COD.

LQA-IQ-13
Determinación de OD, DBO y DQO Versión: 00
Fecha: 24/09/2020

Programa de estudio Experiencia curricular Sesión

Escuela de Ingeniería
Química Analítica 9
Ambiental

I. OBJETIVO
- Determinar OD en una muestra de agua residual
- Determinar DQO en una muestra de agua residual
- Determinar DBO en una muestra de agua residual

II. FUNDAMENTO
- La determinación de Oxígeno disuelto (OD) se basa en la titulación del I 2 liberado
en cantidad equivalente a la del oxígeno disuelto en el agua, empleado una
solución de tiosulfato de sodio y solución de almidón como indicador

- La determinación de Demanda Bioquímica de Oxigeno (DBO) es una estimación

de la cantidad de materia orgánica biodegradable presente en una muestra de
agua residual, por medio de una población microbiana heterogénea. Las
sustancias inorgánicas (S2-, Fe2+, NH4+, etc.) pueden ser oxidadas si es que los
microorganismos quimioautróficos están presentes y las condiciones de
incubación lo permiten. Se basa en el consumo de una muestra de agua
incubada durante cinco días a 20 °C y en oscuridad. Para esto se hacen dos
Determinaciones de Oxígeno disuelto.

- La determinación de demanda química de oxigeno (DQO) informa sobre el

consumo de oxigeno de un agua para la oxidación de casi todas las sustancias
orgánicas solubles en agua, exceptuando una serie de compuestos nitrogenados
y de hidrocarburos apenas solubles en agua. Muchos tipos de materia orgánica
son oxidados mediante ebullición en una mezcla de ácido crómico y sulfúrico
La muestra es sometido a reflujo en una solución fuertemente ácida con un
exceso conocido de K2Cr2O7 .Después de la digestión el remanente de K2Cr2O7
no reducido se titula con sulfato ferroso amoniacal (SFA) se determina la
cantidad de K2Cr2O7 consumido y la cantidad de materia orgánica oxidable se
calcula en términos de oxígeno equivalente. Los compuestos alifáticos volátiles
de cadena lineal o abierta no son oxidados en alguna extensión apreciable. Esto
es debido, en parte, a que los orgánicos volátiles están presentes en la fase de
vapor no llegan a hacer contacto con el líquido oxidante. Los compuestos
alifáticos de cadena lineal son oxidados más efectivamente cuando se adiciona
Ag2SO4 como catalizador. Sin embargo, el Ag2SO4 reaccionaría con Cl-, Br- y I-
para producir precipitados que sólo son oxidados parcialmente. Las dificultades
causadas por la presencia de sales haloideas pueden ser superados en gran
extensión, aunque no completamente, por complicación con HgSO 4 en
proporción de 10:1 a HgSO4:C1- , antes del procedimiento de reflujo, dando
lugar a un cloromercuriato soluble. El ensayo no se debe utilizar para muestras
que contengan más de 2000 ppm Cl-.. El Cl- se oxida a Cl2 con el Cr2O72-; el
Cr2O72- de color naranja pasa a Cr3+ de color verde. Se aproxima que 1 mg de Cl-
es equivalente a 0,226 mg de DQO. El nitrito (NO2-) ejerce una DQO de 1,14 ppm
de O2 por cada mg de N-NO2- . Debido a que las concentraciones de NO 2- en
las aguas contaminadas raramente exceden de 1,-2,0 ppm de N-NO2- la
interferencia se considera insignificante y usualmente es ignorada. Para eliminar
una interferencia significativa debida al NO 2- se adicionan 10 mg de ácido
sulfámico por cada mg de N-NO2- presente en el matraz de reflujo. También se
