Universidad de Sonora

Práctica Núm. #2: Manejo y uso del microscopio óptico

compuesto

Laboratorio de Biología General

Nombre del Docente: Gracida Valdepeña Mirian Liz

Nombre del alumno: Bernal Gamboa Carlos Ivan

Fecha de entrega: 30/09/2019

INTRODUCCIÓN

El microscopio es una de las herramientas básicas en el estudio de la biología. Mediante

un conjunto de lentes, el microscopio aumenta el tamaño de los objetos bajo estudio, que son
demasiado pequeños para ser estudiados a simple vista. Dos principios están involucrados
en el uso del microscopio: MAGNIFICACIÓN (la capacidad de aumentar el tamaño de una
imagen) y RESOLUCIÓN (la capacidad de producir una imagen nítida, o bien la capacidad
del instrumento para dar imágenes bien definidas de puntos situados muy cerca uno del otro
en el objeto). Existen distintos tipos de microscopios, cada uno con un propósito particular.

PARTES DE UN MICROSCOPIO ÓPTICO

En el microscopio distinguimos un sistema óptico destinado a la iluminación y obtención de
una imagen muy aumentada del objeto examinado, y un sistema mecánico (o montura), cuya
finalidad es la de sustentar convenientemente los elementos ópticos y los preparados que se
examinan.

Sistema óptico
OCULAR: Lente situada cerca del ojo del observador. Amplía la imagen del objetivo.
OBJETIVO: Lente situada cerca de la preparación. Amplía la imagen de ésta.
CONDENSADOR: Lente que concentra los rayos luminosos sobre la preparación.
DIAFRAGMA: Regula la cantidad de luz que entra en el condensador.
FOCO: Dirige los rayos luminosos hacia el condensador.

Sistema mecánico
SOPORTE: Mantiene la parte óptica. Tiene dos partes: el pie o base y el brazo.
PLATINA: Lugar donde se deposita la preparación.
CABEZAL: Contiene los sistemas de lentes oculares. Puede ser monocular, binocular.
REVÓLVER: Contiene los sistemas de lentes objetivos. Permite, al girar, cambiar los objetivos.
TORNILLOS DE ENFOQUE: Macrométrico que aproxima el enfoque y micrométrico que consigue el
enfoque correcto.

MANEJO DEL MICROSCOPIO ÓPTICO

1. Mover siempre suave y lentamente cualquier pieza del microscopio.
2. Colocar el objetivo de menor aumento en posición de empleo y bajar la platina completamente. Si el
microscopio se recogió correctamente en el uso anterior, ya debería estar en esas condiciones.
3. Colocar la preparación sobre la platina sujetándola con las pinzas metálicas.
4. Comenzar la observación con el objetivo de 4x (ya está en posición) o colocar el de 10 aumentos (10x) si
la preparación es de bacterias.
5. Para realizar el enfoque:
a. Acercar al máximo la lente del objetivo a la preparación, empleando el tornillo macrométrico. Esto
debe hacerse mirando directamente y no a través del ocular, ya que se corre el riesgo de incrustar el
objetivo en la preparación pudiéndose dañar alguno de ellos o ambos.
b. Mirando, ahora sí, a través de los oculares, ir separando lentamente el objetivo de la preparación
con el macrométrico y, cuando se observe algo nítida la muestra, girar el micrométrico hasta
obtener un enfoque fino.
6. Pasar al siguiente objetivo. La imagen debería estar ya casi enfocada y suele ser suficiente con mover un
poco el micrométrico para lograr el enfoque fino. Si al cambiar de objetivo se perdió por completo la
imagen, es preferible volver a enfocar con el objetivo anterior y repetir la operación desde el paso 3. El
objetivo de 40x enfoca a muy poca distancia de la preparación y por ello es fácil que ocurran dos tipos
 de percances: incrustarlo en la preparación si se descuidan las precauciones anteriores y mancharlo con
aceite de inmersión si se observa una preparación que ya se enfocó con el objetivo de inmersión.
7. Empleo del objetivo de inmersión:
a. Bajar totalmente la platina.
b. Subir totalmente el condensador para ver claramente el círculo de luz que nos indica la zona que se
va a visualizar y donde habrá que echar el aceite.
c. Girar el revólver hacia el objetivo de inmersión dejándolo a medio camino entre éste y el de x40.
d. Colocar una gota mínima de aceite de inmersión sobre el círculo de luz.
e. Terminar de girar suavemente el revólver hasta la posición del objetivo de inmersión.
f. Mirando directamente al objetivo, subir la platina lentamente hasta que la lente toca la gota de
aceite. En ese momento se nota como si la gota ascendiera y se adosara a la lente.
g. Enfocar cuidadosamente con el micrométrico. La distancia de trabajo entre el objetivo de inmersión
y la preparación es mínima, aun menor que con el de 40x por lo que el riesgo de accidente es muy
grande.
h. Una vez se haya puesto aceite de inmersión sobre la preparación, ya no se puede volver a usar el
objetivo 40x sobre esa zona, pues se mancharía de aceite. Por tanto, si desea enfocar otro campo,
hay que bajar la platina y repetir la operación desde el paso 3.
i. Una vez finalizada la observación de la preparación se baja la platina y se coloca el objetivo de
menor aumento girando el revólver. En este momento ya se puede retirar la preparación de la
platina. Nunca se debe retirar con el objetivo de inmersión en posición de observación.
j. Limpiar el objetivo de inmersión con cuidado empleando un papel especial para óptica. Comprobar
también que el objetivo 40x está perfectamente limpio.

