03 Tema3

Análisis Instrumental
Tema 3. Espectroscopia UV - visible
Tema 3. Espectroscopia de absorción

molecular Ultravioleta Visible
José Marcos Jurado Jurado

Departamento de Química Analítica
Universidad de Sevilla
Epígrafes del tema:
-Introducción y fundamentos
-Estructura química y absorción de la radiación UV- Vis
- Ley de Beer – Lambert
- Error fotométrico
- Instrumentación
-Instrumentos de haz sencillo y de haz doble
-Instrumentos multicanal
-Aplicaciones analíticas
1
Introducción y fundamentos
La espectroscopia de absorción molecular se basa en la absorción de radiación

ultravioleta y visible por parte del analito, originándose un estado activado que
posteriormente elimina su exceso de energía en forma de calor.
X + hυ→X* → X + calor
Colorimetría. Este término se refiere a la medida de la radiación absorbida en

la región visible del espectro electromagnético y se emplean aparatos que
utilizan filtros (Fotómetros).
Espectrofotometría. Se refiere a la medida de la radiación absorbida en las

regiones visible, ultravioleta e infrarroja. Se utilizan monocromadores para
seleccionar las longitudes de onda y sistemas de detección más sensibles,
como tubos fotomultiplicadores (Espectrofotómetros).
Estructura química y absorción de la radiación UV- Vis
Absorción de radiación
Cuando una molécula absorbe un fotón UV-Vis se incrementa su energía,
pasando a un estado excitado.
-La absorción de radiación ultravioleta y visible origina transiciones entre distintos
niveles de energía electrónicos, así como simultáneamente transiciones
vibracionales y rotacionales.
ΔE = ΔEelectrónica + ΔEvibracional +ΔErotacional
-Los tipos de transiciones electronicas

que pueden producirse debido a la
absorción de radiación por una molécula
son de los tipos σ→σ*, π→π*, n→σ*,
n→π*. También pueden producirse
transiciones denominadas de
transferencia de carga y de campo
ligando
2
Transiciones σ→σ*
- Implican energías relativamente grandes, de forma que las bandas de absorción

se observan en el ultravioleta lejano, a longitudes de onda inferiores a 200 nm.
- Esta región del espectro se denomina frecuentemente ultravioleta de vacío (es
necesario trabajar al vacío porque las moléculas de los gases atmosféricos
absorben a estas estas λ).
- Estas transiciones aparecen para hidrocarburos saturados, debido a los
electrones de enlace C-H y C-C.
Transiciones n→σ*
- Requieren energías algo inferiores que las

σ→σ*, pero la mayoría de las bandas siguen
apareciendo en el UV de vacío (entre 150-
250 nm).
- Se producen a partir de especies con pares
de electrones en orbitales no enlazante.
Transiciones n→π* y π→π*
- Las transiciones π→π* requieren la absorción de una cantidad de

energía relativamente grande, por lo que suelen aparecer en el ultravioleta
lejano y próximo, mientras que las n→π* necesitan menor cantidad de
energía, como consecuencia de lo cual se originan bandas en las zonas
ultravioleta próximo y visible. La región espectral va de los 200 a los 700
nm.
- En cuanto a la intensidad de la absorción, las absortividades molares de

los picos asociados a las transiciones n→π* son generalmente bajos,
mientras que los correspondientes a los π→π* son considerablemente
mayores
- La mayoría de las aplicaciones de la espectroscopia de absorción de

compuestos orgánicos se basan en este tipo de transiciones.
- Es conditio sine qua non que los compuestos presenten grupos

funcionales con orbitales π (dobles enlaces).
3
Las moléculas pueden

contener grupos cromóforos
(absorben luz UV – Visible),
como por ejemplo los anillos
aromáticos) y otros llamados
auxocromos (hacen que se
modifique alguna de las
características de la absorción
del cromóforo, exaltan el color
o la intensidad del mismo)
Un grupo auxocromo puede causar los siguientes efectos sobre el máximo

de absorción:
Efecto batocrómico: aumento de la λ.

