Kenya Yamileth Gil Santacruz

BIOQUÍMICA ESTRUCTURAL Y METABÓLICA

EJERCICIOS TEMA VII. Cadena de transporte de
electrones y fosforilación oxidativa
Poner las siguientes sustancias en orden de tendencia creciente para aceptar electrones:

a) Alfacetoglutarato (produciendo isocitrato).

b) Oxalacetato.

c) O2

d) NADP+.

a) O2
b) NADP+
c) Oxalacetato
d) Alfacetoglutarato

2). ¿Cuál de las siguientes reacciones podría esperarse que transcurriese en la dirección
mostrada en condiciones estándar, suponiendo que están presentes los enzimas necesarios para
catalizarlas?:

I) Malato + NAD + → oxalacetato + NADH + H + .

II) Acetoacetato + NADH + H+ → β-hidroxi-butirato +NAD+.

III) Piruvato + NADH + H+ → lactato + NAD+.

IV) Piruvato +β-hidroxi-butirato → lactato +Acetoacetato.

V) Malato + piruvato → oxalacetato + lactato.

VI) Acetaldehido + Succinato → etanol +fumarato.

3). Los valores de E°’ de los pares redox conjugados NAD+/NADH y piruvato/lactato son –0,32 V
y –0,19 V, respectivamente:

I) ¿Cuál de los dos pares conjugados tiene mayor tendencia a perder electrones?

Explicarlo. El NAD+/NADH ya que su potencial de reducción más grande

II) ¿Cuál es el agente oxidante más fuerte? Explicarlo.

El Piruvato/Lactato ya que es “más positivo” que el NAD+/NADH

III) Si empezamos con concentraciones 1M de cada reactivo y producto a pH 7,0, ¿en qué dirección
transcurrirá la reacción Piruvato + NADH+ H+ ⇔ lactato + NAD+?

De izquierda a derecha

IV) ¿Cuál es la variación de energía libre estándar (∆G°’ a 25° para la conversión de piruvato en
lactato? La reacción sería espontanea -25,09 kJ/mol

V) ¿Cuál es la constante de equilibrio de esa reacción?

(3.03 × 10^11 M-1)^4

4). Calcular la fuerza electromotriz (en voltios) registrada por un electrodo inmerso en una
solución que contiene las siguientes mezcla de NAD+ y NADH a pH 7,0 y 25°C, con referencia a
una semicelda de E°’=0,00 V:

I) NAD+ 1,0mM y NADH 10 mM

II) NAD+ 1,0mM y NADH 1,0 mM.

III) NAD +10mM y NADH 1,0 mM.

5). La reacción catalizada por la Alcohol DH: Acetaldehído + NADH+ +H+ =Etanol + NAD

+ a) ¿En qué sentido se llevará a cabo en condiciones estándar?

b) Calcular ΔG°’ en las condiciones A y B, caracterizadas por las concentraciones mostradas en la

tabla siguiente:

6). Durante la Segunda Guerra Mundial se descubrió que los trabajadores de las fábricas
demuniciones perdían peso de forma rápida. Los estudios condujeron a la identificación del
agente causante: el 2,4 dinitrofenol que, aunque llegó utilizarse en tratamientos adelgazantes,
dejó de utilizarse debido a su toxicidad. ¿Cómo podría explicarse este efecto?

Los dinitrofenoles son una clase de sustancias químicas orgánicas que pueden existir en seis formas
individuales. Los dinitrofenoles no se encuentran de forma natural en el medio ambiente. El DNP
comercial se utiliza principalmente para producir tinturas, otras sustancias químicas orgánicas y
preservativos para la madera. También se utiliza para fabricar reveladores fotográficos, explosivos y
sustancias para el control de insectos.

Las exposiciones a corto o largo plazo al DNP pueden causar un aumento del metabolismo basal (la
velocidad con la cual el cuerpo utiliza energía cuando está en reposo completo), una sensación de calor,
sudor, pérdida de peso y un aumento del ritmo cardíaco, de la frecuencia respiratoria y de la
temperatura corporal. Algunos o todos estos efectos se han presentado en ciertas personas después de
ingerir dosis tan altas como 46 miligramos de DNP por kilogramo de su peso corporal por día
(mg/kg/día) o dosis tan bajas como 1 mg/kg/día de DNP.
7). ¿Cuáles son las fuentes principales de electrones para la ruta de transporte electrónico?

