La transcripció n

del factor
Nurr1para
diferenciació n de
células madre a
neuronas
dopaminérgicas:
tratamiento para
la enfermedad de
Parkinson
Marco Teórico

Lucero Itsaí Quintana Romero

 Lucero Itsaí Quintana Romero

La transcripción del factor Nurr1para diferenciación de

células madre a neuronas dopaminérgicas: tratamiento
para la enfermedad de Parkinson

Marco teórico
Las enfermedades neurodegenerativas son un grupo heterogéneo de padecimientos con diferente
etiología, clínica y alteraciones anatomopatológicas, con una característica final común, que es la
pérdida aguda o crónica de neuronas o células gliales. 1

La Enfermedad de Parkinson (EP)

Las enfermedades neurodegenerativas son un grupo heterogéneo de padecimientos con diferente
etiopatogenia, clínica, y alteraciones anatomopatológicas, con una característica final común, que
es la pérdida aguda o crónica de neuronas o células gliales. 1

La Enfermedad de Parkinson (Parkinson Disease - PD) es el trastorno neurodegenerativo más

frecuente después de la demencia de Alzheimer; la edad es el factor de riesgo más importante
para su presentación clínica. Su frecuencia aumenta proporcionalmente a la esperanza de vida. 2

Esta enfermedad fue descrita por James Parkinson en 1817 en un reporte titulado “Essay on the
Shaking Palsy”. El descubrimiento de la proyección dopaminérgica nigroestriada, la existencia del
déficit de dopamina en el cerebro de estos pacientes a finales de la década de 1950, y el uso de
levodopa para su tratamiento en la década de los años sesenta, permitió la consideración de que
esta enfermedad era esencialmente asociada con un déficit dopaminérgico. 3

La enfermedad de Parkinson es un trastorno neurodegenerativo de carácter progresivo,

caracterizada por la pérdida de células dopaminérgicos. Se produce por la degeneración de las
neuronas que segregan un neurotransmisor específico: la Dopamina, en la zona mesencefálica
conocida como ganglios basales. En concreto se pierden hasta un 70% de las neuronas
dopaminérgicas de la "sustancia negra" y del núcleo estriado 4, afectando el control motor. Los
síntomas más típicos de esta enfermedad son la bradicinesia (lentitud de los movimientos
voluntarios), acinesia (ausencia de movimiento), la rigidez muscular y el temblor. 5 No obstante, se
ha demostrado que afecta otras estructuras cerebrales provocando síntomas no motores, entre
los que se incluyen la demencia, manifestaciones psiquiátricas, trastornos del sueño, síntomas y
pérdida del olfato entre otras.6

La restauración del sistema nervioso central es un importante desafío clínico, y el trasplante de

células madre ha sido considerado como una opción terapéutica prometedora para muchas
enfermedades neurológicas7.

Las células madre

Las células madre son células inmaduras o indiferenciadas que tienen la capacidad de
autorenovarse y proliferar ampliamente a través de la división celular, dar lugar a dos células hijas
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idénticas y diferenciarse en tipos de células maduras y especializadas diferentes que pueden

colonizar, integrarse y originar nuevos tejidos. Estas células pueden encontrarse en todo
organismo multicelular, y son responsables del crecimiento, reparación y homeostasis de varios
tejidos8,9.

Las células madre se clasifican en células madre embrionarias (ESCs- Embrionic Stem Cells), células
madre fetales (FSCs- Fetal Stem Cells) y células madre adultas (ASCs- Adult Stem Cells)
dependiendo de su origen.

