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    PRACTICA 15. Lipemia Pre y Posprandial PDF

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    El documento describe un experimento para determinar los niveles de triglicéridos en suero antes y después de la ingesta de una dieta alta en grasas. Se extrajeron muestras de sangre de participantes en ayunas y a las 4 y 7 horas posteriores a la ingesta. Se utilizó un método enzimático para medir los triglicéridos en las muestras. Los resultados mostraron un aumento en los niveles de triglicéridos en las muestras posteriores a la comida, lo que refleja la digestión y absorción de

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    Tercera Unidad Metabolismo de los Lípidos

    - DETERMINACIÓN DE TRIGLICERIDOS PRE Y POSPRANDIAL EN SUERO --


    INTRODUCCION:
    Los lípidos de la dieta son principalmente triglicéridos, los cuales son absorbidos junto a colesterol y fosfolípidos. En el enterocito
    los triglicéridos, colesterol y fosfolípidos forman una estructura compleja denominada quilomicrón la cual se caracteriza por ser
    grande, menos densa y presentar la apoproteína B48; constituyendo la primera lipoproteína que servirá para el transporte lipídico
    en el organismo.

    Los ácidos grasos de cadena más larga pasan al duodeno; es allí que, por el colédoco llega la bilis llevando las sales biliares y
    por el conducto del páncreas el jugo pancreático con la lipasa y colipasa; que son solubles en agua mientras que los triglicéridos
    son insolubles determinando que la digestión se lleve a cabo en la interfase agua-lípido. La velocidad de la digestión de los
    triglicéridos depende del área de superficie de la interfase, la cual es grandemente incrementada por el movimiento peristáltico
    del intestino combinado con la acción emulsificante de los ácidos biliares; los cuales son sintetizados por el hígado y secretados
    como conjugados de glicina y taurina, definiéndose como moléculas tipo detergente, con propiedad tensoactiva, que disminuyen
    la tensión superficial y carácter anfipático que permite la formación de micelas con las cabezas polares en la superficie y las colas
    no polares en el interior.

    Por el conducto torácico los quilomicrones llegan a la circulación general. El pico máximo de lipemia postprandial se observa entre
    las 4 y 6 horas de la ingesta, y al cabo de 9 a 10 horas retorna a los valores basales de lípidos, especialmente los triglicéridos.

    Los niveles de lípidos postprandiales, dependen de la cantidad de lípidos consumidos en la dieta, de la digestión y absorción, de
    los niveles basales sanguíneos, de la acción de la lipasa lipoproteica en los tejidos extrahepáticos. La lipasa lipoproteica actúa
    sobre los triglicéridos de los quilomicrones, liberando ácidos grasos que son captados por los tejidos extrahepáticos. Los
    quilomicrones son convertidos en remanentes de quilomicrones y captados por el hígado. Se ha considerado al incremento de la
    lipemia postprandial como un factor riesgo de aterogénesis

    FUNDAMENTACIÓN DE LA TECNICA:
    La técnica empleada en la determinación de triglicéridos en sangre, es una técnica enzimática basada en la siguiente reacción:
    Lipoprotein lipasa Glicerol kinasa
    Triglicéridos glicerol + ácidos grasos; glicerol + ATP glicerol-1-P + ADP
    Glicerolfosfato POD
    Glicerol-1-P + O2 oxidasa H2O2 + dihidroxiacetonafosfato; 2 H2O2 + 4-AF + clorofenol quinonimina roja

    FINALIDAD:
    ▪ Demostrar las variaciones de la concentración de triglicéridos en suero después de la ingesta de alimentos de alto contenido
    de grasas.

