Integrantes Grupo Lab: 501

1. Daniela Alejandra León Lozano

2. Juliana Gabriela Jiménez Ovalle
3. Julieth Katerine Rodríguez Mantilla
4. Paola Andrea Castro Castilla

A partir de las otorgadas durante la clase (cajas Petri), describa los siguientes ítems:

1. Identificación morfológica (macroscópica y microscópica)

A partir de las cajas de Petri (microorganismos crecidos) que encontrará en el mesón,
describa cada una de las morfologías observadas bajo Coloración Gram, soportando
por qué son Gram positivas ó Gram negativas y las estructuras de los hongos
filamentosos observados.

Descripción microscópica (Gram

Microorganismo Observado positivas ó Gram negativas/estructura de
(Descripción Macroscópica) los hongos filamentosos)

Staphylococcus aureus Macroscópica: Las colonias de S.

aureus son grandes, lisas, tienen
consistencia cremosa. presenta un color
Bacteria blanco.
Microscópica: Grampositiva, está
agrupada en racimos. Tienen una forma
esférica.

Bacillos subbtillis Macroscópica: las colonias son lisas con

un aspecto rugoso; los bordes pueden
ser ondulados y presenta un color
amarillo.
Microscópica: bacilos Gram positivos,
alargados con bordes redondeados.
Presentan esporas esféricas que no
deforman el bacilo.

Micrococcus Luteus Macroscópica: las colonias son esféricas

agrupadas grumosas, con un color beige
Microscópica: Es una bacteria gram
positiva

levadura Candida albicans

Macroscópica: Crece formando colonias
lisas, blandas, rugosas o membranosas,
 brillantes, de color blanco o ligeramente
amarillo. célula oval levaduriforme de 2 a
4 micras, con paredes finas

Microscópica: Levadura Gram positiva

Pertenece al filo Ascomycota y se
reproduce de forma asexual por
gemación.
 El dimorfismo le permite evadir
los mecanismos de defensa
relacionados con la inmunidad
celular del huésped.
 Levadura de desarrollo unicelular

Saccharomyces cerevisiae Morfología elípticas u ovoides

•Alta capacidad fermentativa
•Formadora de esporas (ascosporas
con 4 esporas)
•No asimila nitratos ni escinde arbutina
•Crecimiento en presencia de etanol
•Fermenta y asimila glucosa, galactosa,
maltosa,
sacarosa y rafinosa.
•No fermenta ni asimila lactosa
Macroscópica: Colonias de crecimiento
rápido (maduran al tercer día), son
colonias húmedas, cremosas, convexas,
lisas y opacas, con colores que van
desde blanco a color crema.
Microscópica: Son blastoconidios,
unigemantes, de base estrecha, de 2 a
4µm de diámetro, puede llegar a
presentar pseudomicelio, con
pseudohifas cortas.

Hongo Trichoderma Sp Macroscópica: las colonias se

filamentoso reconocen fácilmente por su crecimiento
rápido y su coloración, blancas - verdes,
amarillo - verdosas, las a reas con
conidias se presentan con anillos
concéntricos.
Microscópica: Hifas de pared rugosa,
hialinas, ramificadas, septadas que dan
origen a conidióforos ramificados
irregularmente piramidales, posee
fiálides agrupadas (entre 2 y 4), en
forma cilíndrica. Los conidios presentan
una pared rugosa típicamente de forma
globosa y rara vez elipsoidales, miden
de 3,6-4,8 µm. En condiciones no
favorables presenta clamidosporas
 terminales intercalares

Rhizopus sp Macroscópica: Se observa una colonia

vellosa, algodonosa, blanca grisácea por
la madurez del cultivo; Son colonias
blancas, al alcanzar la madurez
comienzan a adquirir una tonalidad gris
oscura (la tonalidad se debe al
desarrollo de las estructuras de
reproducción asexual las Endosporas),
Son vellosas algodonosas y secas.