También pueden clasificarse por su capacidad de diferenciarse, se clasifican de mayor a menor

capacidad o grado de plasticidad en totipotenciales, pluripotenciales y multipotenciales. Las
células madre totipotenciales incluyen al cigoto y sus primeras células progenitoras, son las que
pueden dar lugar a todo tipo de células del organismo, tanto embrionarias como
extraembrionarias como las de la placenta. Las células madre pluripotenciales son las que se
encuentran en el interior de la masa interna del blastosito, también se conocen como células
madre embrionarias. Estas pueden diferenciarse en células de las tres hojas embrionarias:
ectodermo, mesodermo y endodermo. Las células madre multipotenciales también pueden dar
lugar a diferentes tipos celulares, pero normalmente forman células del tejido en el que residen.
Están presentes durante la vida embrionaria y, en algunos tejidos, permanecen en la vida adulta
participando en la reparación y regeneración de tejidos, e incluyen células madre
mesenquimatosas, nerviosas, de la médula ósea y de la glía envolvente olfatorias 9, 10.

Actualmente se están estudiando los diferentes factores de crecimiento asociados a la

diferenciación de las células madres y la gama de linajes celulares en los que éstas se pueden
diferenciar, así como sus aplicaciones en la terapia celular para el tratamiento de diferentes
enfermedades, tales como las neurodegenerativas entre las que se encuentra clasificada la
enfermedad del Parkinson.

Terapia celular
La terapia celular surge de las relaciones interdisciplinarias con la terapéutica médica como
medicina regenerativa. Es un tratamiento biológico basado en los conocimientos de la terapéutica
quirúrgica, médica y de rehabilitación en el que se inducen a las células madre a un proceso de
diferenciación dirigido para poder obtener un único tipo celular con utilidad terapéutica. Esto se
logra gracias a una combinación de factores tales como proteínas u hormonas, aplicado sobre las
células de acuerdo con un estricto cronograma, que imita las señales y la información que las
células recibirían durante el desarrollo embrionario y fetal necesarias para transformarse en un
específico tipo celular13, 14.

Células madre neuronales

Durante el desarrollo embrionario, las células madres se originan a partir de las capas del
neuroectodermo que rodea los ventrículos, a partir de esta zona migran hacia la corteza
diferenciándose a neuronas o células de la glía y formando los circuitos neuronales que existen en
el adulto, según las diferentes señales de destinación que reciben. En el adulto se ha documentado
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división celular continua en algunas áreas del sistema nervioso central: la capa subgranular del giro
dentado del hipocampo, el bulbo olfatorio y la región subventricular de los ventrículos laterales. Se
plantea que, siguiendo la dirección del desarrollo embrionario, existiría un flujo de nuevas
neuronas, que permanece durante toda la vida hacia el bulbo olfatorio, denominado corriente
migratoria rostral (rostral migratory stream: RMS).

Células madre pluripotenciales para tratamiento celular de PD

Las células madre pluripotenciales permiten una expansión y derivación ilimitada de cualquier tipo
de célula, por lo que representan una excelente fuente para generar neuronas in vitro. Los
procesos de diferenciación del destino celular neuronal pueden ser sintetizados in vitro a partir de
células madre pluripotenciales derivadas de células madre embrionarias. Las neuronas
dopaminérgicas pueden ser generadas a partir de una combinación de los factores Shh, Fgf8 y
Wnt. In vitro, el uso de morfógenos para la diferenciación de neuronas en particular, dan lugar a
varios tipos de células que resultan de la intersección de estas señales, por lo que las células
neuronales deseadas constituirán solo una fracción del total de las células producidas 11, 12.

Neuronas Mesencefálicas Dopaminérgicas

Hay 17 grupos celulares (A1-A17) de neuronas catecolaminérgicas (productoras de catecolaminas)
dentro del cerebro de los mamíferos, que van de la médula al hipotálamo. Sólo tres de ellos, A8
(área retrobulbar), A9 (sustancia negra) y A10 (área ventral tegmental) se encuentran en el
mesencéfalo15, lugar en donde se encuentran las neuronas dopaminérgicas.

