ESTUDIO FITOQUIMICO DE LAS BRACTEAS, FLORES Y HOJAS EN LA

ESPECIE Bougainvillea Glabra Y EVALUACIÓN DE SU ACTIVIDAD

BIOLÓGICA

ALEJANDRA PINTOR
CAROLINA SÁNCHEZ

UNIVERSIDAD DE CIENCIAS APLICADAS Y AMBIENTALES U.D.C.A

FACULTAD DE CIENCIAS Y TECNOLOGIA
SEMINARIO TOPICOS SELECTOS EN FITOQUÍMICA
BOGOTÁ
2014

1
ESTUDIO FITOQUIMICO DE LAS BRACTEAS, FLORES Y HOJAS EN LA
ESPECIE Bougainvillea Glabra Y EVALUACIÓN DE SU ACTIVIDAD
BIOLÓGICA

ALEJANDRA PINTOR
CAROLINA SÁNCHEZ
Monografía para optar al título de Química Pura
Realizado en el seminario de grado Tópicos selectos en Fitoquímica

Docente
Oscar Javier Patiño Ladino
Ph. D. en Ciencias-Químicas
Juliet Angélica Prieto Rodríguez
D. en Ciencias Químicas
Jorge Emilio Parra Amin
Mag. en Ciencias Químicas

UNIVERSIDAD DE CIENCIAS APLICADAS Y AMBIENTALES U.D.C.A

FACULTAD DE CIENCIAS Y TECNOLOGIA
SEMINARIO TOPICOS SELECTOS EN FITOQUÍMICA
BOGOTÁ
2014

2
 AGRADECIMIENTOS

Queremos agradecer de manera especial a:

A Dios por las Bendiciones con las que llena nuestras vidas.

A nuestros familiares, que están con nosotras en todo momento y han

sido nuestros principales maestros incondicionales. Gracias por
ayudarnos y apoyarnos con esta carrera, por creer en nosotras, además
porque han estado siempre brindándonos compañía, por esto y mucho
más, este logro es para ustedes.

La dirección de los profesores, JULIET PRIETO, OSCAR JAVIER PATIÑO

Y JORGE PARRA por su dirección, recomendaciones y aporte de
conocimiento y guía en el proyecto.

Este trabajo fue realizado en el laboratorio de Productos Naturales de la

Universidad de Ciencias Aplicadas y Ambientales U.D.C.A.

3
 TABLA DE CONTENIDO

AGRADECIMIENTOS ........................................................................3

TABLA DE CONTENIDO ....................................................................4

LISTA DE IMAGENES .......................................................................7

LISTA DE ILUSTRACIONES...............................................................8

LISTA DE TABLAS ...........................................................................9

LISTA DE ANEXOS ........................................................................ 10

ABREVIATURAS ............................................................................ 11

1. RESUMEN ............................................................................ 12

Palabras Clave:.......................................................................... 12

2. INTRODUCCIÓN .................................................................... 13

3. OBJETIVOS .......................................................................... 14

3.1 OBJETIVO GENERAL ........................................................... 14

3.2 OBJETIVOS ESPECIFICOS .................................................... 14

4. ESTADO ACTUAL DEL TEMA ................................................... 15

4.1 GENERALIDADES DE LA FAMILIA Nyctaginaceae .................... 15

4.1.1 Distribución geográfica de las especies de la familia

Nyctaginaceae ........................................................................ 17

4.1.2 Usos etnobotánicos de especies de la familia Nyctaginaceae

18

4.1.3 Estudios fitoquímicos de la familia Nyctaginaceae .............. 19

4.1.4 Estudios de la actividad Biologica de especies de la familia

Nyctaginaceae ........................................................................ 21

4
 4.2 Aspectos generales del género Bougainvillea ......................... 23

4.2.2 Distribución geográfica del género Bougainvillea ............... 24

4.3 Aspectos generales de la especie Bougainvillea Glabra ............ 28

4.3.1 Clasificación taxonómica y descripción morfológica ............ 28

4.3.2 Distribución geográfica de la especie Bougainvillea Glabra .. 30

4.3.3 Usos etnobotánicos de la especie Bougainvillea Glabra ....... 30

4.3.4 Estudios Fitoquímicos de la especie Bougainvillea Glabra .... 31

4.3.5 Estudios de Actividad biológica de la especie Bougainvillea

Glabra 31

5. METODOLOGÍA ..................................................................... 33

5.1 PROCEDIMIENTOS GENERALES ............................................ 33

5.1.1 Técnicas cromatográficas ............................................... 33

5.2 ESTUDIO FITOQUÍMICO ...................................................... 34

5.2.1 Material vegetal ............................................................ 34

5.2.2 Extracción y fraccionamiento .......................................... 35

5.2.3 Análisis Fitoquímico preliminar ........................................ 36

5.3 ENSAYOS DE ACTIVIDAD BIOLÓGICA ................................... 38

5.3.1 Determinación de la actividad antioxidante ....................... 38

5.3.2 Prueba de inhibición de Acetilcolinesterasa ....................... 39

6. RESULTADOS Y ANÁLISIS DE RESULTADOS ............................. 40

6.1 Análisis fitoquímico preliminar .............................................. 40

6.1.1 Ensayos en tubo ............................................................. 40

6.1.2 Ensayos en placa ............................................................ 44

6.2 Ensayos de actividad biológica ............................................. 49

5
 6.2.1 Determinación de la actividad antioxidante ......................... 49

6.2.2 Prueba de inhibición de Acetilcolinesterasa ......................... 51

7. CONCLUSIONES ................................................................... 53

8. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS ............................................. 54

6. ANEXOS .............................................................................. 58

6
 LISTA DE IMAGENES

Imagen 1 Cromatografía Flash al vacío ............................................ 35

Imagen 2 Fracciones por CCD. (1 a 5) Fraccionamiento del extracto de
Hojas de B. Glabra. (B) extracto de Flores y Brácteas (H) extracto de
Hojas .......................................................................................... 36
Imagen 3 Actividad antioxidante por bioautografia con β-caroteno de los
extractos de Bougainvillea Glabra ................................................... 50
Imagen 4 Actividad captadora de radicales libres con DPPH de los
extractos de Bougainvillea Glabra ................................................... 51
Imagen 5 Prueba inhibición de Acetilcolinesterasa. (1 a 5)
Fraccionamiento del extracto de Hojas de B. Glabra. (B) extracto de
Flores y Brácteas (H) extracto de Hojas ........................................... 52

7
 LISTA DE ILUSTRACIONES

Ilustración 1 Distribución geográfica de las especies de la familia

Nyctaginaceae.............................................................................. 18
Ilustración 2 Estudio fitoquímico especie Bougainvillea glabra Choisy .. 19
Ilustración 3 Morfología de la flor.................................................... 24
Ilustración 4 Morfología de Bougainvillea Glabra. .............................. 29
Ilustración 5 Estructura del esquema de la Betacianin (a) Betanina R=
β-D-glucosa; (b) Betanidina R = H; (c) Indicaxanthin; (d) Acido
Betalamico. ................................................................................. 32
Ilustración 6 Esquema general del análisis fitoquímico preliminar en tubo
de ensayo .................................................................................... 37

8
 LISTA DE TABLAS

Tabla 1 Importancia terapéutica de la Bougainvillea Spectabilis .......... 20

Tabla 2 Estudio de las partes aéreas en diferentes solventes Boerhavia
diffusa Linn .................................................................................. 20
Tabla 3 Extracto de las flores de Mirabilis Jalapa ............................... 21
Tabla 4 Estudios de actividad biológica : especies Bougainvillea
Spectabilis y Bougainvillea Variegate, ............................................ 27
Tabla 5 Clasificación y descripción botánica de Bougainvillea Glabra ... 28
Tabla 6 Fases Móviles usadas en el ensayo preliminar ....................... 33
Tabla 7 Resultados del análisis fitoquímico preliminar en tubo para los
extractos de frutos y parte aérea. ................................................... 40
Tabla 8 Resultados del análisis fitoquímico preliminar en placa para los
extractos de frutos y parte aérea. ................................................... 46

9
 LISTA DE ANEXOS
Anexo 1 Metodología de las pruebas de reacciones en tubos de ensayo
.................................................................................................. 58
Anexo 2 Metodología de pruebas en cromatografía en capa delgada CCD
.................................................................................................. 62
Anexo 3 Preparación de reactivos para el análisis fitoquímico preliminar
.................................................................................................. 65

10
 ABREVIATURAS

CH3 CH3 Acetona

AcOEt Acetato de etilo
HCl Ácido Clorhídrico
cm centímetro
CC Cromatografía en Columna
CCD Cromatografía en Capa Delgada
CF Cromatografía Flash
CHCl3 Cloroformo
CLV Cromatografía Liquida al Vacío
CH2Cl2 Diclorometano
°C Grados centígrados
C6H14 Hexano
KOH Hidróxido de Potasio
nm nanómetro
MeOH Metanol
mL Mililitro
UV Ultravioleta
FeCl3 Tricloruro férrico

11
 1. RESUMEN

La Bugambilia (Bougainvillea Glabra Choisy) es utilizada en muchos

países como planta ornamental y medicinal, sin embargo no se debería
subestimar y darle importancia solamente por su estética, pues según el
conocimiento etnobotánico se ha usado en afecciones respiratorias.