Efecto hipsocrómico: disminución de la λ.
Efecto hipercrómico: aumento de ε (y, por ello, de la absorbancia)
Efecto hipocrómico: disminución de ε (y, por ello, de la absorbancia)
La conjugación de cromóforos tiene los siguientes efectos:

1) Si los cromóforos están separados por dos o más enlaces sencillos se dice
que están aislados, y, en estos casos, la absorción es la suma de todos los
grupos cromóforos presentes.
2) Cuando los cromóforos están unidos directamente, el espectro resultante

normalmente es distinto del que presentan ambos cromóforos cuando están
aislados, ya que en realidad se forma un nuevo cromóforo.
3) Cuando los cromóforos están conjugados (separados por un enlace sencillo) se

produce un desplazamiento batocrómico acompañado de un efecto hipercrómico.
Esta es una situación intermedia con respecto a las dos anteriores.
4
Transiciones de transferencia de carga

Son transferencias electrónicas entre dos átomos o grupos funcionales de la misma
molécula. Es por tanto necesario que un componente de la molécula tenga carácter
dador de electrones y otro de aceptor.
Entre un catión y un ligando Fe(III)-SCN- + hv → Fe(II)-SCN
Entre dos grupos funcionales
El estado excitado es el producto de un proceso de oxidorreducción interna.

Las absortividades molares son muy altas (>10000), con lo que las bandas de
transferencia de carga, originadas en el UV-Vis, son de gran utilidad analítica debido a
la sensibilidad de estos sistemas.
Espectros de trasferencia de carga
5
Transiciones de campo ligando

Son transferencias electrónicas entre orbitales d de los metales de transición. En
estado gaseoso diluido y ausencia de una campo eléctrico o magnético externo, los
orbitales d (parcialmente ocupados) de los metales de transición tienen la misma
energía. En disolución, la formación de complejos entre el ión metálico y agua u otro
ligando, produce la separación energética de estos orbitales y la transición de
electrones entre orbitales d requiere absorción de energía (mediante la absorción de
radiación visible generalmente).
dxy dxz dyz
dz2 dx2-y2
El orden de los ligandos más comunes en orden creciente de fuerzas del campo
ligando (serie espectroquímica) , donde ∆ aumenta al aumentar la fuerza del campo,
es:
I-<Br- < Cl- <F- <OH- < C2O4=~ H20 < SCN- <NH3 < etilendiamina< o-fenantrolina<
<NO2- < CN-
Puesto que Δ aumenta con el campo, la longitud de onda del máximo de absorción
disminuye.
Espectros de disoluciones acuosas de metales de transición
6
Bandas de absorción originadas por diferentes transiciones electrónicas
Ley de Beer-Lambert
Ley de Beer-Lambert
Cuando un haz de radiación monocromática de una determinada longitud de onda
atraviesa una capa de disolución conteniendo una especie absorbente, la potencia
(energía por unidad de tiempo y unidad de área) del haz incidente P0 se atenúa,
disminuyendo hasta P.
Se define la transmitancia, como la fracción de radiación incidente que consigue
atravesar la muestra. P P
T= ; %T = ×100
P0 P0
Un parámetro de mayor utilidad práctica es la absorbancia, A, definida como
P0 P P
A = − log T = log Experimentalmente: A = log disolvente ≈ log 0
P Pdisolución P
La concentración c de un analito absorbente está relacionada linealmente con la
absorbancia, de acuerdo con la ley de Beer:
A = ε bC
ε es el coeficiente de absortividad molar (L mol-1cm-1), b es la longitud (cm)
de la trayectoria de la radiación en la disolución (camino óptico), C es la
concentración (M) de la especie en disolución y A es la absorbancia.
7
Error fotométrico (Desviaciones de la Ley de Beer)
Desviaciones de la Ley de Beer