adiciona la misma cantidad de ácido sulfámico al matraz de reflujo que
contiene agua destilada usada como blanco. Especies inorgánicas reducidas
tales como hierro ferroso (Fe2+), sulfuros (S2-), manganeso manganoso, etc., son
oxidadas cuantitativamente bajo las condiciones de ensayo. Para muestras que
contengan niveles significantes de estas especies, se pueden asumir oxidación
estequiométricas y conociendo la concentración inicial de las especies que
interfieren, se puede hacer las correcciones al valor obtenido para la DQO.
 III. MATERIALES Y METODO
Demanda Química de Oxigeno
Reactivos para DQO
1) Solución estándar de K2Cr2O7 0,25 N
2) Sulfato de Plata (Ag2SO4) grado reactivo
3) Ácido sulfúrico concentrado grado reactivo)
4) Reactivo de H2SO4: Adicionar 22 gr de Ag2SO4 por frasco de 4 kilos de H2SO4. Se deja
reposar por 1 o 2 días para disolver el Ag2SO4
5) Solución indicadora de Ferroín (1,485 gr de 1,10 fenantrolina hidratada y 695 mg
de FeSO4.7H2O en agua destilada y diluir a 100 mL.. En lugar de este indicador
también se puede usar difenilamina.
6) Solución estándar de SFA 0,25 N.
7) Sulfato de mercurio HgSO4 en cristales o polvo.
8) Acido sulfámico. Solo se requiere si la interferencia N-NO2- se va a eliminar.
9) Patrón Ftalato hidrógeno potásico: Disolver 425 mg en agua destilada y diluir a 1000
mL .El reactivo tiene una DQO teórica de 1,176 gr de O 2/gr y esta solución tiene
una DQO teórica de 500 ppm O2 .Preparar una nueva para cada uso.
Procedimiento de muestras con DQO mayores a 50 ppm O2
1) Tomar 50 mL de muestra (para muestras con DQO mayores que 900 ppm usar una
porción más pequeña diluida a 50 mL) en el matraz de reflujo de 500 mL.
2) Adicionar 1,0 gr de HgSO4, varias perlas de vidrio y muy lentamente 5 mL del
Reactivo H2SO4 mezclando para disolver el HgSO4 .Enfriar mientras se mezcla para
evitar posible pérdidas de materiales volátiles.
3) Adicionar 25 mL de K2Cr2O7 0,25 N y mezclar de nuevo. Conectar el matraz al
refrigerante y aplicar el agua de enfriamiento
4) Adicionar 70 mL del reactivo de H2SO4 a través de la entrada que está en la parte
final del refrigerante (por donde entra el agua de lavado), mezclando y agitando a
medida que se adiciona reactivo.
5) Mezclar bien para prevenir el calentamiento local en el fondo del matraz y una
posible expulsión del contenido del matraz.
 6) Una vez que el aparato esté totalmente montado, someter la mezcla a reflujo por
dos horas, Enfriar y lavar el refrigerante hacia abajo con agua destila
7) Desconectar el refrigerante de reflujo y diluir la mezcla casi al doble de su volumen
con agua destilada. Enfriar a temperatura ambiente y titular el exceso de K2Cr2O7
con la solución de SFA, usando 0,1 a 0,15 mL de (2-3 gotas) de indicador de ferroín
(aunque la cantidad de ferroín no es crítica se debe usar el mismo volumen para
todas las titulaciones).Tomar el punto final de la titulación el primer cambio agudo
de color, el cual va de un color azul verde a café rojizo. El azul verde puede
reaparecer minutos más tarde.
7) Correr un blanco, el cual consiste en un volumen de agua destilada igual a la
muestra; se adiciona los mismos reactivos, se somete a reflujo y se titula con la
solución de SFA
DQO ( mg de O2/L) = N ( a - b) 8000
(ml de muestra)

