Proyecto de Grado Karina Huayhua Llusco

UNIVERSIDAD MAYOR DE SAN ANDRÉS
FACULTAD DE CIENCIAS PURAS Y NATURALES

CARRERA DE CIENCIAS QUÍMICAS
TRABAJO PARA OPTAR AL GRADO DE LICENCIADO EN CIENCIAS QUÍMICAS
VALIDACIÓN DEL MÉTODO

ESPECTROFOTOMÉTRICO UV-VIS DE
DETERMINACIÓN DE CROMO HEXAVALENTE EN
AGUAS NATURALES Y RESIDUALES
POR: KARINA HUAYHUA LLUSCO

TUTOR: PhD. RIGOBERTO CHOQUE
CO-TUTOR: PhD. MAURICIO ORMACHEA
LA PAZ – BOLIVIA
Diciembre, 2019
El presente trabajo es dedicado con mucho cariño y
amor a mis queridos hermanitos: Juanjo y Aleyda.
Espero pueda servirles en un fututo.

AGRADECIMIENTOS
A mis padres Primitivo y Francisca quienes siempre hicieron el esfuerzo para darme
todo lo que ellos no pudieron tener, hermanos, quienes siempre me alentaron a salir
adelante y estuvieron presentes en cada momento siempre pendientes de mi bienestar.
Muchas gracias por llenarme de tanto amor.
Al Laboratorio de Química Ambiental de la CCQ-UMSA, por permitirme desarrollar mi
proyecto y brindarme todo el apoyo necesario.
A mis tutores: Dr Rigoberto Choque y Dr Mauricio Ormachea, por su gran apoyo,
paciencia, enseñanza, consejos y asesoramiento que me brindaron durante todo el
desarrollo del proyecto de grado. A mi tribunal Dr. Rómulo Gemio, por la paciencia y su
tiempo dado para la mejora de este proyecto.
A la Unidad de análisis de Calidad Ambiental del que fue el Instituto de Investigación
Nuclear (IBTEN), por permitirme realizar mis prácticas profesionales, al Ing. Jorge
Chungara, por su gran paciencia, apoyo y enseñanza que me brindo, a la Lic. Rocío
Choque por la disciplina de trabajo que me transmitió.
A Franz Candia por ser parte de mi vida, por apoyarme incondicionalmente, darme
aliento, fuerza para poder realizar cada etapa del proyecto y sobre todo por su gran amor.
Muchas gracias!!!!
INDICE GENERAL
CAPÍTULO I...................................................................................................................... 3
1. INTRODUCCIÓN ............................................................................................... 3
1.1. ANTECEDENTES ....................................................................................... 4
1.2. PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA .................................................... 5
1.3. OBJETIVOS ................................................................................................ 6
1.3.1. OBJETIVO GENERAL ........................................................................... 6
1.3.2. OBJETIVOS ESPECIFICOS ................................................................... 6
1.4. JUSTIFICACIÓN ........................................................................................ 7
CAPÍTULO II .................................................................................................................... 8
2. MARCO TEÓRICO ............................................................................................ 8
2.1. GENERALIDADES DEL CROMO ............................................................ 8
2.2. FUENTES DE CROMO EN AGUA ........................................................... 8
2.3. QUÍMICA DEL CROMO EN AGUA ......................................................... 9
2.4. CROMO EN EL PROCESO INDUSTRIAL DE CURTIEMBRES ......... 11
2.5. TOXICIDAD DEL CROMO ..................................................................... 12
2.6. ESPECTROSCOPIA UV-VIS ................................................................... 13
2.6.1. LEY DE LAMBERT-BEER .................................................................. 14
2.6.2. DESVIACIONES REALES ................................................................... 15
2.6.3. DESVIACIONES INSTRUMENTALES .............................................. 15
2.6.4. DESVIACIONES QUÍMICAS .............................................................. 16
2.6.5. COMPONENTES DE UN ESPECTROFOTÓMETRO ........................ 16
2.7. CALIBRACIÓN Y/O VERIFICACIÓN DE LA EFICIENCIA DE

ESPECTROFOTÓMETROS UV-VIS....................................................... 17
2.7.1. EXACTITUD DE LONGITUD DE ONDA ......................................... 18

2.7.2. EXACTITUD FOTOMÉTRICA ............................................................ 19
2.8. VALIDACIÓN DE MÉTODOS ANALÍTICOS ....................................... 19
2.8.1. IMPORTANCIA DE VALIDAR UN MÉTODO ANALÍTICO ........... 19
2.8.2. CUANDO REALIZAR UNA VALIDACIÓN ...................................... 20
2.9. PARÁMETROS DE VALIDACIÓN ........................................................ 20
2.9.1. LINEALIDAD Y RANGO DE TRABAJO ........................................... 20
2.9.2. LÍMITE DE DETECCIÓN Y LÍMITE DE CUANTIFICACIÓN ......... 24
2.9.3. SELECTIVIDAD ................................................................................... 26
2.9.4. PRECISIÓN ........................................................................................... 29
2.9.5. EXACTITUD ......................................................................................... 30
2.9.6. ROBUSTEZ ........................................................................................... 32
CAPÍTULO III ............................................................................................................ 35
3. METODOLOGÍA EXPERIMENTAL .............................................................. 35
3.1. TIPO DE INVESTIGACIÓN .................................................................... 35
3.2. ZONA DE ESTUDIO ................................................................................ 35
3.2.1. AGUA NATURAL ................................................................................ 35
3.2.2. AGUA RESIDUAL ................................................................................ 37
3.3. TOMA Y CONSERVACIÓN DE LA MUESTRA ................................... 40
3.3.1. TIPOS DE MUESTRAS ........................................................................ 41
3.3.2. CONSERVACIÓN DE LA MUESTRA ................................................ 41
3.4. DETERMINACIÓN DE PARÁMETROS FÍSICO-QUÍMICOS ............. 42
3.5. EQUIPOS, MATERIALES Y REACTIVOS ............................................ 42
3.6. METODOLOGÍA ANALÍTICA ............................................................... 45
3.6.1. VERIFICACIÓN DEL ESPECTROFOTÓMETRO GENESYS 10S UV-

VIS ........................................................................................................... 45
3.6.2. DETERMINACIÓN DE CR (VI) POR ESPECTROSCOPIA UV-VIS 47
3.6.2.2. Preparación de la Solución Tampón ................................................... 48
3.6.2.3. Preparación de la Difenilcarbazida ..................................................... 48
3.6.2.4. Preparación de las soluciones para la curva de calibración ................ 48
3.6.2.5. Tratamiento de la muestra para la determinación de Cr (VI) ............. 49
3.6.2.6. Desarrollo de color y medición ........................................................... 50
3.6.3. DETERMINACIÓN DEL RANGO ÓPTIMO DE pH PARA EL

DESARROLLO DEL COMPLEJO Cr (VI)-DPC ................................... 50
3.6.4. DETERMINACIÓN DEL EFECTO DE LA CONDUCTIVIDAD

SOBRE LA FORMACIÓN DEL COMPLEJO Cr (VI)-DPC ............... 51
3.6.5. DETERMINACIÓN DEL TIEMPO DE FORMACIÓN DEL

COMPLEJO Cr (VI)-DPC ....................................................................... 51
3.6.6. DETERMINACIÓN DE LA LINEALIDAD ......................................... 51
3.6.7. DETERMINACIÓN DEL LÍMITE DE DETECCIÓN Y LÍMITE DE

CUANTIFICACIÓN ................................................................................................ 52
3.6.8. DETERMINACIÓN DE LA SELECTIVIDAD .................................... 52
3.6.9. DETERMINACIÓN DE LA PRECISIÓN ............................................ 53
3.6.10. DETERMINACIÓN DE LA EXACTITUD....................................... 54
3.6.11. DETERMINACIÓN DE LA ROBUSTEZ ......................................... 54
CAPÍTULO IV ............................................................................................................ 55
4. RESULTADOS Y DISCUSIONES .................................................................. 55
4.1.VERIFICACIÓN DEL ESPECTROFOTÓMETRO UV-VIS

(GENESYS 10S) .................................................................................................. 55
4.1.1. Evaluación de la Exactitud de Longitud de onda ................................... 55
4.1.2. Evaluación de la exactitud fotométrica en el rango Visible ................... 55

