PRACTICA 7 Recuento en Placa Petrifilm 1

UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR
FACULTAD DE INGENIERÍA QUÍMICA
CARRERA DE INGENIERÍA QUÍMICA
LABORATORIO DE BIOTECNOLOGÍA
PRÁCTICA 7:
RECUENTOS EN PLACA
INTEGRANTES
 Dayana Borja
 Ingrid Carrera
 Jazmín Guadamud
 Nicole Plaza M
 Tatiana Pila
 Fernanda Ramos
PARALELO 1
DOCENTE: Dr. Pablo Araujo PhD.
AYUDANTE DE CATEDRA: Francisco González Valerio
QUITO-ECUADOR
2019 – 2019
RESUMEN
Aplicación de la técnica de dilución seriada, determinación de

la concentración de diluciones y observación de las colonias
formadas. Para lo cual de una solución madre que contenía el
microorganismo se preparó cuatro diluciones de menor
concentración cada una, se tomó una alícuota de cada solución
y se colocó en medios de cultivos rotulados previamente y
específicos para el microorganismo, después se llevó a la
incubadora por un tiempo apto para la formación de colonias.
Se observó la formación de colonias con presencia de burbujas
de gas. Se concluye que el medio de cultivo de tipo Petrifilm es
un medio adecuado para la duplicación celular ya que se pudo
observar una gran formación de colonias con presencia de gas
en los diferentes cultivos haciendo el conteo imposible.
PALABRAS CLAVES:
DILUCIÓN_SERIADA/ COLONIAS_FORMADAS/
MEDIOS_DE_CULTIVO/ INCUBADORA/ PETRIFILM
LABORATORIO DE BIOTECNOLOGÍA INDUSTRIAL
PRÁCTICA N° 7
RECUENTOS EN PLACA
1. OBJETIVOS
1.1. Aplicar la técnica de dilución seriada.
1.2. Determinación de la concentración de las diluciones.
1.3. Observación de las colonias formadas.
2. TEORÍA
2.1. Dilución seriada.
“Una dilución en serie es la reducción progresiva, paso a paso, de la concentración de una

sustancia en disolución.1 Por lo general, el factor de dilución en cada paso es constante, lo
que da como resultado una progresión geométrica de la concentración, en forma logarítmica.
Las diluciones en serie se utilizan para crear disoluciones muy diluidas con precisión, así
como disoluciones para experimentos en los que se pretenda estudiar curvas de
concentración con una escala logarítmica.” (López T & Torres C, 2006)
“En muchos casos se necesita preparar disoluciones con concentraciones extremadamente

bajas de un soluto, hasta un punto que es difícil o imposible en la práctica medir la cantidad
necesaria de producto sólido o el volumen de solución madre. En esas situaciones es
necesario preparar una solución de mayor concentración (solución de stock o solución
madre) y hacer diluciones sucesivas a partir de ésta hasta alcanzar la concentración
deseada.” (García J, 2004)
2.2. Siembras en placas Petrifilm
Las Placas Petrifilm para recuento de aerobios son un medio de cultivo listo para ser
empleado, que contiene nutrientes del Agar Standard Methods, un agente gelificante soluble
en agua fría, y un tinte indicador de color rojo que facilita el recuento de las colonias. Las
Placas Petrifilm AC se utilizan para el recuento de la población total existente de bacterias
aerobias en productos, superficies, etc. [ CITATION Olg06 \l 12298 ]
Son medios de cultivo en formato listo para sembrar la muestra, semejantes a las
metodologías tradicionales para llevar a cabo Pruebas Microbiológicas Rápidas. Una
preparación del medio y siembra de la muestra consistente y fiable resultan claves para
obtener la calidad de resultados necesaria para la liberación del producto y asegurar GMPs. [
CITATION Bla13 \l 12298 ]
 Fáciles de usar
 Producción certificada
 Métodos validados
 Ahorro de tiempo
 Mayor productividad y fiabilidad
 Menores costes de operación
 Reducen 40% el trabajo de Laboratorio ya que se elimina el tiempo de limpieza de
materiales y preparación de medios de cultivo.
 Ahorro de costos en servicios como energía y agua (Reducen uso de autoclaves) ; en
detergentes, desinfectantes y en almacenamiento.
 Ahorro en 3.7 horas diarias del tiempo en las personas del laboratorio.
 Estos ahorros en mano de obra permiten atender otras prioridades que puede
contribuir a los esfuerzos del área de aseguramiento de calidad. [ CITATION Olg06 \l
12298 ]
2.3. Técnicas de recuento
 El recuento en placa por siembra en profundidad:

