Manual de Practicas - Fitopatologia

MANUAL DE PRÁCTICAS
FITOPATOLOGÍA (AEJ-1028)
Programa Académico de Ingeniería en Agronomía
Profesor: MC. Pablo Santiago Sánchez Azcorra

Juan Sarabia, Quintana Roo
DICIEMBRE 2018
DIRECTORIO
__________________________
Secretario de Educación Pública
_____________________________________________________
Subsecretario de educación Superior e Investigación Tecnológica
__________________________________________
Director General del Tecnológico Nacional de México
___________________________
Coordinador Sectorial Académico
_________________________________________________
Coordinador Sectorial de Planeación y Desarrollo del Sistema
__________________________________________
Coordinador Sectorial de Administración y Finanzas
3
_________________________________________
Coordinador Sectorial de Promoción de la Calidad
MC. Carlos Tiburcio Martínez Martínez

Encargado del Despacho de la Dirección delT Zona Maya
4
ÍNDICE DE CONTENIDO
Página
ÍNDICE DE CONTENIDO………………………………………………………… ii
ÍNDICE DE CUADROS…………………………………………………………… v
PRÁCTICA 1. COLECTA DE MATERIAL…………………..…………………. 1
1. INTRODUCCIÓN………………………………………………………………... 1
2. COMPETENCIA ESPECÍFICA………………………………………………… 1
3. MATERIALES Y MÉTODOS…………………………………………………... 1
3.1. Materiales…………………………………………………………………... 1
3.1.1 Preparación de soluciones fijadoras…………………………… 2
3.2. Metodología………………………………………………………………... 2
3.3 Cuestionario de colecta………………………………………………….. 3
3.4 Datos del laboratorio……………………………………………………… 4
3.5 Usos del material colectado…………………………………………….. 4
4. CUESTIONARIO………………………………………………………………… 4
5. BIBLIOGRAFÍA…………………………………………………………………. 5
5
PRÁCTICA 2. PREPARACIÓN DE MEDIOS DE CULTIVO Y TÉCNICAS
DE AISLAMIENTO DE MICROORGANISMOS………………. 6
1. INTRODUCCIÓN………………………………………………………………... 6
1.1 Aislamiento…………………………………………………………………. 6
1.2 Medios de cultivo………………………………………………………….. 7
1.2.1 Clasificación de los medios de cultivo…………………………. 7
1.2.1.1 Composición………………………………………………... 7
1.2.1.2 Consistencia………………………………………………... 7
3.1. Materiales………………………………………………………………….. 8
3.2. Metodología……………………………………………………………….. 8
3.2.1 Preparación de los medios de cultivo…………………………. 8
3.3.2 Vaciado del medio de cultivo a cajas de Petri………………... 9
3.4 Aislamiento…………………………………………………………………. 9
3.4.1 Técnica de aislamiento de dilución en serie…………………... 9
3.4.2 Técnica de aislamiento de dilución en serie…………………... 10
4. CUESTIONARIO………………………………………………………………… 10
5. BIBLIOGRAFÍA…………………………………………………………………. 10
PRÁCTICA 3. IDENTIFICACIÓN DE BACTERIAS FITOPATÓGENAS……. 12
6
1. INTRODUCCIÓN………………………………………………………………... 12
3.1. Materiales………………………………………………………………….. 12
3.2. Metodología………………………………………………………………... 13
3.2.1 Técnica para realizar preparaciones temporales…………….. 13
3.2.2 Tinción de Gram……………………………………………………. 13
3.2.3 Tinción de flagelos de bacterias………………………………… 13
3.2.3 Tinción de productos de excreción y cápsula de bacterias.. 14
4. CUESTIONARIO………………………………………………………………… 14
5. BIBLIOGRAFÍA…………………………………………………………………. 14
PRÁCTICA 4. IDENTIFICACIÓN DE HONGOS FITOPATÓGENOS……….. 16
1. INTRODUCCIÓN………………………………………………………………... 16
3.1. Materiales………………………………………………………………….. 17
3.2. Metodología……………………………………………………………….. 17
3.2.1 Preparaciones temporales ………………………………………….. 17
3.2.2 Preparaciones permanentes ……………………………………….. 17
4. CUESTIONARIO………………………………………………………………… 17
5. BIBLIOGRAFÍA…………………………………………………………………. 18
7
PRÁCTICA 5. IDENTIFICACIÓN DE NEMATODOS FITOPATÓGENOS….. 19
1. INTRODUCCIÓN………………………………………………………………... 19
2. COMPETENCIA ESPECÍFICA……………………………………………….. 19
3. MATERIALES Y MÉTODOS………………………………………………….. 19
3.1. Materiales………………………………………………………………….. 19
3.2. Metodología…………………………………………………………… 20
3.2.1 Extracción de nematodos por el método de tamizado-

centrifugado…………………………………………………………
20
4. 21
CUESTIONARIO…………………………………………………………………
5. BIBLIOGRAFÍA…………………………………………………………………. 21
PRÁCTICA 6. IDENTIFCACIÓN DE SÍNTOMAS EN PLANTAS

ENFERMAS……………………………………………………….
23
1. INTRODUCCIÓN……………………………………………………………….. 23
2. COMPETENCIA 23
ESPECÍFICA…………………………………………………
3.1 Materiales…………………………………………………………………… 24
3.2 Metodología……………………………………………………………….... 24
3.3. Clave de identificación de síntomas y signos……………………………. 24
4. 27
8
CUESTIONARIO…………………………………………………………………
5. BIBLIOGRAFÍA…………………………………………………………………. 27
PRÁCTICA 7. CONTROL 29
BIOLÓGICO………………………………………….
1. INTRODUCCIÓN………………………………………………………………... 29
2. COMPETENCIA 29
ESPECÍFICA…………………………………………………
3.1 Materiales…………………………………………………………………… 29
3.2 Metodología………………………………………………………………… 30
4. 30
CUESTIONARIO…………………………………………………………………
5. BIBLIOGRAFÍA…………………………………………………………………. 30
9
10
ÍNDICE DE CUADROS
Página
Cuadro 1. Clave para la identificación de síntomas y signos.. ………... 24
Cuadro 2. Escala de clases para evaluar el grado de antagonismo de
una especie ………………………………………………………… 30
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12
13
PRÁCTICA 1
COLECTA DE MATERIAL
1. INTRODUCCIÓN
El diagnóstico de las enfermedades de las plantas se refiere a la determinación

oportuna del agente causal de una enfermedad, y es fundamental para el manejo del
problema siendo una de las bases indispensables para lograr un control eficaz,
permite la optimización de los recursos, la reducción de los efectos negativos en el
medio ambiente y a la vez origina información respecto a la interacción patógeno
hospedante. Un requisito previo para el control de cualquier enfermedad es la
detección e identificación apropiada del organismo causal. La detección de
patógenos en plantas con síntomas puede ser relativamente simple basándose en la
experiencia y en las particularidades de los patógenos que los hacen inconfundibles,
pero hay muchas otras que se confunden, y entonces el diagnóstico se complica,
teniendo que realizar las siguientes actividades: colecta, aislamiento, identificación
del patógeno, inoculación, reaislamiento y reidentificación.
La colecta del material enfermo es de suma importancia, puesto que de esto

dependerá el que se puedan realizar las técnicas conducentes a una identificación
acertada del patógeno en cuestión e inicia con una observación de alteraciones en
nuestro cultivo, y será más precisa si el que la realiza ha examinado de manera
personal la enfermedad en el campo. Un observador cuidadoso puede obtener datos
valiosos que faciliten todo el proceso. Es importante notar la presencia de focos de
infección inicial, a partir de los cuales se extiende la enfermedad, debido a que esa
información da idea del patrón de diseminación y de la fuente de inóculo primario.
2. COMPETENCIA ESPECÍFICA
Manejar las técnicas más comunes de colecta y preservación de material de estudio