La relación absorbancia - concentración es lineal para concentraciones de analito
relativamente bajas (generalmente < 0.01 M). Se observan desviaciones más o
menos acusadas al aumentar la concentración.
Estas desviaciones se clasifican en:
- Reales
Radiación no monocromática
- Instrumentales Radiación parásita
Errores de lectura Ácido-base
Influencia del equilibrio Complejos
Dimerizaciones
Influencia del disolvente
- Químicas
Influencia de la temperatura
Impurezas de reactivos
Interacción entre especies absorbentes
- Errores del analista
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DESVIACIONES REALES
Surgen de la dependencia del coeficiente de absortividad molar

respecto al índice de refracción. La ley de Beer asume que el índice de
refracción de la disolución permanece constante, pero a
concentraciones altas se producen variaciones en el mismo. Se corrige
multiplicando ε por n/(n2 + 2)2. No es significativa para C < 0.01 M.
DESVIACIONES INSTRUMENTALES
Las fluctuaciones producidas en la corriente eléctrica, la inestabilidad

de algunas fuentes de radiación o la respuesta no lineal del detector
pueden originar el funcionamiento incorrecto de un determinado
aparato. Además existen otras tres fuentes de errores instrumentales:
a) Uso de radiación no monocromática.

La deducción de la ley de Beer se hace sobre la base de utilizar
radiación monocromática, lo cual, en sentido estricto, nunca se cumple,
pues en la práctica, todos los dispositivos seleccionan una banda más o
menos simétrica en torno a una determinada longitud de onda.
9
b) Presencia de radiación parásita o

espúrea.
El haz de radiación que sale de un

monocromador suele estar contaminado con
pequeñas cantidades de radiación parásita o
dispersada, originada por reflexión de los
distintos componentes ópticos, dispersión por
partículas de polvo atmosférico o dispersión
por la propia muestra, dando lugar a
desviaciones negativas en la ley de Beer.
c) Errores de lectura.
Son los errores indeterminados en la lectura de la transmitancia o absorbancia que

potencialmente siempre están presentes y es necesario tenerlos en cuenta. La
falta de precisión en la lectura de transmitancia y absorbancia puede ocasionar
errores grandes en la concentración cuando se opera en los extremos de la
escala.
10
Medir en los extremos de la

escala de absorbancia
aumenta el error relativo de
la medida
DESVIACIONES QUÍMICAS
Se incluyen las desviaciones aparentes de la ley de Beer producidas como
consecuencia de reacciones químicas en las que participan los analitos,
dando lugar a productos con un espectro de absorción diferente que el del
analito.
a) Influencia del equilibrio.

Cuando la sustancia problema interviene o forma parte de un sistema en
equilibrio con otras especies, el desplazamiento del equilibrio implica una
modificación en la concentración, y, en consecuencia, de la absorbancia.
* Dimerizaciones de las especies absorbentes

* Influencia de las propiedades ácido-base de las especies
absorbentes
* Formación de complejos de las especies
11
b) Influencia de la temperatura.
La temperatura puede influir modificando el equilibrio químico de algunos
sistemas, así como, en ocasiones, dar lugar a desplazamientos batocrómicos.
c) Influencia del disolvente.

Las interacciones soluto-disolvente originan con frecuencia desplazamientos
espectrales, ensanchamientos de bandas y otros fenómenos que pueden provocar
desviaciones en la ley de Beer. En este sentido, no es posible hacer predicciones
de forma general.
d) Presencia de impurezas en los reactivos.

Los errores por impurezas en los reactivos pueden ser considerables en las
determinaciones de especies a niveles traza. Se pueden conocer y corregir estos
errores realizando medidas de blancos “sin analito” pero con los reactivos.
e) Interacciones entre especies absorbentes.

Cuando en una disolución existen varias especies absorbentes, la ley de Beer
se cumple para cada una de ellas, si todas actúan independientemente. Las
interacciones entre ellas pueden producir desviaciones de dicha ley.
ERRORES DEL ANALISTA
Los mayores errores suelen cometerse por el uso inadecuado de las cubetas de
absorción. Resultan de utilidad las recomendaciones siguientes:
- Las cubetas han de estar perfectamente limpias, no rayadas y exentas de

huellas o adherencias en las paredes por las que ha de pasar la radiación.
- Las cubetas de vidrio y cuarzo pueden limpiarse con ácido nítrico o con agua
regia en frío, pero no con mezcla crómica.
- Una vez limpias, las cubetas deben enjuagarse con agua destilada y con varias
porciones de la disolución a medir
- Una vez llena con la disolución problema, no deben formarse burbujas de aire.
- Se debe trabajar con cubetas idénticas (cubetas pareadas) para la muestra y la

