PRÁCTICA En condiciones patológicas como pérdidas

DETERMINACION DE renales, desnutrición, infecciones etc., suelen

AMINOÁCIDOS Y presentarse hipoproteinemias, mientras que en

2 PROTEÍNAS DEL otras como mieloma múltiple, endocarditis

PLASMA: ALBÚMINA bacteriana y hemoconcentraciones de diversos
Y GLOBULINAS orígenes, se observan hiperproteinemias.
Dr. Luis A. Chávez Abanto La práctica tiene por objetivos:
- Identificar aminoácidos y proteínas en
I. INTRODUCCIÓN soluciones.
Un aminoácido es una pequeña molécula - Determinar las proteínas del plasma:
orgánica que contiene, en su estructura al albúmina, globulinas en estado normal y
menos, un grupo amino (-NH2), de naturaleza patológico.
básica, y un grupo carboxilo (-COOH), de II. MATERIAL Y MÉTODO
carácter ácido. Aunque los seres vivos
sintetizan para distintos propósitos diversos 2.1 Material Reactivos:
tipos de aminoácidos, sin duda los más Solución de Biuret.
importantes son los que forman parte de las Solución de ácido acético al 2%.
proteínas, todos los cuales pertenecen al Solución de sulfato de sodio al 22.6 %
grupo de los L-aminoácidos. Sol de ninhidrina 0,2%
Reactivo PROTI – 2
Los aminoácidos son los monómeros que Bromo Cresolsulfon Ftaleína
componen las proteínas. Específicamente, Reactivo A: EDTA/Cu 13mM en NaOH 875mM
una proteína está compuesta de una o más y alquilaril poliéter (AAP)
cadenas lineales de aminoácidos, cada una Standard: solución de albúmina y globulinas.
de la cuales se denomina polipéptido. Las Espectrofotométro spectronic 20.
proteínas contienen 20 tipos de aminoácidos
de las cuales hay esenciales y no esenciales. 2.2 Método:
1) Reconocimiento de aminoácidos:
Las proteínas son compuestos orgánicos reactivo Ninhidrina
macromoleculares, ampliamente distribuidos
en el organismo y esenciales para la vida. COMPONENTES B S D
Actúan como elementos estructurales y de /TUBOS
transporte y aparecen bajo la forma de Agua destilada 1 ml -- --
enzimas, hormonas, anticuerpos, factores de Aminoácido: glicina 1% -- 1 ml --
coagulación, etc. La proteína más abundante Proteína albumina de -- -- 1 ml
en plasma es la albúmina. Una de sus huevo 2 % (1:50)
funciones más importantes es la de permitir el Reactivo ninhidrina 0,2% X X X
transporte de ácidos grasos, hormonas gotas
esteroides, bilirrubina, catecolaminas, que en Observar el cambio de color, en el tubo que
forma libre son insolubles en medio acuoso. contiene el aminoácido
El origen de las proteínas plasmáticas es
diferente, así la albúmina, el fibrinógeno, la Cuando la ninhidrina reacciona con el
protrombina globulinas alfa y beta son aminoácido este se oxida a aldehído y la
formadas por el tejido hepático, en cambio las ninhidrina se reduce a hidridantina. Esta
globulinas gamma se forman en las células última reacciona con otra molécula de
plasmáticas y en el tejido linfático. Son ninhidrina y con el amoniaco producido en la
importantes para el organismo porque primera reacción, formándose un producto
intervienen en una diversidad de actividades coloreado azul.
entre las que destacan: Función osmótica,
acción amortiguadora, transporte de
sustancias, actividad inmunológica,
coagulación sanguínea.
 2) Reconocimiento de proteínas: cuya intensidad es proporcional a la cc. de
reactivo Biuret proteínas

COMPONENTES B S D
/TUBOS
Agua destilada 1 ml -- --

Aminoácido: fenilalanina -- 1 ml --
1%
Proteína albumina de -- -- 1 ml
huevo 2 % (1:50)
Reactivo Biuret (ml) 2.0 2.0 2.0

Observar el cambio de color, en el tubo que

contiene la proteína.
El reactivo del Biuret lleva sulfato de Cobre
(II) y sosa y el Cu, en un medio fuertemente
alcalino, se coordina con los enlaces
peptídicos formando un complejo de color
violeta (Biuret) cuya intensidad de color
depende de la concentración de proteínas.