4.2. CONDICIONES EXPERIMENTALES PARA LA DETERMINACIÓN
ESPECTROFOTOMÉTRICA DE Cr (VI) ................................................ 56
4.2.1. Variación del pH .................................................................................... 56
4.2.2. Variación de la Conductividad ............................................................... 57
4.2.3. Tiempo de reacción del complejo Cr (VI)-DPC .................................... 58
4.3. PARÁMETROS DE LA VALIDACIÓN DEL MÉTODO ....................... 60
4.3.1. Linealidad ............................................................................................... 60
4.3.2. Límite de Detección y Límite de Cuantificación ................................... 68
4.3.3. Selectividad del Método ......................................................................... 71
4.3.4. Precisión ................................................................................................. 78
4.3.5. Exactitud ................................................................................................. 84
4.3.6. Robustez ................................................................................................. 85
CAPÍTULO V ............................................................................................................. 89
5. CONCLUSIONES............................................................................................. 89
CAPÍTULO VI ............................................................................................................ 92
6. RECOMENDACIONES ................................................................................... 92
CAPÍTULO VII ........................................................................................................... 93
7. BIBLIOGRAFÍA ............................................................................................... 93
8. ANEXOS ........................................................................................................... 97
INDICE DE FIGURAS
FIGURA 1 Diagrama pE-pH de cromo acuoso............................................................. 9
FIGURA 2 Diagrama de flujo del proceso de curtido al cromo ................................. 11
FIGURA 3 Espectro electromagnético ........................................................................ 14
FIGURA 4 Esquema del funcionamiento de un espectrofotómetro UV-VIS ............. 17
FIGURA 5 Efecto de la exactitud de longitud de onda en una medición UV-VIS ..... 18
FIGURA 6 Intervalo de trabajo ................................................................................... 21
FIGURA 7 Relación de los criterios de exactitud y precisión .................................... 31
FIGURA 8 Diseño experimental de Plackett-Burman ............................................... 33
FIGURA 9 Zona de la toma de muestra ...................................................................... 36
FIGURA 10 Toma de la muestra de agua natural ...................................................... 36
FIGURA 11 Mapa Hidrográfico mostrando el curso natural del Río Seco ................ 37
FIGURA 12 Puntos de Muestro en el Río Seco, Distrito 4 Ciudad de El Alto ........... 38
FIGURA 13 Vista de la situación de contaminación del Río Seco, Distrito 4........... 39
FIGURA 14 Toma de la muestra de agua residual .................................................... 39
FIGURA 15 Tipos de envase, preservación de diferentes muestras ambientales ....... 41
FIGURA 16 Reacción de la difenilcarbazida con el Cr (VI) ..................................... 47
FIGURA 17 Formación del complejo Cr (VI)-DPC a diferentes valores de pH ....... 57
FIGURA 18 Cinética de reacción de la solución de 0,020 mg Cr (VI)/L ................... 58
FIGURA 21 Cinética de reacción de los tres niveles de concentración estudiados. ... 59
FIGURA 22 Linealidad del sistema ............................................................................ 67

FIGURA 23 Selectividad del método de determinación de Cromo (VI) .................... 77
FIGURA 24 Curvas de calibración realizadas en los dos equipos .............................. 83

INDICE DE TABLAS
Tabla 1 Equipos y materiales utilizados en el desarrollo del proyecto. ........................... 43
Tabla 2 Reactivos utilizados en el desarrollo del trabajo ................................................. 44
Tabla 3 Valores de longitud de onda de referencia, del espectro de absorción de la
solución de Dicromato de potasio 0,040 mg/kg en ácido perclórico 0,001 N. ................ 46
Tabla 4 Absorbancias de referencia de la solución de Sulfato de cobre pentahidratado
0,08 mol/L en ácido sulfúrico. ......................................................................................... 47
Tabla 5 Datos experimentales de la solución de Dicromato de potasio 0,040 mg/L
preparada con el SRM 935a. ............................................................................................ 55
Tabla 6 Datos experimentales de la solución de Sulfato de cobre pentahidratado .......... 56
Tabla 7 Valores de absorbancia del estándar de 0,098 mg Cr (VI)/L a diferentes valores
de pH. ............................................................................................................................... 56
Tabla 8 Resultados experimentales de la variación de la conductividad ......................... 57
Tabla 9 Datos experimentales para determinar la linealidad del sistema ....................... 60
Tabla 10 Datos experimentales de absorbancia para cada nivel de concentración. Cálculo
del estadístico (G). ........................................................................................................... 62
Tabla 11 Datos experimentales de absorbancia para cada nivel de concentración. Cálculo
del estadístico (C). ............................................................................................................ 64
Tabla 12 Resumen de datos experimentales para determinar la linealidad del sistema... 66
Tabla 13 Límite de detección y límite de cuantificación, hallados a partir de los datos de
linealidad del sistema. ...................................................................................................... 69
Tabla 14 Límite de detección y límite de cuantificación a partir de la lectura de muestras
blanco ............................................................................................................................... 70
Tabla 15 Resumen de los valores obtenidos para el límite de detección y el límite de
cuantificación. .................................................................................................................. 70
Tabla 16 Datos experimentales para la prueba de selectividad del método con matriz sin
analito, al nivel de concentración 0,098 mg Cr (VI)/L y cálculo del estadístico F. ........ 71
analito, al nivel de concentración 0,247 mg Cr (VI)/L y cálculo del estadístico F. ........ 73
Tabla 18 Valores de los parámetros físico-químicos de la matriz ................................... 74
Tabla 19 Datos experimentales para la prueba de selectividad del método utilizando
matriz con analito. ............................................................................................................ 75
Tabla 20 Resumen de los resultados obtenidos................................................................ 77
Tabla 21 Valores de los parámetros físico-químicos de la matriz ................................... 78
Tabla 22 Datos experimentales para la evaluación de la precisión en condiciones de
repetibilidad y cálculo del estadístico F. .......................................................................... 79
Tabla 23 Resumen de los cálculos para obtener una repetibilidad combinada ................ 80
Tabla 24 Datos experimentales de dos analistas para la evaluación de la precisión en
condiciones de precisión intermedia y cálculo del estadístico F. .................................... 81
Tabla 25 Datos experimentales obtenidos de la recta de calibración en dos equipos ..... 82
Tabla 26 Datos experimentales para determinar el porcentaje de recuperación. ............. 84
Tabla 27 Valores de las variables modificadas en el estudio de la robustez.................... 85
Tabla 28 Diseño de Plackett-Burman, que resume los ocho experimentos .................... 86
Tabla 29 Diseño de Plackett-Burman, que resume los ocho experimentos .................... 86
Tabla 30 Resumen de los valores obtenidos para evaluar el criterio de Robustez. ......... 87
Tabla 31 Resultados obtenidos de la determinación de Cr (VI) en muestras reales. ....... 88

RESUMEN
La validación de métodos de ensayo constituye una premisa para la realización de
servicios científicos técnicos y una garantía de la calidad de los resultados a reportar. En
el presente trabajo se realizó la validación del método espectrofotométrico de
determinación de Cromo (VI) en agua natural y residual. El trabajo se realizó en el
Laboratorio de Química Ambiental del CCQ-UMSA basado en el método normalizado
de la guía Standard Methods. (APHA-AWWA-WPCF, 2012)
Se comenzó la validación desde la verificación de la eficiencia del espectrofotómetro

evaluando los parámetros de exactitud de longitud de onda y exactitud fotométrica, así
también la determinación de las condiciones experimentales óptimas del proceso
analítico. Se utilizó el equipo espectrofotómetro UV-VIS Genesys 10S con una cubeta
de 1cm de paso óptico a una longitud de onda de 540 nm.
Para validar la metodología en agua natural se utilizó una muestra recolectada de la

vertiente de la gruta de la Virgen de Lourdes que se encuentra ubicada entre la avenida
del Poeta y la avenida del Libertador, en la zona sur de la ciudad de La Paz. Para la
matriz de agua residual se tomaron muestras del curso de agua del Rio Seco en la zona
Mercedario Sector 1 entre la avenida costanera, en el distrito 4 de la ciudad de El Alto.
Los parámetros validados fueron: linealidad en un rango de 0,039 a 0,245 mg Cr (VI)/L

con un coeficiente de correlación de 0,9996, selectividad concluyendo que no hay efecto
de matriz en agua natural y residual, límite de detección que es de 0,006 mg Cr (VI)/L,
el límite de cuantificación que es de 0,019 mg Cr (VI)/L, precisión con una desviación
estándar de 0,002, exactitud con un porcentaje de recuperación que varía desde un 91,6 a
99,8 % valores que se encuentran dentro del rango esperado de 80 a 110%, la robustez
determinó que no se pueden alterar los valores establecidos para el tiempo de reacción,
presencia de ácido fosfórico, volumen de ácido sulfúrico y volumen de DPC, pero el
cambio de analista no afecta al proceso analítico.
Se determinó la concentración de cromo (VI) de tres muestras recolectadas del curso de

agua del Río Seco que atraviesa la zona Mercedario del distrito 4 de la ciudad de El
Alto, donde hay actividad industrial de curtiembres artesanales que vierten sus efluentes
1
al río. Los valores encontrados fueron: Punto 1 (16°30'42.2908"; 68°07'10.1784)
0,031±0,003 mg Cr (VI)/L, Punto 2 (16°30'42.2908"; 68°07'10.1784) 0,035±0,002 mg
Cr (VI)/L, Punto 3 (16°30'42.2908"; 68°07'10.1784) 0,118±0,003 mg Cr (VI)/L. El valor
máximo permitido por el Reglamento en Materia de Contaminación Hídrica para Cr (VI)
es 0,05 mg/L, el valor del Punto 3 se encuentra por encima del máximo permitido.
Palabras clave: Validación, cromo, método espectrofotométrico
2
CAPÍTULO I
1. INTRODUCCIÓN
La principal fuente de cromo (Cr) en la naturaleza es la cromita ( ) mineral
que se encuentra frecuentemente como granos pequeños en rocas ígneas, pero la
principal fuente de la contaminación ambiental con cromo es antropogénica, puede
presentarse en estados de oxidación de 0 y II a VI (SLOOFF et al., 1990). La descarga
de efluentes industriales al medio ambiente es la causa más importante de acumulación
de cromo. Los compuestos de Cr (VI) son tóxicos y agente carcinógeno para una
variedad de organismos, causan irritación en la piel, debilitamiento en el sistema
inmunológico, daños en riñones e hígado y la muerte (RAMIREZ, 2012). Estos son
móviles en los sistemas suelo/agua, mucho más que los compuestos de cromo (III)
debido a que el cromo (VI) es un oxidante fuerte y es muy soluble en sus formas
aniónicas, mientras que los compuestos de cromo (III) tienden a formar precipitados
inertes cerca de pH neutro. Estas características físicas y químicas de los compuestos de
cromo son la causa de la diferente biodisponibilidad y toxicidad entre los compuestos de
cromo (III) y cromo (VI). El Cromo (VI) puede coexistir en aguas naturales, efluentes y
suelos dependiendo del pH del medio y sus características redox, puede ser generado por
corrientes de efluentes provenientes principalmente de cromado, pigmentos,
preservación de la madera, anticorrosión y cuero curtido entre otros. (Milovanovic,
2011)
En consecuencia, a los daños a la salud, medio ambiente, que puede ocasionar el Cr