Consiste en añadir medio de cultivo fundido y enfriado a 50ºC sobre placa de Petri que
contiene una cantidad determinada de la muestra diluida. Se tapa la placa y se rota para
mezclar la muestra en el agar. Cuando el agar solidifica se incuban las placas. Las colonias
se desarrollan tanto dentro del agar como en la superficie. Es un método generalmente
utilizado para el recuento de microorganismos anaerobios facultativos o microaerofilos.
[ CITATION Jul07 \l 12298 ]
 El recuento en placa por siembra en superficie:
Consiste en la siembra de un volumen conocido de la dilución de la muestra sobre la
superficie de un medio de cultivo en placa Petri. En este método todas las colonias crecen
sobre la superficie del medio. Generalmente se utiliza esta técnica para el recuento de
bacterias aerobias. [ CITATION Jul07 \l 12298 ]
 El recuento microscópico
Es una técnica común, rápida y poco costosa que utiliza un equipamiento fácilmente
disponible en un laboratorio de microbiología. Para estos recuentos se utilizan generalmente
cámaras de recuentos, aunque también pueden realizarse a partir de muestras filtradas en
membranas y transparentadas o teñidas con colorantes fluorescentes. La mayor dificultad del
recuento en cámara es obtener reproducibilidad en el llenado de la cámara con líquido. Otra
dificultad es la adsorción de las células en las superficies del vidrio, incluyendo pipetas. Esta
adsorción es crítica en el proceso de dilución de la muestra y se minimiza al realizar las
diluciones en medios de alta fuerza iónica (solución fisiológica o medios mínimos sin fuente
de carbono). [ CITATION Jul07 \l 12298 ]
 Los recuentos microscópicos directos
Permiten determinar el número de células microbianas, por observación directa en el
microscopio. Presentan una gran ventaja ya que la muestra puede utilizarse tal cual, o puede
prepararse una dilución tal como se realiza para otros métodos de recuento.
El objetivo de este estudio es conocer técnicas variadas de recuento de células de
microorganismos, al igual que medir la efectividad de estos métodos de conteo de
microorganismos.[ CITATION Jul07 \l 12298 ]
2.4. Recuento de colonias en petrifilm. (UFC)
Después de la incubación por el período especificado, seleccionar las placas que, de ser
posible, tengan menos de 250 colonias. Contar las colonias, si es necesario utilizando el
equipo contador de colonias. Examinar las placas bajo una luz tenue.
Es importante que las colonias diminutas sean incluidas en el recuento sin confundirlas con
partículas insolubles o precipitado del Microorganismos aerobios mesófilos.
Se examinan los objetos dudosos detenidamente, utilizando lentes de aumento si es

necesario, para poder distinguir las colonias de otros materiales.
Las “colonias diseminadas” o dispuestas en rosario se consideran como una colonia.
Si se espera el crecimiento de colonias invasivas, se examinan las placas a las 24 h o 48 h y

