LDH-P

C Método UV optimizado (SFBC) para la determinación

AA
de lactato deshidrogenasa (LDH) en suero o plasma

SIGNIFICACION CLINICA PRECAUCIONES

La determinación de la actividad lactato deshidrogenasa Los reactivos son para uso diagnóstico "in vitro".
(LDH) tiene una gran variedad de aplicaciones clínicas. Por Utilizar los reactivos guardando las precauciones habituales
ser una enzima intracelular, su elevación es índice de daño de trabajo en el laboratorio de análisis clínicos.
tisular con la consecuente liberación de ésta a la circula- Todos los reactivos y las muestras deben descartarse de
ción. El daño puede variar desde una simple anoxia con acuerdo a la normativa local vigente.
ligero daño celular y pérdida de citoplasma hasta necrosis
celular severa generando diversos grados de elevación de ESTABILIDAD E INSTRUCCIONES DE
la actividad enzimática. ALMACENAMIENTO
En el infarto agudo de miocardio, la actividad de LDH total Reactivos Provistos: son estables en refrigerador (2-10oC)
(junto con las CK y AST), constituye un elemento importante hasta la fecha de vencimiento indicada en la caja.
de diagnóstico. La misma comienza a elevarse 12-24 horas Reactivo A reconstituido: estable 21 días en refrigerador (2-
después de producido el infarto; alcanza un pico entre las 10oC) o 3 días a temperatura ambiente a partir del momento
48-72 horas y permanece elevada hasta el séptimo o décimo de su reconstitución.
día. También se registra un aumento de actividad de LDH
total en pacientes con necrosis hepática (producida por INDICIOS DE INESTABILIDAD O DETERIORO DE LOS
agentes tóxicos o por infección aguda como la hepatitis viral) REACTIVOS
e incluso acompañando a necrosis tubular renal, pielonefritis, Cuando el espectrofotómetro ha sido llevado a cero con agua
etc. En los tumores sanguíneos como leucemias y linfomas destilada, lecturas de absorbancia del Reactivo A reconsti-
también se observan valores aumentados de la LDH. tuido inferiores a 0,800 D.O. o superiores a 1,800 D.O. (a
En el líquido cefalorraquídeo (LCR) el valor normal es de 340 nm) son indicio de deterioro del mismo.
aproximadamente el 10% de su valor en suero, aumentando
marcadamente su valor en meningitis bacterianas. En las MUESTRA
meningitis virales la LDH aumenta su valor solo en el 10% Suero o plasma
de los casos. a) Recolección: se debe obtener suero de la manera usual y
separar del coágulo dentro de las dos horas de su obtención.
FUNDAMENTOS DEL METODO También puede usarse plasma.
Basado en el siguiente esquema de reacción: b) Aditivos: en caso de que la muestra a emplear sea plas-
LDH ma, debe usarse heparina como anticoagulante.
Piruvato + NADH + H+ L-lactato + NAD+ c) Sustancias interferentes conocidas: las muestras con
Las concentraciones del ensayo están optimizadas de hemólisis visible o intensa pueden producir valores falsamen-
acuerdo a la Sociedad Francesa de Biología Clínica (SFBC). te aumentados por lo que no deben ser usadas.
Referirse a la bibliografía de Young para los efectos de las
REACTIVOS PROVISTOS drogas en el presente método.
A. Reactivo A: viales conteniendo NADH. d) Estabilidad e instrucciones de almacenamiento: la
B. Reactivo B: solución de buffer Tris, pH 7,2 conteniendo muestra debe ser preferentemente fresca. La LDH es estable
piruvato y cloruro de sodio. hasta 24 horas en refrigerador. No congelar.
Concentraciones finales (según SFBC)
Tris................................................................ 80 mM, pH 7,2 MATERIAL REQUERIDO (no provisto)
Piruvato............................................................... 1,6 mmol/l - Espectrofotómetro.
NADH.................................................................. 0,2 mmol/l - Micropipetas y pipetas para medir los volúmenes indicados.
ClNa................................................................... 200 mmol/l - Material volumétrico adecuado.
- Baño de agua a la temperatura indicada en el procedi-
INSTRUCCIONES PARA SU USO miento.
Reactivo A: agregar el volumen de Reactivo B indicado en - Cronómetro.
el rótulo a un vial de Reactivo A. Tapar y agitar suavemente
por inversión hasta disolución completa. Fechar. CONDICIONES DE REACCION
Reactivo B: listo para usar. (Disminución de absorbancia)

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- Longitud de onda: 340 nm (Hg 334 ó 366) CONVERSION DE UNIDADES AL SISTEMA SI
- Temperatura de reacción: 25, 30 ó 37oC. Ver los VALORES LDH (U/l) x 0,017 = LDH (ukat/l)
DE REFERENCIA correspondientes a cada temperatura.
- Tiempo de reacción: 3 minutos y 30 segundos. METODO DE CONTROL DE CALIDAD
- Los volúmenes de muestra y reactivo se pueden reducir Procesar 2 niveles de un material de control de calidad
proporcionalmente sin que varíen los factores de cálculo. (Standatrol S-E 2 niveles) con actividades conocidas de
lactato deshidrogenasa, con cada determinación.

