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R E G U L A C I O N D E L A S C O N C E N T R A C I O N E S
I N T R A T I S U L A R E S y L A P R O D U C C I O N
DE ANDROGE NOS E N T E S T I C U L O
HUMANO Y D E RATA.
T E S I S
19 8 6
El presente trabajo de Tesis para optar al titulo
A mi esposo.
A mis hijos:
I N D I C E
INTRODUCCION
Desarrollo y diferenciación............................... 1
EL TESTICULO............................................... 5
Barrera hematotesticular.................................. 6
La célula de Leydig..................................... 6
OBJETIVOS................................................. 44
PRIMERA PARTE
MATERIALES Y METODOS I
MATERIALES................................................ 45
Reactivos utilizados....................................... 45
Pacientes y tratamientos................................. 47
METODOS................................................... 50
- Radioinmunoensayo (RIE)................................ 55
Otros métodos............................................. 64
RESULTADOS I
DIMARIOS HUMANOS.......................................... 65
Controles metodológicos.................................. 65
cación de esteroides................................... 70
pididimarios.............................................. 79
NADAL...................................................... 93
y 3 a -Diol en suero...................................... 99
SEGUNDA PARTE
MATERIALES Y METODOS II
MATERIALES................................................ 129
- Animales................................................ 130
METODOS................................................... 132
bovina.................................................. 139
- Ensayo.................................................. 140
RESULTADOS II
3 a -Diol.................................................. 14 8
aisladas.................................................. 164
CONCLUSIONES.................... 194
BIBLIOGRAFIA.................... 199
vii
ABREVIATURAS.
ATP Adenosina-trifosfato.
C control.
Ci curie•
CoA coenzima A.
col colesterol.
CP carcinoma de próstata.
17 b ol-3-ona.
3a
OV-Diol
-Diol 5 a -androstrandiol; 5 a -androstano
3 a , 17 b -diol.
viii
ES error estándar.
estrógenos.
3H tritio.
H-E hematoxilina-eosina.
H hormona.
HR hormona-receptor.
hs horas.
i.p. intraperitoneal.
K constante de asociación.
a
ix
LAN lanosterol.
LH hormona luteinizante•
LHRH factor liberador de gonadotrofinas•
LP lipoproteinas.
M molar,
min minutos.
Mix metil-isobutil-xantina.
NAD nicotinamida-adenina-dinucleótido.
ng nanogramos.
P pendiente.
PREG pregnenolona.
pg picogramos.
PRL prolactina.
r coeficiente de correlación.
RIE radioinmunoensayo.
sexuales.
T testosterona?4-androsten 17 (3-ol-3-ona.
estrógenos.
yuCi microcurie.
microgramo.
F*
ui unidades internacionales.
DESARROLLO Y DIFERENCIACION.
EL TESTICULO.
te relacionados.
BARRERA HEMATOTESTICULAR.
1958).
LA CELULA DE LEYDIG.
g lu c o s a .
In d e p e n d ie n te m e n te de su o r ig e n , e l c o le s te r o l lib r e
9
Figura 1.
/
Organización espacial del aparato biosintetico de la
Figura 1 .
Figura 2.
Reacciones involucradas en la conversión de 5-pregnenolona a tess
tosterona.
A + B = 3 ^ hidroxiesteroide-deshidrogenasa + Z ^ - 3 cetohidroxi-
esteroide-isomerasa.
C = 17 -hidroxilasa.
D = C 17 - 20 liasa o desmolasa.
E = 17 -hidroxiesteroide-deshidrogenasa.
13
deshidrogenasa respectivamente.
genos y estrógenos.
1975) .
de importancia fisiológica.
EJE HIPOTALAMO-HIPOFISO-GONADAL.
anteriormente.
y co l ., 197 7) .
otra sección.
1978) .
1972).
c o l ., 1980).
son y c o l ., 1975).
Comunicación intercelular:
1984) .
- 28 -
complejo esteroide-protelna.
5 -1
afinidad (K : 10 M ) y alta capacidad, tratándose de una
el
unión inespecifica ya que la albúmina es capaz de ligar
eda d .
rida.
la hormona (H ).
sobre la cromatina.
col., 1951).
y c o l ., 1961).
c o l ., 1960).
ve y Blaquier, 1977).
1981).
dos •
O B J E T I V O S.
M A T E R I A L E S .
REACTIVOS UTILIZADOS.
PACIENTES Y TRATAMIENTOS.
entre 2 y 6 meses.
T a b 1 a 1.
KJ 76 CP —
Qrquidectomia
FV 59 CP n
LC 71 CP — N
AM 61 CP — n
LG 62 CP — ii
JJ 60 CP — M
FU 63 CP ii
FE 64 CP — n
GJ 72 CP — n
BG 76 CP — n
LM 67 CP — n
GR 61 CP — M
MD 64 CP — ii
dienoestrol 5mg/dia
SM 68 CP ii ii
FJ 39 CP n ii
PF 69 CP n ii
SJ 55 CPe — M
AB 18 CT — N
JY 34 CT — M
CP : carcinoma de próstata.
CT : turar de testículo
49
Tabla 2.
