UNIVERSIDAD NACIONAL DEL ALTIPLANO

FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS

ESCUELA PROFESIONAL DE BIOLOGÍA

EFECTOS DE CRECIMIENTO HASTA LA ETAPA DE

BOTON FLORAL DE DOS VARIEDADES DE QUINUA
(Chenopodium quinoa) UTILIZANDO BACTERIAS
BIOFERTILIZANTES EN PARCELAS EXPERIMENTALES
DEL INIA

TESIS

PRESENTADA POR:

Bach. CARMEN FIORELA URVIOLA ARAGÓN

Bach. LUIS JAVIER ORDOÑEZ ABARCA

PARA OPTAR EL TÍTULO PROFESIONAL DE:

LICENCIADO EN BIOLOGÍA

PUNO – PERÚ

2020
 DEDICATORIA

A Dios, principalmente por brindarme salud, vida y esperanza para

lograr mis objetivos, por darme sabiduría paciencia y fortaleza.
Esta tesis está dedicada a nuestros padres y hermanos que nos
brindaron el apoyo y siempre estuvieron a nuestro lado durante el
desarrollo de este trabajo.
A mis docentes que me inculcaron sus enseñanzas y nos ayudaron
a desarrollar este trabajo de investigación.
 AGRADECIMIENTO

- Quiero expresar mi gratitud a Dios por habernos permitido llegar a este momento y por
su abnegado amor

- A la Universidad Nacional del Altiplano, Facultad de Ciencias Biológicas, Escuela

Profesional de Biología, por darnos la oportunidad de estudiar una carrera profesional

- A todos los docentes de la Escuela Profesional de Biología, por sus conocimientos

impartidos durante mi formación académica.

- A nuestro director de tesis Dr. Juan Jose Pauro Roque, por la paciencia, sus enseñanzas
y compartir sus conocimientos con nosotros.

- Al Instituto de Innovación Agraria por acogernos en sus instalaciones y poder

desarrollar nuestro trabajo de investigación.

- Al Ing. Jesus H. Arcos Pineda e Ing. Wilfredo Barreda por apoyarnos y brindarnos el
apoyo necesario a lo largo de nuestra estancia.

- En especial a mis padres y familiares quienes siempre me apoyaron con sus consejos, en
todas las etapas de nuestras vidas, porque siempre están dándonos ánimo y sobre todo
por ser nuestra fortaleza; gracias a su inmenso paciencia y compresión, gracias por todo
lo que nos brindan día a día.
ÍNDICE GENERAL
ÍNDICE DE FIGURAS ................................................................................................. 8
ÍNDICE DE ACRÓNIMOS ........................................................................................ 11
RESUMEN ................................................................................................................. 12
ABSTRACT ............................................................................................................... 13
I. INTRODUCION ..................................................................................................... 14
1.1. Objetivo General .................................................................................................. 16
1.2 Objetivos Específicos ............................................................................................ 16
II. REVISIÓN DE LITERATURA .............................................................................. 17
2.1 Antecedentes ......................................................................................................... 17
2.2 Marco Teórico ....................................................................................................... 20
2.2.1 La quinua ........................................................................................................... 20
2.2.2 Clasificación taxonómica ................................................................................... 20
2.2.3 Variedad Pasankalla o quinua roja ...................................................................... 20
2.2. 4. Variedad INIA Salcedo .................................................................................... 21
2.2.5 Zonas de cultivo ................................................................................................. 22
2.2.6 Estacionalidad de la quinua peruana ................................................................... 22
2.2 8 Bacterias promotoras de crecimiento vegetal (BPCV)......................................... 24
2.2.9 Tipos de BPCV .................................................................................................. 26
2.2.10 Bacillus subtilis ................................................................................................ 27
2.2.11 Azotobacter spp. ............................................................................................... 29
2.2.12 Pseudomonas spp ............................................................................................. 30
2.2.13 Nitrógeno ......................................................................................................... 32
2.2.14 Fosforo ............................................................................................................. 34
2.2.15 Potasio ............................................................................................................. 36
III. MATERIALES Y MÉTODOS .............................................................................. 39
3.1. Zona de estudio .................................................................................................... 39
3.2 Tipo y nivel de investigación ................................................................................. 40
3.3 Método.................................................................................................................. 40
3.3.1. Identificación de bacterias biofertilizantes (solubilizadoras de fosfato y potasio
y fijadoras de nitrógeno) en suelos de INIA Salcedo y Camicachi del distrito de Ilave
– Puno......................................................................................................................... 40
3.3.2, Cuantificación de bacterias solubilizadoras de fosfatos y potasio y fijadoras de
nitrógeno en suelos de INIA salcedo e Ilave Camicachi del distrito de puno ................ 52
3.3.3 Evaluar el efecto de la inoculación de bacterias solubilizadoras de potasio y
fosforo y fijadoras de nitrógeno en el crecimiento de plántulas de quinua hasta la
etapa de botón floral en la variedad INIA SALCEDO en parcelas experimentales
del INIA Salcedo del distrito de Puno. ........................................................................ 55
3.3.4. Evaluar el efecto de la inoculación de bacterias solubilizadoras de potasio y
fosforo y fijadoras de nitrógeno en el crecimiento de plántulas de quinua hasta la
etapa de botón floral en la variedad quinua roja o Pasankalla en parcelas
experimentales del INIA Salcedo del distrito de Puno, ................................................ 59
V. RESULTADOS Y DISCUSIÓN ............................................................................ 61
4. 1 Identificación bioquímica de bacterias biofertilizantes (solubilizadoras de fosfato
y potasio y fijadoras de nitrógeno) en suelos de INIA Salcedo y Camicachi del
distrito de Ilave ........................................................................................................... 61
4.2 Cuantificación de bacterias solubilizadoras de fosfatos y potasio y fijadoras de
nitrógeno en suelos de INIA salcedo y Camicachi del distrito de Ilave ........................ 64
4.3 Efecto de la inoculación de bacterias solubilizadoras de potasio y fosforo y
fijadoras de nitrógeno en el crecimiento de plántulas de quinua hasta la etapa de
botón floral en la variedad INIA Salcedo en parcelas experimentales del INIA
Salcedo del distrito de Puno. ...................................................................................... 65
4.3.1 Altura de la planta (cm) ...................................................................................... 65
4.3.2 Raíz (cm) ........................................................................................................... 67
4.3.3 Número de hojas ................................................................................................ 68
4.3.4 Diámetro del Tallo (cm) ..................................................................................... 69
4.4 Efecto de la inoculación de bacterias solubilizadoras de potasio y fosforo y
fijadoras de nitrógeno en el crecimiento de plántulas de quinua hasta la etapa de
botón floral en la variedad Pasankalla (quinua roja) en parcelas experimentales del
INIA Salcedo del distrito de Puno. .............................................................................. 70
4.4.1 Altura de la planta (cm) ...................................................................................... 70
4.4.2 Raíz (cm) ........................................................................................................... 72
4.4.3 Número de hojas ................................................................................................ 73
4.4.4 Diámetro del tallo ............................................................................................... 74
V. CONCLUSIONES ................................................................................................. 77
VI. RECOMENDACIONES ....................................................................................... 78
VII. REFERENCIA BIBLIOGRAFICA ...................................................................... 79
ÍNDICE DE FIGURAS
Figura 1.Fenologia de la quinua variedad Pasankalla, (INIA,2013) .......................................... 21
Figura 2. Fenología de la variedad Salcedo INIA, (INIA, 2013)............................................... 22
Figura 3.Mecanismos de control biológico de enfermedades en plantas por bacterias. (a)
Antibiosis, (b) La Resistencia Sistémica Inducida (ISR) y (c) Competencia.
(Lugtenberg & Kamilova, 2009). .............................................................................. 26
Figura 4.Toma satelital de lugares de toma de muestras Camicachi - Ilave e INIA Salcedo –
Puno, enero 2019 ....................................................... ¡Error! Marcador no definido.
Figura 5. Equipo meteorológico Vantage pro 2, ubicado en parcelas de INIA salcedo, (enero -
abril 2019) ............................................................................................................... 40
Figura 6. Tipos de muestreo de suelos, (Lozano, 2014)............................................................ 41
Figura 7.(a) y (b) obtención de muestra de suelo Camicachi e Inía Salcedo
(diciembre 2018). ..................................................................................................... 41
Figura 8.transporte de muestras de suelo, (a) muestra de suelo de la estación experimental
salcedo (b) recolección de muestra de suelo de Camicachi Ilave; (diciembre 2018). .. 42
Figura 9. Cultivos en medio de libre de nitrógeno, laboratorio Inía Salcedo, (enero 2019)........ 43
Figura 10. Aislamiento de cepas de Bacillus, laboratorio INIA, (enero 2019)........................... 44
Figura 11. Aislamiento de pseudomonas, laboratorio INIA, (enero 2019) ................................ 44
Figura 12. Método de tinción Gram, realizado para cada uno de los cultivos. Laboratorio
Inía, (enero 2019). .................................................................................................... 45
Figura 13.capturas de imágenes en microscopio de las cepas sospechosas (a) bacilos
positivos con endosporas característico de Pseudomonas, (b) bacilos positivos
característicos de Bacillus (c) cocos característicos de Azotobacter; laboratorio
INIA, (enero 2019.) .................................................................................................. 46
Figura 14.Prueba de oxidasa, (a) prueba oxidasa marca Bactident® Oxidasa 113300 - Merck
Millipore (b) prueba para Pseudomona resultando positivo (c) prueba positiva para
Bacillus (d) prueba positiva para Azotobacter. laboratorio INIA, (enero 2019) .......... 47
Figura 15. prueba de catalasa (a) Bacillus (b) Azotobacter (c) Pseudomonas, laboratorio
INIA (enero 2019). ................................................................................................... 47
Figura 16. prueba de citrato, laboratorio INIA, (enero 2019).................................................... 48
Figura 17. prueba de gelatina (a) y (b), laboratorio INIA, (enero 2019). ................................... 48
Figura 18. prueba SIM, laboratorio INIA, (enero 2019). .......................................................... 49
Figura 19.prueba de INDOL (a) y (b). laboratorio INIA, (enero 2019). .................................... 50
Figura 20. Prueba de movilidad, laboratorio INIA, (enero 2019).............................................. 50
Figura 21.Prueba de degradación de almidón, laboratorio Inía, (enero 2019)............................ 51
Figura 22. Prueba de fluorescencia para los cultivos de bacterias, laboratorio Inía,
(enero 2019). ............................................................................................................ 51
Figura 23. Diluciones seriadas de muestras de suelo para cultivo y posterior recuentro,
(Pérez, t al, 2014) ..................................................................................................... 53
Figura 24. Dilución de muestras de suelo. Laboratorio INIA, (enero 2019). ............................. 54
Figura 25. Preparación del suelo (a) antes de preparado (b) después de preparado,
parcelas INIA Salcedo,enero 2019. ........................................................................... 55
Figura 26.Preparación del inoculo a partir de las cepas ya aisladas e identificadas
medidas por MACFARLAND (a) Bacillus subtilis (b) Azotobacter spp (c)
Pseudomonas florescens (e) MACFARLAND (d) solución de bacterias.
Laboratorio INIA, (enero 2019). ............................................................................... 56
Figura 27.Aplicación de inoculo de solución bacteriana a semillas de quinua (a) melaza
(b) adición de melaza a semillas de quinua (c) adición de semillas con melaza a
solución de bacterias (d) extendido de semillas, laboratorio INIA, enero 2019. . 57
Figura 28.siembra de las semillas inoculadas, parcelas Inia Salcedo, (enero 2019). .................. 58
Figura 29.Esquema de siembra de semillas inoculadas, esquema elaboración propia,
(enero 2019). ............................................................................................................ 58
Figura 30. Efecto de bacterias promotoras del crecimiento vegetal en altura de la quinua
variedad Salcedo INIA. Histograma estadístico elaborado en Infostat,
(octubre 2019). ......................................................................................................... 66
Figura 31.Efecto de bacterias promotoras del crecimiento vegetal en la raíz de la quinua
variedad Salcedo INIA. Histograma estadístico elaborado en Infostat.
(octubre 2019). ......................................................................................................... 67
Figura 32. Efecto de bacterias promotoras del crecimiento vegetal en el número de hojas
de la quinua variedad Salcedo INIA. Histograma estadístico elaborado en infostat.
(octubre 2019). ......................................................................................................... 68
Figura 33. Efecto de bacterias promotoras del crecimiento vegetal en el diámetro del tallo
de la quinua variedad Salcedo INIA. Histograma estadístico elaborado en infostat.
(octubre 2019) .......................................................................................................... 69
Figura 34, Efecto de bacterias promotoras del crecimiento vegetal en altura de la quinua
variedad Pasankalla. Histograma estadístico elaborado en infostat. Octubre 2019 ..... 71
Figura 35. Efecto de bacterias promotoras del crecimiento vegetal en la raíz de la quinua
variedad Pasankalla. Histograma estadístico elaborado en Infostat, (octubre 2019). .. 72
Figura 36. Efecto de bacterias promotoras del crecimiento vegetal en el número de hojas
de la quinua variedad Pasankalla. Histograma estadístico elaborado en infostat,
(octubre 2019). ......................................................................................................... 73
Figura 37. Efecto de bacterias promotoras del crecimiento vegetal en el diámetro del
tallo de la quinua variedad Pasankalla. Histograma estadístico elaborado en infostat,
(octubre 2019). ......................................................................................................... 74
Figura 38. semillas germinando a las 48h de ser plantadas (a) y (c) semillas de la variedad
INIA salcedo (b) y (d) semillas de la variedad Pasankalla, parcelas Inia Salcedo,
(enero 2019) ............................................................................................................. 87
Figura 39. plántulas de quinua a las 96h, a la derecha (a) y (c) variedad Pasankalla, a la
izquierda (b) y (d) variedad INIA salcedo, parcelas Inia Salcedo, (febrero 2019). ..... 88
Figura 40. plantulas de quinua con 4 hojas verdaderas (a), (b), (c) y (d) variedad Pasakalla
(e), (f), (g) y (h) variedad INIA salcedo, parcelas Inia Salcedo, (febrero 2019) .......... 90
Figura 41. Plantas de quinua desde la etapa de ramificacion hasta el boton floral a los 93
dias, parcelas Inia Salcedo, (marzo 2019). ................................................................ 92
Figura 42. biometría con un vernier de los tallos, raíces y diámetro del tallo (este
procedimiento se realizó para todas las muestras seleccionadas), laboratorio UNAP
(marzo 2019)............................................................................................................ 92
Figura 43.semillas certificadas utilizadas para realizar este trabajo de Figura 43. semillas
certificadas utilizadas para realizar este trabajo de investigación (a) y (c) variedad
Pasankalla (b) y (d) variedad INIA salcedo ............................................................... 93
ÍNDICE DE TABLAS

Tabla 1 La cosecha de quinua promedio por año (Tello, 2009 y Montero 2017) ....................... 23
Tabla 2 Mecanismos de acción directa de las BPCV (Sarabia et al,2010). ................................ 25
Tabla 3 caracterización de suelos INIA Salcedo y Camicachi, elaboración propia,
(enero 2019). .............................................................................................................. 42
Tabla 4. Pruebas bioquímicas hechas para la identificación de las especies bacterianas
promotoras del crecimiento vegetal (BPCV), elaboración propia, febrero 2018. .......... 61
Tabla 5 Recuento de bacterias de los suelos de INIA Salcedo y Camicachi - Ilave, realizado
en el laboratorio de biotecnología UNA - Puno. tabla de elaboración propia, (octubre
2019). ......................................................................................................................... 64
ÍNDICE DE ACRÓNIMOS

PGPR: Plant growth promoting rhizobacteria, o rizobacteria promotora del crecimiento vegetal

INIA: Instituto Nacional de Innovación Agraria

BPCV: bacterias promotoras del crecimiento vegetal

ISR: La Resistencia Sistémica Inducida

DIAIA: subdirección de inocuidad agroalimentaria

 RESUMEN
Las bacterias del suelo poseen bondades biofertilizantes de solubilización de potasio, fosforo y
fijación de nitrógeno. El estudio se desarrolló en el laboratorio de micro propagación del Instituto
Nacional de Innovación Agraria de la ciudad de Puno. Objetivo: Identificar bacterias
solubilizadoras de fosfato. potasio y fijadoras de nitrógeno en suelos de INIA Salcedo y
Camicachi en Ilave del distrito de Puno, Cuantificar bacterias solubilizadoras de fosfatos, potasio
y fijadoras de nitrógeno, Evaluar el efecto de la inoculación de bacterias solubilizadoras de
potasio, fosforo y fijadoras de nitrógeno en el crecimiento de plántulas de quinua hasta la etapa
de botón floral en la variedad INIA Salcedo y en la variedad quinua roja en parcelas demostrativas
del INIA Salcedo del distrito de Puno. Método: que consistió en recolectar 3 muestras de suelo
de una parcela en Camicachi - Ilave y 3 muestras de las parcelas del Instituto Nacional de
Innovación Agraria. la colecta se realizó de manera aleatoria, se aisló las bacterias solubilizadoras
de fosfatos, potasio y fijadoras de nitrógeno en cultivos de agar libre de nitrógeno con azul de
bromotimol y agar nutritivo para Bacillus y Pseudomonas según correspondía, la identificación
se realizó mediante pruebas bioquímicos. Se comprobaran dichas capacidades mediante las
técnicas de cultivo en agar y distinción de halos, después de las muestras obteniéndose pasara a
la inoculación que se realizó en 6 tratamientos, 3 control (sin inoculo) de bacterias y 3 con inoculo
de bacterias 5 repeticiones de cada uno y 3 réplicas de las repeticiones , 300 unidades
experimentales en total, Resultados se trabajaron con un nivel de confianza del 95% con el
análisis estadístico de Anova y prueba T, obteniendo el mejoramiento del crecimiento de las
plantaciones de quinua inoculadas con los microorganismos aislados en la variedad INIA Salcedo
en un 133.85% de efectividad en cuanto a la altura, 38.24% de efectividad en la raíz, 130.66% de
efectividad en el número de hojas y 13 3.33% de efectividad en el diámetro del tallo. Obteniendo
así una diferencia estadísticamente significativa frente a un control que no poseía ningún tipo de
inoculo en cuanto a la variedad Pasankalla (quinua roja) se obtuvo un 83.16% de efectividad en
cuanto a la altura, 26.45% de efectividad en la raíz, 58.35% de efectividad en el número de hojas
y 68.18% de efectividad en el diámetro del tallo. Obteniendo así una diferencia estadísticamente
significativa frente a un control que no poseía ningún tipo de inoculo. Conclusión: la inoculación
de cepas promotoras de crecimiento, es una alternativa orgánica y sostenible, se pudo demostrar
el potencial que estos tienen como fertilizantes orgánicos para contribuir a la productividad y
desarrollo de plantaciones de quinua.

Palabras Clave: Bacillus, bacterias, biofertilizantes, campos, efecto, quinua, variedades.