fitopatológico para Identificar el agente causal de la enfermedad.
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3. MATERIALES Y MÉTODOS
3.1 Materiales
Pala recta, tijeras de podas, serrucho, cámara fotográfica, etiquetas, papel secante,
navaja de campo, lupa de campo, bolsas de papel secante, prensa botánica,
periódico y cartón corrugado, libreta de campo, hielera portátil, ligas, engrapadora,
frascos, soluciones fijadoras, cuestionario de colecta.
3.1.1 Preparación de soluciones fijadoras
F.A.A.
Formol al 40 % 10 mL
Ácido acético glacial 10 mL
Alcohol al 50 % 100 mL
SOLUCIÓN DE HESLER
Agua destilada 1000 mL
Cloruro de Zinc 50 mL
Formalina 25 mL
Glicerina 25 mL
3.2. Metodología
Los problemas fitopatológicos se pueden presentar en hojas, raíces. tallos, etc. y se

detectan cuando las plantas crecen de modo anormal, se secan o se mueren,
disminución de la cosecha, alteraciones en el crecimiento, decoloraciones,
sobrepigmentaciones, manchas, rayados, pudriciones, marchitamientos, etc. Es
conveniente disponer del mayor número de elementos vegetales colectados que
permitan lograr la identificación del agente causal.
Las partes vegetales que deben colectarse dependen del tipo de cultivo que se trate:
Para partes vegetales carnosas, como frutos y bulbos, se deben colectar en frascos
con soluciones fijadoras. En el caso de que la planta presente nodulaciones en la
raíz, es muy probable que se trate de infestaciones de nematodos, por lo que se
deben tomar muestras del suelo que hayan estado en contacto con la raíz. En el
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caso de que las plantas sean pequeñas, se debe sacar la planta entera y, sin sacudir
el suelo de las raíces, se debe meter en una bolsa de plástico junto con
aproximadamente 250 gr de suelo y cerrarla con una liga para evitar que los
nematodos mueran. Las bolsas no deben exponerse al sol.
Es indispensable que todos los ejemplares que se colecten, se acompañen de la

mayor cantidad de datos posibles, que se anotarán en la libreta de campo.
El material colectado puede emplearse para realizar aislamientos del agente causal,
en cuyo caso se puede prensar o conservarse en refrigeración, o bien, como material
de herbario, empleándose el prensado o la preservación en fijadores como el alcohol
al 70 %, el F.A.A. o la solución de Hesler.
El material de herbario se debe montar en cartulinas blancas de 30 x 40 cm,

siguiendo las técnicas de herbario acostumbradas. Todo material preservado debe
llevar su etiqueta correspondiente.
3.3 Cuestionario de colecta
Es indispensable que todos los ejemplares que se colecten, vayan acompañados con
los siguientes datos:
1. Datos generales
Muestra No. _____________________ Variedad _________________________

Localidad_________________________ Edad del cultivo ___________________
Fecha __________________________ Cultivos anteriores ________________
Cultivo (hospedero)_______________ Predio _________________________
2. Apariencia general del cultivo
Marchitez_____________________ Tizones________________________
Amarillamiento________________ Desarrollo anormal_________________
Áreas muertas_________________ Otros______________________
Manchas foliares_______________
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3. Partes atacadas de las plantas
Raíz____________________________ Brotes o tallos______________________

Hojas___________________________ Flores_____________________________
Frutos__________________________
4. Distribución de la enfermedad
Plantas aisladas __________________ Manchones o grupos de plantas_________

Áreas grandes ___________________ Áreas pequeñas__________________
Bandas o franjas_________________ Bordes de cultivo___________________
5. Condiciones prevalecientes durante la aparición de los primeros síntomas y

el desarrollo de la enfermedad
Precipitación _____________________ Humedad relativa ___________________

Vientos__________________________ Heladas___________________________
Granizo_________________________ Otros______________________________
6. Labores culturales
Frecuencia de riego________________ Fertilizaciones ______________________

Incorporación de materia orgánica____ Aclareos___________________________
Podas__________________________ Otros______________________________
7. Químicos aplicados al cultivo (concentraciones y dosis)
Fertilizantes______________________ Fungicidas ________________________

Herbicidas_______________________ Insecticidas ________________________
Defoliantes______________________ Otros_____________________________
8. Características del suelo
Drenaje_________________________ Textura____________________________
pH______________ ______________ Otros_____________________________
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3.4 Datos del laboratorio
Datos del laboratorio que nos ayudarán al diagnóstico de la enfermedad y a la

identificación del agente causal.
a) Características de las lesiones.

b) Presencia de esporas, micelio, cuerpos fructíferos o cualquier estructura (hacer
esquemas).
c) Exudaciones (color, consistencia etc.)
d) Presencia de insectos o ácaros.
e) Evidencia de daños mecánicos.
3.5 Usos del material colectado
El material colectado puede emplearse para:
a) Realizar aislamientos del agente causal. En este caso se puede prensar o preser-
varse en refrigeración.
b) Como material de herbario, empleándose el prensado, o bien la preservación en
fijadores como alcohol al 70 %, F.A.A. o solución de Hesler. En el primer caso los
ejemplares deben ser montados en cartulinas blancas de 25 x 45 cm., siguiendo las
técnicas de herbario acostumbradas. Todo el material preservado debe llevar su
etiqueta correspondiente.
4. CUESTIONARIO
1. ¿Qué es el diagnóstico de las enfermedades?

2. ¿Por qué es indispensable llevar a cabo un diagnóstico?
3. ¿En cuáles casos es fácil diagnosticar una enfermedad?
4. ¿Qué es una colecta?
5. ¿Por qué y cuándo se debe realizar una colecta?
6. ¿Qué observaciones se deben hacer en el campo?
7. ¿Cómo se detectan los problemas fitopatológicos?
8. ¿Qué es una solución fijadora?
18
5. BIBLIOGRAFÍA
Echandi, E. 1975. Manual de Laboratorio de Fitopatología General. Herrero Hnos.

México.
Dhingra, O. D., and Sinclair J. B. 1985. Basic Plant Pathology Methods. CRC Press.
355 pp.
González, L.C. 1977. Introducción a la Fitopatología. I.I.C.A. San José de Costa Rica.
López A.G. 1978. Técnicas de uso común en el manejo de Hongos fitopatógenos.

Tesis. E.N.A. Méx.
Narayanasamy, P. 2001. Plant pathogen detection and diseases diagnosis. Marcel

Dekker Inc. 518 pp.
Roberts, G. y C. Boothroyd. 1972. Fundamentos de Patología Vegetal. Acribia.

Zaragoza.
Tuite, J. 1964. Plant Pathological Methods, Fungi and Bacteria. Burges Pobl. Co.
Minneapolis.
Trigiano, R. N., Windham, M. T. and Windham, A. S., 2004, Plant pathology,

Concepts and Laboratory. CRC Press, Boca Raton, London, New York, Washinton,
D.C., 413 pp.
19
PRÁCTICA 2
PREPARACIÓN DE MEDIOS DE CULTIVO Y TÉCNICAS DE AISLAMIENTO DE

