Proteínas Recombinantes
Proteínas Recombinantes
Proteínas Recombinantes
PROTEÍNAS RECOMBINANTES
En ingeniería genética o tecnología del ADN recombinante, se utilizan estas enzimas para
cortar y aislar un gen determinado -que tiene información para fabricar una proteína
particular- e introducirlo en las células de un organismo distinto del inicial. En consecuencia,
este organismo tendrá ADN recombinante a partir del cual fabricará una nueva proteína. A
la proteína producida a partir de ADN recombinante se la denomina proteína recombinante
(ver El Cuaderno N° 4, Nº 30 y Nº 34).
número cada 20 minutos. De esta forma se pueden obtener en poco tiempo muchas copias
del gen humano inserto en el ADN bacteriano, y producir grandes cantidades de proteínas
recombinantes.
A escala industrial, la producción de proteínas recombinantes involucra las siguientes
etapas:
• Fermentación: las bacterias son cultivadas en tanques sellados (fermentadores) que
contienen un medio de cultivo nutritivo.
• Extracción: las células son centrifugadas para recuperar las proteínas de su interior.
• Purificación: se separa la proteína recombinante de las otras proteínas bacterianas.
• Formulación: la proteína recombinante es modificada para conseguir una forma estable
y estéril que puede administrarse terapéuticamente.
Cada una de las fases de la elaboración implica un manejo muy cuidadoso de los materiales
y un estricto control de calidad para optimizar la extracción, la pureza, la actividad y la
estabilidad del fármaco. Dependiendo del producto y del tipo de célula utilizada, la
producción de proteínas recombinantes puede ser un proceso simple o más complejo.
Aunque la complejidad del proceso aumentaría el costo final del producto, el valor nunca
sobrepasará al gasto de aislar el compuesto desde su fuente original (por ejemplo,
obtención de insulina a partir de páncreas de porcinos o bovinos) para llegar a cantidades
medicinales.
Interferón e interleuquinas
Interferón alfa (IFN alfa) E. coli Hepatitis B y C, distintos tipos de
cáncer
Interferón beta (IFN beta) Cultivo de células de mamífero Esclerosis múltiple
Interferón gamma (IFN gamma E. coli Enfermedad granulomatosa
1b) crónica
Interleuquina 2 (IL-2) E. coli Cáncer de riñón
Vacunas
Anti-hepatitis B Levaduras Inmunización contra la hepatitis B
Anti-hepatitis A Levaduras Inmunización contra la hepatitis A
Anti-enfermedad de Lyme E. coli Inmunización contra la
enfermedad de Lyme
Anticuerpos monoclonales
recombinantes
Anti-IgE (recombinante) Cultivo de células de mamífero Asma
Anti-TNF (recombinante) Cultivo de células de mamífero Arthritis reumatoidea
Anti-IL2 Cultivo de células de mamífero Prevención del rechazo agudo de
transplante de riñón
Otros productos
recombinantes
Proteína morfogénica del hueso- Cultivo de células de mamífero Fractura de tibia
2
Galactosidasa Cultivo de células de mamífero Enfermedad de Fabry (deficiencia
en alfa-galactosidasa)
Iaronidasa Cultivo de células de mamífero Mucopolisacaridosis
Proteína C Cultivo de células de mamífero Sepsis severa
Beta-glucocerebrosidasa E. coli Enfermedad de Gaucher
DNAsa Cultivo de células de mamífero Fibrosis quística
Fuente: Nature Biotechnology, 2003, vol. 21 Nº8
Estructura de la insulina
Preproinsulina
Fuente:
http://escuela.med.puc.cl/paginas/publicaciones/te
masmedicinainterna/insulinas.html
La insulina recombinante
La insulina es el primer caso de proteína producida por ingeniería genética aprobada para
uso en humanos, desde 1982. En la actualidad, varios laboratorios farmacéuticos producen
insulina humana, tanto a partir de bacterias como de levaduras, y sin ningún riesgo para la
salud.
En la siguiente figura, se muestra un esquema general de la obtención de insulina a partir
de páncreas de vacas o cerdos, y mediante ingeniería genética (ver Cuadernos N° 4 y Nº
34) .
