Tesis Doctorado - Zulita Prieto Lara
Tesis Doctorado - Zulita Prieto Lara
Tesis Doctorado - Zulita Prieto Lara
ESCUELA DE POSTGRADO
PROGRAMA DOCTORAL DE CIENCIAS BIOLÓGICAS
TRUJILLO – PERU
1
2008
2
Agradecimientos
A la Universidad Nacional de Trujillo y a la Escuela de Postgrado, que por intermedio de sus autoridades
me brindaron su apoyo con el financiamiento económico para realizar los estudios de doctorado.
A mis alumnos: Julio León Incio, Carlos Quijano Jara, Carmen Aguilar Palmer, Roger Vallejo
Rodríguez, Lilibeth Cisneros Gonzales, Sophia Mendoza Amaya y a todos, que de manera desinteresada
contribuyeron en el desarrollo de la presente tesis.
A los profesores: Edgardo Polo Benites, María Cruz Briceño, Leticia Amésquita Cárdenas y a todos los
profesores por su apoyo en la ejecución de la tesis.
3
INDICE DE TABLAS
4
INDICE DE FIGURAS
Figura 1. Esquema del diseño experimental en Vicia faba. Control = 0.0 de ácido
fólico (AF) y 0.0 de dicromato de potasio (DP), AF = 5 µg/ml y DP= 0.5
mg/ml.
5
Figura 9. Frecuencia de puentes cromosómicos en anafase y telofases después de
8h de exposición a dicromato de potasio y micronúcleos después de 40h
de recuperación a los tratamientos con ácido fólico y dicromato de
potasio de meristemos radiculares de Vicia faba. C= Control negativo,
F=control acido fólico (5µg/ml), D=control dicromato de potasio
(0.5mg/ml) y FD= tratamiento simultáneo de ácido fólico y dicromato de
potasio.
Anexo, figura 3. Metabolismo del folato. Esta figura esta citada en Fenech. 2001.
Mutation Research 475 (2001): 57–67.
6
Anexo. Figura 7. Representación de probables mecanismos del origen de
micronúcleos (MN). A) Micronúcleo de origen aneugénico. Como
consecuencia de una alteración a nivel centromérico de un cromosoma,
este queda rezagado durante la migración anafásica y conduce a la
formación de un MN. B) Micronúcleo de origen clastogénico. A causa
de una rotura cromosómica, un fragmento cromosómico queda excluido
del núcleo, dando origen a un MN. La célula portador de MN continúa
las fases de G1, S, G2 e inician una siguiente división celular
manteniendo el MN en la célula, como se observa en metafase con MN.
El daño cromosómico se habría producido en interfase.
7
RESUMEN
8
ABSTRACT
9
INTRODUCCIÓN
10
complicada química intracelular, múltiples blancos y vías metabólicas
involucradas. Se presentan probables mecanismos de la acción del Cr(VI) a nivel
intracelular (Figuras 1 y 2, anexo).
En relación a la actividad genotóxica de los cromatos particulados y solubles,
el daño genético es más persistente con el cromato de plomo (particulado)
comparado a los efectos del cromato de sodio (soluble), con este último, en
células de fibroblastos bronquiales, los efectos del Cr(VI) decaen a las 72h luego
de la primera dosis. Se reportaron espectros similares de daño cromosómico en
células de epitelio bronquial expuestas a compuestos particulados y solubles 24.
Estudios con dicromato de potasio, el más soluble de los cromatos, demuestran su
genotóxicidad en los sistemas genéticos tales como: mutaciones en bacteris,
alteraciones cromosómicas en líneas célulares, micronúcleos en ratones4,
alteraciones cromosómicas durante la división mitótica en Vicia faba25,
mutaciones en levadura 26, micronúcleos en Procambarus clarkii27, correlación de
bandas polimórficas (amplified fragment length polymorphism, AFLP) con la
concentración de dicromato de potasio en Pseudokirchneriella subcapitata28,
roturas cromosómicas en células de ratones 29,30.
