Microbiologia

FACULTAD CIENCIAS DE LA SALUD
PROGRAMA DE BACTERIOLOGÍA
Practica N° 1.
NORMAS DE BIOSEGURIDAD.
Fecha: --/09/2019
Asignatura: MICROBIOLOGIA LABORATORIO
Introducción
Para el estudio de microorganismos debemos llevar a cabo un buen procedimiento para la

realización de medios de cultivos, estos medios nos ayudara a estudiarlos de manera
adecuada y eficiente, estos serán aislados para ver el comportamiento de una o más
colonias sin otros factores presentes.
Todo esto se consigue mediante distintas técnicas de desinfección y esterilización para

dejar el medio sin otro microorganismo presente.
Objetivos
 Preparar algunos medios de cultivos utilizados en el laboratorio de microbiología.
 Evaluar la calidad del proceso de esterilización de medios de cultivo mediante

indicadores físicos y biológicos.
 Valorar la calidad de los medios de cultivos a través de evaluaciones

semicuantitativas de productividad y selectividad.
 Aplicar métodos de asepsia básicos para la realización del trabajo en el

laboratorio de microbiología.
Marco teórico
MEDIOS DE CULTIVO.
Son una mezcla de nutrientes que, en concentraciones adecuadas y en condiciones

físicas optimas, permiten el crecimiento de los microorganismos. Son esenciales en el
laboratorio de microbiología por lo que un control en su fabricación, preparación,
Por una universidad con calidad, moderna e incluyente

Carrera 6ª. No. 77-305 Montería NIT. 891080031-3 - Teléfono: 7860300 - 7860920 www.unicordoba.edu.co
conservación y uso, asegura la exactitud, confiabilidad y reproducibilidad de los

resultados obtenidos.
Todos los medios de cultivos han de estar perfectamente estériles para evitar la
aparición de formas de vida que puedan alterar, enmascarar o incluso impedir el
crecimiento microbiano normal del o de los especímenes inoculados en dichos medios.
El sistema clásico para esterilizar los medios de cultivo es el autoclave (que se utiliza
vapor de agua a presión como agente esterilizante).
Los medios de cultivo se pueden preparar en el laboratorio a partir de cada uno de sus
constituyentes básicos o por simple rehidratación de productos asequibles
comercialmente (medios de cultivos deshidratados). Generalmente se prefiere el uso de
los medios de cultivos deshidratados porque, además de simplificar el trabajo, con ellos
se tiene mayor probabilidad de obtener resultados reproducibles.
PROCEDIMIENTOS.
A. PREPARACION DE MEDIOS DE CULTIVOS.
Tomamos el medio de
cultivo EMB y revisamos
en la etiqueta la cantidad
de gramos necesarios
para preparar 1L de
solución (36g)

36g 1000ml
Como la cantidad a X 100ml

preparar era 100ml se
realizó el cálculo. X=36g.100ml
1000ml
X= 36
= 3,6g
10
Pesamos los 3,6 gramos

del medio.
En un balón de vidrio
colocar los 3,6g del
medio y los 100ml de
agua destilada.
Luego calentamos en la
estufa hasta obtener una
emulsión, agitar
constantemente.
Tapamos y marcamos el
recipiente, llevamos al
autoclave.
Para preparar agar sangre

usamos agar nutritivo o
agar soya tripticasa, lo
llevamos a calentar y
agregamos de 5-10%
sangre desfibrinada estéril
de carnero o humana con
EDTA.
Mezclamos bien y
dosificamos en cajas de
Petri.
B.CONTROL DE CALIDAD DE LA ESTERILIZACION DE MEDIOS DE CULTIVO.
1. Control químico: cinta testigo o cinta termosensible.