se marcan las colonias visibles.
Si menos un cuarto (1/4) de la placa está cubierto por un crecimiento difuso o diseminado,
se cuentan las colonias en la parte de la placa no afectada y se calcula el número
correspondiente para la placa, deduciéndolo por extrapolación del número teórico que
debería corresponder a la placa entera. Si hay sobrecrecimiento en un área superior a un
cuarto de la placa, se rechaza este recuento. [ CITATION Min14 \l 12298 ]
3. PARTE EXPERIMENTAL
3.1. Material y Equipos
 Lámpara de alcohol
 Pipeta Semiautomática.
 Placas petrifilm
 Jeringuillas de insulina
 Tubos de Ensayo.
 Gradilla
3.2. Sustancias y reactivos
 Medios de cultivo
 Agua destilada
 Sustancia a diluir.
3.3. Procedimiento
3.3.1. Se preparan 5 placas petrifilm.
3.3.2. Rotular las placas petrifilm.
3.3.3. Preparar el área aséptica
3.3.4. Colocar en 4 tubos de ensayo 9 ml de agua peptonada.
3.3.5. Colocar en el primer tubo de ensayo 1 ml de la muestra madre y homogenizar.
3.3.6. Tomar 1 ml de la primera dilución y colocarlos en el segundo tubo de ensayo.
3.3.7. Repetir el procedimiento hasta el cuarto tubo.
3.3.8. Sembrar cada una de las diluciones en las placas petrifilm
3.3.9. Proceder a incubar por 24 horas y observar el crecimiento.
3.3.10. Realizar el recuento de colonias.
4. DATOS
4.1 Datos Experimentales.
Tabla 4.1-1. Observación de la dilución.

Dilución Observación.
10-1 Incontables
10-2 Incontables
10-3 46 UFC
10-4 Incontables
-5
10 Incontables
Fuente: (Lab. Biotecnología Industrial, 2019, FIQ-UCE)
Tabla 4.1-2. Datos iniciales.
Variable Valor
Ca0 10-6
Volumen Agua 9 mL
4.2. Cálculo de la concentración obtenida.

 Cálculo modelo para dilución 3
Cax=Ca0∗f
x=número de dilucion .
Ca=Concentracion de la especie a
f =factor de dilucion .
10−6∗1
Ca∗3=
10
Ca=3,33∗10−8
4.3. Cálculo de conteo de colonias
Tabal 4.1-3. Colonias observadas

Variable Valor
Colonias observadas 46
Volumen de muestra utilizado 1 mL
CO∗f
¿ UFC=
v
Co=colonias observadas
f =factor de dilucion .
V =volumen de muestra .
1
46∗
10
¿ UFC=
1
¿ UFC=4,6
5. RESULTADOS
Tabla 5-1. Observaciones de crecimiento microbiano.
Crecimiento
Observación
microbiano
Al realizar la primera dilución (1:10) de E. coli la
concentración es aún muy elevada.
Dilución 1 Una concentración muy elevada de E. coli hará que todo el
área de crecimiento únicamente tome un color azul verdoso y
las colonias no se puedan diferenciar.
La concentración es alta aún, pero las colonias se pueden
diferenciar un poco, generalmente las colonias son mayores a
Dilución 2 150 y se debe contar de un cuadrado representativo y
multiplicarlo por 20 para obtener el recuento estimado por
placa.
Las colonias ya son contables, sin embargo, no se debe
Dilución 3 contar las colonias de la zona porosa, porque estas están
exentas de la influencia selectiva del medio.
En la última dilución las colonias son totalmente contables,
en ocasiones están difuminadas, pero después de la
Dilución 4
inoculación se puede contar sin ningún problema; en este
caso el recuento es fácil y están entre un valor de 50 – 75.
Fuente: 3M Microbiology. (2003). Recuperado de: www.3M.com/microbiology
Tabla 5-2. Resultados