La utilización del ácido fólico como suplemento vitamínico surge desde los
reportes de su efectividad en el tratamiento de anemia36 y posteriormente, por la
11
reducción significativa de casos con defectos al tubo neural asociada a la
administración de ácido fólico37-39. El mecanismo metabólico de folatos y otras
vitaminas del grupo B, como B12, están íntimamente involucradas en la
remetilación de la homocisteina (Hey), la conversión de Hey a metionina para la
40,41
síntesis de S-adenosilmetionina (SAM), importante agente metilante in vivo .
Estudios in vitro e in vivo en células humanas indican que la deficiencia de folatos
produce elevada concentración de homocisteina, cromosomas frágiles, roturas
cromosómicas, excesivo uracilo en el DNA, hipometilación del DNA y formación
de micronúcleos42,43 (Figura 3, anexo).
12
laboriosa cuantificación de aberraciones de las estructuras cromosómicas 49.
Basado en el origen de los micronúcleos, ya sea por fragmentos acéntricos o
cromosomas rezagados durante la segregación cromosómica en anafase, la
determinación de frecuencias de micronúcleos es considerado un parámetro
potencial para la evaluación de químicos que inducen alteraciones cromosómicas,
estructurales o numéricas50-52. En los ensayos in vivo, en animales como el ratón,
la frecuencia de eritrocitos inmaduros (RET) con micronucleos son comúnmente
evaluados para determinar la genotoxicidad de compuestos químicos, debido a
que en los RET se muestra los daños recientes, a diferencia de los eritrocitos
maduros que conservan y acumulan los daños previos a la inducción 53.
13
Para lo cual se consideró los objetivos siguientes:
Determinar la frecuencia de alteraciones cromosómicas en meristemos
radiculares de Vicia faba expuestos a dicromato de potasio.
Estimar la variación de las frecuencias de alteraciones cromosómicas en
meristemos radiculares de Vicia faba por tratamiento simultáneo de ácido
fólico y dicromato de potasio.
Determinar las frecuencias de micronúcleos en eritrocitos policromáticos
de sangre periférica por efecto del dicromato de potasio en Mesocricetus
auratus.
Comparar las frecuencias de micronúcleos en eritrocitos policromáticos de
sangre periférica de Mesocricetus auratus expuestos a dicromato de
potasio y tratamiento simultáneo con ácido fólico y dicromato de potasio.
Explicar los posibles mecanismos del origen de las alteraciones
cromosómicas en Vicia faba y Mesocricetus auratus por efecto del
dicromato de potasio.
14
Justificación
Con la finalidad de aportar con nuevas evidencias sobre las propiedades del
ácido fólico, como un agente protector ante una exposición de un genotóxico, es
importante conocer en que medida disminuye el daño genético con la
administración conjunta del ácido fólico y el dicromato de potasio en las células;
para lo cual, se elige una especie vegetal como Vicia faba y una especie animal,
Mesocricetus auratus para los ensayos in vivo. Vicia faba, tiene reducido número
de cromosomas (2n=12), cromosomas con variación en tamaño y morfología, que
permiten su identificación y evaluación de los efectos que producen los
genotóxicos en la población celular meristemática de sus raíces en crecimiento,
validado internacionalmente como un sistema genético por constituir un sistema
que hace posible la evaluación de sustancias químicas por exposición directa de la
población celular proliferativa, similar a un sistema in vitro. Mesocricetus
auratus “hamster” se distingue por su cariotipo 2n=44 y cromosomas
relativamente grandes; en sangre periférica existe una población celular de
eritrocitos policromáticos que se diferencian morfológicamente de los eritrocitos
maduros, en la que es posible evaluar la frecuencia de micronúcleos, que son
consecuencia de alteraciones cromosómicas (clastogénico o aneugénico) que se
produce en las poblaciones celulares en estado proliferativo de médula ósea de los
individuos.
15
MATERIAL Y MÉTODOS.
1. Material biológico:
1.1. Vicia faba “haba”:
Población: Meristemos radiculares de la variedad señorita
Muestra: Meristemos radiculares de 12 semillas de la variedad señorita.
Unidad de análisis: el meristemo apical de una raíz.
