UNIVERSIDAD DE SAN CARLOS DE GUATEMALA

CENTRO UNIVERSITARIO DE SAN MARCOS

CARRERA: AGRONOMIA
CURSO: Microbiología
CATEDRATICO: Ing. Nehemías Juan Rivera Méndez

LABORATORIO No. 1 EL MICROSCOPIO

I. La microbiología es la ciencia que se ocupa de los organismos vivos demasiado

pequeños para poder apreciarse a simple vista por eso, se desarrolló a partir de la
invención del microscopio.
El microscopio se debe a Jean Faber, miembro de la antigua Academia de Lincei
(1624), es un aparato que se utiliza para obtener una imagen amplificada de un
objeto no perceptible a simple vista. Ello se consigue mediante un sistema óptico
compuesto por lentes de cristal que, al ser atravesadas por la imagen del objeto,
aumentan en un número “X” su tamaño.
El nombre de microscopio viene del griego mikros=pequeño, y skopeoo=observar.
Este término designa un microscopio compuesto por un objetivo y un ocular, aunque
en la práctica se ha hecho extensivo a todos los instrumentos amplificantes simples
y compuestos.
En el laboratorio de Microbiología se trabaja constantemente con una diversidad de
microorganismos entre los cuales se pueden mencionar nematodos y
principalmente hongos y las bacterias. Por lo mismo, es importante conocer las
partes del microscopio, el funcionamiento de este y también los cuidados que hay
que tener al manejar este aparato.

II. OBJETIVOS:
1. Conocer la constitución y el funcionamiento de los diversos tipos de
microscopios.
2. Obtener conocimientos de los cuidados que deben observarse al manipular
estos aparatos.

-¿Que es un microscopio simple?

Un microscopio simple son todas aquellas lentes con montura o sin ella, gruesas o
pequeñas, biconvexas o plano-convexas, que nos amplifican los objetos.
Comúnmente se les llama lupas. Existen numerosos modelos y variedades, se
puede decir que cualquier lente convergente utilizada de manera que de una imagen
virtual, y, por lo tanto, directa y mayor que el objeto, es un microscopio simple.
El aumento mayor que se obtiene con estas lentes es del orden de los 50 diámetros.

- ¿Qué es un microscopio compuesto?