Dilución Vol. agua Ca0 Ca
-6
1 9 mL 10 1*10-7
-6
2 9 mL 10 5*10-8
3 9 mL 10-6 3,33*10-8
4 9 mL 10-6 2,5*10-8
-6
5 9 mL 10 2*10-8
6. DISCUSIÓN
El método cuantitativo empleado en la práctica fue válido ya que permitió observar e
identificar la cantidad de colonias formadas en función de la concentración de la disolución
sembrada en placas Petrifilm. Se logró cuantificar de forma óptima cada UFC de cada una
de las placas donde se efectuó la siembra, obteniendo así un número aceptable de colonias
UFC
formadas, cuyo valor es de 4,6 .Sin embargo la presencia de errores sistemáticos y
ml
aleatorios produjeron contratiempos experimentales, aleatoriamente en la inoculación al
ejercer mucha presión con el espaciador existió la producción de colonias difuminadas
impidiendo un adecuado recuento de las mismas afectando el cálculo de UFC; mientras que
sistemáticamente el tiempo teórico de incubación de las placas es de 2 días pero
experimentalmente al dejar las placas por un periodo de incubación de 3 días ocasionó un
inadecuado crecimiento de los microrganismos, esto debido a condiciones del ambiente
como la humedad. Se recomienda humectar el ambiente de la incubadora con un pequeño
recipiente con agua estéril, para minimizar la pérdida de humedad con el fin de que la
producción de colonias sea adecuada para el recuento de las mismas.
7. CONCLUSIONES
7.1. De acuerdo con la tabla de resultados (Tabla 5-2) se puede observar que la
concentración de cada dilución disminuye a medida que se realiza una dilución seriada,
con lo cual se concluye que el recuento de aerobios y enterobacterias depende del
número de dilución, es decir, a menor dilución hay menos colonias observadas; no fue
posible observar las colonias en todas las placas de petrifilm a excepción de la dilución
número tres sembrada en la placa petrifilm para recuentro de enterobacterias de
concentración de 3,33*10-8 las cuales fueron 46 colonias observadas en la cual las
unidades formadas de colonia de E-coli fueron alrededor de 4,6, con esto se concluye
que el medio fue acto para el crecimiento de las colonias de E-coli; en las placas de
petrifilm para recuentro de aerobios de las diluciones 1 a la 5 las colonias fueron
incontables por la presencia de gas y por la presencia de coliformes con lo cual se
concluye que se las placas fueron incubadas a una temperatura de 44°C. -Jazmín
Guadamud
7.2. Mediante la aplicación de la técnica de dilución seriada se obtuvo diferentes
concentraciones de diluciones, evidenciando un crecimiento microbiano diferente en
cada placa, esto se observa en la tabla 4.1-1, en donde la mayoría de diluciones
presentaron un crecimiento elevado de colonias, las mismas que no son visualizadas
independientemente, es decir incontables, a comparación de la dilución 10-3 que
presentó un crecimiento microbiano disperso permitiendo el conteo de las colonias
formadas, un total de 46 UFC/ml presentes en la placa. Esto nos permite señalar que esta
experimentación el crecimiento microbiano no solo depende de la dilución de la muestra
sino también del medio en el que se sembró como son las placas petrifilm ya que
contienen los nutrientes necesarios para la respectiva producción de colonias, sin
embargo, al ocasionar afectaciones del medio como falta de humedad en la incubación
altero el crecimiento microbiano y por ende dificultó el recuento de colonias. -Fernanda
Ramos
7.3. Se aplicó la técnica de la dilución seriada, la misma que permitió disminuir la
concentración de la muestra E. coli para que las colonias se puedan formar; este método
permitió determinar la cantidad total de bacterias de E. coli que poseen la enzima beta –
glucuronidasa que es la que reconoció nuestro medio de cultivo, el mismo que al ponerse
en contacto con el indicador se produjo un cambio de pH que permitió observar la
formación de colonias y consigo su recuento. –Ingrid Carrera
7.4. Mediante la observación de los datos obtenidos en la tabla 5-2 se pudo concluir que
la dilución seriada es método eficaz y sencillo para disminuir la concentración de
soluciones y que a medida que se diluya más la solución, será menor el número de
colonias formadas en los cultivos, además que mediante la utilización de Petrifilm que es
un medio de cultivo específico para la E-coli se pudo observar un mayor crecimiento de
las colonias a tal punto de hacer imposible su recuento, también se observó la presencia
de burbujas de gas con formas distintas que no permitían distinguir con claridad las