(VI), se ve necesario contar con una metodología que nos permita cuantificar la
concentración de Cr (VI) en muestras ambientales. Por lo cual el presente trabajo tiene
por objetivo Validar el método analítico para la determinación de Cr (VI) en aguas
naturales y residuales por espectrofotometría UV VIS. Para realizar la validación
inicialmente se realizó la verificación de la eficiencia del espectrofotómetro utilizado y
se determinó las condiciones experimentales óptimas del proceso analítico de
determinación de Cr (VI).
3
Los parámetros evaluados en la validación fueron: linealidad y rango de trabajo, límites
de detección y cuantificación, selectividad, precisión, exactitud y robustez según las
norma ISO-17025, también se determinó la concentración de Cr (VI) en muestras reales
de agua residual.
1.1. ANTECEDENTES
Existen muchos estudios que se han ocupado de la repercusión negativa de los metales
pesados en diversos ecosistemas y en la salud del ser humano. Hoy en día se conoce
mucho más sobre los efectos de estos elementos, cuya exposición está relacionada con
problemas de salud como retraso en el desarrollo, varios tipos de cáncer, daños en los
riñones, e incluso con casos de muerte. De ahí, la importancia que tiene el estudio de los
metales pesados en el medio ambiente, lo cual está dado por su alta toxicidad, alta
persistencia y rápida acumulación por los organismos vivos. Sus efectos tóxicos no se
detectan fácilmente a corto plazo, aunque sí puede haber una incidencia importante a
corto y mediano plazo. Estos son difíciles de eliminar del medio, de ahí la necesidad de
contar con métodos de ensayos rápidos para el monitoreo y control de los mismos en el
medio ambiente. (DANNIS A CASCARET, 2010)
De acuerdo con los estándares de calidad del agua establecidos por la Organización
Mundial de la Salud, las principales directrices se encuentran en el control y
cuantificación para cationes como: Aluminio (Al), Antimonio (Sb), Arsénico (As), Bario
(Ba), Boro (B), Cadmio (Cd), Cromo (Cr), Cobre (Cu), Hierro (Fe), Plomo (Pb),
Manganeso (Mn), Mercurio (Hg), Molibdeno (Mo), Níquel (Ni), Nitrógeno total (N
total), Selenio (Se), Sodio (Na), Uranio (U) y Zinc (Zn). En cuanto a los aniones, la
OMS tiene estándares para: Cloruro (Cl-), Cianuro (CN-), Flúor (Fl-), Sulfato (SO4-2),
Nitrato (NO3-) y Nitrito (NO2-). (OMS, 2003)
Existen varios métodos para la determinación de Cr (VI) podemos mencionar algunos a
continuación:
 El método colorimétrico, es útil para la determinación de Cr (VI) en agua natural
o tratada en el intervalo de 100 a 1000 µg/L. Este rango puede ser extendido por
dilución apropiada de la muestra o la concentración y/o el uso de trayectorias de
celda más largas.
4
 La cromatografía de iones con detección fotométrica es un método adecuado
para determinar el Cr (VI) disuelto en aguas subterráneas, y de los efluentes de
aguas residuales industriales en un rango de 0,5 a 5000 µg/L.
 El método de espectrometría de absorción atómica electro térmica es adecuado
para determinar niveles bajos de cromo total (< 50 µg/L) en aguas naturales y
aguas residuales.
 Los métodos de espectrometría de absorción atómica de llama y los métodos de
plasma acoplado inductivamente son apropiados para medir las concentraciones
totales de cromo hasta niveles de ppm (mg/L). (APHA-AWWA-WPCF, 2012)
1.2. PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA

Uno de los mayores problemas medio ambientales están relacionados con los desechos a
los cuerpos de agua de la creciente actividad industrial, minera, agropecuaria y
descargas domesticas que generan efluentes que en muchos casos descargan
directamente a los cursos de aguas superficiales (CONDE, 2018), En nuestro país, en
general, las descargas a cuerpos de agua están actualmente reguladas por la Ley de
Medio Ambiente 1333 y sus reglamentos. En particular, las descargas líquidas
industriales están reguladas por el RASIM sin embargo, muy pocas empresas cumplen
con los límites establecidos, los cuales han sido calificados como muy exigentes por las
industrias.
En cada ciudad la situación de las descargas líquidas industriales es diferente. A

continuación se menciona la situación actual de las ciudades de La Paz y El Alto:
 En la ciudad de La Paz, no existe una planta de tratamiento que reciba las aguas
de desecho industriales. Tampoco existe una normativa que regule éstas
descargas al sistema de alcantarillado (incluidas las de curtiembres), las empresas
en su mayoría, no cuentan con sistemas individuales de tratamiento de efluentes
y por lo tanto, descargan sus efluentes sin tratamiento a los cuerpos de agua.
 En la ciudad de El Alto, la empresa de agua potable y alcantarillado cuenta con
una planta de tratamiento de tratamiento de aguas de desecho, ubicada en
Puchucollo. En vista de que no existe cobertura total de alcantarillado, la planta
5
recibe parcialmente las aguas de desecho industriales (incluyendo las de
curtiembre) y cobra una tarifa por la descarga de aguas a su sistema en función al
caudal, carga contaminante y degradación de la tubería. Algunas industrias
descargan sus efluentes líquidos directamente al suelo o a los ríos. (CPTS, 2006)
El reglamento en Materia de Contaminación Hídrica establece como valor máximo

permisible para el Cr (VI) 0,05 mg/L y como se ha mencionado el Cr (VI) en el agua es
un carcinógeno comprobado para diferentes órganos internos y externos de los
organismos vivos. Las propiedades físicas, químicas y biológicas del cromo favorecen la
disolución en el medio ambiente del agua. (Debabrata Pradhan et.al., 2017)
La importancia de estos problemas, demuestran la necesidad de contar con una

metodología confiable de análisis de Cr (VI), el laboratorio de Química Ambiental de la
CCQ-UMSA no cuenta con un método validado para la determinación de Cr (VI) con el
presente trabajo se pretende validar el método espectrofotométrico que determine Cr
(VI) en agua natural y residual.
1.3. OBJETIVOS
1.3.1. OBJETIVO GENERAL
Validar el método analítico espectrofotométrico, para la determinación de cromo

hexavalente en aguas naturales y residuales, en el Laboratorio de Química
Ambiental de la Carrera Ciencias Químicas (FCPN-UMSA).
1.3.2. OBJETIVOS ESPECIFICOS
 Verificar la eficiencia del espectrofotómetro ultravioleta-visible Genesys

10S, evaluando la exactitud de longitud de onda y exactitud fotométrica.
 Determinar las condiciones experimentales óptimas para la cuantificación
de Cr (VI) por espectrofotometría UV-VIS.
 Determinar los parámetros de la Norma ISO - 17025 referidos a
establecer la linealidad y rango de trabajo, selectividad, límite de
detección, límite de cuantificación, precisión, exactitud y robustez.
6
1.4. JUSTIFICACIÓN
El interés por la validación del método analítico de determinación de Cr (VI) es
originado por el amplio uso de este metal en la industria metalúrgica, en la fabricación
de materiales refractarios, en fabricación de pigmentos, electro-metalizado y curtido de
pieles entre otros. Cantidades considerables de compuestos de cromo son descargados en
el ambiente en forma de residuos líquidos, como consecuencia de estos procesos, dichas
descargas alteran las condiciones naturales del afluente, ocasionando limitantes para el
aprovechamiento del recurso hídrico.
Hoy en día, el cromo sigue siendo detectado en los suministros de agua potable, sin
embargo, a diferencia de décadas anteriores, a nivel mundial se han estipulado valores
con el fin de regularlo, puesto que se propaga fácilmente a través del agua, afectando la
salud del consumidor. (APHA, 1989)
Ahora bien, surge la necesidad de implementar un método analítico que evalúe la

calidad del agua, tanto en fuentes naturales, como en plantas potabilizadoras, contando
que este sistema analítico sea rápido y de fácil manejo al servicio de la población.
Todo método de cuantificación tiene una finalidad, donde el papel de la validación es

verificar que dicho método es adecuado, por lo tanto, una correcta validación debe
detectar la presencia de errores en él y permitir corregirlos. La importancia de validar el
método propuesto es demostrar que las pruebas para la detección y cuantificación de
cromo hexavalente sean confiables y así confirmar que el ensayo tiene las capacidades
de desempeño consistente, junto con otras actividades contenidas en el aseguramiento de
la calidad.
7
CAPÍTULO II
2. MARCO TEÓRICO
2.1. GENERALIDADES DEL CROMO

