OBJETIVOS

Objetivo General:

Determinar los métodos para evaluar las proteínas del compartimiento visceral
mediante los niveles de Transferrina, Prealbúmina, Proteínas totales y Albúmina
en suero, que por su relativamente corto tiempo de vida y las proteínas del
compartimiento somático ò esquelético la evaluaremos mediante la relación entre la
excreción de la creatinina urinaria en 24 horas y la talla de la persona,así mismo
mediante el Peso y la Talla se evaluará la masa corporal total.

Objetivos Específicos:

 Aprender la importancia de la masa proteica visceral y esquelética, y reconocer en qué

consiste en relación a la bioquímica.

 Aplicar adecuadamente los reactivos que intervienen en la práctica.

 Realizar y verificar correctamente observaciones que actúen en nuestras muestras, así

como dicho instrumento.
INTRODUCIÓN:

Las proteínas son compuestos orgánicos macromoleculares, ampliamente distribuidos en el

organismo y esenciales para la vida. Actúan como elementos estructurales y de transporte y
aparecen bajo la forma de enzimas, hormonas, anticuerpos, factores de coagulación, etc. La
proteína más abundante en plasma es la albúmina. Una de sus funciones más importantes es
la de permitir el transporte de ácidos grasos, hormonas esteroides, bilirrubina, catecolaminas,
que en forma libre son insolubles en medio acuoso. La concentración de albúmina en plasma
influye notablemente en el mantenimiento de la presión coloidosmótica, lo que estaría
relacionado con su relativamente bajo peso molecular y su gran carga neta. En condiciones
patológicas como pérdidas renales, desnutrición, infecciones prolongadas, etc., suelen
presentarse hipoproteinemias, mientras que en otras como mieloma múltiple, endocarditis
bacteriana y hemoconcentraciones de diversos orígenes, se observan hiperproteinemias. En
general, ambas situaciones se ven acompañadas también por hipoalbuminemias. Los
aumentos anormales de albúmina son ocasionales y se relacionan casi siempre con
deshidratación que produce el consecuente aumento en el contenido proteico del plasma. El
análisis del nivel de proteínas en sangre es un análisis que se realiza por separado o en una
petición general de bioquímico en la sangre. Mide la cantidad de proteínas presentes en el
suero. Las proteínas son un constituyente muy importante de las células y los tejidos del
cuerpo humano. Se componen de aminoácidos. Hay diferentes tipos de proteínas con
diferentes funciones, son así proteínas los enzimas, algunas hormonas, la hemoglobina, el
LDL (transportadora de colesterol), el fibrinógeno, el colágeno, las inmunoglobulinas, etc.
Las proteínas totales del suero se pueden separar en dos grandes grupos la Albúmina y las
globulinas. La albúmina es la proteína de más concentración en la sangre. La albúmina
transporta muchas moléculas pequeñas (bilirrubina, progesterona, y medicamentos), y tiene
también la función de mantener la presión sanguínea ya que favorece la presión osmótica
coloidal para mantener líquidos en el torrente sanguíneo y que no pasen a los tejidos,
manteniendo un equilibrio
EVALUACION DE LA MASA PROTEICA VICERAL Y ESQUELETICA:

Evaluar el estado nutricional de un individuo consiste en síntesis en el conocimiento de en

qué grado las demandas bioquímicas, fisiológicas y metabólicas están siendo cubiertas por la
ingestión de nutrientes, por lo que reflejará, si la ingestión, absorción y utilización de los
mismos son adecuadas a las necesidades del organismo teniendo en cuenta su
biodisponibilidad, pérdidas y las reservas. Es tal la preocupación que existe de unos años a
esta parte por el estado nutricional de los individuos, como un indicador de salud, que
desencadenó en la búsqueda de parámetros que siendo fáciles de medir y de cálculo simple,
específicos, fiables, no invasivos y pocos costosos, puedan utilizarse como indicadores
nutricionales de forma rutinaria en la práctica diaria. Es fácil entender que muy pocos
parámetros van a cumplir todas las condiciones anteriormente expuestas, por ello es
indispensable un profundo conocimiento de su metodología e interpretación para que puedan
ser utilizados de la forma más conveniente.

La manera
más
adecuada de abordar la evaluación del estudio del estado nutricional es realizarlo en forma
gradual, donde el primer paso sería conocer si existe algún problema nutricional, para en caso
afirmativo proceder a una valoración más específica, determinando que compartimentos
corporales pueden estar afectados. El primer compartimento que debe ser evaluado es el
compartimento graso, ya que las grasas son las primeras reservas que el organismo va a
utilizar para aprovisionarse de energía, y en un segundo nivel recurrirá a otros sustratos como
las proteínas, pudiendo establecerse finalmente el diagnóstico nutricional.

La primera etapa abordable de estos estudios será la evaluación del estado nutricional global,
que se basa en determinar mediante medidas indirectas si las necesidades del organismo están
siendo cubiertas, pero como comentamos anteriormente, no identificaremos la parte del
cuerpo que puede encontrase afectada. Para este tipo de evaluación recurriremos al análisis de
la dieta, la determinación del peso y a la capacidad de la repuesta inmune del organismo.
MARCO TEORICO:

MÉTODOS DE DETERMINACIÓN DE PROTEÍNAS TOTALES

Los métodos para medir la concentración de proteínas totales (PT) pueden clasificarse
en:

1. Físicos:

• Absorbancia del enlace peptídico a 190 nm: se basa en la propiedad que tiene el enlace
peptídico de absorber a esa longitud de onda.

• Absorbancia de los aminoácidos aromáticos a 280 nm: su principal limitación es que

no todas las proteínas tienen la misma proporción de estos aminoácidos, lo que le resta
exactitud.

• Refractometría: método de elección, pero hoy en día en la práctica clínica se está dejando de
usar.

2. Químicos:

Reacción de Kjeldahl: considerado históricamente como el método referencia.

Método de Lowry: se basa en la reducción del reactivo de Folin-Ciocalteau
provocada por el complejo unión peptídico-Cu2+ en medio alcalino con la
participación de restos fenólicos (tirosilos).
Reacción de Biuret: se fundamenta en la formación de un complejo, en medio
alcalino, entre el Cu2+y los enlaces peptídicos (absorción a 540 nm). En la práctica
clínica, es una de las metodologías más usada para el dosaje de PT.
Métodos turbidimétricos (precipitación con ácido tricloroacético-TCA o
sulfosalicílico)
Método de Bradford

En el Trabajo Práctico se determinará la concentración de proteínas por el Método de

Bradford.

Fundamento: es una técnica sensible que consiste en la medición de la extinción

provocada por el cambio en el espectro visible de un colorante (Coomasie Blue G-250)
cuando éste se une a las proteínas (absorbiendo asía 595 nm). Esta unión se realiza a través
de grupos ionizados y se comprueba proporcionalidad con la concentración de
proteínas contenidas en la muestra.

La determinación del contenido proteico de una muestra requiere la comparación del valor de
absorbancia de la muestra con los obtenidos a partir de cantidades conocidas de
proteínas, con los que se construye una curva de calibración: a mayor cantidad de
proteínas, mayor color desarrollado y por lo tanto,mayor absorbancia. Recordar que esta
proporcionalidad es sólo lineal hasta un cierto límite de concentración.

La curva de calibración

Se requiere contar con un solución testigo de proteína de concentración conocida

(generalmente se utiliza albúmina sérica bovina o inmunoglobulina G). Se preparan por lo
menos 4 tubos testigos con distintas cantidades de proteínas (T1, T2, T3 y T4) y otro tubo
denominado blanco (en el cual el volumen de la solución de proteínas se reemplaza por
agua). En forma simultánea, se procesan las muestras incógnitas. Luego se agrega la
misma cantidad del reactivo de Bradford a cada tubo (dado que en definitiva se compara
el color desarrollado evidenciado por la absorbancia de la solución en cada tubo, sus
volúmenes finales deben ser iguales).

Protocolo ejemplo de determinación de proteínas porel método de Bradford:

Una vez preparados los tubos, se lee la absorbancia de cada uno de ellos a la
longitud de onda de 595 nm. La absorbancia obtenida en el tubo blanco debe ser restada a
cada uno de los tubos restantes. Una opción es calibrar el equipo con el tubo blanco: esto
consiste en asignar a la absorbancia del blanco, una lectura igual a cero. De esta manera,
automáticamente esta lectura es “restada” por el fotocolorímetro a todas las muestras
posteriormente leídas en el equipo. Los resultados obtenidos se vuelcan en una tabla como la
que sigue.
Con las absorbancias de los tubos testigos obtenidas en el fotocolorímetro, se
construye el gráfico de Absorbancia a 595 nm en función de la cantidad de proteína (mg).

En el ejemplo, los tubos conteniendo testigos 4 y 5muestran una desviación de la zona lineal
de cumplimiento de la Ley de Lambert- Beer, motivo por el cual no se consideran al trazar la
recta promedio.

Para determinar la concentración de proteínas en la muestra (X), se interpolan en la curva de

calibración las absorbancia/s correspondientes a el/los tubo/s que contenían la muestra. Así,
sabiendo la cantidad de proteína (X) contenida en el volumen de muestra utilizado en la
medición, puede calcularse la concentración proteica.

Bases clínicas de muestra :

Bandas principales del proteinograma:

1. Pre-albúmina:

o Valor normal: 0,3 g/100 ml, incluye a la transtiretrina.

o La visualización depende de que todas las condiciones técnicas sean las óptimas.
o Su disminución es un marcador sensible del estado nutricional reacción
inflamatoria.
o La presencia de esta banda no se informa.

2. Albúmina:

o Valor normal: 3,5-5,0 g/100 ml.

 o Es la proteína más pequeña y con mayor número de grupos cargados
negativamente; esta característica le permite migrar con mayor rapidez.
o Constituye una banda homogénea, puesto que se trata de una única proteína, actúa
como trasportador activo de diferentes compuestos tales como ácidos grasos,
pigmentos biliares, hormonas esteroides, fármacos y otros.
o Es un reactante de fase aguda negativo, por lo que en estados infecciosos agudos está
disminuida.
o Estados asociados con hipoalbuminemia: estados de malnutrición o malabsorción,
enfermedad hepática severa (por fallas en su síntesis) o aumento de su
catabolismo, no se conoce un estado patológico con hiperalbuminemia.

3. A1-globulina:

o Valor normal: 0,1-0,3 g/100 ml.

o Banda formada principalmente por: α1-antitripsina (mayoritaria), glucoproteína
ácida α1 u orososeromucoide, transcortina y globulina fijadora de tirosina.
o Un aumento o disminución de esta banda se debe a un aumento o disminución de α1-
antitripsina (predomina en la fracción α1) - α1-antitripsina:
o Cumple con el 90% de la acción antiproteásica del organismo; es el inhibidor
biológico de las enzimas proteolíticas de los lisosomas). Es un reactante de fase
aguda positivo.
o Aumento de α1-antitripsina: estrés, reactante de fase aguda, tumores;
o Disminución de α1-antitripsina: estados de malnutrición/malabsorción, enfermedad
hepática severa, o aumento de su catabolismo (procesos relacionados con la
disminución de cualquier proteína).
o Glucoproteína ácida α1: inhibe o inactiva a la progesterona, es un
reactante de fase aguda positivo.
o Transcortina: transporta 2/3 del cortisol y otros corticoides. El cortisol
circulante se une también (minoritariamente) a la albúmina. La transcortina se
sintetiza en el hígado.

Proteína fijadora de tiroxina: une T3 (triyodotironina) y T4 (tiroxina). Las hormonas

tiroideas circulantes se unen también a la prealbúmina.
 o Tanto la transcortina como la proteína fijadora detirosina aumentan en el embarazo y
tras la administración de estrógenos.

4. A2-globulina:

o Es una fracción heterogénea, valor normal: 0,5-0,75 g/100 ml.

o Está integrada por: haptoglobina, α2-macroglobulina y ceruloplasmina.

- haptoglobina:

o Su función es captar hemoglobina (Hb): La formación del complejo Hb-haptoglobina

impide que la pequeña cantidad de Hb liberada por hemólisis normal intravascular
sea excretada por orina, evitando así el efecto tóxico de la Hb libre y la pérdida de
Fe.
o Es un reactante de fase aguda positivo, (aumenta en estados infecciosos agudos).
o Su disminución se asocia a cualquier estado patológico que curse con
hemólisis intravascular debido a un aumento de su consumo (anemia hemolítica, etc).
- α2-macroglobulina:
o Está aumentada fisiológicamente en el embarazo y en niños (dada su función
relacionada con el desarrollo). - ceruloplasmina:
o Participa en el metabolismo del hierro y el Cu++, ya que una molécula puede fijar
hasta 8 átomos de Cu++, es un reactante de fase aguda positivo, y aumenta en
tumores y leucemias.
o La deficiencia congénita de ceruloplasmina desarrolla la enfermedad de Wilson.

5. β-globulinas:

o Valor normal: 0,6-1,1 g/100 ml

o β1-globulina: incluye a la transferrina y la hemopexina.
o β2-globulina: incluye a C3 - transferrina:
o Es una proteína que fija Fe (cada molécula puede fijar 2 Fe).
o Es un reactante de fase aguda negativo, pero además siempre que disminuya la
albúmina, disminuye β1 (excepto en el embarazo) por disminución de la
transferrina.
 o En procesos con déficit de Fe (por estimulación de la síntesis de su proteína
transportadora) aumenta sus niveles, al igual que en el embarazo; - Hemopexina:
o •Ffija y transporta al grupo hemo liberado de la Hb en la hemólisis, cuando
está saturada su capacidad de captación por la haptoglobina. - C3:
o Participa del sistema del complemento.
o Un reactante de fase aguda positivo y disminuye (además de las situaciones
generales) y en enfermedades autoinmunes (LES, AR).

6. γ-globulinas:

o Es una zona heterogénea

o Si la muestra es plasma, aparece en esta región (post-β2 o g-rápida)
una banda homogénea que corresponde al fibrinógeno (0,3 g/100 ml),
esto constituye una interferencia y debe pedirse nueva muestra (suero);
o Está constituido mayoritariamente por inmunoglobulinas (sin embargo
es importante recordar en la búsqueda de algún componente
monoclonal que éstas proteínas pueden migrar desde α2 hasta el punto de
siembra), incluye:
o IgG: monómero de 160 kDa, se reconocen 4 subclases, es la
mayoritaria, puede atravesar la placenta y es la principal inmunoglobulina
en la respuesta inmune secundaria;
o IgA: se puede encontrar como monómero, dímero o trímero, media la
inmunidad de mucosas;
o IgM: es una inmunoglobulina pentamérica, asimétrica, de PM hasta
1000 kDa, no atraviesa la placenta y es la inmunoglobulina que media la
respuesta inmune primaria;
Desarrollo experimental :

MATERIALES
o Espectrofotómetro.
o Tubos de ensayo
o Pipetas.
o Agua destilada.
o Reactivo EDTA/Cu: complejo EDTA/Cu 13 mmol/l en NaOH 875 mmol/l y alquil
aril polièter (AAP).
o •Reactivo BCF: solución de Bromo Cresolsulfon Ftaleìna (en polioxietilèn lauril éter).
 o • Micropipetas.

MÉTODO
Se procede por administrar las determinadas cantidades sugeridas para cada uno de los tubos
de reactivo que son dos, continuación se aplicaran distintas cantidades que variaran de
acuerdo a la indicación del cuadro representado, el cual se distingue debido a las excepciones
que se acentúan dependiendo de las sustancias tanto en suero como en orina. Se procede a
mezclar cada sustancia aplicada en los diferentes tubos, y, se lleva a baño maría a 37 °C
durante 11 minutos y 30 segundos y se leerá ante el espectrofotométro a 600 nm colocando
en la celda cada determinada muestra de cada uno de los tubos en el caso del experimento A
que consta de suero, a diferencia del experimento B que trabajamos con orina el cual se
incuba a temperatura ambiente y durante 20 minutos.
• Reconocer cada uno de los materiales a utilizar.
• Seguir de manera rigurosa las cantidades establecidas por el profesor en el cuadro de
la pizarra, de lo contrario puede afectar a la experiencia.
• Los estudiantes se turnan ante todos los miembros de la mesa para realizar éste
procedimiento.
• Con ayuda de la otra pipeta empezamos a utilizar cada una de las soluciones
añadiéndola de forma exacta para que cada uno de los tubos que ocuparan las muestras.
• Se lleva a cabo el proceso de determinar la diferencia ante el reconocimiento de masa
visceral y esquelética en ambos experimentos.

Resultados :

Experimento A
DETERMINACIÓN DE PROTEINAS TOTALES Y ALBÚMINA EN SUERO

Fundamentos del método:

Determinación de Proteínas Totales:
Los enlaces peptìdicos de las proteínas reaccionan con el ión cùprico, en medio alcalino, para
dar un complejo color violeta con máximo de absorción a 540 nm, cuya intensidad es
proporcional a la concentración de proteínas totales en la muestra.
Determinación de Albúmina:
La albúmina reacciona específicamente (sin separación previa) con la forma aniónica de la
Bromo Cresolsulfon Ftaleìna (BCF), en presencia de un exceso de colorante, en medio
tamponado a pH 3,8. El aumento de absorbancia a 625 nm respecto al blanco de reactivo, es
proporcional a la cantidad de albúmina presente en la muestra.

Procedimientos:
DETERMINACIÓN DE PROTEINAS TOTALES
Blanco Standard Muestra
Reactivo 3ml 3ml 3ml
Agua destilada 30uL - -
Standard - 30uL -
Muestra - - 30uL
Mezclar por agitación. Incubar por 11min y 30 s. Leer en espectrofotómetro a 546nm.

A muestra
Calculo⋮ ×n
A stardard
0.573
× 6=7.67
0.448

DETERMINACIÓN DE ALBÚMINA
Blanco Standard Muestra
Reactivo 3.1ml 3.1ml 3.1ml
Agua destilada 10uL - -
Standard 1.83uL 20uL -
Muestra - - 20uL
Mezclar por agitación. Incubar por 25 s. Leer en espectrofotómetro a 600nm.
 A muestra
Calculo⋮ ×n
A stardard
1.948
×5=3.32
1.83

Experimento B
DETERMINACIÓN DE CREATININA URINARIA
Fundamentos del método:
La creatinina reacciona con el picrato alcalino en medio tamponado, previa desproteinización
con ácido pícrico, obteniéndose un cromógeno que se mide a 510 nm.

Procedimiento:
DETERMINACIÓN DE CREATININA URINARIA
Blanco Standard Muestra
Standard - 0.5ml -
Orina Diluida - - 0.5ml
Agua destilada 1ml 0.5ml 0.5ml
Reactivo 1 2ml 2mL 2ml
Reactivo2 0.5ml 0.5ml 0.5ml
Mezclar por agitación. Incubar por 20 min. Leer en espectrofotómetro a 510nm.
A muestra
Calculo⋮ ×n
A stardard
0.093
× 2=1068.96
0.174
Resultados:

Las proteínas totales se solicitan frecuentemente en una analítica rutinaria. Proporcionan una
información general sobre el estado nutricional, por ejemplo si se ha sufrido una pérdida de
peso injustificable recientemente. También se solicita junto con otras pruebas para
proporcionar información si se presentan síntomas sugestivos de alteración hepática o renal, o
si se sospecha la existencia de un trastorno de la médula ósea o para investigar la causa de
una retención anormal de líquido en los tejidos (edema).

Los resultados de las proteínas totales se suelen interpretar junto con los de otras pruebas y
pueden porporcionar al médico información acerca del estado general del individuo en
relación a la nutrición y/o a la existencia de trastornos que afecten a órganos vitales como el
hígado y el riñón. Si los niveles de proteínas totales están alterados, será necesario realizar
otras pruebas para alcanzar el diagnóstico.Unos niveles bajos de proteínas pueden sugerir una
enfermedad hepática, una enfermedad renal o un trastorno en el que las proteínas no se
digieren o no se absorben adecuadamente a nivel intestinal. Pueden observarse
concentraciones disminuidas de proteínas en malnutrición severa y en trastornos que causan
malabsorción, como enfermedad celíaca o enfermedad inflamatoria intestinal Pueden
observarse niveles elevados de proteínas totales en procesos inflamatorios o infecciosos
crónicos como hepatitis víricas o infección por el VIH. Niveles elevados de proteínas también
pueden asociarse a trastornos de la médula ósea como el mieloma múltiple

Cuestionario :

1.- Con los datos obtenidos en los experimentos, realizar la valoración nutricional de
dicha persona sabiendo que es varón, pesa 60 Kg, su talla es 1,56 m y su volumen
urinario en 24 horas fue de 1000 ml.

Hombre:
- Peso: 60 kg
- Talla: 1.56 m
- C x U: 1000 ml
 Relación C x U 24h/Talla
 1000
=641.02
1.56

DESNUTRICIÓN
 Relación Peso/Talla
60
=38.46
1.56
NORMAL
 Proteínas totales
0.573
× 6=7.67
0.448
NORMAL

 Albúmina
1.948
×5=5.32
1.83
NORMAL

2.- ¿Cómo hubiera sido la valoración nutricional en el caso que la persona hubiera sido
mujer?

Mujer:
- Peso: 60 kg
- Talla: 1.56 m
- C x U: 1000 ml
 Relación C x U 24h/Talla
1000
=641.02
1.56
 BAJO
 Relación Peso/Talla
60
=38.46
1.56
ELEVADO
 Proteínas totales
0.573
× 6=7.67
0.448
NORMAL

 Albúmina
1.948
×5=5.32
1.83
NORMAL

3.- Mencione las características generales de las proteínas y su clasificación.

Las proteínas deben su importancia biológica al número de funciones que desempeñan, entre
las que podemos citar:

A. Catalíticas; la práctica totalidad de las regiones biológicas están catalizadas

por enzimas específicas, de las que existen unas 2.000 distintas en cada célula. Todas
ellas son proteínas.
 B. Reguladoras; hormonas peptídicas como la insulina (que regula el metabolismo de la
glucosa), la hormona del crecimiento o paratiroidea (que regula el metabolismo del
calcio y del fósforo).
C. Estructurales; forman parte de las membranas celulares, los microtúbulos, cilios, etc.
Son parte importante de las uñas, piel, etc.
D. Transporte; como la hemoglobina que transporta oxígeno por la sangre.
E. Acumulación de sustancias; como la ovoalbúmina de la clara del huevo y la caseína
de la leche, que actúan como proteínas de reserva.
F. Movimiento; la contracción muscular se debe a la interacción de filamentos proteicos
de actina y miosina.
G. Defensa inmunitaria; las inmunoglobulinas dan lugar a los anticuerpos, que se forma
como respuesta a la presencia de sustancias extrañas o antígenos, a los que aglutinan o
precipitan.

Las proteínas pueden clasificarse en tres grupos, en función de su forma y su solubilidad.

 Proteínas fibrosas: las proteínas fibrosas tienen una estructura alargada, formada por
largos filamentos de proteínas, de forma cilíndrica. No son solubles en agua. Un
ejemplo de proteína fibrosa es el colágeno.

 Proteínas globulares: estas proteínas tienen una naturaleza más o menos esférica.
Debido a su distribución de aminoácidos (hidrófobo en su interior e hidrófilo en su
exterior) que son muy solubles en las soluciones acuosas. La mioglobina es un claro
ejemplo de las proteínas globulares. Estas se clasifican en:

 Hélice alfa: esta estructura se desarrolla en forma de espiral sobre sí misma

debido a los giros producidos alrededor del carbono beta de cada aminoácido. La
mioglobina es un claro ejemplo de proteína de hélice alfa.
 Hoja plegada beta: cuando la cadena principal se estira al máximo, se adopta
una configuración conocida como cadena beta. La tenascina es un ejemplo de las
proteínas hoja plegada beta.
 Alfa/beta: Las proteínas que contienen una estructura secundaria que alterna la
hélice alfa y la hoja plegada beta. Un ejemplo de proteína alfa/beta es la triosa
fosfato isomerasa. Esta estructura es conocida como un barril TIM. La helicoidal
 alterna y los segmentos de hoja plegada beta forman una estructura de barril
cerrado.
 Alfa + Beta: En estas proteínas, la hélice alfa y la hoja plegada beta se producen
en regiones independientes de la molécula. La ribonucleasa A es un ejemplo de
proteína alfa + beta

 Proteínas de membrana: son proteínas que se encuentran en asociación con las

membranas lipídicas. Esas proteínas de membrana que están embebidas en la bicapa
lipídica, poseen grandes aminoácidos hidrófobos que interactúan con el entorno no
polar de la bicapa interior. Las proteínas de membrana no son solubles en soluciones
acuosas. Un ejemplo de proteína de membrana es la rodopsina. Debes tener en cuenta
que la rodopsina es una proteína integral de membrana y se encuentra incrustada en la
bicapa. La membrana lipídica no se muestra en la estructura presentada.

4.- ¿Qué son las globulinas y cuáles son sus clases?

Las globulinas son un grupo de proteínas insolubles en agua que se encuentran en todos los
animales y vegetales.

Entre las globulinas más importantes destacan las:

 Seroglobulinas (de la sangre).

 Las lactoglobulinas (de la leche).
 Las ovoglobulinas (del huevo).
 La legumina.
 El fibrinógeno.
 Los anticuerpos (gamma-globulinas).

5.- Describa los métodos de dosaje tanto químicos como enzimáticos para proteínas
totales, albúmina, globulina y creatinina.
Los métodos para medir la concentración de proteínas totales (PT) pueden clasificarse en:

1. Físicos:

 Absorbancia del enlace peptídico a 190 nm: se basa en la propiedad que tiene el enlace
peptídico de absorber a esa longitud de onda.
 Absorbancia de los aminoácidos aromáticos a 280 nm: su principal limitación es que no
todas las proteínas tienen la misma proporción de estos aminoácidos, lo que le resta
exactitud.
 Refractometría: método de elección, pero hoy en día en la práctica clínica se está
dejando de usar.

2. Químicos:

 Reacción de Kjeldahl: considerado históricamente como el método referencia.

 Método de Lowry: se basa en la reducción del reactivo de Folin-Ciocalteau provocada
por el complejo unión peptídico-Cu2+ en medio alcalino con la participación de restos
fenólicos (tirosilos).
 Reacción de Biuret: se fundamenta en la formación de un complejo, en medio alcalino,
entre el Cu2+ y los enlaces peptídicos (absorción a 540 nm). En la práctica clínica, es
una de las metodologías más usada para el dosaje de PT.
 Métodos turbidimétricos (precipitación con ácido tricloroacético-TCA o
sulfosalicílico)
 Método de Bradford

Método de Biuret

 Se basa en la formación de un complejo coloreado entre el Cu2+y los grupos NH de

los enlaces peptídicos en medio básico. 1Cu2+seacompleja con 4 NH. La intensidad de
coloración es directamente proporción a la cantidad de proteínas (enlaces peptídicos) y
la reacción es bastante específica, de manera que pocas sustancias interfieren. La
sensibilidad del método es muy baja y sólo se recomienda para la cuantificación de
proteínas en preparados muy concentrados (por ejemplo en suero).

Método de Bradford

 Se basa en la unión de un colorante, Comassie Blue G-250 (también Serva Blue) a las
proteínas. El colorante, en solución ácida, existe en dos formas una azul y otra naranja.
 Las proteínas se unen a la forma azul para formar un complejo proteína-colorante con
un coeficiente de extinción mayor que el colorante libre. Este método es sensible (1-15
µg), simple, rápido, barato y pocas sustancias interfieren en su determinación. Entre
las sustancias que interfieren están los detergentes y las soluciones básicas.

 BIBLIOGRAFÍA

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 https://medlineplus.gov/spanish/pruebas-de-laboratorio/analisis-de-globulinas/

 https://es.scribd.com/document/267481459/Masa-Proteica-Visceral-y-Esqueletica
 https://es.scribd.com/doc/291399352/Bioquimica-11-Masa-Proteica

 https://www.saludalia.com/vivir-sano/composicion-corporal

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