diferentes colonias, pero si se pudo observar como las colonias no tenían una
distribución uniforme a los largo del Petrifilm ya que en algunos casos solo se hallaban
colonias en las orillas de cultivos u en el centro solamente. –Tatiana Pila
7.5. Se observó el crecimiento microbiano de varias siembras realizadas sobre placas
Petrifilm donde se verificó que en aquellas placas que tuvieron mayores concentraciones
el crecimiento fue de gran magnitud, lo que imposibilitó contar de forma adecuada las
colonias formadas, sin embargo en placa con concentración de 10 -3 se observó de mejor
manera el crecimiento y se pudo contabilizar las colonias formadas mismas que fueron
46 como se verifica en la tabla 4.1-3, por otro lado también se dio la formación de gases,
esto ya que se observó la presencia de ciertas burbujas en la placa, los estos resultados
obtenidos pudieron verse afectados debido al tiempo en que la E. coli permaneció en
incubación y a los diferentes factores sometidos, además debido a que en la mayoría de
las placas analizadas se dio un resultado de no contable, no se obtener un correcto
diagrama de crecimiento (ver anexo 2). -Dayana Borja
7.6. La concentración de las diluciones es una función de la cantidad de colonias
formadas, pudiéndose observar una correlación directamente proporcional de la
concentración de la dilución a la cantidad de colonias visibles formadas en la placa
Petrifilm (Ver Tabla 5-2), es decir, que, a mayor número de dilución, la concentración de
la especie será menor, por lo cual se podrá efectuar una mejor contabilización y
visualización de colonias presentes en el cultivo realizado, se infiere, que en la dilución
10-3, se efectuó de manera correcta, ya que se obtuvo un valor de 46 UFC, número que se
encuentra dentro del intervalo óptimo de recuento (colonias totales) en placas Petrifilm
EC es cual es de 15 a 150 UFC, mientras que las diluciones efectuadas respectivamente
después de esta, no se llevaron de forma correcta obteniendo resultados incontables (Ver
Tabla 4.1.-1), no pudiendo cumplir con los valores dentro del intervalo óptimo
permitido, por lo cual se recomienda efectuar de manera correcta las diluciones
efectuadas, llevando a cabo con rigor las medidas de asepsia respectivas. –Nicole Plaza
M
8. CUESTIONARIO.
8.1. ¿Qué permite determinar el estudio cuantitativo de bacterias?
Lo que nos permite la determinación del estudio cuantitativo de bacterias, es el método
de recuento de colonias en placa, este método es muy utilizado cuando se requiere
determinar el tamaño de la población bacteriana, el cual se basa en que cada
microorganismo desarrollará una colonia visible. [ CITATION Lóp06 \l 12298 ]
8.2. Describa como obtendría una dilución de 10-5 de una solución 1/100 de la
muestra a analizar
De la solución 1/100 tomaría 1ml con una micro pipeta y lo trasvasaría a un tubo de
ensayo que contiene 9ml de agua peptonada, obteniendo así una solución de 1/10000, de
esta última tomaría 1ml y de igual manera lo trasvasaría a un tubo de ensayo que
contiene 9ml de agua peptonada, obteniendo así una solución de 1/100000 o una
solución de 10-5.
8.3. ¿Qué es un organismo indicador, y que propiedades debería tener?
Un microorganismo indicador, es un microorganismo que nos permite determinar la
presencia de un agente patógeno, es un indicador de la deficiente higiene y de la posible
contaminación microbiológica existente en un medio. [ CITATION RBi15 \l 12298 ]
8.4. ¿Cómo se define a un coliforme? ¿Cómo se relaciona esta definición con las
pruebas presuntivas, de confirmación y finales?
Las bacterias coliformes, son indicadores de contaminación fecal, son utilizados
principalmente para controlar la calidad del agua. Los métodos convencionales para la
determinación de coliformes se basan en la técnica del NMP, este método requiere la
preparación de diluciones de las muestras de alimentos, de las cuales se toman alícuotas
para sembrar en tubos con medio apropiado (llamada prueba presuntiva), posteriormente
se realizan las pruebas de confirmación, donde por tubidimetría se confirma la presencia
de coliformes, aquí también se realiza la incubación y lectura de colonias, y finalmente
se anotan el número de tubos positivos, y se busca la información necesaria en la tabla
del NMP (pruebas finales) y se procede a informar los resultados como NMP de
Coliformes/ g o ml de alimento analizado. [ CITATION Xim08 \l 12298 ]
8.5. ¿Cómo se diferencia entre coliformes y coliformes fecales en el laboratorio?