El oxígeno se encuentra al final de la cadena de transporte de electrones, donde recibe

electrones y recolecta protones para formar agua. Si el oxígeno no se encuentra ahí para
recibir electrones, la cadena de transporte de electrones se detendrá y la quimiosmosis no
sintetizará más ATP.
8). Describa los procesos que se cree que están impulsados por el transporte electrónico
mitocondrial.

Las enzimas que catalizan estas reacciones tienen la notable capacidad de crear
simultáneamente un gradiente de protones a través de la membrana, produciendo un estado
altamente energético con el potencial de generar trabajo. Mientras el transporte de electrones
ocurre con una alta eficiencia, un pequeño porcentaje de electrones son prematuramente
extraídos del oxígeno, resultando en la formación de un radical libre tóxico: el Superóxido.

9). Describa las características principales de la teoría quimiosmótica

la quimiosmosis se puede referir a cualquier proceso en el que la energía almacenada en un

gradiente de protones se utiliza para hacer un trabajo. La quimiosmosis es notable por
contribuir con más del 80% del ATP obtenido de la degradación de la glucosa en la respiración
celular, pero no es exclusiva de esta última. Por ejemplo, la quimiosmosis también es
importante en las reacciones dependientes de la luz en la fotosíntesis.
10) La hipótesis del acoplamiento químico no podía explicar por qué debía estar intacta la
membrana mitocondrial durante la síntesis de ATP. ¿Cómo explica la teoría quimiosmótica este
fenómeno?

Peter Dennis Mitchell explica en su teoría que la movilización de electrones a través de la

cadena respiratoria tiene por resultado la formación de un gradiente de protones, el cual es el
resultado del traslado de protones de un lado de la membrana al lado opuesto de la misma.
Este traslado se encuentra mediado por acarreadores electrónicos, los hay de dos tipos,
aquellos ubicados en el lado interno de la membrana mitocondrial que transportan tanto
protones como electrones y los específicos que sólo median el transporte de electrones. Es así
como el establecimiento del gradiente de protones es producido tras la incorporación de los
protones a un lado de la membrana por los acarreadores que transportan tanto protones
como electrones y a la separación de los protones en el otro lado cuando los electrones son
transferidos a acarreadores que no aceptan los protones compartidos. Para que estos
protones puedan ser liberados en el otro lado, los electrones deben pasar a acarreadores al
lado de la membrana externa que no acepta los protones. La anterior movilización tiene la
característica de ser electrogénica.

11) ¿Cómo inhibe el nitrofenol la síntesis de ATP?

El dinitrofenol (DNP) es un agente desacoplante, porque tiene la capacidad de aislar el flujo de

los electrones y el bombeo de H+ de la síntesis de ATP. Esto significa que la energía de la
transferencia de electrones no se puede usar para la síntesis de ATP.

En la fosforilación oxidativa, el flujo de electrones desde el NADH y el FADH2 hasta el oxígeno

conduce al bombeo de H+ desde la matriz hacia el espacio intermembranoso. Este gradiente de
H+ puede producir ATP cuando pasa a través de la ATP sintasa en la membrana mitocondrial
interna. El dinitrofenol disipa el gradiente de H+, reduciendo la producción de ATP. Bajo estas
codiciones, los alimentos que se comen no se usan para producir ATP, lo que hace perder
peso. Sin embargo, un exceso de inhibidor puede rebajar demasiado el nivel de ATP hasta un
límite incompatible con la vida. La diferencia entre la pérdida de peso y la muerte está solo en
una pequeña diferencia en la concentración de dinitrofenol, por lo que este compuesto es
peligroso

12) Se requiere cuatro protones para impulsar la fosforilación del ADP. Explique la función de
cada protón en este proceso.

• El complejo I, también llamado NADH-ubiquinona oxidorreductasa o NADH deshidrogenasa,

que transporta los electrones del NADH a la ubiquinona.

• El complejo II es la succinato deshidrogenasa, única enzima del ciclo de Krebs unida a

membrana, que pasa los electrones del FADH2 a la ubiquinona.