12
 ABSTRACT
Soil bacteria possess biofertilizing benefits of potassium solubilization, phosphorus and nitrogen
fixation. The study will be carried out in a micro propagation laboratory of the National Institute
of Agrarian Innovation in the city of Puno. The objectives were: Identify biofertilizing bacteria
(phosphate and potassium solubilizers and nitrogen fixers) in INIA Salcedo and Camicachi soils
in Ilave district of Puno, Quantify phosphate, potassium and nitrogen fixing solubilizing bacteria,
Evaluate the effect of inoculation of potassium and phosphorus solubilizing bacteria and nitrogen
fixers on the growth of quinoa seedlings up to the floral button stage in the INIA Salcedo variety
and in the red quinoa variety in demonstration plots of the INIA Salcedo of the Puno district. The
method consisted of collecting 3 soil samples from a plot in Camicachi - Ilave and 3 samples from
the plots of the same INIA institution, the collection was carried out randomly, the phosphate
solubilizing bacteria, potassium and nitrogen fixing were isolated in Nitrogen-free agar cultures
with bromothymol blue and nutrient agar for Bacillus and Pseudomonas as appropriate, the
identification was made by biochemical tests. Said capacities will be checked by agar culture and
halos distinction techniques, after the samples being obtained will be passed to the inoculation
that was carried out in 6 treatments, 3 control (without inoculum) of bacteria and 3 with inoculum
of bacteria 5 repetitions of each one and 3 replications of the repetitions, 300 experimental units
in total, the results were worked with a level of confidence of 95% with the statistical analysis of
Annova and T test, obtaining the improvement of the growth of the quinoa plantations inoculated
with the microorganisms isolated in the INIA Salcedo variety in 133.85% height effectiveness,
38.24% root effectiveness, 130.66% effective in the number of leaves and 13 3.33% effective in
stem diameter. Obtaining a statistically significant difference compared to a control that did not
have any type of inoculum regarding the PASANKALLA variety (red quinoa), an 83.16%
effectiveness in terms of height was obtained, 26.45% effective at the root, 58.35% of
effectiveness in the number of leaves and 68.18% of effectiveness in the diameter of the stem.
Thus obtaining a statistically significant difference against a control that did not possess any type
of inoculum. The conclusion reached is that the inoculation of growth promoting strains, is an
organic and sustainable alternative, it was possible to demonstrate the potential that these have as
organic fertilizers to contribute to the productivity and development of quinoa plantations.

Keywords: bacteria, Bacillus, biofertilizers, effect, field, quinoa, varieties.

13
 I. INTRODUCION
El uso excesivo de pesticidas y fertilizantes químicos en la agricultura moderna ha dado
lugar al deterioro en la fertilidad de los suelos y a la aparición de formas de resistencia de
los microrganismos fitopatógenos en todo el mundo. En la región de Puno a pesar que
hasta el 2014 según estadística (INEI 2011) El problema se halla en los componentes
químicos y otros contaminantes que puedan contener los cultivos y como afectan a la
producción de quinua. Según el del monitoreo de residuos químicos y otros
contaminantes en granos de quinua (Chenopodium quinoa) emitido por (SENASA 2014)
y la subdirección de inocuidad agroalimentaria/DIAIA mencionan que Según los Límites
Máximos de Residuos (LMR) aprobados por el Codex alimentarios. La región de la Sierra
registró el 40.63% de muestras no conformes por residuos químicos. Junín reporta el 80%
de muestras de no conformes; seguido de Huancavelica con 60%, Cusco y Puno con 40%
y como los más bajos Apurímac y Ayacucho con el 20% de muestras no conformes.

Para hacer frente a estos problemas, productos de origen microbiano y fertilizantes

orgánicos son una alternativa limpia en el control fitosanitario, SENASA resalta valor
que otorga producción orgánica al cultivo de quinua. Productos orgánicos, son
manufacturas de origen vegetal, animal o cualquiera de sus derivados, en cuya
preparación o procesamiento no se han realizado el uso de fertilizantes, plaguicidas
químicos, cuenta con un certificado emitido por un organismo de certificación
(certificadora) de productos orgánicos autorizado y registrado por el (SENASA 2018),

Un agente de biocontrol es el Bacillus subtilis, bacteria Gram positiva que produce una
gran cantidad de lipopeptidos, metabolitos primarios o secundarios, con amplio espectro
antibiótico. Dichos metabolitos son supresores efectivos de algunos patógenos de plantas
incluyendo; especies de Fusarium, Pythium, Phytophthora, Rhizoctonia, Sclerotinia,
Septoria, y Verticillium. (Ariza & Sánchez, 2012) .

Ahora está bien establecido que muchos de estos efectos se logran promoviendo los
procesos microbiológicos naturales que mantienen a las enfermedades de las plantas bajo
control por ejemplo Pseudomonas spp. producen antibióticos específicos se han asociado
de manera convincente con la supresión del suelo. esta evidencia genera un entusiasmo
aun mayor por el potencial de estas bacterias como agentes de control biológico. Por otro
lado, el Azospirillum es una bacteria promotora de crecimiento vegetal (PGPR) de viuda
libre, capaz de ayudar al crecimiento y producción de numerosas especies vegetales; que

14
tiene la habilidad de producir fitohormonas que mejoran el crecimiento radicular;
absorción de agua y minerales presentes a lo largo de la producción del cultivo, y en
muchos casos en la mayor producción de plantas. Los extensos estudios genéticos,
bioquímicos y de aplicaciones, han demostrado que Azospirillum, es uno de los mejores
PGPR’s

El fósforo, el nitrógeno, el hierro y el potasio son algunos compuestos necesarios para el

crecimiento y desarrollo vegetal. Los fertilizantes químicos empleados para aumentar su
concentración afectan significativamente el medioambiente y los ecosistemas del suelo.
De acuerdo con la literatura científica, los microorganismos con potencial biofertilizante
han demostrado poseer diversos mecanismos de acción para solubilizar estos compuestos
y así cumplir con los requerimientos de las plantas. (Restrepo, Correa,et al, 2017) por lo
cual se entiende que estas bacterias bio controladoras actúan también como promotoras
del crecimiento en las plantas por medio de los micronutrientes que proveen a estas.

En estudio realizar se tratará de impulsar a una planta de interés social e industrial como
es la quinua (Chenopodium quinoa), esta es una de las especies más cultivadas en el Perú
hace muchos años. En nuestra región Puno es bien sabido que la cuenca del Lago Titicaca
es la zona considerada como el principal centro de origen de la quinua y el centro de
conservación de la mayor diversidad biológica de esta especie, en la cual existen sistemas
variados e innovadores de cultivo y una cultura alimentaria que genera el grano a la
digestión diaria (MINAGRI,2017). Además, La quinua, especialmente en Puno, está
perdiendo interés en mercados extranjeros como Estados Unidos. En junio de 2015, los
empresarios norteamericanos devolvieron a nuestro país nada menos que 200 toneladas
de este producto por no cumplir con los estándares internacionales. El motivo es uso de
pesticidas o agroquímicos en el cultivo de la planta. Por esta razón, EE.UU. colocó el
rótulo de “rechazado” al grano peruano (Diario correo, 2015). Esto debido a la aplicación,
cada vez mayor, de fertilizantes químicos, con graves consecuencias en cuanto a salud y
calidad del suelo. En forma general, los agricultores no tratan al suelo como un ecosistema
con todas las interacciones que esto implica, sino únicamente se lo ve como el medio de
cultivo para las plantas (Burbano, 2016)

15
1.1. Objetivo General

Evaluar el efecto de las bacterias biofertilizantes en el crecimiento de las dos variedades de quinua
(Chenopodium quinoa) hasta la etapa de botón floral en parcela experimentales del INIA.

1.2 Objetivos Específicos

-Identificar bacterias solubilizadoras de fosfato, potasio y fijadoras de nitrógeno en suelos de

INIA Salcedo y Camicachi del distrito de Ilave

-Cuantificar bacterias solubilizadoras de fosfatos, potasio y fijadoras de nitrógeno en suelos de

INIA Salcedo y Camicachi del distrito de Ilave

-Evaluar el efecto de la inoculación de bacterias solubilizadoras de potasio, fosforo y fijadoras de

nitrógeno en el crecimiento de plántulas de quinua hasta la etapa de botón floral en la variedad
INIA SALCEDO en parcelas experimentales del INIA Salcedo del distrito de Puno.

-Evaluar el efecto de la inoculación de bacterias solubilizadoras de potasio, fosforo y fijadoras de

nitrógeno en el crecimiento de plántulas de quinua hasta la etapa de botón floral en la variedad
Pasankalla o quinua roja en parcelas experimentales del INIA Salcedo del distrito de Puno.

16
 II. REVISIÓN DE LITERATURA

2.1 Antecedentes

En el trabajo titulado bacterias solubilizadoras de fosfato del género Bacillus en suelos de la

provincia del Collao y su efecto en la germinación y crecimiento de quinua, que se realizó en
condiciones de invernadero, obtuvo como resultado que tuvieron variación estadística, es decir
existió diferencia estadística significativa con respecto a los demás tratamientos que contenían
poca inoculación de bacterias y el tratamiento control que no presentaba inoculación de bacterias.
En la estimación de los parámetros biométricos en la longitud de la planta, diámetro del tallo y
peso seco de la planta y raíz, no hubo diferencia estadística entre T1, T2 y T3, aunque si respecto
al control que no posee inoculación de bacterias. (Llanos, 2017),

Según (Álvarez, 2015) los géneros Bacillus sp. Pseudomonas sp y Azotobacter sp entre otros
presentan propiedades proteolíticas además de solubilizar el fosfato orgánico e inorgánico
dependiendo de la especie, para la especie Bacillua subtilis (Calvo y Zuñiga, 2010) afirman que
este se encuentra de manera muy sencilla en los cultivos de papa, y tambien demuestra una gran
cantidad de microorganismos que se da con las diferentes capacidades de crecimiento, tanto a
temperaturas bajas como a pH ácidos, todo esto hace que estos microorganismos sean promotores
de crecimiento vegetal.

La forma de identificar a estos microorganismos es muy variada y entre estos métodos se

encuentra el bioquímico del cual (Caviedes y Zapata, 2010) elabora un test bioquímico para el
género bacillus y pseudomonas al igual que (Cuervo, 2010), menciona que es la prueba de la
gelatinasa la que diferencia a Pseudomona fluorenscens de Pseudomona putida, mediante la
presencia de la enzima proteolítica (gelatinasa); donde P. fluorescens produce la licuefacción de
la gelatina. Así como estos existen otros tipos de test de identificación como lo menciona
(Corrales et al. 2014) y en algunos casos un bateria de pruebas bioquimicas que ayudan a
identificar una especie con una increíble exactitud como lo menciona (Escobar et al. 2011) y
(Flores et al. 2012).

(Calvo, et al, 2008) explican que, dada su importancia, el componente microbiano del suelo es
imprescindible para la salud de los ecosistemas. Las tecnicas agrícolas, y tambien la realizacion
de los recursos vegetales incurren sobre este dando efecto a su biodiversidad como a la densidad
de las poblaciones microbianas implicadas, sin embargo (Cary & Angulo, 2006) en su trabajo
mencionan que la tendencia al incremento que presentan diversos factores del suelo después de
más de 10 años de descanso podría contribuir y explicar la recuperación de la fertilidad, por lo
que la sobre explotación de los recursos del suelo no debería de suceder.

17
A pesar de la contaminación de los suelos y su sobre explotación existen formas de contrarrestar
el malestar y tener una forma de promover el crecimiento de cultivos de una forma sostenible tal
como lo menciona (Lara & Álvarez 2013), (Lara & Esquivel 2011), (Lara & Sanes 2013) y
(Moreno et al. 2018), se debe de entender que las BPCV representan una gran alternativa para la
sustitución parcial de fertilización química con buenos resultados para el crecimiento de las
plantas de pastos Angleton, a bajo costo y de forma amigable con el ambiente para una producción
más limpia es lo que menciona (Lara y Negrete 2015), por otro lado (Loredo, et al 2004) presume
que la colonización de la raíz por BPCV está relacionada con una mayor disponibilidad de
carbono y humedad en la rizosfera. De todos estos, los géneros Bacillus, Pseudomonas y
Azotobacter son las comunes en el microbiota del suelo tal como lo menciona , (Criollo, et al,
2013)

(Flores, 2009), en su trabajo de investigación Efecto de la interacción entre microorganismos

PGPR con hongos formadores de micorrizas arbusculares para la promoción de crecimiento
vegetal en aguaymanto (Physalis peruviana) obtuvo el crecimiento de plantas de aguaymanto en
tales plantaciones se aplicaron inoculantes microbianos, estas fueron escogidas por presentar
buena capacidad, así como un efecto muy bueno en la formación y desarrollo de plántulas en el
laboratorio. Los microorganismos son potencialmente beneficiosos para el desarrollo de las
plantas, ayudando significativamente el desarrollo vegetal.

Al igual que (Ruiz, 2002), en su trabajo variedad microbiana obtuvo que los microorganismos
son la base de la humanidad, tienen un papel muy importante por medio de varias fases que
favorecen al humano, plantas y animales.

Por otro lado, menciona en el trabajo Efecto de compost inoculado con bacterias de los géneros
Azotobacter y Novosphimgobium fijadoras de Nitrógeno en el rendimiento del olivo (Olea
europea L), que existió gran variedad entre la utilidad siendo el mejor la fertilización química,
igualmente se halló que el que obtuvo más niveles de nitrógeno en suelo y mayores calibres
(Bedoya y Torreblanca 2015).

Y sin embargo (Quenaya 2012), en su investigación Influencia de la biofertilización con

Azotobacter chroococcum en la reproducción y calidad de cebolla rosada (Allium cepa L.) obtuvo
que usando bacterias fijadoras del nitrógeno como Azotobacter simboliza una gran opción al uso
de fertilizantes acostumbrados. Se determinó que las concentraciones de A. chroococcum,
permitieron obtener un mayor incremento en la producción de la cebolla rosada y las
concentraciones A. chroococcum evaluando la productividad y calidad de la cebolla.

(Farfán, 2017) en su trabajo Microorganismos promisorios fijadores de nitrógeno, movilizadores

de fosforo y potasio para la formulación de un bioensayo de uso agrícola aisló bacterias nativas
no patógenas de los suelos de cultivo con aptitud fijadora de nitrógeno N, y movilizadora de

18
fósforo P y potasio K; midiendo las concentraciones de estas mismas en los suelos inoculados por
dos meses. Para determinar estadísticamente la fijación y movilización de los nutrientes a los
suelos por parte de las bacterias.

También (Torriente, 2010), en su trabajo aplicación de bacterias promotoras del crecimiento

vegetal en el cultivo de la caña de azúcar consiguió que el uso de Biofertilizantes establece una
opción para aumentar la realización de cultivos actual, con el menor daño al ambiente. Esta
investigación destaca el interés de incluir bacterias promotoras de crecimiento como
biofertilizantes orgánicos en la realización de cultivos de caña de azúcar, viendo los resultados
muy significativos.

“biofertilizante de microorganismos: bacterias diazótrofas aisladas de muestras de suelo

rizosférico” es una investigación en la que (Moreno y Galvis, 2013), obtuvo que las bacterias
promotoras del crecimiento vegetal son capaces de habituarse, desarrollarse y mantenerse en la
rizosfera de la planta, lo cual beneficia al aumento de su tamaño y su desarrollo. Por lo tanto, nos
lleva a inferir que estas cepas pueden ser utilizadas en un potencial biofertilizante.

Al igual que (Rodriguez y Hernandez, 2009), en su trabajo aislamiento y selección de

Pseudomonas sp., y Bacillus sp., promotoras del crecimiento vegetal en cultivo de uchuva
(physalis peruviana l.) con actividad antagónica frente a Fusarium oxysporum” nos dice que los
20 aislamientos que se realizaron en su trabajo de investigación se aumentó el porcentaje de
germinación de las semillas de uchuva sin embargo solo 18 aislamientos aumentaron la longitud
de la raíz y el tallo de las plántulas de uchuva en diferencia con la planta control. La solubilización
del fosfato se localizó en el género Pseudomonas sí, se escogieron varias cepas para la inoculación
ya que se comprobó su capacidad promotora en la germinación de semillas y aumento de tamaño
de las plántulas de uchuva.

(Ramos y Velázquez, 2015), en su investigación Beneficios de microorganismos solubilizadores

de P y K en la recuperación y mantenimiento de suelos agrícolas Los resultados obtenidos
concuerdan con estudios previos, en los cuales se ha demostrado existe un gran número de
microorganismos con capacidad solubilizadora de fósforo, incluyendo bacterias, hongos,
actinomicetos e incluso algas.

(Sharma, et al, 2013), Además de Bacillus y Pseudomonas, dijo que se han reportado otras
bacterias y hongos que no pierden su capacidad solubilizadora al transferirlos repetidamente de
un medio de cultivo a otro.

(Corrales et al, 2014), en su trabajo de investigación Bacillus: género bacteriano que demuestra
ser un importante solubilizadoras de fosfato determino que el 93.33% de las muestras de raíces y

19
suelo Inoculación de Azotobacter spp. Adherido de hortalizas resultó positivo para el
enriquecimiento de bacterias fijadoras de nitrógeno

Así mismo, el 81.67 % de las muestras resultó positivo para el aislamiento de Azotobacter spp.
incremento en la altura, volumen radicular y peso de la biomasa seca total, parte aérea y radicular
(Escobar et al, 2012).

2.2 Marco Teórico

2.2.1 La quinua
La quinua es una planta domesticada por las sociedades prehispánicas la cual se utilizado en la
alimentación por lo menos desde hace 3000 años atrás, (Rivera1995). Por sus características esta
es una planta pertenece a la familia Chenopodiaces, su tamaño varía desde 1m a 3.5m según el
ecotipo y variedad, su tallo primario es recto, también se puede ver unas ramas paralelas normales
para los países altoandinos en los cuales el ecotipo que se ha dado es muy marcado tal como lo
menciona (Tapia et.al; 1979) a continuación (Rivera 1995) describe que sus raíces son más o
menos profundas pudiendo llegar desde 0.50 m. hasta más de 2 m. Posee una inflorescencia, de
forma glomerulada, Esta inflorescencia puede alcanzar hasta 0.70 m. de su tamaño y densidad
depende en gran parte su rendimiento.

2.2.2 Clasificación taxonómica

(Mújica, 1993), la quinua está ubicada dentro de la sección Chenopodia y tiene la siguiente
posición taxonómica:

Reino: Vegetal
División: Fanerógamas
Clase: Dicotiledóneas
Orden: Angiospermas
Familia: Chenopodiáceas
Género: Chenopodium
Sección: Chenopodia
Subsección: Cellulata
Especie: Chenopodium quinoa
2.2.3 Variedad Pasankalla o quinua roja
Esta variedad fue liberada en la región puno el año 2006, como obtentor y mantenedor es el
Instituto Nacional de Innovación Agraria EEA Illpa Puno (INIA), Su adaptación está establecida
en la zona agroecológica suni del altiplano entre los 3800 y 3900 msnm, con clima frio seco,

20
precipitación pluvial de 400 a 550 mm, con temperaturas de 4˚ a 15˚C, en suelos de textura franco
y franco arenoso con pH de 5,5 a 8,0. (INIA, 2013)

2.2.3.1 Descripción morfológica

En cuanto a su descripción morfológica esta variedad tiene el tipo de crecimiento herbáceo con
un hábito de crecimiento simple, en cuanto al ciclo vegetativo se da en 144 días para el altiplano,
120 días para valles interandinos, 105 días para la costa, esta crece hasta una altura de 1.30 a
1.40m con un rendimiento de 3.54 t/ha. El grano es de aspecto opaco, el perigonio es de color
purpura, pericarpio de color plomo claro, episperma de color vino oscuro, perisperma de color
blanco. El borde del grano es afilado y cilíndrico bastante uniforme, el diámetro es de 2.10mm,
el rendimiento de semillas por planta es de 32 a 34g. (Apaza et al. 2013).