MICROORGANISMOS
1. INTRODUCCIÓN
En el diagnóstico de las enfermedades vegetales, el trabajo de laboratorio es de

suma importancia debido a que ahí se efectúa la identificación del agente causal, lo
que posibilita la aplicación de los métodos de control más adecuados.
El proceso de identificación de un patógeno requiere el aislamiento del mismo, para

lo que es necesaria la elaboración de medios de cultivo que permitan el desarrollo de
dicho patógeno.
Una identificación científica debe realizarse según los Postulados de Koch, que
revisten una importancia dentro de a Fitopatología, y deben seguirse siempre que se
está frente a una enfermedad de la que se desconozca o se dude del agente causal.
Los Postulados de Koch son los siguientes:
1. El organismo o agente causal debe estar constantemente asociados con la

enfermedad.
2. El organismo debe ser aislado y cultivado en cultivo puro (identificación).
3. Al inocular una planta susceptible sana, debe desarrollarse la enfermedad original.
4. El organismo patógeno debe ser aislado de la planta infectada bajo condiciones
experimentales (reidentificación).
1.1 Aislamiento
En la naturaleza abundan los microorganismos que se desarrollan estrechamente

relacionados entre sí, de manera que encontramos bacterias, hongos y otros
organismos de muy diversos tipos, tanto de vida libre como parásitos. Para poder
estudiarlos y conocerlos se deben cultivar en medios adecuados aislándolos del
suelo o de partes vegetales enfermas. A partir de la primera muestra que se coloca
en un medio de cultivo, se obtiene un cultivo mixto del que se deben tomar nuevas
muestras para realizar otros cultivos, seleccionando las diferentes colonias hasta
20
lograr que en el medio se desarrolle un solo tipo de organismo, consiguiendo de esta
forma un cultivo puro.
Para realizar aislamientos a partir del suelo, existen diversas técnicas como la de
placa directa y la de dilución en serie. En el caso de que el patógeno se encuentre en
las partes vegetales, se puede proceder a realizar aislamientos directos, utilizar
cámaras húmedas, colocar partes vegetales en el medio de cultivo a través de
trampas, etc.
1.2 Medios de cultivo
Los medios de cultivo son mezclas de sustancias nutritivas que se utilizan para el
aislamiento, determinación, desarrollo, reproducción e identificación de aquellos
organismos productores de enfermedades de las plantas, que se comportan como
parásitos facultativos. Para lograr el desarrollo y reproducción de las diferentes
especies fitopatógenas, los medios de cultivo deben reunir características especiales,
tomando en cuenta los factores que se mencionan a continuación:
Nutrientes. En el medio de cultivo deberán estar presentes elementos nutricionales

tales como fuentes de carbono, nitrógeno, macroelementos (P, K, Mg, Ca),
microelementos (Fe, Zn, Mn, Cu, Mo), vitaminas, etc.
Humedad. Deberá proporcionarse una humedad relativa favorable a los fitopa-
tógenos que se desee cultivar. Por lo general requieren del 50 % o más.
Temperatura. Los valores óptimos de ésta son muy variables para cada especie,
pero la mayoría de ellas pueden crecer en un rango de 20 a 25 ºC. Este es un factor
determinante para el desarrollo y la reproducción.
pH. También en este caso los valores óptimos son muy variables, pero en general
los hongos fitopatógenos se desarrollan y reproducen mejor en pH ligeramente
ácidos, mientras que las bacterias prefieren los ligeramente alcalinos.
Luz. Este factor en algunos casos afecta la reproducción de los hongos fitopa-
tógenos, pero en general no influye.
Asepsia. Los medios de cultivo deben esterilizarse y mantenerse a salvo de
cualquier contaminación por otros microorganismos.
1.2.1 Clasificación de los medios de cultivo

Los medios de cultivo pueden ordenarse de acuerdo con su composición o a su
consistencia, quedando de la siguiente manera:
21
1.2.1.1 Composición
Medios de cultivo sintéticos. Son aquellos medios de cultivo en los que se conoce
con exactitud la composición de cada uno de sus componentes, por ejemplo, agar y
Czapek.
Medios de cultivo complejos o semisintéticos. En estos la composición de uno de

sus elementos no se conoce de manera exacta, o bien, se integran de sustancias
naturales y sustancias sintéticas, por ejemplo PDA (papa-dextrosa-agar).
Medios de cultivo naturales. Se forman a partir de material vegetal natural, por

ejemplo: hojas, tallos, vainas, tubérculos, raíces, etc.
1.2.1.2 Consistencia
Entre los medios de cultivo de uso frecuente en Fitopatología están los siguientes:
Medios sólidos. Contienen esencialmente agar, gelatina, albúmina, etc., materiales

que al enfriarse quedan sólidos por completo. Son muy empleados para el
aislamiento y la reproducción de hongos y bacterias.
Medios semisólidos. Contienen bajas proporciones de agar y gelatina mezclados o

separados; al enfriarse permanecen en estado coloidal. Se emplean para mantener
cultivos por largo tiempo.
Medios líquidos. Son preparados sin agar, gelatina u otras sustancias solidificantes,
por lo que permanecen líquidos aun al enfriarse. Se emplean cuando se necesita
incrementar el inóculo de hongos o bacterias.
Entre los medios de cultivo de uso frecuente en Fitopatología están los siguientes:
1. PDA (papa-dextrosa-agar) 10. HMA (harina de maíz-agar)

2. AN (agar nutritivo) 11. JFA (jugo de frijol-agar)
3. HFA (harina de frijol-agar) 12. JTA jugo de tomate-agar)
4. VM (Ougo Va agar) 13. MSA (malta-sal-agar)
5. AVA (avena-agar) 14. BA (Bonner Addoat)
6. TSA (jugo de tomate-sal-agar) 15. BK (medio B de King)
22
7. MM (medio de Martin)
8. VFA (vainas de frijol-agar)
9. AA (agua-agar)
Que el alumno aprenda la preparación de medios de cultivo y las técnicas de

aislamiento de agentes fitopatógenos más utilizados.
3.1 Materiales
Asa microbiológica Mechero Balanza granataria

Pinzas de disección Soporte con anillo Papa, jugo de tomate, etc.
Agujas de disección Tela de asbesto Partes vegetales enfermas
10 cajas de PETRI
3.2 Metodología
3.2.1 Preparación de los medios de cultivo
Cada equipo elaborará el medio de cultivo que le indique el profesor, de acuerdo con
sus necesidades
3.3.2 Vaciado del medio de cultivo a cajas de Petri
Para llenar las cajas de PETRI con el medio de cultivo de una manera aséptica se
deben realizar los siguientes pasos:
 Limpiar la mesa con una solución de cloro 5:1 en agua.

 Colocar y encender el mechero o lámpara de alcohol.
 Poner las cajas y recipientes con el medio sobre la mesa.
 Tomar el recipiente con el medio de cultivo y destapando con la mano izquier-
da, pasar la boca del recipiente sobre la llama del mechero. Conservar el
tapón en la misma mano con que se sostiene el recipiente del medio.
23
 Tomar con la mano derecha una caja de PETRI y levantar la tapa lo suficiente
para verter el medio de cultivo. Vaciar en cada una de 10 a 12 mL.
 Colocar la tapa de la caja de PETRI suavemente, y tapar el recipiente del
medio de cultivo.
 Distribuir de manera uniforme el medio con movimientos de rotación.
 Colocar las cajas en una superficie horizontal y dejar solidificar.
 Una vez solidificado el medio, realizar pruebas de esterilidad por incubación a
35 ºC durante 48 hr.
3.4 Aislamiento
Todos los aislamientos deben hacerse en un medio estéril, es decir, a la flama del
mechero, para evitar contaminaciones. Existen varias técnicas de aislamiento. El
aislamiento que se va a llevar a cabo es el que utiliza las partes vegetales enfermas,
con sus tres variantes.
Aislamiento a partir de partes vegetales enfermas
3.4.1 Técnica de aislamiento de dilución en serie
Aislamiento directo. Si se observan las fructificaciones o el micelio en el ejemplar

enfermo, se toma una muestra de este material con una aguja de disección estéril y
se coloca en directo sobre el medio de cultivo. Se incuba a 24 ºC y se observan
resultados después de 4 a 5 días.
Partes vegetales en medio de cultivo. La porción vegetal que muestra los síntomas
se desinfecta con una solución de cloro (NaOCl) y agua destilada estéril 5:1. Se en-
juaga con agua destilada estéril y se coloca en cajas de Petri con medio de cultivo.
Se incuba a 24 ºC y se observan resultados después de cuatro a cinco días.
Cámara húmeda. Cuando las partes vegetales afectadas presentan micelio, pero no
hay fructificaciones, o cuando no se aprecia el crecimiento del patógeno, se recurre
al uso de la cámara húmeda. Se toma una porción del tejido enfermo y se desinfecta
en una solución de cloro (NaOCl) y agua destilada estéril 5:1. Se enjuaga con agua
destilada estéril y se coloca en cajas de Petri con un papel filtro en su interior,
previamente esterilizadas. Se humedece con agua destilada estéril y se tapa la caja
Se incuba a 24 ºC y se observan resultados después de cuatro a cinco días.
24
3.4.2 Técnica de aislamiento de dilución en serie
1. Se pesa un gramo de suelo y se agrega a un tubo de ensayo con 10 mL de