Si bien estos son los pasos a seguir para la obtención de insulina recombinante, si se
inserta en el plásmido bacteriano el gen entero de la insulina, se obtendría como resultado
la preproinsulina. Para evitar estas dificultades se sintetizan químicamente las secuencia
de ADN correspondiente a las cadenas polipeptídicas A y B que se insertan separadamente
en un gen bacteriano. Los plásmidos recombinantes se introducen en bacterias E. coli,
donde se multiplican. Una vez purificadas las dos cadenas, se unen mediante una reacción
que forma puentes disulfuro (de azufre) y se obtiene insulina humana pura. El producto
final, la insulina humana biosintética, es idéntica en todos los aspectos a la insulina
purificada del páncreas humano.
ACTIVIDADES
OBJETIVOS:
• Rever los conceptos introducidos en la sección teórica.
• Conocer cómo se aplican los conocimientos de biotecnología a la resolución de
problemas de salud.
DESTINATARIOS:
CONSIDERACIONES METODOLÓGICAS:
Actividad 1
Entre los fármacos obtenidos a partir de proteínas recombinantes se estudió en mayor
detalle la insulina recombinante. Por lo tanto, se propone que los alumnos investiguen
sobre la enfermedad llamada Diabetes mellitus. Algunos de los aspectos a investigar podría
ser:
- tipos de diabetes,
- causas de la enfermedad,
- síntomas de la enfermedad,
- alternativas para el tratamiento,
- en qué casos es necesario suministrar insulina,
- cómo actúa la insulina en las personas insulino-dependientes,
- ventajas del empleo de insulina recombinante desde el punto de vista del paciente y
de la industria.
Actividad 2
Determinar si cada una de las siguientes afirmaciones son verdaderas o falsas.
Nota para el docente: al finalizar el ejercicio se sugiere hacer una puesta en común y
pedir a los alumnos que justifiquen cada una de las respuestas, lo que permite un repaso
del tema, y detectar cuáles son los aspectos que requieren profundizar la explicación.
a) La ingeniería genética se denomina también "Tecnología de ADN recombinante”.
b) La ingeniería genética incluye técnicas que permiten la obtención de un gran
número de copias de genes de interés.
c) Las endonucleasas de restricción son proteínas.
d) Las endonucleasas son enzimas exclusivas de los virus.
e) Las ligasas se utilizan para cortar el ADN en regiones específicas.
f) Las proteínas recombinantes se obtienen al combinar proteínas de organismos
diferentes.
g) La insulina es una proteína.
h) La insulina es una hormona.
i) La existencia de un código genético común en todos los seres vivos posibilita la
síntesis de insulina humana en bacterias.
j) La insulina recombinante se puede producir en levaduras.
k) La insulina recombinante se produce a partir del gen de la insulina de cerdo
introducido en bacterias.
l) La insulina recombinante se produce a partir del gen de la insulina humana
introducido en bacterias.
m) La ventaja de producir proteínas recombinantes consiste en que se producen en
mayor cantidad y a menor costo que si se extrajeran directamente desde su fuente
de origen.
n) Las proteínas recombinantes para uso terapéutico aún no están aprobadas para
uso en humanos en la Argentina.
Respuestas a la Actividad 1:
a. V
b. V
c. V
d. F
e. F
f. F
g. V (Nota para el docente: esta afirmación destaca la estructura química de la
insulina)
h. V (Nota para el docente: esta afirmación destaca la función de la insulina).
i. V (Nota para el docente: este es un punto esencial para comprender la viabilidad de
las proteínas recombinantes, y se puede relacionar con temas de evolución, y las
teorías que sostienen un origen común de los seres vivos)
j. V
k. F
l. V
m. V
n. F
Actividad 3
Se propone completar los espacios en blanco del texto utilizando los siguientes términos:
Insulina recombinante humana. Diabéticos. Escherichia coli. Plásmido
bacteriano. Insulina humana. Insulina. ADN. ADN humano. Cerdos
Nota para el docente: al finalizar el ejercicio se sugiere hacer una puesta en común y
pedir a los alumnos que justifiquen cada una de las respuestas, lo que permite un repaso
detallado del tema, y detectar si los temas fueron comprendidos o cuáles son los aspectos
que requieren más explicación.
