PRÁCTICA N° 6

ACTIVIDAD ENZIMÁTICA
Blgo. M. Cs. Luis G. García Izquierdo

I.- INTRODUCCIÓN:
Las enzimas son moléculas orgánicas que actúan como catalizadores de reacciones químicas, es decir, aceleran la velocidad de
reacción. Comúnmente son de naturaleza proteica, pero también de ARN. Las enzimas modifican la velocidad de reacción, sin afectar
el equilibrio de la misma, ya que una enzima hace que una reacción química transcurra a mayor velocidad, siempre y cuando sea
energéticamente posible.
En estas reacciones, las enzimas actúan sobre unas moléculas denominadas sustratos, las cuales se convierten en moléculas
diferentes denominadas productos.
 A las reacciones mediadas por enzimas se las denomina reacciones enzimáticas.
La actividad de las enzimas puede ser afectada por otras moléculas. Los inhibidores enzimáticos son moléculas que disminuyen o
impiden la actividad de las enzimas, mientras que los activadores son moléculas que incrementan dicha actividad.
Muchas enzimas son usadas comercialmente, por ejemplo, en la síntesis de antibióticos o de productos domésticos de limpieza.
Además, son ampliamente utilizadas en diversos procesos industriales, como son la fabricación de alimentos, destinción de vaqueros o
producción de biocombustibles.
A continuación se indican las seis grandes clases de enzimas existentes en la actualidad:
EC1 Oxidorreductasas: catalizan reacciones de oxidorreducción o redox. Precisan la colaboración de las coenzimas de
oxidorreducción (NAD+, NADP+, FAD) que aceptan o ceden los electrones correspondientes. Tras la acción catalítica, estas
coenzimas quedan modificadas en su grado de oxidación, por lo que deben ser recicladas antes de volver a efectuar una nueva reacción
catalítica. Ejemplos: deshidrogenasas, peroxidasas.
EC2 Transferasas: transfieren grupos activos (obtenidos de la ruptura de ciertas moléculas) a otras sustancias receptoras.
Suelen actuar en procesos de interconversión de monosacáridos, aminoácidos, etc. Ejemplos: transaminasas, quinasas.
EC3 Hidrolasas: catalizan reacciones de hidrólisis con la consiguiente obtención de monómeros a partir de polímeros. Actúan en
la digestión de los alimentos, previamente a otras fases de su degradación. La palabra hidrólisis se deriva de hidro → 'agua' y lisis →
'disolución'. Ejemplos: glucosidasas, lipasas, esterasas.
 EC4 Liasas: catalizan reacciones en las que se eliminan grupos H2O, CO2 y NH3 para formar un doble enlace o añadirse a
un doble enlace. Ejemplos: descarboxilasas, liasas.
EC5 Isomerasas: actúan sobre determinadas moléculas obteniendo o cambiando de ellas sus isómeros funcionales o de
posición, es decir, catalizan la racemización y cambios de posición de un grupo en determinada molécula obteniendo formas isoméricas.
Suelen actuar en procesos de interconversión. Ejemplo: epimerasas (mutasa).
EC6 Ligasas: catalizan la degradación o síntesis de los enlaces denominados "fuertes" mediante el acoplamiento a moléculas
de alto valor energético como el ATP. Ejemplos: sintetasas, carboxilasas.
En la presente práctica el alumno entenderá que existen factores que influyen en la velocidad de acción enzimática.
II. MATERIAL I MÉTODOS:
POR EL LABORATORIO: POR EL ALUMNO:
- Azul de metileno - 03 frascos de agua oxigenada.
- Reactivo de Benedict - Levadura.
- 08 tubos de ensayo por mesa - 01 papa.
- 03 placas Petri por mesa - 03 hígados de pollo fresco.
- H2 SO4 - 01 regla.
 - Cocina eléctrica - Cubos de hielo.
- Termómetro de canastilla - Equipo mínimo.
PROCEDIMIENTO:
2.1 RECONOCIMIENTO DE LA ACTIVIDAD ENZIMÁTICA:
A) ACCIÓN DEL PH EN LA ACTIVIDAD DE LA CATALASA SOBRE EL PERÓXIDO DE HIDRÓGENO:
FUNDAMENTO: La catalasa(peroxidasa) tiene como función principal la degradación de moléculas de H 2O2, de gran
toxicidad, que se origina de muchas oxidaciones biológicas, formando agua y oxígeno molecular. Sin embargo su actividad es
influenciada grandemente por el Ph.
- Numere 02 placas Petri y en cada uno coloque una rodaja de papa.
- Agregue:
* Placa 1: Agua destilada hasta cubrir la rodaja de papa.
* Placa 2: Agua oxigenada hasta cubrir la rodaja de papa.
- Incubar a temperatura ambiente durante 15 minutos.
- Observe los productos que se forman e interprete la actividad de la catalasa(peroxidasa).
- Agregue H2SO4 y observe el efecto sobre la actividad enzimática.
- Esquematice e interprete sus resultados.
B) ACCIÓN DE LA TEMPERATURA EN LA ACTIVIDAD DE LA CATALASA SOBRE EL PERÓXIDO DE
HIDRÓGENO:
FUNDAMENTO: La catalasa tiene como función principal la degradación de moléculas de peróxido de hidrógeno( H 2O2), de
gran toxicidad, que se origina de muchas oxidaciones biológicas, formando agua y oxígeno molecular. Sin embargo su actividad
es influenciada, grandemente por la temperatura.
- Numere 08 tubos de ensayo (del 1 al 8) y colóquelos en la gradilla.
- Corte 4 fragmentos de hígado de pollo de 1 cm. aproximadamente.
- Coloque un fragmento en los tubos de ensayo 1, 2, 3, y 4.
- Triture un hígado de pollo en un mortero.
- Agregue 1 ml. del extracto en los tubos 5, 6, 7 y 8.
- Medir la temperatura ambiente con el termómetro de canastilla, y agregue 01 ml. de peróxido de hidrógeno en los tubos 1 y 5.
Con la regla mida el nivel de las burbujas y anote sus datos en los resultados.
- Calentar agua en el equipo de baño maría y medir la temperatura, una vez que llegue a 37° C, coloque los tubos 2 y 6 en el
equipo y agregue 01 ml. de peróxido de hidrógeno a cada tubo. Con la regla mida el nivel de burbujas y anote sus datos en los
resultados.
- En un beaker de 250 ml. coloque agua y añada cubos de hielo hasta lograr una temperatura de 10° C.
 - Coloque los tubos 3 y 7 en el beaker y agregue 1 ml. de peróxido de hidrógeno a cada tubo. Con la regla mida el nivel de
burbujas y anote sus datos en los resultados.
- Agregue 01 ml. de agua destilada a los tubos 4 y 8. Colóquelos en el equipo de baño maría duranta 5 minutos, cuando el agua
que contiene el equipo esté hirviendo.
- Saque los tubos de ensayo y ubíquelos en la gradilla, agregue 1ml. de peróxido de hidrógeno. Observe y anote los resultados.
Tome la temperatura a la que hirvió el agua.
2.2. RECONOCIMIENTO DE LA ÓXIDO-REDUCCIÓN EN LEVADURA:
FUNDAMENTO: El proceso de óxido-reducción se refiere a la transferencia de electrones, donde una sustancia pierde
electrones y por lo tanto se oxida y otra gana electrones y se reduce. Así el azul de metileno actúa como un indicador, el color
claro demuestra un estado reducido y el color oscuro un estado oxidado.
PROCEDIMIENTO:
- Numere 03tubos de ensayo.
- Coloque:
* Tubo 1: 03 ml. de agua destilada + 02 ml. de azul de metileno.
* Tubo 2: 03 ml. de levadura cruda + 02 ml. de azul de metileno.
 * Tubo 3: 03 ml. de levadura hervida + 02 ml. de azul de metileno.
- Agregue 02 ml. de sacarosa al 5% a cada tubo.
- Incube a 37° C por 10 minutos.
- Deje reposar por 30 minutos y observe.
- Esquematice e interprete sus resultados.
III. RESULTADOS:
A) ACCIÓN DEL Ph EN LA ACTIVIDAD DE LA CATALASA SOBRE EL PERÓXIDO DE HIDRÓGENO:

Cuadro 1. Acción del Ph en la actividad de la catalasa sobre el H2O2.