• El complejo III, también llamado citocromo bcj o complejo ubiquinona- citocromo c

oxidorreductasa, que acopla la transferencia de electrones desde la ubiquinona al citocromo
c.
• El complejo IV, también llamado citocromo c oxidasa, es la última etapa de la cadena de
transporte electrónico de la respiración y conduce a los electrones desde el citocromo c hasta
el último aceptor de los electrones, el oxígeno, que se reduce a agua.

13) De varias razones por las que se utiliza tanto el oxígeno en la producción de energía.

Las células requieren de energía para su mantenimiento y desarrollo, energía que obtienen de
la combinación de distintas sustancias químicas con el oxígeno que se respira. No obstante, la
energía que se obtiene de estos procesos solo puede mantenerse por poco tiempo a nivel
celular, es decir, es utilizada casi inmediatamente. Esta circunstancia hace que deba entrar
continuamente oxígeno a las células y por lo tanto deba entrar continuamente oxígeno al
cuerpo humano. Así, la respiración a partir de los pulmones garantiza que esta renovación
continua del gas se lleve a cabo de forma sistemática; en caso de que la misma se viese
obstaculizada por alguna circunstancia, el resultado más probable sería la muerte.

14) ¿Cuáles de las siguientes son especies del oxígeno reactivas?. ¿Por qué son peligrosas las
EROs?

a) O2

b) OH -

c) RO .

d) O2 .-

e) 1O2

15) Describa los tipos de daño celular producido por las EROs.

Así, el estrés oxidativo generado por la sobreproducción de EROs está asociado al

envejecimiento y patologías como la obesidad y la diabetes tipo 2, entre otras.
16) Describa las actividades enzimáticas que utilizan las células para protegerse del daño
oxidativo.

Las enzimas AOX constituyen la primera línea de defensa celular frente al daño oxidativo, las cuales
eliminan el O2 y el H2O2. Aunado a éstas, existe una segunda línea de defensa compuesta por moléculas
no enzimáticas que actúan sobre los radicales libres. Los antioxidantes se pueden agrupar según su
naturaleza química y su modo de acción:

• Enzimas. Actúan específicamente sobre las ERO, degradándolas a moléculas menos nocivas mediante
mecanismos bioquímicos específicos (Figura 2). El proceso inicia con la dismutación del O2 ·- a H2O2
por acción de la enzima superóxido dimutasa (SOD); posteriormente, la catalasa (CAT) y el glutatión
peroxidasa (GPx) actúan convirtiendo el H2O2 en H2 O. La actividad de estas enzimas debe estar en
equilibrio para mantener el equilibrio REDOX intracelular.

• Antioxidantes preventivos. Moléculas encargadas de secuestrar a los iniciadores del proceso

oxidativo, tales como Fe y Cu, los cuales aceleran la formación de ERO. Ejemplo de esto son las
glicoproteínas que se unen al Fe transportándolo en el torrente sanguíneo por medio de la transferrina
y lactoferrina, para ser almacenado intracelularmente por la ferritina. Aunado a esto, la ceruloplasmina
atrapa a los iones de Cu+ impidiendo la formación de radicales libres a partir de peróxidos. En el
plasma el Cu+ no unido a la ceruloplasmina está ligado a la albúmina, aunque ésta no previene su
interacción con H2O2 para formar el radical hidroxilo.

• Antioxidantes secuestradores de ERO. Antioxidantes secuestradores de ERO. Inhiben la cadena de

reacción y propagación en la formación de radicales libres. El ácido úrico es un producto del
metabolismo de las purinas, capaz de atrapar radicales peroxilo, alcoxilo, ERO e iones de Cu+ y Fe+. La
bilirrubina es un producto secundario del metabolismo del grupo hemo (grupo prostético con Fe+,
capaz de unir átomos de O2), con actividad antioxidante que inhibe la peroxidación lipídica en los
sistemas celulares.