referencia (blanco), y además es bueno utilizar siempre la misma cubeta para cada
uno de esos dos tipos de disolución.
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Instrumentación
Colorímetro
Instrumento muy simple que compara el
color de la sustancia problema con el de
una disolución patrón. Al principio se
usaba el ojo humano como detector. Hoy
día se puede transformar el color
reflejado al iluminar con un haz de luz la
muestra en una serie de números
correspondientes a las coordenadas
RGB (rojo, verde y azul) para obtener el
valor numérico del color.
Fotómetro
Cualquier dispositivo utilizado para medir la intensidad de radiación.
Normalmente se utiliza para designar un instrumento sencillo provisto de
filtros para seleccionar una banda de longitudes de onda y de una
fotocélula o un fototubo para medir la intensidad de radiación.
Espectrofotómetro
Instrumento más sofisticado que posee un monocromador en lugar de
filtros. Además, el sistema de detección normalmente es un
fotomultiplicador, más sensible que una fotocélula.
Instrumentación
Componentes básicos de un espectrofotómetro
- Fuente de radiación
- Selector de longitud de onda
- Compartimento de muestra
- Detector de radiación
- Procesador de señales y dispositivo de lectura
13
Instrumentación
a) Fuentes de radiación
Las fuentes empleadas en espectroscopia UV-Vis deben:
- Proporcionar un haz de radiación suficientemente energético para facilitar su
detección y medida.
- Ser estables a lo largo del tiempo.
- Ser continua, es decir, emitir una radiación que varíe de forma gradual en función
de la longitud de onda. En algunas aplicaciones se pueden emplear fuentes
lineales, que emiten a un número limitado de líneas espectrales de longitudes de
onda muy definidas.
A) Espectro de fuente continua

B) Espectro de una fuente lineal
Instrumentación
Fuentes térmicas
* Lámpara de filamento de tungsteno (W). Es común para el visible e

infrarrojo cercano. Emite en la región de longitudes de onda entre 350 y
2500 nm.
Fuentes de descargas eléctricas en el seno de gases
* Lámpara de descarga de hidrógeno, o de deuterio. La excitación eléctrica

del deuterio a baja presión produce un espectro continuo en la región
ultravioleta (desde los 160 a los 380 nm). D2 + Ee → D2* → D '+ D ''+ hν
* Lámpara de arco de xenón. Se produce un espectro continuo entre 250 y

600 nm al pasar una corriente a través de una atmósfera de xenón.
* Lámpara de vapor de mercurio. Es una fuente lineal que se utiliza en

detectores de longitud de onda fija para cromatografía líquida. Su linea
predominante es a 253.7 nm.
14
Instrumentación
Las lámparas de deuterio y

tungsteno usadas en conjunto
abarcan toda la región
ultravioleta visible.
253.7 nm
Espectro de líneas de una lámpara de

descarga de mercurio
Instrumentación
b) Selectores de longitudes de onda
Su misión es seleccionar un haz de radiación monocromática. Los dispositivos
empleados son los siguientes:
de corte
de absorción
Filtros de banda
de interferencia
prismas
Monocromadores de transmisión
redes
de reflexión
15
Instrumentación
Filtros de absorción
Se utilizan en la región visible y se basan en la absorción selectiva de ciertas
longitudes de onda, dejando pasar radiación de interés. El tipo más usual es un
vidrio coloreado o una suspensión de un colorante en gelatina colocado entre dos
placas de vidrio.
*Filtros de banda, dejan

pasar radiación dentro de un
intervalo de longitudes de
onda, se caracterizan por su
anchura de banda que puede
oscilar entre 30 y 250 nm.
*Filtros de corte, tienen

transmitancias de casi el 100
% en una zona del espectro
visible, pero luego disminuye
rápidamente hasta un valor
de transmitancia cero.
Instrumentación
Filtros de interferencia (filtros de Fabry-Perot)