a = ml de SFA usado para el blanco

b = mL de SFA usado para la muestra
N = normalidad estandarizada de SFA

Oxigeno disuelto
Equipos y aparatos para Oxígeno disuelto
Bureta de 50 ml; Probeta de 50 o 100 ml; Pipetas de 1 ó 2 ml; Vaso de precipitación
de 100 ml; Frasco de DBO de 300 ml de capacidad con tapa esmerilada
Reactivos para oxígeno disuelto
a) Solución A MnSO4. 5 H2O 500 g / litro de solución
b) Solución B (Yoduro-alcalina-azida). Primero se prepara separadamente tres
Soluciones acuosas: KI 15%; NaOH 50 %; NaN3 0.75 %. El reactivo B es la mezclar las
3 soluciones en partes iguales. Por ejemplo 5 mL de cada KI 15 %+ 5 mL NaOH 50
% + 5 mL NaN 0.75 %s se colocan en un vaso de50 mL, se mezcla.
c) Solución de Tiosulfato de sodio 0.025 N: Pesar 6.205 gramos de Na2S2O3.5H2O +
0.1 gramos de Na2CO3 y llevar a 1 litro de solución y agregar 1 gota de CS 2
d) Ácido sulfúrico H2SO4 (densidad = 1.84 g / mL)
e) Solución de almidón 0.5 % : Pesar 2 gramos de almidón soluble en 300 ml de agua
 destilada. Luego adicionar NaOH al 20 % hasta que desaparezca la opalescencia.
Dejar en reposo por 1 a 2 horas, agregar HCl para neutralizar. Añadir 2 ml de ácido
acético glacial. Completar a 1 litro con agua destilada.
Determinación de OD
1) Destapar cuidadosamente el frasco de DBO de 300 mL y adicionar
“subsupercialmente” 1 ml de solución A y 1 ml de solución B. Tapar el frasco
verificando que no se forme burbujas de aire. Dejar en reposo 10 segundos
2) Mezclar el contenido hasta que el precipitado se disperse y dejar en reposo 10
minutos.
3) Destapar el frasco y adicionar 1 mL de H2SO4 cc. Tapar cuidadosamente y agitarla
enérgicamente hasta que todo el precipitado se disuelva. El agua toma un color
ámbar, si este no es el caso, repetir la prueba; si se toma un color blanco lechoso,
pueda ser que la muestra no tenga oxígeno disuelto. Dejar reposar 30 minutos.
4) Colocar 100 ml en un Erlenmeyer de 250 mL y titular con la solución de Na2S2O3
0.0250 N hasta que enérgicamente parezca un color amarillo “paja” (amarillo
pálido).
5) Cuando el color ámbar ha virado al amarillo pálido, adicionar 1 ml de solución de
almidón (indicador); inmediatamente aparecerá una coloración azul, seguir
titulando hasta que desaparezca dicha coloración. Repetir la titulación para
encontrar un valor promedio.
𝑚𝑔 𝑂 𝑑𝑖𝑠𝑢𝑒𝑙𝑡𝑜
2 201.34 ∗(𝑚𝐿 𝑑𝑒 𝑡𝑖𝑜𝑠𝑢𝑙𝑓𝑎𝑡𝑜 𝑡𝑖𝑡𝑢𝑙𝑑𝑜)
OD= 𝐿𝑖𝑡𝑟𝑜 𝑑𝑒 =
𝑠𝑜𝑙𝑢𝑐𝑖𝑜𝑛 𝑚𝐿 𝑑𝑒 𝑚𝑢𝑒𝑠𝑡𝑟𝑎 𝑡𝑖𝑡𝑢𝑙𝑎𝑑𝑎

Mn2+ + 2 OH- → Mn(OH)2 (Precipitado blanco)

2 Mn(OH)2 + ½ O2 → 2 MnO(OH)2 (Precipitado marrón)
MnO(OH)2 + 2 H2SO4 → Mn(SO4)2 + 3 H2O (Disolución)
Mn(SO4)2 + 2 KI → MnSO4 + K2SO4 + I2 (Color ámbar)
Na2S2O3 + I2 → Na2S4O6 + 2 NaI (Titulación)
DEMANDA BIOQUIMICA DE OXIGENO

DBO para muestras pocas contaminadas (DBO < 6)

1) Llenar cuidadosamente sin agitar dos botellas de DBO con la muestra sin diluir. Si
se va a trabajar con muestras diluidas, usar dos botellas adicionales por cada
dilución, colocando cuidadosamente la muestra sin diluir y rellenando con agua
destilada aireada con proporción que permita lograr la dilución deseada.
2) Tapar las botellas evitando que se formen burbujas en el interior. Dejar reposar
por 15 segundos.
3) Determinar por el Método de Winkler el contenido de oxígeno disuelto (OD 1) en
una botella de cada serie.
4) Incubar las botellas restante por cinco días a 20 °C y en oscuridad
5) Determinar luego el contenido de oxígeno disuelto en las botellas incubadas(OD 2)
6) Encontrar la demanda bioquímica de oxígeno (DBO) de la muestra aplicando la
siguiente fórmula
DBO(5 días) = OD1 - OD2 mg O2 / L
P
P = Fracción de muestra analizada (dilución considerada)
NOTA: La dilución a considerar será la última que permita hallar diferencias entre
OD1 y OD2. Esta diferencia será mayor ó igual a 2 mg O 2/ L; y el valor de OD2 será
mayor ó igual a 1 mg O2 / L

