Tincion de Gram 2

Practica de laboratorio #6
Tincion de gram
Autor:Leon Thanya
INTRODUCCIÓN
Tinción de Gram La tinción de Gram, también conocida como coloración de Gram, es una
técnica de laboratorio que se utiliza rutinariamente en los estudios microbiológicos de las
bacterias. Fue diseñada por Christian Gram, un científico danés, en el año 1884.(Tinción de
Gram. (2020) El objetivo de Gram era conseguir una prueba con la que fuera posible diferenciar
diferentes grupos de bacterias para así poder estudiarlas y clasificarlas. La prueba resultó todo un
éxito y pronto se convirtió en una técnica muy útil no solo para el estudio de las bacterias,
sinotambién para poder identificarlas rápidamente en una infección y seleccionar el antibiótico
más adecuado para tratarla. La técnica se basa en aplicar una serie de colorantes a una muestra de
cualquier origen (esputo, orina, pus, etcétera) que supuestamente contenga bacterias no
identificadas. Los colorantes tiñen la pared de las bacterias de color morado y, tras unos minutos,
se realiza un lavado del colorante. Después de eso puede que el colorante permanezca en la pared
bacteriana o que se haya ido. En el primer caso permanecería el color morado, y se trataría de
bacterias Gram positivas y, en el segundo, la pared tendría un color rosado, y serían Gram
negativas.
Objetivo general
Realizar adecuadamente el frotis de bacterias sobre el porta objetos para llevar a cabo la tinción
con los colorantes que componen la tinción de Gram, e identificar si se tratan de bacterias Gram
positivas o Gram negativas al momento de observarla en el microscopio
objetivos especificos
 Realizar la practica de laboratorio,para conocer acerca del proceso de la tincion de gram

 Apropiar los fundamentos de la tincion de gram y su utilidad
PROCEDIMIENTO
PREPARACIÓN DE LAS LÁMINAS
Para realizar una coloración, ya sea simple o diferencial, es necesario como primer paso, preparar
el extendido de la muestra sobre la lámina portaobjeto y fijarlo para posteriormente añadir el o
los colorantes y observar la muestra teñida bajo el microscopio
Preparación del extendido:
 Colocar en cada una de las láminas limpias, secas y desgrasadas, una gota de solución
salina utilizando el asa de platino previamente esterilizada, despues se toma
asépticamente con el filamento una pequeña muestra del cultivo sólido y mezclar con la
gota de solución salina para obtener una suspensión.Despues se dejar secar la lámina a
temperatura ambiente
TINCION DE GRAM
 Se fija la muestra extendida a la lámina utilizando calor.Esto se logra pasando la lámina

varias veces por la llama del mechero
 Colocar las láminas extendidas y fijadas en una bandeja adecuada, cubrir su superficie
con cristal violeta por un minuto y enjaguar con agua
 aplicar un fijador del violeta de genciana (lugol). El lugol y el violeta de genciana
forman un complejo insoluble en agua capaz de penetrar en la pared de las células
bacterianas.
 Lavar de nuevo el portaobjetos con una mezcla de alcohol y acetona durante unos
segundos.
 añadir una tinción de safranina o fucsina para distinguir las gram negativas que
aparecerán bajo el microscopio (en lugar de incoloras) con un tono rosado o rojo y
lavar con agua.
 Ya se puede observar la muestra al microscopio donde se visualizarán de color violeta

las gram positivas y de color rosa-rojizo las gram negativas.
PREGUNTAS:
1. ¿Para qué sirve la tinción de Gram?