Consisten en una capa muy delgada de dieléctrico transparente (frecuentemente,
CaF2 ó MgF2) recubierto en ambos lados con dos finas capas de plata
semirreflectante. Esta disposición se coloca entre dos placas de vidrio. Se utilizan
para todas las zonas de las regiones ultravioleta y visible, así como parte del
infrarrojo.
Se basan en interferencias ópticas

para obtener bandas de radiación
más estrechas de mayor intensidad
que los filtros de absorción
16
Instrumentación
Monocromadores
Son dispositivos formados por varios elementos ópticos que permiten obtener un
haz de radiación de elevada pureza espectral y variar, de forma continua y en un
amplio intervalo, la longitud de onda de radiación. Se denomina “policromador”
cuando se divide el haz incidente de radiación en un número elevado de longitudes
de onda. En este caso se necesita un detector adecuado o múltiples detectores
dispuestos para medir simultaneamente las distintas λ discretas.
Monocromadores de prisma
Se basa en el fenómeno de la refracción. En la región visible se usan prismas de

vidrio, mientras que en el ultravioleta es necesario usarlos de cuarzo.
Prisma tipo Bunsen Prisma tipo Cornu Prisma tipo Littrow
Instrumentación
Una lente colimadora dispone paralelamente los haces de radiación. El

prisma separa las distintas λ de cada haz. La lente focalizadora
concentra cada λ en un punto. La rendija de salida selecciona la
longitud de onda que saldrá del sistema.
17
Instrumentación
Monocromadores de red de reflexión

Se basan en el fenómeno de la difracción en tanto que se produce una reflexión
sobre una superficie dura, pulida y grabada con un gran número de surcos paralelos
y muy próximos entre sí (entre 300 y 2.000 surcos por milímetro para las regiones
ultravioleta y visible).
Un espejo colimador hace

paralelos los haces de
radiación. La red separa las
distintas λ de cada haz. El
espejo focalizador concentra
cada λ en un punto. La rendija
de salida selecciona la
longitud de onda deseada.
Instrumentación
Difracción de una radiación

policromática por una red. La
radiación obtenida no es
totalmente pura: cada λ viene
acompañada de una cierta
cantidad de λ/2, λ/3, etc.
18
Instrumentación
Comparación entre prismas y redes
Prisma Red
• Dispersión no lineal (separa • Dispersión lineal
mejor las λ grandes que las λ • Menor absorción de radiación
pequeñas) • Mejor resolución
• Mayor absorción de radiación • Se obtiene radiación con menor
• Menor resolución pureza espectral (λ viene
• Se obtiene radiación con acompañada de λ/2, λ/3, etc.)
mayor pureza espectral
Instrumentación
c) Recipientes para las muestras
Se utilizan celdas o cubetas para colocar las muestras líquidas en el haz del
espectrofómetro. Así, el vidrio puede emplearse entre 350 y 2.000 nm, mientras que
en la región ultravioleta se necesita cuarzo o sílice fundida
Intervalos de transmitancia para distintos

Celdas para espectrofotometría materiales ópticos
19
Instrumentación
d) Detectores
Son transductores que convierten la energía radiante en una señal eléctrica. Un
detector ideal deberá presentar las características siguientes:
-Sensibilidad elevada en la región espectral de interés.
-Respuesta lineal para la energía radiante.
-Tiempo de respuesta pequeño.
-Utilizable en un amplio intervalo de longitudes de onda.
-Elevada relación señal/ruido.
-Mínima señal eléctrica de salida en ausencia de radiación.
-Buena disponibilidad para la amplificación.

Los más utilizados son: células fotovoltaicas, fototubos y tubos
fotomultiplicadores
Instrumentación
Celdas fotovoltaicas o de capa-barrera
Consisten en una placa de Fe o Cu metálico, que actúa de electrodo positivo, sobre

la que se deposita una fina capa de un material semiconductor, como Se o CuO, y
éste se recubre de una capa muy fina de Au, Ag o Pt, que actúa como segundo
electrodo o electrodo colector. La radiación penetra y origina el fenómeno de la
fotoconducción del semiconductor. Los electrones migran hacia la placa de plata y
los huecos positivos al hierro, apareciendo una pequeña corriente eléctrica.
20
Instrumentación
Ventajas:
-Son sencillas de construir.