Cortamos un pedazo de cinta

indicadora termosensible y la
adherimos al recipiente que
contenía el medio de cultivo.
Llevar al autoclave por

15 minutos.
2. Control biológico (esporas de geobacillusstearothermophilus)
Llevamos al autoclave una

ampolla de indicador biológico
de esterilización junto a los
medios de cultivo ya
preparados.
Dejamos enfriar la
ampolla y llevamos a la
incubadora a 60 +o- 2°C
Por48h.
por una universidad con calidad, moderna e incluyente
3. Control por lote de medio preparado.
Tomar el 1% del total de los

medios preparados (una
caja de Petri con medio
agar sangre) llevar a
incubar a 37°C por 24h.
Tomamos dos cajas de agar

manitol sal y las marcamos
(una con productividad y la
otra con selectividad.
Dividir las cajas en 4

cuadrantes y marcarlos en
la parte externa de estas.
Empleamos cultivos de E.
coli (no target) y S.aureus
(target)
Tomamos una asada del

cultivo E. aureus
(productividad) y trazamos en
Por una universidad
la superficie del medio con calidad, moderna e incluyente
5 estrías
paralelas en cada cuadrante y
una estría central.
Tomamos una asada de E. coli

(selectividad) en la otra caja de
Petri y procedemos hacer el
procedimiento anterior.
Llevar las cajas a incubar.
Tomamos un tubo que contiene

10 ml de caldo selenito y lo
marcamos como productividad.
Tomamos una asada de un

cultivo de salmonella sp
(target) y la depositamos en el
tubo.
Luego depositamos varias

asadas (2 o 3) de un cultivo
de S. aureus (no target)
llevamos a incubar por 24h a
37°C.

Se
Depositamos
Luego
Transcurrido
Tomamos
Realizamos
Serealizó
llevó
introdujo
se alavó
un
incubar
elun
el
hisopo
yfrotis
el
este
frotis
hisopo
desinfecto
hisopo
por
estéril
en
tiempo
24h
en
lalaen
a
misma
el
la
repicaremos
y37°C.
palma
otro
mismo
lo mano
humedecimos
detubo
tubo,
la mano
mano
con
rotulamos
medio
conyalcohol
en
entre
caldo
un
yaySS,
desinfectada.
levamos
yodado.
llevamos
tubo
los
nutritivo,
quededos
aacontenía
incubar
incubación
rotulamos
a9 por
mluna
por
24h
de ya
24h
37°C.
caldo
compañera
llevamos
a 37°C.
nutritivo
a incubar
(sin
estéril.previo
por 24h
lavado
a 37°C. de manos).
Pasadas las 24 h, sembrar

por estría en agar SS e
incubar por 24h a 37°C.
b. Selectividad.
Tomamos un tubo que

contiene 10 ml de caldo
selenito y se marcó como
selectividad.
Después de esterilizar
Se tomaron varias los medios de cultivo se revisó
asadas la
cinta
detestigo y sede
un cultivo observó un cambio de color (líneas
S. aureus
negras).
(no target) y se depositaron que el proceso de
Esto nos indica
esterilización
en el tubo.fue correcto.
 Control biológico:

Luego de esterilizar el bioindicador y llevarlo incubar no observamos crecimiento de

microorganismos, la esterilización fue adecuada.
 Control por lote.
Pasadas las 24 horas de incubación del medio de cultivo agar sangre, observamos que no
hubo crecimiento de microorganismos. El medio se encontró estéril.

 Valoración de la calidad de los medios de cultivo.
 Medios de cultivo solidos selectivos (agar manitol sal)-método

ecométrico.
Productividad
Pasadas las 24 horas de incubación, observamos crecimiento (S. aureus) en el medio

‘productividad’.
NOTA: Para el criterio de evaluación, se considera que un medio de cultivo es productivo

si el ICA (índice de crecimiento absoluto) de el microorganismo deseado es mayor a 3.
Para hallar el ICA asignamos un valor de 0.2 a cada estría en el cultivo, excepto la central
que tiene un valor de 1. Multiplicamos por el número de estrías en las que se observa
crecimiento.
En este caso hubo crecimiento en todas las estrías, por lo tanto, el ICA es igual a 5. Esto
quiere decir que el medio de cultivo cumple con el criterio de productividad.
Selectividad

En el medio de cultivo ‘selectividad’ no hubo crecimiento de microorganismos (E. coli), por

lo tanto, el ICA es igual a 0. El medio cumple con el criterio de selectividad, el cual
considera que el ICA debe ser menor a 3.
 Medios de cultivo líquidos selectivos (caldo selenito)

Pasadas las 24 horas de incubación del medio liquido observamos que el marcado como
productividad estaba mas turbio que el de selectividad. La turbidez indica crecimiento de
microorganismos.
Luego que hicimos el repique de estos medios, en agar SS, esperamos las 24 horas de
incubación y observamos:
Productividad

- Muchas UFC (unidades formadoras de colonias) de salmonella ss.
NOTA: para que un medio liquido se considere productivo deben encontrarse por lo
menos 10 UFC.
En este caso habían mas de 10 UFC, así que el medio cumplió con el criterio de
productividad.
Selectividad

-En el medio selectividad no observamos ninguna UFC de S. aureus, así que el medio
cumplió con el criterio de selectividad.
 Evaluación del procedimiento de desinfección de manos.

