Practica N°8 Perfil Lipidico I PDF

ASIGNATURA : BIOQUÍMICA Y NUTRICIÓN
CICLO : II
SEMESTRE ACADEMICO : 2020-1
UNIVERSIDAD PRIVADA SAN JUAN BAUTISTA
FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD ESCUELA
PROFESIONAL DE MEDICINAHUMANA
“Dr. Wilfredo Erwin Gardini Tuesta”
ACREDITADA POR SINEACE

RE ACREDITADA INTERNACIONALMENTE POR RIEV
PRÁCTICA N°08:
PERFIL LIPIDICO I: COLESTEROL TOTAL Y FRACCIONADO
PLANA DOCENTE
SEDE LIMA : ÁVILA ZAMORA, Enrique.
FILIAL ICA : SALINAS VELIZ, Yolanda.
FILIAL CHINCHA : COILA DE LA CRUZ, Hilda Victoria.
DOCENTE ASISTENTE : ALVARO HILLCARA, Mirna Vanessa.
DOCENTE ASISTENTE : LÉVANO AVALOS, Juan Alejandro.
LOGRO A MEDIR:
Describir las concentraciones de las fracciones lipídicas en sangre y sus

alteraciones.
MARCO TEÓRICO:
El nivel sérico de colesterol ha sido objeto

en los últimos años de numerosas
investigaciones tanto en individuos sanos
como enfermos.
Desde un punto de vista médico la
determinación de colesterol en forma
aislada tiene utilidad diagnóstica limitada.
Sin embargo, su concentración varía de
manera más o menos predecible en un gran
número de condiciones clínicas.
Se ha visto que el colesterol es uno de los
factores contribuyentes a la formación de
ateromas dado que las complicaciones
arterioscleróticas prevalecen en individuos
hipercolesterolémicos.
actualmente es necesario conocer la
distribución de las lipoproteínas encargadas
del transporte:
HDL (lipoproteínas de alta densidad),
considerada como el “factor protector”
LDL (lipoproteínas de baja densidad),
consideradas como el verdadero “factor de
riesgo”.
Las funciones biológicas inherentes a los
distintos grupos de lipoproteínas, las
variaciones en su composición y los
resultados de los diversos estudios
epidemiológicos, indican que los valores
aislados de colesterol HDL y colesterol LDL
no pueden tomarse como índices predictivos
de riesgo, sino que es necesario conformar
un perfil lipídico con los valores de colesterol
total, colesterol LDL y colesterol HDL.
MATERIAL DIDÁCTICO:
DESARROLLO DE LA PRÁCTICA:
EXPERIMENTO A:DETERMINACIÓN DE COLESTEROL EN SUERO
Fundamentos del Método:
El colesterol es oxidado
enzimáticamente por colesterol
oxidasa (CHOD), previa hidrólisis
enzimática de los ésteres
mediante una lipasa de origen
fungal. El agua oxigenada
generada en la oxidación,
produce la copulación oxidativa
del fenol con la 4-aminofenazona
(4-AF) mediante una reacción
catalizada por la peroxidasa. El
producto es una quinonimina roja
con absorbancia máxima a 505
nm.
PROCEDIMIENTO:
En tres tubos colocar:
Tubos
2000 uL 2000 uL
Reactivo Reactivo
2000 uL
Reactivo
20 uL 20 uL
Standar Muesra
B S M
1
2 3 4
Incubar 10 minutos en baño de agua a 37ºC.
Leer en el espectrofotómetro a 505 nm.
B M S
7
5 6
CALCULO DE RESULTADOS: Calcular la concentración de colesterol total en
suero, aplicando el método del factor de calibración.
Recordar que la concentración del standard de colesterol es de 200 mg%
𝐴𝑏𝑠.𝑀
mg% colesterol = Conc. S
𝐴𝑏𝑠.𝑆
VALORES DE REFERENCIA: Los valores de colesterol en sangre fluctúan según

edad, sexo y hábitos de dieta y de ejercicio. Sin embargo, es preferible no hacer
referencia a valores “normales”, pues la norma promedio de una población no
necesariamente refleja ausencia de riesgo patológico en el caso de colesterol.
Menos de 200 mg% valor deseable

200mg% a 239 mg% valor frontera (moderadamente elevado)
Mayor de 240 mg% valor elevado
Experimento B: DETERMINACIÓN DE COLESTEROL HDL EN SUERO
Fundamentos del Método
El presente es un método birreactivo homogéneo para la determinación de HDL-

colesterol.
1. En la primera etapa de la reacción se solubiliza y consume el colesterol libre
asociado a proteínas distintas de HDL, en una reacción que involucra a
colesterol oxidasa (CHO) y catalasa (CAT), dando lugar a un producto no
coloreado.
2. En una segunda etapa, un agente específico (azida) bloquea la acción de
CAT y un detergente solubiliza específicamente las HDL.
3. El HDL-colesterol es así liberado para reaccionar con colesterol esterasa
(CHE), CHO, 4-AAP (4-amino antipirina) y N-etil-N-(2-hidroxi-3-sulfopropil)-3-
toluidina disódica (TOOS), dando un producto coloreado que se lee a 540-
600 nm.
PROCEDIMIENTO
• En un tubo medir 0.5 ml

