LABORATORIO DE BIOLOGIA CELULAR Y MOLECULAR

PRACTICA No.9: MITOSIS

PROFESORA: Concepción Bailón
OBJETIVOS

 Identificar las diferentes etapas y las características de la mitosis en células

vegetales
 Relacionar la mitosis como etapa en el ciclo celular

INTRODUCCION
La mitosis es un tipo de división celular en la que hay fenómenos o cambios tanto a nivel
de núcleo como a nivel de citoplasma en las células eucariotas. Los cambios
característicos que ocurren en el núcleo se denominan cariocinesis (división del núcleo
celular) y en el citoplasma incluyendo la división de la membrana celular, citocinesis
(división del citoplasma). La mitosis es una etapa del ciclo celular que ocurre
especialmente en las células somáticas (células del cuerpo, diferentes a las sexuales) en
la cual resultan dos células hijas idénticas desde el punto de vista genético y número de
cromosomas a la célula original.
El ciclo celular es el espacio o período entre la formación de una célula por división celular
(mitosis), hasta el momento en que nuevamente se divide para dar origen a otras células
hijas. En general en el ciclo celular hay dos etapas bien definidas, la interfase y la mitosis
cada una de las cuales se subdivide a su vez en otras fases.(Fig.1).
 Fig.1. Etapas
del ciclo celular.
La interfase se divide en las siguientes etapas

 G1: (Gap 1 o intervalo 1). Etapa en la que la célula activa la síntesis de ARN y
Proteínas. Las células entran en estado de no división hasta que se activa la
siguiente fase S que es preparatoria para la división celular. El metabolismo se
incrementa y así mismla célula aumenta de tamaño.
 S: (Síntesis). En esta etapa se duplica el ADN, o sea que cada cromosoma se
duplica, terminado con dos cromátidas.
 G2: (Gap 2 o intervalo 2). Etapa comprendida entre sintesis y Mitosis, en la que la
continua la síntesis de ARN y proteínas, Hacia el final de esta y el inicio de M la
cromatina se condensa quedando visibles los cromosomas duplicados.
La mitosis, o fase M se subdivide en varias etapas que son, profase, metafase, anafase y
telofase. En cada una Ocurren los siguientes cambios(Fig.2 y fotos Fig. 3)

 Profase: Los cambio de la cromatina ya son visibles con las dos cromátidas
unidas por el centrpometo. El nucleolo desaparece y la membrana nuclear se
 desintegra, empezando a formarse el huso mitótico al final de esta etapa y el inicio
de la metafase (prometafase).
 Metafase: El huso mitótico formado por fibras protéicas paralelas, sobre las que se
intalan los cromosomas duplicados conectándose a ellas por medio de los
centrómeros.
 Anafase: Las cromátidas hermanas de los cromosomas se separan y grupo de
cromátidas separadas se dirigen de manera opuesta hacia los polos o extremos de
la célula, por acciópn de las fibras del huso.
 Telofase: Las fibras del huso desaparecen, y se organiza nueva membrana
nuclear alrededor de cada grupo de coromosomas en los polos, apreciendo
nuevamente el núcleo. La membrana celular de divide dando origen a dos nuevas
células.
Fig.2 .Etapas de la mitosis
FIG. 3: La mitosis en fotos.