-Relativamente baratas.
-No requieren una fuente externa de energía eléctrica, se pueden conectar
directamente a un galvanómetro o un amperímetro.
Inconvenientes:
-Su uso limitado a la región visible (su máxima sensibilidad se presenta hacia los
550 nm, mientras que la respuesta a 350 y a 750 nm disminuye hasta un 10 % de
la máxima).
-La pequeña resistencia interna de la célula dificulta la amplificación de la señal de
salida, lo que implica una falta de sensibilidad a niveles bajos de intensidad
lumínica.
-Presentan fenómenos de fatiga, bajo una iluminación continuada su corriente de
salida disminuye gradualmente.
Instrumentación
Fototubos de vacio
Consisten en un cátodo semicilíndrico y un ánodo de filamento encerrados

herméticamente en un recipiente transparente en el que se ha hecho el vacío. La
superficie cóncava del cátodo está recubierta por un material fotosensible, que al ser
irradiado emite electrones. Los electrones migran al filamento generando una
fotocorriente.
En general, los fototubos son más sensibles
que las células fotovoltaicas, por la
posibilidad de poder amplificar la corriente
inicialmente generada.
Dependiendo del recubrimiento del cátodo,
son aplicables al UV-Vis
21
Instrumentación
Tubo fotomultiplicador
Es el detector con un uso más extendido. Este tipo de detector consiste en un

cátodo fotosensible y una serie de electrodos (dínodos), cada uno a un potencial
menos negativo que el que le precede. Por cada fotón el cátodo fotoemisor emite
numerosos electrones y por cada electrón se producen numerosos electrones en
cada uno de los dínodos. Se originan 107 e- por cada fotón incidente.
Este sistema de detección se

caracteriza por su respuesta rápida
y elevada sensibilidad. El límite de
detección viene condicionado por el
ruido de fondo (corriente oscura)
que se origina como consecuencia
de la emisión térmica, la cual
puede reducirse enfriando.
Son muy sensibles a las
radiaciones UV-Vis.
Instrumentos de haz sencillo y de haz doble
Instrumentos de haz sencillo y de haz doble

- En los instrumentos de haz
sencillo hay solamente un haz de
radiación que, después de pasar a
Haz sencillo través de la muestra llega al
detector. De esta forma, para
comparar la absorción del blanco,
debe sustituir éste a la muestra en
cada lectura, lo cual implica varios
segundos entre cada medida.
Doble haz, separado en el espacio - En un instrumento de doble
haz, la radiación pasa
alternativamente a través de la
muestra y de la referencia, y
pueden compararse varias veces
por segundo (se compensa
Doble haz, separado en el tiempo
fluctuaciones y deriva en las
medidas).
22
Instrumentos multicanal
En algunos instrumentos, se emplean varios detectores para medir

simultáneamente diferentes longitudes de onda. En estos casos, el
monocromador no selecciona una longitud de onda, sino varias, haciendo llegar
cada una a un detector diferente. Actualmente se utilizan detectores de filas de
diodos para este tipo de instrumentos
Los diodos en fila consisten en una serie de elementos fotosensibles formados por
pequeños diodos de semiconductores de Si (uniones pn inversamente polarizadas).
Permiten colocar una gran número de “detectores” en un espacio muy pequeño.
Cuando la radiación incide en la capa de

depleción, zona de contacto entre los
semiconductores p y n, que está
empobrecida en huecos y electrones
debido a la polarización inversa, se
producen cargas que crean una corriente
Detector de fila de diodos a)

vista transversal b) vista superior
23
-Alta velocidad de adquisición

(utilidad para determinación de
analitos poco estables). Se
obtiene el espectro completo en
0.1 s.
- Resolución de 2 nm en toda la
región espectral
- Pocos componentes ópticos,
con lo que el rendimiento de la
radiación es más elevado.
- No posee elementos móviles, la
reproducibilidad de λ es elevada.
Aplicaciones analíticas
Aplicaciones
Cualquier especie química que absorba radiación electromagnética en las

regiones ultravioleta o visible es puede ser determinada por técnicas
espectrofotométricas. La espectroscopia UV-Vis se emplea en la determinación
directa de sustancias orgánicas directamente o sustancias susceptibles de
producir una reacción cromogénica
Análisis cualitativo
- Está muy limitado, debido a que los espectros de absorción proporcionan