MANTENIMIENTO Y PRECAUCIONES
Al ser el microscopio un aparato de precisión y de precio elevado, es muy conveniente
asegurarle un buen rendimiento y una larga duración mediante toda una serie de normas y cuidados:

1. Para transportar el microscopio se recomienda utilizar siempre las dos manos,

sujetándolo por el brazo con una mano y sosteniéndolo del pie con la palma de la otra mano.
2. Se debe desplazar en posición vertical para evitar la caída del ocular y/o del espejo o
fuente de luz.
3. En la mayoría de los microscopios el brazo debe quedar hacia el observador. Debe
apoyarse correctamente el aparato hacia el centro de la mesa.
4. Al finalizar el trabajo, hay que dejar puesto el objetivo de menor aumento en posición
de observación, asegurarse de que la parte mecánica de la platina no sobresale del borde de la misma
y dejarlo cubierto con su funda.
5. Cuando no se está utilizando el microscopio, hay que mantenerlo cubierto con su
funda para evitar que se ensucien y dañen las lentes. Si no se va a usar de forma prolongada, se debe
guardar en su caja dentro de un armario para protegerlo del polvo.
6. Nunca hay que tocar las lentes con las manos. Si se ensucian, limpiarlas muy
suavemente con un papel de filtro o, mejor, con un papel de óptica.
7. No dejar el portaobjetos puesto sobre la platina si no se está utilizando el
microscopio.
8. Después de utilizar el objetivo de inmersión, hay que limpiar el aceite que queda en el
objetivo con pañuelos especiales para óptica. En cualquier caso, se pasará el papel por la lente en un
solo sentido y con suavidad. Si el aceite ha llegado a secarse y pegarse en el objetivo, hay que
limpiarlo con una mezcla de alcohol-acetona (7:3), xilol o solución para lentes. No hay que abusar
de este tipo de limpieza (mezcla de alcohol-acetona (7:3) o xilol) porque si se aplican estos
disolventes en exceso se pueden dañar las lentes y su sujeción.
9. No forzar nunca los tornillos giratorios del microscopio (macrométrico,
micrométrico, platina, revólver y condensador).
 10. El cambio de objetivo se hace girando el revólver y dirigiendo siempre la
mirada a la preparación para prevenir el roce de la lente con la muestra. No cambiar nunca de
objetivo agarrándolo por el tubo del mismo ni hacerlo mientras se está observando a través del
ocular.
11. Mantener seca y limpia la platina del microscopio. Si se derrama sobre ella
algún líquido, secarlo con un paño. Si se mancha de aceite, limpiarla con un paño humedecido en
xilol.
12. Es conveniente limpiar y revisar siempre los microscopios al finalizar la
sesión práctica y, al acabar el curso, encargar a un técnico un ajuste y revisión general de los
mismos.