 la tinción de Gram se utiliza en microbiología desde finales del siglo XIX. Es una
técnica muy sencilla que se basa en el uso de un colorante (tinción) y que tiene una
gran utilidad en medicina. Es un tipo de tinción que se realiza sobre las bacterias para
observarlas mejor bajo el microscopio. Según la distribución del peptidoglicano de la
pared celular que las envuelve, se tiñen de una forma u otra. Así, las bacterias que no
se tiñen mediante esta técnica se denominan Gram negativas. Están formadas por una
pared más fina formada por menos capas de peptidoglicano y una segunda membrana
rica en lípidos (que repele la tinción Gram), al microscopio aparecen incoloras.
Las Gram positivas tienen una pared celular mucho más gruesa, formada por un gran
número de capas de peptidoglicanos entre las que se inserta la tinción Gram, dando un
color violeta intenso al microscopio y se clasifican como Gram +.La gran aportación
práctica de la tinción de Gram es que permite determinar el tipo de antibiótico así
como su eficacia. El antibiótico de elección ha de ser capaz de atravesar la pared
bacteriana, en función de si la bacteriana es gram positiva o negativa se seleccionará
el antibiótico más eficaz.
2. ¿Cómo es la pared celular de las bacterias Gram positivas?
 La pared celular de las bacterias Gram positivas está formada en un 90% por
peptidoglicano, siendo éste el principal componente que permite diferenciarlas con la
pared de las Gram negativas, pues al teñirlas, es gracias a él, al grosor que éste le
proporciona, que se logra mantener la coloración del cristal violeta en el interior de la
célula al teñirla con la tinción Gram.Esta se encuentra compuesta de ácidos teicoicos,
los cuales están presentes en pequeñas cantidades. Éstos se presentan embebidos en la
pared de la bacteria como polisacáridos ácidos.
3. ¿Cómo es la pared celular de las bacterias Gram negativas?
 tiene una capa delgada de Peptidoglican unida a una membrana exterior por
lipoproteínas. La membrana exterior está hecha de proteína, fosfolípido y
lipopolisacárido. En el lipopolisacárido, la porción de lípido está embebida en el
fosfolípido y el antígeno O polisacárido está en la superficie. El lípido se llama Lípido
A y es tóxico, pero el lipopolisacárido entero se llama Endotoxina. La pared de la
célula tiene poros llamado Porines para el transporte de substancias de peso molecular
bajo. Entre la membrana citoplásmica y la pared celular hay un espacio periplásmico
con enzimas hidrolíticas, enzimas inactivadoras de antibióticos y proteínas de
transporte.
4. ¿Para qué sirve el cristal violeta?
 colorante primario cumple como función permitir la identificación de bacterias cuya
estructura y composición de pared celular se encuentre mayor proporción y
distribución de ácido teicoico
5. ¿Para qué sirve el lugol?
 cumple la función de fijar el colorante primario en la preparación, es decir facilita la
adhesión del cristal violeta en la muestra
6. ¿Para qué sirve el alcohol acetona?
 sirve para realizar la decoloración, ya que en la misma es soluble el complejo
I2/cristal violeta. Los organismos gram positivos no se decoloran, mientras que los
gram negativos sí lo hacen
7. ¿Para qué sirve la safranina o fushina?
 Para el contraste, dado que las bacterias con baja composición de ácido teicoico y
alta composición lipídica en su pared no absorben el cristal violeta luego de ser
Removido con el alcohol ácido absorben este colorante color rojizo; las bacterias que
absorben este colorante y que adquieren una composición rosada o rojiza se conocen
como gram negativas.
8. ¿Cuáles son los tipos morfológicos bacterianos que existen? Explique.
 . Cocos
Los cocos son las bacterias que tienen forma esférica. Pueden vivir como células
Individuales o bien agruparse entre ellas formando cadenas.Dos bacterias de este tipo
que causan problemas de salud en humanos son “Staphylococcus” y “Streptococcus”,
dos géneros con especies que suelen estar vinculadas con intoxicaciones alimentarias
y que generalmente nos provocan infecciones en la piel y amigdalitis.
 Bacilos
Los bacilos son las bacterias que tienen forma de barra. “Escherichia coli” y
“Salmonella” son quizás las especies de bacterias más conocidas y forman parte de
este grupo. Ambas están relacionadas con intoxicaciones alimentarias.
Dentro de este grupo también encontramos dos de las especies de bacterias más
peligrosas del mundo: “Bacillus anthracis” y “Clostridium botulinum”. El primero es
el causante del ántrax, una enfermedad pulmonar mortal. El segundo, del botulismo,
una enfermedad extremadamente grave provocada por las toxinas que produce la
bacteria
 Vibrios
Los vibrios son las bacterias que tienen una morfología ligeramente curvada, en forma
de coma. Suelen encontrarse en medios acuáticos. “Vibrio cholerae” es un famoso
ejemplo de este grupo, pues es causante de la cólera en humanos.
 Espirilos
Los espirilos son las bacterias que tienen forma de tirabuzón rígido. “Spirillum
volutans” es una de las especies de bacterias más abundantes y se encuentra en medios
acuáticos de agua dulce.
 Espiroquetas
Similares a los espirilos, las espiroquetas son bacterias con forma helicoidal, aunque
en este caso el tirabuzón es más flexible. Un ejemplo de bacteria de este grupo es
“Treponema”, responsable de la sífilis, una enfermedad de transmisión sexual muy
Común
Conclusión
En esta práctica es muy importante ya que aprendimos a diferenciar entre una bacteria Gram
positiva y una Gram negativa, también con la ayuda de la tinción se pueden observar ciertos
factores diferentes como las células de color violeta (bacterias de pared Gram positivas),que en
este son gram positivas rod de tipo bacillus anthracis –bacilluus megaterrium y células de color
rosa (bacterias de pared Gram negativa).que es este caso son gran negativa –diplococci-neisseria
gonorrhoeae que se caracteriza por ser de difícil cultivo, siendo muy exigente a nivel nutricional
y a la vez muy sensible a sustancias que se encuentran en los medios de cultivo corrientes.
BIBLIOGRAFIA
 Bacteria gramnegativa. (2020). 25 Julio 2020, de

https://es.wikipedia.org/wiki/Bacteria_gramnegativa
 Tinción de Gram. (2020). 25 Julio 2020, de https://es.wikipedia.org/wiki/Tinci
%C3%B3n_de_Gram
 Bergey's manual de determinative bacteriology. (Book, 1994) [WorldCat.org]. (2020).
25 Julio 2020, de https://www.worldcat.org/title/bergeys-manual-ofdeterminative
bacteriology/oclc/28183643
 Bacteria gramnegativa. (2020). 25 Julio 2020, de
https://es.wikipedia.org/wiki/Bacteria_gramnegativa

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positivas o Gram negativas al momento de observarla en el microscopio

 Realizar la practica de laboratorio,para conocer acerca del proceso de la tincion de gram

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el extendido de la muestra sobre la lámina portaobjeto y fijarlo para posteriormente añadir el o

los colorantes y observar la muestra teñida bajo el microscopio

Preparación del extendido:

 Se fija la muestra extendida a la lámina utilizando calor.Esto se logra pasando la lámina

 Ya se puede observar la muestra al microscopio donde se visualizarán de color violeta

1. ¿Para qué sirve la tinción de Gram?

 Bacteria gramnegativa. (2020). 25 Julio 2020, de

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