Facultad de Ciencias de la Salud

FARMACIA- IV Año
ANALISIS FARMACEUTICO II-TUTORIA

Turno: Matutino

Tema: Parámetros de validación y análisis farmacéuticos a aplicar en tres distintos

Estudiante:
 Georvany Salgado

Tutor:
 Msc. Johanna Olivero

Fecha:
13 de Noviembre-2019
 I. Parámetros analíticos farmacéuticos utilizados en cefadroxilo:
1. Intervalo de linealidad
La linealidad del método se define como la relación entre la respuesta del
instrumento y las concentraciones conocidas de analito. Para establecer la
linealidad se realizó una curva de calibrado empleando disoluciones patrón de
ampicilina comprendidas entre 100-500 ppb.
En los siguientes datos se presentan los gramos de cefadroxilo utilizados y la
concentración de la disolución patrón usada en la preparación de la disolución
madre de cefadroxilo a partir de la cual se prepararon las disoluciones empleadas
en la realización del calibrado.
2. Características del patrón sólido de ampicilina empleado para preparar
la disolución madre.
Patrón Cefadroxilo
 Pureza de estándar % 96,78
 Peso de la muestra g 0,1033
 Peso de la ampicilina pura 0,0999 ppm de la solución concentrada 999,7
A partir de los resultados obtenidos, tras un análisis de regresión lineal, se calculó
la recta de calibrado y su coeficiente de determinación.
y = -3x10-5 x + 0,0000169; R² = 0,9996
Se obtiene los siguientes valores:
3. Análisis estadístico de la recta de calibración
 Parámetro Descripción Valor
 R2 Coeficiente de determinación 0,99961501
 Pendiente 0,0000169
 Desviación
 Estándar de la pendiente 1,9149E-07
 Ordenada -3E-05
 Desviación Estándar de la ordenada
 6,35085E-05 sy/x Desviación estándar de la regresión
 Suma de los cuadrados de regresión 2,8561E-05 df Grados de libertad 3
SC Res.
 Suma de los residuales al cuadrado 1,1E-08
4. Límite de detección (LOD) y Límite de cuantificación (LOQ)
Siguiendo las directrices de la Guidance for Industry, FDA, 2011, se calcularon los
límites de detección (LOD) y cuantificación (LOQ). Para calcular el límite de
cuantificación (LOQ), primero se calcula la altura del pico para el límite de
cuantificación (YLOQ) como 10 veces la desviación estándar y posteriormente
estos valores son usados para calcular las concentraciones asociadas con estas
alturas del pico.
El límite de detección se calcula a partir de los valores obtenidos para:
 YLOD= 0,00015166 y YLOQ = 0,00057553
Al aplicar la fórmula para el cálculo de LOD y LOQ se tiene:
 LOD = (Y LOD – ordenada) / pendiente
 LOQ = (Y LOQ – ordenada) / pendiente
Sustituyendo los valores en la ecuación se tiene el valor correspondiente al límite
de detección y al límite de cuantificación:
 LOD = (YLOD-(-3E-05))/0,0000169= 10,749 µg L -1
 LOQ= (YLOQ-(-3E-05))/0,0000169= 35,830 µg L-1
Estos valores estimados de LOD y LOQ están expresados en términos de la
concentración de la disolución (µg L -1 ) y no en términos de la concentración en la
matriz. Dado que la matriz es agua, estos valores se pueden considerar
equivalentes a µg Kg -1
Se presenta un resumen de los valores obtenidos.
Resumen del límite de detección y límite de cuantificación.
 Parámetro Valor (µg L -1 ) Valor (µg Kg-1)
 Límite de Detección (LOD) 10,75 10,75
 Límite de Cuantificación (LOQ) 35,83 35,83
El máximo valor permitido por la legislación para la cefadroxilo en el estudio es de
4 µg Kg-1 y el valor obtenido del límite de detección es de 10,75 µg Kg-1 y del
límite de cuantificación de 35,83 µg Kg-1 para la recta de calibración, es por ello
que se evidencia la necesidad de efectuar la concentración de la muestra para
poder aplicar el método desarrollado.
Áreas de pico obtenidas para las distintas concentraciones de cefadroxilo.
Muestra Área del pico mAU*min
100 ppb 0,0016
200 ppb 0,0034
300 ppb 0,0051
400 ppb 0,0067
500 ppb 0,0084
 II. Parámetros de validación y análisis farmacéutico utilizados en
ibuprofeno:
Linealidad
 Determinación experimental de la linealidad:
Para la determinación experimental de la linealidad, preparar 7 soluciones de
estándar de Ibuprofeno a 7 concentraciones diferentes: 70%, 80%, 90%, 100%,
110%, 120% y 130% de la concentración nominal utilizada en el método de
ensayo. Leer cada solución por triplicado, comenzando desde la concentración
más baja hasta la más alta y en las condiciones establecidas en el método de
análisis. Luego, graficar la concentración para cada solución estándar versus la
respuesta obtenida (Áreas promedio de cada serie).
Para la determinación de la linealidad del método se sigue el procedimiento
anterior, pero ahora trabajando con la matriz de Ibuprofeno (tabletas).
Realizar el procesamiento estadístico de los resultados determinando:
 Coeficiente de Determinación.
 Coeficiente de Variación de los factores respuesta.
 Intervalo de confianza para el intercepto.
 Intervalo de confianza para pendiente.
 Prueba t para la pendiente.
 Prueba t para el intercepto.
 Test de Cochran.
 Gráfico de los residuales.
 Análisis de Varianza ANOVA.
Criterios de aceptación:
 Coeficiente de determinación (r2) debe ser mayor que 0.999
 El CV de los factores de repuesta no debe ser superior al 2%.
 El intervalo de confianza para el intercepto: el intervalo debe incluir el valor
de
 cero.
 El intervalo de confianza para la pendiente: el intervalo no debe incluir el