Figura 1.Fenologia de la quinua variedad Pasankalla, (INIA,2013)

2.2. 4. Variedad INIA Salcedo

obtentor y mantenedor es el Instituto Nacional de Innovación Agraria, EEA Illpa Puno (INIA}
tuvo una adaptación que está establecida en el altiplano entre los 3800 y 3950 msnm, con clima
semi seco frio, precipitación pluvial de 400 a 560 mm, con temperaturas de 6˚ a 17˚C, en suelos
de textura franco y franco arenoso con pH de 5,5 a 7,8. En cuanto a su descripción morfológica
esta variedad tiene el tipo de crecimiento herbáceo con un crecimiento simple, en cuanto al ciclo
vegetativo lo realiza en 150 días para el altiplano, 135 días para valles interandinos (INIA, 2013).

2.2.4.1 Descripción morfológica

Presenta un tallo sin ángulos con un diámetro de 1.90-2.30cm, no presenta axilas pigmentadas y
con estrías de color verde claro, el tallo principal es verde y no presenta ramificaciones. Las hojas
son de bordes dentado con 12 a 30 dientes con una longitud máxima del peciolo 5.10-6.30cm,
longitud máxima de las hojas 10.40-11.20cm (Apaza et al; 2013).

21
Figura 2. Fenología de la variedad Salcedo INIA, (INIA, 2013)

2.2.5 zonas de cultivo

(Tello 2009) afirma que el sistema en el cual se desarrolla este cultivo es el de agua entre los
valles andinos de Cusco, Urubamba, Valle del Mantaro entre otros, en donde la tierra es firme
pero estas deben soportar estados extremos tales como las bajas temperaturas y brisas sólidas,
paralelo a esto (Rivera, 1995) acota que también repercute la disponibilidad de agua ya que en
zonas altoandinas como Ayacucho, con estas mismas condiciones pero de generación más
destacada de nuestra nación se encuentran las sucursales de Puno, Ayacucho, Junín, Cusco,
Apurímac y La Libertad.

Las características que existen entre las variedades de Pasankalla o quinua roja y Salcedo INIA
están principalmente en sus composición teniendo la variedad Pasankalla con una Humedad de
9.62%; un porcentaje de proteínas de 17.83%;también fibra 3.00%;y grasa 6.29%; por otro lado
la variedad Salcedo INIA tiene un porcentaje de humedad de 8.66%; de proteínas con un 16.23%;
Fibra 1.84%; Grasa 5.20%.(Apaza, et al; 2013)

2.2.6 estacionalidad de la quinua peruana

La quinua en todo el Perú tiene un cultivo muy variable; siendo su produccion ocasional, que
está dada por las estaciones; la siembra empieza en septiembre, se da con más fuerza en octubre
y noviembre y se extiende a los períodos de diciembre. En los meses de abril y mayo son los
meses de porcentajes con más cosecha (tabla 1). La oferta de la quinua es casi permanente durante
todo el año, mientras gran parte de la producción es ofertada meses que se da después de la
cosecha, otra es almacenada racionada para la venta así la venta en meses posteriores. (Tello,
2009)

22
Tabla 1 La cosecha de quinua promedio por año (Tello, 2009) y (Montero 2017)

Quinua (En miles de toneladas métricas)

Meses 2003 2004 2005 2006 2007 2008 2017
Enero 0 0 0 0.01 0 0 0.3
Febrero 0 0 0 0 0 0 0.2
Marzo 0.68 0.08 0.19 1.78 1.87 1.06 1.5
Abril 19.85 12.55 19.68 20.35 20.44 20.32 47.7
Mayo 6.26 11.29 9.93 5.39 6.28 4.79 28.6
Junio 1.9 1.9 2.05 2.15 2.21 2.71 11.4
Julio 1.15 0.97 0.54 0.67 0.95 0.74 4.5
Agosto 0.22 0.19 0.16 0.07 0.06 0.18 1.4
Setiembre 0.02 0.01 0.02 0.01 0 0.06 0.9
Octubre 0 0 0.01 0 0.01 0.01 1.1
Noviembre 0 0 0 0 0 0 1.2
Diciembre 0 0.01 0 0 0 0 1.2

2.2.7 Producción de quinua orgánica

(Crodau,1977) menciona que la zona de mayor producción de quinua orgánica está en Puno –
Perú y Bolivia. Usualmente la quinua que se entrega en los Andes, se desarrolla de forma natural.
La presencia del lago Titicaca es un factor determinante en la producción de esta. La quinua
comúnmente es sembrada después de un cultivo de papa por esta razón la necesidad de abonos
sintéticos es muy escasa y en algunos casos nula. Así mismo, actualmente existen propuestas e
investigaciones innovadoras para la producción de quinua natural particularmente en Puno - Perú
y Bolivia. Por otro lado, Tello (2009) destaca que se debe de diferenciar los distintos sistemas de
producción de quinua, cuando son cultivos rotacionales se les denomina layme o aynocas en
donde es común encontrar de 2 a 6 hectáreas de solo quinua, en los salares de Bolivia la siembra
es muy distanciada por la escasa humedad por lo que solo se encuentran entre 2000 a 3800m.

Tipo Valle, se desarrolla con el maíz en Valle Andinos, en altitudes a partir de los 2000 a 3600
m. las plantas más ramificadas tienen largos periodos vegetativos. Las hojas suelen ser obtusas y
superficialmente dentadas. en este grupo tenemos a la blanca de Junín, amarilla de Marangani.
Tipo Altiplano, estas se desarrollan en lugares cercanos al lago Titicaca a una altura de 3 800
m.s.n.m., estos cultivos son característicos por poseer resistencia a las heladas, su talla es pequeña
y sin ramas, panícula compacta tiene periodo vegetativo corto. Las hojas tienden a ser agudas y
profundamente dentadas. Las semillas son esféricas. (Tello, 2009)

23
2.2 8 Bacterias promotoras de crecimiento vegetal (BPCV)

2.2.8.1 Definición y características

existe una capa alrededor de a raíz, incluido el rizoplano y la superficie de la raíz. La razón por la
cual existen demasiados microorganismos en la rizosfera es en realidad por efecto secundario
derivado de la descarga de materia orgánica e inorgánica como los ácidos y azucares naturales,
por lo que en palabras de (Weert y Bloemberg, 2006) la rizosfera es un microambiente muy
atractivo. De entre todos los organismos microscópicos, existen parásitos o saprofitos y de vida
libre, la presencia de estos mismos propone un cambio común en la red, estructura y plenitud de
las especies tal como lo menciona (Souto et al, 2004). Por otro lado (Milla 2007) afirma que
existen 2 tipos de conexiones microscópicas: las que estructuran una asociación armoniosa con
las plantas y los de vida libre que se encuentran en la tierra ya sea que se encuentren cerca de la
planta o dentro de los cimientos de estas mismas, usualmente estos microorganismos ayudan a
mejorar la calidad o nivel de su desarrollo o bienestar, usualmente se les llama BPCV.

Del 2 al 5% de las rizobacterias completas están asociadas al desarrollo de la planta, estos pueden
utilizar al menos un sistema inmediato o retardado para mejorar el desarrollo y bienestar. Algunos
de ellos son controladores naturales de los patógenos y microorganismos inseguros, a través de la
creación de agentes antiinfecciosos, compuestos líticos, cianuro de hidrogeno y sideróforos o
mediante el desafío de los suplementos, estas acciones afectan el bienestar y el avance de las
plantas, presentándose mejor desarrollo de plántulas, potencia y rendimiento más prominentes
(León, 2001) y (Ahemad y Saghir, 2010).

2.2.8.2 Asociaciones benéficas planta-microorganismo

De entre todas las simbiosis entre microorganismo – planta existen 2 importantes: a) simbiosis
entre el microorganismo - raíz y b) simbiosis entre microorganismos. Estas simbiosis están
aisladas en inseguras, no partidistas y lucrativas. En la simbiosis existe como principal regla 4
impactos únicos: fito estimulación, bio fertilización, biorremediación y control biológico tal como
indica (Weert y Bloemberg 2006). Las BPCV y los Agentes de Control Biológico (ACB)
demuestran acciones que vela a su conveniencia como bio inoculantes, prestando poca atención
al requisito de su capacidad primaria (Avis, et al; 2008).

2.2.8.3 Mecanismos de promoción directa del crecimiento

El avance directo del desarrollo ocurre cuando: 1) los PCB exacerban a las plantas sustancias que
animan su desarrollo (ya sea del tallo o de la raíz), principalmente fitoreguladores, por ejemplo,
auxinas y citoquininas, 2) cuando los microbios fomentan la permeabilidad de los suplementos
para las plantas, por ejemplo, fijación por nitrógeno o solubilización de fósforo; o 3) cuando los
microorganismos estimulan en la planta mecanismos de resistencia localizada. Se denomina

24
promoción directa por que no existen otros organismos involucrados más que la planta y el BPCV
(Cárdenas, 2005).

Tabla 2 Mecanismos de acción directa de las BPCV (Sarabia, et al;2010).

• Mecanismo Efecto

Fijación de nitrógeno asociada a la raíz Biomasa y contenido de nitrógeno

Producción de hormona (auxinas, citoquininas,Biomasa (parte área y radical); ramificación de

giberelinas) raíces; floración.

Inhibición de síntesis de etileno Longitud radical

Aumento de la permeabilidad de raíz Biomasa y captación de nutrientes

BPCV pueden suministrar ciertos complejos, por ejemplo, nutrientes, giberelinas, citoquininas,
ácido – indol – acético y vitaminas en grandes cantidades, estos apresuran la germinación de la
semilla, mejora el desarrollo de las plantas e incrementan la capacidad del cultivo. Estos sistemas
indirectos ocurren cuando los metabolitos liberados por ciertos microorganismos que son
utilizados como controladores de desarrollo y/o precursores de la planta (Tabla 2) Ávila (2004).
Entre los componentes de actividad del BPCV, se destaca la expansión en la admisión de agua y
suplementos por parte de la planta, la generación de fitohormonas y la fijación por el nitrógeno
(Jiménez, 2004).

2.2.8.4 Mecanismos de promoción indirecta del crecimiento

Esta se da cuando las BPCV reducen o previenen los efectos deletéreos producidos por bacterias
fitopatógenos. Los mecanismos responsables de este biocontrol incluyen: la competencia por
nutrimentos, la exclusión de nicho, la producción de metabolitos antifúngicos (algunos son
antibióticos (Figura 3), que incluso pueden proteger a la raíz de las enfermedades causadas por el
ataque de nematodos (Tello, 2009)

25
Figura 3.Mecanismos de control biológico de enfermedades en plantas por bacterias. (a)
Antibiosis, (b) La Resistencia Sistémica Inducida (ISR) y (c) Competencia. (Lugtenberg &
Kamilova, 2009).

2.2.9 tipos de BPCV

Para (Karakurt y Aslantas 2010) hay una gran cantidad de géneros bacterianos que son
considerados como organismos para el desarrollo de las plantas (BPCV) por ejemplo,
Pseudomonas, Burkholderia, Bacillus, Azospirillum, Herbaspirillum, entre otros. Mientras que
Ochoa et al. (2010) ha propuesto la división en 2 grupos: el PGPB o Bacterias que promotoras del
crecieminto de plantas que ayudan en el desarrollo de las plantas, influyendo en la admisión de
agua y suplementos, el desarrollo del sistema radical y ayudan a el funcionamiento de otros
microorganismos benéficos presentes en la rizósfera (Sarabia et al, 2010)

Algunos otros autores afirman que los beneficios producidos por estos organismos microscópicos
en las plantas se deben a la amalgamación de las fitohormonas y la obtención natural del nitrógeno
atómico (N2). Provocando una longitud radical que es más que la normal en la asimilación del
agua y los suplementos (Schoebitz Cid, 2006). Algunas investigaciones han descubierto que los
BPCV que fijan N o solubilizan P incrementan el desarrollo y la creación de albaricoque, nuez y
manzana sin cáscara a largo plazo. Los trabajos de investigación con manzanas dieron a ver que
un pequeño inóculo de los microbios expandió el crecimiento vegetativo y además tuvo impacto
en la hoja con una sustancia dietética más alta. Estos microbios son significativos debido a los
impactos que aplican sobre la tierra, lo que respalda una accesibilidad más notable de los
suplementos y un desarrollo y mejora superior de las plantas de (Karakurt y Aslantas,2010). Estos
microorganismos también son significativos debido a que se ha visto que su aplicación permite
disminuir la extensión actual de los compost (Adesemoye y Kloepper, 2009). BPCV ha recibido
una gran consideración últimamente, en el campo de la biorremediación, en oposición al problema

26
inorgánico, los microorganismos pueden degradar e incluso mineralizar el problema natural en
relación con las plantas (Ochoa et al., 2010).

2.2.9.1 Importancia de las BPCV en los cultivos agrícolas

Hay pruebas que muestran que BPCV puede tener una verdadera historia de progreso en la
horticultura factible. En cualquier caso, para que estos inoculantes microbianos tengan un
resultado positivo, debe considerarse una progresión de cualidades, por ejemplo, la edad de la
planta y las propiedades físicas, brebaje y natural de la suciedad., aumentan la competencia en el
uso de estiércol y compost (Antoun y Prévost, 2006). Hoy en día, se utilizan diversos
microorganismos con capacidades explícitas en el rubro agrícola para mejorar la rentabilidad de
la planta. Los microorganismos proponen una fuente de suplementos que aprovechan el
funcionamiento de las cosechas, y son una pieza de innovación que garantiza una eficacia natural,
financiera y biológica progresivamente efectiva y sin contaminar la tierra. (Hernández &
Escalona, 2003).

Hay casos fructíferos, por ejemplo, uno en México que fue impulsado el 20 de septiembre de
2000, que fue planeado en el laboratorio de Bioquímica que contiene una bacteria e inhibidor de
avance de desarrollo. de los patógenos de Rhizoctonia y Fusarium que atacan el desarrollo de la
papa, que controla suficientemente a pesar de la creciente rentabilidad por hectárea (Jiménez,
2004). Algunos artículos comerciales que contienen solo microorganismos, generalmente se
denominan biofertilizantes, como a causa de Rhizobium, "fito-estimulantes", como en
Azospirillum, "biopesticidas" cuando se utilizan para el control natural, por ejemplo,
Pseudomonas o adicionalmente, "bioinoculante". Estos se pueden utilizar en cosechas anuales,
pastos de hierba, hortalizas y árboles de productos orgánicos tal como los sugiere Aguirre y Al
(2009). Cuando en la tierra hay niveles intermedios de N, P y K, demuestran que los
microorganismos promotores del crecimiento no suplantan el tratamiento químico; sin embargo,
mejora su producción, logrando grados similares de rentabilidad con un menor costo de abonos
sintéticos (Schoebitz Cid, 2006).

El uso de los microorganismos a grandes escalas como biofertilizantes en cualquier marco de

generación hortícola traería ventajas increíbles, ya que son menos costosos que los inorgánicos,
afectan eficazmente a las plantas (como las de un compost de brebaje) y no generan un efecto
sobre la tierra o afectan a la salud del humano. (Hernández y Escalona, 2003).

2.2.10 Bacillus subtilis

Bacillus subtilis una bacteria tiene un movimiento bioquímico debido a su límite cosmopolita es
una bacteria gram positiva, anaeróbica facultativa, consume mucho oxígeno, se adapta con
facilidadd, catalasa positiva, desarrolla endosporas que permite que vivan en condiciones
antagónicas entran en una etapa de inercia o criptobiosis. Estas pueden extenderse y entrar en la

27
naturaleza, esta bacteria impermeable a las altas temperaturas, a los cambios osmóticos sólidos y
a baja humedad, (Villarreal, et al; 2018)

Clasificación taxonómica de Bacillus subtillis.

Reino: Bacteria
Filo: Firmicutes
Clase: Bacilli
Orden: Bacillales
Familia: Bacillaceae
Género: Bacillus
Especie: Bacillus subtilis
Elaborado por: (Villarreal,et al., 2018)

2.2.10 .1 Bacillus subtilis Como bio controlador de fitopatógenos

Bacillus subtilis es una de las bacterias más investigados por su actividad fitopatógenos, debido
a que esto en sus datos hereditarios comunica cualidades que codifican la síntesis de metabolitos
peptídicos antiinfecciosos que restringen la declaración de ciertos microorganismos patógenos a
través de la antibiosis. (Mendoza, 2018). Así también Márquez (2007) por otra parte menciona
que a pesar de que la antibiosis es el componente utilizado por Bacillus subtilis, existen diferentes
técnicas mediante las cuales aplica su antagonismo esto hace que sea de alto rango como
biocontrolador por otro lado se muestra que las colonias de Bacillus tienen una superficie áspera
o nivelada, de color claro y blanco, a veces tienen un nivel marginalmente curvado, sus bordes
son impredecibles redondos y gruesos, cerosos o de consistencia. Los tipos de esporas o
endosporas de estructura de Bacillus, que son estructuras que pueden resistir de manera autónoma
al microorganismo inmaduro, son particulares para oponerse a condiciones ecológicas hostiles,
por ejemplo, calor, sequedad, solidificación, radiación y sustancias sintéticas peligrosas,
nuevamente Realpe, Hernández y Agudelo (2002) hacen referencia a que cuando se desarrolla
Bacillus subtilis en Cordero Agar-Sangre, sus provincias tienen un ancho de 2 a 4 mm, beta
hemolítico con hemólisis completa, que puede tener una apariencia suave, mucosa o áspera; Sus
bordes pueden ser ondulados o extendidos en el centro y de vez en cuando dan la presencia de
cosechas combinadas.

(Fravel, 2005), menciona que Bacillus subtillis se ha utilizado durante décadas para la elaboración
de suplementos alimenticios (probióticos) para animales y humanos, así como de medicinas. En
la actualidad una gran cantidad de B. subtilis y sus metabolitos como enzimas son utilizadas en la
elaboración de productos biológicos de uso agrícola y biorremediación. En la agricultura esta
bacteria y otras especies representan aproximadamente la mitad de los bio plaguicidas disponibles

28
comercialmente en el mercado mundial. El Bacillus subtilis es utilizado para el control de
enfermedades fúngicas en vegetales, frutas, frutos secos y cultivos vitícolas.

2.2.11 Azotobacter spp.

Azotobacter sp, es un microorganismo habitual del suelo, fijador de nitrógeno y fabricante de
sustancias para el desarrollo de las plantas. Está en su mayor parte conectado con la rizosfera
(zona de la raíz) y en las hojas (filosfera) de numerosas plantas, estructura estructuras únicas
llamadas quistes, las disminuciones en la preparación de nitrógeno se han exhibido en un 40% y
los incrementos de rendimiento en un 25 a la mitad en hortalizas con la utilización de Azotobacter
spp, incrementos de 11% en rendimiento de zanahoria en maíz de 44% y en arroz de 8% y en
16% en cebada; Se han demostrado resultados beneficiosos en tomate, trigo, papa y girasol;
Igualmente. Azotobacter puede fijar mínimamente 10 mg de N2 por gramo de almidón, sin
embargo, su diseminación biológica depende firmemente del problema natural, la viscosidad, la
proporción C / N y el pH (Tejera y Al, 2005).

