Bacillus Cereus PDF

PRACTICA 8. RECUENTO DE Bacillus cereus.
 Identifica la técnica utilizada para el recuento de Bacillus cereus.

 Interpreta los fundamentos de los medios de cultivo utilizados para el aislamiento de Bacillus
cereus y realiza pruebas bioquímicas para su confirmación.
COMPETENCIAS  Analiza los resultados obtenidos en los recuentos de los diferentes tipos de alimentos y
compara con la norma vigente para cada uno.
A MODO DE INTRODUCCIÓN.
Bacillus cereus es una bacteria con capacidad de formar esporas, distribuida

de forma amplia, necesita oxígeno para vivir y puede provocar toxiinfecciones al
consumidor. Se localiza sobre todo en el suelo, polvo y vegetales, con lo que se
halla de forma fácil en toda clase de alimentos: hortalizas, frutas, leche,
especias, carne o en las cosechas de cereales.
Su presencia alcanza niveles muy bajos y es muy raro que provoque

enfermedad a quien los consume, sin embargo, su capacidad para formar
esporas garantiza su supervivencia a través de toda la cadena alimentaria si se
cumplen las condiciones óptimas de temperatura y humedad para multiplicarse.
Iconografía tomada de: http://www.plastlabor.com.br/microbiologia-news/87-analise-de-
alimentos-chromagar-bcereus
Bacillus cereus es peculiar. Tiene diferentes características de crecimiento y
supervivencia. Algunos tipos crecen a una temperatura de 4 ºC (psicrotrofas) y no sobreviven a 40 ºC, mientras que otros
viven entre 7 ºC y 55 ºC (mesofilas). La bacteria produce la toxina al final de su fase de crecimiento y, al ser resistente al
calor, es posible que se detecte en alimentos que ya se han sometido a tratamiento térmico. Este proceso elimina la bacteria,
pero no siempre la toxina, que puede permanecer en el alimento. Las infecciones por B. cereus son muy poco habituales.
Durante el periodo 2004-2007, los brotes representaron menos del 1%, según datos del Centro Nacional de Epidemiología
(CNE). En la Unión Europea, los brotes de infección representaron entre el 1% y el 2% durante el periodo 1993-1998, según
la Autoridad Europea de Seguridad Alimentaria (EFSA). No obstante, hoy en día se calcula que su presencia sería mayor,
aunque no se han publicado estadísticas oficiales.
FUNDAMENTO TEÓRICO.
Agar Mossel.
USO: Medio diagnóstico, utilizado para el aislamiento y recuento de Bacillus cereus en alimentos.
PRINCIPIO: Bacillus cereus, ha sido implicado en toxoinfecciones alimentarias, particularmente asociado al consumo de
arroz contaminado, y también en algunos procesos infecciosos en seres humanos y animales. El medio de cultivo, contiene
los nutrientes necesarios para el apropiado desarrollo bacteriano. Es diferencial debido a la presencia de manitol. Bacterias
fermentadoras de manitol, acidifican el medio produciendo el viraje del indicador de pH rojo de fenol del rojo al amarillo,
mientras las bacterias que no lo fermentan, producen colonias del color del medio.
COMPOSICIÓN
Iconografía tomada de: http://www.kontrollstaemme.de/eshop/single-view/bid/78/produkt/bacillus-cereus.html
La adición de emulsión de yema de huevo, mejora el aislamiento y la esporulación de esta bacteria, además favorece y
facilita la visualización de las colonias de B. cereus ya que se produce un halo de precipitación de la lecitina hidrolizada
alrededor de las mismas. Puede lograrse el aislamiento selectivo de B. cereus, inhibiendo el desarrollo de la flora
acompañante presente en la muestra, por el agregado del suplemento para Bacillus cereus con el que se obtiene una
concentración final de 100 U de Polimixina B por ml de medio.
METODOLOGÍA.
Muestra: Por grupo de laboratorio traer cualquier producto de los que se mencionan a continuación para su respectivo
análisis: alimentos preparados en restaurantes (comida rápida), arepas, productos precocidos, chocolisto, milo, sopas
deshidratadas, granos de cereales, harina de maíz, harina de arroz, avena en hojuelas, leche en polvo, queso doble crema,
postre de leche pasteurizado, mayonesa, condimentos. Ver Tabla Normatividad Alimentos.
Equipos y Materiales: Medios de cultivos, asas microbiológicas, micropipetas, puntas estériles, etc.
Descripción:
1. Preparar la muestra y las diluciones de los homogenizados tal como se ha recomendado.

2. Pipetear 0.1 ml de cada una de las diluciones sobre la superficie del agar Mossel. Extender el inóculo sobre la superficie
del agar, con la ayuda de la varilla de jockey, hasta que la superficie quede seca.
3. Invertir las placas e incubarlas a 35°C +/- 2°C durante 18-24 horas.
4. Contar las colonias rosadas (manitol negativo) que presenten un halo denso (lecitina positiva) sobre un fondo rojo
violeta.
5. Tomar como mínimo 3 colonias típicas y colorearlas por el método de Gram. Se observan bacilos G (+), con extremos
cuadrados, en cadenas cortas, largas, con esporas elipsoidales, centrales o subterminales de pared fina que no
deforman el bacilo.
Confirmación de Bacillus cereus mediante Pruebas Bioquímicas:
Inocular con asa los tubos de los caldos glucosa, xilosa, arabinosa, el caldo nitrato y
el caldo Voges Proskauer.
SIEMBRAS Sembrar por estría en agar leche, agar almidón, agar gelatina y agar sangre de
cordero.
Incubar a 35°C+/-2°C durante 24 horas.
REVELACIÓN DE PRUEBAS
Añadir a cada uno de los tubos, unos miligramos del reactivo de Griess y observar el
Reducción de color que presenta: rojo (+), reducción de nitratos. A los tubos negativos, agregar una
Nitratos pequeña cantidad de polvo de zinc, agitar.
Color rojo: no reducción de nitratos.
Color del reactivo: reducción de nitratos.
(Glucosa, xilosa y arabinosa): observar el cambio de color según el indicador de pH

Fermentación de utilizado.
Carbohidratos Rojo de fenol: vira de amarillo a rosado cuando la reacción es positiva.
Andrade: vira de rosado a amarillo cuando la reacción es positiva.
Producción de Acetil Adicione 0.6 ml de la solución alfa naftol al 5% y 0.2 ml de una solución de hidróxido
Metil Carbonil de potasio al 40%. Agitar suavemente. Rojo (+)
Hidrolisis de la La aparición de una zona clara alrededor de la estría realizada en agar leche indica
Caseína hidrólisis de la caseína.
Cubrir la superficie de la placa de agar almidón con solución de lugol. La aparición de
Hidrolisis del Almidón
una zona clara alrededor de la estría indica la hidrólisis del almidón.
Verter sobre la superficie de la placa de agar gelatina, cloruro de mercurio al 15% y
Hidrolisis de la eliminarlo después de 5 minutos, lavar con agua corriente; la reacción es positiva cuando
Gelatina una zona clara rodea la estría.
Hemólisis Beta-Hemólisis.
REGISTRO BIOQUÍMICO DE Bacillus cereus

Cálculo e interpretación de los resultados:
Determine el número total de colonias después de las 48 horas de incubación y la proporción de colonias confirmadas por
las pruebas bioquímicas (A: número de colonias confirmadas, por lo general 5). Después de la identificación, calcule para
cada caja el número a de colonias que cumplen con los criterios de identificación, utilizando la siguiente ecuación:
A= b x C
A
B = es el número de colonias que cumplen con los criterios de identificación entre las colonias identificadas A;
C = es el número total de colonias presuntivas contadas en la caja Aproxime el resultado calculado hasta el número entero
más próximo.
Ejemplo: el recuento ha producido los siguientes resultados:
10-3: 66 ufc
10-4: 4 ufc
Se realizó el ensayo de las colonias seleccionadas así:
De las 66 ufc, 8 se sometieron a ensayo, 6 de las cuales cumplieron con los criterios, entonces a=50
De las 4 colonias, las 4 cumplieron con los criterios, entonces a=4
N= ∑a _ = 50+4___ = 54 _ = 490909 = 490000 = 4,9 *105 ml o gr.
V*1.1*d 0.1*1.1*10 -3 0.11*0.001
Ejemplificación Recuento de Bacillus cereus:
Segmento I:
Segmento II:
Segmento III:
Ejemplificación Crecimiento Bacillus cereus:
Fotografías tomadas: por los estudiantes de Microbiología de Alimentos en la Universidad de Santander, UDES (2015).
Resultados: Entrega Informe.
Temas para revisión:
 Fundamentos de medios de cultivo empleados en la práctica.

 Toxigénesis y antibióticos extraídos del Bacillus cereus e importancia de Bacillus cereus en la industria de alimentos.
 Métodos rápidos y técnicas moleculares que existen en el mercado para la identificación de B. cereus en alimentos.
Referencias Bibliográficas:
D.A.A. Mossel, B. Moreno y C.B. Struijk. Microbiología de los Alimentos. Segunda. Zaragoza: ACRIBIA, S.A.,
2003.
Holguín Hernández, Martha S y Higuera de Rozo, Mariana Isabel. Manual de Técnicas de Análisis para Control
de Calidad Microbiológico de Alimentos para Consumo Humano. Ministerio de Salud. INVIMA. Santafé de Bogotá
D.C., 1998.
Manual de Medios de Cultivo. MERCK. Darmstadt, Alemania. 1994.
NTC 4092. Microbiología de Alimentos y Productos para Alimentación Animal. Requisitos generales y directrices
para análisis microbiológicos. ICONTEC. Bogotá, D.C. 2009.
Salgado C., María Teresa. Microbiología de Alimentos. Primera. Manizales: Universidad de Caldas, 2006. pág.
146.
Páginas web:
Normatividad alimentos: http://web.invima.gov.co/portal/faces/index.jsp?id=1303
Bad Bug Book: Introduction. Foodborne Pathogenic Microorganisms and Natural Toxins: Handbook:
http://www.fda.gov/Food/FoodSafety/FoodborneIllness/FoodborneIllnessFoodbornePathogensNaturalToxins/BadBugB
ook/default.htm

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PRACTICA 8. RECUENTO DE Bacillus cereus.

 Identifica la técnica utilizada para el recuento de Bacillus cereus.

Bacillus cereus es una bacteria con capacidad de formar esporas, distribuida

Su presencia alcanza niveles muy bajos y es muy raro que provoque

Iconografía tomada de: http://www.kontrollstaemme.de/eshop/single-view/bid/78/produkt/bacillus-cereus.html

1. Preparar la muestra y las diluciones de los homogenizados tal como se ha recomendado.

Color del reactivo: reducción de nitratos.

(Glucosa, xilosa y arabinosa): observar el cambio de color según el indicador de pH

REGISTRO BIOQUÍMICO DE Bacillus cereus

Ejemplo: el recuento ha producido los siguientes resultados:

Se realizó el ensayo de las colonias seleccionadas así:

Ejemplificación Recuento de Bacillus cereus:

Resultados: Entrega Informe.

Temas para revisión:

 Fundamentos de medios de cultivo empleados en la práctica.

Manual de Medios de Cultivo. MERCK. Darmstadt, Alemania. 1994.

Normatividad alimentos: http://web.invima.gov.co/portal/faces/index.jsp?id=1303

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