OBJETIVOS:
Identificar las partes ópticas y mecánicas de un microscopio óptico compuesto y el uso
correcto del mismo.
Preparar laminillas simples para observar bajo el microscopio y aprender a enfocarlas a
diferentes magnificaciones.

MATERIALES:
Papel periódico (una hoja)
Hilos de colores
Tijeras
Portaobjetos
Cubreobjetos
Gotero

METODOLOGÍA O ACTIVIDADES:
Instrucciones generales:
Limpiar los lentes del microscopio siempre, antes y después de usarlo con papel óptico.
Colocar el objetivo de baja potencia en posición a utilizar.
Colocar la laminilla encima de la platina, centralizando el área del cubreobjetos en la
abertura de la misma.
Encender el microscopio.
Mirar por el ocular intentando localizar la imagen en el área observada (campo visual).

Preparación de laminilla de letra “e”:

Tome un portaobjetos limpio y seco por sus bordes.
Corte una pequeña letra de diario asimétrica –e,f u otra-
Coloque una gota de agua en el portaobjetos y ubíquela encima de la gota de agua.
Cubra el preparado con un cubreobjetos.
Coloque el portaobjetos sobre la platina (esta preparación se conoce como MONTAJE
HÚMEDO).
Enfoque con el objetivo 4X. (Utilice el tornillo macrométrico girándolo suavemente hasta
observar la imagen). Cuando obtenga una imagen nítida no mueva más el tornillo.
Mientras observa a través del microscopio, mueva la laminilla hacia la izquierda ¿Hacia
dónde se mueve la imagen?
Luego de enfocar la laminilla de la letra “e” utilizando el lente 4X, cambie el lente al 10X
girando el revólver.
La imagen debe permanecer enfocada. Si necesita aclarar más la imagen, utilice solamente el
tornillo micrométrico.
Dibuje la imagen que observa en el campo visual de 4 y 10 X.
 Cambie ahora al objetivo 40X.
La imagen debe permanecer en foco.
Si necesita aclarar más la imagen utilice solamente el tornillo de ajuste micrométrico.
Dibuje la imagen que observa en el campo visual de 40X.
Laminilla con hilo de colores (Profundidad de foco)
4X 4X

Corte tres trozos de hilos y colóquelos sobe un

portaobjetos, ponga un cubreobjetos encima y observe al microscopio. ¿Cuándo tiene en foco uno
de los hilos, que sucede con los otros?
A medida que el aumento va siendo mayor es imposible poder apreciar todos los hilos, pero el grado
de detalle en el que se logra apreciar es mucho mayor debido al aumento en cuestión, es decir, se
cambia amplitud por capacidad de detalle en la visión.
4X 10X 40X

En función a lo observado, podrá responder a las siguientes preguntas:

CUESTIONARIO

1. Observando los distintos elementos del microscopio ubique los que corresponden a la
parte óptica:

Foco o fuente de luz: Este es un elemento esencial que genera un haz de luz dirigido hacia
la muestra.
Condensador: El condensador es el elemento encargado de concentrar los rayos de luz
provenientes del foco a la muestra.
Diafragma: El diafragma es un pieza que permite regular la cantidad de luz incidente a la
muestra.
Objetivo: El objetivo es el conjunto de lentes que se encuentran más cerca de la muestra y
que producen la primera etapa de aumento.
Ocular: Este es el elemento óptico que proporciona la segunda etapa de ampliación de
imagen.

2. Reconozca los objetivos secos y de inmersión:

 Objetivos secos: Se utilizan sin la necesidad de colocar sustancia alguna entre ellos (agua
por ejemplo) y la preparación. Los objetivos secos más utilizados son el 6X, 10X, 20X, 45X y 60X.

Objetivos de inmersión: Está compuesto por un complicado sistema de lentes. Para

observar atreves de este es necesario colocar una gota de aceite de cedro entre el objetivo y la
preparación, de manera que lente frontal entre en contacto con el aceite de cedro.
Generalmente, estos objetivos son de 100X y se distingue por uno o dos círculos o anillos de
color negro que rodea su extremo inferior.