La expresión forzada de factores de transcripción que determinan el destino celular de las

neuronas in vivo puede promover la inducción de líneas de restricción para células madre
pluripotenciales. La expresión forzada de factores como Nurrl (NR4A2), Lmx1 y Pitx3, en
combinación con Shh y Fgf8, pueden promover la diferenciación de neuronas dopaminérgicas. La
expresión de Nurrl incrementa la proporción de neuronas dopaminérgicas de un 25 a un 80% de
todas las neuronas. Específicamente Nurrl regula el fenotipo de neurotransmisor de dopamina,
con el incremento de TH, DAT, AADC y cret. Pitx3 no incrementa el número total de neuronas
dopaminérgicas, pero mueven el destino preferentemente a células del Sistema Nervioso tales
como las neuronas dopaminérgicas definidas por la expresión de Raldh 1. La expresión de Lmx1 en
células de nestina puede desencadenar la diferenciación de neuronas dopaminérgicas, induciendo
la expresión de Msx1 y Ngn2, con aproximadamente el 80% de neuronas que muestran un
fenotipo correcto. Como Lmx1 tambien se expresa en otras parter durante el desarrollo
embrionario, fue necesaria la inducción de neuronas dopaminergicas en un ambiente ventral 12.

Nurr1
El receptor nuclear asociado 1 (NURR1) es una proteína que pertenece a los factores de
transcripción intracelulares incluidos dentro de la familia de los receptores nucleares y se
encuentra codificado, en humanos, por el gen NR4A2 (de sus siglas en inglés "nuclear receptor
subfamily 4, group A, member 2").17
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El factor nuclear asociado Nurr1 (NR4A2) es un factor de transcripción esencial para la adquisición
y mantenimiento del fenotipo de dopamina (DA) sintetizada en neuronas del mesencéfalo. Se han
descrito mutaciones en el gen NR4A2 que han sido asociadas con desórdenes relacionados con
disfunciones dopaminérgicas tales como la enfermedad de Parkinson, la esquizofrenia o el
trastorno bipolar. 18

Aunque estructuralmente se relaciona con receptores nucleares regulados por ligandos, nurr1 es
funcionalmente atípico debido a su inhabilidad de atar un ligando semejante y activar la
transcripción siguiendo las reglas comunes de los receptores nucleares (NR). Hasta ahora, el
estímulo fisiológico que activa Nurr1 y la señalización de proteínas que regulan su actividad
transcripcional en neuronas mesencefálicas, se desconocen.

NR4A2
Es un gen que codifica un miembro de de la superfamilia de receptores hormona retinóica estero-
tiroidea. La proteína codificada puede actuar como factor de transcripción. Es un regulador de
transcripción importante para la diferenciación y mantenimiento de neuronas dopaminérgicas
mesodiencefpalicas (mdDA) durante el desarrollo. Mutaciones en este gene han sido asociadas
con desórdenes relacionados con disfunción dopaminérgica como Enfermedad de Parkinson,
esquizofrenia y depresión maniaca. 19

Localización: 2q22-q23

Exón: 8

Secuencia: TGGGAATCAGAGTACCTTTCTGCAGAAGGCGCACCTGTTGCCTGCTGCTCGGCTGCATTG
TCTGCGAAAGGAAAAGGGGCGACGCTTCACTCTGACTTTTGGGGTTTCTAAAGAGCTGGG
TCACGGTCACTGTCTACCCTCTCCCCTTCCTCTCCCCCCCCCCCGCAAGCACCACGTCCT
CCATCGAACGTGGGCACTGCATGGAAATAAGGAAACATAGAAAAATAAGCCCTACCCCCA
CTCCCATTCCCTTTCAGATGGGAGTGTGGGGGGTGGGGGTGGGGTAGAGAGAGTGAGAGA
GAGAGATAATTAGAATGAATATATGCCAGAAGAGGAGGAGGCCTGGGACAGGAAAAGGGA
GTAAAAGGGGATGAACCGGGTAGGGAAATCCCACCCGAACTGCGTGAGCCCTCTGAGCGT
CTCGTGTCATGGGACATCTGTACGCTCTTCCGCTAAGGGGGTGACGAAGGTGGGTGGGAG
AGGTTAGGGCGCTGCAAGGCACATCCCATTCCGTGCGGCTCCAGGTGCGTACTACCTGGC
CACGCCGGCCTTGCCTTCCGCCGGTGCTTTTGTTGCACCCTCCCCACATGTGAGCGGCCG