DBO USANDO AGUA DE DILUCION (MUESTRAS MUY CONTAMINADAS) DBO > 6

1. TOMA Y PRESERVACION DE MUESTRAS
1.1 Las muestras para determinación de la DBO se deben analizar con prontitud; si
no es posible, refrigerarlas a una temperatura cercana al punto de congelación,
ya que se pueden degradar durante el almacenamiento, dando como resultado
valores bajos. Sin embargo, es necesario mantenerlas el mínimo tiempo posible
en almacenamiento, incluso si se llevan a bajas temperaturas. Antes del análisis
calentarlas a 20ºC.
1.2 Muestras simples. Si el análisis se emprende en el intervalo de 2 h después de la
recolección no es necesario refrigerarlas; de lo contrario, guardar la muestra a
4ºC o menos; reportar junto con los resultados el tiempo y la temperatura de
almacenamiento. Bajo ningún concepto iniciar el análisis después de 24 h de
haber tomado la muestra; las muestras empleadas en la evaluación de las tasas
retributivas o en otros instrumentos normativos, deben ser analizadas antes de
que transcurran 6 h a partir del momento de la toma.
1.3 Muestras compuestas. Mantener las muestras a 4ºC o menos durante el proceso
de composición, que se debe limitar a 24 h. Aplicar los mismos criterios que para
las muestras sencillas, contando el tiempo transcurrido desde el final del período
de composición. Especificar el tiempo y las condiciones de almacenamiento
como parte de los resultados.

2. REACTIVOS
2.1 Solución tampón de fosfato: Disolver 8,5 g de KH2PO4, 21,75 g de K2HPO4, 33,4 g
de Na2HPO4.7H2O, y 1,7 g de NH4Cl en aproximadamente 500 mL de agua
destilada y diluir a 1 L. El pH debe ser 7,2 sin posteriores ajustes. Si se presenta
alguna señal de crecimiento biológico, descartar este o cualquiera de los otros
reactivos.
2.2 Solución de MgSO4.7H2O 2.25 % (p/v)
2.3 Solución de CaCl2: 2.75 % (p/v).
2.4 Solución de FeCl3.6H2O 0.025 % (p/v)
2.5 Soluciones H2SO4 1N y NaOH, 1 N, para neutralización de muestras cáusticas o
ácidas.
2.6 Solución de Na2SO3 0.1575 % (p/v). Esta solución no es estable y se debe
preparar diariamente.
2.7 Inhibidor de nitrificación: 2-cloro-6-(triclorometil)piridina).
2.8 Solución de glucosa-ácido glutámico: Secar a 103ºC por 1 h glucosa y ácido
glutámico grado reactivo. Disolver 150 mg de glucosa y 150 mg de ácido
glutámico en agua destilada y diluir a 1 L. Preparar inmediatamente antes de su
uso.
2.9 Solución de NH4Cl Disolver 1,15 g de NH4Cl en 500 mL de agua destilada, ajustar
el pH a 7,2 con solución de NaOH, y diluir a 1 L. La solución contiene 0,3 mg de
N/mL.

3. PROCEDIMIENTO
3.1 Preparación del agua de dilución. Colocar la cantidad de agua necesaria en una
botella y agregar por cada litro, 1 mL de cada una de las siguientes soluciones:
tampón fosfato, MgSO4, CaCl2, y FeCl3. El agua de dilución se puede inocular
como se describe en 6.4; chequear y guardar como se describe en 6.2 y 6.3, de
tal manera que siempre se tenga disponible.
Llevar el agua de dilución a una temperatura de 20ºC antes de su uso; saturarla
con OD por agitación en una botella parcialmente llena, por burbujeo de aire
filtrado libre de materia orgánica, o guardarla en botellas lo suficientemente
grandes con tapón de algodón, para permitir su saturación. Emplear material de
vidrio bien limpio para proteger la calidad del agua.

3.2 Verificación del agua de dilución. Aplicar este procedimiento como una forma
de verificación básica de la calidad del agua de dilución.
Si el agua de dilución consume más de 0,2 mg de oxígeno/L se debe mejorar su
purificación o emplear agua de otra fuente; si se usa el procedimiento de
inhibición de la nitrificación, el agua de dilución inoculada, se debe guardar en
un sitio oscuro a temperatura ambiente hasta que el consumo de oxígeno se
reduzca lo suficiente para cumplir el criterio de verificación. Confirmar la calidad
del agua de dilución almacenada que está en uso, pero no agregar semilla para
mejorar su calidad. El almacenamiento no es recomendable cuando se va a
determinar la DBO sin inhibición de nitrificación, ya que los organismos
nitrificantes se pueden desarrollar en este período. Revisar el agua de dilución
para determinar la concentración de amonio, y si es suficiente después del
almacenamiento; de lo contrario, agregar solución de NH 4Cl para asegurar un
total de 0,45 mg de amonio como nitrógeno/L. Si el agua de dilución no ha sido
almacenada para mejorar su calidad, agregar la cantidad suficiente de semilla
para producir un consumo de OD de 0,05 a 0,1 mg/L en cinco días a 20ºC. Llenar
 una botella de DBO con agua de dilución, determinar el OD inicial, incubar a 20ºC
por 5 días y determinar el OD final como se describe en 6.8 y 6.10. El OD
consumido en este lapso no debe ser mayor de 0,2 mg/L y preferiblemente
menor de 0,1 mg/L.