1.2. Mesocricetus auratus “hamster”:
Población: individuos de la cepa Sirio Dorado
Muestra: 16 individuos de sexo masculino, peso en el rango de 90 a 100g,
de 6 meses de edad. Los individuos fueron obtenidos de Instituto
Nacional de Salud, Centro Nacional de productos Biológicos,
Coordinación de Bioterio, Lima, Perú.
Unidad de análisis: un individuo
2. Material químico:
Dicromato de potasio, Sigma/Aldrich.
Acido fólico, Laboratorio Hersil S.A. comprimidos de 0.5 mg.
3. Método:
3.1.Tipo de estudio: experimental
3.1. Diseño experimental:
En Vicia faba: meristemos de raíces secundarias.
Los tratamientos fueron: a) Control negativo (C ), b)control ácido fólico
(AF), c)control dicromato de potasio (DP) y d) tratamiento de ácido fólico
y dicromato de potasio (AF-DP).
Semillas sanas y de tamaños similares se colocaron en sustratos de
algodón para su germinación hasta la emergencia de raíces secundarias.
Las semillas con raíces secundarias en crecimiento, de 1 a 2 cm, fueron
expuestas de manera individual a concentraciones de 5µg/ml de AF,
0.5mg/ml de DP, 5µg/ml de AF y 0.5mg/ml de DP y un control negativo
(0.0 AF y 0.0 DP) durante 8 horas, luego de la toma de muestra (2 a 3
raíces), las raíces restantes de cada semilla se enjuagaron en agua y se
16
dejaron que continúen su crecimiento sin dicromato de potasio (fase de
recuperación) (Figura 1). Después de 40 horas de recuperación se procedió
con la segunda toma de muestra (2 a 3 raíces). Las muestras apicales de
cada semilla fueron fijadas en Carnoy`s y coloreadas con Orceína acética
1% durante 30 minutos25.
Variables:
Variables independientes:
Concentración de ácido fólico ( 0.0 y 5 µg/ml)
Concentración de dicromato de potasio ( 0.0 y 0.5 mg/ml)
17
Variable dependiente:
Frecuencia de alteraciones cromosómicas, evaluado a través de los
indicadores:
Frecuencia de fases mitóticas
Frecuencia de anafase-telofases con puentes cromosómicos (ATp)
Frecuencia de micronúcleos (MN)
Frecuencia de cromosomas rezagados
18
determinación de diferencias entre tratamientos se realizó con la prueba de
análisis de varianza y la comparación de promedios de Tukey (p<0.05).
Toma de muestra
Procedimiento:
Toma de muestra antes de la administración de ácido fólico y antes de la
inyección de dicromato de potasio en las etapas 1 y 2 del diseño
experimental.
19
En la etapa 1: Adicionalmente a las muestras previas se tomó muestras de
sangre periférica después de 2 días y luego de 4 días de tratamiento con
dicromato de potasio, muestras de sangre periférica y médula ósea.
En la etapa 2: Adicionalmente a las muestras previas, se tomó muestras de
sangre periférica y médula ósea a los 4 días de tratamiento con dicromato
de potasio.
Obtención de la muestra
Sangre periférica: Con una aguja estéril se realizó una punción en el
extremo de la cola del individuo y con un capilar heparinizado se obtuvo
dos a tres gotas de sangre y se realizó los extendidos celulares sobre
láminas portaobjetos. Se fijaron en metanol absoluto y se colorearon con
Giemsa 7% por 20 minutos. Luego del enjuague, las láminas secas
sellaron con una gota de Entellan y lámina cubreobjeto.
