La morfología macroscópica de las colonias de los hongos, es una

herramienta importante para la identificación de estos agentes, para lo cual

se tienen en cuenta una serie de parámetros que se deben analizar y que el
estudiante de Micología aprenderá
Entendemos por colonias el conjunto de hongos que se originan a partir de
una espora que germina, o de un fragmento de micelio de un
microorganismo determinado. Las colonias se forman a partir de
prolongaciones tubulares conocidas como tubo germinal que darán origen a
las hifas, que se alargan por el crecimiento de su extremo distal. Las hifas
conforman el talo o micelio. El micelio que se origina se va extendiendo
radialmente y las colonias que se forman tienen características propias para
cada especie o grupo de especies. Si deseamos estudiar la morfología
macroscópica de una colonia se deben estudiar las siguientes características:
forma y tamaño, color en la superficie(blanca, rosada, gris, anaranjada, rojiza,
verde, negra) o en el reverso (hialina o dematiácea), difusión del pigmento,
textura (yesosa, glabra, terrosa, granulosa, filamentosa, cremosa), superficie
(elevada o plana, levantamiento central), aspecto (plegado, radiado,
cerebriforme, crateriforme) y rapidez de crecimiento (las levaduras y los
hongos oportunistas crecen en 24 a 48 horas, y los dermatofitos en cinco a
diez días).

La observación microscópica de los hongos es importante para su

identificación, existen tres técnicas fundamentales para este proceso
Para la observación de las características de esporulación de los hongos se
utilizan las técnicas: microcultivo, desmenuzamiento o disgregación y los
preparados con cinta pegante. Para la visualización de las estructuras se
utiliza el azul de lactofenol, colorante que penetra en el protoplasma de los
hongos haciendo más visibles las estructuras internas
TÉCNICA DEL MICROCULTIVO (ver figura 1)
1. Tomar la caja Petri estéril y colocar dos palillos y el algodón (ver figura 1),
luego la lámina de vidrio sobre los dos palillos. Sobre la lámina, se colocará
de manera aséptica un cuadrado de agar Sabouraud (de 1 cm de lado),
previamente cortado con ayuda del asa recta. Inocular el hongo en estudio
en el centro de cada uno de los 4 lados del agar por medio de punciones.
3. Cubrir el agar con una laminilla (cubreobjetos estéril) y colocar agua
destilada sobre el algodón. TODO BAJO CONDICIONES DE ESTERILIDAD.
4. Incubar a temperatura ambiente durante 5 días. Una vez cumplido el
tiempo de incubación, colocar el cubreobjetos recogido del bloque de agar
microcultivado en una gota de azul de lactofenol en una lámina para el
montaje microscópico. 5. Enfocar con objetivo de 40x y 100 x.

TÉCNICA DE LA DISGREGACIÓN O DESMENUZAMIENTO (ver figura 2)

1. Las láminas deben estar completamente limpias y desengrasadas, colocar
una gota de azul de lactofenol y, con la ayuda de un asa recta o agujas de
disección estériles, tomar micelio del hongo esparciéndolo cuidadosamente
en la gota y desmenuzar la colonia. Colocar una laminilla evitando la
formación de burbujas (soltarlas con un ángulo aproximado de 45º).
2. Enfocar con objetivo de 40x y 100 x.

PREPARADOS CON CINTA PEGANTE (ver figura 3)

1. Tomar la cinta adhesiva transparente, presionar la parte engomada
suavemente contra la superficie de las colonias, tomando una porción del
micelio aéreo.
2. Colocar la cinta con la parte engomada hacia abajo sobre un portaobjetos
con una pequeña gota de azul de lactofenol y examinar en objetivo de 40x.