MATERIALES

 Cebolla cabezona con brotes de

raíz. (Debe dejarse con la base
en contacto con agua en un
frasco y en oscuridad por lo
menos con ocho días antes.
 Caja Petri
 Tubo de ensayo
 Frasco lavador
 Mechero
 Mango de bisturí con cuchilla
 Papel arroz
 Papel toalla
 Pipeta Pasteur
 3 láminas portaobjetos y
 Cubreobjetos
 Solución para limpieza lentes
 Acetorceina A al 1%
 Acetoorceina B al 1%
EQUIPOS
Microscopio
PROCEDIMIENTO
Corte la parte apical de las raíces nuevas de la cebolla cabezona hasta 1 cm, de
longitud a partir de la punta de la raíz
a. Cortar segmentos de dos a 5 milímetros aproximadamente a partir de
las puntas de raíz (1 por cada raíz) y colocarlos en un tubo de ensayo
que contenga acetoorceina A. Caliente suavemente con varios pases
en la llama de un mechero sin ebullición.
b. Dispensar el contenido del tubo en una caja Petri.
c. Con aplicador o con la punta del bisturí, coger uno por uno los
segmentos de raíz de la caja Petri, y colocarlos en número de tres o
cuatro separados un poco por lámina portaobjetos.
d. Agregar sobre los segmentos en la lámina una gota de acetoorceina B,
colocar la laminilla y con cuidado realizar un squash (comprimir
suavemente y sin romper la laminilla, contra los segmentos de raíz).
Con papel absorbente retire el exceso de líquido.
e. Observar al microscopio las láminas con menor, mayor aumento y si es
posible con inmersión. Identificar la mayor cantidad de etapas de
mitosis.
TALLER.
1. Haga un diagrama de flujo de la metodología seguida en la práctica.
2. Como se observan los cromosomas en las células de cebolla?
3. Por qué se colorean los cromosomas con la acetorceina A y Acetoorceina B?
4. Saque fotos de las diferentes etapas observadas de la mitosis en la práctica, e
indique las partes que alcanza a observar en cada una de ellas: Huso acromático,
ubicación de los cromosomas, y descríbalas..
5. Porque hay tanta actividad de mitosis en las células de la raíz de la cebolla?
6. La mitosis se lleva a cabo en células sexuales o somáticas?
7. Que es el cariotipo. Explique la metodología para hacerlo y dé un ejemplo.
Videos para el desarrollo de la practica en virtualidad

https://www.youtube.com/watch?v=ELLINOKt_vI

https://www.youtube.com/watch?v=vuZ_ozeagAM

BIBLIOGRAFIA

CAMPBELL, N., et al. 2007. Biología. Editorial Médica Panamericana. Buenos

Aires.

CURTIS, H., et al. 2008. Biología. Editorial Médica Panamericana. Buenos Aires.

FREEMAN, S. 2009. Biología. Ed. Pearson. Madrid. 3ª. Ed.

HARVEY, L. et al. 2016. Biología celular y molecular. Ed. Médica Panamericana.
Buenos Aires, Bogotá. /a. ed.
KARP, G. 2013. Biología Celular y Molecular. Conceptos y Experimentos.Ed. Mc Graw
Hill. 6ª. Ed. México.
SOLOMON, E. et al. 2008. Biología: La unidad y la diversidad de la vida. McGraw-Hill.
México. 8ª. Ed.
 LABORATORIO DE BIOLOGIA CELULAR

EXTRACCION CASERA DE ADN

PROFESORA: Concepción Bailón
OBJETIVOS

 Extraer y visualizar ADN a partir de tejidos vegetales

INTRODUCCION
Los ácidos nucleicos denominados así por haberse descubierto en el núcleo celular
son principalmente el ADN (ácido desoxirribonucleico) y ARN (ácido ribonucleico). El
ADN está localizado en el núcleo y las mitocondrias en las células animales y en las
células vegetales además en el cloroplasto. Sus funciones estan relacionadas sobre
todo con el almacenamiento y transmisión de la información genética, aunque pueden
tener funciones estructurales y/o catalíticas.
El ADN, es una macromolécula conformada por la unión de unidades repetitivas
similares o monómeros, denominadas nucleótidos. Un nucleótido (fig.1) está formado
por la unión de tres moléculas: una base nitrogenada (llamada así porque es una
molécula que contiene nitrógeno), un azúcar de cinco carbonos (desoxirribosa) y un
grupo fosfato. Hay cuatro clases de nucleótidos según el tipo de base que contengan:
Guanina, citosina, timina y adenina. Los nucleótidos se unen por medio del grupo
fosfato por medio de enlaces azúcar- fosfato, denominados enlaces 3!-%!
Fosfodiester, porque el grupo fosfato esterifica con dos átomos de oxígeno cada uno
de los azúcares adyacentes (de dos nucleótidos).(fig.2)
Fig. 1.
 Fig.2
La unión de los nucleótidos forma cadenas de gran extensión. La molécula de ADN
está conformada por dos cadenas de nucleótidos unidos por medio de enlaces
hidrógeno entre las bases nitrogenadas hacia el centro de la molécula, por medio del
emparejamiento de bases: adenina con timina (A-T) y citosina con guanina (C-G). Las
dos cadenas unidas se enrollan formando una doble hélice. (Fig. 3)

