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    Practica 2. Efecto Rizosferico

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    Faryuli Jimenez Rojas
    Este documento describe un procedimiento para determinar el efecto rizosférico midiendo el número de unidades formadoras de colonias (UFC) en el suelo adherido a las raíces de una planta (suelo rizosférico) en comparación con el suelo circundante no influenciado por las raíces (suelo no rizosférico). El procedimiento implica tomar muestras de ambos suelos, preparar diluciones seriadas, sembrar en placas de agar y contar colonias después de la incubación. El índice R/S indica

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    PRACTICA 2. EFECTO RIZOSFERICO.docx

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    Asignatura: Microbiología de suelos

    PRACTICA 2

    DETERMINACIÓN DEL EFECTO RIZOSFERICO

    OBJETIVOS

     Evidenciar el efecto de la rizosfera sobre el número de microorganismos del


    suelo adyacente a la raíz.
     Determinar el efecto rizosférico en plántulas de interés, mediante la obtención
    del índice rizosférico.

    MATERIALES

    Cajas de Petri con Agar Nutritivo (AN) o Agar Plate count (PCA)
    Tubos de ensayo con solución salina o agua peptonada
    Pipetas de 1 -5 mL
    Micropipetas 1-100 ul y 100-1000 ul
    Asas de vidrio en L (Asas de Drigalsky)
    Muestras de suelo rizosférico de diferentes especies vegetales
    Muestras de suelo no rizosférico
    Vortex
    Solución salina o agua peptonada.

    OJO: Cada grupo debe traer tres asas de hockey (asa de vidrio en forma de
    L) estériles.

    PROCEDIMIENTO

    I. Toma De Muestras

     En un suelo con cobertura boscosa, un suelo cultivado o un jardín, seleccione


    una plántula saludable (según su interés) y desentiérrela con cuidado,
    extrayendo todo el sistema radical sin romper las raíces.
     Sacuda suavemente las raíces de tal manera que se desprenda el volumen de
    suelo que no está adherido directamente a la superficie radical, tome 100
    gramos de raíces finas con las partículas de suelo que están adheridas
    directamente a la superficie rodeando las raíces (Suelo rizosférico)
     En el mismo terreno seleccione el área más cerca al lugar donde se
    encontraba la planta, pero que no tenga influencia del sistema radical y tome
    unos 100 gramos de suelo (suelo no rizosférico).
     Coloque por separado en bolsas ziploc el suelo rizosférico y el suelo no
    rizosférico, rotúlelo y transpórtelo al laboratorio en el menor tiempo posible.

    II. Procesamiento de las muestras

     Tome las raíces de la plántula y agítelas sobre una superficie limpia y


    desinfectada, hasta que se desprenda la mayor cantidad posible de suelo
    rizosférico, tome 10 gramos de dicho suelo y adiciónelo en 90 mL de agua
    peptonada agitando vigorosamente en el vortex hasta que no se distingan
    gránulos de suelo en el fondo del recipiente. A partir de allí, prepare una serie
    de diluciones 10 -1 hasta 10 -6 en los tubos de ensayo con solución salina o
    agua peptonada.
     Tome diez gramos del suelo no rizosférico y proceda de la misma manera para
    realizar una serie de diluciones.
     De cada dilución (10-1 a 10-6) de suelo rizosférico, tome 0,1 mL y proceda a
    realizar una siembra en superficie en una caja de Petri con Agar Nutritivo o
    Agar Plate Count, disperse la muestra con ayuda del asa de vidrio.
     Repita el procedimiento anterior para el suelo no rizosférico.
     Rotule las cajas e Incúbelas a una temperatura entre 25 a 30 o C por 3 a 5 días
    o hasta evidenciar el crecimiento de colonias microbianas en toda la superficie
    de la caja.
     Retire las cajas de la incubadora y proceda a realizar el recuento del número
    de colonias en cada caja y determine el número de UFC por gramo de suelo
    rizosférico (R) y el número de UFC por gramo de suelo no rizosférico (S).
     Determine la relación R/S
     Interprete el resultado de acuerdo al valor:
     R/S > 1, R/S = 1 o R/S <1
     De acuerdo al resultado, explique el efecto rizosférico de la planta sobre la
    microbiota del suelo.

    NOTA: Se puede determinar el efecto rizosférico para diferentes grupos de


    microorganismos inoculando la muestra de las diluciones en medios de cultivo
    selectivos para hongos, bacterias, actinomicetos, etc., o incluso géneros y
    especies de especial interés.

    CUESTIONARIO
    1. ¿Qué es la competencia rizosférico de un microorganismo?
    2. ¿Qué importancia practica tiene la determinación del efecto rizosférico?
    3. ¿Qué factores relacionados con la interacción planta microorganismo pueden
    influir en el resultado del índice R/S)?

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