N° DE PLACA MUESTRA REACTIVO INTERPRETACIÓN

PETRI
01 Agua destilada + trozo de H2 SO4 No hay reacción
papa
02 Agua oxigenada + trozo de H2 SO4 Añadir H2O
papa H2O4 desaparece
Esquematice el proceso
B) ACCIÓN DE LA TEMPERATURA EN LA ACTIVIDAD DE LA CATALASA SOBRE EL PERÓXIDO DE
HIDRÓGENO:
Complete el proceso:

T. 1 T. 5 T. 1 T. 5

T. 2 T. 6 T. 2 T. 6

T. 3 T. 7 T. 3 T. 7

T. 4 T. 8 T. 4 T. 8
Cuadro 2. Influencia de la temperatura en la acción enzimática.

TEMPERATU NIVEL DE
N° TUBO MUESRTA REACTIVO RA (° C) BURBUJAS

01 Hígado de pollo triturado H2O2 22° 4 cm

02 Hígado de pollo triturado H2O 37° 10 cm

03 Hígado de pollo triturado H2O 10° 8 cm

04 Hígado de pollo fragmentado H2O 79° 3 cm

05 Hígado de pollo fragmentado H2O 22° 13 cm

06 Hígado de pollo fragmentado H2O 37° 6 cm

07 Hígado de pollo fragmentado H2O 10° 11 cm

08 Hígado de pollo fragmentado H2O 79° 1 cm

2.2 RECONOCIMIENTO DE LA ÓXIDO-REDUCCIÓN EN LEVADURA:
Cuadro 6. Reconocimiento de óxido-Reducción en levaduras.

N° TUBO MUESTRA REACTIVO INTERPRETACIÓN

01 03 ml agua destilada 2 ml de azul metileno Estado de oxidación
02 03 ml agua destilada 2 ml de azul metileno Estado de redacción

03 03 ml agua destilada 2 ml de azul metileno Estado de redacción

+ Reactivos

= Resultados
IV. DISCUSIÓN:
4.1. Mencione las diferentes enzimas que existen en el Sistema Digestivo humano y sobre que sustrato actúan:
 Amilasa: producido en la boca ayuda a descomponer grandes moléculas de almidón .
 La pepsina: producida en el estómago ayuda a descomponer las proteínas de los aminoácidos.
 La tripsina: producido en el páncreas descompone las proteínas.
 La lipasa: producida en el páncreas descomponer grasas.
 La ribonucleosa: rompen cadenas en ácidos nucleicos como el ADN y ATRN.

4.2. Haga una definición de enzima.

 Proteína soluble producida por las células del organismo que favorece y regula las reacciones químicas en dos seres vivos.
4.3. ¿Qué sucedió al colocar la reacción enzimática a baja temperatura?

 Las enzimas estarán muy rígidas y por ende noctivos hasta que se alcanza nuevamente la temperatura
normal a cuál funciona a 37°.

4.4. ¿Qué sucedió al hervir el hígado? Explíquelo.

 Pierde color mucho más rápido el agua toma un color apoco e incluso se siente una cierta presión

en el anticipo superior del tubo al parecer en el hígado macerado se efectúa más rápida la reacción.

4.4. ¿Influye el Ph en la actividad enzimática? Explique.

 Si, ya que la mayoría de los enzimas son muy sensibles a los cambios de PH.
V. CONCLUSIONES:
De acuerdo a sus resultados y discusiones plantee sus conclusiones:

 Las enzimas se entrelazan y se pliegan una o más cadenas policeptidos, que aportan un pequeño
grupo de aminoácidos para formar el sitio activo, a lugar donde se adhiere sustrato, y donde se realiza
la reacción. Este hecho asegura que la enzima no participa en reacciones equivocados.
VI. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS:

 Cambell, Nerl. A. etal, (2001) biología conceptos y reacciones. Pearson educativo México.

 Sacramento. N, (2001) biología y bioquímica. Thema equipo editorial, España pg. 105-110.