Es aquel que está constituido por la combinación de dos sistemas de lentes
convergentes: uno, próximo al ojo del observador, por lo cual se le llama ocular otro
próximo al objeto, denominado objetivo. Este es el verdadero microscopio, el que
estamos acostumbrados a ver en todos los laboratorios.
Existen muchos tipos de microscopios compuestos en cuanto a su construcción y
manejo, pero todos se basan en los mismos principios fundamentales.
 - ¿Cuáles son las partes del microscopio?
Básicamente, el microscopio está compuesto de una parte estructural, una parte
óptica y una parte mecánica.
La parte estructural, a su vez está compuesta por el pie, la platina y el tubo.
El pie. Es una pieza maciza y pesada, para asegurar la estabilidad del aparato y
servir de soporte a sus demás partes.
La platina. Es una pieza metálica, donde se colocan las preparaciones tiene en el
centro una abertura por la que pasaran los rayos luminosos procedentes del sistema
de iluminación, puede ser fija o estar adosada a un carro con dos tornillos de
cremallera que permitan dos movimientos de traslación.
El tubo. En él está instalado el sistema óptico. Está constituido por dos sistemas o
cuerpos, uno interno y otro externo. En los aparatos modernos es común los
binoculares, que facilitan la visión con los dos ojos y los revólveres porta objetivos,
con los cuales se pueden cambiar los objetivos instantáneamente, sin desenfocar
la preparación.
La parte óptica, está constituida por los objetivos, los oculares y el sistema de
iluminación.
Objetivos: Son los elementos más importantes del microscopio. Están formados
por la reunión de varias lentes para corregir las aberraciones. Se atornillan a la parte
inferior del tubo o al revolver porta objetivos. Existen objetivos en seco y objetivos
de inmersión, los primeros son los que se emplean más corrientemente; entre el
lente frontal y el cubreobjetos solo hay aire. A estos objetivos pertenecen los de
menor aumento (3.5x, 4.5x, 6x, 10x, 20x, 30x, 40x, 45x, 60x y 75x). Los objetivos
de inmersión (95x, 98x, 100x) son aquellos en los cuales para la observación, debe
interponerse entre la lente frontal y la preparación un líquido que, por su índice de
refracción apropiado, permita una mayor luminosidad; normalmente es aceite de
inmersión, o en su defecto, agua.
Oculares: Los forman dos lentes separadas por un diafragma y van montados en
la extremidad superior del tubo. La lente superior se llama lente ocular; la inferior,
lente de campo. Pueden ser de 6x, 8x y 10x.
Sistema de iluminación: Se encuentra situado bajo la platina y tiene la misión de
iluminar los objetos por medio de luz transmitida, a causa de que la mayoría de las
observaciones se realizan por transparencia. En algunos microscopios consta de un
espejo, condensador y de un diafragma. La fuente de luz puede ser natural o
artificial. Otros microscopios traen un sistema de luz propia. El sistema de
iluminación también incluye el condensador.
La parte mecánica: Está constituida por los tornillos macrométrico y micrométrico,
así como por los tornillos del movimiento de la platina, tornillo de movimiento del
condensador, etc.
Tornillos macrométrico: Son llamados también tornillos de movimiento grosero, y
son utilizados parta obtener una imagen aproximada del objeto que se quiera
observar.
Tornillos micrométricos: Son llamados también tornillos de movimiento fino, y son
utilizados para obtener una imagen definitiva del objeto que se quiera observar.
Tornillos de movimiento de la platina: Son utilizados para mover los portaobjetos
que están sobre la platina y ubicar exactamente el objeto que queramos observar.
Tornillo de movimiento del condensador: Es utilizado para bajar o subir el
condensador y así obtener conos luminosos más grandes, algunos aparatos no
tienen este sistema.

-¿Cómo se obtiene la amplificación?

En un microscopio compuesto la amplificación se obtiene mediante dos sistemas de
lentes. El situado más cerca de la muestra, llamado objetivo, la amplifica y produce
una imagen real, y el sistema de lentes oculares que amplifica esta imagen real,
dando una imagen virtual que es vista por el ojo. La amplificación total es igual al
producto de las amplificaciones producidas por el ocular y el objetivo.
El lente objetivo es una combinación de lentes convexas y cóncavas, de tipos
distintos de vidrio que corrigen las aberraciones cromáticas y esféricas, inherentes
a las lentes convexas simples. Los microscopios de la mayoría de los laboratorios
de Microbiología poseen tres objetivos: el objetivo seco débil (10x), el objetivo seco
fuerte (40x) y el objetivo de inmersión (100x). El objetivo que se desea utilizar se
coloca en su sitio, girando la pieza llamada revolver.
El lente objetivo enfoca los rayos de luz procedentes de la muestra, formando una
imagen real dentro del tubo del microscopio. La imagen real se amplifica
posteriormente por el sistema de lentes oculares, el cual está situado en el extremo
distal del tubo y está formado por dos lentes. La lente más baja o de campo, coloca
la imagen real en el plano focal de la más alta o lente ocular, la cual actúa como una
simple lente de amplificación, permitiendo al ojo el enfoque de la imagen virtual de
la muestra.
Las amplificaciones totales que se obtendrían con los objetivo que se han
mencionado serían las siguientes: con el objetivo 10x y con un ocular de 10x,
aumenta 100 diámetros; el objetivo 40x y ocular 10x, aumenta 400 diámetros, el
objetivo 100x y ocular 10x, aumenta 1000 diámetros.

ESTEREOSCOPIO:
También es llamado microscopio de disección o microscopio estereoscópico, posee
dos lentes objetivos y dos oculares y produce una visión tridimensional. La visión
tridimensional se debe a que la imagen captada por el complejo objetivo ocular
izquierdo, no es igual a la captada por el complejo objetivo ocular derecho, por
consiguiente se reciben dos impresiones visuales distintas, proporcionado en
conjunto la visión estereoscópica.
Este instrumento se utiliza para la observacio0n y disección de objetos que por su
tamaño no pueden verse completos, aun con el menor aumento del microscopio
compuesto.
Las partes del microscopio estereoscopio son: base, platina, brazo, tornillo
macrométrico, cabezal, oculares, los cuales tienen similar función que el
microscopio compuesto.