0 52 CP
- — + -
bromocriptina +
P 58 CP
—
+ -
bromocriptina — +
Q 59 CP
—
+ -
bromocriptina — +
R 62 CP
—
+ -
bromocriptina — +
S 63
—
+ -
CP
bromocriptina — +
T
-— + -
64 CP
bromocriptina — +
— + -
U 65 CP
bromocriptina — +
— -
V 66 CP
bromocriptina — +
— + -
X 69 CP
bromocriptina — +
— + -
K 70 CP
bromocriptina — +
— + -
Z 71 CP
bromocriptina — +
—— + -
M 73 CP
bromocriptina — +
M E T O D O S
el transporte
miento .
paciente.
histológico.
1 minuto.
fase de diclorometano.
tes
b) 5 mi de isooctano (lavado).
3 OC -Diol).
- RADIOINMUNOENSAYO (R I E ).
Azida sódica 1 g
CINa 9 g
Gelatina 1 g
Este buffer ajustado a pH 7> fue además utilizado para
del carbón.
varon a 4QC.
sido preparados.
mismo desplazamiento.
Ant i-Testosterona.
testosterona 100 %
dihidrotestosterona 100 %
epitestosterona 0.1 %
androstandiol 1.6 %
androstandiona 0.3 %
dehidroepiandrosterona 0.002 %
estradiol 0.003 %
estriol 0.001 %
estrona 0.001 %
progesterona 0.05 %
1 7 (X-hidroxiprogesterona 0.003 %
desoxicorticosterona 0.001 %
58
Anti-DHT
dihidrotestosterona 100 %
testosterona 23 %
5 Of-androstan-17^-ol-3-ona 1.5 %
androstenediona
O
VO
%
•
androstenediol 0.3 %
androsterona 0.17 %
Anti-3 -Diol
pregnan-30( -ol-20-ona 5 %
dihidrotestosterona 0.3 %
testosterona 0.2 %
progesterona 0.1 %
pregnenolona 0.1 %
17 o(-OH-progesterona 0.1 %
dehidroepiandrosterona 0.1 %
androstenediona 0.1 %
estrona 0.1 %
estradiol 0.1 %
trifuga refrigerada.
y Técnicas).
microfotografia automático.
62
roideas.
OTROS METODOS.
como estándar.
CONTROLES METODOLOGICOS.
terferencias en el ensayo.
2.00 - 0.09).
67
Figura 3 .
y ep id id imar io.
Figura 4 .
y epididimario
iFigura 5 .
cular y epididimario
y 3 -Diol respectivamente.
DE ESTEROIDESi
previo a la homogeneización.
tico.
Figura 6 .
Concentración de andrógenos testiculares determinados por RIE
previa extracción, purificación y aislamiento en microcolumnas
de celita. Las barras vacias corresponden a las concentraciones
de T y DHT en pacientes con carcinoma de próstata sin tratamien
to previo. Las barras sombreadas muestran las concentraciones
de ambos andrógenos en pacientes con carcinoma de próstata
tratados con dienoestrol, 5 mg/dia durante más de 2 meses.
77
geno reducido.
tivamente .
carcinoma de próstata.
MARIOS.
Figura 7 .
Concentración de T y DHT determinados por RIE en la cabeza
del epididimo, en pacientes con carcinoma de próstata sin trata
miento previo (barras vacias) y luego de la administración
de dienoestrol (5 mg/dia)por periodos superiores a 2 meses (ba
rras sombreadas).
81
ng/g; cuerpo: 40,9 - 7,7 ng/g y colas 40,2 - 6,7 ng/g mientras
21,0 - 4,4; cuerpos 20,8 - 5,1 y colas 17,7 - 3,0. Las rela
ciones T/DHT fueron: 1,9 - 0,4; 1,9 - 0,3 y 2,2 - 0,5 respec
Figura 8 .
Concentración de T y DHT en los diferentes segmentos epididima-
rioss cabeza (Ca) cuerpo (Cu) y cola(Co) en 6 pacientes con car
cinoma de próstata sin tratamiento previo (CA) (barras lisas) y
3 pacientes que hablan recibido dienoestrol (CA + estrógenos)
durante 2 meses antes de la orquidectomia (barras sombreadas).
83
79% (p < 0.01); cuerpo 84% (p <0.02) y cola 79% (p < 0.01)
(Figura 8).
proteínas.
y epididimo.
85
Figura 9.
Concentraciones de Zn en biopsias de tejido testicular y epididi^
mario determinados por espectroscopia de absorción atómica
previa destrucción de la materia orgánica. Las barras vacias
corresponden a pacientes con carcinoma de próstata (CP) sin
tratamiento previo y las sombreadas a 3 pacientes bajo trata
miento con estrógenos (CP + estrógenos).
86
13) .
Figura 10.
Relación entre las concentraciones de T y Zn en tejido testi-
cular humano. Coeficiente de correlación r = 0.53 (p < 0 05) .
88
Figura 11.
Figura 12.
Figura 13.
Figura 14.
Figura 15.
circulantes de PRL.
Figura 16.
pg/ml).
-97
Figura 17
Figura 18.