agua destilada estéril.
2. Se agita manualmente durante un minuto.
3. Se toma una alíocuota de 1 mL con una pipeta y se agrega a otro tubo que
contenga 9 mL de agua destilada estéril agitándose de igual manera durante
un minuto.
4. Se repite la operación hasta llegar a la dilución 10-4.
5. De cada dilución se toma una alícuota de 1 mL y se siembra en placas Petri
que contengan medio de cultivo PDA distribuyendo uniformemente.
6. Se sellan con parafilm y se incuban en posición invertida a una temperatura de
26 ºC durante siete días.
7. Transcurrido este tiempo, se hace el conteo de las colonias de
microorganismos presentes.
4. CUESTIONARIO
1. ¿A qué tipo de medios de cultivo (natural, semisintético o sintético) pertenecen los

utilizados en esta práctica? Explique su respuesta.
2. ¿Qué es la esterilización y cuáles son los métodos más frecuentes para esterilizar
materiales fitopatológicos?
3. Describa los tipos de colonias que surgieron en los aislamientos a partir del suelo y
partes vegetales enfermas.
4. Calcule el número de organismos que surgieron en los aislamientos a partir del
suelo por el método de dilución, de la siguiente manera:
En donde
C= Número de colonias
D=Dilución emleada
VI=Volumen inicial
NO= Número de organismos presentes en un Ml
25
5. BIBLIOGRAFÍA
Agrios, G. N. 2005. Plant pathology. 5th ed. Elsevier academic Press. Amsterdam,
Boston, Heidelberg, London, New York, Oxford, Paris, San Diego, San Francisco,
Singapore, Sydney, Tokyo. 992 pp. *
355 pp.
Echandi, 1975. Op. cit.
French, E.R. y Her. 1980. Métodos de Investigación Fitopatológica. IICA. Costa Rica.
Gaviño, G. C., C. Juárez y H. Figueroa. 1975. Op. cit.
López A.G. 1978. Op. cit.
Narayanasamy, P., 2001, Plant pathogen detection and disease diagnosis. Marcel
Dekker Inc., 518 pp.
Schots, A., Dewey, F. M. and Oliver, R., 1994. Modern assay for plant pothogenic
fungi. C A B International, 267 pp.

Concepts and Laboratory. CRC Press, Boca Raton, London, New York, Washinton,
D.C., 413 pp.
26
PRÁCTICA 3
IDENTIFICACIÓN DE BACTERIAS FITOPATÓGENAS
1. INTRODUCCIÓN
En el proceso de diagnóstico de las enfermedades de las plantas, la identificación del

agente causal ocupa un lugar preponderante. Las técnicas de identificación
particularizan en los agentes bióticos que causan enfermedades, en decir, en los
microorganismos fitopatógenos, entre los que encontraremos virus, fitoplasmas,
espiroplasmas, bacterias, hongos y nemátodos. Los virus son tan pequeños y
requieren de técnicas tan elaboradas para su observación que es imposible llevarla a
cabo en un laboratorio como éste. En cambio, es completamente factible observar a
las bacterias (y organismos semejantes a ellas), a los hongos y a los nemátodos.
Las bacterias son microorganismos pertenecientes al Reino Procaryotae. Se

encuentran distribuidas con amplitud en la naturaleza. Su forma puede ser esférica,
de bacilo o de espiral. Se encuentran constituidas con las siguientes estructuras:
cápsula de secreción, pared celular, membrana celular y citoplasma, este último
conteniendo gránulos de grasa, vacuolas, pigmentos y material genético disperso, es
decir, carecen de membrana nuclear (procariontes). Algunas bacterias tienen flagelos
y pueden desplazarse en medios líquidos. La pared celular determina la forma de las
bacterias y es selectiva, pudiendo contener aminoácidos aromáticos, proteínas,
ácidos teitoicos y diferentes azúcares. Dependiendo de la cantidad de éstos, las
bacterias pueden teñirse de rojo o de violeta al seguir la técnica de tinción de Gram.
Se conocen aproximadamente mil 600 especies de bacterias. La mayoría son
saprófitas obligadas y como tales benefician al hombre porque ayudan
descomponiendo grandes cantidades de materia orgánica y deshechos animales y
vegetales.
27
Reconocer las características morfológicas que distinguen a las bacterias en

preparaciones temporales y permanentes.
3.1 Materiales
Portaobjetos Cristal violeta Sulfato de cobre

Cubreobjetos Safranina Alcohol etílico
Agujas de disección Agua destilada Lugol
Cultivos de bacterias
3.2 Metodología
NOTA: Antes de iniciar los trabajos deberá desinfectar su mesa de trabajo con cloro
3.2.1 Técnica para realizar preparaciones temporales
 Trabaja cerca de la flama. Flamea el asa o la aguja de disección hasta obtener

el rojo vivo, para evitar contaminaciones.
 Con el asa o aguja toma una pequeña muestra de bacterias del cultivo,
colócala en un portaobjetos limpio con una gota de agua destilada.
 Coloca el cubreobjetos inclinado, evitando que se formen burbujas. Cuando el
fluido se extiende por el borde, se deja caer suavemente.
 Observa la preparación al microscopio utilizando diferente objetivos. Siempre
debes empezar con el aumento de 10X y avanzar de manera progresiva.
Recuerda que con el objetivo de 100X debes agregar una gota de aceite de
inmersión sobre la preparación, antes de colocar el lente.
 Si observas bacterias, puedes teñir la preparación, utilizando alguna de las
técnicas sugeridas.
3.2.2 Tinción de Gram
 En una gota de agua coloca una pequeña masa de bacterias esparciéndolas a

lo largo del portaobjetos. El cultivo debe ser de preferencia de 24 horas.
28
 Fija la preparación al aire o directamente a la flama.
 Cubre la preparación con cristal violeta durante un minuto y decanta.
 Cubre la preparación con lugol durante un minuto y lava con agua corriente.
 Decolora con alcohol etílico por 30 segundos agitando para una decoloración
homogénea. Lava con agua corriente.
 Cubre con safranina durante un minuto y lava con agua corriente.
 Absorbe el agua con papel.
 Observa al microscopio. Si las bacterias tiñen de rojo son Gram (-), y si tiñen
de violeta son Gram (+). Esquematiza lo observado.
3.2.3 Tinción de flagelos de bacterias
 Se prepara un frotis y se seca al aire.

 Se añade el mordiente filtrado y se deja de uno a cinco minutos.
 Se lava con agua cuidadosamente.
 Se cubre con cristal violeta se deja actuar dos minutos.
 Se repite el lavado de la misma forma.
 Se seca la preparación al aire.
 Se observa al microscopio con el objetivo de inmersión.
3.2.3 Tinción de productos de excreción y cápsula de bacterias
 Coloque en un portaobjetos una gota de tinta china bacteriológica, agregue

una pequeña muestra de bacterias, coloque el cubreobjetos y observe.
 Haga un frotis, séquelo al aire, agregue cristal violeta durante dos minutos.
Lave con Sulfato de Cobre al 2 %. Séquelo con papel absorbente. Las
cápsulas aparecen en color azul y violeta y los cuerpos bacterianos en azul
oscuro.
4. CUESTIONARIO
29
1. Los primeros sistemas de clasificación se basaban principalmente en el número y
distribución de los flagelos. La posición de tales flagelos se indican mediante las
siguientes expresiones:
 Monotrico: _________________________________________________
 Lofotrico: __________________________________________________
 Anfitrico:__________________________________________________
 Peritrico: _________________________________________________
2. Cuando se permite que una sola bacteria se desarrolle (se reproduzca) sobre la
superficie o en el interior de un medio sólido, su progenie en poco tiempo produce
una masa notoria denominada _____________________
3. La multiplicación bacteriana tiene lugar por _____________ ________________ y
no existen procesos de reproducción sexual
4. El diagnóstico correcto de las bacteriosis es indispensable para disertar
estrategias racionales de control. Mencione de manera general, el procedimiento que
se sigue en el laboratorio:
5. Los métodos de control de las bacteriosis fitopatógenas se basan en medidas
preventivas y curativas. Mencione usted cuales son las medidas curativas utilizadas
5. BIBLIOGRAFÍA
Singapore, Sydney, Tokyo. 992 pp.
Barne H, H. L. end Hunter B. B. 1987. Illustrated genera of imperfect fungi. Fourth