• Antioxidantes nutricionales. Para proteger a la célula en contra de los efectos de la oxidación, los
sistemas de defensa antioxidante deben actuar en conjunto para formar un sistema íntegro en donde la
dieta es la mayor fuente de antioxidantes y micro elementos para la síntesis de enzimas antioxidantes.
En este sentido, varios metales (Cu, Zn, Se, Mn y Fe) participan como componentes o cofactores de
enzimas AOX; al igual que las vitaminas, ácido ascórbico, α-tocoferol, β-caroteno y ácido fólico, las
cuales actúan como atrapadores de las ERO.

17) Utilice los valores de E ´0 de la Tabla para calcular el ��ΔG°�� para la oxidación del
malato por la malato deshidrogenasa.

18) En relación con la cadena respiratoria:

a. Se puede separar en cuatro complejos individuales.

Esos componentes redox complejos están situados en la membrana interna mitocondrial,

pudiendo ser separados y aislados, así como ser reconstruidos funcionalmente.

b. El citocromo c está situado antes que la ubiquinona en la cadena.

c. La NADH-ubiquinona oxidorreductasa carece de componentes con hierro no

hemínico. d. La citocromo oxidasa actúa entre los complejos II y III.

e. Los citocromos abundan más en las células de los organismos anaerobios.

19) Cadena respiratoria:

a. Está compuesta por 4 proteínas diferentes.

b. Si el potencial de reducción de NAD+/NADH es -0,32 v y el de ½O2/O= es +0,82 y ello significa que el

cambio de energía libre estándar del proceso oxidativo es insuficiente para que se pudiese acoplar a la
obtención de 4 ATP.

c. En los citocromos su estado oxidado se corresponde al Fe+3 y el reducido al Fe+2.

El hierro de los citocromos es de tipo hemínico y puede estar en forma oxidada o reducida, de
ahí su papel redox en la cadena respiratoria.
d. El citocromo c es una proteína que permanece siempre anclada en la membrana

interna. e. La citocromo oxidasa posee un solo citocromo, el conocido como citocromo

oxigenante.

20) Fosforilación oxidativa:

1. En las células superiores heterótrofas éste es el proceso que mayor energía utilizable produce.

2. Tiene lugar entre puntos de la cadena respiratoria con una separación tal entre sus potenciales que
originan un cambio de energía libre estándar que supera al necesario para la síntesis del ATP.

3. En las células superiores el proceso es mitocondrial y asociado a la membrana interna de las

mitocondrias.

4. En la cadena respiratoria completa existen 4 lugares de fosforilación.

21) En las células hay lugares de fosforilación oxidativa situados entre:

1. Ubiquinona y citocromo oxidasa.

2. Succinato deshidrogenasa y ubiquinona.

3. Citocromo c y oxígeno.

Los lugares de fosforilación oxidativa se sitúan respectivamente entre complejo I/ubiquinona;

complejo II/complejo IV y complejo IV/oxígeno. Por el contrario es suficientemente
exergónico para ello el proceso redox entre complejo/ubiquinona.
4. Piruvato y NAD+.

22) Cada acetilCoA que es oxidado totalmente por oxígeno hasta CO2

proporciona: a. 12 ATP, todos ellos por la fosforilación oxidativa.

b. 12 ATP, todos ellos en fosforilaciones a nivel de sustrato.

c. 11ATP.

d. 10 ATP

e. Nada de lo anterior es cierto.

Produce 12 ATP, uno en fosforilación a nivel de sustrato (en el ciclo), 2 ATP procedentes de la
oxidación de 1 FADH2 y 9ATP procedentes de la oxidación de los 3 NADH originados en el
ciclo.

23) Fosforilación oxidativa:

a. La diferencia de potencial entre los complejos I y II no permite una fosforilación oxidativa acoplada
pero sí una fosforilación a nivel de sustrato.

b. Desde el NADH, por cada átomo de oxígeno consumido, se producen 3 ATP.

Teniendo en cuenta la localización de los lugares de fosforilación oxidativa, P/O será 3 para el
NADH, y 2 para el FADH2
c. Para cualquier sustrato dador de hidrógeno el cociente P/O vale 3.
d. Para el FADH2 el cociente P/O vale 4.

e. El ATP producido intramitocondrialmente pasa al citoplasma y desde allí a la circulación sanguínea,

desde donde se distribuye por todo el organismo.

24) Mecanismos de fosforilación oxidativa:

a. La hipótesis química supone la existencia de intermedios químicos de alta energía de hidrólisis.

