Universidad de Guayaquil

Facultad de Ciencias Químicas

Carrera: Química y Farmacia
Guía de Prácticas de Laboratorio de Análisis Instrumental II
NOMBRE Y APELLIDO DEL ESTUDIANTE: Sofia Michelle Lazo Barriga
GRUPO: 2 FECHA: 29/07/20 CICLO I (2020-2021)
Práctica N°
TÍTULO: Cromatógrafo de gases. Evaluación del efecto de la temperatura.
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Objetivo de la práctica de laboratorio
1) Reconocer los componentes del sistema cromatográfico de gases.
2) Identificar los parámetros de optimización cromatográfica por GC.
3) Determinar el efecto de aplicación de programación de temperatura para la separación cromatográfica.
Introducción
CROMATÓGRAFO DE GASES

La cromatografía de gases es una técnica analítica que puede ser utilizada para separar compuestos orgánicos
basada en sus volatilidades. También provee información cualitativa y cuantitativa de los componentes presentes
en una mezcla. Los componentes son separados por sus diferencias de partición entre la fase móvil gaseosa y la
fase estacionaria en la columna, permitiendo que sean separados en tiempo y espacio. Un cromatógrafo de gases
consiste de: ( Olguín Pérez & Rodríguez Magadán , 2004)

1. Gas portador
2. Sistema de inyección
3. Horno y columna cromatográfica
4. Sistema de detección
5. Registro

En cromatografía de gases la muestra se volatiliza y se inyecta en la cabeza de una columna cromatográfica. La

elución se produce por el flujo de una fase móvil que es un gas inerte, y a diferencia de la mayoría de los tipos de
cromatografía, la fase móvil no interacciona con las moléculas del analito; su única función es la de transportar el
analito a través de la columna.

La instrumentación requerida para cromatografía de gases también es mucho más sencilla y económica que la
empleada en HPLC. Sin embargo, en cromatografía de gases, la influencia de la temperatura sobre la distribución
del equilibrio es considerable, a diferencia de la cromatografía líquida. Por ello, la cromatografía de gases presenta
limitaciones en tres casos:

• compuestos poco volátiles, generalmente los de peso molecular superior a 300 u.m.a.
• compuestos sensibles a una elevación de la temperatura incluso moderada (determinados compuestos de
interés biológico)
• compuestos que se encuentran en forma iónica (puesto que son e n general poco volátiles)

Por esta razón, la cromatografía de gases se emplea cuando los componentes de la mezcla problema son volátiles
o semivolátiles y térmicamente estables a temperaturas de hasta 350-400ºC.

A menudo la cromatografía de gases se emplea para confirmar de la presencia o ausencia de un compuesto en una
muestra determinada.

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 - Recipiente con al fase móvil o gas portador: Es una bala de gas inerte (N2, He, Ar), a elevada presión y
de gran pureza, provista de un manorreductor y un sistema para regular un flujo pequeño de gas.

- Sistema de introducción de la muestra. Es el lugar por donde vamos a introducir la muestra, generalmente
en disolución, con ayuda de una microjeringa. Se suelen inyectar volúmenes muy pequeños del orden de
los microlitros. En el sistema de inyección la muestra se volatiliza y es arrastrada hacia la columna por la
fase móvil.

- Horno y Columna. El siguiente componente del cromatógrafo es el horno, que es un recinto donde está
la columna, la cual está conectada por un extremo al sistema de inyección y por otro al detector.

La columna es el elemento principal del cromatógrafo pues se trata de un tubo de acero o sílice fundida en cuyo
interior está la fase estacionaria. Los componentes de la muestra arrastrados por el gas portador son más o menos
retenidos por la misma y en consecuencia se separan unos de otros. El tiempo de retención de un compuesto en
cromatografía de gases va a depender, por una parte, de su naturaleza, es decir, de su estructura, composición
química y volatilidad, y por otra, de las características del sistema cromatográfico, como tipo de fase estacionaria,
longitud de la columna y Tª de la separación.

Se emplean actualmente cientos de tipos diferentes de fases estacionarias, si bien las podemos agrupar en tres
variantes:
Fases estac. sólidas
Fases estac. líquidas, y
Fases estacionarias ligadas

Estas últimas, basadas en una estructura de silicona, son las más empleadas. Hay muchas variedades de diferentes
polaridades que nos permiten elegir la fase más adecuada para una muestra concreta.

- Detector. La salida de la columna esta conectada al detector, cuya misión es la de generar una pequeña señal
eléctrica cuando pase un analito por él. Dicha señal, proporcional a la cantidad de analito, es amplificada y enviada
a un registro, donde es representada en función del tiempo transcurrido desde la inyección de la muestra, dando
lugar a un cromatograma. También puede el detector enviar su señal a un ordenador donde es almacenada y
procesada adecuadamente. (Ozores Belmonte, s.f.)