III. METODOLOGIA:
Inicialmente se hará una exposición teórica-practica sobre las partes del
microscopio, su funcionamiento y cuidados que hay que tener al manejar este
aparato.
Seguidamente se realizara la parte práctica que consistirá en observar algunos
montajes preparados, utilizando para ello los aparatos que estén en el laboratorio.
Para lo anterior seguir el siguiente procedimiento:
MICROSCOPIO:
1. Limpie el espejo, parte superior del condensador, oculares y objetivos,
empleando papel especial para lente humedecido en xilol que es un
disolvente de grasas, esta operación debe hacerse lo más suave posible para
evitar daños a los lentes.
2. Coloque el microscopio de manera que el espejo este en dirección a la fuente
de luz, en el caso que tuviera espejo. Tome una posición cómoda frente al
aparato.
3. Con la muestra sobre la platina haga el enfoque inicial con el objetivo de
menor aumento, colocado correctamente y luego transfiera la imagen a los
siguientes aumentos.
4. Vea a través del ocular y asegúrese de contar con la adecuada cantidad de
luz, moviendo el espejo, condensador y diafragma.
5. Enfoque primero con el tornillo macrométrico (punto de aproximación) y afine
luego con el micrométrico (punto definitivo).
6. El enfoque con el objetivo de inmersión debe hacerse con mucho más
cuidado.
a. Utilice primero el objetivo 10x y localice con él, colocando al centro del campo
del microscopio la parte de la muestra que desea observar.
b. Coloque en el portaobjetos una gota de aceite de inmersión, cuidando que la
misma puede en la posición donde bajara el objetivo.
c. Gire el revolver para colocar el objetivo de inmersión.
d. Usando el tornillo macrométrico baje con mucho cuidado el objetivo de
inmersión cuidando que el mismo entre en contacto con el aceite que coloco
pero no con el portaobjeto.
e. Usando el cular enfoque la muestra con el tornillo micrométrico, cuide de
graduar la entrada de luz accionando el diafragma y el espejo o fuente de luz
hasta que la imagen aparezca clara y bien definida.
f. Cuando deje de observar, baje la platina y limpie los lentes del microscopio
con papel “limpia lentes” previamente humedecido con xilol.
g. Limpie el resto de lentes del microscopio si en dado caso se ensucia durante
su manejo y cúbralo con su funda respectiva.

ESTEREOSCOPIO:
En el laboratorio existirán muestras de plantas enfermas, las cuales deberán ser
observadas en el estereoscopio. El estudiante deberá realizar montajes de estas
muestras. Observar los montajes al microscopio.

IV. CUESTIONARIO:
1. Que cuidados deben tenerse al trabajar con el microscopio.
2. Que es poder de resolución.
3. Como podría usted determinar el tamaño real de un microorganismo,
observando este al microscopio.
4. Que es distancia de trabajo.
V. EL AUTOCLAVE:
Se utiliza para esterilizar los medios de cultivo, en una atmosfera de temperatura y
presión de agua.
Consta de un cuerpo cilíndrico dividido por una placa metálica perforada, en dos
partes de volumen diferente; la inferior es el reservorio del agua y la superior es la
cámara de vapor.
A la caldera va adaptada una tapadera, que se fija a la misma mediante una serie
de bulones, provistos de su tuerca correspondiente, y que permite un cierre
hermético mediante la interposición de una arandela de caucho, alojada en una
hendidura de la que va provista en el borde superior del autoclave. Adjunto se
dispone un manómetro y una válvula de seguridad.
Un sistema de calefacción colocado en la parte inferior del aparato, permite calentar
el agua introducida en la cámara inferior. En las páginas siguientes se presenta un
diagrama del autoclave.