El presente estudio fue llevado a cabo para encontrar metabolitos que

estuvieran presentes en el extracto de Flores-Brácteas y Hojas
Bougainvillea Glabra, la cual fue recolectada en el Municipio de
Copaquira-Cundinamarca, se llevó a cabo un estudio fitoquímico
preliminar por dos metodologías, la primera por medio de tubos de
ensayo en la que se detectaron carotenoides, esteroides, taninos,
saponinas y cardiotónicos, y la segunda prueba que es de coloración en
placas de cromatografía CCD, se observó la presencia de : esta pruebo
confirma los resultados obtenidos en ese estudio fitoquímico en tubos.
Se realizan ensayos cualitativos para determinar la actividad
antioxidante de la B. Glabra, con los ensayos de B- caroteno y DPPH
evidenciando en estos que la B Glabra tiene actividad antioxidante.
Finalmente se le realizaron pruebas biológicas a los dos extractos en la
que se detectó por medio de un bioensayo que no inhibió la
Acetilcolinesterasa, por lo que no tiene actividad potencial como fármaco
en contra del Alzheimer.

Se hace necesario realizar una caracterización más extensa de esta

planta para ampliar y confirmar el uso etnobotánico.

Palabras Clave: Estudio fitoquímico, metabolitos secundarios,

Bougainvillea Glabra Choisy, ensayos biológicos, cromatografía,

12
 2. INTRODUCCIÓN

El cultivo de plantas ornamentales se encuentra genéricamente dentro

de lo que se denomina horticultura no comestible, que sirve para
embellecer y mejorar nuestro entorno de vida, dentro de esta categoría
tenemos principalmente la producción de árboles, arbustos
ornamentales, plantas de colores y florales, ya sean sembradas en el
suelo o en jardineras (Liotier, Sébastie n. 2006).

A la horticultura ornamental se le atribuye como función básica

satisfacer las necesidades estéticas del hombre. Hoy esto se considera
un negocio atractivo ya que proporciona elevados ingresos por unidad
de superficie (Boris, P.1995).

Si bien la Bougainvillea Glabra Choisy, se caracteriza por ser una planta

de uso principal como arbusto decorativo, de soporte o barrera
vegetativa, constituye adicionalmente como una fuente de otros
múltiples usos a nivel biológico con servicio al ser humano o a su
entorno. Los extractos de este arbusto no han sido ampliamente
estudiados y analizados por lo que podrán ser de interés para realizar
futuros estudios químicos a fin de dilucidar más actividades biológicas
que las ya estudiadas (1, 2, 4, 6, 8 y 10) y vistas en comunidades para
que estén soportados con estudios fitoquímicos de más profundidad.

13
 3. OBJETIVOS

3.1 OBJETIVO GENERAL

 Contribuir y ampliar los estudios fitoquímicos de la especie

Bougainvillea Glabra Choisy, mediante la identificación de algunos
metabolitos secundarios presentes en el extracto etanólico de la
especie y realizar un bioensayo simple a los extractos.

3.2 OBJETIVOS ESPECIFICOS

 Identificar por medio de dos metodologías, placa y tubos de

ensayo algunos metabolitos secundarios presentes en las
Brácteas-Flores y Hojas, comparar esta información frente a lo
reportado en la bibliografía consultada.
 Evaluar la actividad biológica de los extractos puros y las
fracciones extraídas de ellos.

14
 4. ESTADO ACTUAL DEL TEMA

4.1 GENERALIDADES DE LA FAMILIA Nyctaginaceae

Familia perteneciente al orden de las Caryophyllales de 26 a 31 géneros

con 300 a 400 especies distribuidas sobe todo en regiones tropicales y
subtropicales de América, Son plantas herbáceas y sobre todo leñosas,
formada por hierbas, arbustos o árboles (15)

Plantas herbáceas anuales o perennes, o bien arbustivas, arbóreas o

trepadoras; tallos procumbentes, erectos o escandentes, a veces
provistos de espinas axilares, hojas alternas u opuestas y con frecuencia
desiguales las de cada par, simples o enteras con el margen ondulado,
inflorescencias terminales generalmente cimosas, generalmente
provistas de brácteas de 1 a 5 debajo de cada flor generalmente con
colores vistosos. (16)

Las características puntuales sobre cada órgano de la Familia

Nycataginaceae son:

Porte: árboles, arbustos trepadores o plantas herbáceas, anuales o

perennes.

Hojas: simples, enteras, alternas, opuestas, o verticiladas, sésiles o

pecioladas.

Flores: generalmente perfectas, rara vez imperfectas dioicas; dispuestas

en cimas, racimos o solitarias, actinomorfas; protegidas por brácteas

15
libres o soldadas, a menudo vistosas o remplazando aparentemente al
cáliz. Flores bisexuales, inflorescencia cimosa.

Perigonio: con 3-8 tépalos soldados; tubuloso, con el limbo ensanchado,

truncado, lobulado o dentado, frecuentemente coloreado, simulando una
corola.

Estambres: 1-∞, libres o monadelfos; filamentos filiformes, desiguales,

anteras bitecas, de dehiscencia longitudinal.

Gineceo: ovario súpero, unilocular, uniovulado, estilo filiforme, estigma

simple.

Fruto: indehiscente, aquenio o utrículo protegido por la base del cáliz.

Semilla: con tegumento hialino, de embrión recto o curvado, con

perisperma y endosperma

Fuente: http://www.biovirtual.unal.edu.co

La familia Nyctaginaceae se distingue por tener flores sostenidas por

brácteas libres o unidas formando o no involucro, perianto petaloide,
uniseriado, antocarpo y semillas con perispermo. Su clasificación está

16
basada principalmente en la variación del habito, arreglo de las hojas,
presencia o ausencia de brácteas, tipo de pubescencia, sexualidad,
connacion de los estambres, forma del estigma, morfología del polen,
del fruto y características del embrión. (17)

Biología floral y/o Fenología: una especie, Abronia, es polinizada durante

el día o en la noche, mientras que Boerhavia sp. se abre solamente
durante el día.

Diseminación: la dispersión de los frutos se realiza mediante animales,

por el viento o por el agua. Algunos llevan pelos glandulares para
adherirse a ropas, plumas, etc. Plantas que viven en la costa del mar
son dispersadas presumiblemente por aves marinas a causa de sus
glándulas pegajosas. En algunos géneros las diásporas se dispersan por
el viento. Las brácteas de Bougainvillea poseen dos funciones: atracción
de insectos y, cuando las frutas maduran, pierden totalmente su color y
se tornan secas y papiráceas, separándose unas de otras y funcionando
como alas para la dispersión por el viento (Bittrich y Kühn, en
Kubitzki,1997). (18)

4.1.1 Distribución geográfica de las especies de la familia

Nyctaginaceae

Los metabolitos generalmente reportados para la familia Nyctaginaceae

son flavonoides, compuestos fenólicos, terpenos saponinas, alcaloides.
Los flavonoides y compuestos fenólicos reportados para la familia tienen
una amplia gama de actividades como actividad antioxidante y
antimicrobiana.
Adicional a esto una amplia variedad de compuestos, incluyendo mono-
y sesquiterpenoides, compuestos aromáticos, compuestos alifáticos ,

17
lactonas, y compuestos que contienen nitrógeno se detectaron en las
fragancias florales y vegetativos de 20 especies Nyctaginaceae (Ver
ilustración 1) . (19)

Ilustración 1 Distribución geográfica de las especies de la familia Nyctaginaceae

4.1.2 Usos etnobotánicos de especies de la familia

Nyctaginaceae

Bougainvillea glabra es usada con frecuencia como ornamental, sus

brácteas en infusión junto con hojas de mango (Mangifera indica), son
usadas para aliviar la tos; Boerhavia erecta L es usada para
tratamientos espasmódicos y enfermedades nerviosas.