El cromo (Cr) es el primer elemento en el grupo VIB de la tabla periódica; que tiene un
número atómico de 24, un peso atómico de 51,99 y valencias de (0) y (II a VI). La
abundancia promedio de Cr en la corteza terrestre es de 122 mg/L; en suelos oscila entre
11 a 22 mg/L; en corrientes promedia alrededor de 1 µg/L y en aguas subterráneas es de
100 µg/L (APHA-AWWA-WPCF, 2012).
Las formas más comunes en las que se encuentra este elemento son las valencias (0),
(III) y (VI). El Cr (0), también denominado cromo metálico, se usa en la fabricación de
acero y el Cr (III) y (VI) se utilizan en el cromado, en colorantes y pigmentos, en curtido
del cuero y en la preservación de la madera y, en cantidades pequeñas, en barrenas para
la extracción de petróleo, inhibidores de corrosión, en la industria textil y en el tóner
para copiadoras. El cromo hexavalente Cr (VI) y el cromo Cr (0) son formas producidas
normalmente por procesos industriales, mientras que las formas trivalentes predominan
en organismos vivos. El cromo trivalente Cr (III) es un elemento residual necesario para
mantener un buen estado de salud, ya que ayuda al cuerpo a utilizar el azúcar, la grasa y
las proteínas. (ATDRS, 2006)
2.2. FUENTES DE CROMO EN AGUA

El cromo se encuentra de forma natural y se extrae como óxidos dobles, principalmente
como cromita ( ) y, en menor medida, como crocoita ( ) o óxido de
cromo ( ). La cromita se utiliza casi exclusivamente para la producción de cromo,
el contenido de varía de 40 a 55% (SLOOFF et al., 1990).
El cromo y sus sales se utilizan en las industrias de curtido de cuero y textil teñido, la
fabricación de catalizadores, productos químicos de lavandería, pigmentos y pinturas,
fungicidas, la industria cerámica y vidrio, y en la fotografía, y para el cromo de la
aleación y la producción de metal de cromo, cromado y control de la corrosión
(SLOOFF et al., 1990). Las emisiones no controladas o descargas de residuos de estos
8
sitios industriales, a vertederos, cursos de agua natural, desagües y otros, tienen un gran
potencial para la contaminación de las aguas dulces con formas relativamente tóxicas de
cromo.
2.3. QUÍMICA DEL CROMO EN AGUA

Como se mencionó anteriormente el Cr tiene valencias que van de 0 y II a VI, sin
embargo, sólo la forma hexavalente Cr (VI) y trivalente Cr (III) se encuentran
comúnmente en el medio acuoso. La distribución de los compuestos que contienen Cr
(III) y Cr (VI) depende del potencial redox, el pH, la presencia de oxidantes o
compuestos reductores, la cinética de las reacciones redox, la formación de complejos de
Cr (III) o sales insolubles de Cr (III), y la concentración total de cromo (Figura 1). En el
agua, Cr (III) se produce como un catión que forma complejos acuosos y precipitados de
hidróxido. En las aguas superficiales, la relación de Cr (III) a Cr (VI) varía ampliamente,
y concentraciones relativamente altas de este último se puede encontrar localmente. En
general, las sales de Cr (VI) son más solubles que las de Cr (III), haciendo al Cr (VI)
relativamente móvil. (WHO, 2003)
FIGURA 1 Diagrama pE-pH de cromo acuoso

Fuente: (AWWARF, 2004)
9
La especie dominante de Cr (III) presente en el agua depende del pH, ya que se forman
complejos acuosos como ser: ( ) , ( ) , ( ) . A altas concentraciones
estos iones imparten un color verde al agua. El ( ) es la especie dominante en el
agua subterránea natural con un pH entre 6 y 8. (Calder, 1988). En condiciones
ligeramente ácidas a alcalinas el Cr (III) puede precipitar como hidróxido de cromo
amorfo, ( ) (s). El Cr (III), siendo un ion cargado positivamente, tiene una fuerte
tendencia a formar complejos muy estables con ligandos orgánicos o inorgánicos
cargados negativamente. Por lo tanto, normalmente se encuentra en forma de complejos.
(PICHEL et al., 1976)
Se espera que la movilidad de Cr (III) en el medio acuoso sea baja debido a la baja
solubilidad de ( ) (s) por lo cual precipita además tiene una fuerte adsorción sobre
sólidos en condiciones ligeramente ácidas a alcalinas. El Cr (III) alcanza su solubilidad
mínima en el intervalo de pH de las aguas naturales (pH= 7,5-8,5).
El Cr (VI) existe en solución como especies/iones monoméricos: (ácido

crómico), (cromato ácido) y (cromato); o como el ión dimérico
(dicromato que sólo existe en soluciones fuertemente ácidas). Las especies
monoméricas (cromato y cromato ácido) imparten un color amarillo al agua cuando la
concentración de Cr (VI) es mayor que 1 mg/L. En soluciones diluidas (˂1 mg/L), la
forma predominante es que al estar cargada negativamente, no forma complejos
con superficies con carga negativa (PICHEL et al., 1976). Sin embargo, los aniones de
Cr (VI) se adsorben sobre superficies cargadas positivamente, como los óxidos e
hidróxidos de Fe, Mn y Al. La adsorción de Cr (VI) suele ser limitada y disminuye con
aumento del pH Por lo tanto, Cr (VI) es más móvil que Cr (III). (SLOOFF et al., 1990)
El Cr (VI) se reduce fácilmente por Fe (II), sulfuros disueltos y ciertos compuestos

orgánicos con grupos sulfhidrilo. En contraste, Cr (III) se oxida rápidamente por un
gran exceso de y poco a poco por el oxígeno en condiciones similares a las aguas
naturales. Sobre la base de estas tendencias de conversiones internas, es deseable que los
estándares de calidad del agua se basen en la concentración total de cromo, así como en
la concentración de las especies más tóxicas Cr (VI).
10
2.4. CROMO EN EL PROCESO INDUSTRIAL DE CURTIEMBRES
En las Curtiembres se desarrolla un proceso en el cual las pieles de animales,
especialmente vacunos y caprinos, se someten a una serie de tratamientos con diversas
sustancias llamadas curtientes y otras diversas operaciones, destinadas a producir
modificaciones químicas y físicas en las pieles, con el fin de convertirlas en material
duradero, permeable al agua y a la vez suave, elástico y flexible, el producto final es el
cuero o piel curtida. (CORONA, 1998)
El proceso implicas tres etapas de producción que son: ribera, curtido y acabado, en la
Figura 2 se muestra el diagrama de producción.
FIGURA 2 Diagrama de flujo del proceso de curtido al cromo

Fuente: (ESTRUCPLAN, 2000)
11
En la fase de curtido las pieles reaccionan con productos químicos, estabilizando su
composición orgánica, evitando de esta manera procesos de descomposición y
putrefacción. Esta etapa se inicia con el desencalado que consiste en remover el sulfuro
de sodio y la cal de la piel mediante el uso de dióxido de carbono y sulfato de amonio,
con el fin de eliminar la alcalinidad de la misma, también se adicionan encimas
pancráticas y bacteriales con el fin de modificar la proteína de las fibras de la piel y
convertirla en suave y flexible que facilite la penetración de los curtientes; se continúa
con el piquelado que consiste en tratar las pieles con ácidos y sales como el sulfúrico,
clorhídrico, fosfórico, acético y cloruro sódico, para dar a la piel pH entre 2 y 3.5 y
recibir el curtido mineral a base de cromo; en el curtido se aplica a la piel un curtiente
vegetal o mineral para forma un complejo (cuero) resistente a la degradación física o
biológica, los curtientes vegetales son principalmente taninos, mientras los curtientes
minerales son compuestos químicos inorgánicos y derivados especialmente de cromo,
circonio, aluminio y hierro; el escurrido es la operación mecánica mediante la cual el
cuero pierde la humedad y aumenta su área; por último el rebajado consiste en rebajar
mecánicamente el calibre del cuero hasta obtener un espesor uniforme. (Social, 1996).
Después del curtido al cromo, el cuero se escurre, rebaja y divide mecánicamente para
obtener el "wet blue", un producto cuyo nombre se debe al color azul verde del sulfato
de cromo. Los cueros sin cromo, por su color claro, se llaman "wet white".
2.5. TOXICIDAD DEL CROMO

La toxicidad del cromo depende de la especiación química y, por lo tanto, los efectos
asociados a la salud están influenciados por las formas químicas de exposición (Calder,
1988). Los compuestos de Cr (VI) son mucho más solubles que Cr (III) y son mucho
más tóxicos (mutagénico y cancerígeno) en microorganismos, plantas, animales y
humanos (NTP, 2007). En contraste, Cr (III) tiene toxicidad relativamente baja y es
inmóvil bajo moderadamente condiciones alcalinas a ligeramente ácidas (ZOUBOULIS
et al., 1995).
Cr (III) es un oligoelemento nutricionalmente esencial, no tóxico y poco absorbido. Su

deficiencia resulta en intolerancia a la glucosa, incapacidad para usar glucosa y otros
trastornos metabólicos. El requerimiento diario de cromo se estima en ser 0,5–2 mg de
12
Cr adsorbible (III). Sin embargo, un exceso cantidad de cromo por encima del valor
recomendado puede ser tóxico para la salud humana. La ingestión de 1 a 5 g de cromato
resulta en efectos agudos severos y puede ocurrir la muerte después shock
cardiovascular (OMS, 2003). Cr (VI) es tóxico, produciendo daño hepático y renal,
hemorragia interna y trastornos respiratorios. Una dosis oral de 2 a 5 g de un compuesto
de cromo hexavalente soluble puede ser fatal para un humano adulto. Ingerir menos de 2
g de compuesto de cromo hexavalente puede resultar en riñón y daño hepático después
de 1 a 4 días de exposición (Katz, 1994). Los efectos sub crónicos y crónicos incluyen
dermatitis y ulceración de la piel. Se ha demostrado que Cr (VI) causa cáncer en
humanos y animales a través de la exposición por inhalación, pero no se ha demostrado
que sea cancerígeno por ingestión exposición. Los compuestos de Cr (VI) se han
asociado con cáncer de pulmón en trabajadores de fábrica.
2.6. ESPECTROSCOPIA UV-VIS