Microscópica: Presenta un micelio

macrosifonado (entre 5 – 10µm), hialino,
cenocítico, en los puntos en donde se
conectan los esporangióforos y los
estolones que presentan, se forman
rizoides.
 Hifas aseptadas de color pardo
oscuro
 presencia de rizoides
 Esporangios sin ramificar

Alternaria Macroscópica: Presenta un cultivo de

colonias de color verde oscuro, planas,
lanosas que con el tiempo se oscurecen,
se torna de colores grises, verde oliva y
negro, Polvosas por el desarrollo de un
micelio aéreo, denso bien desarrollado,
de borde irregular.

Microscópica: Tiene hifas septadas,

además, Conidias cafés lisas. La parte
de la conidia más cercana al conidióforo
es redonda mientras que en el ápice son
más pequeñas.
Los conidios pueden aparecer solitarios
o encadenados y son fácilmente
reconocibles debido a su tamaño (30-50
x 10-14 micras).

Fusarium oxysporium Macroscópica: Colonias algodonosas de

color blanco con leves tonalidades
moradas, se caracteriza por producir
colonias de crecimiento rápido; su
micelio es generalmente aéreo,
abundante, algodonoso con coloración
variable de blanco a rosado y/o morado.

Microscópica: Fusarium puede presentar

3 clases de esporas
1. Microconidias: Esporas
unilaterales, sin septos, se
 forman sobre fiálides laterales,
cortas, simples o sobre
conidióforos poco ramificados.
2. Macroconidias: Esporas con
pared delgada, fusiformes,
largas, moderadamente curvas
en forma de hoz.
3. Clamidioesporas: Esporas
formadas a partir de la
condensación de los contenidos
de las hifas y macroconidias.

2. Cuantificación de rendimientos de un cultivo Batch de Saccharomyces cerevisiae

a) Organice en una tabla los valores iniciales y finales de la fermentación (pH, °Brix,
densidad, temperatura, agitación y cantidad de biomasa)

Tiempo pH °Brix Densidad Temperatura Agitación Cantidad de

(gr/cm3) (°C) Biomasa (g)

INICIA 5,45 3,5 1, 04206 18,9 no 0,5

L

FINAL 4,556 1,33 1,0186 17,7 si

 inicial
°Brix (promedio) = (3,4 + 3,7 + 3,4) / 3 = 3,5
Picnómetro lleno: 48,3352 gr
Picnómetro Vacío: 22,2837 gr
volumen del picnómetro: 25 ml

g
∗1ml
picnometro lleno−picnometro vacio 48,3352 g−22,2837 g ml
ρ= = =1,04206 =1,04206 g /cm3
volumen del picnometro 25 ml 1 cm3

 final
°Brix (promedio) = (1,5 + 1,4 +1,1) / 3 = 1,33
Picnómetro lleno: 46,0544 gr
Picnómetro Vacío: 20,5894 gr
volumen del picnómetro: 25 ml

g
∗1 ml
picnometro lleno−picnometro vacio 46,0544 g−20,5894 g ml
ρ= = =1,0186 =1,0186 g /cm3
volumen del picnometro 25 ml 1cm 3
 TUBO VACIO (g) TUBO + BIOMASA (g) BIOMASA SECA (g)

t iR1 5,5688 5,5889 0,0201

t iR2 5,5686 5,5911 0,0225

t iR3 5,5141 5,5340 0,0199

t fR1 5,3363 5,3675 0,031

t fR2 5,3648 5,5593 0,1945

t fR3 5,3439 5,5478 0,2039

BIOMASA SECA:
 tiR1: (tubo + biomasa) - Tubo vacío =5,5889 g -5,5688 g = 0,0201 g
 tiiR2: (tubo + biomasa) - Tubo vacío =5,5911 g -5,5686 g = 0,0225 g
 tiiR3: (tubo + biomasa) - Tubo vacío =5,5340 g -5,5141 g = 0,0199 g
 tfR1: (tubo + biomasa) - Tubo vacío =5,3675 g- 5,3363 g = 0,031 g
 tfR2: (tubo + biomasa) - Tubo vacío =5,3648 g -5,5593 g= 0,1945 g
 tfR3: (tubo + biomasa) - Tubo vacío =5,5478 g - 5,3439 g = 0,2039 g

