Universidad de Guayaquil

Facultad de Ciencias
Químicas Carrera: Química
y Farmacia
Laboratorio de Análisis
Instrumental I
Prácti
ca DETERMINACIÓN ESPECTROFOTOMÉTRICA DE VITAMINA B12
N° 10
Integrantes:
 Karla Vera González
 Andrea Guzmán Cabezas
 Wellington Lucin

GRUPO: 12 CICLO II (2020-2021)

Objetivo de la práctica de laboratorio
1. Determinar la concentración de cianocobalamina (vitamina B12) en un producto, por medio de la
aplicación de métodos espectrofotométricos.

Marco teórico
El descubridor de las vitaminas fue el polaco Casimir Funk (1884-
1976), su experiencia fue posible gracias a los estudios efectuados
previamente por el médico Christian Eijkman (1855- 1930), que había
investigado la importancia del cascabillo del arroz en la curación y
prevención del beriberi, una enfermedad neurológica debida a carencias
alimentarlas y particularmente difundida en Asia.
A raíz de estas investigaciones, Funk logró aislar a partir del arroz un
principio activo al que le denominó TIAMINA. Es la primera vitamina
que se logró aislar bautizándola con el nombre de vitamina B1. El
termino vitamina fue acuñado mediante la unión de las voces "vida" y "amina", el género químico de la
sustancia
Las vitaminas son sustancias presentes en los alimentos en pequeñas cantidades que son indispensables para
el correcto funcionamiento del organismo. Actúan como catalizador en las reacciones químicas que se
produce en el cuerpo humano provocando la liberación de energía
Existen 13 vitaminas esenciales. Esto significa que estas vitaminas se requieren para que el cuerpo funcione
apropiadamente. Las cuales son:

 Vitamina A
 Vitamina C
 Vitamina D
 Vitamina E
 Vitamina K
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  Vitamina B1 (tiamina)
 Vitamina B2 (riboflavina)
 Vitamina B3 (niacina)
 Ácido pantoténico (B5)
 Biotina (B7)
 Vitamina B6
 Vitamina B12 (cianocobalamina)
 Folato (ácido fólico y B9)
Las vitaminas se dividen en:

VITAMINAS HIDROSOLUBLES
son aquellas que se disuelven en el agua. En este grupo se encuentran las vitaminas C y las B1, B2, B3, B6 y B12.
Su almacenamiento en el organismo es mínimo, por lo que la dieta diaria debe de cubrir las necesidades de estas
sustancias. Con la práctica de la actividad física se produce gran número de reacciones metabólicas en las que
están implicadas las vitaminas, por lo que el ejercicio intenso puede provocar carencias de estas vitaminas siendo
necesaria la ingesta de suplementos.

VITAMINAS LIPOSOLUBLES
El organismo las almacena en los tejidos, el hígado y la grasa. Son las vitaminas A, E, D y K. Son solubles en los
cuerpos grasos, son poco alterables, y el organismo puede almacenarlas fácilmente. Dado que el organismo puede
almacenarlas como reserva, su carencia estaría basada en malos hábitos alimentarios. Existe el riesgo de
saturación si se consumen de forma excesiva e incontrolada.

 La vitamina A ayuda a la formación y mantenimiento de dientes, tejidos óseos y blandos, membranas