2.2.11.1 Metabolismo
Son quimio heterótrofos, utilizan azúcares, alcoholes y sales inorgánicas para desarrollarse. Son
fijadores de nitrógeno; en vida libre por lo menos fijan 10 mg de N2 por gramo de azúcar (glucosa)
gastado. Esperan que el molibdeno fije nitrógeno que en parte puede ser reemplazado por vanadio.
Utilizan sales de nitrato y amonio y ciertos aminoácidos como manantiales de nitrógeno. Son
seguros la catalasa y la oxidasa, disminuyen el nitrato, producen H2S e hidrolizan el almidón
(Espín, 2007). Según (Sadoff, 1975), esta variedad involucra células polimórficas gramnegativas
que se replican por doble separación y pueden combinar dos polímeros de importancia industrial:
alginato y polihidroxibutirato (PHB). Algunos tipos de animales, por ejemplo, A. vinelandii y A.
chrocoocum también pueden separarse en células circulares llamadas espinillas. Esta etapa ocurre
cuando se expulsa la glucosa del medio de vida y se incluye un inductor quístico, por ejemplo, ß-
hidroxibutirato elo. Los crecimientos entregados por los microbios de la variedad Azotobacter se
representan como redondos, producidos por el acortamiento y redondeo de una sola célula
vegetativa con una doble capa que rodea la estructura entera.

2.2.11.2 Azotobacter como promotor del crecimiento de plantas

El efecto de rizobacterias en maíz, se determinó en un experimento bajo un diseño de

bloques completos aleatorizados (BCA) con arreglo factorial 4 x 3. El factor A
correspondió a las bacterias con cuatro niveles: sin PGPR, Azotobacter, Azospirillum y
Azotobacter + Azospirillum. Las bacterias se inocularon en las semillas (1 07 bacterias/g)
y en campo se aplicó fertilizante químico (150 N - 75 P - 75 kg ha-1) en todos los
tratamientos. A la cosecha, las bacterias incrementaron significativamente el rendimiento

29
y componentes, alcanzándose los mayores valores con Azotobacter, El efecto de la
inoculación en conjunto de Azotobacter y Azospirillum fue significativamente igual que
el de Azospirillum y a su vez, ambos fueron superados por Azotobacter, por otro lado,
para determinar el efecto de diferentes fertilizantes biológicos y químicos en el
rendimiento de maíz se realizó un experimento en condiciones de campo, bajo un diseño
de bloques completamente aleatorizado, BCA, con arreglo 8 factorial. El factor A
correspondió a la inoculación de Azotobacter (con o sin), parámetros del maíz,
alcanzándose los mayores valores con la interacción de ambos. Se demostró que con
Azotobacter se disminuyó en 50 % los requerimientos de nitrógeno y fósforo en el cultivo
de maíz (Sarajuohi, et al, 2012).

2.2.12 Pseudomonas spp

Los organismos microscópicos de la clase Pseudomonas tienen una capacidad extraordinaria para
utilizar una variedad variada de suplementos, razón por la cual se aclara su universalidad. Su
movimiento enzimático los convierte en una importante reunión de microorganismos, ya que son
responsables de la degradación que consume oxígeno de numerosas mezclas en diferentes
entornos (Pérez, et al, 2012). Recientemente, diferentes creadores como (Hernández, et al, 2014)
revelaron recientemente la viabilidad de las cepas de Pseudomonas con acción hostil, contra
fitopatógenos que influyen en rendimientos de importancia financiera.

Esta familia bacteriana es un caso sorprendente de la mezcla de varios componentes a través de

los cuales aplica un control orgánico convincente, recordando la enemistad directa y el
alistamiento de obstrucción para la planta de. Sea como fuere, Pseudomonas no puede crear
esporas de obstrucción, lo que restringe su plan para uso comercial. P. fluorescens produce
metabolitos, por ejemplo, sideróforos, antimicrobianos, mezclas inestables, catalizadores y
fitohormonas (Showkat et al, 2012). Por otra parte, hay varios especialistas que informan que esta
bacteria es un patógeno en rendimientos de importancia monetaria (Pérez et al, 2012)

Generalidades de Pseudomonas fluorescens

Pseudomonas fluorescens son microorganismos baciliformes, de alto impacto, tienen algunos

flagelos polares. Son conocidos por su capacidad para animar el desarrollo de plantas que viven
en contacto con ellas (Madigan y Martinko, 2005). Este lo clasifica en:

30
 Reino: Bacteria

Filo: Proteobacteria
Clase: Gammaproteobacteria
Orden: Pseudomonadales
Familia: Pseudomonadaceae
Género: Pseudomonas
Especie: Pseudomonas fluorescens
Estos organismos microscópicos son bacilos gramnegativos, rectos o marginalmente doblados y
saprófitos. Se pueden encontrar en ambientes marítimos y en la tierra. No enmarcan esporas y la
temperatura más grande para su mejora es de 25 a 30 ° C, a pesar de que pueden desarrollarse de
5 a 42 ° C. Requiere un pH imparcial y no se desarrolla en ácido condiciones (pH ≤ 4.5). Sus
flagelos polares hacen posible su desarrollo dinámico en fluidos. Su tono fluorescente
(fluoresceína) responde a la luz brillante, aunque de vez en cuando no fluye cuando la forma de
vida es posterior o después de unas pocas sociedades de investigación. Florecen en el exterior de
las raíces, ya que son adaptables en su digestión y pueden utilizar diferentes sustratos creados por
ellos, interactuando en una ruta cooperativa con la planta (Madigan y Martinko, 2005).

Pseudomona fluorescens tiene una capacidad extraordinaria para solubilizar fósforo. La bacteria
puede llevar a cabo este movimiento a través de dos cursos: el primero es la generación de ácidos
naturales (cítricos, oxálicos, glucónicos) que siguen el pH de la suciedad, favorecen la
solubilización del fósforo inorgánico y descargan el fosfato a la suciedad. El otro curso es a través
de las fosfatasas, estas son proteínas de hidrolasa (monosterasas y diesterasa fosfórica) que dan
seguimiento a los enlaces éster, descargando las acumulaciones de fosfato de emisión natural. Las
dos vías producen una medida más prominente de fosfato, accesible para ser consumida por los
cimientos subyacentes de las plantas de (Cornelis, 2008). Otra perspectiva excepcional en
Pseudomona fluorescens es la creación de sustancias vigorizantes para el desarrollo. Las
sustancias principales de este tipo son las hormonas (auxinas, giberelinas y citoquininas).
Además, también producen aminoácidos y anunciantes explícitos de desarrollo de plantas. La
creación de estas sustancias es concebible dado que la convergencia de los seres vivos en el marco
de la raíz es satisfactoria y que existe un problema natural suficiente en la tierra (Madigan y
Martinko, 2005).

Mecanismos de acción de Pseudomonas fluorescens como estimuladora del crecimiento en

plantas, Se escribe mucho sobre la utilización potencial de los microbios relacionados con las
plantas como operadores que fortalecen su mejora y bienestar. (Ahmet y col, 2010) Esa es la razón
por la que (Bashan et al. 2003) propusieron dos nuevos términos para la utilización lógica general
de PGPB; Estos fueron: desarrollo de plantas que avanzan los microorganismos biocontroladores,

31
por ejemplo, biocontrol en plantas (Biocontrol-PGPB) y microbios animadores de desarrollo de
plantas (PGPB).

- Secuestro de hierro: la partícula férrica de Fe3 + es la estructura trascendente en la naturaleza,

por lo que la medida de hierro accesible para ser absorbida por las formas de vida es
increíblemente baja. (Bashan, et al; 2003).

Pseudomonas putida, (Rives, et al; 2012) también lo considera como organismos microscópicos
diazotróficos, que como inoculantes microbianos establecen una opción increíble en la utilización
de compuestos de nitrógeno. Estos microbios pueden disminuir el nitrógeno climático, donde se
encuentra como nitrógeno esencial sin límites, y hacerlo accesible para los cultivos.

2.2.12.1 Pseudomonas fluorescens como agente de control biológico

La manera más común de controlar plagas es fertilizantes químicos; sin embargo, se ha visto que
estos tienen consecuencias negativas en todo el ambiente y por consecuencia de la salud humana
(Kah y Brown, 2007). Una de las opciones muy prometedora para el control de fitopatógenos es
el grupo de Pseudomonas fluorescentes. Esta colección bacteriana es muy importante colonizador
de la rizosfera de la planta (Rands, 2003). La clase Pseudomonas produce mezclas extracelulares
conocidas como bio surfactantes. La investigación dirigida por (Tran, et al;2007), indicó que los
bio surfactantes entregados por las especies Pseudomonas tienen movimiento lítico en las
zoosporas de los géneros Phytophthora y Pythium.

2.2.13 Nitrógeno

El nitrógeno es regularmente el componente más escaso en la generación de cultivos e (INPOFOS,

1997) hace referencia a que es fundamental para el desarrollo de las plantas, que requieren una
gran cantidad de N para desarrollarse normalmente. (Gros, 1992) muestra que el fósforo y el
potasio pueden acumularse en la tierra, siendo accesibles para las plantas. De todos los
componentes saludables, el nitrógeno es el que no existe en la roca madre. El que está en el suelo
se origina en el clima. (Bazan, 2014) también (Tisdale y Werner, 1991) mencionan que hay etapas
que se comparan con un período de desarrollo extremo donde el requerimiento de nitrógeno es
más notable ya que pueden ser a causa de la fructificación, el florecimiento y el conjunto de
productos orgánicos, una planta que siempre Con el nitrógeno se obtiene una mejora decente de
las hojas y los tallos.

El nitrógeno como una característica de la partícula de clorofila se dedica al procedimiento de la

fotosíntesis. Es un componente de nutrientes, de esta manera, adicionalmente un componente
básico de aminoácidos, estas proteínas de estructura y otras mezclas naturales básicas
(compuestos, coenzimas, nutrientes, ácidos nucleicos) (INPOFOS 1997) y (Scheiner y Lavado
1999). La reserva de N se identifica con la utilización de azúcares. En el momento en que el N es

32
deficiente, los almidones se almacenarán en las células vegetativas causando el engrosamiento de
(Bazán, 2014) igualmente se da cuando se da que no hay presencia de nitrógeno, las plantas tienen
tallos delgados y leñosos que pueden ser resultado a la realización de abundancia de carbohidratos
que no se usan en la amalgamación amino corrosiva. En el momento en que la reserva es suficiente
y las condiciones son positivas para el desarrollo, las proteínas se forman a partir de almidones
hechos. De esta forma, se conservan menos almidones en la parte vegetativa, se forma más
material celular y debido a que el material celular está profundamente hidratado, resultan plantas
suculentas progresivas (Zeiger y Taiz, 2006).

En el momento en que el inventario de N de la condición de la raíz es deficiente, el N de las hojas

viejas se activa para sostener los órganos juveniles de la planta. Por lo tanto, las plantas que
experimentan los efectos nocivos del N carecen de efectos secundarios de insuficiencia en
bastante tiempo. En tales hojas, las proteínas se han hidrolizado y los aminoácidos posteriores se
redistribuyen a las partes juveniles. La proteólisis provoca una descomposición de los cloroplastos
y una disminución del contenido de clorofila. En consecuencia, el amarillamiento de las hojas
viejas es un primer indicio de la alimentación insuficiente de N. (Salisbury y Ross, 1994). Esto
provoca un desarrollo temprano y senescencia debido a la ausencia de nitrógeno está conectado
con el impacto del stock de N en la combinación y transporte de citoquininas. Esta fitohormona
promueve el desarrollo y mantenimiento vivaz de la planta en una etapa progresivamente joven.
(Bazán, 2014)

La insuficiencia de N provoca clorosis foliar debido a la proximidad de las medidas disminuidas

de clorofila que, en casos extremos de insuficiencia de nitrógeno, las hojas se vuelven totalmente
amarillas y luego se consumen al morder el polvo. (Salisbury y Ross, 1994) y (Tisdale y Werner,
1991).

Los efectos secundarios de una planta que necesita nitrógeno son

• Crecimiento retrasado
• sombreado amarillento pálido
• Quema de las puntas y bordes de las hojas.
• Bajo contenido de proteínas (Fertilizantes, 1993)

El N consumido por los cimientos subyacentes de las plantas se mueve a través del xilema hacia
las la parte superior de la planta. Prácticamente todas las sales de olor ingeridas N se absorben en
el tejido de la raíz y se redistribuyen como aminoácidos. La urea es un compuesto natural
integrado a partir de mezclas inorgánicas. (INPOFOS, 1997).

La forma de vida toma nitrógeno nítrico, en cualquier caso, cuando se aplica nitrógeno amoniacal,
debido a la rápida oxidación microbiana de las sales aromáticas en la suciedad. El pasaje de NO3

33
a la planta es un procedimiento funcional, contra una pendiente electroquímica. Como lo indican
(Gros, 1992), el nitrógeno se ingiere en su mayor parte en la estructura nítrica (NO3). (Tisdale y
Werner, 1991) afirman que el nitrato prevalece en el aire bien circulado a través de suelos algo
ácidos o ligeramente solubles. Estos creadores equivalentes notan que el nitrógeno nítrico es el
último período de mineralización de las reservas naturales, esto resulta de la oxidación de
nitrógeno amoniacal a nitritos y luego a través de la actividad de los microorganismos nitrificantes
en la suciedad que entran en nitratos, que es la estructura debajo de la cual la planta ingiere la
mayor cantidad de nitrógeno El nitrógeno nítrico es muy solvente en el agua y no es retenido por
la intensidad adsorbente de la suciedad. Se desploma a través del agua a una velocidad que
depende de la estructura física de la tierra, a lo largo de estas líneas, debe ser consumida por las
raíces con el objetivo de que no se pierda por el drenaje. Cuando los nitratos son consumidos por
la planta, deben seguir el proceso de cambio, estos se reducen a nitritos en el citoplasma y luego
a sales aromáticas en el cloroplasto para finalmente ser utilizados en la mezcla de proteínas. (Gros,
1992).

En condiciones cada vez más favorables para el desarrollo de las plantas, la gran mayoría del NH4
en la tierra se cambia a NO3 por métodos para nitrificar organismos microscópicos. (INPOFOS
1997).

2.2.14 Fosforo
El fósforo es esencial para el crecimiento de la planta y no puede ser sustituido por ningún otro
nutriente. (Fertilizantes, 1993) menciona que la mayor parte de los cultivos tienen más necesidad
de este elemento al comienzo de su ciclo de crecimiento. (INPOFOS, 1997).

(El fósforo en la mayoría de plantas se encuentra en menos cantidad que el nitrógeno y el potasio.
(Tisdale & Werner 1991) El contenido promedio de P en los suelos del mundo es de 800 mg/kg
y varía entre 35 a 5300 mg/kg. (Sparks 1995). A diferencia del nitrógeno, el fósforo lo podemos
obtener una pequeña parte a partir de la roca madre, tras muchas transformaciones fisicoquímicas
y biológicas pasa a la solución suelo al final del proceso. (Gros, 1992).

Las plantas absorben el fósforo de la solución suelo en forma proporcional a la concentración de

iones fosfato que se hallen en la solución, el nivel de fósforo disponible en suelos cultivados
tiende a acumularse en las capas superficiales. El fósforo en el suelo puede clasificarse en general
como orgánico e inorgánico, dependiendo de la naturaleza del compuesto en el cual se encuentra.
La fracción inorgánica está en numerosas combinaciones con hierro, aluminio, calcio, flúor y
otros elementos, los cuales son poco solubles en agua. (Tisdale y Werner, 1991).

Valores bajos de pH incrementa la absorción del ion H2PO4, mientras los valores más altos del
pH incrementan la absorción de la forma HPO4. Pero la mayoría de plantas absorben en forma
más rápida el fósforo del ion primario H2PO4 y pequeñas cantidades del ion secundario HPO4

34
son absorbidas. (Gros 1992); El P cumple un papel importante en la fotosíntesis, la respiración,
almacenamiento y transferencia de energía, la división y crecimiento celular. También promueve
la rápida formación y crecimiento de las raíces, además el P está involucrado en la transferencia
de características hereditarias de una generación a la siguiente. (INPOFOS, 1997). El papel
fundamental del fósforo es la transferencia de energía (Gros 1992). Los iones fosfóricos son
capaces de recibir energía luminosa captada de la clorofila y transportarla a través de la planta.
La principal ruta de asimilación del fosfato es la formación de ATP. En la mitocondria, la energía
que se dirige a la síntesis de ATP procede de la oxidación del NADH producto de la fosforilación
oxidativa (Zeiger y Taiz, 2006).

El desarrollo radicular se ve favorecido por una buena fertilización fosfórica al principio del ciclo
vegetativo sobre todo si va acompañado de nitrógeno en forma amoniacal. (Gros 1992). El P se
localiza en los fosfolípidos participando activamente en la formación de las membranas, además
se encuentra como constituyente de nucleoproteínas y participa en la transferencia de las
características hereditarias por los cromosomas como constituyente del DNA y del RNA
(Alcantar y Trejo, 2009).

El principal mecanismo de transporte del P a la superficie radicular, el flujo de masa contribuye

en una baja proporción aproximadamente 20% (Bazan Quintana,2014) y según (INPOFOS, 1997)
se dado que las raíces de un cultivo en crecimiento contactan solamente del 1% al 3% del suelo
en los primeros 15 a 20 cm superficiales. El fosfato absorbido por las células de las plantas
rápidamente se involucra en procesos metabólicos, este elemento a diferencia del N no es reducido
en la planta al ser asimilado, sino que es incorporado a los compuestos orgánicos en su mismo
estado de oxidación, se ha observado que después de los 10 minutos siguientes a la absorción, el
80 % del fosfato absorbido se incorporó en compuestos orgánicos (Alcantar y Trejo, 2009).

Las plantas pueden absorber pequeñas cantidades de P2O5 por contacto directo de las raíces con
los elementos sólidos, pero la mayor parte lo toman de la solución del suelo, en forma de iones
fosfato. Estos iones se desplazan desde las raíces hasta las hojas por medio de la corriente que
crea la transpiración de la planta. La absorción es muy activa durante el periodo de máximo
crecimiento y se reduce a partir de la floración. El fósforo es un elemento muy poco móvil en el
suelo, generalmente se mantienen en el lugar donde ha sido colocado el fertilizante y los iones
fosfatos no pueden ser extraídos por las raíces cuando están separados por una distancia de más
de 2mm. Las pérdidas de este elemento por lavado son prácticamente despreciables aun en suelos
arenosos (INPOFOS 1997) y (Gros1992). La mayoría de suelos tamponan rápidamente las
adiciones de fósforo y raramente la solución suelo presenta concentraciones que puedan causar
toxicidad. Tal vez los síntomas más comunes de exceso de fósforo son los ocasionados por las
deficiencias inducidas de micronutrientes, particularmente de Zn y Cu (Sanchez, 2006).

35
A un pH entre 5 y 6, los fosfatos se fijan principalmente como fosfatos de hierro y fosfatos de
aluminio y se hacen menos disponibles. Cuando el pH se eleva de 7.5 a 8.5, los fosfatos precipitan
con el calcio. Generalmente la fijación del fosfato es más baja y su disponibilidad más alta en los
límites ligeramente ácidos de 6.2 a 6.5. (Fertilizantes, 1993). La mayor parte del fertilizante
fosforado incorporado al suelo permanece móvil y es utilizado por la planta, en suelos
medianamente ácidos a neutros. En suelos calizos puede producirse una fijación lenta e
irreversible de una parte del fósforo en forma de fosfatos tricálcicos. (Gros, 1992)

Los factores que afectan la solubilidad del P son de gran trascendencia en el crecimiento de las
plantas, siendo muy importante la actividad de los microorganismos que mineralizan compuestos
orgánicos liberando P inorgánico. El Nitrógeno, especialmente en forma de amonio, aumenta la
solubilidad de los compuestos de P en suelos alcalinos como consecuencia de la nitrificación y
también induce a un incremento en la absorción de P por parte de la planta (Bazan, 2014).