EVALUACIÓN DEL EFECTO DE LA TEMPERATURA.

La temperatura óptima de la columna depende del punto de ebullición de la muestra y del grado de separación
requerido. Para muestras cuyos componentes presentan un amplio intervalo de temperaturas de ebullición, a
menudo es conveniente emplear una programación de temperaturas. En general, la resolución óptima se asocia
con una temperatura mínima; en contrapartida la reducción de temperatura produce un aumento en el tiempo de
elución, y por tanto el tiempo que se necesita para completar el análisis. (Abelló Linde S.A)

El punto de ebullición es la temperatura a la cual el líquido

tiene energía suficiente para que las moléculas que se
transfieren a la fase gaseosa ejercen una presión que es igual
a la presión externa. Esto permite que todas las moléculas, no
solo las de la superficie, pasen a la fase de vapor.

Este equilibrio tiene un impacto directo en la temperatura en

la cromatografía de gases. Si la temperatura del horno es
demasiado baja, un compuesto se encontrará la mayor parte
del tiempo condensado en la fase estacionaria. Solo la
pequeña cantidad que se evapore se transferirá a la columna.

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 Por el contrario, si la temperatura es muy alta, el equilibrio girará en la dirección opuesta. El compuesto se
encontrará casi todo el tiempo en la fase de vapor y no se condensará en la fase estacionaria.

La cromatografía de gases funciona cuando un compuesto puede pasar libremente dentro y fuera de la fase
estacionaria (condensada). Solo cuando el compuesto se condensa puede interactuar con la fase estacionaria. Solo
cuando el compuesto está en fase de vapor, la fase móvil puede empujarlo por la columna hacia el detector.

Los compuestos que son muy volátiles no tendrán interacción con la fase de la columna si la temperatura está muy
por encima del punto de ebullición. Por lo tanto, se necesita bajar la temperatura para obtener interacciones
favorables con la fase. Obviamente, si la temperatura es demasiado baja, la totalidad del compuesto se condensará.
Esto no da buenos resultados porque es la transición de la fase líquida a la gaseosa, y viceversa, la responsable de
la separación.

De hecho, esa es la idea para el plato teórico. Cada transferencia (hacia adentro y hacia afuera, y de nuevo hacia
adentro) es un plato teórico. Cuanto más de estas transferencias se produzcan, mayor será la eficacia.

Idealmente, se debería dar la mejor separación cuando la temperatura ofrece la mayor cantidad de transiciones
hacia adentro y afuera de la fase. Esto sucede entre 10 y 50 °C por debajo del punto de ebullición del compuesto
para una columna capilar tubular abierta tradicional.

El punto de ebullición de estos freones es bastante bajo, por lo que es necesario disminuir la temperatura para
obtener la mejor separación con las columnas capilares normales. (Science Unfiltered, 2017)
Instrucciones o consideraciones previas
• Registrar y analizar los datos de las mediciones cromatográficas conforme a los artículos científicos
proporcionados por el docente.
• Definir orden de elución de los compuestos.
• Describir el tipo de fase estacionaria utilizada y característica equivalentes.
• Elaborar el informe correspondiente.
Reactivos de laboratorio (se debe colocar los reactivos utilizados según el artículo de la práctica)
1. Benceno
2. Butanol
Materiales de laboratorio
1. Columna Capilar de tipo Zebron ZB-5ms (30 m x 0.25 mm x 0.50 um)
Equipos de laboratorio
1. Cromatógrafo de gases
− Detector FID, Gas de arrastre Helio, Inyector split
Actividades desarrolladas / Técnica operatoria o procedimiento

✓ Preparar una solución de patrón benceno y butanol (solución mezcla) del orden de 50 ppm de concentración.
✓ Encender el sistema cromatográfico y abrir el paso del gas de arrastre.
✓ Revisar la literatura para definir las condiciones de temperatura de ebullición de los compuestos a analizar,
peso molecular, polaridad. Así también características de la columna cromatográfica.
✓ Colocar en el software las condiciones básicas del método analítico
• Temperatura del inyector: 250°C
• Temperatura del detector: 250°C
• Flujo de gas de arrastre: 55 cm/seg
• Volumen de inyección: 1 uL
• Inyección Split 50:1
✓ Inyectar en el sistema cromatográfico 1 uL de la solución patrón condiciones de temperatura de columna.
✓ Registrar los tiempos de retención de los compuestos.

