un gel y se aplica
tecnologías del ADN
una corriente eléctrica para arrastrarlas a través
del gel.

Los fragmentos enen carga nega va, por lo

que se mueven hacia el electrodo posi vo.
Puesto que todos los fragmentos de ADN
enen la misma can dad de carga por masa, los
fragmentos pequeños atraviesan el gel más
rápido que los grandes.

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Cuando un gel se ñe con un pigmento que se

une al ADN, los fragmentos de ADN pueden
verse como bandas, las cuales representan un
grupo de fragmentos de ADN del mismo
tamaño.

Introducción
Imagina que acabas de hacer una reacción de PCR
y se produjeron muchas copias de una región
blanco de ADN. O tal vez hiciste alguna clonación
de ADN tratando de "pegar" un gen en un plásmido
circular de ADN.

Ahora, quieres ver si la PCR funcionó o si el

plásmido con ene el gen correcto. ¿Qué técnica
puedes usar para visualizar (observar directamente)
los fragmentos de ADN?

Electroforesis en gel
La electroforesis en gel es una técnica u lizada
para separar fragmentos de ADN (u otras
macromoléculas, como ARN y proteínas) por su
tamaño y carga. La electroforesis consiste en
aplicar una corriente a través de un gel que
con ene las moléculas de interés. Con base en su
tamaño y carga, las moléculas se desplazarán por el
gel en diferentes direcciones o a dis ntas

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velocidades, con lo que se separan unas de otras.

[¿De dónde viene el nombre "electroforesis"?]

Todas las moléculas de ADN enen la misma

can dad de carga por masa. Debido a esto, la
electroforesis en gel separa los fragmentos de ADN
únicamente por su tamaño. La electroforesis nos
permite ver cuántos fragmentos diferentes de ADN
están presentes en una muestra y cuán grandes son
unos con respecto a otros. También podemos
determinar el tamaño absoluto de un fragmento de
ADN examinándolo junto a una "escala" estándar
de fragmentos de tamaño conocido.
[Más información]

¿Qué es un gel?
Como su nombre lo indica, en la electroforesis en
gel par cipa un gel: un bloque de material similar a
la gela na. Los geles para separar ADN suelen estar
hechos de un polisacárido llamado agarosa, que se
consigue como hojuelas secas pulverizadas.
Cuando la agarosa se calienta en una solución
amor guadora (agua mezclada con algunas sales) y
deja enfriar, se forma un gel sólido ligeramente
blando. A nivel molecular, el gel es una matriz de
moléculas de agarosa que se man enen unidas por
puentes de hidrógeno y que forman pequeños
poros.

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En un extremo, el gel ene muescas en forma de

ranuras llamadas pozos, que son donde se
colocarán las muestras de ADN:

Antes de agregar las muestras de ADN, el gel debe

colocarse en una cámara. Uno de los extremos de
la cámara se conecta a un electrodo posi vo y el
otro extremo se conecta a un electrodo nega vo. El
cuerpo principal de la cámara, donde se coloca el
gel, se llena con solución amor guadora con sales
que puede conducir la corriente. Aunque tal vez no
puedas verlo en la imagen superior (gracias a mis
fabulosas habilidades ar s cas), la solución
amor guadora llena la cámara hasta un nivel en el
que apenas cubre el gel.

El extremo del gel que ene los pozos se coloca

hacia el electrodo nega vo. El extremo sin pozos
(hacia donde migrarán los fragmentos de ADN) se
coloca hacia el electrodo posi vo.

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¿Cómo se mueven los fragmentos

de ADN a través del gel?
Una vez que el gel está en la cámara, cada una de
las muestras de ADN que queremos analizar (por
ejemplo, cada reacción de PCR o cada plásmido
digerido con enzimas de restricción) se transfiere
cuidadosamente a uno de los pozos. Un pozo se
reserva para el marcador de peso molecular, un
estándar de referencia que con ene fragmentos de
ADN de longitudes conocidas. Los marcadores de
ADN comerciales cubren diferentes intervalos de
tamaños, por lo que trataremos de usar uno con
buena "cobertura" en el intervalo de tamaños en el
que esperamos encontrar nuestros fragmentos.

A con nuación, se aplica energía eléctrica a la

cámara y empieza a fluir corriente a través del gel.
Los grupos fosfato de su esqueleto de azúcares-
fosfato le otorgan una carga nega va a las
moléculas de ADN, por lo que comienzan a
moverse a través de la matriz de gel hacia el polo
posi vo. Cuando el sistema está encendido y pasa
corriente por el gel, se dice que el gel está
corriendo. [¿Qué voltaje se usa para correr un gel?]

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Basado en un diagrama similar de Reece et al.2

Conforme corre el gel, los fragmentos más cortos

de ADN viajarán más rápido a través de los poros
de la matriz del gel que los fragmentos más

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grandes. Después de un rato que ha corrido el gel,

los fragmentos más cortos de ADN estarán más
cerca del extremo posi vo del gel y los más largos
se mantendrán cerca de los pozos. Los fragmentos
de ADN muy pequeños podrían correr hasta salirse
del gel si lo dejáramos corriendo por demasiado
empo (¡algo de lo que defini vamente he sido
culpable!).