(Fertilizantes, 1993) los síntomas de una planta que le falta fósforo son:

• Poco desarrollo, sobre todo de las raíces

• Retraso en la madurez
• Coloración púrpura del follaje de algunas plantas
• Falta de desarrollo de los frutos y semillas
La deficiencia de P se puede producir incluso en suelos bien provistos de P. también (Bazan,
2014) indica que en muchos suelos se ha demostrado que todas las fuentes comunes de P son
similares agronómicamente cuando se aplican las mismas dosis y cuando los métodos de
aplicaciones son comparables. (INPOFOS, 1997)

Si bien es raro encontrar toxicidad de P en el suelo debido a la gran retención que este nutriente
sufre, un exceso puede inducir a deficiencias de zinc, hierro, calcio, boro, cobre y manganeso;
pero también, puede prevenir la absorción de concentraciones tóxicas de aluminio y metales
pesados. (Bazán, 2014). Las pérdidas más importantes de fósforo del suelo, se deben a las
exportaciones de los cultivos que es muy diferente entre especies y variedades de los cultivos
(Gros, 1992).

2.2.15 Potasio
Las plantas consumen potasio en sumas más prominentes que los diferentes suplementos además
del nitrógeno. A diferencia del fósforo, el potasio está disponible en cantidades moderadamente
enormes en muchos suelos, en cualquier caso, solo un pequeño segmento es accesible para las
plantas de (Bazan, 2014) y Tisdale y (Werner, 1991).

El potasio contenido en los suelos comienza por la podredumbre y la desintegración de las rocas
que contienen minerales de potasio (Tisdale y Werner, 1991). A diferencia de N y P, K no forma

36
mezclas naturales en la planta, su capacidad primaria se identifica en su mayor parte con
numerosos procedimientos metabólicos (INPOFOS 1997).

(Tisdale y Werner, 1991) informan los elementos fisiológicos acompañantes del potasio:

• Ajuste de la apertura de la estoma y las relaciones con el agua.

• Digestión de carbohidratos, disposición y cambio de almidón.
• Mezcla de metabolismo y proteínas.
• Promoción del desarrollo de tejidos meristemáticos.
• Activación de algunos catalizadores.

El potasio cuando está presente como catión K +, junto con su acción con partículas, asume un
trabajo principal en la guía del potencial osmótico, el contenido de agua celular, la turgencia
celular, la corriente y el nivel de sudor. Garantiza una oposición más notable de la planta a la
estación seca, explotando el sistema de agua de agua (Taiz y Zeiger, 2006) y (Gros, 1992). Por
otra parte, también se ha visto que el potasio participa en la fotosíntesis, apoya la mezcla de
azúcares en la hoja al igual que el desarrollo de estas sustancias y su acumulación en ciertos
órganos. El vehículo de azúcares y mezcla de proteínas requiere vitalidad como ATP, que requiere
K para su unión. El potasio en mezcla con el fósforo favorece la mejora de la raíz y da una
consistencia más prominente a los tejidos. Además, la protección contra la infección aumenta
(Gros, 1992).

En la roca madre, los desarrollos cristalinos y volcánicos son comúnmente ricos en potasio, pero
esto es insoluble para todos los efectos; Por lo tanto, la planta no puede utilizarlos. Sea como
fuere, bajo la actividad de especialistas climáticos y raíces, una pequeña parte de este potasio es
dinámicamente accesible para las plantas. Así la accesibilidad al potasio está en su punto más
elevado entre 6 a 7 pH. La idoneidad del potasio en respuesta a su ingestión por los cultivos se ve
afectada por la proximidad de diferentes cationes, por ejemplo, Ca, Mg y Al en suelos corrosivos
y Na en suelos influenciados por sales. (Bazan, 2014)

La falta de potasio no produce de inmediato efectos secundarios notables. (Guevara, 2010)

Primero, solo hay una disminución en la tasa de desarrollo, finalmente, una disminución de los
rendimientos, esto se conoce como hambre envuelta, y en consecuencia, hay clorosis y corrupción
que comienza en los bordes y el cenit de las hojas. Estos efectos secundarios generalmente
comienzan en las hojas viejas, debido a la forma en que suministran K a las hojas jóvenes. Las
plantas con K insuficiente muestran una disminución de la hinchazón y, bajo los estados de
presión del agua, se secan y se vuelven flácidas y son cada vez más vulnerables al daño por
enfermedades y condiciones salinas (Taiz y Zeiger, 2006). La abundancia de potasio accesible en
la tierra provoca una disminución en la ingestión de diferentes cationes, por lo que puede influir
en el rendimiento y la naturaleza de las cosechas. (Bazan, 2014)

37
 III. MATERIALES Y MÉTODOS

3.1. Zona de estudio

La investigación se realizó en el distrito de Puno e Ilave, provincia de Puno, de la región Puno.

Las muestras fueron recolectadas de las parcelas de cultivo de INIA en la rinconada salcedo puno
en las coordenadas del Instituto Nacional de Innovación Agraria Latitud: -15.881820″S
Longitud: -70.000504″ y de las parcelas de cultivo de papa de una comunidad campesina de
Camicachi: las cuales se encuentran localizados en Lat: -16.0855 y Lon: -69.6390-

Figura 4.Toma satelital de lugares de toma de muestras Camicachi - Ilave e INIA Salcedo Puno,
enero 2019

Según estación meteorológica (inalámbrica) marca Vantage Pro2 (figura n°5) Que se encuentra
en la estación experimental del INIA las parcelas cuentan con una temperatura ambiente mensual
en enero de 11.5 °C en febrero de 10.2°C en marzo 10.5°C, abril con 9.74°C con picos de 19.7°C
como temperatura máxima y 0.7°C de temperatura mínima, con precipitación de 217.79 mm en
enero, 120.51 mm en febrero 83.71mm en marzo, 54.05mm en abril, 17.5mm en marzo, humedad
relativa en los cuatro meses de 70,92 %; evaporación media de 111,33 mm y una velocidad
máxima del viento de 5,44 m s-1 y mínima de 3,64 m s-1. Se ubica en el área de clima templado
andino

39
Figura 5. Equipo meteorológico Vantage pro 2, ubicado en parcelas de INIA salcedo, (enero -
abril 2019)

3.2 Tipo y nivel de investigación

El tipo de investigación fue experimental, analítico con nivel aplicativo, debido a que se
inoculo una carga bacteriana fijadora de nitrógeno, solubilizadora de potasio y de fosforo
aislada y presente en suelos de cultivo de parcelas de INIA Salcedo y una comunidad en Ilave
llamada Camicachi en semillas de quinua para evaluar su crecimiento in situ en parcelas
experimentales de la misma institución (INIA) el crecimiento de la plántula se evaluó en 120
días. las muestras recolectadas se procesaron en el laboratorio de INIA salcedo laboratorio de
micropropagación de cultivos.

3.3 Método

3.3.1. Identificación de bacterias biofertilizantes (solubilizadoras de fosfato y potasio y fijadoras

de nitrógeno) en suelos de INIA Salcedo y Camicachi del distrito de Ilave – Puno

3.3.1.1 Frecuencia y Muestreo

Método de muestreo aleatorio simple o al azar, cuyo fundamento de este tipo de muestreo (figura
6) se emplea en casos en los que se dispone de poca información acerca de las características de
la población a medir (Instituto cambio climatico, 2017). El medio más común para minimizar la
desviación estándar en esta selección es asignarle un número a cada unidad de población y
extraer unidades de muestras de una tabla de números aleatorio (Lozano, 2014). Este tipo de
muestreo es recomendable para áreas homogéneas menores a cinco hectáreas, delimitadas por
referencias visibles a lo largo y ancho de toda la zona (Valencia y Hernández 2002).

40
Figura 6. Tipos de muestreo de suelos, (Lozano, 2014)

El campo de cultivo limitado fue aproximadamente de 100 m2, dicho terreno se dividió en nueve
cuadrantes y a partir de estos cuadrantes indicados se colectaron las muestras al azar a
profundidades de 10 a 20 cm con la ayuda de un pico y una pala, se muestreó 500g de suelo de
cada punto.(Mendoza & Espinoza, 2017)

El número total de muestras evaluadas fueron de 6, en la comunidad de Ilave se muestrearon 3

suelos de cultivo de papa y en INIA salcedo de igual manera se recolecto 3 muestras de suelo de
cultivo de papa de manera aleatoria, los cuales fueron rotuladas especificando hora, fecha y sitio;
luego fueron trasladados en bolsas de cierre hermético en una caja de Tecnopor con hielo para
mantenerlas a temperatura de 4°C para su conservación y traslado al laboratorio para evaluar la
carga microbiana. (Mostacedo, et al,. 2000)

(a) (b)
Figura 7.(a) y (b) obtención de muestra de suelo Camicachi e Inía Salcedo (diciembre 2018).

El trasporte; muestras de suelo recolectadas fueron llevadas al laboratorio de microbiología de

la Universidad Nacional del Altiplano, en envase de Tecnopor con hielo para conservar la
muestra de suelo donde se procedió a extender la muestra en una superficie previamente
desinfectada para dejar que la tierra seque 12 horas aproximadamente, realizarle el análisis de
biofertilidad (características de suelo) en el laboratorio de suelos de la facultad de ingeniería

41
agronómica para después realizar el tamizado de las muestras y su respectiva dilución ya antes
mencionada. (anexo 8.2.2)

(a) (b)
Figura 8.transporte de muestras de suelo, (a) muestra de suelo de la estación experimental salcedo
(b) recolección de muestra de suelo de Camicachi Ilave; (diciembre 2018).

3.3.1.2 Análisis de caracterización de suelos

Tabla 3 caracterización de suelos INIA Salcedo y Camicachi, elaboración propia, enero

2019.
Diciembre 2018

Desviación
Parámetros Centros poblados Promedio C.V
estándar

INIA CAMICACHI

SALCEDO ILAVE

Arena (%) 52.10 48.00 50.05 2.90 5.79%

Arcilla (%) 35.00 49.00 42.00 9.90 23.57%

Limo (%) 12.90 3.00 7.95 7.00 88.05%

FRANCO
ARCILLO
Clase textual ARCILLO no aplica no aplica no aplica
ARENOSO
ARENOSO

Materia
5.90 3.15 4.53 1.94 42.97%
orgánica (%)

N total (%) 0.14 0.11 0.13 0.02 16.97%

pH(unidades) 7.25 7.07 7.16 0.13 1.78%

42
C.E. (ms/cm) 0.22 0.14 0.18 0.06 31.43%

P. disponible
15.76 10.10 12.93 4.00 30.95%
(ppm)

K. disponible
258.00 88.00 173.00 120.21 69.48%
(ppm)

Se encontró un pH de 7,5 considerado óptimo para el desarrollo de la planta, una baja

conductividad eléctrica (0,18 ms/cm), lo que indica que no había problemas de salinidad.

a) Aislamiento de bacterias

- Azotobacter spp.

Se vertió 0.1mL de la muestra de dilución en una placa con agar sulfato manitol y se
extendió con una espátula digalski. Se procedió a incubar (25°C aproximadamente) agar
libre de nitrógeno y se incubaron a 31°c por 48 horas. terminado este procedimiento las
colonias que se desarrollaron fueron aisladas en otras placas Petri para mantener el cultivo
puro.

la composición del medio utilizado para las bacterias fijadoras de nitrógeno se detalla
a continuación

Glucosa 10 g/L, Nitrato de potasio 5 g/L, Cloruro de potasio 0.2 g/L,Sulfato de amonio 0.5
g/L, Sulfato de magnesio 0.1 g/L, Sulfato de manganeso trazas 0.1g/L, Púrpura de
Bromocresol 0.125 g/L ,Agar 15 g/L,pH 7.0 ± 2 el cal se preparp para el cultivo selectivo
de las bacterias. (Guevara Granja, 2010) el medio cambia de color indicando la acción del
microorganismo.

Figura 9. Cultivos en medio de libre de nitrógeno, laboratorio INIA Salcedo, (enero 2019).

- Bacillus spp.

43
 Primero se sembró en agar nutritivo la dilución ya antes realizada 1ml con una pipeta en
una placa con medio nutritivo y se extendió con una espátula digalski. La incubación a 35ºC
se mantuvo por 24 horas. El procedimiento se realizó por duplicado hasta obtener cultivo
puro de las cepas sospechosas de especie Bacillus.

(a) (b)

Figura 10. Aislamiento de cepas de Bacillus, laboratorio INIA, (enero 2019)

- Pseudomonas spp.

Con una pipeta se vertió 0.1mL de l amuestra antes diluida en una placa petri con medio
agar pseudomona. Ésta se incubó por 24 horas a una temperatura de 35ºC. Posteriormente
se realizó un repique el procedimiento se realizó por duplicado. A partir de un cultivo joven
se realizó pruebas bioquímicas para la identificación. (Producción de bacterias fijadoras de
nitrógeno (Azotobacter, Bacillus y Pseudomonas); en medio líquido a base de melaza, para
su aplicación en las semillas.

Figura 11. Aislamiento de pseudomonas, laboratorio INIA, (enero 2019)

b) Identificación.

44
se realizaron pruebas microscópicas y bioquímicas siguiendo los siguientes procedimientos:
identificación microscópica, se realizó con el método

- Método de Tinción Gram

Fundamento del método es muy importante en Microbiología, permite realizar diferencias

taxonómicas, separando dos grandes grupos de bacterias (gram-positivas, de color violeta
azulado, y gram-negativas, de color granate o rojo-rosado), (Esaú López-Jácome et al., 2014)

Procedimiento que se realizó fue tomar una muestra colonias obtenidas en los procedimientos
anteriores. Las muestras se observaron al microscopio hasta un aumento de 100x

1.Preparar la extensión del cultivo: En un portaobjetos limpio, libre de grasa, y con un asa
bacteriológica colocar una pequeña cantidad de la colonia bacteriana.

a) Muestra solida: colocar solución salina previamente a colocar la colonia, igual en muestra
semisólida.

b) Muestra liquida: colocar la colonia directamente.

2. Dejar secar al aire, luego fijar la preparación pasando la placa rápidamente por el mechero (2
o 3 veces).

3. Agregar violeta cristal durante 1 minuto, el cual tiene afinidad con el peptidoglicano de la
pared bacteriana, enjugar con agua seguidamente.

4. colocar en la preparación Lugol por tiempo de 1 minuto, enjuagar con agua.

5. agregar alcohol acetona y enjuagar automáticamente,

5 añadir safranina a la preparación por tiempo de 1 minuto, enjuagar a chorro de agua.

Figura 12. Método de tinción Gram, realizado para cada uno de los cultivos. Laboratorio Inía,
(enero 2019).

De las cuales se obtuvieron las siguientes muestras caracteristicas de los generos que se
buscaban aislar

45
 (a) (b) (c)
Figura 13.capturas de imágenes en microscopio de las cepas sospechosas (a) bacilos positivos
con endosporas característico de Pseudomonas, (b) bacilos positivos característicos de Bacillus
(c) cocos característicos de Azotobacter; laboratorio Inía, (enero 2019.)

c) Pruebas Bioquímicas

• Prueba de la oxidasa,

Fundamento de esta prueba es demostrar la presencia de enzimas oxidasas. La reacción de la

oxidasa se da gracias a la presencia de un conjunto de citocromo oxidasa que realiza la oxidación
del citocromo el cual es reducido por el oxígeno molecular desarrollandose agua o peróxido de
hidrógeno según la especie bacteriana. (Fernandez , et al, 2010)

Procedimiento, Utilizamos tiras de papel impregnadas con el reactivo para-amino-N-dimetil-

anilina, que se oxida por la citocromo-oxidasa. El procedimiento consiste en impregnar una
colonia sospechosa a la zona coloreada de la tira reactiva. De la marca Bactident® Oxidasa |
113300 - Merck Millipore. El resultado es positivo cuando la tira cambia de color a azul.

(a) (b)

(c) (d)

46
Figura 14.Prueba de oxidasa, (a) prueba oxidasa marca Bactident® Oxidasa| 113300 - Merck
Millipore (b) prueba para Pseudomona resultando positivo (c) prueba positiva para Bacillus (d)
prueba positiva para Azotobacter. laboratorio INIA, (enero 2019)

• Prueba de catalasa.

Fundamento, La catalasa es un enzima que esta en los microorganismos que tienen citocromos.
Las bacterias que degradan catalasa hidrolizan el peróxido de hidrógeno en agua y oxigeno
gaseoso que se representa en forma de burbujas. (Fernandez, et al; 2010)

Procedimiento, Con un asa de siembra se tomó una colonia pura de 24 a 48 h de incubación y se

extendió sobre una lámina portaobjetos. Luego se adiciono una gota de H2 O2 al 30%. La
reacción de burbujas indicó la liberación de O2 característico de un resultado positivo de acuerdo
con (Guzmán, et al; 2012)

(a) (b)

(c)
Figura 15. prueba de catalasa (a) Bacillus (b) Azotobacter (c) Pseudomonas, laboratorio INIA
(enero 2019).

• Utilización de citrato,

Fundamento: determina si un microorganismo es capaz de utilizar citrato como única fuente de

carbono para el metabolismo y crecimiento, provocando alcalinidad. El medio incluye citrato de

47
sodio, un anión como única fuente de carbono y fosfato de amonio como única fuente de
nitrógeno. (Bailon, et al; 2003)

Procedimiento, se tomó una colonia bien aislada de la superficie del medio de aislamiento
primario y se inocula como una estría única en la superficie del pico de flauta. Tiempo de
incubación 24 horas Temperatura de crecimiento 35 - 37° C. se observa crecimiento y medio de
color verde. (figura 16).

Figura 16. prueba de citrato, laboratorio INIA, (enero 2019).

• Agar Gelatina

Fundamento, observar si un microorganismo puede producir enzimas de tipo proteolítico es decir

gelatinasas que van a dar como resultado licuar el medio de solido a líquido. (Bailon, et al;2003).

Procedimiento, se inoculó una colonia de la muestra y se deja en la incubadora, la digestión de

la gelatina (licuefacción). Tiempo de incubación 24 horas a temperatura 35 - 37 ° C se reporta
Positivo cuando él esta licuado (estado líquido)

(a) (b)

Figura 17. prueba de gelatina (a) y (b), laboratorio INIA, (enero 2019).

• Prueba de SIM

48
Fundamento, este método demuestra la capacidad del triptófano que es un aminoácido que es
oxidado por algunas bacterias para que puedan formar metabolitos como el indol, escatol e
indolacético.

Ver si un organismo puede ser móvil o no y si es capaz de liberar ácido sulfhídrico por la acción
de las enzimas que contienen azufre que realiza una reacción la cual demuestra un halo de color
negro en el medio de cultivo.

Figura 18. prueba SIM, laboratorio INIA, (enero 2019).

• Prueba Movilidad

Fundamento, determina si un organismo es móvil o inmóvil.

Procedimiento sembrar las colonias sospechosas por un tiempo: 24 - 48 horas a temperatura 35

- 37° C, Adicionar 5 gotas de reactivo de Kovács y agitar suavemente el tubo Interpretar
inmediatamente. Se reporta Indol Positivo con la formación de un anillo rojo en la superficie del
medio y negativa cuando no se produce color.