edition. MacMillan Publishing Company. 218 pp.
Bridge, P. D. 1998. Applications of PCR in mycology. CAB, International.
Cummins, G. B. and Hiratsuka, Y. 2003. Illustrated genera of rust fungi. Third Edition.
APS Press 225 pp.
355 pp
30
French, E.R.; Herbert, T.T. 1980 Métodos de investigación fitopatológico, I.I.C.A. San
José, Costa Rica.
Hanlin, R. T. 1997. Illustrated genera of ascomycetes. Volume 1. APS Press. 263 pp.
León Gallegos, H. M. y Cummins, G. B. 1981. Uredinales (royas) de México. SARH.

Vol 1. 440 pp. y Vol 2 492 pp.
Kálman Vánky. 2002. Illustrated genera of smut fungi. APS Press. Second edition.
238 pp.
Mier, T., Toriello, C. y Ulloa, M. Hongos microscópicos saprobios y parásitos:

Métodos de laboratorio. 2002. UAM IB UNAM. 90pp.
Muller, G. M., Bills, F. G. and Foster, S. M., 2004, Biodiversity of fungi inventory and
monitoring methods, Elsevier Academic Press. 777pp.

Concepts and Laboratory. CRC Press, Boca Raton, London, New York, 413 pp.
31
PRACTICA 4
IDENTIFICACIÓN DE HONGOS FITOPATÓGENOS
1. INTRODUCCIÓN
Los hongos y los organismos semejantes a estos comprenden el grupo más

numeroso de microorganismos fitopatógenos (ocho mil especies) y son los causantes
de la mayoría de las pérdidas económicas agrícolas, debido al gran número de
enfermedades que ocasionan. Se considera que todas las plantas son atacadas al
menos por un hongo, y muchas son afectadas por un gran número de estos
organismos.
El hábitat de los hongos es muy amplio, puesto que se encuentran en el suelo, en el

agua y en las plantas y animales. Pueden desarrollarse en condiciones climáticas
muy variadas, en todo tipo de ecosistemas.
Los organismos semejantes a los hongos pertenecen a los reinos Protozoa y

Chromista, y los hongos al reino Fungi. Son microscópicos y macroscópicos, uni y
pluricelulares. Presentan pared celular y carecen de clorofila.
Están constituidos por células redondas u ovales solitarias o en plasmodios, o más

frecuentemente por estructuras alargadas y ramificadas llamadas hifas, cuyo
conjunto se denomina micelio. Cada hifa está conformada por una pared celular que
protege a la membrana celular y al contenido protoplasmático, en donde se
encuentran dispersos sus núcleos verdaderos, así como las mitocondrias, ribosomas,
retículo endoplásmico y gránulos de sustancias de reserva. Si las hifas están
separadas en celdas, se dice que el micelio es septado, y si el protoplasma es
continuo en las hifas el micelio es cenocítico. En algunos hongos el micelio llega a
formar pseudotejidos. Prosénquima y pseudoparénquima.
Entre las estructuras de reproducción asexual están los oídos, clamidosporas,

esporangios y conidios, estos últimos solitario o agrupados en sinemas,
esporodoquios, acérvulos o picnidios. Las esporas sexuales son las siguientes:
cigosporas, oosporas, ascas-libres o en apotecios, peritecios y cleistotecios- y
32
basidios, que nacen de forma directa de una espora de resistencia o en basidiocarpo,
o dentro de basidiocarpos.
Reconocer las características morfológicas que distinguen a los hongos en

preparaciones temporales y permanentes.
3.1 Materiales
Portaobjetos Agua destilada Agujas de disección Lugol

Cubreobjetos Azul de metileno Cultivos de hongos Rojo congo
3.2 Metodología
3.2.1 Preparaciones temporales
 Pon una gota de agua en un portaobjetos, y agrega una masa de micelio y

esporas de un cultivo de hongos.
 Observa al microscopio.
 Si hay micelio y esporas, agrega una pequeña gota del colorante para una
mejor observación de las estructuras.
 Coloca el cubreobjetos y observa nuevamente al microscopio. Esquematiza lo
observado.
3.2.2 Preparaciones permanentes
 Pon una gota de lugol en un portaobjetos, y agrega una masa de micelio y

esporas de un cultivo de hongos.
 Observa al microscopio.
 Si hay micelio y esporas, agrega una pequeña gota del colorante para una
mejor observación de las estructuras.
33
 Coloca el cubreobjetos y observa de nueva cuenta al microscopio.
Esquematiza lo observado.
 Sella tu preparación con barniz transparente y etiquétala.
4. CUESTIONARIO
1. Mencione usted de que está formada la pared celular de los hongos

2. Según el nivel de parasitismo, diga usted como pueden ser los hongos
3. El organismo vivo infectado por el parásito se llama
4. Característica principal de los hongos inferiores
5. Característica principal de los hongos superiores
6. Para la identificación de hongos fitopatógenos es necesario la observación de sus
______________ _____________________ y _________________
5. BIBLIOGRAFÍA

APS Press 225 pp.
355 pp.
José, Costa Rica.
34

Vol 1. 440 pp. y Vol 2 492 pp.
238 pp.

Métodos de laboratorio. 2002. UAM IB UNAM. 90 pp.
monitoring methods, Elsevier Academic Press. 777 pp.

35
PRÁCTICA 5
IDENTIFICACIÓN DE NEMATODOS FITOPATÓGENOS
1. INTRODUCCIÓN
Los nematodos son organismos que pertenecen al reino Animalia, y son quizá los
animales pluricelulares más abundantes en el mundo, después de los insectos. Su
tamaño fluctúa entre unas cuantas micras hasta 0.5-1 mm.
Los nematodos son gusanos cilíndricos con cuerpo alargado y delgado con simetría
bilateral. Su cutícula es lisa, son no segmentados y carecen de patas u otros
apéndices. Presentan todos los sistemas fisiológicos principales de todos los
animales, como lo son los sistemas excretor, nervioso, reproductor y digestivo.
Durante su ciclo de vida, los nematodos llegan a presentar cinco estados y cuatro
mudas. En algunas especies la primera y segunda etapas larvales no pueden infectar
a las platas, realizando sus funciones metabólicas a expensas de la energía
almacenada en el huevecillo.
Los nematodos fitopatógenos presentan géneros ectoparásitos, los cuales pasan

toda su vida en el suelo y se alimentan externamente de las raíces de las plantas
hospederas, como es el caso de Cricononemoides, Hemicycliophora y Cacopaurus.
Otros géneros son endoparásitos, produciendo lesiones internas en los tejidos
vegetales. Por lo general se ubican en el parénquima cortical, o bien llegan hasta el
cilindro central de las raíces hospederas, en donde permanecen o migran hacia otros
órganos de las plantas, por ejemplo, Aphelehchoises, Anguina y Ditylenchus. Otros
más pasan parte de su vida como endoparásitos y la otra en el suelo que se
encuentra alrededor de las raíces que parasitan, por lo que se les conoce como
semiendoparásitos, entre los que destacan: Meloidogyne, Heterodera y Tylenchus.
2. COMPETENCIAS ESPECÍFICAS
Reconocer las características morfológicas que distinguen a los nematodos en

preparaciones temporales (extracción) y permanentes.
36
3. MATERIALES Y METODOS
3.1 Materiales
Plástico de 1 m Tubos de centrífuga