3) Determinación de Albúmina.
Método colorimétrico. La albúmina
reacciona específicamente con la forma
aniónica de la Bromo Cresolsulfon Ftaleína
(BCF), en presencia de un exceso de
colorante, en medio tamponado a pH 3,9. El
aumento de absorbancia a 625 nm respecto
del Blanco de reactivo, es proporcional a la
cantidad de albúmina presente en la
muestra.
En tres tubos marcados B (Blanco), S
(Standard) y D (Desconocido), Colocar:
COMPONENT B S D
ES /TUBOS
Estándar albúmina -- 10 ul --
Muestra problema -- -- 10 ul
(suero)
Reactivo BCF (ml) 3.5 3.5 3.5

- Mezclar y mantener los tubos entre 15 y 28ºC

durante 10 minutos.
- Leer en espectrofotómetro a 625 nm llevando
a cero con el Blanco de Reactivo.
- El color es estable 20 minutos debe ser leída
dentro de ese lapso.

4) Determinación de Proteínas Totales

Fundamento: Los enlaces peptídicos de las
proteínas reaccionan con el ión cúprico, en
medio alcalino, para dar un complejo color
violeta con máximo de absorción a 540 nm,
2
totales en la muestra. Globulinas 1.5 a 2.5 g/100 ml
• Los valores para las 24 horas) que sólo
En tres tubos de fotocolorímetro marcados
fracciones de puede descubrirse con
Blanco, Standard y Desconocido colocar:
globulinas varían procedimientos
COMPONENTES B S D más de los obtenidos delicados y no con
/TUBOS para los de la métodos usuales de
Agua destilada 50 -- -- albúmina. laboratorio.
ul
Estándar proteínas --50 -- • Se observa
totales ul disminución de los
III.RESULTADOS
1.Muestra
Reconocimiento de aminoácidos:
problema (suero) -- -- 50 valores de albúmina
reactivo Ninhidrina ul en la destrucción
Reactivo Biuret (ml) 3.5 3.5 3.5 prolongada, por
aporte inadecuado de
5) Determinación de las globulinas proteínas, en
De la cantidad de proteínas totales alteraciones de la
encontradas, se resta la de las albúminas y la digestión de las
diferencia indicará los gramos de globulinas mismas (insuficiencia
% pancreática), por
pérdida crónica de
6)2)Determinación
Reconocimiento de deproteínas:
cualitativa las proteínas ya sea por
reactivo Biuret
proteínas en la orina: Coagulación por el orina (síndrome
calor nefrótico) o por
extravasación
COMPONENTES B p (quemaduras) en
/TUBOS padecimientos
Agua destilada 5,0 -- hepáticos crónicos
ml (cirrosis).
Orina previamente filtrada -- 5,0
ml • Las fracciones
3)Someter
Determinación desiAlbúmina.
a ebullición, aparece precipitado, globulínicas
enturbiamiento, puede deberse a la presencia habitualmente
de proteínas o fosfatos aumentan en los
Solución de ácido acético al IV IV diversos estados
2% gotas gotas patológicos; así las
gamma globulinas se
Si desaparece la turbidez, se trata de
incrementan en
fosfatos que se han disuelto en medio ácido.
enfermedades
Si la turbidez permanece o se ha hecho más febriles agudas, esto
intensa o se forma un precipitado, se trata parece estar
de proteínas. relacionado con la
CALCULO DE LOS RESULTADOS inflamación y
destrucción tisular;
Proteínas Totales (g/dl) = D x f cuando hay acúmulo
Factor = Estándar de proteinas totales (g/dl) / de lípidos, aumentan
lectura del Standard las globulinas beta.
Albúmina (g/dl) = D x f • La orina normal
Factor = Standard de albúmina (g/dl) contiene una
lectura Standar pequeña cantidad de
Globulinas= ([Proteinas totales] – [Alb]) (g/dl) proteínas solubles
(albúminas, diversas
VALORES DE REFERENCIA enzimas) la cantidad
Albúmina 3,5 - 5.5 g/100 ml. es tan pequeña (
Proteínas totales 6.0 - 8.0 g/ 100 ml 0.075 g en orina de
3
4) Determinación de Proteínas Totales
6) Determinación cualitativa
proteínas en la orina:

Identifique los reactivos:

5) Determinación de las globulinas
b)
Reacciones:

c) d)

4
IV. DISCUSIÓN V. CONCLUSIONES

VI. BIBLIOGRAFÍA
ACTIVIDADES EXTRA-AULA: 6. Reacción del aminoácido con la
ninhidrina:
1. Funciones de la albúmina

Causas de:
Hipoalbuminemia

Hiperalbuminemia

2. Funciones de las proteínas

plasmáticas 7. Reacción de la proteína albúmina con
el reactivo de Bromo Cresolsulfon
Ftaleína (BCF) y su coloración final.

3. Funciones de las globulinas

4. Dibuje la estructura de un aminoácido

BIBLIOGRAFÍA DE LA ACTIVIDAD

5. Enuncie 3 aminoácidos esenciales