Médula ósea: los individuos fueron sacrificados por dislocación cervical
previamente anestesiados. Se extrajo la médula ósea y fueron colocados en
una solución de cloruro de potasio 0.075M, se realizaron suspensiones
celulares con rapidez y transferidos a un tubo de centrífuga. Se mantuvo
en reposo por 20 minutos a 37ºC. Se centrifugaron a 800 rpm 10 minutos,
y luego de eliminar el sobrenadante se agregó el fijador, solución de
metanol:ácido acético (3:1) la cantidad aproximada de 7 ml en cada tubo y
se dejó en reposo por 20 minutos a 5ºC. Se realizó la suspensión celular y
fue centrifugado nuevamente. Luego de eliminar el sobrenadante se agregó
1ml de fijador, se resuspendió y se dejó caer una o dos gotas sobre láminas
limpias y secas. Luego de 24 horas de secado fueron coloreados con
Giemsa 7% por 20 minutos56.
Variables:
Variables Independientes:
Dosis de ácido fólico (0.0 y 1mg/ml)
Dosis de dicromato de potasio (0.0 y 50mg/Kg)
20
Variable dependiente:
Frecuencia de eritrocitos policromáticos con micronúcleos en sangre
periférica.
Instrumentos de recolección de datos
Un microscopio Olympus a 1000X de magnificación. Cámara
fotográfica y contador de células.
Toma de datos:
En eritrocitos policromáticos se cuantificaron 4000 células con o sin
micronúcleos y se estimaron las frecuencias en cada individuo.
Procesamiento estadístico: Las frecuencias determinadas fueron
comparadas mediante el análisis de varianza y pruebas de comparación
múltiple de Tukey.
21
Figura 2. Esquema del diseño experimental, etapa 1, seguido en Mesocricetus
auratus. Acido fólico (AF=1mg/ml), Dicromato de potasio (DP=50mg/Kg).
Solución fisiológica de cloruro de sodio. Agua bidestilada estéril.
22
RESULTADOS
En Vicia faba:
Efecto del dicromato de potasio:
A nivel mitótico:
En los meristemos radiculares de Vicia faba expuestas a dicromato de
potasio a 0.5mg/ml durante 8h, el índice mitótico promedio fue de
1.93±0.06% comparado con 7.88±2.37% en el control, significativamente
disminuida p<0.05. Después de 40h de recuperación, contrariamente a los
resultados anteriores, el índice profásico y el índice mitótico estuvieron
incrementados en el tratamiento con dicromato de potasio, siendo sus valores
promedios: 8,27±1.32% y 13.11±1,81% y del control, 4.44±2.18% y
8.01±3.27%, respectivamente (p<0.05) (Tabla 1).
23
(Tabla 2). Sin embargo, cuando se evaluó ATp aleatoriamente, se registró
0.05±0.07% de 2095 células en promedio, valor no significativo comparado
con el control. Después de 40h de recuperación, se cuantificó micronúcleos
(MN), ATp y ATrz en muestras elegidas al azar de todo el extendido celular y
se encontró 1.98±0.88% de MN (p<0.05), las demás alteraciones no
presentaron diferencias significativas (p>0.05) (Tabla 2).
Efecto del acido fólico y del tratamiento simultáneo con ácido fólico y
dicromato de potasio.
El índice mitótico en el tratamiento con ácido fólico fue de 10.43±1.64%,
mientras que en el control fue de 7.75±1.79% (p<0.05). Al comparar los
índices profásicos entre si, se observó similar diferencia. Después de 40h de
recuperación – sin ácido fólico y sin dicromato de potasio - no hubo
diferencias significativas en el índice mitótico entre todos los tratamientos,
aún cuando los valores promedios están aumentadas (Tabla 3, figura 8).
24
algunos meristemos, particularmente en uno, se registró un incremento
significativo de células con segregación y compactación cromosómica
incompleta como se muestra en la figura 7.b, inclusive mayor que en el
tratamiento con dicromato de potasio.
En Mesocricetus auratus:
25
En médula ósea de los individuos con dicromato de potasio se observó la
presencia de metafases poliploides en los individuos con dicromato de potasio
(Figura 12), con aumento del número de metafases comparada con el resto de
individuos. En la figura 13, se muestra 3 placas metafásicas en un campo a
10X, de un individuo después de cuatro días de la dosis de dicromato de
potasio, via intraperitoneal y sin tratamiento con colchicina.