b) Halle el rendimiento de biomasa respecto a glucosa, para su fermentación y la de

sus compañeros de mesón

1. Glucosa
1.1. Datos iniciales

g glucosa
° Brix= ∗ρi
100 g muestra
               
 
3,5 g glucosa g muestra
3,5= ∗1,04206 ∗100 ml
100 g muestra ml

                    g glucosa (inicial) = 3,6472 g  

1.2. Datos finales

g glucosa
° Brix= ∗ρ
100 g muestra

1,33 g glucosa g muestra

1,33= ∗1,0186 ∗100 ml
100 g muestra ml

    g glucosa (final) = 1,3547 g

                   
2. Biomasa
 2.1. Datos iniciales
Peso Biomasa promedio = (0,0201+0,0225+0,0199) /3
Biomasa seca inicial = 0,020833 g

0,020833 g
∗100 ml=0,2976 g Biomasa
7 ml

2.2. Datos Finales

Peso Biomasa promedio = (0,031 + 0,1945 + 0,2039) /3

Biomasa seca final = 0,143 g

0 ,143 g
∗100 ml=2,045 g Biomasa
7 ml

3. Rendimiento global

X (xf −xi ) (2,045 g Biomasa−0,2975 g Biomasa) g Biomasa

Y = = =0,7625
S ( si−sf ) (3,6472 g glucosa−1,3547 g glucosa) g glucosa

X g Biomasa g Biomasa
Y =0,7625 =76,25%
S g glucosa g glucosa

4. Coeficiente de Biomasa
x∗PM Biomasa
0,7625=
PM glucosa

g
0,7625∗ 180( mol ) =Coef . Biomasa
( 23,39 molg )
C oef . Biomasa=5,868

Reacción

C 6 H 12O 6+ aO2+bNH 3→ 5,87 CH 1,67 O 0 ,

Posterior a los tiempos de incubación a distintas temperaturas y medios de cultivo

TABLA FERMENTACIÓN GRUPO CON AGITACIÓN

 Tiempo Densidad Biomasa pH Rendimiento Temperatura de
Fermentación (g / cm3) Yxs Incubación

Inicial    1,04206 0,2976 5,45 0,7625 30

Final 1,0186 2,04571 4,556 0,7625 30

TABLA FERMENTACIÓN GRUPO ESTÁTICO

Tiempo Densidad Biomasa pH Rendimiento Temperatura de

Fermentación Yxs Incubación

Inicial 1,025 0,348 5,224 0,010 31

Final 1,022 0,371 4,64 0,010 31,1

SOPORTE DE CÁLCULOS
DISCUSIÓN DE RESULTADOS
c) Analice los resultados y compare en cada uno de los casos, y bajo las condiciones
reales sobre las que se llevó a cabo la fermentación teniendo en cuenta (Tenga en
cuenta si logro la fermentación mantener las condiciones óptimas del microorganismo
y compare)

-La fermentación se llevó a cabo en óptimas condiciones ya que al observar al

microscopio ninguna de las dos fermentaciones (en agitación y estática) estaba
contaminada por ningún otro microorganismo diferente a Saccharomyces cerevisiae
así que todos los nutrientes fueron tomados por nuestro microorganismo de interés lo
que permitió que la cantidad de biomasa resultante fuera mayor en la fermentación
con agitación que en la que se mantuvo estática, esto se debe a que la agitación es un
factor que favorece a la fermentación y esta permite que la producción de biomasa sea
más acelerada, también se favorece con la dispersión del aire en la solución de
nutrientes, suspensión de los microorganismos y de los nutrientes y su dispersión.