Visualización de los fragmentos

de ADN
Una vez que los fragmentos se han separado,
podemos examinar el gel y saber el tamaño de las
bandas que se encuentran en él. Cuando un gel se
ñe con un pigmento que se une al ADN y se
coloca bajo luz UV, los fragmentos de ADN
brillarán, lo cual nos permite ver el ADN presente
en dis ntos lugares a lo largo del gel.

El pb que está al lado de cada número en el marcador indica cuántos pares

de bases ene el fragmento de ADN.

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Una "línea" de ADN bien definida en un gel se llama

banda. Cada banda con ene un gran número de
fragmentos de ADN del mismo tamaño que han
viajado juntos a la misma posición. Un fragmento
único de ADN (o incluso un pequeño grupo de
fragmentos de ADN) no sería visible por sí mismo
en un gel.

Al comparar una banda en una muestra con el

marcador de peso molecular, podemos determinar
su tamaño aproximado. Por ejemplo, la banda
brillante del gel anterior ene un tamaño
aproximado de 700 pares de bases (pb).

Comprueba tu comprensión

En el gel anterior se numeran cuatro carriles. (Un

carril es un corredor por el cual pasa el ADN al salir
de un pozo).

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¿Qué carril corresponde a las siguientes

descripciones?

1 2 3 4

Este carril con ene el

fragmento de ADN más
largo.

Este carril con ene el

fragmento de ADN más
corto.

Este carril con ene un

fragmento de ADN de
1500 pares de bases (pb).

[Pista]

Comprobar

Explora fuera de Khan Academy

¿Quieres saber más sobre la electroforesis en gel?
Mira esta herramienta interac va desplegable y
esta simulación de LabXchange.

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LabXchange es una plataforma de educación en

ciencias gratuita en línea creada en la Facultad de
Artes y Ciencias de Harvard que recibe apoyo de
Amgen Founda on.

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Belu hace 3 años

mayor

Tengo una duda... se supone que esta técnica es

u lizada para separar fragmentos de ADN según
su longitud. En el caso de que sean genes de
nuestro interés, no se supone que todos enen
el mismo tamaño? Entonces cómo hacen
algunos para unirse en fragmentos más grandes
o más cortos?
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abl.23abl hace 2 años

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Algunas veces puede deberse a que el

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ADN se encuentra concatenado y eso

puede llevar a que exista pequeñas
variaciones en el tamaño de las
bandas.
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Carlos Joaquin hace 3 años

mayor

En la pregunta "este carril con ene un

fragmento de ADN de 1500 pares de bases
(pb)", podrían dar una explicación acerca de
esto? Mi maestra dice que esa no es la respuesta
y pienso que tal vez ella está en lo correcto. La
respuesta correcta es 2000?
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hace
m…
3
Galindo Gándara Alejandro años

Hay un fragmento en 2000 y otro en

1500
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eidercollins15 hace 3 años

mayor

Hola, muy buena explicación solo que tengo una

duda ¿cómo podría iden ficar si un alimento es
GMO o no en el gel?
graciasa :)
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Javier Lasso hace 3 años

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En primer lugar tendrías que comparar

el bandeo entre tu muestra problema y
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un control (seguro que es orgánico) o

bien buscar los genes que piensas han
sido introducidos en el OGM, para
esto úl mo puedes buscar genes en la
página del NCBI.
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Claudia So a Cruz hace 3 años

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¿Que significa que algunas bandas sean más

brillantes que otras?
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abl.23abl hace 2 años

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Es por la can dad de adn en el pozo, o

tambien puede deverse a la pureza de
la muestra.
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edileidytorres hace un mes

mayor

¿dónde se encontrará el ADN?

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sara Ibeth Hernandez hace 2 años

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En el gel anterior se numeran cuatro carriles.

(Un carril es un corredor por el cual pasa el ADN
al salir de un pozo).
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guzman0523 hace 2 años

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Nombre del aparato que sirve para visualizar el

gel
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Belu hace 3 años

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Una pregunta, cómo se supone que al visualizar

el tamaño de los plásmidos por medio de
electroforesis sabrás si con enen el gen
correcto?
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Javier Lasso hace 3 años

mayor

En primer lugar debes de conocer dos

cosas fundamentales, el tamaño del
plásmido y el tamaño de el gen de
interés.
Una vez teniendo esto en cuenta es
importante realizar la restricción del
constructo (gen insertado en el
plásmido) con enzimas disponibles
para ello.
Terminada la restricción en un gel se
carga el ladder, un plásmido vacío pero
restringido (control de experimento) y
la muestra problema restringida.
La electroforesis presentará al control
como una banda única (generalmente
en la parte superior del gel) y tu
muestra problema será presentada
como una banda arriba (plásmido) y
una banda más abajo (gen de interés),
por ello es fundamental conocer los
tamaños en pb.

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Erzsébet Savaez hace 3 años

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Excelente, le entendí muy bien a la primera. :)

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danna.amell.11 hace 3 años

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Hola, quisiera saber qué pos de geles existen y

cuál es el uso de cada uno.
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