Fig. 3
La doble Hélice de ADN, se condensa formando otras estructuras, asociándose a
proteínas como son las histonas que se denominan nucleoproteínas que permiten por
su asociación por el carácter básico que tienen.
El aislamiento e identificación del ADN implica su separación del resto de
componentes celulares y de nucleoproteínas asociadas. Lo primero que se hace es
ocasionar la ruptura de membranas celulares, por medio de choque térmico, o por
medio de sales como el cloruro de sodio o maceración en mortero o con licuadora.
Después de romper las membranas celulares se separan los componentes por
centrifugación y quedando el DNA con las nucleoproteínas se procede a su separación
y precipitación.
MATERIALES
Mortero con pistilo, licuadora o batidora
3 frascos con tapa limpios, desengrasados y secos
Un vaso de vidrio pequeño y estrecho como los de tomar aguardiente, limpio y
desengrasado.
1 embudo
Papel de cocina, papel filtro o colador
Cloruro de sodio (sal de cocina)
Detergente liquido
Agua mineral sin gas o destilada
Bicarbonato de sodio
Alcohol absoluto o en su defecto del antiséptico (etanol) frío, mantenido en nevera
desde la noche anterior.
Dos jeringas plásticas de 5 y de 10 mililitros
Gotero de vidrio
Cucharitas tinteras y una sopera
Cuchillo pequeño
Tomate, o banano

PROCEDIMIENTO
1. Preparación de la muestra
Cortar el tomate o el banano en pequeños trozos, y colocarlo en el mortero o en la
licuadora, (con lo que se vaya a ayudar a la trituración del material). Agregar 5
cucharadas soperas de agua mineral o destilada en el mortero o licuadora. Si se utiliza
el mortero macerar hasta que quede la muestra bien diluida; si se utiliza la licuadora,
hacer dos o tres arranques de licuadora por 10 segundos cada uno. Utilizando un
colador, separar la parte líquida del macerado (o licuado), recogiendo la parte líquida
en uno de los frascos con tapa. Se puede utilizar para colar también papel de cocina
con un colador.
2. Preparación de la solución extractora de ADN, o tampón de lisis.
En otro frasco, mezclar 15 cucharadas soperas de agua, 1 cucharadita rasa de sal de
cocina , 1 cucharadita rasa de bicarbonato (si se consigue), y dos cucharaditas de
detergente líquido.(Jabón para manos, o detergente para lavado de platos). Mezclar
bien sin producir espuma, en lo posible con la cuchara.
3. Extracción del ADN
En en un frasco estrecho y alto, mezclar, 10 mililitros, medidos con una jeringa
plástica, con 20 ml medidos también con una jeringa plástica de la solución extractora,
o tampón. Tapar el frasco si se hace en frasco o mezclar o una cucharita, por dos
minutos vigorosamente. Filtrar nuevamente la solución.
4. Precipitación del ADN
En el vaso de aguardiente, o en un frasco estrecho, o si se tiene un tubo de ensayo
con la solución filtrada obtenida en el párrafo anterior con 20 mililitros de alcohol frío,
que se adicional al vaso o al frasco con la jeringa a través de las paredes y
lentamente. Dejar reposar por lo menos por 5 0 10 minutos, sin mover el recipiente de
mezcla. Después de ese tiempo se verán tres capas en el vaso, frasco o tubo de
ensayo que se utilizó para la precipitación. En la parte superior estará el alcohol, en la
parte media, se vera, de pronto burbujas de aires pero una capa como de fibras de
algodón que es el ADN y el parte inferior otra solución que contiene otros elementos
como proteínas.
Con un gotero trate de enrollar el ADN y colóquelo en una tapa para que lo pueda
observar.

TALLER
1. Hacer un diagrama de flujo de la metodología
2. ¿Para que se macera o licua el material vegetal?
3. En donde se halla ADN en las células vegetales.
4. ¿Para qué se utiliza el detergente, y las sales en la extracción del ADN?
5. ¿Porque se precipita el ADN en contacto con el etanol separándose de la
solución?

Practicas virtuales para extracción casera de ADN

https://www.youtube.com/watch?v=PkjtFM_UVxk

https://www.youtube.com/watch?v=Bj1zz1u5jT0

https://www.youtube.com/watch?v=UU0beJDQt48

BIBLIOGRAFIA

CAMPBELL, N., et al. 2007. Biología. Editorial Médica Panamericana. Buenos

Aires.

CURTIS, H., et al. 2008. Biología. Editorial Médica Panamericana. Buenos Aires.

FREEMAN, S. 2009. Biología. Ed. Pearson. Madrid. 3ª. Ed.

HARVEY, L. et al. 2016. Biología celular y molecular. Ed. Médica Panamericana.

Buenos Aires, Bogotá. /a. ed.
SOLOMON, E. et al. 2008. Biología: La unidad y la diversidad de la vida. McGraw-Hill.
México. 8ª. Ed.