26
Figura 4. Telofases con puentes cromosómicos (Tp) en meristemos radiculares de
Vicia faba expuestos a dicromato de potasio (0.5mg/ml). a) un puente, b y c)
puentes múltiples, c) cariocinesis con variación en el tamaño nuclear. Barra 10µm.
27
Figura 5. Alteraciones cromosómicas en meristemos radiculares de Vicia
faba expuestos a dicromato de potasio (0.5mg/ml). a) célula con núcleo
lobulado y portador de un micronúcleo, b) brote nuclear. c)metafase
alterada, cromosoma en anillo. d) telofase con un cromosoma rezagado.
Barra 10µm.
28
Figura 6. Micronúcleos en meristemos radiculares de Vicia faba expuestos a
dicromato de potasio (0.5mg/ml). a) metafase con micronúcleo pequeño. b)
interfases con micronúcleos que difieren en la compactación. Barra 10µm.
29
Figura 7. Alteraciones en la segregación cromosómica en meristemos radiculares
de Vicia faba expuestos a dicromato de potasio 0.5mg/ml. a y b) migración
alterada y falta de condenzación cromosómica, c y d) cromosoma segregado e
inicio de citocinesis, e y f) citocinesis con variación del tamaño de núcleos. Barra
10µm. A) Migración de un grupo reducido de cromosomas, B y C) Citocinesis
con diferencias en el tamaño de los núcleos segregados. D) Células hijas,
minicélula y célula con mayor contenido nuclear. Barra 10µm.
30
16
IM
14 IP
12
Frecuencia (%)
10
0
C F D FD C F D FD
8h 40h
Tratamientos
31
60
55
50
45
40
Frecuencia (%)
35
30
25
20
15
10
5
0
C F D FD C F D FD
Puentes Cromosomicos Micronúcleos
(ATp) 8h (MN) 40h
32
Tabla 1. Frecuencias de fases del ciclo celular en muestras aleatorias de
meristemos radiculares de Vicia faba expuestos a dicromato de potasio 0.5mg/ml
durante 8h y 40h de recuperación.
__________________________________________________________________________________________
Horas Tratamiento Interfase Mitosis (índice de fases)
%
IM IP IMt IA IT
x ± DE x ± DE x ± DE x ± DE x ± DE x ± DE
__________________________________________________________________________________________
8 Control 92.12± 2.37 7.75 ± 1.79 4.76 ± 0.45 1.20 ± 0.94 0.68 ± 0.35 1.25 ± 0.45
Cr2K2O7 98.07*± 0.06 2,69*± 2,09 1.56**± 1.23 0.10 ± 0.00 0.09 ± 0.07 0.31± 0.10
40 Control 91.99 ± 3.67 8.01 ± 3.27 4.44 ± 2.18 1.19 ± 0.56 0.90±0.41 1.48 ± 0.85
Cr2K2O7 86.89 ± 1.81 13.11*±1.81 8.27* ±1.32 2.09 ± 0.84 0.91±0.36 1.85 ±0.20
_____________________________________________________________________________________________________________________________________________________
n= 2000 células por ápice de raíz.
* p<0.05
** p<0.01
___________________________________________________________________________________
Tratamiento 8h de exposición 40 h de recuperación
33
Tabla 3. Índices mitótico y profásico en meristemos radiculares de Vicia
faba, Control negativo (C ), control dicromato de potasio (D), control ácido
fólico (F) y ácido fólico-dicromato de potasio (FD) a las 8 horas de
tratamiento y después 40 horas de recuperación.
_________________________________________________
Horas Tratamiento IM IP
x ± DE x ± DE
__________________________ _______________________
__________________________________________________________________________________
* p<0.05
34
Tabla 4. Frecuencia de anafase-telofase con puentes cromosómicos a las
8 horas de tratamiento con dicromato de potasio 0,5 mg/ml y frecuencia
de micronúcleos 40 horas de recuperación en meristemos radiculares de
Vicia faba expuestos previamente con ácido fólico 5 µg/ml.
35
Figura 10. Eritrocitos policromáticos de sangre periférica de un individuo de
Mesocricetus auratus después de 48h de tratamiento con dicromato de potasio
(50mg/1Kg). Se indica un eritrocito policromático con un micronúcleo. 1000X.