valor
 de cero.
 Prueba t para pendiente: texp> ttabla.
 Prueba t para el intercepto: texp < ttabla.
 Test de Cochran: Gexp< Gtabla.
 Gráfico de los residuales: la distribución de los puntos debe ser aleatoria y
no debe reflejar ninguna tendencia.
Exactitud
 Determinación experimental de la exactitud
La exactitud se determina a través del método adición patrón. Preparar soluciones
muestras a tres niveles de concentración, 80%, 100% y 120% de la concentración
nominal de trabajo. Tomar alícuotas de 5 ml de la solución madre de Ibuprofeno y
adicionar cantidades crecientes de la solución estándar de Ibuprofeno hasta lograr
el porcentaje teórico previamente descrito.
Cada muestra se inyecta al Cromatógrafo 3 veces, y se lee según las condiciones
establecidas en el método de análisis. Inyectar las muestras desde la
concentración más baja hasta la más alta.
Graficar la concentración de la curva de calibración normal (CCN) y curva de
adición patrón (CAP) en función de las áreas obtenidas y confrontar las varianzas
de ambas curvas a través de la prueba de Fisher. A partir de las pendientes de
ambas curvas estimar el porcentaje de recobro y establecer si existe efecto de
matriz
Preparar una solución estándar de Ibuprofeno a la concentración nominal,
analizarla por un día, un mismo analista y en el mismo instrumento de medida.
Realizar, consecutivamente, nueve inyecciones al Cromatógrafo. Obtener las
áreas de cada cromatograma y tabular los resultados.
Selectividad
 Determinación experimental de la selectividad
Para estudiar la selectividad del método se analizan muestras de Ibuprofeno a
diferentes condiciones de estrés:
 Hidrólisis básica: solución de NaOH 1N
 Hidrólisis ácida: solución de HCL 1N
 Oxidación: solución de H2O2 30%
El tiempo de exposición de las muestras, en las condiciones de estrés, es de dos
horas.
Cada muestra se inyecta al Cromatógrafo 3 veces, y se leen según las
condiciones establecidas en el método de análisis. Se registran los
cromatogramas y se comparan con el de la solución de estándar de Ibuprofeno.
Límite de Cuantificación:
 Determinación experimental del límite de cuantificación
La estimación del límite de cuantificación del método de ensayo, se determina a
través de la desviación estándar residual de la linealidad del sistema y la
pendiente de la curva de calibración por adición patrón. El cálculo se realiza
utilizando la siguiente fórmula: LC=10 S/b1
Estabilidad
 Determinación experimental de la estabilidad del estándar
Para realizar el estudio de estabilidad del estándar se prepara una solución
estándar, a la concentración nominal (1mg/mL), y se lee por triplicado durante tres
días.
III. Parámetros de Validación y análisis farmacéuticos de Losartan:
Especificidad
 Placebo: El cromatograma obtenido para el placebo no muestra ninguna
señal en el tiempo de retención de la Losartan Compuesto Relacionado A.
 Hidrólisis Ácida: Los picos correspondientes a Losartan se observan
espectralmente puros evidenciándose resolución entre compuesto
relacionado A de Losartan.
 Hidrólisis Alcalina: En el cromatograma no se detectan compuestos de
degradación; la losartan se muestra espectralmente pura.
 Oxidación con Peróxido de Hidrógeno: Los picos correspondientes a
losartan se observan espectralmente puros.
 Oxidación con Luz Ultravioleta: No se observa evidencia de sustancias de
degradación que interfieran con la cuantificación de los principios activos.
Linealidad
 Prueba de Linealidad: Se observa el área bajo la curva linealmente
proporcional a la concentración de los analitos en la muestra en un intervalo
determinado entre 70% - 130%.
 Coeficiente de Correlación: El valor observado experimentalmente del
coeficiente de correlación ( R ) entre la cantidad de principio activo
adicionado y la cantidad recuperada es de 0.9906 para el compuesto
relacionado A de 0,9947 para el Losartan.
 La Prueba de Student para el coeficiente de correlación rechaza la hipótesis
nula de no correlación. El coeficiente de variación de los factores de
respuesta para los datos es de 3.1% para el compuesto relacionado A y
2.6% para losartan.
Exactitud
El porcentaje de recuperación promedio obtenido fue de 101.3% para el
Compuesto Relacionado A de Losartan, 102,4% para el compuesto B de losartan
y 102,2% para el losartan de compuesto C; no existiendo diferencia significativa
entre la recuperación media y el 100%; además el factor concentración no tiene
influencia en la variabilidad de los resultados.
Estabilidad de la muestra en la solución diluente
En el estudio realizado durante 16 horas sobre una muestra preparada a la
concentración de trabajo, se encontró que las respuestas obtenidas para el
Compuesto Relacionado A de Losartan, Compuesto B y C no variaron
significativamente (menor al 2%) frente a la respuesta obtenida inicialmente.
Límites de detección y cuantificación
Para el compuesto relacionado A de Losartan
Los límites de detección y de cuantificación obtenidos a partir de la prueba de
linealidad del compuesto relacionado A de Losartan fueron 0.08 y 0.21 ppm,
respectivamente. Estos límites están por debajo del límite máximo permitido de
dicho compuesto en el producto, el cual se encuentra en máximo 1 ppm.