La espectroscopia o espectrofotometría UV-Visible es una técnica analítica que permite
determinar la concentración de un compuesto en solución, la espectroscopia se debe a la
capacidad de las moléculas para absorber radiaciones, entre ellas las radiaciones dentro
del espectro UV-visible. Las longitudes de onda de las radiaciones que una molécula
puede absorber y la eficiencia con la que se absorben dependen de la estructura atómica
y de las condiciones del medio (pH, temperatura, fuerza iónica, constante dieléctrica),
por lo que dicha técnica constituye un valioso instrumento para la determinación y
caracterización de biomoléculas. (DIAZ, 2005)
El principio de la espectroscopia ultravioleta-visible involucra la absorción de radiación

ultravioleta – visible por una molécula, causando la promoción de un electrón de un
estado basal a un estado excitado, liberándose el exceso de energía en forma de calor. La
longitud de onda se comprende entre 190 y 800 nm la Figura 3 muestra el espectro
electromagnético. (WIKIPEDIA, 2019)
13
FIGURA 3 Espectro electromagnético
Fuente: (DAVIS, 2010)
La luz visible o UV es absorbida por los electrones de valencia, estos son promovidos a
estados excitados (de energía mayor). Al absorber radiación electromagnética de una
frecuencia correcta, ocurre una transición desde uno de estos orbitales a un orbital vacío.
Las diferencias entre energías varían entre los diversos orbitales. Algunos enlaces, como
los dobles, provocan coloración en las moléculas ya que absorben energía en el visible
así como en el UV.
2.6.1. LEY DE LAMBERT-BEER
La ley Fundamental en que se basa los métodos espectrofotométricos es la ley de

Lambert – Beer se cumple para cualquier proceso de absorción en cualquier zona del
espectro, en el cual establece que existe una relación lineal entre la absorbancia y la
concentración y el camino óptico. La cual se puede expresar en la siguiente formula:
Ecc.1
Dónde:
14
A= absorbancia
= Coeficiente de absortividad Molar
b= camino óptico
C= Concentración
Esta ley es de mucha utilidad para la cuantificación de un determinado analito en una

muestra. Esta ley se ve alterada por algunos factores los cuales se conocen como
desviaciones de la ley de Lambert – Beer y estas desviaciones se clasifican en:
2.6.2. DESVIACIONES REALES
En la deducción de la ley de Beer, no se ha considerado que la absortividad dependa del

índice de refracción, según la expresión:
( )
Ecc.2
Como a su vez, el índice de refracción varía con la concentración, la absortividad no es

rigurosamente constante para cualquier concentración, provocando desviaciones
negativas. De todas formas, en la práctica, para concentraciones menores a 10-3 M
puede prescindirse de la influencia de este factor, al ser el índice de refracción,
esencialmente constante.
2.6.3. DESVIACIONES INSTRUMENTALES
Las fluctuaciones producidas en la corriente eléctrica, la inestabilidad de algunas fuentes

de radiación o la respuesta no lineal del detector pueden originar el funcionamiento
incorrecto de un determinado aparato. Además de éstos, pueden considerarse los
siguientes factores de tipo instrumental como causas de desviaciones de la Ley de Beer:
 Uso de radiación no monocromática

 Presencia de radiación parásita
 Errores de lectura
15
2.6.4. DESVIACIONES QUÍMICAS
Se incluyen en este apartado toda una serie de desviaciones aparentes de la ley de Beer
producidas como consecuencia de procesos químicos en los que participan las especies
absorbentes, como ser:
 Influencia del equilibrio

 Influencia del solvente
 Influencia de la temperatura
 Presencia de impurezas en los reactivos
 Interacciones entre especies absorbentes
 Interacciones soluto-radiación electromagnética
2.6.5. COMPONENTES DE UN ESPECTROFOTÓMETRO
Los componentes principales de un espectrómetro son:
 Fuente de radiación (Fuente de luz), la fuente de luz ilumina la muestra. Las

condiciones necesarias de la fuente son estabilidad, direccionabilidad,
distribución de energía espectral continua y larga vida. Las fuentes empleadas en
los espectrofotómetros son lámparas de tungsteno de bajo voltaje, lámpara
tungsteno-halógena o lámpara de pulso/arco de xenón.
 Selector de longitud de onda (Monocromador), Se necesita una radiación
constituida por un grupo limitado, estrecho y continuo de longitudes de onda
denominadas bandas. Una anchura de banda estrecha aumenta la resolución.
 Recipiente de la muestra (Cubeta de muestra), Es el camino óptico que atraviesa
la radiación electromagnética, los recipientes de la muestra tienen medidas de 0.5
a 5 cm., sus formas pueden ser rectangulares y cilíndricas, el material del que
están elaborados varían dependiendo de la región del espectro electromagnético
en el cual serán utilizadas, así podemos encontrar para la región Ultra violeta:
Cuarzo o sílice fundida, para la región Visible: Cuarzo, sílice fundida, plástico y
para Infrarrojo: cristales de sal (KCl, KBr,)
16
 Detector (Foto multiplicador), Los detectores son transductores que convierten la
energía radiante en señal eléctrica. La propiedad general de los detectores es su
capacidad de producir una señal eléctrica cuando son bombardeados por fotones.
 Amplificador de la señal, que produzca o genere una señal eléctrica mucho
mayor a la señal recibida.
 Dispositivo de lectura (Ordenador)
En la Figura 4 se muestra un esquema del equipo.
FIGURA 4 Esquema del funcionamiento de un espectrofotómetro UV-VIS

Fuente: (MARTÍNEZ et al., 2009)
2.7. CALIBRACIÓN Y/O VERIFICACIÓN DE LA EFICIENCIA DE

ESPECTROFOTÓMETROS UV-VIS
El objetivo de la calibración es evaluar la capacidad de medida de los instrumentos
como objeto de garantizar la comparabilidad de los resultados con los obtenidos por
otros laboratorios. El vocabulario internacional de términos fundamentales y generales
de metrología (ISO, 1993) define así la calibración: “Conjunto de operaciones que
establecen, en unas condiciones especificadas, la relación entre los valores de una
magnitud indicados por un instrumento de medida o un sistema de medida, o los valores
representados por una medida materializada o por un material de referencia, y los
valores correspondientes de esta magnitud realizados por patrones”.
17
Existen varias pruebas para calibrar un espectrofotómetro ultra violeta visible, estas
incluyen la exactitud, reproducibilidad de la longitud de onda, y la exactitud y la
reproducibilidad fotométrica. En el presente trabajo sólo se hará la verificación de la
exactitud de longitud de onda y exactitud fotométrica en el rango visible, por no contar
con los materiales de referencia necesarios.
2.7.1. EXACTITUD DE LONGITUD DE ONDA
Es definida como la desviación de la longitud de onda leída a una banda de absorción o

emisión de una banda de longitud de onda conocida. Esta desviación puede ser causas de
errores significantes en las medidas de los análisis cualitativos y cuantitativos.
La exactitud de longitud de onda es determinada por comparación entre las medidas

obtenidas de un material de referencia y el valor estándar establecido en el certificado
del material de referencia como se muestra en la Figura 5. Entre los materiales de
referencias utilizados tenemos un material óptico neutro el cual tiene poca dependencia
de la longitud de onda para las transmitancias o absorbancias es deseable porque este
elimina la dependencia del ancho de banda espectral de las mediciones. (MARTÍNEZ et
al., 2009)
Prueba: La exactitud de la longitud de onda se verifica midiendo un estándar de

referencia de longitud de onda conocida, con picos de absorción o emisión bien
caracterizado y comparando la longitud de onda del pico registrado contra el valor de
longitud de onda declarado en el certificado del estándar de referencia.
FIGURA 5 Efecto de la exactitud de longitud de onda en una medición UV-VIS

Fuente: (MARTÍNEZ et al., 2009)
18
2.7.2. EXACTITUD FOTOMÉTRICA
La exactitud fotométrica es determinada comparando la diferencia entre la absorbancia

medida del material estándar de referencia y el valor estándar establecido. Entre los
materiales de referencia utilizados tenemos un material óptico neutro el cual tiene poca
tendencia de la longitud de onda para la transmitancia o absorbancias es deseable porque
este elimina la dependencia del ancho de banda espectral de las mediciones. (VI
IBEROLAB, 2015)
Prueba en el rango visible: Realizar 6 lecturas consecutivas de la solución de sulfato de

cobre en ácido sulfúrico a las longitudes de onda de 600, 650, 700 y 750 nm, registrando
los valores y confrontándolos con los valores de referencia.
2.8. VALIDACIÓN DE MÉTODOS ANALÍTICOS

La validación parte del concepto de la norma NTC/ISO/IEC 17025:2005 es, “La
confirmación, a través del examen y el aporte de evidencias objetivas, de que se
cumplen los requisitos particulares para un uso específico previsto” (IBMETRO, 2018).
Es fundamental que los laboratorios dispongan de medios y criterios objetivos para
demostrar por medio de la validación que los métodos de ensayo reproducen resultados
confiables y adecuados a la calidad deseada.
Es importante, cumplir las normativas (NB – ISO – IEC 17025) como:
 Optimizar los procesos.