(a) (b)

49
Figura 19.prueba de INDOL (a) y (b). laboratorio INIA, (enero 2019).

dilución de muestra para cultivo, se obtuvo la cantidad de 10 g de suelo de cada una de las
muestras recolectadas, se diluyeron en 90 ml de agua destilada estéril, a partir de esta muestra
madre después se prepararon soluciones seriadas en agua destilada estéril en base a las muestras
de suelo se hicieron diluciones de hasta 10-5 y tanto los aislados obtenidos a partir de raíces y
suelo se sembraron en placas de Petri con medio específico a partir de cada una de estas
diluciones se sembró por duplicado las muestras con método de superficie en los medios agar
selectivos nutritivo, (Álvarez , 2015)

Figura 20. Prueba de movilidad, laboratorio INIA, (enero 2019).

• Prueba de hidrolisis de almidón

Fundamento, la estructura del almidón se puede degradar con el empleo de enzimas del tipo
endoamilasas, exoamilasas.

Procedimiento, de cada una de las cuatro muestras incubadas, se pesó 10 g de suelo y se hizo una
disolución con 90 mL de solución salina fisiológica estéril, luego fue sometida a calor de 80 ºC
por 20 min; se adicionó el reactivo de Lugol hasta cubrir toda la superficie. Los cultivos
bacterianos con capacidad de hidrólisis del almidón fueron reconocidos por la observación de un
halo de hidrólisis de almidón alrededor de la colonia. (figura 21). (LLenque, 2011).

50
Figura 21.Prueba de degradación de almidón, laboratorio Inía, (enero 2019).

• Prueba de fluorescencia

Fundamento, la microscopía de fluorescencia se basa en los mismos principios de óptica de la

microscopía común, con diferencias en el manejo y el diseño relacionadas con la generación y
transmisión de longitudes de onda adecuadas a los fluorocromos que se quieren visualizar, ya
sean propios de la muestra o de la coloración utilizada (Franco Cardoza, 2005)

Procedimiento, los procesos de excitación generalmente requieren longitudes de onda cortas en

el UV cercano (lámpara de halógeno-cuarzo, arcos de mercurio, etc.). se llevó a ambiente oscuro
la caja Petri con las bacterias cultivadas, (Sánchez & Montoya, 2012)

Figura 22. Prueba de fluorescencia para los cultivos de bacterias, laboratorio INIA, (enero 2019).

3.3.1.2. Descripción detallada de los equipos y materiales

o Los equipos utilizados en este objetivo fueron Destilador de agua, Autoclave, Incubadora,
Balanza analítica, Microscopio biológico óptico, Vortex Vantage Pro2
o Reactivos que se utilizó Agar nutriente. Agar azotobacter, Agar pseudomona, pruebas
bioquímicas de glucosa, Prueba bioquímica de catalasa, Tinción gram, Agar sim, Agar
almidón, Citrato, Prueba oxidasa, Prueba de indol, agua destilada.

51
o Materiales de laboratorio; Pipeta, Papel aluminio, Cristalería (Erlenmeyer, Matraces,
Baker), Cajas Petri, tubos de ensayo Picos, Palas, caja de Tecnopor, bolsas con cierre
hermético

3.3.1.3 Variables que se Analiza

Las variables que se analizan en este objetivo son: variable dependiente especies identificadas y
variable independiente zonas de muestreo

3.3.1.4 Prueba Bioestadística

Para el análisis estadístico en esta prueba se utilizó el software Excel el cual describen cual es
la diferencia de población de bacterias entre Ilave - Camicachi e INIA – Salcedo y la
identificación de cada una de las especies verificados por las pruebas de bioquímica

3.3.2, Cuantificación de bacterias solubilizadoras de fosfatos y potasio y fijadoras de

nitrógeno en suelos de INIA salcedo e Ilave Camicachi del distrito de puno

3.3.2.1 Frecuencia y Muestreo

El muestreo se realizó por el método aleatorio simple o al azar con 3 repeticiones para cada punto
de muestro, esto en una sola ocasión antes de realizar el sembrío de la quinua y por ende el inoculo
de bacterias.

52
Figura 23. Diluciones seriadas de muestras de suelo para cultivo y posterior recuentro, (Pérez, t
al, 2014)

Fundamento, La técnica se basa en contar las “unidades formadoras de colonias” o UFC presentes
en un g o ml de muestra (Camacho et al., 2009). fue dada por conteo directo de unidades
formadoras de colonias en placas. Durante el conteo se observaron y seleccionaron colonias que
se distinguían en cuanto a forma, aspecto de la superficie, color y tamaño. Los morfotipos
seleccionados fueron purificados y mantenidos en agar nutritivo, pseudomonas y Azotobacter
para su posterior evaluación in vitro de la actividad solubilizadora de fosfato y fijadora de
nitrógeno según (Pérez, et al; 2014)

Procedimiento, el método de muestreo fue aleatorio simple o al azar, (figura 6) se emplea en casos
en los que se dispone de poca información acerca de las características de la población a medir,
se aplicó la metodología de diluciones seriadas, realizada por (Tejera , et al, 2013), para esto la
muestra de suelo ya tendría que estar tamizada una vez hecho esta acción se procedió a pesar en
la balanza analítica de precisión 1 g del suelo y se adicionó a un tubo de ensayo que contenía 9
ml de solución salina (NaCl al 0,85%), se agitó manualmente por un periodo de un minuto.
Seguidamente se obtuvo diluciones decimales seriadas desde 10-1 hasta llegar a 10-5, se sembraron
0,1 ml por diseminación mediante asa de Drigalsky en el medio agar nutritivo, para así
posteriormente contar en toda la placa las unidades formadoras de colonias (UFC/g). Una vez

53
terminada el conteo de colonias se multiplica por el total de la dilución que en este caso sería de
10-5 (x 100000).

Figura 24. Dilución de muestras de suelo. Laboratorio INIA, (enero 2019).

Para calcular el numero de bacterias se aplica la siguiente formula:

3.3.2.2 Descripción de los equipos y Materiales

o Los equipos que se utilizaron en este objetivo fueron cámara de flujo laminar, estufa
Destilador de agua, Autoclave, Incubadora, Balanza analítica, Microscopio biológico óptico
o Reactivos, Agar nutriente, Agar Azotobacter, Agar Pseudomona
o Materiales de laboratorio, Pipetas, Papel aluminio, Cristalería (Erlenmeyer, Matraces,
Baker), Cajas Petri

3.3.2.3 Variables que se Analizan

En este objetivo las variables fueron: variable dependiente número de colonias de recuento de
placa y la independiente fueron las zonas de muestreo

3.3.2.4 Prueba estadística

Para este objetivo se utilizó el software estadístico de infostat en el cual se desarrolló la prueba
de T de student para muestras independientes, para determinar si hubo diferencia entre las zonas
de muestreo, Tukey para confirmar y también Excel para determinar el coeficiente de variación.

54
3.3.3 Evaluar el efecto de la inoculación de bacterias solubilizadoras de potasio y
fosforo y fijadoras de nitrógeno en el crecimiento de plántulas de quinua hasta la etapa
de botón floral en la variedad INIA SALCEDO en parcelas demostrativas del INIA
Salcedo del distrito de Puno.

3.3.3.1 Frecuencia y Muestreo

Preparación del suelo, se realiza un riego abundante y largo, en el campo elegido, para que la
germinación de semillas sea buena y no compita con malezas ni con cultivos anteriores, Esta
actividad hace que la quinua tenga una fase inicial de establecimiento sin competencia con
malezas. El riego proporciona la humedad requerida para una buena preparación de suelo y
ayudará a controlar insectos de suelo (Gómez & Aguilar, 2017).

(a) (b)

Figura 25. Preparación del suelo (a) antes de preparado (b) después de preparado, parcelas INIA
Salcedo, (enero 2019).

En la tierra previamente preparada se realizó la siembra de las semillas inoculadas,

• Preparación de concentración de bacterias para inoculo

Cada cepa nativa de Azotobacter spp de Bacillus subtilis y de pseudomona se sembró

respectivamente en sus medios de cultivo ya antes mencionados con la biomasa desarrollada se
obtuvieron suspensiones de solución salina estéril cuya concentración fue de 3x 10 – 8 cuya
concentración se estandarizo por la técnica de MAC FARLAND (Paola et al., 2012) para
proceder a juntarla con la melaza para su posterior siembra .

55
 (a) (b) (c)

(d) (e)

Figura 26.Preparación del inoculo a partir de las cepas ya aisladas e identificadas medidas por
MACFARLAND (a) Bacillus subtilis (b) Azotobacter spp (c) Pseudomonas florescens (e)
MACFARLAND (d) solución de bacterias. Laboratorio INIA, (enero 2019).

• Inoculo de bacterias a semillas,

La metodología descrita a continuación se aplicó para cada género de bacteria aislado. En 3

Erlenmeyer de 125mL de capacidad se adicionaron 50mL de medio líquido a base de melaza pura
al 20% respectivamente, con un pH ajustado en 7 y sellados con tapones de algodón estéril Luego
se agregó el inóculo previamente preparado (Rodriguez & Hernandez, 2009)

56
 (a) (b)

(c) (d)

Figura 27.Aplicación de inoculo de solución bacteriana a semillas de quinua (a) melaza (b)
adición de melaza a semillas de quinua (c) adición de semillas con melaza a solución de bacterias
(d) extendido de semillas, laboratorio INIA, enero 2019.

• Método de siembra

Se realizó el método de siembra directa, debe ser realizada inmediatamente de concluida la

preparación del suelo. De esta forma las semillas dispondrán de humedad adecuada y se reducirá
la competencia con malezas.

Siembra manual, Surcado: Se recomienda el sistema de siembra en surcos porque facilita la

realización de una serie de labores culturales que se aplican durante el cultivo.

57
Figura 28.siembra de las semillas inoculadas, parcelas INIA Salcedo, (enero 2019).

Los estudios del efecto de los aislados en quinua en condiciones no controladas se llevaron a cabo
mediante experimentos in situ, en una parcela experimental de 10m por 25m. Los experimentos
en condiciones no controladas se realizaron utilizando un diseño experimental totalmente
aleatorizado con 03 réplicas y 5 repeticiones, se monitoreo la temperatura, humedad relativa,
riego, incidencia de plagas y el sustrato a aplicar. Se monitoreo el crecimiento cada semana (figura
38, 39, 40, 41).

Sin inóculo variedad INIA SALCEDO Con inóculo variedad INIA SALCEDO
Repetición 1 Replica 2 Replica 3 Repetición 1 Replica 2 Replica 3
Repetición 2 Replica 2 Replica 3 Repetición 2 Replica 2 Replica 3
Repetición 3 Replica 2 Replica 3 Repetición 3 Replica 2 Replica 3
Repetición 4 Replica 2 Replica 3 Repetición 4 Replica 2 Replica 3
Repetición 5 Replica 2 Replica 3 Repetición 5 Replica 2 Replica 3
Sin inóculo variedad PASANKALLA Con inóculo variedad PASANKALLA
Repetición 1 Replica 2 Replica 3 Repetición 1 Replica 2 Replica 3
Repetición 2 Replica 2 Replica 3 Repetición 2 Replica 2 Replica 3
Repetición 3 Replica 2 Replica 3 Repetición 3 Replica 2 Replica 3
Repetición 4 Replica 2 Replica 3 Repetición 4 Replica 2 Replica 3
Repetición 5 Replica 2 Replica 3 Repetición 5 Replica 2 Replica 3

Figura 29.Esquema de siembra de semillas inoculadas, esquema elaboración propia, (enero

2019).

Se realizo monitoreos todas las semanas cada 3 días. Evaluamos a partir de los 120 días de la
siembra se evaluó la altura de la planta, número de hojas, tamaño de raíz y diámetro de tallo del
tallo. A los 120 días en la etapa de botón floral después de la siembra se evaluaron los parámetros
morfológicos y biomasa total del cultivo y se tomaron 5 muestras de cada una de las repeticiones
en total se evaluaron 300 muestras de plántulas de quinua en ambas especies (Álvarez, 2015).

58
3.3.3.2 Descripción de equipos y materiales
o Para este objetivo se utilizaron los siguientes equipos una pala, un pico. Prueba de
MacConkey, estufa, incubadora, balanza analítica, escalímetro.
o Los siguientes reactivos e insumos agua destilada, melaza, quinua variedad Pasankalla y
variedad INIA Salcedo
o Los materiales de laboratorio placas Petri, tubos de ensayo aza de siembra envases estériles,
gaza, papel toalla.

3.3.3.3. Variables que se utiliza

Las variables consideras en este objetivo fueron variables dependientes crecimiento del tallo,
longitud del tallo, numero de hojas, crecimiento de la raíz; y variable independiente el inoculo de
concentración de bacterias a la 10-4 según la escala de McFarland.

3.3.3.4. Pruebas estadísticas

Las pruebas estadísticas utilizadas se realizaron en el software estadístico infostat la prueba de T
de student para variables independientes y Tukey para determinar si existió diferencia
significativa entre las plántulas sin inoculo y las plántulas con inoculo.

3.3.4. Evaluar el efecto de la inoculación de bacterias solubilizadoras de potasio y fosforo

y fijadoras de nitrógeno en el crecimiento de plántulas de quinua hasta la etapa de botón
floral en la variedad quinua roja o Pasankalla en parcelas demostrativas del INIA Salcedo
del distrito de Puno,

3.3.4.1. Frecuencia y Muestreo

Se realizo el mismo procedimiento anterior, en este caso solo se cambió de variedad de quinua a
Pasankalla o quinua roja.

Los estudios del efecto de los aislados en quinua en condiciones no controladas se llevaron a cabo
mediante experimentos in situ, en una parcela experimental de 10m por 25m. Los experimentos
en condiciones no controladas se realizaron utilizando un diseño experimental totalmente
aleatorizado con 03 réplicas y 5 repeticiones, se monitoreo la temperatura, humedad relativa,
riego, incidencia de plagas y el sustrato a aplicar.

Evaluamos a partir de los 120 días de la siembra se evaluó la altura de la planta, número de hojas,
número de tallos y grosor del tallo. Estos monitoreos se realizaron todas las semanas cada 3 días.
A los 120 días en la etapa de botón floral después de la siembra se evaluaron los parámetros
morfológicos y biomasa total del cultivo y se tomaron 5 muestras de cada una de las repeticiones

59
y se evaluó el número de hojas el tamaño de talo el tamaño de raíz .(Álvarez Rodríguez, 2015) y
se realizó la biometría de las muestras recolectadas (figura 42, 43)

3.3.4.2 Descripción de equipos y materiales

o Para este objetivo se utilizaron los siguientes equipos una pala, un pico. Prueba de
MacConkey, estufa, incubadora, balanza analítica.
o Los siguientes reactivos e insumos agua destilada, melaza, quinua variedad Pasankalla y
variedad INIA Salcedo
o Los materiales de laboratorio placas Petri, tubos de ensayo aza de siembra envases estériles,
gaza, papel toalla.

3.3.4.3. Variables que se utiliza

Las variables consideras en este objetivo fueron variables dependientes crecimiento del tallo,
longitud del tallo, numero de hojas, crecimiento de la raíz; y variable independiente el inoculo de
concentración de bacterias a la 10-4 según la escala de McFarland.

3.3.4.4. Pruebas estadísticas

Las pruebas estadísticas utilizadas se realizaron en el software estadístico infostat la prueba de T
de student para variables independientes y Tukey para determinar si existió diferencia
significativa entre las plántulas sin inoculo y las plántulas con inoculo.

60
 V. RESULTADOS Y DISCUSIÓN

4. 1 Identificación bioquímica de bacterias biofertilizantes (solubilizadoras de fosfato y

potasio y fijadoras de nitrógeno) en suelos de INIA Salcedo y Camicachi del distrito de
Ilave

Se logro aislar e identificar 3 géneros de bacterias promotoras del crecimiento vegetal en las
muestras de suelo en cultivos de papa, este tipo de suelo son alcalinos (Tabla Nº4), la
identificación se realizó mediante pruebas bioquímicas tal como se muestra en el Tabla Nº9 las
bacterias identificas son Pseudomona flourescens, Pseudomona putida, Bacillus subtilis y
Azotobacter spp.

Tabla 4. Pruebas bioquímicas hechas para la identificación de las especies bacterianas

promotoras del crecimiento vegetal (BPCV), elaboración propia, febrero 2018.
Muestreo Salcedo Ilave

Especies P. flourescens B. subtilis Azotobacter sp. P. putida B. subtilis Azotobacter sp.

Repeticiones R1 R2 R3 R1 R2 R3 R1 R2 R3 R1 R2 R3 R1 R2 R3 R1 R2 R3

Florescencia + + + + + + - - - + + + + + + - - -

Catalasa + + + + + + + + + + + + + + + + + -

Oxidasa + + + - - - + + + + + + - - - + + +

Tinción Gram - - - + + + - - - - - - + + + - - -

Agar SIM + + + + + - - - - + + + + + + - - -

Agar Almidón + + + + + + - - - - - - + + + - - -

Citrato + + + + + + + + + + + + + + + + + +

Indol - - - - - - + + - - - - - - - - + +

Gelatina + + + + + + - - - - - - + + + - - -

*donde R1, R2,R3 son repeticiones, (+) resultado positivo y (-) resultado negativo.

Se hicieron diferentes pruebas bioquimicas con 3 repeticiones de las cuales se observa que los
resultados obtenidos concuerdan con las siguientes Bacterias promotoras del crecimiento vegetal:
Pseudomona flourescens, Bacillus subtilis, Azotobacter sp. Y Pseudomona putida. De entre ellas
la diferencia entre las Pseudomonas es la licuefacción de la gelatina siento positiva para
Pseudomona flourescens y negativa para Pseudomona putida. Estos resultados concuerdan con
(Llenque, 2015) el cual menciona que la Pseudomona flourescens es citrato positivo ya que
verifico el viraje de color verde a azul, en cuanto a la prueba SIM se comprobó la presencia de
flagelo, para la prueba de citocromo oxidasa se comprobó la descomposición del peróxido de

61
hidrogeno en agua y oxígeno, pero la prueba diferencial entre Pseudomona flourescens y
Pseudomona putida se da con la prueba de la gelatina en la cual la Pseudomona flourescens
produce licuefacción de la gelatina. Por otro lado, las cepas con esporas centrales, catalasa
positiva, citocromo oxidasa negativa, citrato positivo, hidrolisis de almidón positiva e hidrolisis
de gelatina positiva corresponden a las características de Bacillus subtilis según (Carolina, et al,
2010) y (Cuervo, 2010). Sin embargo, para la identificación de Azotobacter sp se evaluó las
pruebas de glucosa, sacarosa, manitol, glicerol, benzoato, indol, catalasa tal como lo indica
(Flores, et al, 2012), (Escobar, et al, 2011) y (Jiménez, 2007) de las cuales las pruebas de indol,
catalasa, oxidasa concuerdan con los resultados de esta investigación.