Probeta Vasos de precipitados
2 cubetas Centrífuga
Tamices de 100, 200 y 350 mallas Agitadores
Piseta Cajas de Petri pequeñas
Caolín Solución azucarada (55 gr/100 ml H2O)
Muestras de suelo
3.2 Metodología
Las actividades que se llevarán a cabo en esta práctica son cuatro:
1. Extracción de nematodos.
2. Observación de nematodos vivos.
3. Observación de preparaciones permanentes y temporales de nematodos.
4. Esquematización de lo observado, indicando los nombres de las estructuras.
3.2.1 Extracción de nematodos por el método de tamizado-centrifugado
1. Se coloca la muestra de suelo sobre un plástico, se deshacen los terrones y

se retiran las basuras, piedritas, raíces, etc. Se remueve bien la tierra para
homogeneizarla.
2. En una probeta o vaso de precipitados se ponen 200 mL de agua y se agrega
suelo hasta que la marca de agua llegue a 400 mL. Esto se hace con el objeto
de tener una referencia del tamaño de la población que se encuentra en 200
mL de suelo, sobre todo si se desea hacer un estudio cuantitativo.
3. Esta mezcla se vacía en la cubeta “A” con un poco más de agua, se deshacen
los grumos y se vacía el sobrenadante en los tamices de 100, 200 y 325
sobrepuestos y se recoge en la cubeta “B”. Esta operación se repite dos veces
más.
37
4. La arenilla que quedó en el tamiz de 325 se recoge en un vaso de precipitados
con una pizeta, procurando que el ángulo que forma el chorro de agua con el
tamiz sea lo más agudo posible, nunca recto, puesto que de esta forma el
agua ayudaría a pasar a los nematodos a través de la malla del tamiz y los
dañaría.
5. El agua que se recogió en la cubeta “B” se vierte a través del tamiz de 325 y
se recoge en la cubeta “A”. Esta operación se repite dos veces más.
6. La arenilla que quedó en el tamiz se recoge con una pizeta de la forma
indicada en el número 4 y se pasa al mismo vaso de precipitados.
7. La arenilla recogida se distribuye en los tubos de centrífuga y se le agrega un
poco de caolín a cada tubo. Se agitan bien.
8. Se centrifugan durante cinco minutos a 2900 rpm.
9. Se tira el sobrenadante.
10. Al sedimento se le agrega la solución azucarada y se agita bien.
11. Se centrifugan durante tres minutos a 2900 rpm.
12. Se pasa el sobrenadante por el tamiz de 325 y se lava perfectamente bien
hasta eliminar por completo la solución azucarada.
13. Se recoge el sedimento con una pizeta y se pasa a una caja de Petri pequeña
con un poco de agua.
14. Se observa al microscopio.
Este método de extracción brinda la oportunidad de obtener casi todos los

nematodos del suelo de una forma rápida. El suelo retenido en los tamices se
centrifuga para separar a los nematodos de las partículas orgánicas mediante la
flotación de los mismos en una solución de gravedad específica mayor de la que
poseen los nematodos. Se emplea el caolín para sedimentar a los nematodos y
poder eliminar el agua sobrenadante de la muestra. La solución azucarada, como
tiene una gravedad específica mayor a la que presentan los nematodos, hace que
éstos floten y queden suspendidos en la solución.
4. CUESTIONARIO
1. Los nematodos carecen de aparato circulatorio y respiratorio, diga usted como se

efectúa la circulación y respiración en ellos
2. Diga usted como se efectúa y puede ser la reproducción en los nematodos
3 Es el género del nematodo agallador, La hembra adulta es esférica o tiene forma
de pera con un cuello alargado mientras que los machos tienen forma de gusano
38
(vermiforme), Los juveniles y las hembras son endoparásitos que causan agallas, El
estilete es delgado con nódulos basales, Los huevos se depositan en una matriz
gelatinosa.
4. Es el nematodo (género) causante del anillo rojo del cocotero
5. Es el nematodo (género) barrenador del platano
6. Es el nematodo (género) lesionador de los cítricos
5. BIBLIOGRAFÍA

APS Press 225 pp.
355 pp.
José, Costa Rica.
Vol 1. 440 pp. y Vol 2 492 pp.
238 pp.

Métodos de laboratorio. 2002. UAM IB UNAM. 90 pp.
39
monitoring methods, Elsevier Academic Press. 777 pp.
Trigiano, R. N., Windham, M. T. and Windham, A. S., 2004. Plant pathology,

40
PRÁCTICA 6
IDENTIFICACIÓN DE SÍNTOMAS EN PLANTAS ENFERMAS
1. INTRODUCCIÓN
La Sintomatología es la rama de la Fitopatología que estudia los síntomas y los

signos que producen los patógenos en las plantas que atacan. Su conocimiento es
indispensable para el diagnóstico de las enfermedades.
Un síntoma es la manifestación visible de una condición patológica en una planta

sensible, y un signo es la estructura o evidencia del patógeno mismo, producida
dentro o fuera de los tejidos del hospedero.
Debido a la gran cantidad de síntomas que existen, se han agrupado bajo diversas
denominaciones, dependiendo de múltiples factores tales como el lugar de aparición,
del efecto del medio ambiente, del número de patógenos involucrados, etc. Así,
tenemos que los síntomas que ocurren en los órganos directamente atacados por los
patógenos se llaman síntomas primarios, en cambio, a los que aparecen en otro
órgano de la planta no atacado de forma directa por el patógeno, sino como una
secuela de éste, se les llama síntomas secundarios. En algunas ocasiones los
hospederos son atacados de manera simultánea por más de un patógeno,
provocando síntomas complejos. Otras veces los síntomas no se expresan del todo,
debido a condiciones ambientales favorables al patógeno, denominando a éstos
síntomas enmascarados. De modo típico, cada enfermedad produce varios síntomas
característicos, que en lo habitual aparecen en series subsecuentes durante el curso
de la enfermedad; a este conjunto de síntomas se le conoce con el nombre de
síndrome.
Desde el punto de vista morfofisiológico, los síntomas se agrupan en necrosis

(muerte de células, tejidos, órganos o la planta completa), hipoplasias (disminución
del desarrollo) e hiperplasias (exceso en el desarrollo).
41
Identificar los diferentes síntomas y signos que ocurren en las enfermedades
vegetales, mediante la observación de material fresco.
3.1 Materiales
Diez ejemplares fitopatológicos por equipo, prensados y con datos de identificación.

Ejemplares vegetales fitopatológicos frescos
Ejemplares vegetales fitopatológicos montados
Microscopio estereoscópico
Agujas de disección
Navaja
Cartulinas para herbario
Etiquetas
3.2 Metodología
1. Identificación de síntomas y de signos en ejemplares vegetales enfermos

utilizando la clave de identificación de síntomas y signos.
2. Los ejemplares a identificar se observan cuidadosamente, utilizando la lupa y el
microscopio cuando sea necesario, siguiendo la Clave de identificación de Síntomas
y Signos.
3.3. Clave de identificación de síntomas y signos
SÍNTOMAS
1. NECROSIS. Caracterizadas por la degeneración y muerte celular.