bandas muy anchas, que son poco útiles para la identificación de moléculas.
- La identificación de un compuesto requiere la comparación empírica del

espectro (máximos, mínimos y puntos de inflexión) y, con frecuencia, de la
intensidad de la absorción, expresada en términos de la absortividad molar, ε,
la de la sustancia problema con los del compuesto puro.
24
Análisis Cuantitativo
La espectrofotometría de absorción ultravioleta y visible es una de las técnicas

más usadas en análisis cuantitativo en todo tipo de muestras (ambientales,
clínicas, alimentarias, industriales, forenses, etc.).
En relación con los métodos clásicos de análisis (gravimétricos y

volumétricos), los métodos espectrofotométricos son menos exactos, pero
presentan mayor sensibilidad (10-4-10-6 M) y rapidez. La precisión puede
considerarse aceptable (incertidumbres relativas entre el 1 y 2 %) aunque
con determinadas precauciones pueden reducirse considerablemente
Etapas para llevar a cabo una determinación
a) Selección de la longitud de onda
Inicialmente se registra un espectro de una disolución de analito y se

selecciona la longitud de onda de máxima absorción. En este punto se alcanza
una máxima sensibilidad y la Ley de Beer presenta menos desviaciones, pues
la respuesta suele ser plana en esta zona y no le influye la precisión en la
selección de λ
b) Preparación de las muestras para el análisis.
- Disolución y medida. Ejemplo, muchos compuestos orgánicos.

- Reacciones rédox previas. Ejemplo, Mn2+ a Mn04⎯.
- Desarrollo de un color por adición de reactivos orgánicos o inorgánicos.
Ejemplo, Ni2+ y dimetilglioxima (rosa); Fe3+ y SCN- (rojo), etc.
25
La formación de especies absorbentes hace necesario considerar toda una

serie de factores:
- pH - Concentración de los reactivos
- Tiempo adecuado para la medida - Temperatura
- Orden de adición de los reactivos - Eliminación de interferencias
- Extracción con disolventes orgánicos
c) Determinación de la relación absorbancia-concentración
- Calibrado externo a partir de

una serie de disoluciones patrón,
preparadas en las mismas
condiciones que la muestra.
- Método de adición estándar,

con objeto de contrarrestar los
efectos de la matriz.
Determinación de mezclas
Se va a considerar el caso de que la muestra esté constituida por los componentes
M y N. La forma de proceder depende de los espectros de absorción de ambas
especies, y pueden presentarse los siguientes casos:
Espectros no superpuestos Espectros completamente superpuestos
Espectros parcialmente superpuestos
26
a) Para espectros no superpuestos se realiza la medida de la absorbancia en los

máximos correspondientes a cada sustancia.
b) En el caso de espectros parcialmente superpuestos se miden las

absorbancias en los máximos1 de cada sustancia para una disolución mezcla de las
mismas. Así
A1 = ε1M bCM + ε1N bCN (a λ1 )
A2 = ε 2 M bCM + ε 2 N bCN (a λ2 )
Las absortividades molares a para cada componente a cada longitud de onda se

evalúa mediante la medida de los espectros de las especies por separado o, de
manera más exacta, a partir de las pendientes de sus representaciones de la Ley
de Beer. Con esos datos, es posible resolver este sistema de ecuaciones.
1Las medidas deben realizarse a las longitudes de onda donde las diferencias de
absorbancia de las dos especies es máxima.
a) En el caso de espectros completamente superpuestos es más efectivo aplicar

la espectrofotometría derivada. Consiste en aplicar derivadas sucesivas al espectro
obtenido para los analitos. En el caso de un pico de absorción único y simétrico:
El espectro de primera derivada
muestra un máximo y un mínimo
en los puntos de inflexión del
espectro original y un corte en cero
a la longitud de onda del máximo
de absorción.
En la segunda derivada el
máximo de absorción se convierte
en un mínimo
Ventajas
- Medida exacta de λmax
- Mejor resolución de los espectros.
- Determinaciones en presencia de turbidez.
- Determinaciones cuantitativas en presencia de dos o más componentes.
27
Valoraciones fotométricas
- La espectroscopia UV-Vis puede servir de base para la detección del punto