Inicio: 157,180,944 bp

Fin: 157,198,860 bp

Tamaño: 17,917 bases

Orientación: Hebra menor 20

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Justificación
La Enfermedad de Parkinson (Parkinson Disease - PD) es el trastorno neurodegenerativo más
frecuente después de la demencia de Alzheimer; la edad es el factor de riesgo más importante
para su presentación clínica. Su frecuencia aumenta proporcionalmente a la esperanza de vida. 2

En México se ha estimado una prevalencia de enfermedad de Parkinson de entre 40 y 50 casos por

cada 100,000 habitantes/año. En el Instituto Nacional de Neurología y Neurocirugía es la cuarta
causa de consulta. Sólo el Instituto Mexicano del Seguro Social (IMSS) atendió durante 2010 a 132
mil pacientes con Parkinson, a quienes les proporcionó atención médica y quirúrgica. Se ha
calculado que en el mundo debido al aumento de la tasa de sobrevida y con esto al aumento de
enfermedades degenerativas, la enfermedad de Parkinson afecta actualmente a 4.1 a 4.6 millones
de personas mayores de 50 años calculándose que para el año 2030 esta cifra será duplicada por
lo que conlleva a un problema de salud pública. La enfermedad de Parkinson es progresiva con
una edad media de inicio de 55 años, y se ha calculado una duración media de la enfermedad de
10 a 13 años.1

La restauración del sistema nervioso central es un importante desafío clínico, y el trasplante de

células madre ha sido considerado como una opción terapéutica prometedora para muchas
enfermedades neurológicas7.

Actualmente el uso de células madre como fuente de células neurológicas dopaminérgicas es de

gran interés para la terapia celular en la EP. A pesar de las grandes expectativas que se tienen
debido a su potencial de replicación y de diferenciación, su uso clínico no está indicado debido a
las limitaciones que presenta en la actualidad. Entre ellas destaca el limitado número de células
dopaminérgicas que es posible obtener in vitro y la variabilidad en la respuesta de estas una vez
trasplantadas, por lo que conocimiento de los mecanismos implicados en la generación de células
dopaminérgicas in vitro a partir de sus precursores mesencefálicos es clave para su uso en terapia
celular de la EP.

Se considera que la expresión forzada de factores como Nurrl (NR4A2), Lmx1 y Pitx3, en
combinación con Shh y Fgf8, pueden promover la diferenciación de neuronas dopaminérgicas. El
presente estudio se enfoca en el factor Nurr1 y pretende identificar la relación que existe entre su
transcripción y la Enfermedad de Parkinson, así como el incremento de diferenciación celular a
neuronas dopaminérgicas con este factor.
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Hipótesis
 La transcripción de Nurr1 incrementa la diferenciación celular de células madre a neuronas
dopaminérgicas.

Objetivos
Objetivo General
 Determinar si la transcripción de Nurr1, que es esencial para el desarrollo y mantenimiento
de las neuronas dopaminérgicas de la substancia negra, es un factor de riesgo asociado con el
PD.

Objetivos Específicos
 Identificar en pacientes con EP, la transcripción de Nurr1

 Medir la diferenciación celular de células madre in vitro con la transcripción de Nurr1

Diseño metodológico
Tipo de estudio
Prospectivo, longitudinal, experimental

Área de estudio
Líneas celulares de 100 pacientes con EP del Instituto Nacional de Neurología y Neurocirugía

Universo y muestra
Universo: Pacientes con EP en México, más de 500,000.

Muestra: Líneas celulares de 200 pacientes con EP del Instituto Nacional de Neurología y
Neurocirugía

Métodos e instrumentos de recolección de datos

Activar la transcripción de Nurr1 en la línea celular y medir la diferenciación celular in vitro a partir
de biomarcadores.

Los cultivos de células se mantienen libres de RPMI 1640 por 24 horas antes del tratamiento.

Plan de tabulación y análisis

Procedimientos
 Lucero Itsaí Quintana Romero

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21. Diagnóstico y tratamiento de la Enfermedad de Parkinson inicial y avanzada en el tercer
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