LABORATORIO DE INVESTIGACIONES BIOMÉDICAS UNISUCRE

TÍTULO: NORMAS DE MANEJO Y BIOSEGURIDAD EN EL LABORATORIO

LABORATORIO No. 1

INTRODUCCIÓN

Durante la segunda mitad del pasado siglo XX, la Bioquímica, la Biología

Molecular y la Ingeniería Genética han alcanzado un alto grado de desarrollo,
merced al apoyo de la informática, las comunicaciones y los avances
tecnológicos logrados en los diversos dominios de la Ingeniería.

La Universidad de Sucre, consciente de su papel como impulsador de diversas

líneas de investigación en el campo de la Biotecnología, ha incorporado a su
actividad investigadora y docente muchas técnicas que implican el manejo de
agentes biológicos y sustancias peligrosas. Esta situación comporta diversos
riesgos para la salud de las personas que los manipulan, dependiendo
fundamentalmente de la naturaleza del agente o de la sustancia en cuestión.
Ello obliga tanto a los responsables de los lugares donde se utilizan como a los
propios usuarios directos, a tener un profundo conocimiento sobre la naturaleza
y características de tales factores de riesgo, con el fin de conservar su salud.

Esta guía intenta aportar un instrumento útil y de fácil manejo, para identificar y
analizar los riesgos en bioseguridad asociados a las distintas operaciones que
se realizan habitualmente en los laboratorios de biotecnología y de tipo
biológico y describir las medidas que deben implantarse para su prevención y
control.

REGLAS GENERALES

Para la realización de cada práctica se exige que cada estudiante tenga el

manual respectivo y la previa lectura y estudio de la guía además de la
consulta de temas adicionales y/o complementarios del tema a desarrollar.
Toda práctica realizada conlleva al rendimiento de un informe de laboratorio
después de un plazo fijo para la realización del mismo.
Condúzcase responsablemente todo el tiempo que se encuentre en el
laboratorio.
Todo estudiante debe usar blusa de laboratorio blanca y limpia, esta le
preserva su ropa de muchos deterioros al igual que el uso de zapatos cerrados
a fin de evitar el contacto con la piel de las muestras y/o agentes químicos a
utilizar.
Se debe contar con los implementos de laboratorio que el profesor le
determine, la carencia de ellos implica reducción en el trabajo y mayor gasto de
tiempo.

1. Cuando se hace uso por primera vez del laboratorio no tocar ningún
equipo, agentes químicos, y otros materiales en los cuales no se le
instruido previamente.

2. En el laboratorio está prohibido fumar, comer, conversar en voz alta o

jugar, y aplicarse cosméticos. No pierda tiempo ni se distraiga en su
trabajo

3. Mantener su sitio de trabajo limpio y ordenado, evitando la presencia de

material y equipo que no tengan relación con el trabajo.

4. La limpieza, el cuidado al trabajar, el empleo correcto de las técnicas

enseñadas y el interés demostrado son factores indispensables y
contribuyen al éxito de sus prácticas.

5. El material de trabajo que se da para las prácticas es propiedad de la

Universidad de Sucre y deben ser devueltos en buenas condiciones de
conservación y limpieza, Usted es el responsable de él y debe reponer o
pagar todo el material roto o averiado.

6. Use los reactivos en las cantidades y concentraciones que se le indique

la mayoría son costosos y difícil de conseguir.

7. Cuando utilice reactivos o colorantes no emplee goteros ni pipetas

sucias para extraerlo de los recipientes. Tampoco emplee un mismo
gotero o pipeta para extraer sustancias diferentes.

8. Cuando le caiga un reactivo en la piel (ácido o base) lávese

inmediatamente con agua durante unos minutos. En caso de accidente o
quemaduras grave consulte con su profesor.

9. No arroje material sólido de desechos en las pocetas, utilice los

recipientes que se proveen para tal efecto.

10. No se retire del laboratorio sin causa justificada.

11. En su práctica utilice siempre su análisis y no confíe en los resultados de

sus compañeros, ya que la experiencia de ellos en este caso apenas se
inicia. Confíe en sus propias observaciones e informe siempre los
resultados obtenidos por Usted

12. Cuando mire a través del microscopio monocular conserve abierto el ojo
que no está utilizando en la observación. Esto facilita la elaboración de
esquemas y evita la fatiga.
 13. Los diversos reactivos etiquetados se encuentran en un área del
Laboratorio, es allí donde Usted debe buscarlos, evite llevarlos a su sitio
de trabajo, ya que son de uso común, así los demás compañeros no
perderán tiempo buscándolos.