3. ¿De qué partes del microscopio depende la correcta iluminación de la

preparación?

Obviando la fuente de luz, también influyen aspectos tales como la altura y la apertura del
diafragma (que tanta luz deja pasar) al igual que del uso correcto de los objetivos y oculares de
tal manera que la luz este en cantidad adecuada para permitir observar la muestra en cuestión
de la mejor manera posible (nítida y enfocada)

4. ¿Cómo varía la iluminación al abrir o cerrar el diafragma?

El diafragma nos ayuda a controlar la cantidad de luz que traspasa hacia la muestra, de tal
manera que ayuda a mejorar el contraste en la muestra, lo que significa que a menor apertura
de este menor será la luz que traspase hacia la muestra, de ser el caso contrario esta
aumentara, controlando esto es que podemos darle la cantidad justa de luz para generar un
contraste adecuado en la muestra.

5. ¿Qué función tienen el filtro azul, el diafragma y el condensador en la

iluminación?

Filtro Azul.- Es una pieza azul que se inserta en el condensador de microscopio y es

utilizado para mejorar la iluminación y obtener una mayor resolución de imagen. Incrementa la
resolución dado que al disminuir la longitud de onda de la luz se mejora la resolución y teniendo
en cuenta que la longitud de onda más corta a la luz visible es la de color azul.

Diafragma.- Como se mencionó anteriormente  Es una pieza encargada de regular la

cantidad de luz proveniente del condensador a la muestra,  como el iris de un ojo humano. De
esta manera permitir el mayor o menor paso de luz al portaobjetos

Condensador.- Es un sistema de lentes situadas bajo la platina, su función es al de

concentrar la luz generada por la fuente de iluminación hacia la muestra y permitir la mejor
iluminación posible, en esta pieza se puede insertar un filtro azul.

6. Escriba e interprete las inscripciones que llevan cada grupo de lentes. Preste
especial atención al objetivo de INMERSIÓN
 Empezando desde arriba, las indicaciones inscritas en el objetivo son las siguientes:

Nombre del fabricante: Zeiss, Olympus, Leica, Nikon, etc.

Correcciones ópticas: Indicaciones acerca del tipo de lentes utilizadas en el objetivo para
corregir las aberraciones ópticas. Existe una gran variedad de opciones en este punto, la
nomenclatura específica puede variar en función del fabricante.
Aumento: Capacidad de aumento del objetivo, es decir, relación entre los tamaños de la
imagen real y el objeto real.
Apertura numérica: Indicación del tamaño del cono de luz incidente al objetivo.
Longitud del tubo: Este número indica la distancia en milímetros que debe haber entre el
objetivo y el ocular para que la imagen se forme correctamente. El símbolo infinito se utiliza
para indicar que los rayos son completamente paralelos al salir del objetivo.
Espesor del cubreobjetos: Este número indica el espesor en milímetros del cubreobjetos
que debe utilizarse para minimizar las aberraciones ópticas.
Código de color: Mediante un código de colores suele indicarse el aumento proporcionado
por el objetivo. La mayoría de los fabricantes siguen el estándar incluido en la siguiente sección
de este artículo. Adicionalmente, en el caso de los objetivos de inmersión, un segundo color
indica el medio de inmersión que debe utilizarse.
Negro
Café
Rojo
Amarrillo
Verde Claro
Verde Oscuro
Azul Claro
Azul Oscuro
Blanco

Existen dos tipos básicos de objetivos: los objetivos secos y los objetivos de inmersión. Estos
dos tipos de objetivos se diferencian en función del medio situado entre la muestra y la lente del
objetivo. En el caso de los objetivos secos, no hay ningún medio entre la muestra y el objetivo aparte
del aire. Los objetivos de inmersión, en cambio, están diseñados para observar la muestra a través de
una capa de medio de inmersión que normalmente consiste en aceite. La ventaja principal de utilizar
objetivos de inmersión es que la luz que llega al objetivo no necesita atravesar el aire. Esto se
traduce en un aumento en la calidad de imagen ya que reduce la refracción de la luz incidente. En
consecuencia, los objetivos de inmersión son utilizados en aplicaciones donde se requiere un gran
poder de aumento y alta resolución.
Como se explicó anteriormente lo Objetivos de inmersión necesitan de una medio liquido
entre este y la muestra, para esto también existe una nomenclatura a base de colores para especificar
que liquido u aceite es necesario.