3.3 Chequeo con glucosa-ácido glutámico. Debido a que la prueba de la DBO es un

bioensayo, sus resultados pueden estar muy influenciados por la presencia de
sustancias tóxicas o por el uso de semillas de mala calidad. Muchas veces el agua
destilada puede estar contaminada con cobre, o algunos inóculos de aguas
residuales pueden ser relativamente inactivos, y si se emplean tales aguas o
inóculos siempre se van a obtener bajos resultados. Controlar periódicamente la
calidad del agua de dilución, la efectividad de las semillas y la técnica analítica,
por mediciones de la DBO para compuestos orgánicos puros y muestras con
adiciones conocidas. En general, para determinaciones de la DBO que no
requieran una semilla adaptada, usar como solución estándar de chequeo una
mezcla de 150 mg de glucosa/L y 150 mg de ácido glutámico/L. La glucosa tiene
una velocidad de oxidación excepcionalmente alta y variable, pero cuando es
empleada con ácido glutámico se estabiliza, y es similar a la obtenida con aguas
residuales municipales. Si un agua residual contiene un constituyente
mayoritario identificable, que contribuye a la DBO, usar este compuesto en
remplazo de la mezcla de glucosa-ácido glutámico.
Determinar la DBO5 a 20ºC de una dilución al 2% de la solución estándar de
chequeo glucosa-ácido glutámico mediante las técnicas descritas en los
numerales 6.4 a 6.10. Evaluar los datos como se describe en la sección de
Precisión.
3.4 Inoculación.
6.4.1 Origen de las semillas o inóculo. Es necesario que en la muestra esté
presente una población de microorganismos capaces de oxidar la MO
biodegradable. Las AR domésticas no cloradas, los efluentes no desinfectados de
plantas de tratamiento biológico, y las aguas superficiales que reciben descargas
residuales contienen poblaciones satisfactorias de microorganismos. Algunas
muestras no contienen una población microbiana suficiente (por ejemplo,
efluentes industriales sin tratamiento, aguas desinfectadas, efluentes con
elevada temperatura o con valores extremos de pH), por tanto deben inocularse
por adición de una población adecuada de microorganismos. La semilla o inóculo
preferible es el efluente de un sistema de tratamiento biológico, en su defecto,
el sobrenadante de AR domésticas después de dejarlas decantar a temperatura
ambiente por lo menos 1 h pero no más de 36 h. Cuando se emplee el efluente
de un proceso de tratamiento biológico, se recomienda aplicar el procedimiento
de inhibición de la nitrificación.
Algunas muestras pueden contener materiales no degradables a las tasas
normales de trabajo de los microorganismos; inocular tales muestras con una
población microbiana adaptada, obtenida a partir de efluentes sin desinfectar de
un proceso de tratamiento biológico de AR. También se puede obtener la semilla
en el cuerpo de agua receptor del vertimiento, preferiblemente de 3 a 8 Km
después del punto de descarga. Cuando no se disponga de ninguna de dichas
fuentes del inóculo, desarrollar en el laboratorio una semilla adaptada, por
aireamiento continuo de una muestra clarificada de AR doméstica y adición de
pequeños incrementos diarios de AR. Para obtener la población microbiana
inicial, usar una suspensión de suelo, un lodo activado, o una preparación a partir
de semilla comercial. Ensayar el rendimiento de la semilla haciendo pruebas de
la DBO en las muestras hasta obtener una población satisfactoria. Si los valores
de la DBO aumentan con el tiempo hasta un valor constante, se consideran como
un indicio de la adaptación sucesiva de la semilla o inóculo.
6.4.2 Control de inóculos. Determinar la DBO del material inoculante como si se
tratara de una muestra. De este valor y del conocimiento del dato del agua de
dilución determinar el OD consumido. Hacer las diluciones necesarias hasta
obtener una disminución de por lo menos el 50% del OD. La gráfica de la
disminución de OD expresada en miligramos por litro contra los mililitros de
inóculo, origina una recta cuya pendiente debe interpretarse como la disminución
de OD por mililitro de inóculo. La intercepción de la recta con el eje de los valores
de reducción del OD representa la disminución del oxígeno provocada por el agua
de dilución, valor que debe ser inferior a 0,1 mg/L (ver 6.8). Con el objeto de
corregir el valor de OD consumido por una muestra, se debe restar a éste el
 consumido por el inóculo. El consumo de OD del agua de dilución más el inóculo
puede estar en el intervalo de 0,6 a 1,0 mg/L. En el numeral 6.6 se describen las
técnicas para adición de material inoculante al agua de dilución, para dos
métodos de dilución de muestras.
3.5 Blanco de agua de dilución. Con el objeto de verificar la calidad del agua de
dilución sin inóculo y la limpieza de los materiales, usar una porción de la misma
y llevarla junto con las muestras a través de todo el procedimiento. El OD
consumido por el agua de dilución debe ser menor de 0,2 mg/L y
preferiblemente no mayor de 0,1 mg/L.