A continuación, se describe los procedimientos para la identificación en el laboratorio de
coliformes totales y de coliformes fecales:
a) COLIFORMES TOTALES
 A partir de muestra, en este caso leche, se procede a preparar diluciones de 10 -
1
,10-2 y 10-3, en tubos de ensayos correspondientes.
 Se procede a tomar 1 microlitro de cada tubo de ensayo, y se efectúa la siembra
de en cajas petri respectivas.
 Se deja incubar las siembras por 24h a 35°C±1.
 Realizar la primera lectura de la cantidad de microorganismos (determinar la
presencia de gas). Esta se logra observar en las campanas. [ CITATION Róm08 \l
12298 ]
b) COLIFORMES FECALES
Para coliformes fecales e utilizan dos métodos:
PRIMER MÉTODO
 Se cogen los tubos positivos del caldo Lauril Sulfato Triptosa y se lleva una
asada al caldo EC utilizando un asa que tenga 3 mm de diámetro.
 Luego, estos tubos se incuban a 45.5 ºC ± 0.2, en baño María con agitación
constante por 24 h.
 Si hay gas a las 24 o 48 h. es positivo para coliformes fecales. [ CITATION Róm08 \l
12298 ]
SEGUNDO MÉTODO
 En esta se usa el caldo Brila más agua Peptonada.
 Se parte del caldo MacConkey, los tubos positivos de la prueba de coliformes
totales se siembran en este caldo, si aquí vuelve a salir positivo se le realizan las
dos pruebas sgtes.
 Sólo se tomará esta prueba como positiva si los dos tubos (caldo Brilla y caldo
Peptonado) resultan positivos.
 Al tubo con caldo peptonado se le agrega el reactivo de Kovacs para hacer la
prueba de Indol.
 Para ver coliformes termorresistentes, de los tubos que hayan salido positivos se
siembra una asada en agar MacConkey y se aíslan las colonias características.
 De los tubos positivos se los siembra en otros tubos en caldo EC con campana de
Durham.[ CITATION Róm08 \l 12298 ]
8.6. ¿Ventajas y desventajas entre el uso del método tradicional y el Petrifilm?
MÉTODO TRADICIONAL
VENTAJAS DESVENTAJAS
Los medios contienen agentes Se requiere de un tiempo prolongado para
higroscópicos, que permiten que no sean la preparación de los medios de cultivo.
alterados en lugares que son muy
húmedos.
Existen gran variedad de medios Los medios preparados son más
presentes en el mercado para todos los susceptibles a cambios de pH y a la
sectores de la industria. desecación.
Los medios contienen indicadores Ruptura del agar al momento de la
químicos que colorean las colonias homogenización de la muestra con las
facilitando su recuento. asas de Drigalsky.
PETRIFILM
VENTAJAS DESVENTAJAS
No existe la necesidad de preparar los Se debe tener cuidado al momento de
medios de cultivo. dispersar la muestra para evitar que se
derrame.
No se debe esterilizar o fundir los medios Existe la generación de burbujas de aire al
de cultivo. momento de dejar caer el film superior.
Estas placas ocupan menos espacio en la Las placas petriflim son costosas.
incubadora que las cajas petri.
Disminuye el uso de equipos como Cuentan con fecha de expiración, si no
autoclaves, material de vidrio, neveras. son utilizadas en este tiempo, ya no
tendrán vida útil.
Fuente: https://javeriana.edu.co/biblos/tesis/ciencias/tesis230.pdf
8.7. Para el caso del Petrifilm® ¿Por qué las colonias Mesófilos aerobias se observan
de color rojo?
Las colonas mesófilas aerobias se observan de color rojo, debido a los nutrientes del agar
el cual posee un tinte indicador de color rojo llamado tetrafenil tetrasolium clorado TTC,
el cual facilita el recuento de las colonias. Estas placas Petrifilm, para el recuento de
Aerobios, están en combinación con caldo MRS como diluyente e incubación anaerobia,
que permiten el crecimiento de bacterias ácido lácticas heterofermentativas (productores
de gas). Estas colonias son de color rojizo, y pueden tener o no una burbuja de gas
asociada. [ CITATION Xim08 \l 12298 ]
8.8. ¿Porque se utiliza agua Peptonada y no agua destilada para hacer las
diluciones?
El agua peptonada es un medio de enriquecimiento no selectivo, se utiliza para hacer las
diluciones ya que este medio permite que el crecimiento bacteriano sea muy limitado y
no permite la muerte celular. (García, 2005)
8.9. ¿Cuáles son las ventajas y desventajas de realizar el método de recuento en