Negro

Blanco
 Naranja
Rojo

7. ¿Qué es la profundidad de foco?

La profundidad de foco se refiere al rango sobre el cual el plano de imagen se puede mover
mientras que se mantiene una cantidad aceptable de nitidez.

8. ¿Cuáles son las características que tiene la imagen final del microscopio
compuesto?

Al mirar a través de la lente ocular se ve una imagen aumentada de la imagen real

que se conoce como imagen virtual. La configuración más simple de un microscopio
compuesto consiste en una lente para el objetivo y otra para el ocular. El aumento total
obtenido mediante un microscopio compuesto es el resultado de combinar el aumento obtenido
por el objetivo con el aumento obtenido por el ocular.
La mayor parte del aumento se produce en el objetivo.
El aumento total se calcula multiplicando el aumento del objetivo por el aumento del ocular.
Los microscopios compuestos suelen venir equipados con tres o cuatro objetivos que se pueden
seleccionar mediante el revólver.
Los aumentos de estos objetivos suelen estar contenidos en un rango de entre 4x y 100x.
En el caso de los oculares el aumento suele estar entre 5x y 20x. En base a estos números el
aumento alcanzable por el microscopio compuesto varía entre 20x y 2000x. Sin embargo, debido a
la naturaleza de la luz el máximo aumento alcanzable por un microscopio óptico está limitado
alrededor de 1500x.

9. Al desplazar el portaobjetos, ¿en qué sentido se mueve la imagen?

Permite su desplazamiento a voluntad por medio de dos mandos que la mueven en

sentido anterior-posterior y latero-lateral. Si se mueve el portaobjetos hacia la derecha, el objeto
examinado se desplazará hacia la izquierda. Si se mueve el portaobjetos hacia la izquierda, el
objeto examinado se alejará.

10. ¿Qué combinaciones de aumentos (del ocular, del objetivo y total) pueden
hacerse con el microscopio del que se dispone?

El aumento de la muestra se produce en dos etapas, primero en las lentes del objetivo y a
continuación en las lentes del ocular. El aumento total del microscopio se puede calcular fácilmente
multiplicando el aumento del objetivo por el aumento del ocular:
Aumento microscopio = Aumento objetivo × Aumento ocular
Existen 28 combinaciones de aumentos
 11. ¿Por qué es conveniente centrar en el campo de observación el objeto que nos
interesa ver de la preparación si queremos observarlo a gran aumento?

Es una ventaja tener un rango de campos de observación (aumentos) para obtener un

conocimiento general del espécimen. Un objetivo de bajos aumentos (campo de observación
grande) como el 1x – 5x es particularmente útil en aplicaciones de patología clínica donde este
brinda una vista general comprensiva que habilita la identificación de características de posible
significado diagnóstico para aumentar más esa imagen.

Identifique las partes componentes del microscopio en la figura presentada a continuación, y a

partir de la observación del microscopio del que dispone.

Oculares

Ajustes de las dioptrías

Tubo

Revolver
Brazo
Objetivos

Desplazadores de platina
Platina

Diafragma Tornillo Macrométrico

Condensador Tornillo
Micrométrico
Fuente de
iluminación / foco

Base

MICROSCOPIO ÓPTICO COMPUESTO

Base o pie: Es la pieza que se encuentra en la parte inferior del microscopio y sobre la cual se
montan el resto de elementos. Acostumbra a ser la parte más pesante para proporcionar suficiente
equilibrio y estabilidad al microscopio. Es habitual que incluya algunos topes de goma para evitar
que el microscopio se deslice sobre la superficie donde se encuentra.

Brazo: El brazo constituye el esqueleto del microscopio. Es la pieza intermedia del microscopio que
conecta todas sus partes. Principalmente conecta la superficie donde se coloca la muestra con el
ocular por donde ésta se puede observar. Tanto las lentes del objetivo como del ocular se encuentran
también conectadas al brazo del telescopio.