mucosas y piel sanos.
 La vitamina B6 también se denomina piridoxina. La vitamina B6 ayuda a la formación de glóbulos
rojos y al mantenimiento de la función cerebral. Esta vitamina también juega un papel importante en
las proteínas que participan de muchas reacciones químicas en el cuerpo. Mientras
más proteína coma, más piridoxina requiere su cuerpo.
 La vitamina B12, al igual que las otras vitaminas del complejo B, es importante para el metabolismo.
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 También ayuda a la formación de glóbulos rojos y al mantenimiento del sistema nervioso central.
 La vitamina C, también llamada ácido ascórbico, es un antioxidante que favorece los dientes y encías
sanos. Esta vitamina ayuda al cuerpo a absorber el hierro y a mantener el tejido saludable. También es
esencial para la cicatrización de heridas.
 La vitamina D también se conoce como "la vitamina del sol" debido a que el cuerpo la produce luego
de la exposición a la luz solar. De 10 a 15 minutos de exposición al sol 3 veces a la semana son
suficientes para producir los requerimientos corporales de esta vitamina para la mayoría de las
personas y en la mayoría de las latitudes. Es posible que las personas que no viven en lugares soleados
no produzcan suficiente vitamina D. Es muy difícil obtener suficiente vitamina D únicamente de
fuentes alimenticias. Esta vitamina le ayuda al cuerpo a absorber el calcio. Usted necesita el calcio
para el desarrollo normal y el mantenimiento de dientes y huesos sanos. Asimismo, ayuda a mantener
niveles sanguíneos apropiados de calcio y fósforo.
 La vitamina E es un antioxidante, conocida también como tocoferol. Ayuda al cuerpo a formar
glóbulos rojos y a utilizar la vitamina K.
 La vitamina K es necesaria porque sin ella, la sangre no se solidificaría (coagularía). Algunos estudios
sugieren que es importante para la salud de los huesos.
 La biotina es esencial para el metabolismo de proteínas y carbohidratos, al igual que en la producción
de hormonas y colesterol.
 La niacina es una vitamina del complejo B que ayuda a mantener saludable la piel y los nervios. En
dosis altas también tiene efectos que reducen el colesterol.
 El folato actúa con la vitamina B12 para ayudar en la formación de glóbulos rojos. Es necesario para
la producción del ADN, que controla el crecimiento tisular y la función celular. Cualquier mujer
embarazada debe asegurarse de consumir cantidades adecuadas de folato. Los niveles bajos de esta
vitamina están asociados con defectos congénitos como la espina bífida. Muchos alimentos vienen
ahora enriquecidos con ácido fólico.
 El ácido pantoténico es esencial para el metabolismo de los alimentos. También desempeña un papel
en la producción de hormonas y colesterol.
 La riboflavina (vitamina B2) funciona en conjunto con las otras vitaminas del complejo B. Es
importante para el crecimiento corporal y la producción de glóbulos rojos.
 La tiamina (vitamina B1) ayuda a las células corporales a convertir los carbohidratos en energía.
Obtener suficientes carbohidratos es muy importante durante el embarazo y la lactancia. También es
esencial para el funcionamiento del corazón y las neuronas sanas.
¿CANTIDAD O CALIDAD?
Cada vez más los alimentos son purificados, refinados e industrializados con tratamientos que mejoran la conservación;
el estado natural de las vitaminas se ve alterado y cuando llegan a nuestra mesa han perdido gran parte del valor
nutricional. Los desequilibrios alimenticios como la comida chatarra, salto de horarios, dietas bajas en calorías,

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producen disminución en las vitaminas. Otras veces, las carencias se relacionan con el uso de abonos químicos en lugar
de los abonos animales. Como nutrientes del organismo, las vitaminas son esenciales para la vida. La mejor manera de
consumirlas es al natural y según la variación en función del contenido vitamínico.[CITATION Cha05 \l 12298 ]