1.1. PLESIONECROSIS
Si se presentan antes de que ocurra la muerte celular 1.2. HOLONECROSIS
42
Si se manifiestan hasta que las células y los tejidos mueren
Cuadro 1. Clave para la identificación de síntomas y signos
1.1. PLESIONECROSIS
El tejido foliar toma coloraciones amarillentas debido a la AMARILLAMIENTO
destrucción de la clorofila
Presencia de tejidos débiles y flácidos debido a la pérdida MARCHITEZ
de la turgencia celular provocada por la carencia de agua,
casi siempre por el taponamiento de los vasos conductores
a causa de los patógenos.
Manchas traslúcidas, acuosas, como pequeñas gotas de HIDROSIS
agua contenidas dentro de los espacios intercelulares.
Estas acumulaciones de líquidos provienen de células que
han sufrido daños en sus membranas celulares.
1.2. HOLONECROSIS
Si se presentan en tejidos de almacenamiento 1.2.1
Si se presentan en tejidos verdes 1.2.2
Si se presentan en tejidos leñosos 1.2.3
1.2.1. Tejidos de almacenamiento
Los tejidos sufren rápidamente una descomposición 1.2.1.1. PUDRICIÓN
1.2.1.1. PUDRICIÓN
Si es antecedida por hidrosis y con un reblandecimiento de PUDRICIÓN BLANDA
los tejidos
El agua es eliminada muy rápido de los tejidos, por lo que MOMIFICACIÓN
el órgano atacado se seca, quedando con un aspecto
arrugado, duro y seco
1.2.2. Tejidos verdes
Marchitez y caída de las plantitas de almácigo, como AHOGAMIENTO O
consecuencia de la muerte (necrosis) de las células del “DAMPING-OFF”
cuello del tallo
Necrosis localizada alrededor del borde de la hoja CHAMUSCADO
Necrosis extendida en toda la lámina foliar TIZÓN
Zonas de tejido necrótico bien definidas, de diversos MANCHADO
colores y tamaños, en ocasiones rodeadas por un borde
púrpura o de algún otro color
Manchas necróticas muy pequeñas que después se rasgan TIRO DE MUNICIÓN
43
y se caen dejando pequeños orificios
Manchas necróticas sobre las que existe crecimiento RONCHA O
micelial oscuro ERUPCIÓN
Manchas necróticas muy pequeñas extendidas en todo el ABIGARRADO
órgano
Zonas alargadas de necrosis, a lo largo de venas y tallos RAYADO
Zonas necróticas alargadas, en las regiones intervenales BANDEADO
de la lámina
Repentina desecación, debilitación y muerte de toda la hoja QUEMADURA
debido a la acción indirecta de la actividad del patógeno
Necrosis epidérmica que da como resultado un blanqueado ESCALADADURA
de la epidermis y de los tejidos adyacentes en el fruto y las
hojas
Muerte repentina de brotes o yemas foliares AGOSTAMIENTO
Necrosis extensiva que provoca la caída de los frutos DESGRANAMIENTO
1.2.3. Tejidos leñosos
Necrosis restringida a los tejidos corticales del tallo o raíz, CÁNCER O CANCRO
generalmente rodeado de un callo de tejido sano
Necrosis extensiva que se origina en el ápice de brotes y MUERTE
corre hacia la base, por lo general después de la REGRESIVA
hibernación
Exudado de tejidos leñosos, de consistencia acuosa, SANGRADURA
generalmente de colores vivos
Exudados de consistencia viscosa o gomosa, generalmente GOMOSIS
en frutos
3. HIPERPLASIA. Existe un desarrollo excesivo en tamaño
y color de algún órgano de la planta o de la planta
completa, o bien por un desarrollo precoz de los órganos
Desarrollo excesivo de la planta en general 3.1. GIGANTISMO
Acumulación excesiva de pigmentos 3.2. HIPERCROMÍA
Los órganos se desarrollan fuera de lugar o con otras 3.3. METAPLASIA
formas
3.1 GIGANTISMO
Se da un torcimiento de los brotes o enrollamiento de las VERRUCOSIS
hojas por crecimiento excesivo de una parte del órgano O ENCHINAMIENTO
Marchitez causada por hinchamientos de las células COSTRA O ESCARA
epidérmicas y subepidérmicas, provocada por la
44
acumulación excesiva de agua
Sobrecrecimiento de tejido epidérmico, en forma de INTUMESCENCIA
pequeñas lesiones, ásperas, elevadas, formadas por
células con paredes suberizadas
Hinchazón provocada por la acumulación excesiva de SARCOSIS
material nutritivo, generalmente encima de un área
constreñida
Hinchazón localizada que envuelve a órganos completos TUMEFACCIÓN (tu-
mores, nódulos
agallas)
Desarrollo de órganos adventicios alrededor de un punto FASCICULACIÓN
local “ESCOBA DE
BRUJA”
Crecimiento laminar de tallos u otros órganos cilíndricos, FASCICACIÓN
provocando que estos tomen forma aplanada y extendida
Desarrollo continuado después de que se alcanza el PROLIFERACIÓN
desarrollo normal
3.2. HIPERCROMIA
Coloración verdosa en tejidos normalmente carentes de VIRESCENCIA
clorofila, debido a la producción y acumulación de ésta en
los órganos
Coloración púrpura resultante del desarrollo excesivo de ANTOCIANESCENCIA
antocianinas
Coloración cobriza como resultado de diversos procesos BRONCEADO
que acumulan pigmentos, como puede ser la deficiencia de
potasio
3.3 METAPLASIA
Desarrollo de órganos en posiciones anormales HETEROTROPÍAS
Desarrollo de pétalos u otros órganos florales en forma de FILODIOS
hojas
Desarrollo de hojas juveniles en plantas maduras JUVENILODIOS
SIGNOS
Exudados bacterianos de tipo cremoso y de color ZOOGLEAS
blanquecino
Se observa el crecimiento de organismos semejantes a los MILDIU O
hongos, en particular sus micelios y esporangios, que dan CENICULLA
una apariencia de fieltro suave, localizado en el envés de VELLOSA
45
las hojas. Casi siempre se observa en el haz una mancha
en correspondencia. Son producidos por Peronosporales
Se observa el crecimiento vegetativo del hongo, como un OÍDIO O
micelio de color blanquecino o grisáceo, en pequeños CENICILLA
manchones o de forma continua, que aparentas polvo POLVOSA
sobre las hojas. En algunas ocasiones se observan
conidios y cleistotecios. Todos son producidos por Erisifales
Presencia de pústulas que contienen una gran cantidad de ROYA
esporas de hongos Uredinales. Son circulares en
dicotiledóneas y alargadas en monocotiledóneas. Su color
varía entre amarillo, naranja y café oscuro, dependiendo del
tipo de espora que contengan (uredosporas o teliosporas)
Se presenta una masa de color negro, compuesta por CARBÓN
teliosporas de hongos Ustilaginales, la cual puede estar
cubierta por una membrana de la planta, o bien puede estar
desnuda
Micelio y conidios de hongos de color oscuro, producidos FUMAGINA
por Melioalaceas o Capnodiaceas. A pesar de que son
saprófitos, llegan a formar verdaderas costras sobre la
epidermis de las hojas, de los frutos o de las ramas que
disminuyen el área fotosintética
4. CUESTIONARIO
1. Diga usted a que hace referencia un síntoma

2. Diga usted a que corresponde un signo
3. Mencione en que parte de la planta se presenta el mildiu
4. Mencione dos géneros que producen pudrición blanda en los frutos
5. Mencione usted el género que causa la enfermedad conocida como “huitlacoche”
5. BIBLIOGRAFÍA
Agrios, G. N. 2005.Plant pathology. 5th ed. Elsevier academic Press. Amsterdam,

46
Blancard, Dominique. 1990. Enfermedades del Tomate: Observar, Identificar, Luchar.
Mundi-Prensa. España.
Blancard, Dominique. 1991. Enfermedades de Cucurbitaceas: Observar, Identificar,

Luchar. Mundi-Prensa. España.
Brunt, Alan; Crabtree K., Gibbs A. 1990. Viruses of Tropical plants. Descriptions and
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Hull, R. 2002. Matthews´ Plant Virology. Fourth Ed. Academic Press. San Diego, San
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Kurstak, R.E.F. 1991. Plant virus infections. Elselvier/North-Holland. Biomedical