La infusión del follaje y las flores de Mirabilis jalapa se utiliza en México

contra convulsiones, epilepsia y debilidad cardíaca, además tiene
propiedades vulnerarias, la tintura de sus hojas y raíces, mezcladas con
las de "tabaco" (Nicotiana tabacum), se usa tópicamente para aliviar
dolores reumáticos, también el cocimiento de su raíz tiene propiedades
catárticas, sus raíces desecadas y pulverizadas poseen propiedades
purgantes; la infusión de las hojas de Pisonia aculeata, es usada en

18
Jamaica contra el reumatismo y enfermedades venérea. La corteza de la
raíz de la Pisonia zapallo Griseb. tiene propiedades emetocatárticas, las
hojas se utilizan en infusión como antiblenorrágico y en decocción, sea
en lociones o en inyección contra la leucorrea.

4.1.3 Estudios fitoquímicos de la familia Nyctaginaceae

Acerca de la especie Bougainvillea glabra Choisy, se ha reportado que

en las brácteas de este arbusto se han aislado los siguientes
compuestos: Alcaloides, Indol, protoalcaloides, diglucosilrutinosido de la
betanidina e isobetanidina; compuestos heterocíclicos de nitrógeno no
alcaolideos Ver Ilustración 2 (20).

Ilustración 2 Estudio fitoquímico especie Bougainvillea glabra Choisy

Los extractos etanólico, acetato de etilo, cloroformo y acuosos de las

flores de la especie Bougainvillea Spectabilis revelaron la presencia de
diversos metabolitos secundarios de importancia terapéutica (Ver Tabla
1): saponinas, flavonoides, terpenoides, glucósidos cardiotónicos y
alcaloides. Todos los extractos mostraron ausencia de esteroles,
antraquinonas, Cardenolidos y aceites volátiles. Al comparar los
extractos de hoja con los de flor se observa que hay menos cantidad de
metabólitos secundarios (Kumara Swamy)

19
 Tabla 1 Importancia terapéutica de la Bougainvillea Spectabilis

Los extractos en n-Hexano, acetato de etilo y metanol de las partes

aéreas de la especie Boerhavia diffusa Linn muestra la presencia de
metabolitos secundarios: Alcaloides, antraquinonas, flavonoides,
saponinas, esteroides, terpenoides, taninos, azucares reductores y
glucósidos cardiotónicos tal como lo muestra la tabla 2 (Apurba Sarker
Apu)

Tabla 2 Estudio de las partes aéreas en diferentes solventes Boerhavia diffusa Linn

El extracto de las flores de Mirabilis Jalapa presenta metabolitos

secundarios de acuerdo a la tabla 3: Alcaloides, Triterpenos, esteroides,
aceites esenciales, azucares reductores, saponinas, taninos y
flavonoides. (Merlys Massie)

20
 Tabla 3 Extracto de las flores de Mirabilis Jalapa

El extracto en diclorometano de las raíces de la especie Mirabilis Jalapa

caracterizado por GC/MS en un estudio realizado para la determinación
de propiedades antioxidantes, se identificó la presencia de compuestos
fenólicos como isosteviol y 4 – hidroxiquinolina, compuestos alcaloides
tales como Lukianol. Que confiere actividad antioxidante y citotoxica y
en el extracto metanolico la presencia de β-Sitosterol con propiedades
antimicrobianas y antioxidantes. (Mohamed Hajji)

4.1.4 Estudios de la actividad Biologica de especies de la

familia Nyctaginaceae

Estudios de actividad biológica de especies de la familia Nyctaginacea,

Los metabolitos identificados en la familia Nyctaginaceae presentan
actividades potenciales como antioxidantes, antibacterianos,
antimicrobianos , antidiabéticos.

En la tabla se resume laos metabolitos encontrados en algunas especies

de la familia Nyctaginaceae y los estudios de su actividad biológica :

21
ESPECIE METABOLITO ACTIVIDAD BIOLOGICA BIBLIOGRAFIA
Antidiabetica
Antiperistáltica (extracto
Bougainvillea
partes aéreas)
glabra Choisy
Antibacteriana (extracto
etanólico brácteas) plantas
Actividad antibacteriana y
anti fúngica.
Los extractos de flor,
inhibieron el crecimiento de
cepas bacterianas
Flobataninos, (Klebsiella pneumoniae,
Bougainvillea Kumara
Flavonoides Proteus vulgaris,
Spectabilis Swamy
Saponinas Pseudomonas aeruginosa,
Bacillus subtilis ) y fungicas
(Aspergillus
niger,Penicillium notatum ,
Rhizopus oryzae,
Trichoderma viride)
Actividad antibacteriana y
antigungica.
Los extractos de flor,
Boerhavia Flavonoides
inhibieron el crecimiento de
diffusa Antraquinonas
cepas bacterianas (S
aureus, S dysenteriae ) y
fungicas (C albicans)
Antioxidante
Mirabilis Jalapa β- sitosterol Antibacteriales
Antifungicas

22
4.2 Aspectos generales del género Bougainvillea
Bougainvillea, es un miembro de la familia Nyctaginaceae , comprende
18 especies de árboles espinosos , arbustos y lianas. Las buganvillas son
algunos de los arbustos más floríferas del trópico

El género Bougainvillea conocido con los nombres comunes de:

Buganvilla (España), buganvilia (México, Perú, Chile y Guatemala),

papelillo (zona norte del Perú), Napoleón (Honduras), veranera
(Ecuador, Colombia, Nicaragua, El Salvador, Costa Rica y Panamá),
Trinitaria (Colombia, Cuba Panamá, Puerto Rico, República Dominicana y
Venezuela), Santa Rita (Argentina, Bolivia, Paraguay y Uruguay).

Es un género de plantas originarias de los Bosques tropicales húmedos

de América del Sur

4.2.1. Descripción morfológica

Son hierbas, arbustos o arboles; con tallos leñosos. Las hojas son
alternas, pecioladas, ovaladas a elípticas –lanceoladas de 4 a 10 cm,
simples y enteras; hay una gran variabilidad en la forma, tamaño, e
indumentos en las hojas, aun en la misma especie. Las espinas están
presentes en las axilas de muchas hojas, y estas sirven para que la
planta trepe sobre otras plantas. Las flores son blanco-cremosas nacen
comúnmente en grupos de tres y son pequeñas e inconspicuas, Una flor,
considerada terminal, se abre antes que las otras dos. La flor es tubular,
pero con una contracción en el medio del tubo y un poco angosta bajo
este punto. Cinco crestas corren a lo largo del tubo y terminan en los
rayos de la estrella de cinco puntas formado por el limbo expandido de
la flor. El tubo y el limbo forman el cáliz, por lo que no es una corola
verdadera. Dentro del tubo se encuentran ocho estambres de diferente
largo. Estos nacen en la base del nectario localizado bajo el ovario. El

23
ovario contiene solo un ovulo, por lo que solo se produce una semilla
por flor. Ver Ilustración 3.

Cada flor está sostenida por una bráctea (hoja modificada) muy
llamativa de colores diversos: morado, rojo, rosado, anaranjado, blanco,
etc. Las muchas variaciones en color son el resultado de inter-
hibridaciones. (Magaña, J)

Ilustración 3 Morfología de la flor

a. Inflorescencia
b. Flor
c. Órganos de la flor y bráctea.

4.2.2 Distribución geográfica del género Bougainvillea

Nativa de Brasil, crece cultivada en países tropicales y subtropicales se
en Colombia se cultiva en huertos familiares y macetas como plantas
ornamentales

24
 4.2.3 Usos etnobotánicas del género Bougainvillea

La infusión oral de las hojas tiernas y brácteas floridas se indica contra

diarreas y dolor de estómago, asma, bronquitis, catarro, dolor de pecho,
fiebre, gripe, pulmonía, ronquera y tos ferina. La decocción de raíces se
usa contra la fiebre y como purgante. Las hojas frescas se emplean para
limpia las heridas.