 Asegurar la calidad/mejorar la productividad.
 Reducir costos
2.8.1. IMPORTANCIA DE VALIDAR UN MÉTODO ANALÍTICO
Un método debe validarse cuando es necesario verificar que sus parámetros de

desempeño cumplen en su totalidad la calidad deseada brindando seguridad y respaldo a
una investigación analítica; por ejemplo cuando se desarrolla un nuevo procedimiento
para solucionar un problema específico, cuando se requiere incorporar mejoras,
extenderlo o cuando el control de la calidad indica que dicho procedimiento establecido
está cambiando con el tiempo.
19
El laboratorio debe validar métodos no normalizados, métodos diseñados / desarrollados
por el laboratorio, métodos normalizados usados fuera de su alcance propuesta y
modificaciones de método normalizados para confirmar que los métodos se ajustan al
uso propuesto. La validación establece un método y confirma su desempeño de
apreciaciones cualitativas por parte del laboratorio en general, realizando mediciones
analíticas que diariamente varios laboratorios van desarrollando, por ejemplo: como
apoyo en la salud, para verificar los parámetros de calidad de agua para consumo
humano, para verificar la composición nutricional en inocuidad alimentaria y evaluación
de elementos toxico en aguas y alimentos. La validación de métodos analíticos junto con
otras actividades englobadas en el área del aseguramiento de la calidad, otorgando
confianza en los resultados obtenidos. (TOLA, 2016)
2.8.2. CUANDO REALIZAR UNA VALIDACIÓN
El proceso de validación debe realizarse cuando se presente alguna de las situaciones

que se expone a continuación:
 Un nuevo método
 Un método ya establecido revisado para incorporar mejoras o extenderlo a un
nuevo problema
 Cuando el control de calidad indica que el método ya establecido está cambiando
con el tiempo
 Un método establecido usado en un laboratorio diferente o con diferentes
analistas o con diferente instrumentación
 Para demostrar la equivalencia para dos métodos es decir: un método nuevo y
uno de referencia.
2.9. PARÁMETROS DE VALIDACIÓN
2.9.1. LINEALIDAD Y RANGO DE TRABAJO
La linealidad es la capacidad del método analítico para obtener resultados directamente

proporcionales a la concentración o cantidad del analito en un rango definido. Se
determina mediante el tratamiento matemático de los resultados obtenidos en el análisis
20
del analito a diferentes cantidades o concentraciones. La selección del rango y del
número de puntos experimentales está estrictamente relacionada con la aplicación del
método.
Se puede determinar la linealidad del rango de trabajo (Figura 6) mediante un gráfico de

concentración versus respuesta también llamado curva de calibración. Se establece cada
día con una cierta cantidad de valores formados por un blanco y los patrones de valores
teóricos conocidos en este sentido se recomienda partir de valores de cero o cercanos al
cero y valores superiores.
Después de establecer el comportamiento lineal del método se debe realizar la curva de

calibración graficando los datos de concentración de los estándares (X) versus la lectura
observada (Y).
FIGURA 6 Intervalo de trabajo

Fuente: (Callejas, 2010)
21
2.9.1.1. EVALUACIÓN DE LOS RESULTADOS
La linealidad es obtenida por calibración interna o externa y formulada como expresión

matemática en forma de una ecuación de regresión lineal, determinada por el método de
mínimos cuadrados (sin forzar pasar por el origen). (IBMETRO, 2018)
Una ecuación de recta que relaciona dos variables es:
Ecc.3
Dónde:
y = respuesta de la medida (absorbancia, altura o área de pico y otros)
x = concentración
b = inclinación de la curva de calibración (sensibilidad)
a = intersección con el eje y cuando x=0
Antes de hallar la ecuación de regresión lineal es necesario realizar un tratamiento

estadístico de los datos obtenidos para descartar la presencia de datos anómalos. Dos de
las pruebas estadísticas utilizadas con mayor frecuencia en un grupo de datos único son
la prueba de Dixon y la prueba de Grubbs. La prueba de Grubbs utiliza una estadística
de prueba, T, que es la diferencia absoluta entre el valor atípico, Xo, y el promedio de la
muestra dividida por la desviación estándar de la muestra, s.
| ̅|
Ecc.4
Dónde:
Xo = valor sospechoso o aberrante
̅ = promedio de la muestra
S = desviación estándar
Si el Gcalculado˃Gtablas, el valor sospechoso es atípico o aberrante
22
Para determinar si el rango de trabajo es el correcto se realiza la validación de la
dispersión de las medidas, es decir, estudio de las varianzas a lo largo de la curva. El
método de los mínimos cuadrados supone que los residuos tienen una misma varianza.
En la calibración esto significa que la precisión de las medidas es independiente del
valor de la concentración. Esta condición de varianza uniforme es llamada
HOMOCEDASTICIDAD.
Para la comparación de varianzas se utiliza el Test “C” de Cochran, en el cual se utiliza

la siguiente ecuación:
∑
Ecc.5
Si Ccal>Ctab hay una condición de heterocedasticidad
Si Ccal<Ctab hay una condición de homocedasticidad
Posteriormente, se realiza el método de mínimos cuadrados para hallar los valores de

ecuación de regresión lineal, las ecuaciones utilizadas son:
∑ ∑
Ecc.6
∑( ̅ )( ̅)
∑( ̅)
Ecc.7
∑( ̅ )( ̅)
Ecc.8
√∑( ̅ ) ∑( ̅)
El coeficiente de correlación (r) indica el grado de relación entre la variable

concentración (x) y la variable respuesta (y) de la curva de calibración. Los valores
máximos que puede alcanzar son de -1 y 1, el valor máximo de 1 indica una correlación
positiva perfecta. Para una curva de calibración es recomendable que el coeficiente de
correlación obtenida sea mayor o igual a 0,999 aunque para elementos trazas se admite
un valor igual o mayor que 0,99. (CONDE, 2018)
Para contar con un mejor indicador se puede realizar una evaluación de curva de
calibración global, haciendo repeticiones de la curva en las mismas condiciones,
23
realizando una evaluación estadística de prueba t-Student para el coeficiente de
correlación ( r ) que es un test de grado de relación entre la concentración y la respuesta
el t crit se calcula por medio de tablas con n-2 grados de libertad, para el nivel de
confianza requerido del 95% (α = 0.05), dos-colas, en este caso para un “P” que
depende de los niveles de calibración (número de puntos usados en su cálculo).
Hipótesis
Ho: r = 0 No Existe correlación entre X y Y Sí texp ˂ ttab
H1: r ≠ 0 Existe correlación entre X y Y Sí texp ˃ ttab
Se calcula el texp con la ecuación:
| |√
Ecc.9
√( )
2.9.2. LÍMITE DE DETECCIÓN Y LÍMITE DE CUANTIFICACIÓN
En términos generales, el límite de detección (LOD) de un analito se puede describir

como aquella concentración que proporciona una señal en el instrumento (y)
significativamente diferente de la señal del “blanco” o “ruido de fondo”. Esta
descripción proporciona al analista un buen margen de libertad para decidir la definición
exacta del límite de detección, basada en una adecuada interpretación de la frase
“significativamente diferente”. (MILLER, 2002)
El límite de cuantificación (LOQ) estrictamente es la concentración más baja del analito

que puede ser determinada con un nivel aceptable de precisión de repetibilidad y
veracidad. También se define por diversas convenciones como la concentración del
analito correspondiente al valor del blanco de muestra más 5, 6 ó 10 desviaciones
estándar de la media del blanco. Algunas veces también se conoce como “límite de
determinación”. LOQ es un valor indicativo y no deberá usarse en la toma de decisiones.
(EURACHEM, 2005)
24
Existen diferentes metodologías para calcular los límites de detección y cuantificación
los cuales son:
 A partir de la medición de una matriz sin analito

 A partir de la medición de una matriz fortificada
 A partir de la recta de calibración
 A partir de la relación instrumental señal/ruido
2.9.2.1. MEDICIÓN DE UNA MATRIZ SIN ANALITO
Se recomienda hacer 10 determinaciones independientes de una “muestra blanco”

(matriz sin analito) y calcular la desviación estándar de los resultados, los límites se
calculan con las siguientes ecuaciones:
Ecc.10
Ecc.11
Dónde:
Xb = valor medio obtenido para la muestra blanco
S = desviación estándar de los resultados
2.9.2.2. MEDICIÓN DE UNA MATRIZ FORTIFICADA
Se recomienda hacer 10 determinaciones independientes de una matriz fortificada a baja

concentración y calcular la desviación estándar de los resultados, las ecuaciones que se
utilizan son:
Ecc.12
Ecc.13
2.9.2.3. MEDICIÓN A PARTIR DE LA RECTA DE CALIBRACIÓN
A partir de la pendiente de la recta de calibración (b) y de la desviación estándar de la

respuesta (Sa) se calculan los límites de detección y cuantificación con las siguientes
expresiones:
25
Ecc.14
Ecc.15
2.9.3. SELECTIVIDAD
Según la definición de la IUPAC la selectividad es la capacidad de un método para ser

utilizado para determinar analitos particulares en mezclas o matrices, sin interferencias
de otros componentes de similar comportamiento.
Una interferencia es aquella especie química que causa un error sistemático en la

determinación de un analito.
Se pueden dar dos casos:
 La presencia de interferencias que puedan dar una respuesta analítica que no se

diferencie de la respuesta del analito.
 La presencia de interferencias que afecten la señal del analito (“efecto matriz”).
2.9.3.1. LA MATRIZ NO AFECTA A LA SEÑAL DEL ANALITO
En el caso que la matriz no afecta a la señal del analito en el rango de concentración

estudiado se procede a la preparación de dos grupos de muestras de prueba, una con
matriz y otra sin matriz, ambas con idéntica concentración en cada nivel de
concentración de interés. Para la evaluación de los resultados se prosigue con los
siguientes cálculos:
 Test de valores aberrantes o atípicos (Test de Grubbs)