MANEJO Y CUIDADOS:
1. Asegúrese que el agua introducida en el autoclave alcanza el nivel de la placa
metálica perforada o diafragma.
2. Verificar el buen funcionamiento de la válvula de seguridad.
3. Colocar el material a esterilizar sobre la placa metálica perforada.
4. Cubrir los tapones de algodón con papel de envolver o papel de aluminio.
5. Cerrar el autoclave, cuidando que la tapadera quede bien acoplada, y todas
las llaves adicionales también en posición de cerrado.
6. Calentar, manteniendo abierta la válvula de puerta. El aire se expulsa.
7. Purgando el aparato se manifiesta por la salida de un chorro de vapor
continuo, se cierra la citada válvula y el manómetro indica el aumento de la
presión en el interior del aparato, la que deberá ser de 15 libras y una
temperatura de 120°C.
8. La esterilización termina cuando la temperatura deseada se ha mantenido un
tiempo de 15 minutos y a la presión indicada.
9. Se baja el swich del encendido y cuando la presión desciende se abre la
válvula de purga para restablecer el equilibrio de presiones interiores y
exteriores, luego cuando el manómetro marca 0 y el termómetro 0°C se abre
la puerta con cuidado.

VI. EL HORNO PASTEUR:

Se utiliza para la esterilización en seco del material de vidrio (placas de Petri, tubos
de vidrio, pipetas, etc.)
Consta de 2 cámaras, que dejan entre si un espacio destinado para la circulación
del aire caliente. La calefacción del aire se realiza mediante un sistema apropiado
dispuesto sobre el fondo del aparato.
Un panel metálico, destinado a recibir el material a esterilizar se dispone en el
interior de la cámara central. El horno, provisto de un termómetro, es cerrado por
una puerta o tapadera.
MANEJO Y CUIDADOS:
1. El material de vidrio que se va a esterilizar, limpio y bien seco, tapado con
algodón, o embalado en un papel sólido, se dispone en el interior del horno,
se procede al calentado del mismo hasta que la temperatura alcance 150°C
durante 60 minutos.
2. En este momento, considerada la operación como terminada, se cesa de
calentar, se retira el material estéril y se guarda en alguna caja, gaveta o
armario, protegiéndolo de posibles contaminaciones.

VII. PREPARACION Y ESTERILIZACIION DE PIPETAS PASTEUR, PIPETAS

GRADUADAS Y CAJAS DE PETRI.

A. PREPARACION Y ESTERILIZACION DE PIPETAS PASTEUR.

1. Utilizando tubos de vidrio de un metro de largo y de 7 a 9 mm de diámetro,

se cortan fragmentos de 25 cm. de largo.
2. Con la ayuda de un mechero se estiran los fragmentos de los tubos de vidrio,
colocando el centro de los mismos sobre la llama. Para que el calor sea
uniforme deben rotarse lentamente y cuando usted sienta que el vidrio se ha
suavizado estírelo hasta que se forme un delgado filamento. La pieza
estirada sepárela por el centro.
3. Con la ayuda de un punzón se obturan con un tapón de algodón, sin que este
sobresalga, los extremos gruesos de las pipetas Pasteur que preparo.
4. Las pipetas así preparadas se colocan en número de 4-5 en tubos de ensayo
15 cm. de largo, los cuales se tapan con un tapón de algodón y se esterilizan
al horno según indicaciones anteriores.

B. PREPARACION Y ESTERILIZACION DE PIPETAS GRADUADAS:

1. Se obtura con un tapón de algodón y sin que este sobresalga la extremidad
no afilada de la pipeta.
2. Luego la pipeta se envuelve utilizando una tira de papel kraft grueso para
lograr una buena envoltura hágala enrollando la tira de papel en forma espira
lada hasta que quede completamente cubierta la pipeta.
3. Se esteriliza en el horno según se indicó.

C. PREPARACION Y ESTERILIZACION DE CAJAS DE PETRI:

1. Si no posee un cilindro de metal para esterilizar cajas de Petri se puede usar

papel kraft de envolver de la siguiente manera:
- Se toman 2 o 3 cajas de Petri y utilizando un papel que las envuelva a todas
(según instrucción objetiva) se colocan al horno según observaciones
anteriores.