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Matthews, R.E.F. 1991. Plant Virology. Academic Press. New York. London, Toronto,
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Matthews, R.E.F. 1992. Diagnosis of Plant Virus Diseases, Ed. C.R.C. Press. USA.
374 pp.
47
PRÁCTICA 7
CONTROL BIOLÓGICO
1. INTRODUCCIÓN
En la agricultura convencional moderna, los fungicidas son la principal herramienta

empleada para el control de hongos fitopatógenos. El uso continuado de estos
productos químicos para el control de estos microorganismos ha provocado a través
del tiempo el desarrollo de resistencia a los fungicidas utilizados y la contaminación
en los agroecosistemas productivos, afectando de manera negativa los servicios
ambientales básicos. Por ello, la tendencia actual ha sido racionalizar el uso de
fungicidas y desarrollar nuevas alternativas de control a través del uso de agentes de
control biológico. En la actualidad, se han desarrollado biopreparados con base en
microorganismos antagonistas como Trichoderma spp, que pueden reducir el
impacto de los patógenos vegetales. Este hongo antagonista permite el control de
patologías fungosas en árboles frutales, forestales y hortalizas, es posible aislarlo
localmente y reproducirlo en forma masiva para su aplicación a nivel de campo.
48
Comprobar el efecto antagonista de Trichoderma spp. con algunos hongos
fitopatógenos.
3.1 Materiales
Cepas puras de Trichoderma spp. Cepas puras de hongos Fitopatógenos

Cajas de Petri estériles con PDA Mechero
Papel parafilm Bisturí
Alcohol en matraz Erlenmeyer Incubadora
Alcohol en atomizador Cerillos
Papel absorbente Agua destilada estéril
Campana de flujo laminar
3.2 Metodología
1. Preparar la campana de flujo laminar y trabajar en la zona de asepsia.

2. Rotular las cajas de Petri en donde se van a llevar a cabo las pruebas duales.
3. Esterilizar el bisturí y enfriarlo.
4. De la cepas puras de cada una de las especies antagónicas se toma un
cuadro de aproximadamente 1 cm2 y se coloca dentro de uno de los extremos
de la caja Petri, opuesto a éste y de forma equidistante se coloca un cuadro
del mismo tamaño pero de la especie fitopatógena correspondiente.
5. Se incuba a 27 ºC, cuando desaparezca la condensación en el botoon de la
caja de Petri sellar las cajas con papel parafilm.
6. Se hacen las observaciones hasta que los crecimientos cubran la totalidad de
la superficie de crecimiento de las cajas de Petri.
7. Clasificar el grado de antagonismo de las pruebas duales de acuerdo con la
escala de Bell et al (1982) (tabla 1)-.
49
8. A los siete días de crecimiento de las colonias antagónicas, medir los centíme-
tros de crecimiento de cada una de ellas. Registre los datos en una tabla
comparativa entre los géneros evaluados.
Cuadro 2. Escala de clases para evaluar el grado de antagonismo de una

especie
Clase 1 El agente de control biológico crece completamente sobre la colonia

del patógeno y cubre toda la superficie del medio de cultivo.
Clase 2 El agente de control biológico crece al menos sobre dos terceras
partes de la superficie del medio de cultivo.
Clase 3 El agente de control biológico y el patógeno cubren aproximadamente
la mitad de la superficie del medio de cultivo.
Clase 4 El patógeno crece al menos en las dos terceras partes del medio de
cultivo limitando el crecimiento del agente de control biológico.
Clase 5 El patógeno crece sobre la colonia del agente de control biológico ocu-
pando toda la superficie del medio de cultivo.
4. CUESTIONARIO
1. Diga usted que es el control biológico

2. En que se sustenta el control biológico
3. Mencione al menos tres géneros de hongos utilizados en el control biológico
4. Diga usted que es un hongo antagonista
5. Diga usted como es el modo de acción de Trichoderma ssp.
5. BIBLIOGRAFÍA
Bell, D.K., Well, H.D. and Markham, C.R. 1982. In vitro antagonism of Trichoderma
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MANUAL DE PRÁCTICAS

Programa Académico de Ingeniería en Agronomía

Profesor: MC. Pablo Santiago Sánchez Azcorra

MC. Carlos Tiburcio Martínez Martínez

PRÁCTICA 1. COLECTA DE MATERIAL…………………..…………………. 1

3.1.1 Preparación de soluciones fijadoras…………………………… 2

3.3 Cuestionario de colecta………………………………………………….. 3

3.4 Datos del laboratorio……………………………………………………… 4

3.5 Usos del material colectado…………………………………………….. 4

1.2 Medios de cultivo………………………………………………………….. 7

1.2.1 Clasificación de los medios de cultivo…………………………. 7

3.2.1 Preparación de los medios de cultivo…………………………. 8

3.3.2 Vaciado del medio de cultivo a cajas de Petri………………... 9

3.4.1 Técnica de aislamiento de dilución en serie…………………... 9

3.4.2 Técnica de aislamiento de dilución en serie…………………... 10

PRÁCTICA 3. IDENTIFICACIÓN DE BACTERIAS FITOPATÓGENAS……. 12

3.2.1 Técnica para realizar preparaciones temporales…………….. 13

3.2.2 Tinción de Gram……………………………………………………. 13

3.2.3 Tinción de flagelos de bacterias………………………………… 13

3.2.3 Tinción de productos de excreción y cápsula de bacterias.. 14

PRÁCTICA 4. IDENTIFICACIÓN DE HONGOS FITOPATÓGENOS……….. 16

3.2.1 Preparaciones temporales ………………………………………….. 17

3.2.2 Preparaciones permanentes ……………………………………….. 17

3.2.1 Extracción de nematodos por el método de tamizado-

PRÁCTICA 6. IDENTIFCACIÓN DE SÍNTOMAS EN PLANTAS

3.3. Clave de identificación de síntomas y signos……………………………. 24

Cuadro 1. Clave para la identificación de síntomas y signos.. ………... 24

Cuadro 2. Escala de clases para evaluar el grado de antagonismo de

una especie ………………………………………………………… 30

El diagnóstico de las enfermedades de las plantas se refiere a la determinación

La colecta del material enfermo es de suma importancia, puesto que de esto

Manejar las técnicas más comunes de colecta y preservación de material de estudio

3.1.1 Preparación de soluciones fijadoras

Los problemas fitopatológicos se pueden presentar en hojas, raíces. tallos, etc. y se

Es indispensable que todos los ejemplares que se colecten, se acompañen de la

El material de herbario se debe montar en cartulinas blancas de 30 x 40 cm,

3.3 Cuestionario de colecta

Muestra No. _____________________ Variedad _________________________

2. Apariencia general del cultivo

Raíz____________________________ Brotes o tallos______________________

Plantas aisladas __________________ Manchones o grupos de plantas_________

5. Condiciones prevalecientes durante la aparición de los primeros síntomas y

Precipitación _____________________ Humedad relativa ___________________

Frecuencia de riego________________ Fertilizaciones ______________________

7. Químicos aplicados al cultivo (concentraciones y dosis)

Fertilizantes______________________ Fungicidas ________________________

8. Características del suelo

Datos del laboratorio que nos ayudarán al diagnóstico de la enfermedad y a la

a) Características de las lesiones.

3.5 Usos del material colectado

El material colectado puede emplearse para:

1. ¿Qué es el diagnóstico de las enfermedades?

Echandi, E. 1975. Manual de Laboratorio de Fitopatología General. Herrero Hnos.

López A.G. 1978. Técnicas de uso común en el manejo de Hongos fitopatógenos.

Narayanasamy, P. 2001. Plant pathogen detection and diseases diagnosis. Marcel

Roberts, G. y C. Boothroyd. 1972. Fundamentos de Patología Vegetal. Acribia.

Trigiano, R. N., Windham, M. T. and Windham, A. S., 2004, Plant pathology,

PREPARACIÓN DE MEDIOS DE CULTIVO Y TÉCNICAS DE AISLAMIENTO DE

En el diagnóstico de las enfermedades vegetales, el trabajo de laboratorio es de

Muestra No. _ Variedad _____

Raíz______ Brotes o tallos

Plantas aisladas __________ Manchones o grupos de plantas_

Precipitación ___ Humedad relativa _

Frecuencia de riego Fertilizaciones ______

Fertilizantes Fungicidas __