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    P. Sem 06 - Trigliceridos

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    Este documento presenta un protocolo para determinar los triglicéridos en suero o plasma a través de un método espectrofotométrico. Explica los fundamentos del método, los reactivos utilizados, las instrucciones para su uso, el procedimiento, cálculos, control de calidad y valores de referencia. El objetivo es reconocer los niveles de triglicéridos y su importancia en el diagnóstico y manejo de hiperlipidemias.

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    Este documento presenta un protocolo para determinar los triglicéridos en suero o plasma a través de un método espectrofotométrico. Explica los fundamentos del método, los reactivos utilizados, las instrucciones para su uso, el procedimiento, cálculos, control de calidad y valores de referencia. El objetivo es reconocer los niveles de triglicéridos y su importancia en el diagnóstico y manejo de hiperlipidemias.

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    Gestión Curricular

    GUIA DE PRÁCTICA DE LABORATORIO DE


    BIOQUÍMICA

    PRÁCTICA N° 6: DETERMINACIÓN DE TRIGLICÉRIDOS

    Apellidos : ……………………………..………………………….
    Sección :
    Nombres : …………………………………..…………………….
    Docente : Mg. VERÓNICA CANALES GUERRA
    Fecha : Duración: 90 min

    1. TEMA: DETERMINACIÓN DE TRIGLICÉRIDOS


    2. PROPÓSITO:
    - Determinar los triglicéridos en suero o plasma.
    - Dar a conocer la importancia del control de los niveles plasmáticos de los triglicéridos
    - Reconocer los niveles de triglicéridos por método espectrofotométrico.
    3. SIGNIFICACION CLINICA
    Los triglicéridos son lípidos absorbidos en la dieta y también producidos en forma
    endógena a partir de los carbohidratos. Su medición es importante en el diagnóstico y
    manejo de las hiperlipidemias. Estas enfermedades pueden tener origen genético o ser
    secundarias a otras tales como nefrosis, diabetes mellitus y disfunciones endócrinas. El
    aumento de triglicéridos se ha identificado como un factor de riesgo en enfermedades
    ateroscleróticas.
    FUNDAMENTOS DEL METODO
    El esquema de reacción es el siguiente:
    lipoprotein lipasa
    triglicéridos glicerol + ácidos grasos

    glicerol kinasa
    glicerol + ATP glicerol-1-P + ADP

    GPO
    glicerol-1-fosfato + O2 H2O2 + dihidroxiacetonafosfato

    POD
    2 H 2O2 + 4-AF + clorofenol quinonimina roja

    REACTIVOS PROVISTOS
    A. Reactivo A: solución conteniendo buffer Good (pH 6,8), clorofenol, lipoprotein lipasa
    (LPL), glicerol kinasa (GK), gli-cerol fosfato oxidasa (GPO), peroxidasa (POD), adenosina
    trifosfato (ATP) y 4-aminofenazona (4-AF).

    S. Standard*: solución de glicerol 2,26 mmol/l (equivale a 2 g/l de trioleína).


    Gestión Curricular

    Concentraciones finales
    Buffer Good............................................. 50 mmol/l; pH 6,8
    clorofenol................................................................ 2 mmol/l
    lipoprotein lipasa................................................... ≥ 800 U/l
    GK......................................................................... ≥ 500 U/l
    GPO.................................................................... ≥ 1500 U/l
    POD...................................................................... ≥ 900 U/l
    ATP........................................................................ 2 mmol/l
    4-AF.................................................................... 0,4 mmol/l

    INSTRUCCIONES PARA SU USO


    Calibrador A plus de Wiener lab. Para la técnica automática.

    MUESTRA: Suero o plasma.


    a) Recolección:
    Previo ayuno de 12 a 14 horas, obtener suero o plasma. Separar de los glóbulos rojos dentro de
    las 2 horas de extracción.

    b)Aditivos:
    En caso de emplear plasma, se recomienda el uso de Anticoagulante W o heparina para su
    obtención.
    c) Sustancias interferentes conocidas:
    No se observan interferencias por bilirrubina hasta 15 mg/dl; hemólisis marcadas no interfieren
    en la determinación.
    d)Estabilidad e instrucciones de almacenamiento:
    Los triglicéridos en suero son estables 3 días en refrigerador (2-10oC). No congelar.