3.6 Pre tratamiento de la muestra.

3.6.1 Muestras con alcalinidad cáustica o acidez. Neutralizar las muestras a pH
entre 6,5 y 7,5 con una solución de H2SO4 o NaOH de concentración tal que
la cantidad de reactivo no diluya la muestra en más de 0,5%. La menor
dilución de muestra no debe afectar el pH dado por el agua de dilución
inoculada.
3.6.2 Muestras con compuestos residuales de cloro. Evitar las muestras que
contengan cloro residual; tomarlas antes del proceso de cloración; si la
muestra ha sido clorada pero no presenta cloro residual detectable, inocular
el agua de dilución; si hay cloro residual, declorar la muestra e inocular el
agua de dilución (ver 6.7). No ensayar las muestras que han sido decloradas,
sin inocular el agua de dilución. En algunas muestras, el cloro se elimina si se
dejan 1 o 2 h a la luz, lo cual puede suceder durante el transporte y manejo
de la muestra. Para muestras en las cuales el cloro residual no se disipa en
un tiempo razonablemente corto, eliminar el cloro residual por adición de
solución de Na2SO3. El volumen de Na2SO3 requerido se determina en una
porción de 100 a 1 000 mL de la muestra, previamente neutralizada, por la
adición de 10 mL de ácido acético 1 + 1 o H2SO4 1 + 50, 10 mL de solución de
KI (10 g /100 mL), por cada 1000 mL de muestra; el volumen resultante se
titula con solución de Na2SO3 hasta su punto final, determinado por el
indicador almidón-yodo. Se agrega a la muestra neutralizada, el volumen
relativo de solución de Na2SO3 determinado, se mezcla bien y se deja en
 reposo cerca de 10 a 20 minutos. Ensayar la muestra para determinar el cloro
residual. (NOTA: Un exceso de Na2SO3 en la muestra, consume oxígeno y
reacciona con ciertas cloraminas orgánicas que pueden estar presentes en
muestras tratadas).
3.6.3 Muestras contaminadas con sustancias tóxicas. Las muestras de AR
provenientes de industrias, por ejemplo electroquímicas, contienen metales
tóxicos. Estas muestras requieren de estudios especiales y deben ser
tratadas antes de medirles la DBO.
3.6.4 Muestras sobresaturadas con OD. En muestras procedentes de aguas muy
frías o de aguas en que la producción primaria es alta, los valores de OD a
20ºC suelen ser mayores de 9 mg de OD/L. Para prevenir pérdidas de oxígeno
durante la incubación, llevar la temperatura de la muestra a 20ºC en una
botella parcialmente llena, mientras se sacude fuertemente o se burbujea
aire comprimido filtrado y limpio.
3.6.5 Ajuste de temperatura de la muestra. Llevar las muestras a 20 ± 1ºC antes de
hacer las diluciones.
3.6.6 Inhibición de la nitrificación. A las muestras contenidas en botellas de 300
mL se agregan 3 mg de 2-cloro-6-(triclorometil)-piridina (TCMP) o se puede
agregar directamente al agua de dilución para lograr una concentración final
de aproximadamente 10 mg de TCMP/L. (NOTA: Es posible que la TCMP se
disuelva lentamente y permanezca flotando en la superficie de la muestra;
algunas formulaciones comerciales se disuelven más fácilmente pero no son
100% puras, por lo que se debe ajustar la dosificación). Las muestras que
requieren el procedimiento de inhibición de la nitrificación incluyen:
efluentes tratados biológicamente, muestras inoculadas con efluentes
tratados biológicamente, y aguas de río, pero no se limitan necesariamente
a estas. En el reporte de los resultados registrar el uso del procedimiento de
inhibición de la nitrificación.