 Test F (Snedecor) de Homogeneidad de varianzas y Test t (Student) de
Comparación de las medias obtenidas.
La prueba F (Snedecor) de Homogeneidad de varianzas se plantea de la siguiente

manera:
Hipótesis
26
Ho: = No existe diferencia significativa entre las varianzas Sí Fcalc˂ Ftab
H1: ≠ Existe diferencia significativa entre las varianzas Sí Fcalc ˃ Ftab
Se calcula el estadístico (F) con la ecuación:
Ecc.16
Dónde el resultado debe ser mayor a 1.
El valor de F tabulado con (n1-1) GL como numerador y (n2-1) GL como denominador,

es obtenido en la tabla estadística (Anexo 2) con ayuda de un hoja de cálculo;
usualmente, se adopta un nivel de confianza de 95%.
Sí el Fcalc˂ Ftab la matriz no tiene un efecto significativo sobre la precisión. Las

desviaciones estándar de los grupos de pruebas (con matriz y sin matriz) pueden ser
agrupados y la significación de las diferencias de las medias de los dos conjuntos de
muestras puede ser probado con la prueba t-student para medias emparejadas se
determina de la siguiente forma.
Hipótesis
Ho: ̅ = ̅ Las medias son estadísticamente iguales Sí tcalc˂ ttab
H1: ̅ ≠ ̅ Las medias no son estadísticamente iguales Sí tcalc ˃ ttab
El valor del estadístico t se calcula con las ecuaciones:
(̅ ̅ )
Ecc.17
√
[( ) ( ) ]
√ Ecc.18
( )
2.9.3.2. MATRIZ CON PRESENCIA DE ANALITO
La selectividad en este caso es validada por la comparación de las inclinaciones de las

curvas de adición de patrón. Se preparan dos grupos de muestras que contengan la
27
misma adición de analito para cada nivel de concentración. Un grupo contiene la matriz
de la muestras (conteniendo un nivel básico de analito) y otro grupo no incluye la matriz
de muestra.
Si las inclinaciones fueran consideradas estadísticamente iguales, no hay efecto matriz, y

el uso del método de adición de patrón no es necesario.
El test t-student para igualdad de inclinaciones se desarrolla de la siguiente forma:
Hipótesis
Ho: = Las inclinaciones son estadísticamente iguales Sí tcalc˂ ttab
H1: ≠ Las inclinaciones no son estadísticamente iguales Sí tcalc ˃ ttab
Se calcula el estadístico t a partir de las ecuaciones:
| |
Ecc.19
√
( ) ( )
√ Ecc.20
∑ ( ̅) Ecc.21
( ̂)
√ Ecc.22
Dónde:
GL = grados de libertad del residuo (n-2)
ESD = error estándar
RSD = desviación estándar del residuo
Sí el t-calculado˂t-tabulado indica que b1=b2 por lo tanto no hay efecto de matriz.

Consutar el t.tabulado para GL1+GL2.
28
2.9.4. PRECISIÓN
La precisión mide la concordancia de los resultados analíticos obtenidos de una serie de

mediciones repetidas del mismo analito realizadas en las condiciones previstas en el
método. La precisión también refleja los errores aleatorios que se producen cuando se
utiliza un método. Las condiciones en que se mide la precisión se dividen, según opinión
general, en condiciones repetidas. (BORIS DUFFAU, 2010)
La precisión de un método de ensayo puede evaluarse en diferentes condiciones

experimentales:
 Repetibilidad
 Precisión intermedia
 Reproducibilidad
Las condiciones de Repetibilidad (r) son las siguientes:
 El mismo método
 La misma muestra (homogénea)
 En un solo laboratorio
 Un solo analista
 Con el mismo equipamiento
 En un corto intervalo de tiempo
Se compara los valores obtenidos en dos o más días diferentes, para uno o varios niveles
de concentración. Se realiza el Test F (Snedecor) de Homogeneidad de varianzas, en
caso de no existir diferencias significativas en las varianzas, es decir, Fcalculado˂Ftabulado se
combinan las repetibilidades con la ecuación 23:
( ) ( )
√ Ecc.23
Las condiciones de Precisión intermedia (Rw) son las siguientes:
29
 En un solo laboratorio
 Diferentes analistas
 Con distinto equipamiento
 En mayores intervalos de tiempo
Las condiciones de Reproducibilidad (R) son las siguientes:
 En distintos laboratorios
 Diferentes analistas
 Con distinto equipamiento
 En intervalos largos de tiempo
2.9.5. EXACTITUD
La exactitud expresa la cercanía de un resultado al valor verdadero aplicado a un

conjunto de resultados de ensayo, y supone una combinación de componentes aleatorios
y un componente común de error sistemático o sesgo. La validación de un método busca
cuantificar la exactitud probable de los resultados evaluando tanto los efectos
sistemáticos como los aleatorios sobre los resultados. Normalmente la exactitud se
estudia con dos componentes: la veracidad y la precisión, la veracidad es una expresión
de cuan cercana se encuentra la media de un conjunto de resultados respecto al valor
real. (EURACHEM, 2005)
2.9.5.1. VERACIDAD
La evaluación práctica de la veracidad se fundamenta en la comparación de la

media de los resultados de un método con relación a valores conocidos, es decir,
la veracidad se determina contra un valor de referencia (o sea, un valor verdadero
o un valor verdadero convencional).
Se dispone de dos técnicas básicas para la evaluación: la verificación con respecto a los
valores de referencia de un material caracterizado o de otro método caracterizado. Estos
valores de referencia son idealmente trazables a patrones internacionales y los materiales
30
de referencia certificados por lo general se aceptan como medio de proveer valores
trazables.
No debemos confundir la exactitud con la precisión (Figura 7), pues la precisión está
relacionada con la dispersión de una serie de mediciones, pero no da ninguna indicación
de lo cerca que está el valor verdadero. Para que un método sea exacto se requiere de un
cierto grado de precisión con el uso de material de referencia.
FIGURA 7 Relación de los criterios de exactitud y precisión

Fuente: (FERNÁNDEZ, 2010)
En el caso de no contar con un material de referencia certificado y se vea impedida la

posibilidad de comparar los resultados con un método alternativo, se pueden realizar
ensayos de recuperación.
2.9.5.2. ENSAYO DE RECUPERACIÓN
En un ensayo de recuperación se ve la capacidad que tiene un procedimiento analítico

para determinar cuantitativamente una especie química que ha sido adicionada a una
muestra. Se expresa como Porcentaje de Recuperación. (COY, 2006)
31
Como criterio de aceptación se deben analizar al menos seis mediciones en lo posible
en tres niveles de manera que los niveles nos permitan entregar la mejor información
posible respecto a la capacidad de recuperación del método, calculada por la ecuación:
[ ] Ecc.24
Dónde:
Xe= Concentración del analito en la muestra fortificada
Xo= Concentración del analito en la muestra
Xref= Concentración del analito adicionado en la muestra
2.9.6. ROBUSTEZ
La robustez de un procedimiento analítico es una medida de su capacidad para

mantenerse sin cambios ante pequeñas pero deliberadas variaciones en los parámetros
del método, que provee una indicación de su confiabilidad durante el uso normal. (ICH,
2002)
Para su determinación se puede considerar lo siguiente:
 Conocer las condiciones del medio.

 Definir las condiciones que afectan al proceso analítico.
 Seleccionar el objetivo de evaluación de la conformidad a ser utilizado, muestras
de referencia y las muestras a determinar.
 Realizar mediciones bajo las condiciones modificadas.
Establecer niveles de influencia para cada una de las variables modificadas, sabiendo
que la prueba de robustez tiene por objeto optimizar el proceso analítico, describiendo
que bajo sus condiciones establecidas se puede obtener resultados suficientemente
exactos, de manera que la prueba funcione confiablemente si se utiliza en otros
laboratorios.
32
2.9.6.1. DISEÑO EXPERIMENTAL DE PLACKETT-BURMAN
Se evalúan siete parámetros diferentes o menos (A, B, C, D, E, F y G) a través de ocho

experimentos. Cada parámetro es medido en dos niveles: “-” representa el parámetro sin
modificar y “+” representa el parámetro modificado. Los parámetros pueden
corresponder también a variables no cuantitativas o no continuas, por ejemplo tipo de
columna, analista, número de extracciones, etc. En la medida de lo posible los 8
experimentos deberían hacerse en condiciones de repetibilidad.
Los ocho experimentos realizados se presentan en la Figura 8:
FIGURA 8 Diseño experimental de Plackett-Burman