El género Bacillus ha sido reportado por, (Calvo & Zúñiga, 2010) en cultivos de papa, (Márquez
y Torres, 2007) en suelos de un bosque de pinos, mientras que (Corrales Ramírez, et al. 2014)
logra aislarlos de rizosferas de diferentes plantas, los cuales concuerdan en que este género está
presente en la rizosfera de diversos cultivos debido a su capacidad de formación de esporas que
le da una ventaja de supervivencia en la rizosfera vegetal, sin mencionar su capacidad
solubilizadora de fosfatos (Pérez, et al, 2015) reporta 35 bacterias en la rizosfera de plantas de
vainilla dentro de los cuales se encuentran el género Bacillus como degradadores de celulosa y
solubilizadores de fosfato inorgánico y Pseudomonas como proteolíticos/amonificantes, además
de fijadores biológicos de nitrógeno, esta última bacteria también es reportada por (Alarcón,
2010) al lograr aislarla de raíces secundarias de plantas de uchuva, (Guerra et al, 2011) en lotes
de arveja y (Uribe et al, 1999) en cultivos de papa. En cuanto al género Azotobacter (Goitia, 2014)
señala que en suelos alcalinos se pueden aislar bacterias del género Azotobacter spp. Las cuales
son gram negativas de formas ovaladas, catalasas positivas. (Jiménez, 2007), (Escobar, et al,
2011), (Valderrama, 2010) y (Flores, et al, 2012) logran aislarlo de suelos rizosferas con el agar
ASHBY. Por otro lado, (Lara, et al, 2013) lograron aislar 9 cepas bacterianas de las cuales algunas
contrastan con los resultados obtenidos en este trabajo de investigación, Pseudomonas flourescens
y Bacillus sp. Estas especies son comúnmente aisladas según (Sanclemente, 2017) puesto que son
solubilizadoras de fosfato.

En cuanto al indol, mediante esta prueba se detecta la liberación de indol en un cultivo bacteriano.
La prueba que define las especies entre el género Pseudomonas en este trabajo es la prueba de
hidrólisis de gelatina tal como lo menciona (Llenque, 2015) esta prueba muestra la capacidad de
ciertos microorganismos para hidrolizar la gelatina y volver el medio de solido a liquido
(Fernandez Olmos, et al. 2010), otra de las pruebas determinantes es la utilización del citrato esta
prueba sirve para determinar si un microorganismo es capaz de utilizar citrato como única fuente
de carbono (Escobar, et al; 2011)

62
Para la identificación de las cepas se realizaron algunas de estas pruebas bioquímicas ya descritas
las cuales se contrastan

Estas bacterias identificadas pertenecen al grupo de promotoras del crecimiento vegetal (BPCV)
y estas mismas representan aproximadamente del 2-5% del total de rizobacterias involucradas en
la promoción de crecimiento. Estos mecanismos se pueden activar simultánea o
independientemente en diferentes etapas de desarrollo de la planta. Entre estos mecanismos se
encuentran la solubilización de fósforo, la fijación biológica de nitrógeno, la absorción facilitada
de otros nutrientes y la producción de fitohormonas (León, 2001) Además, permiten el control
biológico de patógenos y microorganismos nocivos, mediante la producción de antibióticos,
enzimas líticas, cianuro de hidrógeno y sideróforos, o mediante la competencia por nutrientes y
espacio, tienen un efecto en la salud y el desarrollo de las plantas, presentándose un mejor
crecimiento de plántulas, un mayor vigor y rendimiento (Ahemad y Saghir, 2010).

La importancia de estos microorganismos yace en que pueden promover el crecimiento y la

productividad de las plantas el cual sería su efecto principal, pero también se ha demostrado que
desempeñan un papel en la reducción de enfermedades como efecto secundario, y existen casos
en las que se presentan situaciones inversas los agentes de control biológico, pueden controlar
enfermedades, Se dice que tienen un efecto aditivo, por lo que sus beneficios multifacéticos
pueden ayudar a reducir los problemas asociados al uso de productos químicos sintéticos en la
agricultura (Avis, et al; 2008). Por ejemplo, (Brito, 2014) menciona que Bacillus subtilis es un
microorganismo autóctono del suelo que a diferencia de Escherichia coli, prospera en la
naturaleza, donde se encuentra ampliamente distribuido en muy diversos hábitats, los cuales ha
colonizado eficientemente debido a sus cualidades. Bacillus subtilis no es potencialmente
patógena, no produce endotoxinas y secreta proteína al medio, algunas de ellas con propiedades
antifúngicas, como la subtilina y otros antibióticos de la familia de las iturinas. Se utiliza
industrialmente como insecticida y fungicida. La subtilina liberada por Bacillus subtilis actúa
sobre la pared celular de hongos. Otro punto vital es el estudio del genoma de Bacillus subtilis,
que es un organismo modelo de las bacterias gram-positivas. (Lisboa, 2003).

Según estación meteorológica (inalámbrica) marca Vantage Pro2 (figura n°5) Que se encuentra
en la estación experimental del INIA las parcelas cuentan con una temperatura ambiente mensual
en enero de 11.5 °C en febrero de 10.2°C en marzo 10.5°C, abril con 9.74°C con picos de 19.7°C
como temperatura máxima y 0.7°C de temperatura mínima, con precipitación de 217.79 mm en
enero, 120.51mm en febrero 83.71mm en marzo, 54.05mm en abril, 17.5mm en marzo, humedad
relativa en los cuatro meses de 70,92 %; evaporación media de 111,33 mm y una velocidad
máxima del viento de 5,44 m s-1 y mínima de 3,64 m s-1.

63
4.2 Cuantificación de bacterias solubilizadoras de fosfatos y potasio y fijadoras de
nitrógeno en suelos de INIA salcedo y Camicachi del distrito de Ilave

El recuento de bacterias entre las dos localidades de muestreo no presento diferencia

estadísticamente significativa (t = -0.28; gl = 4; p = 0.7646) p – valor es > 0.05 con un valor de
0.76, por lo que se entiende que el número de bacterias son similares, los valores obtenidos (Tabla
Nº 5)

Tabla 5 Recuento de bacterias de los suelos de INIA Salcedo y Camicachi - Ilave, realizado en
el laboratorio de biotecnología UNA - Puno. Tabla de elaboración propia, octubre 2019.

Centros Desviación C.V

Promedio
Poblados estándar (%)

Repeticiones Repetición Repetición2 Repetición3

INIA
22.25 x 105 24.75 x 105 34.00 x 105 27.00 x 105 6.19
SALCEDO 22.92%

CAMICHACHI
27.50 x 105 32.25 x 105 24.75 x 105 28.17 x 105 3.79
ILAVE 13.47%

El recuento obtenido para las dos muestras de suelo se considera alto, para este recuento se hizo
3 repeticiones en las cuales se obtuvieron en promedio 27.00 x 10 5 UFC/g para el duelo de INIA
Salcedo y 28.17 x 105 UFC/g para el suelo de Camicachi – Ilave estos resultados contrastan con
los de (Calvo et al, 2008) en la cual se observa que en la región de puno las poblaciones
bacterianas oscilaban 31.5 x 104 UFC/g hasta 50.7 x 104 UFC/g para el género bacillus, mientras
que para el género Azotobacter oscilan desde 75.2NMP hasta 90.2NMP, al igual que (Llanos,
2017) quien obtuvo un recuento de 1.23 x 103 hasta 2.40 x 103 en bacterias solubilizadoras de
fosfato en la región de puno. Sin embargo, un recuento bajo frente a (Cary y Angulo, 2006)
quienes realizaron como parte de su estudio recuentos de bacterias en suelos del altiplano
boliviano encontrando recuentos de 7.06 Log UFC/g para las poblaciones bacterianas, (Brito,
2014) consideró un número limitado de colonias ya que éstas podían sobre poblarse, lo que
dificultaría el conteo. El rango sugerido de acuerdo a la ¨Food and Drug Administration¨ (siglas
en ingles FDA), es de 25-250 colonias por dilución en cada medio selectivo. Este método es
preferible porque arroja el total de células vivas. Transcurridas 48 horas desde el momento del
cultivo, se procedió a contar y a tipificar cada célula viva en los medios seleccionados.

(Pérez, 2014) afirma que en biofumigación existen diferencias significativas entre tratamientos
(p-valor < 0,05). Los suelos tratados con Brassicas registran la mayor densidad de población de

64
bacterias antes de realizar el trasplante, valores muy superiores a los observados en los suelos
tratados con Biofence®. El testigo, por el contrario, presenta valores próximos a cero, pero en
biosolarización existen diferencias significativas entre tratamientos (p-valor < 0,05). Los suelos
tratados con Biofence® recogieron una mayor densidad de población bacteriana respecto de los
suelos tratados con Brassicas, sin embargo, los valores son semejantes si son comparados con las
muestras de suelo pertenecientes al Testigo donde se registraron valores de densidad de población
3 veces superior a los suelos tratados.

(Goitia, 2014) menciona a que posteriormente a los 10 días de cultivo, las triadas de tubos
negativos a los siete días, realizaron el viraje de azul a un color amarillo, demostrándose así la
presencia de una alta carga bacteriana de diazótrofos en las muestras de suelo cultivado, suelo
virgen y humus de lombriz respectivamente.

El aislamiento de microorganismos en medios libres de nitrógeno, constituye un primer paso hacia

la identificación de bacterias con capacidad para metabolizar nitrógeno. El análisis del número y
tipo de microorganismos identificados en estos medios brinda información valiosa acerca de la
distribución de microorganismos potencialmente promotores del crecimiento vegetal de las
semillas de quinua en los diferentes sitios muestreados.

Teniendo en cuenta que los suelos de los cuales se aisló y se realizó el recuento (tabla 5) posee
un pH de 7.5 en el cual las bacterias buscadas pueden desarrollarse en condiciones óptimas. existió
diferencia en el recuento en el suelo recolectado del distrito de Camicachi se encontró mayor
cantidad en el recuento de colonias que en el de las parcelas de INIA Salcedo, aunque no existe
una diferencia estadísticamente significativa.

4.3 Efecto de la inoculación de bacterias solubilizadoras de potasio y fosforo y fijadoras

de nitrógeno en el crecimiento de plántulas de quinua hasta la etapa de botón floral en la
variedad INIA Salcedo en parcelas demostrativas del INIA Salcedo del distrito de Puno.

4.3.1 Altura de la planta (cm)

Se observa la diferencia en los surcos 1,2 y 3 que corresponden al tratamiento control poseen una
media de 9.75cm mientras que en los surcos 4,5 y 6 que corresponden al tratamiento con inoculo
de bacterias poseen una media de 22.80cm a pesar que esta tiene 4 muestras menos que el
tratamiento control, la diferencia de medias es de 13.05cm. Al realizar la prueba T de student se
obtiene p-valor < 0.0001 por lo que se dice que la diferencia es significativa estadísticamente
hablando para contrastar estos resultados se hizo a la par la prueba de Tukey obteniendo al igual
que en la prueba anterior un p-valor < 0.0001 y dos grupos diferentes para Tukey lo que demuestra
la significancia entre estos tratamientos, (Figura Nº30).

65
Figura 30. Efecto de bacterias promotoras del crecimiento vegetal en altura de la quinua variedad
Salcedo INIA. Histograma estadístico elaborado en Infostat, (octubre 2019).

Los resultados obtenidos están en concordancia con los (Lara et al, 2013) en cuanto a la altura de
planta, puesto que los tratamientos T1, T2, Y T3 (tratamientos con inóculos) obtuvieron mayor
altura 48.7cm – 52.7cm mientras que los tratamientos control T0 Y T4 40.7cm – 42.13cm. Sin
embargo (Lara et al, 2013), (Lara y Negrete, 2015) y (Laral et al, 2011) en sus trabajos no
presentan una significancia estadística a pesar de que entre los tratamientos si existe una
diferencia de tamaños.

Existen dos tipos de bacterias promotoras del crecimiento de las plantas que afectan el
crecimiento vegetal, promueve el aumento de la toma de agua y también de nutrientes, el
desarrollo del sistema radical y la estimulación del funcionamiento de otros microorganismos
benéficos presentes Aunque esta propuesta parece no haber sido ampliamente aceptada (Sarabia
et al, 2010). También (González. y Fuentes , 2017) en su trabajo Mecanismo de acción de
microorganismos promotores de crecimiento de las plantas nos indica cómo actúan los diferentes
microorganismos promotores de crecimiento en plantas, afecta a las plantas ya que los
microorganismos actúan con un metabolismo que es propio de cada una de las bacterias
(solubilizando fosfatos, produciendo hormonas o fijando nitrógeno), los cuales darán como
resultado directamente el metabolismo de la planta (incrementando la toma de agua y minerales),
desarrollando así el desarrollo radicular, incrementan la actividad enzimática de la planta o
propician que otros microorganismos benéficos actúen de mejor manera sobre las plantas

(Suresh et al, 2010) menciona que la bacteria Pseudomonas fluorescentes, es una rizobacteria que
promueve el crecimiento de plantas a través de sus múltiples actividades como antifúngicos de
amplio contra hongos patógenos y solubilización de fosfatos. Por lo que al realizar estudios con
dichos microorganismos los resultados indicaron que la mayoría de los aislados probados poseían
rasgos de BPCV, por lo que se podrían ser utilizados como biofertilizantes potenciales y también
como agentes de biocontrol

66
4.3.2 Raíz (cm)
Los surcos 1,2 y 3 que corresponden al tratamiento control poseen una media de 8.50cm mientras
que en los surcos 4,5 y 6 que corresponden al tratamiento con inoculo de bacterias poseen una
media de 11.75cm, la diferencia de medias es de 3.25cm. Al realizar la prueba T de student se
obtiene p-valor < 0.0001 por lo que se dice que la diferencia es significativa estadísticamente
hablando para contrastar estos resultados se hizo a la par la prueba de Tukey obteniendo al igual
que en la prueba anterior un p-valor < 0.0001 y dos grupos diferentes para Tukey lo que demuestra
la significancia entre estos tratamientos, (Figura Nº31).

Figura 31.Efecto de bacterias promotoras del crecimiento vegetal en la raíz de la quinua variedad
Salcedo INIA. Histograma estadístico elaborado en Infostat. (octubre 2019).

Los resultados obtenidos están en concordancia con los de (Lara et al. 2013) (Lara y Negrete,
2015) quienes en sus trabajos reportan una diferencia significativa entre las raíces del control
frente a los tratamientos, explican los autores que esto se debe quizá a la disponibilidad de fósforo
y también a la posible presencia de fitohormonas (auxinas, giberelinas y citoquininas.) al igual
que en nuestro trabajo de investigación posiblemente las auxinas : indol-3-ácido acético , indol-
3-ácido butírico que tienen una gran influencia en el crecimiento de los vegetales, especialmente
de la raíz. (Benjumeda Muñoz, 2017)

Por otro lado, existen referentes contradictorios como los de (Laral et al. 2011), (Lara Mantilla
et al. 2013) los cuales mencionan en sus trabajos de investigación que no existe diferencia
estadísticamente significativa a pesar de haber una diferencia cuantitativa.

La acción directa del crecimiento se da cuando las bacterias dan a las plantas de compuestos que
estimulan su crecimiento (ya sea del vástago o de la raíz), cuando las bacterias facilitan la

67
disponibilidad de nutrimentos para las plantas como fijación del nitrógeno o la solubilización del
fósforo; o cuando las bacterias estimulan en la planta resistencia localizada. (Cárdenas, 2005).

4.3.3 Número de hojas

Se observa una diferencia en los surcos 1,2 y 3 que corresponden al tratamiento control poseen
una media de 16.27 mientras que en los surcos 4,5 y 6 que corresponden al tratamiento con inoculo
de bacterias poseen una media de 37.53 a pesar que esta tiene 4 muestras menos que el tratamiento
control, la diferencia de medias es de 21.27cm. Al realizar la prueba T de student se obtiene p-
valor < 0.0001 por lo que se dice que la diferencia es significativa estadísticamente hablando para
contrastar estos resultados se hizo a la par la prueba de Tukey obteniendo al igual que en la prueba
anterior un p-valor < 0.0001 y dos grupos diferentes para Tukey lo que demuestra la significancia
entre estos tratamientos (Figura Nº32).

Figura 32. Efecto de bacterias promotoras del crecimiento vegetal en el número de hojas de la
quinua variedad Salcedo INIA. Histograma estadístico elaborado en infostat. (octubre 2019).

Los resultados obtenidos están en concordancia con los de (Lara y Negrete, 2015) puesto que
muestra que el tratamiento T3 es superior al T1 obteniendo así una diferencia estadísticamente
significativa (P < 0.05). Contrariamente a este resultado está la de (Lara y Sanes, 2013) en el cual
se indica que no existe una diferencia estadísticamente significativa a los 25 días ni a los 50 días.

Esto puede darse posiblemente ya que según (Benjumeda, 2017) Bacillus y Pseudomonas son las
bacterias que solubilizan el fosfato utilizan diferentes mecanismos para convertir las formas
insolubles de fósforo en formas solubles.

El uso de estos microorganismos en cantidades industriales como biofertilizantes en cualquier

sistema de producción agrícola traería grandes beneficios, (Hernández y Escalona, 2003) en su
trabajo de investigación da a conocer los efectos positivos en las plantas estos generalmente

68
provienen del extranjero pues se introducen microorganismos en nuestros sistemas de producción
que están poco adaptados a los sistemas productivos del país.

4.3.4 Diámetro del Tallo (cm)

Se observa una diferencia en los surcos 1,2 y 3 que corresponden al tratamiento control poseen
una media de 0.12cm mientras que en los surcos 4,5 y 6 que corresponden al tratamiento con
inoculo de bacterias poseen una media de 0.28cm a pesar que esta tiene 4 muestras menos que el
tratamiento control, la diferencia de medias es de 0.16cm. Al realizar la prueba T de student se
obtiene p-valor < 0.0001 por lo que se dice que la diferencia es significativa estadísticamente
hablando para contrastar estos resultados se hizo a la par la prueba de Tukey obteniendo al igual
que en la prueba anterior un p-valor < 0.0001 y dos grupos diferentes para Tukey lo que demuestra
la significancia entre estos tratamientos, (Figura Nº33).

Figura 33. Efecto de bacterias promotoras del crecimiento vegetal en el diámetro del tallo de la
quinua variedad Salcedo INIA. Histograma estadístico elaborado en infostat. (octubre 2019)

Los resultados obtenidos están en concordancia con los de (Martínez et al. 2013) el cual reporta
una diferencia estadísticamente significativa en 2 cultivos tomates y pimientos en donde se
observa la diferencia entre los tratamientos MA 06, MA 04 y MA12 contrastados con una prueba
de Tukey al igual que (Llanos, 2017) quien menciona que el tratamiento 1 presentó el mayor
diámetro, notándose una claro crecimiento en el diámetro de los tratamientos frente al control.
También (Sánchez,et al; 2016) menciona en su trabajo de investigación efectividad de cepas de
Azotobacter sp. y Bacillus sp. para el biocontrol de especies de hongos relacionadas a hortalizas
que estas bacterias resaltan la fijación biológica del nitrógeno atmosférico y la producción de
fitohormonas. por su resistencia ante condiciones ambientales adversas y por la producción de

69
una amplia gama de compuestos con actividad fungicida o fungistática. Las enfermedades
causadas por hongos fitopatógenos.

Para (Bazan, 2014) una planta bien provista de nitrógeno adquiere un buen desarrollo de hojas y
tallos y toma un color verde intenso debido a la abundancia de clorofila. Una buena parte foliar
bien desarrollada promueve crecimiento activo. Esto es respaldado por (Otsuka, 1963) quien
propone que el papel del nitrógeno en la formación y la calidad de la cosecha está dado por la
formación y desarrollo de las yemas florales y fructíferas y por el aumento en el contenido de
proteína de la parte cosechada. Es necesario mantener un buen equilibrio entre el nitrógeno y el
potasio, ya que cada uno de estos elementos favorece la acción del otro, (Taiz y Zeiger, 2006)
mencionan que cuando esta carencia de nitrógeno ocurre, las plantas pueden presentar tallos muy
delgados y leñosos que puede ser debido a la producción de un exceso de carbohidratos que no
son utilizados en la síntesis de aminoácidos.