3.7 Técnica de dilución. Los resultados más acertados se obtienen con diluciones de
muestra en las que los valores de OD residual son por lo menos 1 mg/L y un
consumo de OD de por lo menos 2 mg/L después de los 5 días de incubación. La
 experiencia con muestras de diferente origen permiten optimizar el número de
diluciones requeridas; la correlación de la DQO con la DBO puede constituir una
guía efectiva para la selección de las diluciones más convenientes. Si no se
dispone de esta metodología, se pueden emplear las diluciones de 0,0 a 1,0 %
para efluentes líquidos industriales, 1 a 5 % para efluentes industriales no
tratados y decantados, 5 a 25 % para efluentes con tratamiento secundario o
biológico, y 25 a 100 % para corrientes contaminadas.
Las diluciones se efectúan en probetas y luego se transfieren a las botellas de
DBO, o se preparan directamente en las botellas. Cualquiera de los dos métodos
de dilución puede combinarse con cualquier técnica para medición de OD. El
número de botellas a ser preparadas para cada dilución depende de la técnica
de análisis del OD y del número de réplicas deseadas. Cuando sea necesaria la
inoculación, agregar la semilla directamente al agua de dilución o a cada probeta
o botella de DBO antes de la dilución. La inoculación en las probetas evita la
disminución de la relación semilla: muestra cuando se hace un incremento en las
diluciones.
3.7.1 Diluciones preparadas en probeta.
Si se emplea el método modificado de la azida para la medición de OD, transvasar
cuidadosamente el agua de dilución -inoculada si es necesario-, hasta llenar la
mitad de una probeta de 1 a 2 L de capacidad por medio de sifón para evitar la
entrada de aire. Agregar la cantidad deseada de muestra cuidadosamente
mezclada y diluir al nivel apropiado con agua de dilución; mezclar bien con una
varilla tipo émbolo y evitar la entrada de aire. Trasvasar la dilución a dos botellas
de DBO por medio de sifón. Determinar el OD inicial en una de estas botellas.
Tapar herméticamente la segunda botella, con sello de agua, e incubar por 5 d a
20ºC. Si se determina el OD por el método de electrodo de membrana,
transvasar la mezcla de dilución a una botella DBO por medio de sifón.
Determinar el OD inicial en esta botella, descartar el residuo y llenar nuevamente
la botella con la muestra diluida. Tapar herméticamente la botella, con sello de
agua, e incubar por 5 d a 20ºC.
3.7.2 Diluciones preparadas directamente en botellas DBO.
 Con una pipeta de boca ancha agregar el volumen de muestra deseado a
diferentes botellas para DBO de volumen conocido. Agregar, a cada botella o al
agua de dilución, las cantidades apropiadas de semilla; llenar las botellas con
suficiente agua de dilución, inoculada si es necesario, de tal manera que al
insertar el tapón se desplace todo el aire, sin dejar burbujas. Para diluciones
mayores de 1:100 hacer una dilución preliminar en una probeta antes de hacer
la dilución final. Preparar dos botellas de cada dilución cuando se empleen los
métodos yodométricos de volumetría para la medición del OD; determinar el OD
inicial en una de las dos botellas, tapar herméticamente la segunda botella, con
sello de agua, e incubar por 5 d a 20ºC. Si se emplea el método de electrodo de
membrana para la medición de OD, preparar solamente una botella de DBO por
cada dilución; determinar el OD inicial en esta botella y remplazar cualquier
contenido desplazado con agua de dilución para llenar la botella. Tapar
herméticamente, con sello de agua, e incubar por 5 d a 20ºC. Enjuagar el
electrodo de OD entre determinaciones para prevenir la contaminación cruzada
de las muestras.
3.8 Determinación del OD inicial. Si la muestra contiene sustancias que reaccionan
fácilmente con el OD, es necesario determinar el OD antes de llenar la botella de
DBO con la muestra diluida. Si el consumo de OD inicial es insignificante, el
período entre la preparación de la dilución y la medida del OD inicial no es crítico.
Emplear el método modificado de la azida (método yodométrico) o el método
de electrodo de membrana, para determinar el OD inicial en todas las muestras
diluidas, testigos y, si se considera necesario, en los controles de semilla.
3.9 Incubación. Incubar a 20 ± 1ºC las botellas que contienen las diluciones, los
controles de semilla, los blancos de agua de dilución y los patrones de glucosa-
ácido glutámico. .
3.10 Determinación del OD final. Determinar el OD en las muestras diluidas, los
blancos y los patrones después de 5 días de incubación como se describe en 6.8
4. CALCULO
4.1 Cuando el agua de dilución no ha sido inoculada: DBO 5, mg/lt = (D1-D2) / P