final de un método volumétrico. Se miden las cambios de absorbancia de la
disolución durante la valoración. Estos cambios de absorbancia indican
cambios en la concentración de alguna especie absorbente de radiación
(analito, producto o agente valorante)
- Las curvas de valoración consisten en la representación de la absorbancia en

función del reactivo añadido. Debe constar de dos zonas rectas de distinta
pendiente, de manera que el punto final pueda ser establecido como el punto de
corte de la prolongación de ambas rectas
28
s: analito, p: producto de reacción, t: agente valorante
Bibliografía del tema
- D. A. Skoog, F. J. Holler, T. A. Nieman, Principios de Análisis Instrumental,

5ª Edición, McGraw-Hill, Madrid, 2001
- D. Harvey, Modern Analytical Chemistry, McGraw-Hill, Boston, U.S., 2000
-E. Olsen, Métodos Ópticos de Análisis, Reverté, 2003
29

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Tema 3. Espectroscopia UV - visible

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José Marcos Jurado Jurado

Epígrafes del tema:

La espectroscopia de absorción molecular se basa en la absorción de radiación

Colorimetría. Este término se refiere a la medida de la radiación absorbida en

Espectrofotometría. Se refiere a la medida de la radiación absorbida en las

ΔE = ΔEelectrónica + ΔEvibracional +ΔErotacional

-Los tipos de transiciones electronicas

- Implican energías relativamente grandes, de forma que las bandas de absorción

- Requieren energías algo inferiores que las

Transiciones n→π* y π→π*

- Las transiciones π→π* requieren la absorción de una cantidad de

- En cuanto a la intensidad de la absorción, las absortividades molares de

- La mayoría de las aplicaciones de la espectroscopia de absorción de

- Es conditio sine qua non que los compuestos presenten grupos

Las moléculas pueden

Un grupo auxocromo puede causar los siguientes efectos sobre el máximo

 Efecto batocrómico: aumento de la λ.

La conjugación de cromóforos tiene los siguientes efectos:

2) Cuando los cromóforos están unidos directamente, el espectro resultante

3) Cuando los cromóforos están conjugados (separados por un enlace sencillo) se

Transiciones de transferencia de carga

Entre un catión y un ligando Fe(III)-SCN- + hv → Fe(II)-SCN

Entre dos grupos funcionales

El estado excitado es el producto de un proceso de oxidorreducción interna.

Espectros de trasferencia de carga

Transiciones de campo ligando

dxy dxz dyz

Espectros de disoluciones acuosas de metales de transición

Bandas de absorción originadas por diferentes transiciones electrónicas

Desviaciones de la Ley de Beer

Estas desviaciones se clasifican en:

- Errores del analista

Surgen de la dependencia del coeficiente de absortividad molar

Las fluctuaciones producidas en la corriente eléctrica, la inestabilidad

a) Uso de radiación no monocromática.

b) Presencia de radiación parásita o

El haz de radiación que sale de un

Son los errores indeterminados en la lectura de la transmitancia o absorbancia que

Medir en los extremos de la

a) Influencia del equilibrio.

* Dimerizaciones de las especies absorbentes

c) Influencia del disolvente.

d) Presencia de impurezas en los reactivos.

e) Interacciones entre especies absorbentes.

- Las cubetas han de estar perfectamente limpias, no rayadas y exentas de

- Se debe trabajar con cubetas idénticas (cubetas pareadas) para la muestra y la

Componentes básicos de un espectrofotómetro

A) Espectro de fuente continua

* Lámpara de filamento de tungsteno (W). Es común para el visible e

Fuentes de descargas eléctricas en el seno de gases

* Lámpara de descarga de hidrógeno, o de deuterio. La excitación eléctrica

* Lámpara de arco de xenón. Se produce un espectro continuo entre 250 y

* Lámpara de vapor de mercurio. Es una fuente lineal que se utiliza en

Las lámparas de deuterio y

Espectro de líneas de una lámpara de

Efecto batocrómico: aumento de la λ.