36
Figura 11. Eritrocitos policromáticos de sangre periférica de un individuo de
Mesocricetus auratus después de 48h de tratamiento con dicromato de potasio
(50mg/Kg). Se indica un eritrocito policromático con dos micronúcleos. 1000X.
37
Figura 12. Placa metafásica con número poliploide de cromosomas en un
individuo Mesocricetus aratus después de 48h de la aplicación intraperitoneal de
dicromato de potasio (50mg/Kg). 1000X.
38
Figura 10. Placas metafásicas en médula ósea de un individuo
Mesocricetus auratus expuesto a dicromato de potasio (50mg/Kg, vía
intraperitoneal).
39
Tabla 5. Frecuencias de eritrocitos policromáticos con micronucleos en sangre
periférica de individuos de Mesocricetus auratus suplementados con ácido fólico.
___________________________________________________________
Tratamientos N° RET MN
______________________________
N° ‰ x ± SD
___________________________________________________________
Control 4066 18 4,43 3,62 ± 1,09
4200 21 5,00
4041 14 3,46
4440 13 2,93
4374 10 2,29
40
Tabla 6 . Frecuencia de eritrocitos policromáticos con micronúcleos en sangre periférica de
Mesocricetus auratus expuestos a ácido fólico (1μg/ml) y dicromato de potasio (50mg/Kg).
______________________________________________________________________
Tratamiento Antes de DP Después de 48h de DP Después de 96h de DP
MN ‰ MN ‰ MN ‰
X ± DE
______________________________________________________________________
______________________________________________________________________
_____________________________________
Tratamientos MN después de 96 h de DP
‰ x ± DE
_____________________________________
Control 2,95 ± 0,73
DP 6,77 ± 0,25
AF + DP 4,67 ± 1,55
AF 4,81 ± 0,86
_____________________________________
41
42
DISCUSIÓN
43
uno o más puentes cromosómicos probablemente tomarían la vía apoptósica o
tardarían más en continuar el proceso proliferativo.
44
material genético sería tal que la probabilidad de recuperación de estas células
sería escasa. Los mecanismos que explican la alteración en la condensación
19,59
cromosómica por efecto del cromo no se conocen. reportan cambios
conformaciones a nivel de nucleosomas por efecto del Cr(III) que impiden el
inicio de la transcripción.
Por otro lado, la cariocinesis asimétrica mostrada por efecto del Cr(VI)
derivado del dicromato de potasio tanto en células somáticas como en células
meióticas, serían indicadores de alteraciones en el complejo de proteínas
implicados en los procesos de condensación cromosómica, lo cual ocurre, paralelo
a la formación de la banda pre-profásica, importante para la ubicación sincrónica
del conjunto de cinetocoros al huso acromático y segregación cromosómica
equitativa. De acuerdo a las configuraciones adoptadas en la segregación
cromosómica por efecto del Cr(VI) en los meristemos de raíz de vicia faba, se
propone una explicación de la presencia de minicélulas, como consecuencia de la
segregación incompleta y no equitativa del conjunto de cromosomas, falta de
condensación cromosómica, asincronía en el progreso acromático y compactación
cromosómica, generándose la citocinesis con una fisión obligada de los
cromosomas o con la segregación de uno o mas cromosomas, resultando dos
células hijas con núcleos notoriamente distintas, una minicélula y otra, con un
exceso de material genético. En la figura 4A. Inicio de la migración de un grupo
reducido de cromosomas, 4B y 4C. Citocinesis con variación del contenido
nuclear, y en 4D. Minicélula. Un mecanismo alternativo, al origen de un
microcito.