(Salisbury, 1994) afirma que, por esta razón, las plantas que sufren de deficiencia de N primero
muestran síntomas de deficiencia en las hojas viejas. en tales hojas, la proteólisis resulta en un
colapso de cloroplastos y una disminución del contenido de clorofila. por lo tanto, el
amarillamiento de las hojas viejas es un primer síntoma de la inadecuada nutrición de N.

4.4 Efecto de la inoculación de bacterias solubilizadoras de potasio y fosforo y fijadoras

de nitrógeno en el crecimiento de plántulas de quinua hasta la etapa de botón floral en la
variedad Pasankalla (quinua roja) en parcelas demostrativas del INIA Salcedo del distrito
de Puno.

4.4.1 Altura de la planta (cm)

Los surcos 1,2 y 3 que corresponden al tratamiento control poseen una media 13.12cm mientras
que en los surcos 4,5 y 6 que corresponden al tratamiento con inoculo de bacterias poseen una
media de 24.03cm a pesar que esta tiene 4 muestras menos que el tratamiento control, la diferencia
de medias es de 10.91cm. Al realizar la prueba T de student se obtiene p-valor < 0.0001 (T = -
9.76; gl = 133) por lo que se dice que la diferencia es significativa estadísticamente hablando para
contrastar estos resultados se hizo a la par la prueba de Tukey obteniendo al igual que en la prueba
anterior un p-valor < 0.0001 y dos grupos diferentes para Tukey lo que demuestra la significancia
entre estos tratamientos, (Figura Nº34).

70
Figura 34, Efecto de bacterias promotoras del crecimiento vegetal en altura de la quinua variedad
Pasankalla. Histograma estadístico elaborado en infostat. Octubre 2019

Los resultados obtenidos están en concordancia con los (Lara y Alvarez, 2013) en cuanto a la
altura de planta, puesto que los tratamientos T1, T2, Y T3 (tratamientos con inóculos) obtuvieron
mayor altura 48.7cm – 52.7cm mientras que los tratamientos control T0 Y T4 40.7cm – 42.13cm.
Sin embargo, (Lara y Sanes, 2013), (Lara y Negrete, 2015) y (Lara, Esquivel y Negrete, 2011) en
sus trabajos no presentan una significancia estadística a pesar de que entre los tratamientos si
existe una diferencia de tamaños.

El uso continuo de fertilizantes químicos y abonos para mantener la fertilidad de los suelos y la
productividad de los cultivos, a menudo da lugar a inesperados efectos ambientales nocivos,
(Adesemoye y Kloepper, 2009) Por lo que los sistemas de gestión de sistemas integrados de los
nutrientes son necesarios para mantener la productividad agrícola y proteger el medio ambiente

(Jiménez et al. 2001) afirma que existen casos exitosos como el producto elaborado por
mexicanos, el cual se lanzó al mercado el 20 de septiembre del 2000, denominado PROBACIL
que fue formulado en el laboratorio de Bioquímica ecológica en CINVESTAV-IPN unidad
Irapuato, el cual contiene una bacteria promotora de crecimiento e inhibitoria de Rhizoctonia y
Fusarium patógenos que atacan el cultivo de papa, a los cuales controla adecuadamente además
de aumentar la productividad por hectárea.

Los resultados de esta investigación se apoyan con los obtenidos con (Goitia, 2014) en el que
menciona que los tratamientos que presentaron mejores resultados en la emergencia de las plantas,
el diámetro del tallo y la longitud de las hojas y los tallos fueron las inoculadas con las bacterias
diazótrofas. Estos tuvieron diferencias significativas con respecto a las semillas testigo sin
inoculación bacteriana, además se observó una mayor eficiencia en la emergencia y el crecimiento
en las plantas de quinua. De acuerdo con el análisis estadístico de los datos las semillas inoculadas

71
presentaron valores por encima de la media y límite superior, con respecto a los otros aislados y
controles.

4.4.2 Raíz (cm)

Los surcos 1,2 y 3 que corresponden al tratamiento control poseen una media de 7.75cm mientras
que en los surcos 4,5 y 6 que corresponden al tratamiento con inoculo de bacterias poseen una
media de 9.80cm, la diferencia de medias es de 2.05cm. Al realizar la prueba T de student se
obtiene p-valor < 0.0001 (T = -4.08; gl = 148) por lo que se dice que la diferencia es significativa
estadísticamente hablando, para contrastar estos resultados se realizó la prueba de Tukey
obteniendo al igual que en la prueba anterior un p-valor < 0.0001 y dos grupos diferentes para
Tukey lo que demuestra la significancia entre estos tratamientos, (Figura Nº 35).

Figura 35. Efecto de bacterias promotoras del crecimiento vegetal en la raíz de la quinua variedad
Pasankalla. Histograma estadístico elaborado en Infostat, (octubre 2019).

Los resultados obtenidos están en concordancia con los de (Lara y Sanes, 2013), (Lara Negrete,
2015) quienes en sus trabajos reportan una diferencia significativa entre las raíces del control
frente a los tratamientos, explican los autores que esto se debe quizá a la disponibilidad de fósforo
y también a la posible presencia de fitohormonas. Por otro lado, existen referentes contradictorios
como los de (Lara y Esquivel, 2011), (Lara y Álvarez, 2013) los cuales mencionan en sus trabajos
de investigación que no existe diferencia estadísticamente significativa a pesar de haber una
diferencia cuantitativa.

También se evaluaron diez aislados diferentes de BPCV extraídos de la rizósfera de suelos donde
se cultiva arroz, dando como resultado la sugerencia del uso de tres aislados de Bacterias, los
cuales incrementaron el crecimiento de arroz, además de que inducen la producción de ácido indol
acético y solubilizan fósforo (Ashrafuzzaman et al. 2009), mientras que en maíz la inoculación

72
de BPCV aumentó significativamente nitrógeno y potasio en grano, mientras que en las hojas
incrementaron fosforo y potasio (Yazdani et al. 2011).

(Goitia, 2014) propone que la elongación de la radícula podría atribuirse a la producción de algún
metabolito bacteriano como el ácido indol acético (AIA). En las condiciones ensayadas, la
inoculación no provocó en ninguno de los casos, un crecimiento significativo en el largo de la
radícula en relación a las semillas no inoculadas. Algunos microorganimos capaces de producir
AIA pueden perder esta capacidad por las condiciones en las cuales se encuentran, o que en vez
de provocar el crecimiento de la raíz principal provoquen un aumento de Tratamiento Largo de
la radícula (cm).

Según (Bazan, 2014) la planta absorbe el nitrógeno por medio de sus raíces en estado mineral ya
sea nítrico o amoniacal. El nitrógeno se encuentra en el suelo en tres formas principales: orgánico,
amoniacal y nítrico, que no tienen el mismo valor para la planta.

4.4.3 Número de hojas

Se observa una diferencia en los surcos 1,2 y 3 que corresponden al tratamiento control poseen
una media 21.68 mientras que en los surcos 4,5 y 6 que corresponden al tratamiento con inoculo
de bacterias poseen una media de 34.33 a pesar que esta tiene 4 muestras menos que el tratamiento
control, la diferencia de medias es de 12.65. Al realizar la prueba T de student se obtiene p-valor
< 0.0001 (T = -4.75; gl = 148) por lo que se dice que la diferencia es significativa estadísticamente
hablando, para contrastar estos resultados se hizo la prueba de Tukey obteniendo al igual que en
la prueba anterior un p-valor < 0.0001 y dos grupos diferentes para Tukey lo que demuestra la
significancia entre estos tratamientos, (Figura Nº36)

Figura 36. Efecto de bacterias promotoras del crecimiento vegetal en el número de hojas de la
quinua variedad Pasankalla. Histograma estadístico elaborado en infostat, (octubre 2019).

73
Los resultados obtenidos están en concordancia con los de (Lara y Negrete, 2015) puesto que
muestra que el tratamiento T3 es superior al T1 obteniendo así una diferencia estadísticamente
significativa (P < 0.05). Contrariamente a este resultado está la de (Lara y Sanes, 2013) en el cual
se indica que no existe una diferencia estadísticamente significativa a los 25 días ni a los 50 días.

Un elemento móvil en la planta que interviene en lo que llamamos tejidos jóvenes meristemáticos
es el potasio y esta misma se traslada hacia estos puntos cuando ocurre una deficiencia. Como
resultado de esto, los síntomas de deficiencia aparecen al principio en las hojas más bajas de las
plantas, progresando hacia la parte superior conforme aumenta su deficiencia (Tisdale, 1991) y
(Bazan Quintana, 2014).

Al evaluar el efecto del N en la relación entre el área foliar y la fructificación del melón (Nylund,
1954) encontró que una aplicación de 400 kg de N /ha de sulfato de amonio tuvieron efectos
positivos incrementando el área foliar, el número de flores estaminadas y, más aún, el número de
flores pistiladas, en comparación con aquellas sin fertilizar.

4.4.4 Diámetro del tallo

Los surcos 1,2 y 3 que corresponden al tratamiento control poseen una media de 0.22cm mientras
que en los surcos 4,5 y 6 que corresponden al tratamiento con inoculo de bacterias poseen una
media de 0.37cm, la diferencia de medias es de 0.15cm. Al realizar la prueba T de student se
obtiene p-valor < 0.0001 (T = -6.24; gj = 137) por lo que se dice que la diferencia es significativa
estadísticamente hablando para contrastar estos resultados se hizo a la par la prueba de Tukey
obteniendo al igual que en la prueba anterior un p-valor < 0.0001 y dos grupos diferentes para
Tukey lo que demuestra la significancia entre estos tratamientos

Figura 37. Efecto de bacterias promotoras del crecimiento vegetal en el diámetro del tallo de la
quinua variedad Pasankalla. Histograma estadístico elaborado en infostat, (octubre 2019).

74
Los resultados obtenidos están en concordancia con los de (Martínez et al. 2013) el cual reporta
una diferencia estadísticamente significativa en 2 cultivos tomates y pimientos en donde se
observa la diferencia entre los tratamientos MA 06, MA 04 y MA12 contrastados con una prueba
de Tukey al igual que (Llanos, 2017) quien menciona que el tratamiento 1 presentó el mayor
diámetro de tallo con 0,210 cm, seguida del tratamiento 2 con 0,206 cm y el tratamiento 3 con
0,202 cm y el grupo control presentó un diámetro de 0,164 cm, notándose una claro crecimiento
en el diámetro de los tratamientos frente al control.

Esto se ve reflejado en los siguientes valores: para el tallo la efectividad en la variedad INIA
Salcedo es de 133.85% frente a un 83.16% el cual corresponde a la variedad Pasankalla (quinua
roja), en cuanto a la raíz la efectividad en la variedad INIA Salcedo es de 38.24% frente a un
24.45% el cual corresponde a la variedad Pasankalla (quinua roja), para el numero de hojas la
efectividad en la variedad INIA Salcedo es de 130.66% frente a un 58.35% el cual corresponde a
la variedad Pasankalla (quinua roja) y por último el diámetro del tallo con una efectividad en la
variedad INIA Salcedo de 133.33% frente a un 68.18% el cual corresponde a la variedad
Pasankalla (quinua roja)

Las condiciones en las cuales se hizo el cultivo in situ están precisadas según estación
meteorológica (inalámbrica) marca Vantage Pro2 (figura n°5) Que se encuentra en la estación
experimental del INIA las parcelas cuentan con una temperatura ambiente mensual en enero de
11.5 °c en febrero de 10.2°c en marzo 10.5°c, abril con 9.74°c con picos de 19.7°c como
temperatura máxima y 0.7°c de temperatura mínima, con precipitación de 217.79mmen enero,
120.51mm en febrero 83.71mm en marzo, 54.05mm en abril, 17.5mm en marzo, humedad relativa
en los cuatro meses de de 70,92 %; evaporación media de 111,33 mm y una velocidad máxima
del viento de 5,44 m s-1 y mínima de 3,64 m s-1. Se ubica en el área de clima templado andino

Por otro lado, es importante saber la función que cumples estos macronutrientes esenciales en las
plantas y el mecanismo de acción que toman para que su desarrollo sea más eficaz como por
ejemplo el P es un macronutriente de gran importancia puesto que está involucrado en la
fotosíntesis, la respiración, almacenamiento y transferencia de energía, la división y crecimiento
celular. (INPOFOS, 1997) también menciona que la elongación de la raíz y su formación se
acelera, además el P está involucrado en la transferencia de características hereditarias de una
generación a la siguiente

(Moreno et al. 2018) menciona que, en cultivos como el arroz, maíz, trigo, caña de azúcar, nabo
entre otros se encuentran bacterias como Bacillus, Pseudomonas, Azotobacter y muchas mas las
cuales tienen como función la biofertilización, elongación y crecimiento de la planta además de
la producción de fitohormonas, a esto se le suman los reportes de (Loredo et al. 2004) De (Sevilla
y Benjumeda, 2017), (Pérez et al. 2016) y (Criollo et al. 2013) que además insisten en que la

75
colonización de la raíz por BPCV está relacionada con una mayor disponibilidad de carbono y
humedad en la rizosfera

(Lingle y Wight, 1964) lograron constatar con sus experimentos de fertilización de variedades
cantaloupe a diferentes dosis de N, P, K que hubo un incremento en el rendimiento de 25 a 300%
se consiguió después de la aplicación de N y señala también que pueden esperarse respuestas a
las aplicaciones de hasta 120 kg/ha o más dependiendo del contenido de materia orgánica.

Las interacciones y señales moleculares que existen en los ecosistemas reflejan la ausencia de los
bioinoculantes, esta misma influye en la interacción entre suelo-planta- microorganismos (Antoun
y Prévost, 2005). Así mismo para el desarrollo de inoculantes que beneficien los cultivos en el
futuro se deben de tomar en cuenta una serie de requisitos como: inoculación de consorcios que
pueden estimular el crecimiento de plantas en diferentes etapas de crecimiento y que muestre uno
o más de los mecanismos conocidos de acción de BPCV, visualizar el suelo de la región y de los
sistemas generales de gestión de los cultivos utilizados, los inoculantes de las BPCV tendrán que
ser compatibles con los productos de agroquímicos utilizados, así como con las enmiendas
orgánicas del suelo utilizado, y en su desarrollo hay que tener en cuenta el tiempo de formulación
del producto y de los sistemas de producción donde se utiliza la rotación de cultivos

76
 V. CONCLUSIONES
Las bacterias biofertilizantes (solubilizadoras de fosfato y potasio y fijadoras de nitrógeno) en
suelos de INIA Salcedo e Ilave del distrito de Puno, tienen una carga bacteriana amplia de las
cuales se llegó a identificar a 3 géneros de bacterias, Bacillus subtilis, Pseudomona putida,
Pseudomona flourescens y Azotobacter sp. Todas estas de gran importancia agrícola ya que
además de ser promotoras de crecimiento también son controladoras de algunas bacterias
parasitas y hongos perjudiciales para la planta

Las bacterias cuantificadas solubilizadoras de fosfatos, potasio y fijadoras de nitrógeno en suelos

de INIA Salcedo e Ilave del distrito de Puno no mostró una diferencia estadísticamente
significativa, además el pH y otro tipo de indicadores son similares, por lo que se presume que la
carga bacteriana en todos los puntos de muestro son iguales

El efecto de la inoculación de bacterias solubilizadoras de potasio, fosforo y fijadoras de nitrógeno

en el crecimiento de plántulas de quinua hasta la etapa de botón floral en la variedad INIA
SALCEDO es positiva teniendo así un 133.85% de efectividad en cuanto a la altura, 38.24% de
efectividad en la raíz, 130.66% de efectividad en el número de hojas y 13 3.33% de efectividad
en el diámetro del tallo. Obteniendo así una diferencia estadísticamente significativa frente a un
control que no poseía ningún tipo de inoculo

El efecto de la inoculación de bacterias solubilizadoras de potasio, fosforo y fijadoras de nitrógeno

en el crecimiento de plántulas de quinua hasta la etapa de botón floral en la variedad
PASANKALLA (quinua roja) es positiva teniendo así un 83.16% de efectividad en cuanto a la
altura, 26.45% de efectividad en la raíz, 58.35% de efectividad en el número de hojas y 68.18%
de efectividad en el diámetro del tallo. Obteniendo así una diferencia estadísticamente
significativa frente a un control que no poseía ningún tipo de inoculo

77
 VI. RECOMENDACIONES
- Se recomienda realizar el mismo procedimiento de inoculo para otro tipo de cultivos ya que
estas bacterias no son propias de la quinua y su valor agroindustrial está infravalorado, el
potencial agrícola se extiende a muchos otros cultivos propios de la región Puno ya que son
bacterias nativas.

- Se recomienda duplicar este trabajo en la quinua hasta la etapa final de esta misma la cual es
el panojamiento para posteriormente realizar un análisis bromatológico y así ver su valor
nutricional.

- Se recomienda una investigación más exhaustiva de las bacterias promotoras de crecimiento

ya que se podría identificar otras bacterias quizá de mayor importancia.

- Se recomienda realizar un cepario de las bacterias promotoras de crecimiento para su

posterior identificación mediante métodos mucho más específicos.

- Se recomienda realizar un análisis de caracterización de suelo y microbiológico como antes

de la siembra y después de culminado el proyecto de investigación para así observar la
diferencia de los inóculos bacterianos en los suelos.

- Se recomienda considerar las condiciones climáticas para replicar el trabajo de investigación

puesto que este factor influye directamente en el desarrollo del cultivo de quinua. Así como
los ecotipos y accesiones de la quinua

78
 VII. REFERENCIA BIBLIOGRAFICA

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85
ANEXOS

86
Figuras de control de crecimiento de las plántulas

(a) (b)

(c) (d)

Figura 38. semillas germinando a las 48h de ser plantadas (a) y (c) semillas de la variedad INIA
salcedo (b) y (d) semillas de la variedad Pasankalla, parcelas Inia Salcedo, (enero 2019)

(a) (b)

87
 (c) (d)
Figura 39. plántulas de quinua a las 96h, a la derecha (a) y (c) variedad Pasankalla, a la
izquierda (b) y (d) variedad INIA salcedo, parcelas Inia Salcedo, (febrero 2019).

(a) (b)

88
 (c) (d)

(e) (f)

89
 (g) (h)
Figura 40. plantulas de quinua con 4 hojas verdaderas (a), (b), (c) y (d) variedad Pasakalla (e),
(f), (g) y (h) variedad INIA salcedo, parcelas Inia Salcedo, (febrero 2019)

(a) (b)

90
(c) (d)

91
 (e) (f)

(g) (h)
Figura 41. Plantas de quinua desde la etapa de ramificacion hasta el boton floral a los 93 dias,
parcelas Inia Salcedo, (marzo 2019).

Figura 42. biometría con un vernier de los tallos, raíces y diámetro del tallo (este procedimiento
se realizó para todas las muestras seleccionadas), laboratorio UNAP (marzo 2019)

92
 (a) (b)

(c) (d)

Figura 43.semillas certificadas utilizadas para realizar este trabajo de Figura 43. semillas
certificadas utilizadas para realizar este trabajo de investigación (a) y (c) variedad Pasankalla (b)
y (d) variedad INIA salcedo

DOCUMENTOS:
Análisis de biofertilidad y características del suelo.
Constancia de ejecución del proyecto de tesis Instituto de Innovación Agraria.
Constancia de ejecución del proyecto de tesis Universidad Nacional del Altiplano.

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