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Resultados obtenidos

TABLA DE DATOS

Compuesto Condiciones de temperatura ensayadas

Ensayo 1 Temperatura isotérmica a 30ºC
Ensayo 2 Temp. Inicial 30ºC - Temp. final 50ºC at 10ºC/min
Ensayo 3 Temp. Inicial 30ºC - Temp. final 70ºC at 20ºC/min
Ensayo 4 Temp. Inicial 30ºC - Temp. final 90ºC at 30ºC/min

Tiempo de retención (min)

Compuesto
Ensayo 1 Ensayo 2 Ensayo 3 Ensayo 4
Benceno 3.74 min 2.60 min 2.18 min 2.60 min
Butanol 3.92 min 2.60 min 2.16 min 2.30 min

Características de la Fase Estacionaria:

Zebron ZB-5MSi

(Fase 5% -fenilo 95% -dimetilpolisiloxano)

• Dimensiones: columna capilar GC 30m x 0.25mm x 0.25µm.
• Límites de temperatura de -60 a 360/370
• Altamente inerte: forma de pico mejorada para compuestos ácidos / básicos
• Los niveles de bajo sangrado certificados por MS proporcionan la máxima sensibilidad
• La unión ESC da como resultado estabilidad de fase y límites de alta temperatura.

Discusión de resultados
En el cromatograma se ve la separación de los dos compuestos (benceno y butanol) que se da a medida que
aumenta la temperatura; según los resultados obtenidos en el programa del horno (ensayo 1) fue isotérmica
siendo la temperatura inicial a 30ºC en la que se puede observar que el benceno tiene mayor presencia en la
fase móvil y esta eluye primero que el butanol, debido a que el benceno está más próximo del punto de
ebullición que el butanol. Luego, secuencialmente, la rampa de temperatura se incrementó a 10ºC/min del
(ensayo 2, 3 y 4) hasta alcanzar una rampa de 30ºC/min, según las temperaturas incrementadas y el tiempo
retención en el ensayo 2 los dos compuestos comenzaron a coeluirse a una temperatura de 50ºC; en el ensayo
3 los compuestos comenzaron a separarse a una temperatura de 70ºC y por último en el ensayo 4 los dos
compuestos se separaron a 90ºC.

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En los resultados del tiempo de retención se puede observar que en el ensayo 1 el butanol tiene un tiempo de
retención más retino (4.32min) y el benceno un tiempo de retención menos retenido (4.12 min); en el ensayo 2
el benceno y el butanol empiezan a coeluirse en un tiempo de retención de (2.60 min); en el ensayo 3 el benceno
tiene un tiempo de retención más retenido (2.18 min) y el butanol un tiempo de retención menos retenido (2.16
min) y en el ensayo 4 el benceno tiene tiempo de retención mas retenido (2.60 min) y el butanol tiene un tiempo
de retención menos retenido (2.30 min).
Conclusiones

Mediante la práctica se logró distinguir los componentes de la cromatografía de gas (Gas portador; Sistema de
inyección; columna cromatográfica; Sistema de detección y Registro) y la función de cada uno de ellos.
Se determino que uno de los parámetros que influyen en la eficiencia de la técnica de cromatografía de gases,
demostrando que se requieren de varios ensayos controlando esta variable, es la temperatura, que me define el
comportamiento de los resultados cromatográficos, la cual se deben tener en cuenta dos factores: el punto de
ebullición de un compuesto y su capacidad para interactuar con la fase estacionaria; estos dos factores me
determina la presión de vapor del analito que le dan la capacidad de manipular el orden de elución de una
corrida cromatográfica al analista de GC.
Recomendaciones
• Leer detenidamente lo que me indica el art.
• El gas portador no debe reaccionar con la muestra, la fase estacionaria ni las superficies del instrumento
• Los dispositivos para inyección deben permitir la introducción instantánea de la muestra en la columna
cromatográfica.

Bibliografía

Olguín Pérez, L., & Rodríguez Magadán , H. (8 de Junio de 2004). CROMATOGRAFÍA DE GASES. Obtenido de
http://www.ibt.unam.mx/computo/pdfs/met/cromatografia_de_gases.pdf
Abelló Linde S.A. (s.f.). Cromatografía de gases. Barcelona: HiQ.
Ozores Belmonte, M. I. (s.f.). Laboratorio de Técnicas Instrumentales (LTI). Obtenido de Cromatografía de gases:
http://laboratoriotecnicasinstrumentales.es/analisis-qumicos/cromatografa-de-
gases#:~:text=Por%20esta%20raz%C3%B3n%2C%20la%20cromatograf%C3%ADa,temperaturas%20de%20h
asta%20350%2D400%C2%BAC.
Science Unfiltered. (29 de Septiembre de 2017). ¿Cómo afecta la temperatura el tiempo de retención de un
compuesto? Obtenido de https://phenomenex.blog/2017/09/29/como-afecta-la-temperatura-el-tiempo-de-
retencion-de-un-
compuesto/#:~:text=Este%20equilibrio%20tiene%20un%20impacto,se%20transferir%C3%A1%20a%20la%20
columna.