PROCEDIMIENTO LIMITACIONES DEL PROCEDIMIENTO

Ver Sustancias interferentes conocidas en MUESTRA.
A) 25 C
o
- Absorbancia inicial baja: cuando una vez agregado el sue-
En una cubeta mantenida a la temperatura de trabajo,
ro, la primera lectura (tiempo 0) es inferior a 0,800 D.O.
colocar:
estando el sustrato (Reactivo A) en condiciones, indica
Reactivo A reconstituido 3 ml una muestra con muy alta actividad de LDH (que consume
Preincubar unos minutos, luego agregar: NADH aún antes de esta lectura). En este caso, repetir la
determinación con muestra diluida 1/10 con solución fisio-
Muestra 100 ul lógica y multiplicar el resultado por la dilución efectuada.
Mezclar inmediatamente y disparar simultáneamente el - La humectación es causa de deterioro del Reactivo A.
cronómetro. Esperar 30 segundos. Leer la absorbancia
inicial (ver LIMITACIONES DEL PROCEDIMIENTO) y PERFORMANCE
luego a los 1, 2 y 3 minutos de la primera lectura. Determi- a) Reproducibilidad: procesando simultáneamente repli-
nar la diferencia promedio de absorbancia/min (∆A/min), cados de una misma muestra, se obtienen los siguientes
restando cada lectura de la anterior y promediando los valores:
valores. Utilizar este promedio para los cálculos. Nivel D.S. C.V.
B) 30-37 C
o 438 U/l ± 5,14 U/l 1,17 %
I- MACROTECNICA 683 U/l ± 7,99 U/l 1,17 %
Emplear 50 ul de Muestra, siguiendo el procedimiento b) Límite de detección: depende del espectrofotómetro
indicado en A). empleado y de la longitud de onda. De acuerdo con la sen-
sibilidad requerida, en espectrofotómetro a 340 nm (Hg 334
II- MICROTECNICA
ó 366), con cubetas de caras paralelas de 1 cm de espesor,
Emplear 20 ul de muestra y 1,0 ml de Reactivo A re-
reproducibilidad ± 2 nm, luz espuria ≤ 0,5% y semiancho de
constituido siguiendo el procedimiento indicado en A).
banda ≤ 8 nm, para un ∆A/min de 0,001, el mínimo cambio
de actividad detectable será de 5 U/l (a 340 nm y a 25oC).
c) Rango dinámico: el rango útil de lectura se extiende
CALCULO DE LOS RESULTADOS
hasta 0,200 D.O. ∆A/min (a 340 nm y 25oC). Si la ∆A/min
LDH (U/l) = ∆A/min x factor es superior a 0,200 D.O. (340-334 nm y 25oC) o 0,100 D.O.
En cada caso deberá emplearse el factor de cálculo co- (366 nm y 25oC), repetir la determinación con muestra diluida
rrespondiente de acuerdo a la temperatura de reacción 1/5 ó 1/10 con solución fisiológica, corrigiendo consecuen-
seleccionada (30-37oC o 25oC) y a la técnica empleada temente los resultados.
(micro o macrotécnica) como se indica en la siguiente tabla
de factores: PARAMETROS PARA ANALIZADORES AUTOMATICOS
Para las instrucciones de programación consulte el manual
Temp. 25 C
o
30-37 C
o
del usuario del analizador en uso.
L. onda I II
PRESENTACION
340 nm 4.921 9.683 8.095 - 3 x 20 ml (Cód. 1521303).
334 nm 5.016 9.871 8.253
366 nm 9.118 17.941 15.000 BIBLIOGRAFIA
- Societé Française de Biologie Clinique (SFBC) - Ann. Biol.
VALORES DE REFERENCIA Clin. 40:160, 1982.
Temperatura 25oC 30oC (*) 37oC (*) - Sociedad Española de Química Clínica - Comité Científico,
Comisión de Enzimas - Quim. Clin. 57-61, 1989.
Valores (U/l) 120-240 160-320 230-460 - Young, D.S. - "Effects of Drugs on Clinical Laboratory Tests",
(*) Calculados AACC Press, 4th ed., 2001.
Se recomienda que cada laboratorio establezca sus propios
valores de referencia.

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Símbolos
Los siguientes símbolos se utilizan en todos los kits de reactivos para diagnóstico de Wiener lab.

C
Este producto cumple con los requerimientos
previstos por la Directiva Europea 98/79 CE de
productos sanitarios para el diagnóstico "in vitro"
M Elaborado por:

P
Xn

Representante autorizado en la Comunidad

Europea Nocivo

V Uso diagnóstico "in vitro"

Corrosivo / Caústico

X Contenido suficiente para <n> ensayos

Xi

Irritante

H Fecha de caducidad

i Consultar instrucciones de uso

l Límite de temperatura (conservar a)

 No congelar
Calibr. Calibrador

b Control

F Riesgo biológico

Volumen después de la reconstitución

b Control Positivo

Cont. Contenido c Control Negativo

g Número de lote h Número de catálogo

M Wiener Laboratorios S.A.I.C.

Riobamba 2944

Wiener lab.
2000 - Rosario - Argentina
http://www.wiener-lab.com.ar
Dir. Téc.: Viviana E. Cétola
Bioquímica
Producto Autorizado A.N.M.A.T.
Cert. Nº: 2114/97 2000 Rosario - Argentina
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