    4. MATERIAL REQUERIDO (no provisto)


    - Espectrofotómetro

    - Micropipetas y pipetas para medir los volúmenes indicados

    - Cubetas espectrofotométricas

    - Baño de agua a 37oC

    - Reloj o timer

    CONDICIONES DE REACCION:

    - Longitud de onda: 505 nm

    -Temperatura de reacción: 37oC

    -Tiempo de reacción: 5 minutos

    - Volumen de muestra: 10 ul

    Pág. …
    Gestión Curricular

    - Volumen de Reactivo A: 1 ml

    - Volumen final de reacción: 1,01 ml

    5. PROCEDIMIENTO
    Homogeneizar la muestra antes de usar, especialmente frente a sueros lechosos.
    En tres cubetas espectrofotométricas marcadas B (Blan-co), S (Standard) y D (Desconocido)
    colocar:

    B S D

    Muestra - - 10 ul

    Standard - 10 ul -

    Reactivo A 1 ml 1 ml 1 ml

    Mezclar. incubar 5 minutos a 37oC o 20 minutos a temperatura ambiente (18- 25oC).


    Enfriar y leer en espectrofotómetro a 505 nm llevando el aparato a cero con agua destilada.

    Microtécnica

    Seguir el procedimiento indicado anteriormente, pero utilizando 5 ul de Muestra y 500 ul


    de Reactivo A.

    ESTABILIDAD DE LA MEZCLA DE REACCION FINAL


    El color de reacción final es estable 60 minutos, por lo que la absorbancia debe ser leída
    dentro de este lapso.

    CALCULO DE LOS RESULTADOS:

    Corregir las lecturas con el Blanco de reactivos y usar las lecturas corregidas para los cálculos.

    2 g/l
    TG (g/l) = D x factor factor =
    S

    CONVERSION DE UNIDADES

    Triglicéridos (g/l) = 0,01 x Triglicéridos (mg/dl)

    Triglicéridos (mg/dl) x 0,0113 = Triglicéridos (mmol/l)

    METODO DE CONTROL DE CALIDAD

    Procesar 2 niveles de un material de control de calidad (Standatrol S-E 2 niveles) con


    concentraciones conocidas de triglicéridos, con cada determinación.

    Pág. …
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    VALORES DE REFERENCIA

    El panel de expertos del National Cholesterol Education Pro-gram (NCEP) provee los
    siguientes valores de Triglicéridos:

    Deseable: < 1,50 g/l

    Moderadamente elevado a elevado: 1,50 - 1,99 g/l

    Elevado: 2,00 - 4,99 g/l

    Muy elevado: ≥ 5,00 g/l

    4. HIPÓTESIS:
    Para determinar los triglicéridos en plasma, se reconocerá los niveles de triglicéridos por el
    método espectrofotométrico y así dar a conocer la importancia del control de los niveles
    plasmáticos de los triglicéridos.

    5. CONCLUSIONES:
    Los triglicéridos almacenan las calorías no utilizadas y proporcionan energía al cuerpo.
    El incremento en el nivel de los triglicéridos que se hallan en la sangre, se conoce como
    hipertrigliceridemia.

    CUESTIONARIO:
    - ¿Qué pasa si tienes los triglicéridos altos?
    - ¿Qué función realizan los triglicéridos en nuestro cuerpo?
    - Un paciente tiene los triglicéridos (195 gr/dl) y las transaminasas altas ¿Qué
    debe hacer?
    - ¿Cómo es la estructura química de los triglicéridos?

    REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS Y/O ENLACES RECOMENDADOS


    http://www.who.int/csr/resources/publications/biosafety/CDS_CSR_LYO_2004_11SP.pdf

    - “Bioquímica ilustrada de Harper” MURRAY, R.; DARYL K, GRANNER,


    RODWELL, VICTOR W.: 17ava edición; editorial “EL MANUAL MODERNO”,
    México 2008.

    Pág. …

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