IDENTIFICACIÓN DE BACTERIAS

LABORATORIO DE MICROBIOLOGÍA #5

1 González Castro Ángela P, Robles Sierra Bernier Rafael A, Rivera Rangel Verónica.
1 Estudiantes de Microbiología. Facultad de Ciencias Básicas y Aplicadas. Programa de
Biología. VIII Semestre. Riohacha, La Guajira. Marzo. 2021

RESUMEN
Una de las tareas fundamentales del laboratorio de microbiología es la aplicación de una
metodología precisa que permita la identificación de los microorganismos implicados en
procesos clínicos asociados a infecciones o de aquellos que tienen relación con el hombre.
Por esta razón es de vital importancia adquirir la destreza suficiente con las técnicas de
laboratorio estudiadas. Por medio de la ayuda didáctica, ha sido una metodología de
aprendizaje bastante estricta ya que nos lleva a esforzarnos un poco más en el estudio
requerido para el desarrollo normal de la materia.

INTRODUCCIÓN.
Una de las tareas fundamentales del laboratorio de microbiología es la aplicación de una
metodología precisa que permita la identificación de los microorganismos implicados en
procesos clínicos asociados a infecciones o de aquellos que tienen relación con el hombre.
De manera rutinaria, el laboratorio de microbiología aplica técnicas fenotípicas que
permiten lograr los objetivos expuestos. Estos métodos están consolidados en los
laboratorios de microbiología y en la práctica rutinaria diaria muestran algunas
limitaciones que se observan de manera específica y más evidente para algún tipo de
microorganismos.
Por ello, en los ˙últimos años hemos asistido a un crecimiento importante en la oferta de
métodos moleculares rápidos aplicados al diagnóstico microbiológico. En general, acortan
los tiempos de respuesta de los denominados métodos convencionales ya que no
dependen del cultivo. Sin embargo, suelen tener un coste superior, ya que requieren un
equipamiento instrumental y personal cualificado de los que no se dispone en todos los
laboratorios. Asimismo, la identificación molecular no es siempre accesible de forma
inmediata y generalmente se utiliza conjuntamente con la identificación tradicional.
De cualquier forma la verificación de las diferentes formas, tamaños y aspectos de las
colonias va a servir como: Un dato más en la tipificación de la bacteria problema. Una
medida de control para una siembra correcta. Lo ideal es que las colonias se encuentren
más separadas que juntas y que en el proceso de la siembra no haya habido
contaminación. Y verificación de que el medio de cultivo no está contaminado Los medios
sólidos en los que se verifican las colonias pueden ser en placa o en tubo con agar
inclinado, y siempre, sembrándolo por el sistema de estrías.

En placa, sembrándolo por estrías.

El tamaño, forma y aspecto de las colonias obtenidas por esta técnica suele ser bastante
constante para cada género y especie bacteriana, hecho que se puede utilizar como
característica diferencial. Para ello debemos considerar los siguientes aspectos de las
colonias: tamaño, forma, superficie, consistencia, transparencia y coloración y presencia o
no de halos de transparencia.

Tamaño de las colonias.

Tamaño pequeño: colonias puntiformes con aproximadamente 0,5 mm de diámetro o
inferiores.
Tamaño mediano: de 1 a 2 mm de diámetro.
Tamaño grande: de 4 a 6 mm de diámetro.

Tamaño muy grande: colonias extendidas en forma de velo invadiendo toda la superficie
del medio de cultivo.
FUNDAMENTO
Los esquemas tradicionales de identificación fenotípica bacteriana se basan en las
características observables de las bacterias, como su morfología, desarrollo, y propiedades
bioquímicas y metabólicas.

OBJETIVOS
● Revisar las técnicas de identificación fenotípica de las principales bacterias que
pueden encontrarse en muestras
● Manejar guía del proceso de identificación bacteriana.