de muestra y agregar
0.05 ml de Reactivo
Precipitante. precipitado
Homogenizar agitando
(sin invertir) durante 20
segundos.
• Dejar 15 minutos en 500 Ul suero 50 Ul precipitante
refrigeración. No colocar
en el congelador.
• Centrifugar a 3000 rpm. SOBRENADANTE
• Usar el sobrenadante HDL
como muestra.
PROCEDIMIENTO:
2000 uL 2000 uL
Reactivo Reactivo
2000 uL
Reactivo
20 uL 100 uL
Standar sobrenadante
B S M
1
2 3 4
B M S
7
5 6
CALCULO DE RESULTADOS: Calcular la concentración de colesterol HDL en suero,
aplicando el método del factor de calibración.
Considerar que la concentración del standard de colesterol HDL es de 47.6 mg%
𝐴𝑏𝑠.𝑀
mg% HDL colesterol = Conc. S
𝐴𝑏𝑠.𝑆
VALORES DE REFERENCIA
Los valores esperados de HDL-colesterol son los siguientes:
Varones: 30 - 70 mg/dl
Mujeres: 30 - 85 mg/dl
El panel de expertos del National Cholesterol Education Program (NCEP) provee los
siguientes valores de HDL
- colesterol: 40 - 60 mg/dl
Es recomendable que cada laboratorio establezca sus propios valores de referencia. No
obstante, valores mayores de 40 mg/dl se consideran recomendables y los que se
encuentren por encima de 60 mg/dl se han considerado como protectores. Por el
contrario, valores de HDL-colesterol por debajo de 40 mg/dl se consideran como índice
significativo de riesgo de enfermedad cardíaca coronaria.
Experimento C: DETERMINACIÓN DE COLESTEROL LDL EN SUERO
Fundamentos del Método
El presente método es un ensayo homogéneo sin precipitación, en dos pasos.

 En el primero, se agrega un tensoactivo (Reactivo A) que solubiliza las
partículas lipoproteicas no-LDL.
El colesterol liberado es consumido por la colesterol esterasa y la
colesterol oxidasa en una reacción sin desarrollo de color.
 Un segundo tensoactivos (Reactivo B) solubiliza las partículas de LDL
formándose, por la presencia de enzimas y un Reactivo cromogénico, un
color proporcional a la cantidad de LDL colesterol presente en la muestra.
PROCEDIMIENTO
• En un tubo, colocar 0.2

ml de suero problema y
añadir 0,1 ml de
Reactivo Precipitante. precipitado
Homogenizar agitando
(sin invertir) durante 20
segundos. Dejar 15
minutos en un baño de 200 Ul suero 100 Ul precipitante
agua a 20-25°C.
Centrifugar a 3000 rpm.
Usar el sobrenadante SOBRENADANTE
como muestra. LDL
PROCEDIMIENTO:
2000 uL 2000 uL
Reactivo Reactivo
2000 uL
Reactivo
20 uL 100 uL
Standar sobrenadante
B S M
1
2 3 4
B M S
7
5 6
CALCULO DE RESULTADOS :
LDL Colesterol = Colesterol total - (Abs muestra neta x factor de calibración)
La concentración del standard es de 62.4 mg%.
VALORES DE REFERENCIA
Riesgo bajo o nulo: Menor de 129 mg%

Riesgo moderado: 130 a 189 mg%
Riesgo elevado : ≥190 mg%
No obstante, es recomendable que cada laboratorio establezca sus propios valores de

referencia.
Se tomo la muestra a un paciente para determinar el colesterol total, HDL y
LDL obteniéndose las lecturas de las absorbancias de los diferentes tubos
debidamente rotulados.
Realizar los cálculos:
Blanco = 0.048
Estándar = 0.345
Muestra colesterol = 0.246
Muestra HDL = 0.295
Muestra LDL = 0.187
INSTRUMENTO DE EVALUACIÓN:
1.- ¿Qué es Riesgo Coronario y cómo se calcula?
2.- Explique ¿qué diferencias hay entre la arteriosclerosis y la

ateroesclerosis?
3.- Describa la biosíntesis de colesterol dentro del organismo
4.- Explique ¿qué es el colesterol VLDL y cómo se calcula?
5.- ¿Qué rol cumplen los triglicéridos y cómo se realiza su metabolismo?
Fuente: Guía de práctica de Bioquímica y Nutrición UPSJB

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ASIGNATURA : BIOQUÍMICA Y NUTRICIÓN

ACREDITADA POR SINEACE

Describir las concentraciones de las fracciones lipídicas en sangre y sus

El nivel sérico de colesterol ha sido objeto

VALORES DE REFERENCIA: Los valores de colesterol en sangre fluctúan según

Menos de 200 mg% valor deseable

Fundamentos del Método

El presente es un método birreactivo homogéneo para la determinación de HDL-

• En un tubo medir 0.5 ml

Fundamentos del Método

El presente método es un ensayo homogéneo sin precipitación, en dos pasos.

• En un tubo, colocar 0.2

LDL Colesterol = Colesterol total - (Abs muestra neta x factor de calibración)

La concentración del standard es de 62.4 mg%.

Riesgo bajo o nulo: Menor de 129 mg%

No obstante, es recomendable que cada laboratorio establezca sus propios valores de

1.- ¿Qué es Riesgo Coronario y cómo se calcula?

2.- Explique ¿qué diferencias hay entre la arteriosclerosis y la

3.- Describa la biosíntesis de colesterol dentro del organismo

4.- Explique ¿qué es el colesterol VLDL y cómo se calcula?

5.- ¿Qué rol cumplen los triglicéridos y cómo se realiza su metabolismo?

Fuente: Guía de práctica de Bioquímica y Nutrición UPSJB

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