45
De todas las alteraciones registradas durante la mitosis por efecto del
dicromato de potasio en Vicia faba, a las 8 horas de tratamiento, las células AT
con puentes cromosómicos del total de telofases fueron significativamente altas
comparada a los ATp evaluadas al azar y a las 40 horas de recuperación después
de la exposición al dicromato de potasio, la alteración mas frecuente fue la
presencia de MN. Consideramos estos dos parámetros altamente sensibles para
ensayos de genotoxicidad. Este método de evaluación tiene ventajas de ser
factible de que la cuantificación sea realizada por más de un observador, mayor
objetividad, disminución del error de muestreo, facilidad en la toma de datos y
resultados comparables en diferentes laboratorios. No habiéndose encontrado
publicaciones similares al respecto.
46
significativo por efecto de la administración intraperitoneal de dicromato de
potasio en madres gestantes y en sangre periférica de fetos provenientes de
madres gestantes con tratamiento intraperitonial de dicromato de potasio,
registraron 12,60 ‰ de MN en eritrocitos policromáticos; en ratones
suplementados vía oral, por periodos prolongados no mostraron diferencias
64
significativas con el control en la frecuencia de micronúcleos . Sin embargo,
con el test del cometa demostraron la presencia de fracturas cromosómicas por
efecto del dicromato de potasio administrados por via oral en ratones65, esto
indicaría mayor sensibilidad del test del cometa en la detección de genotoxicidad.
47
la presencia de micronúcleos con fragmentos cromosómicos terminales acéntricos
y micronúcleos con cromosomas completos, como consecuencia de roturas
cromosómicas explicadas por la incorporación de uracilo en la estructura del
DNA68,69. De estas evidencias concluyeron que los folatos tienen efecto protector
del DNA tanto en las alteraciones de estructura como en el número
cromosómico69.
El efecto sinergizante del folato a dosis bajas de radiación ionizante fue reportada
en ratones, haciéndose efectiva la remoción de tumores con la aplicación de
48
radiación después de 2 a 3 días de tratamiento con folato, hecho que no fue
posible por la terapia convencional -solo con radiación- para inducir apoptosis o
necrosis de células neoplásicas y promover la reducción del tamaño del tumor 47.
Otros trabajos con aplicación conjunta de acido fólico y dicromato de potasio
reportaron disminución de las frecuencias de alteraciones en la morfología de
espermatozoides en conejos debido a la actividad antioxidante del acido fólico 48 .
Elevada frecuencia de eritrocitos micronucleados han sido registrados en
pacientes con diabetes mellitus y con la suplementación de acido fólico reportan
su disminución a diferencia de lo que ocurren en ratas70, la reducción de
eritrocitos micronucleados por efecto del acido fólico reportaron en conejos con
diabetes inducido previamente71.
49
los síntomas hematológicos de la deficiencia de la vitamina B12 por acido fólico.
En relación, al posible rol del folato en la carcinogénesis, por un lado, se
mencionan el efecto protector en pacientes con riesgo al cáncer colorectal 81,82, y
por otro, el acido fólico aumenta la probabilidad de progresión al cáncer en
pacientes con lesiones preneoplásicas83.
50
PROPUESTA
51
CONCLUSIONES
52
BIBLIOGRAFÍA
53
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62
ANEXO
63
Figura 1. Posible estructura del Cr(III) en unión con un nucleótido de guanina.
Esta figura está citado como Fig. 6 en Arakawa et al. 2006. Carcinogenesis
27(3):639-645.
64
Figura 2. Modelo esquemático de la represión transcripcional del cromo. Esta
figura está citada como Fig. 9 en Schnekenburger et al. 2007. Mol Cell Biol,
2007. 27(29):7089-101.
65
Figura 3. Metabolismo del folato. Esta figura esta citada en Fenech. 2001.
Mutation Research 475 (2001): 57–67.
66
Figura 4. Placa metafásica de un individuo macho de Mesocricetus auratus.
2n=44. La flecha indica el cromosoma sexual X, metacéntrico, de mayor tamaño,
1000X.
67
Figura 5. Placa metafásica de un individuo hembra Mesocricetus auratus.
2n=44. Las flechas indican los cromosomas sexuales X, metacéntrico, de
mayor tamaño, 1000X.
68
Figura 6. Eritrocitos policromaticos y maduros de Mesocricetus
auratus. Se señala un eritrocito policromático.
69
(A) (B)
70
71