MATERIALES
• Mechero
• Asa recta
Asa en aro
• Medios de cultivo elaborados en la práctica anterior

PROCEDIMIENTO
La práctica se realizará de manera virtual en la cual se realizará en los siguientes pasos:
● Se realizará la práctica de identificación morfológica y bioquímica de bacteria a
partir de cultivo de bacterias a través de un video en YouTube con los link de
acceso https://youtu.be/L8Tfvzs0KjI
● Se explicara los diferentes tipos de recuento de bacterias. a través de un video en
el link de acceso https://youtu.be/oOVcbloehn8

RESULTADOS
Identificación morfológica y bioquímica de bacterias a partir de cultivos
Las enzimas son las encargadas de realizar los procesos catabolicas en las reacciones
químicas.
1. Indicadores bioquímicos
● Se debe obtener un cultivo puro
● Realizar una coloración de gram, observación de las respuestas a la reacción, se
debe identificar: Las características de las bacterias, sus estructuras, morfológia,
tipo de agrupación, y la presencia y ausencia de estructuras como esporas.
● Realizar pruebas primarias, para ayudar a definir familias, grupo de genero o
géneros que pertenece la bacteria.
● Realizar pruebas secundarias para la identificación de especie.

2. PRUEBA CATALASA
Permite evidenciar la presencia de esta enzima, ya que esta descompone el peróxido de
hidrógeno. Dando respuesta positiva a un burbujeo

3. PRUEBA OXIDASA
Sirve para determinar si una bacteria produce alguna enzima del citocromo C oxidasa.

4. CITRATO
Permite evidenciar si la bacteria es capaz de utilizar en citrato como única fuente de
carbono

5. PRUEBA DE TSI
Permite diferenciar bacterias fermentadoras de no fermentadoras, de los azucares:
lactosa, sacarosa y glucosa. Y se puede determinar la producción de gas y ácido
sulfhídrico.

6. PRUEBA DE LIA
Se utiliza para diferenciar si una bacteria tiene de descarboxilar el aminoácido lisina y
producir ácido sulfhídrico.

7. PRUEBA UREASA
Permite ver si una bacteria posee esa enzima, formando 2 moléculas de amoníaco y
dióxido de carbono.

8. PRUEBA SIM
Permite determinar si un organismo es móvil, o no, si es capaz de liberar acido sulfhídrico,
y si es capaz de desdoblar el indol de la molécula de triptofano.

9. OTROS
Para la identificación de organismos también se utiliza sistemas de multiprueba, como el
API y pruebas moleculares.
Métodos de recuento microbiano.

El medio de cultivo es un grupo de nutrientes, factores de crecimiento y otros

componentes, que pueden crear las condiciones necesarias para el crecimiento de
microorganismos (Monod.J, 2017). La diversidad metabólica de los microorganismos es
muy extensa. Por esta razón, existen muchos tipos de medios de cultivo y no existe un
medio de cultivo universal adecuado para todos los medios (Varela.G, 2002).

El crecimiento de una población bacteriana puede ser entendido desde diferentes

perspectivas y de acuerdo a éstas se puede llegar a determinar la medida del crecimiento
mediante diversas metodologías (3). Para algunos, el crecimiento es la capacidad para
multiplicarse que tienen las células individuales, esto es iniciar y completar una división
celular. De esta forma, se considera a los microorganismos como partículas discretas y el
crecimiento es entendido como un aumento en el número total de partículas bacterianas.
Para otros, el crecimiento implica el aumento de los microorganismos capaces de formar
colonias debido a que sólo se tiene en cuenta el número de microorganismos viables, esto
es capaces de crecer indefinidamente.

El crecimiento de poblaciones bacterianas puede entenderse desde diferentes ángulos

opiniones y basadas en estas puede ser determinado a través de varios crecimientos
metodología (Basu,S. 2017). Para algunas personas el crecimiento es multiplica la celda
tiene personalmente, esto es para comenzar y terminar una división celular. Semejante,
piensa que los microbios son partículas discretas cuyo crecimiento es entendido como un
aumento en el número partículas bacterianas totales. para otros, crecimiento significa
aumento microorganismos que pueden formarse colonia, porque solo ocurre en cuenta la
cantidad de microorganismos factible, esto puede crecer indefinidamente

El recuento microbiano.
El número de placas es uno de los métodos más utilizados para determinar el número de
microorganismos viables en un medio líquido. Cuando la concentración es baja, la muestra
se filtra a través de una membrana y luego la membrana se transfiere al medio de cultivo
en la placa de Petri. Los microorganismos retenidos en la membrana formarán colonias
que permitirán cuantificarlos. Cuando la concentración sea alta, realizaremos diluciones
en serie del orden de 1:10, llegando a una dilución de 10-7 o superior. Se inocula una
alícuota de estas diluciones en un medio de placa de nutrientes donde las bacterias crecen
para formar colonias. La concentración en la alícuota de inoculación es demasiado alta, las
bacterias crecerán en grandes cantidades, pero si la concentración es demasiado baja, la
cantidad de UFC puede ser muy baja. Entre los dos extremos de dilución, algunas placas
contendrán muchas colonias entre 30 y 300, lo que permite cuantificar (Scheffers, J,
2013).