d) Qué puede afectar el crecimiento o formación de biomasa de Saccharomyces

cerevisiae en una fermentación batch:
-las altas temperaturas ocasionan una disminución de la biomasa, producto de un
descenso en el contenido de proteínas, RNA; DNA y aminoácidos libres e induce a la
rigidez de la membrana celular. Temperaturas muy bajas provocan un estado de
latencia en la célula, deteniendo su desarrollo.
- el pH óptimo en el cual se desarrollan mejor, está entre 4 y 5. Las levaduras tienen la
ventaja de soportar, medios más ácidos, que otros microorganismos, lo que es
aprovechado en los procesos para mantener el medio controlado de bacterias que
puedan competir por el sustrato
-Los nutrientes deben estar disponibles de acuerdo a las necesidades de crecimiento
de las células. Sin embargo, la presencia de nutrientes en cantidad adecuada no es
suficiente, los nutrientes deben estar también en un estado adecuado para su
asimilación.
- El oxígeno es el sustrato gaseoso más importante para el metabolismo microbiano y
el anhídrido carbónico es el producto metabólico más importante. El factor más
importante que controla la velocidad de transferencia es la resistencia en la interfase
entre la burbuja de gas y el líquido. Las células microbianas próximas a la burbuja de
gas pueden absorber directamente el O2 a través de la interfase aumentando la
transferencia del gas a estas células. En los aglomerados de células o en las bolitas
de micelio, la transferencia de gas dentro del aglomerado puede ser un factor limitante.
-La agitación es la operación que crea o que acelera el contacto entre dos o varias
fases. Una fermentación microbiana puede ser considerada como un sistema de tres
fases, que implica reacciones líquido-sólido, gas-sólido y gas-líquido.1.-
La fase líquida contiene sales disueltas, sustratos y metabolitos. Puede existir, en
algunos casos, una segunda fase líquida si existe un sustrato inmiscible en agua como
por ejemplo los alcanos. La fase sólida consiste en células individuales, bolitas de
micelio, sustratos insolubles o productos del metabolismo que precipitan. La fase
gaseosa proporciona un reservorio para el suministro de oxígeno, para la eliminación
del CO2 o para el ajuste del pH con amonio gaseoso.

Una adecuada agitación de un cultivo microbiano es esencial para la fermentación ya

que produce los siguientes efectos en las tres fases:

1.- Dispersión del aire en la solución de nutrientes.

2.- Homogeneización, para igualar la temperatura, pH y concentración de nutrientes,

en el fermentador.

3.- Suspensión de los microorganismos y de los nutrientes sólidos.

4.- Dispersión de los líquidos inmiscibles.

 

CONCLUSIONES
 Se puede observar que las levaduras y las bacterias son diferentes no solo en
su micromorfología y si no que también en su macroscopia y esto se puede ver
fácilmente en la diferencia de tamaño y su forma ya que las levaduras pueden
alcanzar un diámetro máximo de de entre cuatro y cinco μm lo que las hacen
mucho más grande que las bacterias.
 La Saccharomyces cerevisiae es una levadura con alta capacidad fermentativa
por lo cual se debe tener mucho cuidado al momento de montar la
fermentación ya que fácilmente se puede afectar el rendimiento de la levadura
como lo vimos en el laboratorio que era muy importante mantener tapado
nuestro Erlenmeyer para que esta no reaccionara con el oxígeno (se deben
controlar las cantidades que se le suministran) y además entrarán los
microorganismos presentes en el aire a competir por el alimento de la
Saccharomyces cerevisiae  y así afectar su rendimiento. Los datos obtenidos
demuestran que se alcanza un buen rendimiento en la fermentación ya que se
obtiene más del doble de biomasa inicial al final de la fermentación con
respecto a los 0.5 gr utilizados.