Según la hipótesis química la energía liberada en la respiración se podría usar para la síntesis
de un producto intermedio de muy alta energía de hidrólisis de modo que ésta, a su vez, se
acople a la obtención de ATP a partir de ADP y Pi.

b. La hipótesis de Mitchell exige que la ATP-asa sea soluble.

c. La hipótesis conformacional exige que la membrana interna sea totalmente rígida.

d. La hipótesis conformacional exige que los cambios conformacionales se produzcan

independientemente de la existencia del proceso redox respiratorio.

e. La hipótesis química necesita que la ATP-asa esté ligada a membranas.

25) Relación entre la ATP-asa y la teoría quimiosmótica de la fosforilación: 1. El complejo

enzimático ha de situarse tanto en la membrana interna como en la externa mitocondrial.

La ATP-asa está situada en la membrana interna y en su actuación el agua, el ADP, el fosfato y

el ATP pertenecen al espacio intramitocondrial y los protones al intermembranoso,
equivalente al citoplásmico, operando con mayor rendimiento cuanto más ácido sea éste.
2. El ATP que produce o consume se libera o adquiere directamente del citoplasma. 3. El

rendimiento operativo de la fosforilación se incrementa al alcalinizar el citoplasma. 4. El

papel de la respiración celular es el de activar alostéricamente a la ATP-asa. 26)

Desacopladores de la fosforilación oxidativa:

a. Para un mismo flujo respiratorio incrementan la cantidad de ATP obtenido.

b. Disminuyen la producción de ATP y se incrementa el flujo respiratorio.

Al desacoplarse el proceso de la fosforilación respecto a la respiración, no se efectúa aquélla y

dejan de ejercerse sobre ésta los retrocontroles relacionados con la concentración de ATP, por
lo que la intensidad respiratoria se incrementará

c. No actúan en el tejido pardo o marrón.

d. Interrumpen el flujo respiratorio.

e. Interrumpen la oxidación de las coenzimas reducidas.

27) En una preparación celular respirante a la que se le añade 2,4-dinitrofenol cabe esperar
que:

a. Consuma más oxígeno y produzca más ATP.

b. Produzca ATP pero no consuma oxígeno.

c. Consuma más oxígeno y produzca menos ATP.

Un desacoplador afecta negativamente a la fosforilación oxidativa y no modifica la cadena

respiratoria, pero al producirse menos ATP la respuesta biológica es la de incrementar la
velocidad respiratoria.

d. Cese el consumo de oxígeno y la producción de ATP.

e. Consuma el mismo oxígeno y produzca más ATP.

28) Teoría quimiosmótica de la fosforilación oxidativa:

1. Al operar la cadena respiratoria se acidifica el citoplasma.

El movimiento de protones (necesitados o producidos) de la ATP-asa se relaciona con el

espacio citoplásmico, de modo que como consecuencia de la acidificación originada por la
cadena respiratoria la ATP-asa pueda actuar en el sentido biosintético.

2. Los intermediarios redox de la cadena respiratoria no pueden intercambiar electrones sino siempre
hidrógenos (protones más electrones).
3. Cuando un intermediario redox proporciona sólo electrones al siguiente intermediario, cuya
reducción necesita hidrógenos, los protones necesarios se traen desde la matriz mitocondrial.

4. El funcionamiento de la cadena respiratoria provoca la aparición de un potencial químico protónico,

pero no se altera el potencial eléctrico de la membrana.

29) Permeabilidad de las membranas mitocondriales. La interna es impermeable

a: 1. NAD+ / NADH +

La membrana externa no presenta especiales dificultades respecto a la permeabilidad de

metabolitos, mientras que la interna es mucho más impermeable, por ejemplo a los cuatro que
se indican.
2. H+

3. Oxalacetato

4. AcetilCoA
30). El funcionamiento de la cadena respiratoria afecta a los sistemas de transporte a través de
la membrana interna mitocondrial de modo que al incrementarse aquél:

1. Se favorece que el piruvato pase al interior en forma de ácido pirúvico.

2. Se bloquea el intercambio ATP/ADP

3. Se favorece que el fosfato pase al interior en una forma más protónica.

4. Se detienen todos los sistemas de transporte.