3 O^-DIOL.
vo (Figuras 19 y 20).
DIMO,
testosterona 30% (p < 0.01) DHT 15% y Diol 20%(p < 0.05).
Figura 20.
Figura 21.
Figura 22.
Figura 23.
Figura 2 4 ,
vacuolas.
* Figura 25.
. Figura 26.
Figura 27.
de andrógenos.
res.
nal de la enzima.
114
vamente.
humano.
del epididimo.
1949).
la espermatogénesis.
el cinc.
masculina.
r io.
la gonada.
tográfica.
rentes
4
grupos, que la bromocriptina reduce el número de
la administración d© bromocriptina.
LH sérica.
M A T E R I ALES.
REACTIVOS UTILIZADOS.
Comp. (E E .U U ),
ANIMALES Y TRATAMIENTOS.
— ANIMALES• ^ j. • i • a_ on * f\ ^
--------- Se utilizaron ratas entre 30 y 40 dias de edad
ad libitum.
metros :
andrógenos.
1984) .
M E T O D O S .
(Rat LH RPl).
de
i
4 8 a 72 hs a 4QC, se separó la hormona unida de la libre
a testosterona + DHT.
dos humanos.
PROLACTINEMIA.
de medio 199.
de incubación).
95%.
DETERMINACION DE AMPclclico.
y col. (1971)
- ENSAYO.
Cada tubo contenia 50 Mi de la dilución apropiada de
de hCG.
__5
de bromocriptina (1.3 x 10 M) fueron estimuladas con 0.25
descriptas.
de dicha hormona.
143
TESTICULAR DE LA RATA.
tores.
Figura 28
Tratamiento n PRL LH
ng/ml ng/ml
Br
Efecto del tratamiento con distintas dosis de Br en ratas entre los 30 y 40 dia¡
n = número de animales.
indetectables.
utilizadas.
3 CX-DIOL.
Figura 2 9 .
bromocript ina
mg/kg peso/dia
151
bromocript ina
mg/kg peso/dia
152
ta dopaminérgico.
producidos.
Figura 30 .
Figura 31,
a partir de 0,4 m U I .
Figura 32.
muy semejante.
Figura 33,
Figura 34.
Figura 35.
respecto al control.
Figura 36.
Respuesta a la hCG nin vitro" para la producción de AMPc
por testículos enteros decapsulados provenientes de ratas
tratadas con Br (3 mg/kg peso/dia) entre los 30 y 40 dias
de edad. Las barras abiertas corresponden al grupo control
y las sombreadas al grupo tratado. Cada barra representa
el valor medio íerror estandard (n = 3). * Datos significati
vamente diferentes del control (p ^.0.05, test de Student).
164
estudio.
menores de bromocriptina.
AISLADAS.
teñidas.
Figura 37.
BROMOCRIPTINA Y PROLACTINA.
dogénica en la gonada.
con hCG.
con vehículo.
Figura 38.
-5
Efecto de la administración intratesticular de Br (10 M)
sobre la respuesta a la hCG " in vitro" para la producción
de (A): T; (B): 3 o^-Diol por testículos enteros decapsulados
(40 dias de edad). Las barras abiertas corresponden a testicu
los controles inyectados con vehículo y las sombreadas a
los contralaterales inyectados con Br. Cada barra representa
el valor medio - error estandard (n = 3). * Datos significati
vamente diferentes del control (p 40,05, test de Student).
171
Figura 39.
4
Figura 4 0 .
-5
Respuesta a Br (5 x 10 M) "in vitro" para la producción
de (A): T; (B ); 3 -Diol, basal y estimulada con hCG por
células intersticiales provenientes de ratas de 40 dias de
edad. Las barras abiertas corresponden a las suspensiones
celulares controles y las sombreadas a los incubados con
Br. Cada barra representa el valor medio - error estándar
(n = 6). *Datos significativamente diferentes del control
(p ^ 0.02, test de Student).
175
Figura 42.
Figura 43.
Figura 44.
Figura 4 5 .
Figura 46.
—8
Respuesta a PRL ( 5 x 10 M) "in vitro" para la producción
de (A): T y (B): 3 0 ( -Diol basal y estimulada con hCG por
células intersticiales provenientes de ratas de 40 dias de
edad. Las barras abiertas corresponden a las suspensiones
celulares controles y las sombreadas a las incubadas con
-f
PRL. Cada barra representa el valor medio - error estándar
(n = 3). * Datos significativamente diferentes del control.
DISCUSION II
182
1983) .
realiza el estudio.
andrógeno.
estimulo.
receptor.
ción de hipoprolactinemia.
lados .
de ser descartado.
19 2 -
receptor de LH/hCG.
e "in vitro".
CONCLUSIONES
194
en animales de experimentación.
a continuación:
órganos.
lact inemia .
minérgico.
-5
- Bromocnptina en concentraciones de 5 x 10 M ejerce
— 8
- El agregado de PRLo (5 x 10 M) a testículos decapsula
th
Bartke, A. (1973). 9 L Acta Endocrinológica Congress. Abstract
NQ 22 Acta endocr. (Kbh) Suppl. 177: 22.