placa?
 Ventajas:
- Mide el número de células viables.
- Si el cultivo se somete a demasiado tiempo de incubación el crecimiento
bacteriano será abundante impidiendo el conteo de las colonias.
 Desventajas:
- El agar fundido puede afectar a los microorganismos sensibles a la
temperatura.
- Requiere de tiempo considerable para que se pueda realizar el conteo
(mínimo 24 horas).
- El medio se puede contaminar lo que provocaría errores al momento del
conteo de colonias.
9. BIBLIOGRAFÍA
(1)AG, R.-B. (2015). Organismos Indicadores . Obtenido de R-Biopharm AG:

https://food.r-biopharm.com/es/analitos/microbiologia/organismos-indicadores/
(2) Blamis, J. (23 de Junio de 2013). Siembra en placas Petrifilm . Obtenido de

https://www.blamis.com.co/product/placas-petrifilm
(3) Cossettini, O. (15 de Enero de 2006). Placas Petrifilm. Obtenido de

www.3M.com/microbiology
(4) Inga, R. A. (14 de Febrero de 2008). Determinación de Coliformes Totales y Fecales.

Método de recuento por dilución en tubo: NMP. Obtenido de ESCUELA
PROFESIONAL DE BIOLOGÍA :
https://www.monografias.com/trabajos89/determinacion-coliformes-totales-
fecales/determinacion-coliformes-totales-fecales.shtml
(5) Ramírez, J. (20 de Noviembre de 2007). Análisis de técnicas de recuento de

Microorganismos. Obtenido de http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/26124557
(6) Salud, M. d. (Noviembre de 2014). Análisis microbiológio . Obtenido de Bacteriological

Analytical Manual, 8th Edition, Revision A, 1998. Chapter 3.
(7) Tevez, L. (2006). Estudio Cuantitativo de bacterias . Obtenido de Microbiología

General-Carrera Farmacia : http://www.biologia.edu.ar/microgeneral/tp5.pdf
(8) Ximena, A. (Diciembre de 2008). ESTUDIO COMPARATIVO EN TÉCNICAS DE

RECUENTO RÁPIDO EN EL MERCADO Y PLACAS PETRIFILM 3M PARA EL
ANÁLISIS DE ALIMENTOS. Obtenido de PONTIFICIA UNIVERSIDAD
JAVERIANA: https://javeriana.edu.co/biblos/tesis/ciencias/tesis230.pdf
10. ANEXOS
10.1. Diagrama del equipo.
10.2. Diagrama del crecimiento microbiano.
ANEXO 1
10.1. Diagrama del equipo.
Figura 11.1-1: Diagrama de equipo
1. Petrifilm
2. Aplicador
3. Mechero de alcohol
4. Tubos de ensayo
5. Gradilla
6. Agujas de insulina
Nombre: Fecha:
Universidad Central del Ecuador
Dibuja: Grupo 3 2019/05/31
Facultad de Ingeniería Química
Francisco Escuela de Ingeniería Química
Revisa: 2019/06/06
González-
Escala: Diagrama del equipo. Lámina:

1
ANEXO 2
10.2. Diagrama del crecimiento microbiano.
Figura 11.2-1: Diagrama del crecimiento microbiano.
Diagrama del crecimiento microbiano.