Existen diferentes técnicas para la siembra y repique de hongos en medios de

cultivo teniendo en cuenta las características morfológicas de las colonias.
Las técnicas de inoculación para obtener colonias varían según sus
necesidades y requieren el uso de diversos utensilios: agujas de mango o de
anillo, bisturí, lancetas, transportadores normalizados, etc. Las colonias se
pueden obtener a partir de fragmentos de micelio joven, de otras estructuras
sin esporas o a partir de esporas.
Siembra a partir de un fragmento de micelio (Figura 1A)
Si se van obtener colonias a partir de fragmentos de micelio joven o de otras
estructuras sin esporas, se puede cortar una parte elegida de la colonia que
se encuentre en las colonias aisladas del ambiente con cualquiera de los
utensilios mencionados en el marco teórico y la transportamos a la placa que
queremos inocular. El fragmento se coloca sobre la superficie del agar
abriendo al mínimo la caja a fin de evitar infecciones.
Siembra a partir de esporas (Figura 1B) Si deseamos obtener una colonia a
partir de esporas, con una mano abrimos la caja que queremos sembrar
manteniéndola boca abajo; de esta forma las esporas que se desprenden del
utensilio utilizado para la inoculación del medio caen sobre el revés de la
caja. Las placas se mantienen boca abajo, sin tocarlas. De esta forma se evita
el crecimiento de multitud de colonias nacidas de la germinación de cada
espora que hubiera caído, si se le hubiera dado vuelta a la caja.
Siembras en estría (Figura 2)  Para la realización de este tipo de siembra se
pueden utilizar cajas y tubos con agar inclinado.  Siembra en tubos: se
sostiene el tubo a inocular con una mano y con la otra el asa, pero de tal
manera que nos queden libres dos dedos de esta misma mano, para así abrir
y sostener los tapones del tubo. Los tapones no deben caer nunca de la
mano, ni hay que dejarlos sobre la mesa de trabajo. Se abre el tubo,
flameamos el cuello y también el asa; con el asa tomamos un poco de
esporas o de micelio de la colonia que queremos sembrar, la introducimos en
el tubo sin inocular y depositamos el material que esta adherido al asa o lo
hacemos deslizar en estría, sobre la superficie del agar.  Se flamea el cuello
del tubo y se coloca el tapón. También se debe flamear el asa.
Estructura de los Hongos

Para conservar su capacidad de adaptación, es necesario que estos

organismos se reproduzcan. Los hongos pueden presentar una reproducción
bien sea sexual (estado teleomorfo), asexual (estado anamorfo) o pueden
tener ambos tipos de reproducción (estado holomorfo). La reproducción
sexual exige condiciones previas tanto del hongo como del ambiente, por lo
cual, esta forma de reproducción no se presenta con mucha frecuencia. La
esporulación asexuada es útil para la identificación de los hongos debido a
que se presenta con mayor frecuencia en el laboratorio, para esto es
necesario analizar el tipo de esporas asexuales producidas por el hongo, su
morfología y ordenamiento en el cuerpo de fructificación.
El examen directo es el procedimiento más utilizado en el diagnostico
presuntivo de micosis, debido a que permite la identificación del agente
etiológico en una muestra clínica. Con frecuencia es la única herramienta
utilizada para diagnosticar estas enfermedades. Existen tres tipos de examen
directo los cuales son: el fresco, el frotis y la biopsia; en los cuales se emplean
una serie de reactivos y coloraciones para visualizar las estructuras fúngicas.
Entre los reactivos más utilizados en el diagnóstico micológico se encuentran:
el hidróxido de potasio (KOH) a diferentes concentraciones (10 – 40%); el
agua destilada y el lugol. Entre los colorantes se encuentran las tinciones de
Gram, Giemsa, Wright, Kinyoun, Coloración plata–metenamina y
hematoxilina– eosina, entre otros. En algunas micosis, es necesario para
confirmar el diagnóstico, la realización de un cultivo en medios de
aislamiento primario, tales como el agar Sabouraud con o sin antibióticos.

PROCESAMIENTO DE LAS MUESTRAS EXAMEN DIRECTO Para la observación

microscópica se puede utilizar KOH al 20% + tinta china (1:1). También se
puede utilizar azul de lactofenol. Para el procesamiento de la muestra, se
toma una pequeña cantidad de las escamas y se le adiciona una gota de
cualquiera de los reactivos mencionados anteriormente; se le coloca un
cubreobjetos. Se observa en el microscopio a 10x y 40x

Se debe observar cualquiera de las siguientes estructuras:

− Levaduras o blastosporas redondas u ovales de pared gruesa de tamaño
variado, filamentos cortos de pared gruesa cuando se encuentran aislados o
en grupos. En ocasiones los filamentos son más largos: indican
presuntamente Pitiriasis versicolor.
− Hifas largas septadas, hialinas y artrosporas: indican presuntamente
dermatofitosis. − Hifas septadas o aseptadas hialinas o dematiáceas: indican
una dermatomicosis.
Las esporas producidas por los hongos filamentosos pueden presentar
diferentes características de tamaño y forma, pueden estar constituidas por
una célula conocido como ameroconidio o cuando presentan más de una
célula didimoconidios, fragmoconidios, dictioconidios entre otros, estos
pueden ser móviles o inmóviles.
Los conidios pueden ser producidos y permanecer hasta su madurez dentro
de estructuras especializadas como esporangios, zoosporangios o ascomas; o
formarse y madurar dentro de estructuras especializadas (esporógenas) tales
como basidios, fiálides o anélides o, directamente, de la hifa, como los
artroconidos y aleurosporas, producidos por varios tipos de hongos, incluidos
los dermatófitos (agentes de tiñas). Todas estas características facilitan la
identificación clásica de los hongos filamentosos