    MATERIAL, EQUIPO y REACTIVOS:


    ▪ Material de vidrio: tubos de ensayo, pipetas milimétricas.
    ▪ Equipo de extracción de muestra: guantes, alcohol, algodón, agujas N° 20, jeringas x 5 cc.
    ▪ Equipos: centrífuga, micropipetas x 10 ul, baño maría, espectrofotómetro.
    ▪ Reactivos:
    • Reactivo A: Solución conteniendo lipoprotein lipasa, glicerol kinasa, glicerolfosfato oxidasa, peroxidasa,
    adenosisnatrifosfato, aminofenazona, clorofenol y buffer Good pH: 6,8.
    • Estándar: solución de glicerol 2g/l. (200 mg/dl)

    PROCEDIMIENTO:
    1) Extracción de muestras: previa limpieza de la zona con alcohol, se extraerá 5 cc de sangre de la flexura del codo con jeringa
    hipodérmica de 5 cc y aguja N° 20 en tres momentos:
    ▪ La primera extracción se realizará con la persona en ayuno de al menos 8 horas.
    ▪ La segunda muestra se obtendrá 04 horas después de la ingesta alimenticia, rica en grasas conteniendo un vaso de leche,
    un huevo, 2 panes y 10 aceitunas.
    ▪ La tercera extracción se realizará 07 horas posingesta de la dieta.
    2) Una vez obtenidas las muestras, colocarlas en tubos de ensayo y dejarlas reposar durante 10 minutos.
    3) Terminado el reposo, contrapesar los tubos conteniendo las muestras y centrifugarlos a 3000 RPM durante 10 minutos.
    4) Finalizado el centrifugado separar el suero para trabajar la determinación.

    1
    Tercera Unidad Metabolismo de los Lípidos

    5) Para la determinación de triglicéridos pre y posprandial: En 3 tubos de ensayo marcados con B (Blanco), S (estándar) y D
    (Desconocido), colocar:
    TUBOS DE ENSAYO
    COMPONENTES
    B S D
    Muestra (suero / ul) -- -- 10
    Estándar (ul) -- 10 --
    Reactivo A (ml) 1.0 1.0 1.0
    Mezclar e incubar por 5 minutos a 37 °C o 20 minutos a temperatura ambiente (18 a
    25 °C). Enfriar y leer en espectrofotómetro a 505 nm llevando el aparato a cero con
    agua destilada.
    6) El Desconocido está constituido por las 3 muestras a determinar: basal, a las 4 y 7 horas posingesta de la dieta rica en lípidos.

    RESULTADOS:
    1) Luego del incubado se observa lo siguiente:

    B S D

    2) Lecturas del espectrofotómetro: de las muestras pre y pos ingesta de la dieta rica en lípidos.

    ACTIVIDADES A DESARROLLAR POR EL ALUMNO:


    1) Cálculos de los resultados:
    ▪ Cálculo del factor:
    𝟐 𝐠/𝐥
    𝐅=
    𝐒

    ▪ Cálculo de la concentración de Triglicéridos. (de cada una de las muestras).


    Triglicéridos (g/l) = D x F

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    Tercera Unidad Metabolismo de los Lípidos
    Conversión: Triglicéridos (g/l) = 0,01 x Triglicéridos (mg/dl)

    2) Interpretación de los resultados.


    ▪ Valores Referenciales: [ATP III, NCEP]
    • Deseable: < 1,50 g/l
    • Límite alto de la normalidad: 1,50 – 1,99 g/l
    • Elevado: 2,00 – 4,99 g/l (hipertrigliceridemia moderada)
    • Muy elevado: ≥ 5,00 g/l (hipertrigliceridemia severa)

    3) Explique bioquímicamente lo encontrado.

    PREGUNTAS DE APLICACIÓN:
    1) ¿Cuál fueron los objetivos de la práctica?
    2) Identifique las variables que intervinieron en el experimento realizado en la práctica.
    3) Identifique los componentes del sistema enzimático empleado en la práctica y señale sus principales características.
    4) ¿Qué tipo de la muestra se empleó para la realización de las pruebas?
    5) Explique el mecanismo de acción de la lipasa lipoproteica
    6) ¿Cuál es la importancia médica de la lipemia posprandial
    7) ¿Cuáles son los factores que pueden intervenir en la elevación de los niveles séricos de lípidos luego de la ingesta de la
    dieta?
    8) Esquematice la estructura de los quilomicrones es indique sus componentes.
    9) Elabore un esquema y explique el destino de los productos de la acción de la lipasa lipoproteica sobre los triglicéridos.

    REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS.
    1) Murray R. Harper Bioquímica Ilustrada. 31° edición, México 2019.
    2) Nelson D, Cox M. Lehninger. Principios de Bioquímica. 6ta Edición, Editorial Omega, España, 2011

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