Platina: Esta es la superfície donde se coloca la muestra que se quiere observar. Su posición vertical
con respecto a las lentes del objetivo se puede regular mediante dos tornillos para generar una
imagen enfocada. La platina tiene un agujero en el centro a través del cual se ilumina la muestra.
Generalmente hay dos pinzas unidas a la platina que permiten mantener la muestra en posición fija.

Pinzas: Las pinzas tienen la función de mantener fija la preparación una vez esta se ha colocado
sobre la platina.

Tornillo macrométrico: Este tornillo permite ajustar la posición vertical de la muestra respecto el
objetivo de forma rápida. Se utiliza para obtener un primer enfoque que es ajustado posteriormente
mediante el tornillo micrométrico

Tornillo micrométrico: El tornillo micrométrico se utiliza para conseguir un enfoque más preciso de
la muestra. Mediante este tornillo se ajusta de forma lenta y con gran precisión el desplazamiento
vertical de la platina.

Revólver: El revólver es una pieza giratoria donde se montan los objetivos. Cada objetivo tiene
proporciona un aumento distinto, el revólver permite seleccionar el más adecuado a cada aplicación.
Habitualmente el revólver permite escoger entre tres o cuatro objetivos distintos.

Tubo: El tubo es una pieza estructural unida al brazo del telescopio que conecta el ocular con los
objetivos. Es un elemento esencial para mantener una correcta alineación entre los elementos
ópticos.
Foco o fuente de luz: Este es un elemento esencial que genera un haz de luz dirigido hacia la
muestra. En algunos casos el haz de luz es primero dirigido hacia un espejo que a su vez lo desvía
hacia la muestra. La posición del foco en el microscopio depende de si se trata de un microscopio de
luz transmitida o de luz reflejada.

Condensador: El condensador es el elemento encargado de concentrar los rayos de luz provenientes

del foco a la muestra. En general, los rayos de luz provenientes del foco son divergentes. El
condensador consiste en un seguido de lentes que cambian la dirección de estos rayos de modo que
pasen a ser paralelos o incluso convergentes.

Diafragma: El diafragma es un pieza que permite regular la cantidad de luz incidente a la muestra.
Normalmente se encuentra situado justo debajo la platina. Regulando la luz incidente es posible
variar el contraste con el que se observa la muestra. El punto óptimo del diafragma depende del tipo
de muestra observada y de su transparencia.

Objetivo: El objetivo es el conjunto de lentes que se encuentran más cerca de la muestra y que
producen la primera etapa de aumento. El objetivo suele tener una distancia focal muy corta. En los
microscopios modernos distintos objetivos están montados en el revólver. Este permite seleccionar
el objetivo adecuado para el aumento deseado. El aumento del objetivo junto con su apertura
numérica suele estar estar escrito en su parte lateral.

Ocular: Este es el elemento óptico que proporciona la segunda etapa de ampliación de imagen. El
ocular amplia la imagen que ha sido previamente aumentada mediante el objetivo. En general, el
aumento aportado por el ocular es inferior al del objetivo. Es a través del ocular que el usuario
observa la muestra. En función del número de oculares se puede distinguir entre microscopios
monoculares, binoculares e incluso trinoculares. La combinación de objetivo y ocular determina el
aumento total del microscopio.

Conclusión:
En esta práctica aprendimos los aspectos más importantes a la hora de utilizar un microscopio, tales
como su correcto manejo, aspectos que son necesarios para enfocarlo, cómo preparar las muestras de
una manera adecuada para facilitar su observación. También aprendimos los distintos componentes
del microscopio y la función que tienen estos a la hora de utilizarlo, además nos percatamos de la
historia del microscopio y como fue e ha ido evolucionando y como es que en base a estos avances
la ciencia también ha ido descubriendo nuevos elementos y funciones de organismos o partículas.

4X 10X 40X

BIBLIOGRAFÍAS

https://www.uv.es/instrumental/El%20microscopio/Punto3-4.htm
http://www.pretexsa.com/J6x1Ka0X.html
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