-No observamos crecimiento de microorganismo en ninguno de los dos tubos. Esto se

debe a que a la persona que le tomamos la muestra de ‘manos sin desinfectar’ tal vez ya
se las había lavado o no tomamos suficiente muestra. Por otro lado, en el tubo marcado
como ‘manos desinfectadas’ no había crecimiento porque hubo un correcto lavado y
desinfección de manos.
Conclusión

En el presente trabajo pudimos apreciar los medios de cultivos y los microorganismos que
crecen en estos, estos medios nos ayudaron a estudiar de manera más a adecuada el
comportamiento de las bacterias ya que las aislamos en colonias sin otros factores
presentes.
PRELABORATORIO.
1. Establezca diferencias entre medios de cultivo selectivo y no selectivo.

La diferencia entre los medios de cultivo selectivos y no selectivos radica en que los
primeros permiten el crecimiento de ciertos microorganismos y de otros no y el seguido
permite el crecimiento de variedad de microorganismos.
2. Mencione 3 medios de cultivo selectivos.
 Agar cetrimida (pseudomonas).
 Agar bacillus cereus.
 Agar manitol salado (permite el crecimiento de bacterias gram positivas)
3. Explique brevemente el mecanismo de acción sobre los microorganismos del calor

húmedo y del calor seco.
 El calor húmedo destruye los microorganismos por coagulación de sus proteínas

celulares y desnaturalización, esto se debe a que:
- El agua es una especie química muy reactiva y muchas estructuras biológicas son
producidas por reacciones que eliminan agua.
- El vapor de agua posee un coeficiente de transparencia de calor mucho mas

elevado que el aire.
 El calor seco tiene acción microbicida y se basa en la acción oxidante del aire seco
caliente que circula por convección forzada a través de los productos. La muerte
microbiana se produce como consecuencia de mecanismos de transferencia de
energía y oxidación. (aire caliente).
4. defina cepa o clon y de ejemplo de la codificación internacional para algunas

bacterias de acuerdo con el tipo de colección.

Una cepa es un conjunto de bacterias con igualdad en términos de sus

características biológicas, es decir, bacterias de la misma especie. Por ejemplo: E.
coli es un bacteria que se aloja en el tracto intestinal y no vive sola, lo hace
formando cepas o colonias.
Ejemplo:
Familia: enterobacteriaceae.
Género: klebsiella.
Especie: klebsiella pneumoniae.
5. mencione al menos 3 desinfectantes utilizados en el laboratorio de

microbiología.
 Hipoclorito de sodio.
 Clorhexidina.
 Povidona yodada.
 Alcohol.
POSTLABOLATORIO.
Formato de evaluación de medio de cultivo sólido.

Medio de lot Fecha de Tipo Código Genero/especie Tip Código Genero/especie

e realizació o
cultivo
n de
evaluado análisis
.
Identificación de Identificación de cepa
cepa(microorganismo deseado) (microorganismo interferente)
Manitol Vm 04/06/2019 AT 65 S.aureus AT 25 E. Coli

64 CC 38 CC 922
sal.
37
04
432
Resultados (unidades) Resultados(unidades) Medio de Responsable

(microorganismo cultivo
(microorganismo deseado)
interferente) conforme
Productividad Selectivida Productividad Selectividad Si no
d
ICA=5 ICA=0 X ANGIE

CORDERO.
CELI
CASTRO.
LUISA
ESPITIA.
Formato de evaluación de medio de cultivo líquido.