4.2.4 Estudios fitoquímicos del género Bougainvillea

Los metabolitos secundarios reportados para el género de Bougainvillea

son: Alcaloides, flavonoides, compuestos fenólicos, taninos y saponinas

En un extracto acuoso de las hojas de la especie Bougainvillea glabra se

reportó la presencia de metabolitos tales como: alcaloides, flavonoides,
saponinas y glucósidos cardiotónicos. Además la presencia del
compuesto D-Pinitol al se le atribuyen las propiedades anti-diabéticas,
pues tiene el mismo efecto que la insulina; este compuesto también fue
extraído de los tallos de la especie Bougainvillea spectabillis. (Grace I.
Adebayo)

D-Pinitol

Un estudio Fitoquímico del extracto etanólico del tallo de la especie

Bougainvillea spectabillis. Reporta los metabolitos secundarios:
Flavonoides, Fito esteroles, alcaloides, saponinas, triterpenos, taninos,
antraquinonas, furanos, fenoles.

25
Extracto etanólico de las hojas de la especie Bougainvillea Variegate
reporta la presencia de metabolitos secundarios: flavonoides, Fito
esteroles, alcaloides, saponinas, antraquinonas, furanoides y fenoles. No
reporto la presencia de triterpenos y taninos. (Sardar Atiq Fawad)
En el extrato etanolico de las brácteas de la especie Bougainvillea Glabra
se encontró que contenía betalainas que son los pigmentos que dan la
coloración a las brácteas, y se caracterizan por tener propiedades
antioxidantes. (Shiv Narayan Amit Kumar)

Betanidinas

4.2.5 Estudios de actividad biológica del género

Bougainvillea

Las especies Bougainvillea Spectabilis y Bougainvillea Variegate,

muestran resultados positivos al realizar pruebas antimicrobianas para
todas la gran positiva mostradas en la tabla XX excepto para la bacteria
Enterococcus faecalis, donde las dos especies muestran que no hay zona
de inhibición (Sardar Atiq Fawad)

26
 Tabla 4 Estudios de actividad biológica : especies Bougainvillea Spectabilis y Bougainvillea
Variegate,

El extracto etanólico de la especie Bougainvillea xbuttiana reporta que

tiene actividades anti-inflamatorias y anticonceptivos significativos, por
inhibición de la nocicepción inducida al causar un edema en un ratón.
Las proporciones de citoquinas pro-/anti-inflamatorias en los sueros de
los ratones inyectados con el extracto etanólico, se pueden manifestar
en un estado anti-inflamatorio. (Álvarez Perez gil)

Citoquinas

Un estudio del extracto etanólico de las raíces de la especie

Bougainvillea Spectabilis, demuestra la actividad antiviral; a partir de
Bioensayos se comprobó que actúa contra el virus que ocasiona el
marchitamiento del tomate, se aisló la proteína antiviral (BAP I).

27
4.3 Aspectos generales de la especie Bougainvillea Glabra

4.3.1 Clasificación taxonómica y descripción morfológica

Bougainvillea Glabra Choisy, pertenece a la familia de las Nyctaginaceas

(8 y 9) la cual consiste en aproximadamente 30 géneros, encontrados
principalmente en las regiones tropicales. En algunas regiones se le
llama "Flor de Santa Rita" “Flor de papel”, “Veranera” o ”Buganvila"; se
le impuso en honor de la región de Francia: Bougainville y por su
descubridor (3) Se clasifica botánicamente de la siguiente manera (Ver
Tabla 5):

Tabla 5 Clasificación y descripción botánica de Bougainvillea Glabra

Reino Vegetal
División Antophytea
Clase Dicotyledoneae
Subclase Caryophyllidae
Orden Caryopyllales
Familia Nyctaginaceae
Género Bougainvillea
Especie Bougainvillea Glabra

Es una planta arbustiva siempre verde de hasta 8 metros de alto, con

un tronco leñoso, de corteza lisa, sin pelos, con espinas, a menudo
crece sobre las edificaciones, por ser trepadora; hojas simples, alternas,
lisas, oblongolanceoladas, de 2 a 8 cm de largo que terminan en punta o
en forma de cuna en la base por 3 cm de ancho, más ancho en su parte
media. Tres flores tubulares en grupo, de color morado con corola
blanca, dispersas en ramos con brácteas elípticas o elíptico-lanceoladas

28
de 3 cm o más de largo de color purpura o morado (Ver Ilustración 4).
Existen algunas variedades que se diferencian por el color y el tamaño
de las brácteas (9,11 y 12) La flor de buganvilla es una flor verdadera,
perfecta, que está rodeado por brácteas vibrantes de colores vistosos,
adaptadas para atraer a los polinizadores y flores sin perfume que reside
en la superficie superior (1)

Flores

Brácteas

Hojas

Ilustración 4 Morfología de Bougainvillea Glabra.

Tomado de: http://delta-intkey.com/angio/images/nycta626.gif

29
4.3.2 Distribución geográfica de la especie Bougainvillea
Glabra
La Bougainvillea es una planta común ornamental crece en casi todo el
mundo (Sur América, Norte América, Europa noroccidental, África del
Norte, el medio oriente y algunas partes de la India) en los jardines
tropicales y subtropicales. Es originaria de Latino América. El género
Nyctaginaceae es nativa de Brasil. Crece como un arbusto, pero
también es una planta trepadora. (1, 5, 6 y 7). Existen reportadas más
de diez especies, de las cuales tres especies B. Spectabilis, B. glabra y
B. peruiana son importantes para la horticultura y las dos primeras son
las más estudiadas. (1 y 7)

4.3.3 Usos etnobotánicos de la especie Bougainvillea Glabra

Bougainvillea Glabra se han utilizado en el tradicional práctica en
variedad de trastornos como antiinflamatorio, analgésico, anti cáncer,
anti diabetes, antibacterial, anti fúngico (8) diarrea, reduce la acidez,
tos y dolor de garganta decocción de flores secas para la leucorrea y
hepatitis. La parte principal utilizado son las hojas y las
inflorescencias(1, 4)

La Bugambilia tiene otros usos entre los más destacados la utilización

como planta ornamental (7) y usos medicinales ya que se le atribuyen
propiedades para curar la tos, asma, bronquitis, gripa y tosferina (2 y 4)

Se utiliza la infusión de las flores de buganvilia sola en combinación con

otras plantas como naranja, canela y tomillo. Se venden de manera
comercial en jarabes preparados. Se recomienda también para tratar la
alferecía de los niños, el dolor de estómago, el mal de orín y el acné. (2)

30
Información de algunos practicantes de la medicina tradicional muestran
que algunos escarabajos que son alimentados de cualquier especie de
Bougainvillea son secados y vueltos polvo para adicionarlos en los
principales ingredientes de combinaciones herbales usados en
tratamientos de diabetes mellitus(6)

4.3.4 Estudios Fitoquímicos de la especie Bougainvillea

Glabra

Según Sahu, N. y Saxena, J. (2012) llevaron a cabo un estudio

fitoquímico sobre el extracto de las flores y brácteas de la Bougainvillea
Glabra y lo compararon frente a otra especie del mismo género. El
extracto de las plantas estuvieron sujetos a diferentes ensayos químicos
para investigar el perfil químico del extracto de B. glabra. Análisis
mostraron la presencia de alcaloides, flavonoides, compuestos fenólicos
y taninos. Otro estudio demuestra la actividad antioxidante, anti
proliferativa y antiinflamatorio potencial de B. Glabra. Los extractos de
Bougainvillea sp presenta una reducción de poder soportado por el
contenido de fenoles. Este hallazgo podría parcialmente justificar el uso
tradicional de estas plantas particularmente como antiinflamatorio, (8)

4.3.5 Estudios de Actividad biológica de la especie

Bougainvillea Glabra

Extractos preparados de partes aéreas de Bougainvillea glabra, son

comercializados como ingredientes de algunos jarabes, dulces y otros
remedios destinados para aliviar los síntomas de infecciones del tracto
respiratorio como tos y escozor en la garganta. Este conocimiento
etnobotánico fue comprobado por medio de un estudio de la B. glabra
ya que mostro que es: activa y selectiva en contra de bacterias Gram

31
positivas y Gram negativas. Este efecto antimicrobiano puede estar
asociado a la presencia de pigmentos de betalaina, así como
compuestos esteroidales con actividad antiinflamatoria (4 y 8). La
estructura del esquema de la Betacianin (rojo-purpura): (a) betanina;
(b) betanidina; (c) indicaxanthin (amarillo-naranja); y (d) ácido
betalamico, son mostrados en la Ilustración 5. Como se ve en la figura,
las estructuras contienen grupos carboxílicos, esta Betanina es
fácilmente obtenida de las brácteas de la Bougainvillea.