En 1972 se presentó el primer clonaje exitoso de un gen. Para realizarlo, los científicos
utilizaron tres componentes: la bacteria ______________, un plásmido, que es un
fragmento de ADN circular ubicado dentro de la bacteria, y el _____de un humano.
¿Qué realizaron con esto? Los científicos lograron tomar un fragmento del
______________ e insertarlo dentro del ___________________. Luego, introdujeron
esta construcción dentro de E. coli para que ésta, al multiplicar su material genético,
produjera millones de veces la copia del gen insertado.
Esto fue la gran revolución de la biotecnología en los años ochentas. Años más tarde, se
aplicó esta nueva técnica al gen de la ___________________, obteniendo la proteína
que ese gen codificaba. Y no sólo los científicos estaban contentos con su descubrimiento.
Los más favorecidos fueron los ____________, porque a ellos les falta ___________ y
hasta ese momento tenían que aplicarse la insulina que se extraía del páncreas de los
"El Cuaderno de PorquéBiotecnología" es una herramienta didáctica creada y
desarrollada por el equipo pedagógico del Programa Educativo PorquéBiotecnología. Su
reproducción está autorizada bajo la condición de que se aclare la autoría y propiedad
de este recurso pedagógico por parte del Programa Educativo PorquéBiotecnología.
EDICIÓN Nº 49 – 2004
Respuesta a la Actividad 2
En 1972 se presentó el primer clonaje exitoso de un gen. Para realizarlo, los científicos
utilizaron tres componentes: la bacteria Escherichia coli, un plásmido, que es un
fragmento de ADN circular ubicado dentro de la bacteria, y el ADN de un humano.
¿Qué realizaron con esto? Los científicos lograron tomar un fragmento del ADN humano,
e insertarlo dentro del plásmido bacteriano. Luego, introdujeron esta construcción
dentro de E. coli para que ésta, al multiplicar su material genético, produjera millones de
veces la copia del gen insertado.
Esto fue la gran revolución de la biotecnología en los años ochentas. Años más tarde, se
aplicó esta nueva técnica al gen de la insulina humana, obteniendo la proteína que ese
gen codificaba. Y no sólo los científicos estaban contentos con su descubrimiento. Los más
favorecidos fueron los diabéticos, porque a ellos les falta insulina y hasta ese momento
tenían que aplicarse la insulina que se extraía del páncreas de los cerdos. EL problema era
que un porcentaje de personas era sensible a este medicamento y presentaban reacciones
de rechazo. La insulina recombinante humana no presenta ese problema y la calidad
de vida mejoró para esos enfermos.
comprensión. Por ejemplo, antes de preparar los modelos de papel se puede analizar
con los alumnos cómo diseñarían una enzima de restricción o una enzima ligasa, de
acuerdo con la función que tiene cada una de ellas, o qué diferencia resaltarían entre
una célula bacteriana y una célula humana, o qué estructura debería tener la insulina.
Desarrollo de la actividad:
Los alumnos deberán representar mediante los materiales disponibles las siguientes
etapas del proceso de producción de insulina recombinante. Nota para el docente:
el docente puede ir leyendo las etapas que los alumnos irán representando, o solicitar
que los alumnos mismos sugieran la secuencia de hechos que integran el proceso de
producción de la insulina recombinante.
1. Ubicar el plásmido en la célula que corresponde.
2. Ubicar el cromosoma humano con el gen de la insulina en la célula correspondiente.
3. Extraer el plásmido de la bacteria y cortar con la enzima de restricción.
4. Cortar con la misma enzima el gen de la insulina del cromosoma humano.
5. Formar el ADN recombinante ligando el gen de la insulina humana con el plásmido
abierto.
6. Insertar el plásmido que contiene el gen de la insulina en una nueva bacteria
(proceso de transformación).
7. La bacteria transformada se multiplica y se obtienen muchas bacterias, cada una
con un plásmido con ADN recombinante.
8. Cada bacteria produce varias moléculas de ADN a partir del gen humano.
9. Se extrae la insulina de las bacterias transformadas.
10. Se purifica la insulina y se envasa para su comercialización y administración a
personas diabéticas.
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