VITAMINA B12
El término cobalamina se refiere a una familia de compuestos con
una estructura determinada. La vitamina B12 es una cobalamina
(PM 1,355) que resulta de la unión asimétrica de 4 anillos
pirrólicos, formando un grupo macrocíclico casi planar (núcleo
corrina) en torno a un átomo central de cobalto (Co). El anillo
corrina es parecido al anillo porfirínico y se diferencia de éste por
el carácter asimétrico de las uniones entre los grupos pirrólicos. En
esta estructura, el Co posee 6 valencias de coordinación, 4 de las
cuales establecen enlace covalente con los correspondientes
nitrógenos (N) de los anillos pirrólicos. La quinta valencia de coordinación se halla siempre unida a un
seudonucleótido complejo, el 5,6 dimetilbencimidazol, casi perpendicular al núcleo y la sexta valencia al
unirse a diferentes radicales origina los diversos derivados de la cobalamina.
La mayor parte de la vitamina B12 de las células y el hígado se encuentra en las mitocondrias en forma de 5'
desoxiadenosilcobalamina, mientras que la metilcobalamina es la principal forma de cobalamina en el plasma,
aunque pequeñas cantidades de esta coenzima se pueden encontrar en las células. En el plasma y otros órganos se
han detectado otros corrinoides que contienen Co que no son cobalaminas, llamados análogos por su semejanza
estructural con la vitamina, de la cual se diferencian por alteraciones en el núcleo corrínico, que pueden ser
separados de las cobalaminas en el laboratorio a partir de sus propiedades cromatográficas y su pobre afinidad por el
factor intrínseco gástrico. [ CITATION Lis98 \l 12298 ]
El significado biológico de estos análogos de la cobalamina no es
bien conocido, aunque algunos pueden ser inertes, otros pueden tener
actividad coenzimática y otros ser toxinas o inhibidores de la acción
de la vitamina B12.
Los alimentos más ricos en vitamina B12(>10 µg/100 g de peso
húmedo) son las vísceras como el hígado (reserva natural), los
riñones o el corazón de ovinos y bovinos y los bivalvos como las
almejas y las ostras. Existen cantidades moderadas de vitamina B12
(3 a 10 µg/ 100 g de peso húmedo) en la leche en polvo desnatada,
así como en algunos pescados y mariscos (cangrejos, peces de roca,
salmón y sardinas) y en la yema de huevo. En la carne y otros
pescados y mariscos (langosta, lenguados, merluza, pez espada, atún) y quesos fermentados se encuentran
cantidades discretas de cobalamina (1 a 3 µg/ /100 g de peso húmedo). Por su parte, los productos lácteos líquidos y

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los quesos cremosos contienen menos de 1 µg/100 g de peso húmedo

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Reactivos de laboratorio Equipos de laboratorio
 Solución estándar de vitamina B12 ug/ml  Genesys 20
 Agua destilada  Balanza analítica
 Muestra de vitamina B12 Materiales de laboratorio
Matraces volumétricos, pipetas automáticas y
Pipetas volumétricas
Procedimiento
 Preparación de la curva de calibración
Pesar directamente en un matraz de 25 ml, 20 mg (± 5) de la solución estándar de vitamina B12, adicione agua
destilada, disuelva completamente y enrase con el agua destilada. A partir de esta solución tome 5 alícuotas de
10 ml a una concentración de 0, 10, 20, 30, 40, 50 ug/ml.
 Preparación de la muestra
De una muestra que contenga Vitamina B12 inyectable, que tenga una concentración 250µg de vitamina
B12/ml, tome una alícuota de la muestra y transfiérala a un matraz volumétrico de 10 ml, de tal forma que la
concentración final de la dilución preparada este entre 20 y 30 µg/ml, enrase utilizando agua destilada.
 Parte instrumental
Lea las Absorbancias de las diluciones de trabajo y de la dilución de la muestra preparada a una longitud de
onda de 361 nm. Use agua destilada como blanco.
Cálculos

 Solución Estándar
20 𝑚𝑔
ppm = = 800𝑚𝑔/𝑚𝑙 Vit. B12
0.025 𝐿 𝑑𝑒 𝑠𝑜𝑙.
 Cálculo De Alícuotas

a) Nivel 1
10 𝜇𝑔⁄𝑚𝑙 ∗ 10 𝑚𝑙
𝑉1 = = 0.123 𝑚𝑙
800 𝜇𝑔⁄𝑚𝑙
b) Nivel 2
20 𝜇𝑔⁄𝑚𝑙 ∗ 10 𝑚𝑙
𝑉1 = = 0.25 𝑚𝑙
800 𝜇𝑔⁄𝑚𝑙
c) Nivel 3
30 𝜇𝑔⁄𝑚𝑙 ∗ 10 𝑚𝑙
𝑉1 = = 0.375 𝑚𝑙
800 𝜇𝑔⁄𝑚𝑙
d) Nivel 4
40 𝜇𝑔⁄𝑚𝑙 ∗ 10 𝑚𝑙
𝑉1 = = 0.5 𝑚𝑙
800 𝜇𝑔⁄𝑚𝑙
e) Nivel 5
50 𝜇𝑔⁄𝑚𝑙 ∗ 10 𝑚𝑙
𝑉1 = = 0.625 𝑚𝑙
800 𝜇𝑔⁄𝑚𝑙