14. El material biológico que se requiere en las diversas prácticas debe ser
llevado al laboratorio por cada estudiante (en la respectiva guía
aparecen estos requerimientos).

15. En el laboratorio encontrará escobillas y recipientes con agua jabonosa

para ejecutar la limpieza del material de vidrio al finalizar cada práctica.

16. Los instrumentos y aparatos de laboratorio son para su uso, sin

embargo, no utilice dichos aparatos sin un debido conocimiento y
adiestramiento dado por su profesor.

17. Sí observa alguna anomalía en su equipo de trabajo repórtesela

inmediatamente a su profesor y/o auxiliar de laboratorio, de lo contrario
Usted será responsable. No trate de arreglar nada, esto es labor de los
técnicos.

18. Del buen uso y manejo de los instrumentos, los cuales tienen un costo
elevado, depende el mantenimiento y duración, siga siempre las
instrucciones que se dan.

19. Al terminar cada una de las prácticas deje limpio y ordenado el sitio de
trabajo y los materiales que utilizó.

BIOSEGURIDAD

Los laboratorios son calificados con arreglo a sus características de diseño y

medios restrictivos y de contención (precauciones y equipo de seguridad) en
Niveles Básicos de Seguridad Biológica 1 y 2; Nivel de Contención de
Seguridad Biológica 3 y Nivel de Contención máxima de seguridad biológica 4.
Grupos de riesgos
Grupo de Riesgo 1:(escaso o nulo riesgo individual y comunitario)
Microorganismo que tiene pocas probabilidades de provocar enfermedades
humanas o animales.
Grupo de Riesgo 2 :(riesgo individual moderado, riesgo comunitario bajo)
Agente patógeno que puede provocar enfermedades humanas o animales,
pero que tiene pocas probabilidades de entrañar un riesgo grave para el
personal de laboratorio, la comunidad, el ganado o el medio ambiente. La
exposición en el laboratorio puede provocar una infección grave, pero se
dispone de medidas eficaces de tratamiento y de prevención, y el riesgo de
propagación es limitado.
Grupo de Riesgo 3:(riesgo individual elevado, riesgo comunitario bajo) Agente
patógeno que suele provocar enfermedades humanas o animales graves, pero
que de ordinario no se propaga de un individuo infectado a otro. Se dispone de
medidas eficaces de tratamiento y de prevención.
Grupo de Riesgo 4: (elevado riesgo individual y comunitario) Agente patógeno
que suele provocar enfermedades graves en las personas o en los animales y
que puede propagarse fácilmente de un individuo a otro, directa o
indirectamente. No suele disponerse de medidas eficaces de tratamiento y
prevención.

Recomendaciones generales:

- No ingerir alimentos ni bebidas durante la permanencia en el laboratorio, ni

guardarlos en los refrigeradores destinados a material propio del lugar de
trabajo.
- Debe establecerse la prohibición expresa de fumar.
- No pipetear con la boca.
- Utilizar los protocolos recomendados para cada trabajo.
- No usar prendas sueltas ni objetos colgantes y llevar el pelo recogido.
- Utilizar siempre bata manga larga y zapatos cerrados.
- Usar guantes y tapa bocas o caretas.
- Es recomendable lavarse siempre las manos al término de una operación y
antes de abandonar el laboratorio.
- Se debe tener a la mano un manual de primeros auxilios en caso de
accidente.
- Conocer y tener siempre a la mano el manual de bioseguridad.

SEÑALIZACION

En los laboratorios de biotecnología y de tipo biológico, la señalización

contribuye a indicar aquellos riesgos que por su naturaleza y características no
han podido ser eliminados. Considerando los riesgos más frecuentes en estos
lugares de trabajo.

Sustancias tóxicas: Son sustancias peligrosas para la salud cuando se

respiran, se ingieren o entran en contacto con la piel

Sustancias Inflamables: Evite el contacto con el aire, manténgalas alejadas de

fuentes de inflamación, evite el contacto con el agua o la humedad.

Riesgo Biológico: Señal de manipulación de agentes biológicos.

ELABORACIÓN DE INFORMES

El informe se debe elaborar con base en las anotaciones efectuadas durante el

laboratorio, de ahí la necesidad de poner el máximo cuidado en las notas y
dibujos que se hacen en el transcurso de la práctica consignándolas en forma
aseada, clara, completa y ordenada.

El informe debe constar de:

A. Portada
B. Introducción
C. Materiales y métodos
D. Análisis y discusión de resultados
E. Conclusiones
F. Bibliografía.