4.2 Cuando el agua de dilución ha sido inoculada:

(𝐷1 − 𝐷2)− (𝐵1 − 𝐵2 )∗𝑓

DBO5, mg/lt = 𝑃

dónde:
D1 = OD de la muestra diluida inmediatamente después de la preparación, mg/L,
D2 = OD de la muestra diluida después de 5 d de incubación a 20ºC, mg/L,
P = fracción volumétrica decimal de la muestra empleada,
B1 = OD del control de semilla antes de la incubación, mg/L (sección 6.1.4),
B2 = OD del control de semilla después de la incubación, mg/L (sección 6.1.4), y
f= proporción de semilla en la muestra diluida a la semilla en el control de semilla
= (% de semilla en la muestra diluida)/(% de semilla en el control de
semilla).

4.3 Si el material inoculante se agrega directamente a la muestra o a las botellas de

control:f=(volumen de semilla en la muestra diluida)/(volumen de semilla en el
control de semilla.
4.4 Si se ha inhibido la nitrificación, reportar los resultados como DBO 5.
4.5 Los resultados obtenidos para las diferentes diluciones pueden ser promediados
si se cumple con los requisitos de valores de OD residual de mínimo 1 mg/L y un
consumo de OD de por lo menos 2 mg/L. Este promedio se puede hacer si no hay
evidencia de toxicidad en las muestras menos diluidas o de alguna alteración
detectable.
4.6 En estos cálculos no se hace corrección por el OD consumido por el blanco de
agua de dilución durante la incubación. Esta corrección no es necesaria si el agua
de dilución cumple el criterio de blanco estipulado en el procedimiento. Si el
agua de dilución no cumple este criterio, la corrección es difícil y los resultados
serán cuestionables.
 Ejemplo de cálculo; Los resultados siguientes corresponden a un ensayo de DBO
con botella de 300 mL. Para una muestra con siembra sobre las botellas de DBO.

Testigo Muestra Control de siembra

Volumen de muestra 0 2,0 0

Volumen de siembra 0 1,0 3,0

OD inicial 8,8 8.8 8,8

OD final 8,8 4,2 6,9

Consumo de OD 0,0 4,6 1,9

1,0
(𝐷1 − 𝐷2 )− (𝐵1 − 𝐵2 )∗𝑓 (8,8 − 4,2)− (8,8− 1,9)∗
3,0
DBO5, mg/lt = t= 2 = 345
𝑃
300

Diluciones recomendadas para diferentes valores esperados de DBO

mL de muestra Rango de DBO
0.02 30 000 -105 000
0.05 12 000 – 42 000
0.1 6 000 – 21 000
0.2 3 000 – 10 500
0.5 1200 - 4200
1.0 600 – 2 100
2.0 300 - 1 050
5.0 120 - 420
10.0 60 - 120
20.0 30-105
50.0 12 - 42
100 6 - 21
100-300 <6
 3.1. Metodología
Se hará DQO de muestra de curtiembre y DBO de agua de caño.
La explicación de esta práctica empezara desde la clase teórica

IV. REFERENCIA BIBLIOGRAFÍA

Código Referencias Bibliográficas
Biblioteca
545 / H22 HARVER, David. Química Analítica Moderna. 1° ed. Madrid:
Editorial Mc Graw Hill Interamericana Editores, 2004. 571p.
ISBN 9788448136352.
543 / H:51 SEAMUS, H. Química Analítica. 1° ed. México: Editorial
Interamericana Editores S.A., 2007. 452p. ISBN 109701061527
Methods for Chemical Analysis of Water and Wastes. United
States Environmental Protection Agency. Cincinnati, 1983.
543 / S:29 SKOOG, D.; WEST, D. Fundamentos de Química Analítica. 8va
Ed. México: Editorial Thomson, 2005. 1065p. ISBN 9706863699.
543.08 / S- SKOOG D; HOLLER D; CROUCH S. Principios de Análisis
62 Instrumental. 6ta Ed. México: Editorial Cengage Learning, 2008.
1038p. ISBN 139789706868299
Standard Methods for the Examination of Water and
Wastewater. American Public Health Association, American
Water Works Association, Water Pollution Control Federation.
19 ed., New York, 1995. pp 5-2 a 5-12

ANEXOS
Incluir los cuadros o tablas que permitirán recolectar los datos para su posterior
procesamiento.

RESULTADO E INFORME
Se presentara un esquema de la práctica, así como la realización de cálculos de