Concentración de Cianocobalamina (Vit. 20 mg/ml

B12)
Vol. disolución 25 ml
Preparación de la muestra de un producto con 1100 ug/ml Vit. B12

Concentración inicial (Vit. B12) 250 ug/ml

Vol. disolución 10 ml
Concentración final (Vit. B12) 30 ug/ml

Concentración
ABB
30 𝜇𝑔⁄𝑚𝑙 ∗ 10
(Ug Vitaminas 𝑉1 = 𝑚𝑙 = 1.2𝑚𝑙
B12/ml)
0 0 250 𝜇𝑔⁄𝑚𝑙
10 0,1
74
20 0,3
87
30 0,5
57
40 0,7
54
50 0,9
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 Curva de Calibración

Ecuación de la recta: y = 0,0186x + 0,0001

𝑦 − 0,0001
𝑥=
0,0186
 Concentración de las
diluciones

a) Réplica A
0,489 − 0,0001
𝑥= = 26.28 𝑢𝑔/𝑚𝑙
0,0186
b) Réplica B
0,481 − 0,0001
𝑥= = 25.85 𝑢𝑔/𝑚𝑙
0,0186
c) Réplica C
𝑥 = 0,476 − 0,0001
= 25.58 𝑢𝑔/𝑚𝑙
0,0186
Concentración Real de la muestra

c) Réplica C
[25.58 𝜇𝑔⁄𝑚𝑙] ∗ 10 𝑚𝑙
[𝐶 ] = = 213.16 𝜇𝑔⁄𝑚𝑙 𝑣𝑖𝑡 𝐵12
1.2 𝑚𝑙

Resultados obtenidos
RESULTADOS

PROMEDIO 215.85

DESVIACION ESTANDAR 2.40

COEFICIENTE DE VARIACION % 1.11%

Porcentaje:
250 ug/ml vit. B12 →
100% 215.85 ug/ml
vit.B12 → x
x = 86.34 %
Conclusiones
Se desarrolló un método rápido y sencillo para la determinación de vitamina B12, el método validado es
lineal, preciso y exacto.

Recomendaciones
 Encender el instrumento de medición 15 minutos antes de realizar la práctica.
 Preparar la solución estándar para la curva de calibrado y así obtener mayor precisión y
exactitud.
 Pesar correctamente la muestra de cianocobalamina.
 Realizar correctamente las lecturas de las absorbancias de cada una de las soluciones.
 Interpretar los valores obtenidos.
 Mantener el patrón según su especificación

Bibliografía
1. Carpenter K. Britannica. [Online]. [cited 2021 Febrero 26. Available
from: https://www.britannica.com/science/vitamin.

2. Dergal SB. Química de los Alimentos México: PEARSON; 2006.

3. Yurkanis P. Química Orgánica México: Pearson Educación; 2008.

4. Chazi C. Las Vitaminas. La Granja. Revista de Ciencias de la Vida. 2006;(4).

5. Chazi, C. (2005). Las vitaminas. Redalyc, 51-54. Recuperado el 03 de 2021, de

https://www.redalyc.org/pdf/4760/476047388007.pdf

6. Lissette Sordo MARTÍN, L. S. (1998). Determinación de Vitamina B 12 en una Formulación

Multivitamínica. Acta Farm. Bonaerense, 135-137. Recuperado el 03 de 2021, de
http://www.latamjpharm.org/trabajos/18/2/LAJOP_18_2_3_1_UGT0K5IHRZ.pdf