Medio de lot Fecha de Tipo Código Genero/especie Tip Código Genero/especie

e realizació o
cultivo
n de
evaluado análisis
.
Identificación de cepas Identificación de cepa
(microorganismo deseado) (microorganismo no deseado)
Caldo 118 04/06/2019 AT 14 Salmonella sp AT 68 E. aureus

58 CC 028 CC 38
selenito
98
Medio Productivida Medio si no si No responsable

d U.F.C. de s
de
cultivo
cultivo no
selectiv selectividad medio de
selectiv
o (agar) cultivo
o (agar) (cto de m.o no conforme.
deseados)
SS SS x x ANGIE
CORDERO.
CELI
CASTRO.
LUISA
ESPITIA.
Formato de evaluación del proceso esterilización.

Medio de Fecha de Lote Fecha de Gramo Fecha de tipo p tiempo t

vencimiento preparació s vencimient
cultivo
n en el o de medio Control de esterilización.
laboratorio de cultivo
preparado.
AMB 2020/06/12 nv 28/05/2019 3,6 28/0772019 calor 15 15 121°C

124 húmedo libras min
54
700
3
VERIFICACION DE RESPONSABLES
ESTERILIZACION
cinta biológico incubación
No no no ANGIE
CORDERO.
CELI CASTRO.
LUISA ESPITIA.
Hubo crecimiento

Referencias bibliográficas
-EcuRed. Medio de cultivo[internet]. Cuba. [consultado el 10/06/2019]. Disponible en

https://www.ecured.cu/Medio_de_cultivo_(Microbiolog%C3%ADa).
- Rojas, F. Cepas: Material de referencia, manejo y aplicación en el área de

microbiología[internet]. Chile. [consultado el 03/05/2019]. Disponible en
http://www.metrologia.cl/medios/Cepas.pdf.
- Microbiología. Tipos y funciones de los medios de cultivo[internet]. [consultado el

03/05/2019].Disponible en http://microbiologia3bequipo5.blogspot.com/2014/09/tipos-y-
funciones-de-los-medios-de.html.
- Scribd. Esterilización por calor seco y calor húmedo[internet]. [consultado el

03/05/2019].Disponible en https://es.scribd.com/document/109417270/Esterilizacion-por-
Calor-seco-y-Calor-humedo.
- Iáñez, E.Acción de los agentes químicos sobre las bacterias[internet]. [consultado el

03/05/2019]. Disponible en http://www.biologia.edu.ar/microgeneral/micro-
ianez/19_micro.html.


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Todo esto se consigue mediante distintas técnicas de desinfección y esterilización para

 Preparar algunos medios de cultivos utilizados en el laboratorio de microbiología.

 Evaluar la calidad del proceso de esterilización de medios de cultivo mediante

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 Aplicar métodos de asepsia básicos para la realización del trabajo en el

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conservación y uso, asegura la exactitud, confiabilidad y reproducibilidad de los

A. PREPARACION DE MEDIOS DE CULTIVOS.

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Como la cantidad a X 100ml

Pesamos los 3,6 gramos

Para preparar agar sangre

B.CONTROL DE CALIDAD DE LA ESTERILIZACION DE MEDIOS DE CULTIVO.

1. Control químico: cinta testigo o cinta termosensible.

Por una universidad con calidad, moderna e incluyente

Cortamos un pedazo de cinta

Llevar al autoclave por

2. Control biológico (esporas de geobacillusstearothermophilus)

Llevamos al autoclave una

3. Control por lote de medio preparado.

Tomar el 1% del total de los

Tomamos dos cajas de agar

Dividir las cajas en 4

Tomamos una asada del

Tomamos una asada de E. coli

Tomamos un tubo que contiene

Tomamos una asada de un

Luego depositamos varias

Por una universidad con calidad, moderna e incluyente

Pasadas las 24 h, sembrar

Tomamos un tubo que

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 Control por lote.

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 Valoración de la calidad de los medios de cultivo.

 Medios de cultivo solidos selectivos (agar manitol sal)-método

Pasadas las 24 horas de incubación, observamos crecimiento (S. aureus) en el medio

NOTA: Para el criterio de evaluación, se considera que un medio de cultivo es productivo

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 Medios de cultivo líquidos selectivos (caldo selenito)

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-No observamos crecimiento de microorganismo en ninguno de los dos tubos. Esto se

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1. Establezca diferencias entre medios de cultivo selectivo y no selectivo.

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2. Mencione 3 medios de cultivo selectivos.

 Agar cetrimida (pseudomonas).

 Agar bacillus cereus.

 Agar manitol salado (permite el crecimiento de bacterias gram positivas)