50
Numero de celulas
40
30
20
10 f(x) = − 127.91 x + 12.04

R² = 0.07
0
0.00E+00 2.00E-02 4.00E-02 6.00E-02 8.00E-02 1.00E-01 1.20E-01
Concentracion
Tabla 11.2-1: Observación de la dilución

Dilución Observación.
10-1 Incontables
-2
10 Incontables
-3
10 46 UFC
10-4 Incontables
10-5 Incontables
Nombre: Fecha:
Universidad Central del Ecuador
Dibuja: Grupo 3 2019/05/31
Facultad de Ingeniería Química
Francisco Escuela de Ingeniería Química
Revisa: 2019/06/06
González-Valerio
Escala: Diagrama de crecimiento Lámina: 2

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DOCENTE: Dr. Pablo Araujo PhD.

AYUDANTE DE CATEDRA: Francisco González Valerio

Aplicación de la técnica de dilución seriada, determinación de

“Una dilución en serie es la reducción progresiva, paso a paso, de la concentración de una

“En muchos casos se necesita preparar disoluciones con concentraciones extremadamente

2.2. Siembras en placas Petrifilm

 El recuento en placa por siembra en profundidad:

2.4. Recuento de colonias en petrifilm. (UFC)

Se examinan los objetos dudosos detenidamente, utilizando lentes de aumento si es

Las “colonias diseminadas” o dispuestas en rosario se consideran como una colonia.

Si se espera el crecimiento de colonias invasivas, se examinan las placas a las 24 h o 48 h y

Tabla 4.1-1. Observación de la dilución.

Tabla 4.1-2. Datos iniciales.

4.2. Cálculo de la concentración obtenida.

4.3. Cálculo de conteo de colonias

Tabal 4.1-3. Colonias observadas

Tabla 5-2. Resultados

8.5. ¿Cómo se diferencia entre coliformes y coliformes fecales en el laboratorio?

8.6. ¿Ventajas y desventajas entre el uso del método tradicional y el Petrifilm?

8.9. ¿Cuáles son las ventajas y desventajas de realizar el método de recuento en

(1)AG, R.-B. (2015). Organismos Indicadores . Obtenido de R-Biopharm AG:

(2) Blamis, J. (23 de Junio de 2013). Siembra en placas Petrifilm . Obtenido de

(3) Cossettini, O. (15 de Enero de 2006). Placas Petrifilm. Obtenido de

(4) Inga, R. A. (14 de Febrero de 2008). Determinación de Coliformes Totales y Fecales.

(5) Ramírez, J. (20 de Noviembre de 2007). Análisis de técnicas de recuento de

(6) Salud, M. d. (Noviembre de 2014). Análisis microbiológio . Obtenido de Bacteriological

(7) Tevez, L. (2006). Estudio Cuantitativo de bacterias . Obtenido de Microbiología

(8) Ximena, A. (Diciembre de 2008). ESTUDIO COMPARATIVO EN TÉCNICAS DE

Figura 11.1-1: Diagrama de equipo

Fuente: (Lab. Biotecnología Industrial, 2019, FIQ-UCE)

Escala: Diagrama del equipo. Lámina:

10.2. Diagrama del crecimiento microbiano.

Figura 11.2-1: Diagrama del crecimiento microbiano.

Diagrama del crecimiento microbiano.

10 f(x) = − 127.91 x + 12.04

Fuente: (Lab. Biotecnología Industrial, 2019, FIQ-UCE)

Tabla 11.2-1: Observación de la dilución

Escala: Diagrama de crecimiento Lámina: 2

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