Del método de recuento en placa se dividen dos variables muy utilizadas que son:

El recuento en placa por siembra en profundidad: que consiste en añadir medio de cultivo
fundido y enfriado a 50ºC sobre placa de Petri que contiene una cantidad determinada de
la muestra diluida. Se tapa la placa y se rota para mezclar la muestra en el agar. Cuando el
agar solidifica se incuban las placas. Las colonias se desarrollan tanto dentro del agar
como en la superficie. Es un método generalmente utilizado para el recuento de
microorganismos anaerobios facultativos o microaerófilos

El recuento en placa se realiza mediante inoculación de superficie, que implica inocular un

volumen conocido de dilución de muestra en la superficie del medio de cultivo en una
placa de Petri. En este método, todas las colonias crecen en la superficie del medio. Esta
técnica se usa generalmente para contar bacterias aeróbicas (Varela, G. 2008).

El recuento microscópico es una técnica común, rápida y económica que utiliza equipos
disponibles en los laboratorios de microbiología. Las cámaras de recuento se utilizan
comúnmente para estos recuentos, aunque también pueden estar hechas de muestras
filtradas por filtros, transparentes o teñidas con tintes fluorescentes (Kirchman, D 1982).
La mayor dificultad con el recuento de la cámara es obtener repetibilidad al llenar la
cámara con líquido. Otra dificultad es la adsorción de células en superficies de vidrio
(incluidas pipetas). Esta adsorción es muy importante en el proceso de dilución de la
muestra, y esta adsorción se minimizará cuando se diluya en un medio de alta fuerza
iónica (solución fisiológica o el medio más pequeño sin fuente de carbono (Knaysi, G.
2017)).

El recuento directo al microscopio permite determinar el número de células microbianas

mediante observación directa al microscopio. Tienen grandes ventajas porque la muestra
se puede utilizar directamente o la dilución se puede preparar como otros métodos de
recuento (Jennison, W. 2017).

CONCLUSIÓN.

Se han evaluado algunos de los métodos de recuento microbiano más utilizados para
determinar las ventajas y desventajas de cada microbio.

Aunque existen muchos tipos de recuentos de células y algunos son mejores que otros, la
mayoría de ellos siempre tienen desventajas. Algunas de las desventajas de contar con
métodos de siembra en profundidad y superficie son el largo tiempo necesario para
preparar el medio de cultivo y el riesgo de contaminación por otros microorganismos que
puedan afectar el medio de cultivo.

Una de las ventajas del recuento de células viables es que forman UFC. El recuento
microscópico no determina si es una célula viva o muerta, a menos que esté activa o
teñida de por vida.

Sin duda, una de las ventajas del método de microscopía es que puede proporcionar otra
información sobre el tamaño y la forma del objeto que se está contando.
En el método del microscopio de cámara de Neubauer, el margen de error aumenta a
medida que la concentración de células en la muestra es alta, y si el tamaño de las células
microbianas es muy pequeño, será difícil de ver.

En general, se puede decir que dependiendo del tipo de microorganismos a cultivar, qué
método se debe estudiar con las mejores características de conteo sin un rango de error
tan grande, es simple y económico.

BIBLIOGRAFÍA

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-Kirchman D, Sigda J, Kapuscinski R, Mitchell R. Statistical analysis of the direct count

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- Knaysi G, Ford M. A Method of Counting Viable Bacteria in Milk by Means of the

Microscope. J Dairy Sci [Internet]. 1938 Mar 1 [cited 2017 Nov 20];21(3):129–41. Available
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- Ortega, Y; Quevedo F. 1991. Garantía de la Calidad de los Laboratorios de Microbiología

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http://doi.wiley.com/10.1002/9780470 015902.a0001419.pub2
- Varela G, Grotiuz G. Fisiología y metabolismo bacteriano. Uruguay, Editor Cefa [Internet].
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FisiologiayMetabolismoBacteriano.pdf