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    Prac 2. Determinación de La Concentración de Maltosa (Memoria de Calculo)

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    Grizel Gomez
    Este documento presenta los cálculos para determinar la actividad enzimática y la cinética de una enzima. En primer lugar, calcula la concentración de maltosa producida y la actividad enzimática en unidades de μmol de maltosa producida por minuto y litro. Luego, calcula la actividad enzimática específica en términos de μmol de maltosa por minuto y miligramo de proteína. Finalmente, determina la unidad internacional, la velocidad en katales y la constante de velocidad de recambio (

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    Prac 2. Determinación de La Concentración de Maltosa (Memoria de Calculo)

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    Este documento presenta los cálculos para determinar la actividad enzimática y la cinética de una enzima. En primer lugar, calcula la concentración de maltosa producida y la actividad enzimática en unidades de μmol de maltosa producida por minuto y litro. Luego, calcula la actividad enzimática específica en términos de μmol de maltosa por minuto y miligramo de proteína. Finalmente, determina la unidad internacional, la velocidad en katales y la constante de velocidad de recambio (

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    Prac 2. Determinación de la concentración de maltosa (Memoria de Calculo).docx

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    Determinación de la concentración de maltosa:

    [ maltosa ] =2.448∗Absorbancia+0.1332
    0.2996 mg/mL=2.448( 0.068)+0.1332
    Determinación de la Actividad Enzimática (Vo) (g/min L):

    Vo=pendiente de regresión de los primeros3 puntos∗factor de dilución


    Para [1mg prot/mL]

    Vo=¿
    Actividad Enzimática (AE) (μmol de maltosa producida/min L):

    ( g maltosa
    min L )

    ( )
    Vo 6
    μmol maltosa 1 x 1 0 μmol
    AE ( min L
    = ) g maltosa ( 1 mol )
    P M Maltosa ( mol )
    g maltosa
    3.7120
    AE=
    (
    342.3
    min L
    g maltosa
    mol
    )( 1 x 1 06 μmol
    1mol ) =10844.2886
    μmol maltosa
    min L

    AE especifica (g/min*mg de prot):

    g maltosa
    AE es p (
    g maltosa
    Vo( min L )
    min ¿ mg prot )
    1 =
    mg prot
    [ prot ] (
    L )
    g maltosa
    3.7120
    min L g maltosa
    AE es p1= =0.0037
    mg prot min ¿ mg prot
    1000
    L
    AE especifica (μmol maltosa/min*mg de prot):

    μmol maltosa
    AEes p (
    μmol maltosa ( AE
    min L )
    min ¿ mg prot )
    2 =
    mg prot
    [ prot ] (
    L )
    μmol maltosa
    10844.2886
    min L μmol maltosa
    AEes p1 = =10.8443
    mg prot min¿ mg prot
    1000
    L
    Unidad internacional UI (μmol maltosa/min):
    UI ( μmolmin
    maltosa
    )= (Volumenmedio de reacción( L))∗( AE ( μmolminmaltosa
    L ))
    μmol maltosa μmol maltosa
    (
    UI =( 0.95 x 1 0−3 L )∗ 10844.2886
    min L )
    =10.302
    min

    Katal (mol maltosa/seg):

    Katal ( mol maltosa


    seg )=( UI (
    μmol maltosa
    min ) ( 1 min
    ) 1 m ol
    ) 60 seg ( 1 x 10 μmol )
    6

    μmol maltosa
    (
    Katal= 10.302
    min )( 601 min ) ( 1mol
    seg 1 x 1 0 μmol )
    6
    =1.717 x 1 0 −7 mol maltosa
    seg

    Número de recambio (Kcat) (s-1):

    g 1min
    −1
    Kcat ( s ) =
    ( Vo ( min L ) 60 seg )
    ) (
    [ prot ] ( mg = g )
    mL L

    g 1 min
    Kcat =
    ( 3.7120
    min L 60 seg )
    )( =0.06187 s −1
    g
    1
    L

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