La portada incluye el título de la práctica, el nombre de las personas que lo

elaboraron, docente a quien va dirigido, institución, facultad, programa y
año.
La introducción expone objetivos del informe, algunas bases teóricas sobre
la temática del informe y un avance sobre las conclusiones logradas.
En los materiales y métodos se hace una descripción detallada del
procedimiento y los materiales empleados.
Los resultados se deben presentar con honradez y objetividad. Deben ser
única y exclusivamente los logrados por cada persona o grupo de trabajo,
generalmente son esquemas perfectamente detallados.
La discusión es la parte más importante del informe y se basan en los
resultados obtenidos, conocimientos teóricos adquiridos y revisión de
literatura, se debe efectuar un análisis crítico de los resultados, analizando
las posibles fuentes de error, comparando con las observaciones realizadas
por otras personas.
Las conclusiones son hechas con base en el análisis de los resultados
logrando un acercamiento a la interpretación de los datos obtenidos. En
este punto el investigador demuestra su agudeza de observación,
capacidad de análisis e interpretación (forma sistemática y ordenada para
efectuar las observaciones y anotar los datos). La bibliografía es la lista de
obras consultadas para la elaboración del informe, (libros, artículos, revistas
o dirección de páginas Web consultadas.

Además de las anteriores normas es fundamental organizar en forma

coherente el contenido del informe, y tener en cuenta la presentación física
del mismo. No debe olvidarse que un informe está siempre destinado a ser
leído y consultado por otras personas y que su contenido queda fácilmente
determinado por una presentación deficiente.

BIBLIOGRAFÍA RECOMENDADA

1. CRC handbook of laboratory safety. (4ª edición). 1995. Furr AK. CRC
Press, Inc., Boca Raton, Florida, 1996.
2. Laboratory Safety. Principles and practices. 1995. Fleming DO,
Richardson JH, Tukis JJ, y Vesley D. ASM Press, Washington DC.
3. Seguridad y condiciones de trabajo en el laboratorio. 1994. Guardino X y
col. Inst. Nac. Seg. Hig. Trabajo, Madrid.
4. Laboratory safety. 1993. Barkley W y Richardson JH. p. 716-734. En
Methods for general and molecular Bacteriology, P. Gerhardt (ed.). ASM,
Washington DC.
5. Hazards in the chemical laboratory (3ª Edición).1981. Bretherick L Ed.
The Royal Society of Chemistry, London,
 LABORATORIO DE INVESTIGACIONES BIOMÉDICAS UNISUCRE
TÍTULO: EXTRACCIÓN CASERA DE ÁCIDOS NUCLEICOS DE CÉLULAS
ANIMALES
LABORATORIO No. 2

OBJETIVOS:

A través del desarrollo de la práctica, se espera que el estudiante de Biología:

 Conozca algunos métodos de extracción de ácidos nucleicos de células

animales.
 Desarrolle habilidades en la extracción del DNA por los métodos
propuestos.
 Identifique las propiedades de los ácidos nucleicos evidenciadas en la
práctica.

MATERIALES:

Por estudiante:
Todo el material necesario para cumplir las normas de bioseguridad.

Por Grupo:
Un trozo de hígado de pollo, o de ratón, 1,25 g de Cloruro de Sodio (sal de
cocina), agua destilada (botella por 500 mL), 5 ml de jabon lavaplatos, 1 bisturí
con cuchilla o un Cuchillo, gasa.

Por el laboratorio para cada grupo:

2 Beaker de 50 ml, 1 Mortero, 1 Pipeta, 5 tubos de centrífuga, Etanol absoluto,
Centrífuga, Refrigerador (-20ºC), varilla de vridrio para doblar, 1 probeta de 50
ml

PROTOCOLO
1. Durante todo el desarrollo de la práctica use guantes para manipular el
material biológico.
2. Ponga en el congelador (-20ºC) el etanol absoluto.
3. Usando agua destilada prepare 25 ml de una solución de cloruro de
sodio 2M.
4. Separe un fragmento de 8-10 gr del tejido animal (medio hígado de
pollo) al que se le extraerán los ácidos nucleicos.
5. Corte el tejido en partes muy pequeñas usando un bisturí o cuchillo
limpio.
 6. Deposite el tejido cortado en el mortero, adicione 20 ml de agua
destilada y macere completamente hasta disolver completamente el
tejido.
7. Deje reposar el macerado a temperatura ambiente durante cinco
minutos para permitir que se precipiten las partículas de mayor tamaño.
8. Ponga una gasa doble (10 x 10 cm) sobre un beaker limpio y filtre el
macerado usando ésta. Descarte los tejidos retenidos en la gasa y repita
de nuevo la filtración usando otra gasa limpia hasta que el sobrenadante
quede libre de partículas sólidas.
9. Determine el volumen del sobrenadante usando una probeta.
Transfiéralo nuevamente al beaker y adicione una cantidad semejante
de la solución de NaCl 2M.
10. A continuación agregue 1 ml de shampoo o detergente líquido.
11. Deje reposar por espacio de 10 minutos.
12. Separe la solución en cuatro tubos de ensayo y centrifugue a 1.200
r.p.m. durante 5 minutos. Después tome el sobrenadante de cada tubo
con una pipeta pasteur y llévelo a un beaker limpio.
13. Luego añada lentamente 20 ml de etanol absoluto frío por las paredes
del recipiente manteniendo éste inclinado, hasta que se formen dos
capas.
14. Visualice los ácidos nucleicos precipitados formando una madeja blanca
en la interfase entre el alcohol y el agua.
15. Introduzca con cuidado una varilla de vidrio hasta la parte de abajo de la
separación agua y alcohol. Mueva suavemente la varilla en la misma
dirección para permitir que los filamentos de DNA se adhieran a la
misma. Luego de dos minutos retire suavemente la varilla atravesando la
capa de alcohol y visualice los ácidos nucleicos pegados en la punta de
ésta.