Ilustración 5 Estructura del esquema de la Betacianin (a) Betanina R= β-D-glucosa; (b)

Betanidina R = H; (c) Indicaxanthin; (d) Acido Betalamico.

Otro estudio evidencia los efectos antidiabéticos and antilipidémicos de

Bougainvillea glabra, los resultados mostraron que el extracto reduce
significativamente (p< 0.05) la hiperglicemia el extracto también reduce
el colesterol total (TC), los trigliceridos (TG) y la baja densidad de
lipoproteína del colesterol (LDLColesterol), mientras que incrementa la
alta densidad lipoproteína del colesterol (HDL-C). Por lo tanto tiene un
efecto benéfico en el perfil lipidico de la sangre, por lo que se justifica el
uso de la medicina tradicional en el tratamiento de la diabetes mellitus.
(6) La planta B. Glabra también se ha utilizado para preparar colorantes
naturales y comprobado acción como biopesticida (10)

32
 5. METODOLOGÍA

5.1 PROCEDIMIENTOS GENERALES

5.1.1 Técnicas cromatográficas

Para dar inicio a la cromatografía en columna se realizó primero un

estudio cromatográfico en capa delgada, (CCD) utilizando como:

Fase Estacionaria: Silica gel

Fases Móviles: El estudio cromatográfico se llevó a cabo seleccionando
aquellas fases móviles más convenientes para la separación de los
principales componentes químicos presentes en el extracto etanólico, en
la tabla 6 se muestran las fases móviles utilizadas para el estudio.
Revelador: Yodo y fluorescencia UV

Tabla 6 Fases Móviles usadas en el ensayo preliminar

33
El fraccionamiento se realizó por la técnica de cromatografía en columna
tipo Flash (CF), se realizó en una columna de vidrio con diámetro de, la
columna se empaco con la fase estacionaria gel de sílice 63-200μm de
Merck. La columna fue eluida con las fases móviles previamente
seleccionadas; el monitoreo de las fracciones obtenidas se realizó por
Cromatografía en capa delgada (CCD), empleando cromatoplacas Merck,
utilizando como reveladores vapores de yodo, luz UV (254 y 365 nm).
Las fracciones que mostraron similitud en el seguimiento con
cromatoplacas, se unieron. Para su posterior estudio en placa. Los
solventes empleados para las separaciones cromatográficas fueron de
grado técnico (destilados antes de su uso) y/o grado analítico.

Para realizar los ensayos fitoquímicos preliminares en placa, el extracto

etanólico de brácteas- flores y hojas de B Glabra se sometieron a
separación por CCD, empleando como fase estacionaria silica gel y fases
móviles de acuerdo a la polaridad de los metabólitos, Hexano: acetona
7:3 para separar los metabólitos menos polares y Cloroformo: metanol
8:2 para separar los más polares. Las placas se secaron y se observaron
a la luz UV y posteriormente se sometieron a los diferentes reveladores
cromogenicos.

5.2 ESTUDIO FITOQUÍMICO

5.2.1 Material vegetal

Fue colectada los órganos (Flores, Brácteas y Hojas) de la planta
Bougainvillea Glabra Choisy en el municipio de Zipaquirá Colombia, las
hojas fueron removidas de su tronco y las flores se dejaron junto con las
brácteas. Fueron pesadas y llevadas a secar en la sombra a temperatura
ambiente, se terminaron de secar a 35°C, posteriormente se trituraron
hasta volver polvo (Hojas) y triturado (Flores y Brácteas), se pesaron.

34
5.2.2 Extracción y fraccionamiento
Luego de secar se almacenaron en recipientes de vidrio con etanol al
96% para el proceso de maceración en frio, durante 7 días para su
extracción. Después de esto se retiró el solvente por filtración, el
extracto etanólico obtenido fue concentrado a presión reducida en rota
vapor obteniéndose:

Extracto etanólico de Flores y Brácteas = 104.64 g

Extracto etanólico de Hojas = 56.18 g

Una vez se obtuvo cada extracto se realizó el fraccionamiento solamente

de las hojas (56.18 g) se hizo una CF, en la Imagen 1 se observa la
columna de vidrio empacada con gel de sílice 63-200μm de Merck, luego
se agrega la muestra del extracto secada en una pequeña cantidad de
absorbente, se introduce el disolvente, un sistema de elución de n-
Hexano-Acetona (7:3); posteriormente se hizo un gradiente con
Cloroformo-Metanol (8:2) obteniéndose un total de 35 fracciones.

Imagen 1 Cromatografía Flash al vacío

35
Se realiza un análisis de las fracciones por CCD, se reunieron las
fracciones de acuerdo a sus perfiles cromatográficos. En total quedaron
5 fracciones. (Ver Imagen 2)

1 2 3 4 5 B H

Imagen 2 Fracciones por CCD. (1 a 5) Fraccionamiento del extracto de Hojas de B. Glabra. (B)
extracto de Flores y Brácteas (H) extracto de Hojas

5.2.3 Análisis Fitoquímico preliminar

Para el análisis fitoquímico preliminar se realizo de acuerdo al protocolo
construido teniendo en cuenta las metodologías propuestas en
diferentes libros de análisis fitoquímico preliminar, diferentes ensayos
químicos fueron desarrollados para investigar la composición del
extracto B. Glabra Choisy. La primera parte se resume en la Ilustración
6, consiste en reacciones cualitativas llevadas a cabo en tubos de
ensayos. La segunda parte se realizaron fraccionamientos con solventes
con el fin de separar los metabolitos de acuerdo a sus características de
polaridad. Luego estos extractos obtenidos por el fraccionamiento con

36
solventes se sometieron a separaciones por CCD, empleando como fase
estacionaria silica gel y fases móviles de acuerdo a la polaridad de cada
metabolito. Las placas se secaron y observaron en la luz UV y
posteriormente se sometieron a diferentes reveladores cromogenicos.
De igual forma dando continuación a la parte experimental del análisis
fitoquímico preliminar en el Anexo 1, se observa el procedimiento
experimental llevado a cabo más detallado para las pruebas en tubo de
ensayo, en el Anexo 2 el procedimiento experimental llevado a cabo de
forma detallada para las pruebas de coloración en cromatografía en
capa delgada CCD y en el Anexo 3 está la preparación de cada uno de
los reactivos usados.

Fuente: Tomado de clases del seminario

Ilustración 6 Esquema general del análisis fitoquímico preliminar en tubo de ensayo

37
5.3 ENSAYOS DE ACTIVIDAD BIOLÓGICA

5.3.1 Determinación de la actividad antioxidante

- Actividad antioxidante por bioautografía con β-caroteno

(método cualitativo)
El ensayo se realizó siguiendo la metodología descrita, en una placa de
cromatografía se procedió a sembrar las cinco fracciones obtenidas y
reunidas de la cromatografía en columna (CF), y los extractos etanolicos
de Brácteas - flores B y hojas H de B. Glabra; Imagen 3, se realiza la
elución de dos placas con fases móviles: Hexano: Acetona (7:3) y
Cloroformo: Metanol (8:2) respectivamente; las placas de dejaron secar
para garantizar la evaporación del solvente. Luego las placas se rociaron
con una disolución de β-caroteno al 0,05% en cloroformo. La placa se
expuso a la luz UV (254 nm) durante dos horas hasta que el fondo se
decoloró. La presencia de sustancias antioxidantes se determina por la
aparición de manchas de color amarillo pálido en el fondo blanco de la
placa.

- Actividad captadora de radicales libres con DPPH

La capacidad captadora de radicales libres (RSC) fue determinada
mediante la metodología descrita a continuación:

En una placa de cromatografía se procedió a sembrar las cinco

fracciones obtenidas y reunidas de la cromatografía en columna (CF) y
los extractos etanólico de brácteas - flores B y hojas H de B. Glabra; se
realiza la elución de dos placas con fases móviles: Hexano: Acetona
(7:3) y Cloroformo: Metanol (8:2) respectivamente; las placas de
dejaron secar para garantizar la evaporación del solvente. Luego las
placas se rociaron con una disolución de radical 2,2 difenil
1priclirhidracilo (DPPH) al 0.2% en metanol. La placa se examina a la

38
luz del día, después de 30 minutos. Los compuestos activos (captadores
de radicales libres) aparecen como manchas amarillo – blancuzcas
contra un fondo purpura.

5.3.2 Prueba de inhibición de Acetilcolinesterasa

Se realizó un ensayo bioautobiográfico con CCD para seleccionar si este
extracto mostraban inhibición de la actividad de la acetilcolisterasa, el
cual consistió en hacer una reacción de descomposición de la
acetilcolisterasa sobre el 1-naftil acetato para formar 1-naftol que a su
vez reacciona con la sal de azul permanente B para producir un tinte de
diazonio coloreado de purpura, excepto en regiones que contienen
inhibidores de la acetilcolinesterasa, que aparecen como manchas
blancas.

39
 6. RESULTADOS Y ANÁLISIS DE RESULTADOS

6.1 Análisis fitoquímico preliminar

6.1.1 Ensayos en tubo

Los resultados de los ensayos fitoquímicos preliminares en tubos de
ensayo muestran la presencia de diferentes compuestos incluyendo
Carotenoides, esteroides, taninos, saponinas y cardiotónicos; mediante
ensayos sencillos, prácticos y rápidos, se pudo hacer un acercamiento
para conocer los principales metabolitos secundarios en órganos aéreos
de la planta Bougainvillea Glabra y se encuentran en la siguiente Tabla
7.

Tabla 7 Resultados del análisis fitoquímico preliminar en tubo para los extractos de frutos y parte
aérea.

METABOLITO PRUEBA QUÍMICA RESULTADOS RESULTADOS

SECUNDARIO FLORES Y HOJAS
BRACTEAS

- +
CAROTENOIDES Salkowiski

+ +

ESTEROIDES Liebermann-
Burchard

- -
ESTEROIDES

Vainillina-Ácido
orto-fosfórico

40
 - -

Shinoda

Rosenhein - -

FLAVONOIDES

- -

Leucoantocianidin
as

Cloruro férrico + +

TANINOS

- +

Gelatina-sal

+ -

SAPONINAS Espuma

41
 Rosenthaler - -

- -

Baljet

+ +

CARDIOTONICOS

Molish

- -

LACTONAS Hidroxamato
SESQUITERPENICAS férrico

- -

Hidroxamato
ferrico

42
 Erlich - -

CUMARINAS

Fluorescencia - -

Dragendor - -

Valser - -

ALCALOIDES

43
 ALCALOIDES Wagner - -

Mayer - -

(Signo+ indica presencia) y (signo – indica ausencia)

Según el estudio fitoquímico preliminar de Sahu (2012) sobre la

Bougainvillea Glabra refería que había encontrado taninos, saponinas,
flavonoidos y alcaloides, aun sin embargo no pudimos comprobar este
resultado, de igual forma se pudo identificar otros tipos de metabolitos
secundarios como Carotenoides, esteroides y cardiotónicos los cuales no
habían sido reportados en dicho estudio.

6.1.2 Ensayos en placa

Los resultados de los ensayos fitoquímicos preliminares en capa
delgada, de las flores y Hojas de B. Glabra se muestran en la tabla 8 y
validan alguna información obtenida en los ensayos de tubo,
confirmando la presencia de esteroides, taninos, saponinas y
cardiotónicos; y revelando las presencia adicional de Cumarinas ,

44
compuestos nitrogenados y secoiridoides. Al comparar los resultados
obtenidos entre flores y hojas se pudo evidenciar que las hojas tienen
un mayor contenido de metabólitos secundarios, aun así las flores y las
Brácteas de la especie B Glabra, tiene un alto contenido de compuestos
fenólicos, esto se pudo evidenciar en la prueba de Vapores de Amoniaco
y aspersión de FeCl3.

La prueba de detección polivante de Goding, permitio evidenciar la

presencia de Terpenoides (manchas azules y violetas) y secoiridoides
(manchas marron) en las flores y hojas de la B Glabra,

De acuerdo a Acerca de la especie Bougainvillea glabra Choisy. Se ha

reportado que en las brácteas de este arbusto se han aislado los
siguientes compuestos: Alcaloides, Indol, protoalcaloides,
diglucosilrutinosido de la betanidina e isobetanidina; compuestos
heterocíclicos de nitrógeno no alcaloideos.

De acuerdo a esta investigación se puedo comprobar la presencia de

alcaloides o compuestos nitrogenados, flavonoides y compuestos
fenólicos y se contribuyó a la investigación de la planta demostrando
que de acuerdo al estudio fitoquímico preliminar la B Glabra tiene
secoiridoides, y cumarinas.

45
Tabla 8 Resultados del análisis fitoquímico preliminar en placa para los extractos de frutos y
parte aérea.

METABOLITO PRUEBA RESULTADO OBSERVACIONES

SECUNDARIO QUIMICA
ESTEROIDES Lieberman- Se observa la aparición de
Burchard Positivo manchas azules a violetas

Vainillina- Se observa la aparición de

Acido Positivo manchas coloreadas, con
sulfúrico mayor intensidad en el
extracto de hojas de
características menos
polares.

ZnCl2 Se observa fluorescencia

Positivo en el UV de onda larga, de
manera más intensa en los
compuestos separados con
Cloroformo: Metanol 8:2 (
mas polares ) tanto en
Brácteas-flor y hojas

46
FLAVONOIDES Vapores de Se observa fluorescencia
NH3 Positivo azul y amarilla, en los
metabolitos separados con
cloroformo: metanol (mas
polares) tanto en Brácteas-
flor como en hojas

AlCl3 Positivo Se observa fluorescencia

intensa de color amarillo
en las separaciones tanto
de hojas como de
Brácteas-flor.

FeCl3 Se observa la aparición de

Positivo manchas azulosas, en las
separaciones de hojas y
Brácteas-flor, confirma la
presencia de grupos
fenólicos.

QUINONAS Borntrager Se observa fluorescencia

Positivo de color amarillo
(antronas) y azul
(cumarinas) en las dos
placas tanto para Brácteas-
flor como para hojas,
evidenciando así que en
las Brácteas-flor y hojas
hay antronas y cumarinas.

47
 FENOLES FeCl3 Se observa la aparición de
Positivo manchas azulosas, en las
separaciones de hojas y
Brácteas-flor,
confirmando así la
presencia de grupos
fenólicos.

SAPONINAS ZnCl2 Se observa fluorescencia

Positivo en el UV de onda larga, de
manera más intensa en los
compuestos separados con
Cloroformo: Metanol 8:2 (
mas polares ) tanto en
Brácteas-flor y hojas (placa
derecha)

CARDIOTONICOS Kedde No se observa aparición de

Negativo manchas violetas ni
coloreadas.

Vainillina- Se observa la aparición de

Acido Positivo manchas coloreadas, con
sulfúrico mayor intensidad en el
extracto de hojas de
características menos
polares (placa izquierda)

48
 ALCALOIDES Dragendorf Se observa que hay
Positivo coloraciones naranja de
poca intensidad, pero se
ve acentuado en el punto
de siembra de la placa
corrida con Hexano:
Acetona, esto indicaría que
en los compuestos polares
no se separaron hay
metabolitos como
alcaloides, o compuestos
de nitrógeno como
aminas.
DETECCION Gonding Se observan manchas de
POLIVALENTE Positivo color azul y violeta, en la
separación de compuestos
de baja polaridad de
Brácteas-flor y hojas (Placa
derecha) evidenciando así
la presencia de
terpenoides, y manchas de
color marron en los
compuestos de mayor
polaridad (placa izquierda)
evidenciando la presencia
de secoiridoides.

6.2 Ensayos de actividad biológica

6.2.1 Determinación de la actividad antioxidante

6.2.1.1 Actividad antioxidante por bioautografia con β-caroteno (método

cualitativo)
El ensayo de actividad antioxidante por bio-autografía con β-caroteno es
un método cualitativo que permite evaluar de manera rápida y sencilla
los compuestos antioxidantes de una muestra. El β-caroteno es conocido
por ser un potente captador de los radicales libres de oxígeno, Cuando
la placa con β-caroteno es expuesta a la luz UV (254 nm), los radicales

49
libres del oxígeno formados son estabilizados por el β-caroteno
produciendo la descomposición de éste, que se observa por un el cambio
en la coloración, pasando de naranja a incoloro. Los compuestos
antioxidantes retardan el proceso de oxidación del β-caroteno, lo cual se
observa en la placa como manchas amarillo pálido contra un fondo
blanco. De acuerdo a lo anterior los extractos etanólicos de flores y
Hojas de B. Glabra, logran retardar el proceso de oxidación del β-
caroteno, esto se demuestra por la presencia de manchas amarillo
pálido, que es donde el B – Caroteno no se descompuso Imagen 3

1 2 3 4 5 B H 1 2 3 4 5 B H

Imagen 3 Actividad antioxidante por bioautografia con β-caroteno de los extractos de