Cuestionario
1. Mencione como se da el proceso bioquímico para liberar el ADN contenido
en el núcleo, que función cumple en este proceso el detergente.

2. ¿A que se le denomina desproteinización, en el proceso de purificación del

ADN?

3. ¿Cuál es la función de un agente desproteinizador?

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TÍTULO: EXTRACCIÓN CASERA DE ÁCIDOS NUCLEICOS VEGETALES
LABORATORIO No. 3

FUNDAMENTO

La extracción de ADN de una muestra celular se basa en el hecho de que los

iones salinos son atraídos hacia las cargas negativas del ADN, permitiendo su
disolución y posterior extracción de la célula. Se empieza por lisar (romper) las
células mediante un detergente, vaciándose su contenido molecular en una
disolución tampón en la que se disuelve el ADN. En ese momento, el tampón
contiene ADN y todo un surtido de restos moleculares: ARN, carbohidratos,
proteínas y otras sustancias en menor proporción. Las proteínas asociadas al
ADN, de gran longitud, se habrán fraccionado en cadenas más pequeñas y
separadas de él por acción del detergente. Sólo queda, por tanto, extraer el
ADN de esa mezcla de tampón y detergente, para lo cual se utiliza alcohol
isoamílico, probablemente el único reactivo de esta práctica que no suele haber
en una cocina.

MATERIALES Y REACTIVOS

Bicarbonato sódico Vaso

Detergente líquido o shampoo Tubos de ensayo
Alcohol Isoamilico a 0 ºC Varilla fina
Por grupo: Detergente líquido o shampoo, bicarbonato sódico.

PROTOCOLO

1. Preparar el tampón con los siguientes ingredientes y mantener en la

nevera o en un baño de hielo triturado:
o 120 ml de agua, si es posible destilada y si no mineral. No usar
agua del grifo.
o 1,5 g de sal de mesa, preferiblemente pura.
o 5 g de bicarbonato sódico.
o 5 ml de detergente líquido o champú.
2. Elegir la muestra que va a proporcionar el ADN entre los vegetales que
pueda haber en la cocina (cebolla, ajo, tomates, etc.) y cortarla en
cuadraditos.
3. Triturar la muestra con un poco de agua en la batidora accionando las
cuchillas a impulsos de 10 segundos. Así se romperán muchas células y
otras quedarán expuestas a la acción del detergente.
4. Mezclar en un recipiente limpio 5 ml del triturado celular con 10 ml del
tampón frío y agitar vigorosamente durante al menos 2 minutos. Separar
después los restos vegetales más grandes del caldo molecular
haciéndolo pasar por un colador lo más fino posible. Lo ideal es
 centrifugar a baja velocidad 5 minutos y después pipetear el
sobrenadante.
5. Retirar 5 ml del caldo molecular a un tubo de ensayo y añadir con pipeta
10 ml de alcohol isoamílico enfriado a 0ºC. Se debe dejar escurrir
lentamente el alcohol por la cara interna del recipiente, teniendo éste
inclinado. El alcohol quedará flotando sobre el tampón.
6. Se introduce la punta de una varilla estrecha hasta justo debajo de la
separación entre el alcohol y el tampón. Remover la varilla hacia delante
y hacia atrás y poco a poco se irán enrollando los fragmentos de mayor
tamaño de ADN. Pasado un minuto retirar la varilla atravesando la capa
de alcohol con lo cual el ADN quedará adherido a su extremo con el
aspecto de un copo de algodón mojado.

Página consultada:
http://www.menorcaweb.net/cnaturals/aula/guions/bioquimica/tex9b.pdf