Bougainvillea Glabra

6.2.1.2 Actividad captadora de radicales libres con DPPH

El ensayo de Actividad captadora de radicales libres con DPPH es un
método cualitativo que permite evaluar de manera rápida y sencilla los
compuestos captadores de radicales libres , Cuando la placa con el
radical estable DPPH se examina después de dejar al aire libre por 30
min la placa, los compuestos activos aparecen como marchas amarillo-
blancas. De acuerdo a lo anterior los extractos etanólicos de flores y
Hojas de B. Glabra, tienen compuestos que son captadores de radicales
libres. Y de una coloración violeta inicial, pasa a una incorporación
descrita por la siguiente reacción (ver Imagen 4):

50
 1 2 3 4 5 B H 1 2 3 4 5 B H

Imagen 4 Actividad captadora de radicales libres con DPPH de los extractos de Bougainvillea
Glabra

El poder antioxidante y protector de radicales libres se le atribuye a los

compuestos fenólicos que hacen parte de los metabólitos secundarios de
esta especie

6.2.2 Prueba de inhibición de Acetilcolinesterasa

Según el ensayo bio-autografíco por CCD para seleccionar si los
extractos de las Flores-Brácteas y Hojas de la planta Bougainvillea
Glabra, por medio de la inhibición de la actividad de la colinesterasa,
con el fin de investigar nuevos fármacos, esperábamos la visualización
de una coloración en forma de manchas blancas en donde se
presentaran los compuestos inhibidores de la acetilcolinesterasa, sin
embargo habíamos obtenido un falso positivo, que finalmente se
confirmó como prueba negativa para ambos extractos, tanto en el

51
sistema Cloroformo-Metanol (8:2) y Hexano-Acetona (7:3). (Ver
Imagen 5)

Imagen 5 Prueba inhibición de Acetilcolinesterasa. (1 a 5) Fraccionamiento del extracto de Hojas

de B. Glabra. (B) extracto de Flores y Brácteas (H) extracto de Hojas

1 2 3 4 5 B H 1 2 3 4 5 B H

52
 7. CONCLUSIONES

 Aportamos en la ampliación de información sobre el estudio

fitoquímico preliminar de los metabolitos secundarios presentes en
la especie Bougainvillea Glabra Choisy.
 En el estudio fitoquímico preliminar de identificación de
metabolitos secundarios por medio de reacciones en tubo de
ensayo en la planta Bougainvillea Glabra se evidencio
carotenoides, esteroides, taninos, saponinas y cardiotónicos, los
cuales no habían sido reportados en la bibliografía.
 Se observó que tanto el extracto de Flores- Brácteas y Hojas no
presentan inhibición de la enzima Acetilcolinesterasa por lo que
no tiene actividad potencial como fármaco contra el Alzheimer.
 El estudio fitoquímico preliminar en placa, confirma la presencia
de metabolitos observados en el ensayo de tubos y también de:
alcaloides o compuestos nitrogenados, flavonoides y compuestos
fenólicos

 De acuerdo al estudio fitoquímico preliminar (Prueba de

Borntrager) la B Glabra tiene secoiridoides, y cumarinas. No
reportadas bibliográficamente.

 Las Hojas y las brácteas de la B. Glabra presentan actividad

antioxidante, los extractos etanólicos de flores y Hojas de B.
Glabra, logran retardar el proceso de oxidación del β-caroteno, y

 Las Hojas y las brácteas de la B. Glabra presentan compuestos

captadores de radicales libres al dar positivo ante la prueba
cualitativa con DPPH.

53
 8. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS

(1) Sahu, N. AND Saxena, J. A comparative phytochemical analysis of

Bougainvillea Glabra Choisy and California Gold. Int J Pharm Bio Sci
2012 July; 3: 247–250.

(2) Magaña, J. Etiología de la Cenicilla en Bugambilia (Bougainvillea

Comm ex Juss.) Tesis UMSNH Mexico

(3) Alvarez H. A; Diccionario de Herbolaria 1993 Ed. Posada In:

Martinez, A. Aislamiento y caracterización de metabolitos secundarios
de Bougainvillea Glabra, (Nyctaginaceae); Leucophyllum
Frutescens, (Rerl) I.M Johnst, (Scrophulariaceae) y Eriobotry a japónica,
linsl (Rosaceae) Tesis UANL Monterey 1997.

(4) Enciso, O. Et al. Antibacterial Activity of Bougainvillea Glabra,

Eucalyptus globulus, Gnaphalium attenuatum, and Propolis Collected in
Mexico. Pharmacology & Pharmacy, 2012, 3, 433-438.

(5) Bailey, L. H; et al. Manual of cultivated plants. Mc Millan Publishhers

1984. In: Martinez, A. Aislamiento y caracterización de metabolitos
secundarios de Bougainvillea Glabra, (Nyctaginaceae); Leucophyllum
Frutescens, (Rerl) I.M Johnst, (Scrophulariaceae) y Eriobotry a japónica,
linsl (Rosaceae) Tesis UANL Monterey 1997.

(6) Adebayo, G. et al. Anti-diabetic Properties of the Aqueous Leaf

Extract of Bougainvillea glabra (Glory of the Garden) on Alloxan-Induced
Diabetic Rats. Rec. Nat. Prod. 3:4 (2009) 187-192.

(7) Chew, S. Anatomical features of Bougainvillea (Nyctaginaceae).

Studies by Undergraduate Reseachers at Guelph. Vol. 4. No. 1 (2010)
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54
(8) Compaore, M. et al. Polyphenolic Contents of Bougainvillea
spectabilis Wild and Bougainvillea Glabra Choisy (Nyctaginaceae) with
Potential Antioxidant and Antiproliferative Activities. Asian Journal of
Asian J Pharm Biol Res Vol-3 (2013) 24-28.

(9) Gallardo, J. Plantas medicinales del municipio de santa Maria

Tlahuitoltepec, Mixe, Oaxaca. Tesis UNSIJ Oaxaca (2013)

(10) Kalirajan, A. et al. Utilization of Bougainvillea Glabra for prepared

natural colouring agent and biopesticides. International Journal of
Current Research Vol. 4, 09;(2012), 0-11.

(11) Barkley F. A. Outline Classification of organism Office Services

Northeastern Univerity 1973. In: Martinez, A. Aislamiento y
caracterización de metabolitos secundarios de Bougainvillea
Glabra, (Nyctaginaceae); Leucophyllum Frutescens, (Rerl) I.M Johnst,
(Scrophulariaceae) y Eriobotry a japónica, linsl (Rosaceae) Tesis UANL
Monterey 1997.

(12) Porter C. L; Taxonomy of Flowering plants. W. H. Freeman and Co.

1959. In: Martinez, A. Aislamiento y caracterización de metabolitos
secundarios de Bougainvillea Glabra, (Nyctaginaceae); Leucophyllum
Frutescens, (Rerl) I.M Johnst, (Scrophulariaceae) y Eriobotry a japónica,
linsl (Rosaceae) Tesis UANL Monterey 1997.

(13) Boris, P. Manual de Floricultura. 1995. 2 – 3. En, Espinoza, A. y

Espinoza, J. Evaluar el crecimiento de estacas de veranera (Bouganvillea
Glabra Choisy) bajo el efecto de biofertilizante liquido a base de estiércol
vacuno. Tesis UNA, Managua. 2008.

(14) Liotier, Sébastien. La Floricultura en Nicaragua. 2006. En,

Espinoza, A. y Espinoza, J. Evaluar el crecimiento de estacas de

55
veranera (Bouganvillea Glabra Choisy) bajo el efecto de biofertilizante
liquido a base de estiércol vacuno. Tesis UNA, Managua. 2008.

56
57
 6. ANEXOS
Anexo 1 Metodología de las pruebas de reacciones en tubos de ensayo

METABOLITO PRUEBA CONTROL PROCEDIMIENTO

SECUNDARIO QUÍMICA POSITIVO
Salkowiski Β-caroteno A 1 mL de ácido sulfúrico al 85% añadir lentamente por
CAROTENOIDES las paredes de un tubo 1mL de extracto etéreo. Observar
la coloración azul en la interface.
Liebermann- Lupeol Agregar 4 gotas del reactivo de Liebermann-Burchard al
Burchard extracto etéreo. Observar los cambios de coloración.
ESTEROIDES Vainillina- Lupeol A 0,5 mL del extracto etéreo adicionar 4 gotas del
Ácido orto- reactivo VAO por las paredes del tubo. Observar la
fosfórico coloración azul-violeta en la interface.
Shinoda Quercitina A 0,5 mL de extracto etanólico agregar un trozo de
magnesio metálico y 5 gotas de HCl al 10%. Observar la
FLAVONOIDES aparición de una coloración rojiza.
Leucoantocian Quercitina Agregar 1 mL de HCl al 10% al extracto etanólico y
idinas calentar durante 10 minutos. Observar la coloración roja.
Cloruro férrico Ácido Agregar 2 gotas de solución de cloruro férrico en etanol al

58
 tánico 1% a 0,5 mL de extracto y observar la coloración azul o
TANINOS verde.
Gelatina-sal Ácido A 1 mL de extracto etanólico agregar 1 mL de reactivo de
tánico gelatina-sal y observar el precipitado.
Espuma Quinua Tomar 1 mL de extracto etanólico y agregarle 5 mL de
SAPONINAS agua. Agitar vigorosamente durante 5 minutos. Observar
la formación de una espuma estable hasta de 2 cm en
forma de panal.
Rosenthaler Quinua Adicionar a 0,5 mL del extracto etanólico 4 gotas del
reactivo VAO por las paredes del tubo. Observar la
coloración azul-violeta.
Baljet Digitalis Agregar 0,5 mL de reactivo de Baljet a 0,5 mL de extracto
purpurea etanólico. Observar la formación de una coloración
CARDIOTONICO naranja rojiza.
S Molish Digitalis Mezclar 0,5 mL de extracto y 0,5 mL de reactivo de
purpurea Molish, verter la mezcla gota agota por las paredes del
tubo que contenga 1 mL de ácido sulfúrico concentrado.
Observar la coloración violeta en la interface.
LACTONAS Hidroxamato Manzanilla Tomar 0,2mL de extracto y adicionarle una gota de

59
 férrico solución metanolica 2N de clorhidrato de hidroxilamina y
una gota de KOH en metanol. Calentar durante 5
minutos, enfriar, acidular con HCl 0,5N y añadir una gota
de FeCl3 1%. Observar la coloración violácea.
Hidroxamato 7- Ver procedimiento anterior
férrico hidroxicum
arina
CUMARINAS Erlich 7- A 1 mL de extracto etanólico agregar 1 mL de reactivo de
hidroxicum Erlich. Observar la coloración naranja.
arina
Fluorescencia 7- Calentar al baño de Maria hirviendo un tubo de ensayo
hidroxicum con 1mL de extracto etanólico. Colocar en la boca del
arina tubo un papel de filtro impregnado con sln 0,1N de NaOH.
Observar la fluorescencia al UV.
Dragendorff Berberina Agregar 4 gotas de reactivo de Dragendorff a 1 mL de
extracto ácido. Observar formación de un precipitado
naranja.
Valser Berberina Agregar 4 gotas de reactivo de Valser a 1 mL de extracto
ALCALOIDES ácido. Observar formación de un precipitado.

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Mayer Berberina Agregar 4 gotas de reactivo de Mayer a 1 mL de extracto
ácido. Observar formación de un precipitado blanco.
Wagner Berberina Agregar 4 gotas de reactivo de Wagner a 1 mL de
extracto ácido. Observar formación de un precipitado
blanco.

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Anexo 2 Metodología de pruebas en cromatografía en capa delgada CCD

METABOLITO PRUEBA CONTROL PROCEDIMIENTO

SECUNDARIO QUIMICA POSITIVO
Lieberman Lupeol Asperjar la placa de cromatografía y calentar 10 min a
ESTEROIDES n- 110°C. Observar la aparición de manchas coloreadas azules a
Burchard violetas y manchas fluorescentes al UV.
Vainillina- Lupeol Asperjar la placa de cromatografía y calentar a 120°C hasta
Ácido el desarrollo de manchas coloreadas.
sulfúrico
ZnCl2 Lupeol Asperjar la placa de cromatografía y calentar 5 min a 110°C.
Observar la fluorescencia en el UV de onda larga.
Vapores Quercitina Exponer la placa a vapores de amoniaco durante 5 min y
FLAVONOIDES de NH3 observar la aparición de manchas fluorescentes azules,
verdes, amarillas, etc. en el UV de onda larga*.
AlCl3 Quercitina Asperjar la placa con una solución de cloruro de aluminio al
1% en etanol y observar la fluorescencia amarilla en el UV-
365 nm.
FeCl3 Quercitina Asperjar la placa con una solución de FeCl3 al 1% y observar
la aparición de manchas verdes o azules, esto indica la

62
 presencia de grupos fenólicos.
QUINONAS Bornträger Antrona Asperjar la placa con una solución de KOH al 10% en metanol
y observar la aparición de manchas amarillas o rojas
fluorescentes en el UV-365 nm.
Ácido Asperjar la placa con una solución de FeCl3 al 1% y observar
FENOLES Cloruro tánico la aparición de manchas verdes o azules, esto indica la
férrico presencia de grupos fenólicos.
Vainillina- Ácido Asperjar la placa de cromatografía y calentar a 120°C hasta
Ácido tánico el desarrollo de manchas coloreadas.
clorhídrico
SAPONINAS Cloruro de Quinua Asperjar la placa de cromatografía y calentar 5 min a 110°C.
zinc Observar la fluorescencia en el UV de onda larga.
CARDIOTONICO Kedde Digitalis Asperjar la placa con una solución de ácido 3,5-
S purpurea dinitrobenzoico en KOH y metanol y observar la aparición de
manchas violetas-azuladas.
Vainillina- Digitalis Asperjar la placa de cromatografía y calentar a 120°C hasta
Ácido purpurea el desarrollo de manchas coloreadas.
sulfúrico
KOH en 7- Asperjar la placa con una solución de KOH al 5% en etanol y

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 metanol hidroxicum observar la intensificación de la fluorescencia azul en UV-365
CUMARINAS arina nm.
Cloruro 7- Asperjar la placa con una solución de FeCl3 al 1% y observar
férrico hidroxicum la aparición de manchas verdes o azules, esto indica la
arina presencia de grupos fenólicos.
ALCALOIDES Dragendor Berberina Agregar 4 gotas de reactivo de Dragendorff a 1mL de
ff extracto ácido. Observar formación de un precipitado
naranja.

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Anexo 3 Preparación de reactivos para el análisis fitoquímico preliminar

LIEBERMAN-BURCHARD: se mezclan a 0°C 10 mL de anhídrido acético y 10 mL de cloroformo, después

se añade 1 mL ácido sulfúrico concentrado. Este reactivo se debe preparar antes de usarlo.

VAINILLINA-ÁCIDO ORTO-FOSFÓRICO (VAO): Preparar una solución de vainillina al 1% en ácido orto-

fosfórico en etanol.

SOLUCIÓN DE NAOH-NH4OH (BRONTRÄGER-KRAUSS): Preparar una solución al 2% de hidróxido de

amonio en hidróxido de sodio al 5%.

CLORURO FÉRRICO: Preparar una solución de FeCl3 al 1% en etanol del 96%.

GELATINA-SAL: Preparar una solución al 1% de gelatina en cloruro de sodio al 10%.

REACTIVO DE BALJET: Se debe preparar antes de usarse mezclando volúmenes iguales de los reactivos A
y B. El reactivo A es una solución de ácido pícrico al 1% en etanol y el reactivo B es una solución de
hidróxido de sodio al 10%.

REACTIVO DE MOLISH: Preparar una solución de α-naftol al 5% en etanol.

CLORHIDRATO DE HIDROXILAMINA: Preparar una solución de clorhidrato de hidroxilamina 2N en

metanol.

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REACTIVO DE ERLICH: Se prepara disolviendo 1 g de p-dimetilaminobenzaldehido en 15 mL de etanol y
se mezcla con 15 mL de ácido clorhídrico concentrado.

REACTIVO DE DRAGENDORFF: Disolver 4 g de nitrato de bismuto en 10 mL de ácido clorhídrico

concentrado y mezclarla con una solución de 13,6 g de yoduro de potasio en 25 mL de agua. Aforar el
volumen a 50 mL con agua.

REACTIVO DE VALSER: Preparar 50 mL de una solución al 10% de yoduro de potasio en agua.

REACTIVO DE MAYER: Disolver 0,67 g de cloruro mercúrico y 1 g de yoduro de potasio en 50 mL de

agua.

REACTIVO DE WAGNER: Disolver 0,63 g de yodo re-sublimado y 1 g de yoduro de potasio en 50 mL de

agua.

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