Fuente: (IBMETRO, 2018)
2.9.6.2. EVALUACIÓN
El efecto producido por la variación de un parámetro particular se estima de la siguiente

forma, por ejemplo, para el parámetro A:
( ) ( )
Ecc.25
33
Una vez calculada la diferencia para cada parámetro, se compara la diferencia con
√ , en donde Sr es la desviación estándar del método en condiciones de
repetibilidad. Entonces sí:
| | √ Ecc.26
El parámetro modificado tiene un efecto significativo, a un nivel de confianza del 95%.
2.9.6.3. MÉTODO SIMPLIFICADO
Si no se quieren evaluar tantos factores, se puede implementar una metodología

alternativa más simple. En este caso se evalúa cada factor a partir del análisis de un
material de referencia en las condiciones normales y en las condiciones modificadas.
Se llevan a cabo mediciones replicadas en ambas condiciones y se comparan los

promedios de los resultados a través de un test de t de muestras independientes.
34
CAPÍTULO III
3. METODOLOGÍA EXPERIMENTAL
3.1. TIPO DE INVESTIGACIÓN

La presente investigación es de tipo experimental cuantitativa y estadística; donde se
realiza una amplia revisión bibliográfica sobre la teoría de validación y de los métodos
existentes para la determinación espectrofotométrica de Cromo hexavalente, en aguas
naturales y residuales. Tomando como referencia los métodos normalizados de análisis,
entre los trabajos de mayor importancia se tiene a: Standard Methods for The
Examination of Water and Wastewater 22nd Edition. Así mismo, se tomó en cuenta el
procedimiento empleado anteriormente en la Unidad de Análisis de Calidad Ambiental
(UACA) que fue parte del Instituto Boliviano de Ciencia y Tecnología Nuclear(IBTEN),
documentos legales como la Norma Boliviana dictada bajo el amparo de la ley de
Gestión Ambiental Nº 1333, reglamentos en materia de contaminación hídrica entre
otras.
3.2. ZONA DE ESTUDIO
3.2.1. AGUA NATURAL
Se denomina como agua natural a aquellas aguas cuyas propiedades originales no han
sido modificadas por la actividad humana. (RMCH, 1995).
3.2.1.1. Vertientes de la Ciudad de La Paz
Por su situación geográfica y topográfica, la ciudad de La Paz, es una cabecera de

cuenca donde se ha identificado aproximadamente 200 ríos y más de 100 vertientes que
pasan por toda la mancha urbana; de acuerdo a datos de la alcaldía. (Paco, 2018) Por la
gran presencia de vertientes en la ciudad se establece como zona de estudio en el caso de
agua natural. En el presente trabajo la muestra fue recolectada de la vertiente de la gruta
de la Virgen de Lourdes que se encuentra ubicada entre la avenida del Poeta y la avenida
del Libertador, en la zona sur de la ciudad de La Paz a 16°30'42" latitud Sur y
35
68°07'10.0" longitud Oeste. La Figura 9 y 10 muestran imágenes satelitales del punto de
muestreo y toma de muestra.
FIGURA 9 Zona de la toma de muestra

Fuente: Google Maps
FIGURA 10 Toma de la muestra de agua natural
36
3.2.2. AGUA RESIDUAL
Las aguas residuales son cualquier tipo de agua cuya calidad se vio afectada
negativamente por influencia antropogénica. Las aguas residuales incluyen las aguas
usadas, domésticas, urbanas y los residuos líquidos industriales o mineros eliminados, o
las aguas que se mezclaron con las anteriores (aguas pluviales o naturales).
(WIKIPEDIA c. d., 2019)
3.2.2.1. Río Seco, ciudad de El Alto
El Río seco es uno de los ríos más importantes de la Ciudad de El Alto, se inicia en los
nevados del Huayna Potosí y recorre cinco Distritos: 9, 6, 5, 4 y 3, atravesando un total
de 23 zonas; prácticamente cruza toda el área urbana hasta llegar a la Planta de
Tratamiento de Aguas Residuales de Puchuckollo (Figura 11); posteriormente el agua
retornará a rio Seco, para luego unirse al río Pallina y seguidamente al río Katari para
finalmente desembocar en la Bahía de Cohana. Se caracteriza por permanecer con poco
caudal de agua durante el año, sin embargo su riesgo para la población se multiplica en
gran manera en las épocas de lluvia, debido a la presencia de inundaciones que afectan a
diferentes zonas; y el relave de toda la contaminación depositada en este cuerpo de agua
recorrerá río abajo hasta llegar a la Bahía de Cohana. (APAZA, 2011)
FIGURA 11 Mapa Hidrográfico mostrando el curso natural del Río Seco

Fuente: (Arismendi, 2011)
37
Se puede observar que sus aguas superficiales son víctimas de contaminación urbana
con aguas residuales domésticas, contaminación por uso comercial del agua (lavado y
engrase de autos), contaminación industrial y otros. Por tal situación se recolectaron tres
muestras del curso de agua del Río Seco que atraviesa la zona Mercedario del distrito 4
de la ciudad de El Alto, donde hay actividad industrial de curtiembres artesanales que
vierten sus efluentes al río. La Figura 12 muestra una imagen satelital de los puntos de
muestreo.
 Punto 1 (16°30'42.2908"; 68°07'10.1784

 Punto 2 (16°30'42.2908"; 68°07'10.1784
 Punto 3 (16°30'42.2908"; 68°07'10.1784
FIGURA 12 Puntos de Muestro en el Río Seco, Distrito 4 Ciudad de El Alto

Fuente: Elaborado en Google Maps
38
FIGURA 13 Vista de la situación de contaminación del Río Seco, Distrito 4
La Figura 13 y 14 muestran el estado de contaminación del río y la toma de muestra.
FIGURA 14 Toma de la muestra de agua residual
39
3.3. TOMA Y CONSERVACIÓN DE LA MUESTRA
El protocolo de muestreo es un proceso específico, diseñado a través de nuestra
experiencia del muestreo en campo y se sigue para aprovechar al máximo el tiempo de
trabajo, sabiendo con anticipación lo que se va a realizar en la salida de campo. El
apropiado muestreo y medición de campo de ciertos parámetros fisicoquímicos son
críticos para determinar resultados de alta calidad y una interpretación confiable de
datos. (CONDE, 2018)
Para iniciar el muestreo se debe preparar todos los materiales y equipos necesarios:
 Botellas para muestras, debidamente rotulados.

 Hoja para tomar datos.
 Contenedor para las muestras
 pH- metro y Multiparámetro de campo.
 Etiquetas.
 Cinta adhesiva.
 GPS
La localización del sitio de muestreo debe ser registrada con tanta precisión como sea
posible, usando un sistema de posicionamiento global (GPS), se debe indicar puntos de
referencia cercanos al punto de muestreo, si los hay, para luego proceder a las
mediciones fisicoquímicos como la conductividad, temperatura, pH y otros.
Según los análisis que vayan a realizarse se definirá el tipo de envase a utilizar. El
mismo estará en función de la cantidad de muestra a tomar y de la necesidad de dejar (en
análisis microbiológicos) o no (en la mayoría de los análisis) una cámara de aire, o un
espacio para mezclas o para el agregado de algún reactivo que permita la conservación
de la muestra. En la Figura 15 se muestra los diferentes tipos de envase que se deben
utilizar para distintas fines.
40
FIGURA 15 Tipos de envase, preservación de diferentes muestras ambientales
Fuente: (Saénz, 2015)
3.3.1. Tipos de muestras
 Muestras simples: Son las que se toman en un tiempo y lugar determinado para
su análisis individual.
 Muestras compuestas: Son obtenidas por mezcla y homogenización de
muestras simples recogidas en el mismo punto y diferentes tiempos.
 Muestras integradas: Son obtenidas por mezcla y homogenización de muestras
simples recogidas en puntos diferentes y simultáneamente.
3.3.2. Conservación de la muestra
En el presente trabajo se tomaron muestras simples, para la determinación de los

siguientes parámetros:
 Alcalinidad total
 Cationes mayoritarios
 Aniones mayoritarios
 Cromo (VI)
41
Cada envase utilizado se enjuagó tres veces con la muestra antes de tomar el volumen
final, los envases se trasladaron y se mantuvieron bien sellados y etiquetados en el
contenedor de muestras con contenido de hielo para mantener las muestras a
temperaturas bajas, en el laboratorio se almacenan a 4 ºC. De acuerdo a los parámetros
que se vayan a determinar la muestra se preserva de diferente forma. En el caso de
cationes mayoritarios se preserva con ácido nítrico previa filtración por 0,45 µm , las
muestras para la determinación de aniones mayoritarios se filtran por 0,45 µm y se
congelan analizándolas en el menor tiempo posible, las muestras para el análisis de
alcalinidad se analizan de inmediato sin necesidad previa de filtración y por último para
la determinación de Cr (VI) las muestras deben ser filtradas y preservadas durante las
primeras 24 horas con el procedimiento explicado en adelante para tal caso.
3.4. DETERMINACIÓN DE PARÁMETROS FÍSICO-QUÍMICOS

Se realizó el estudio de parámetros físico-químicos de las matrices de agua natural y
residual donde se determinaron: pH, temperatura, conductividad eléctrica, alcalinidad
total, cationes mayoritarios, aniones mayoritarios. Se utilizaron los siguientes métodos:
 pH: Determinación potenciométrica, in situ.

 Conductividad eléctrica: Determinación conductimétrica, in situ.
 Oxígeno disuelto: Determinación electrométrica, in situ.
 Alcalinidad: Titulación potenciométrica.
 Cationes mayoritarios: Espectroscopia de Absorción Atómica con llama
 Aniones mayoritarios: Cromatografía Iónica
3.5. EQUIPOS, MATERIALES Y REACTIVOS

Los equipos, materiales y reactivos utilizados durante el desarrollo del proyecto son los
que muestran en las Tablas 1 y 2.
42
Tabla 1 Equipos y materiales utilizados en el desarrollo del proyecto.
EQUIPO CARACTERÍSTICAS UBICACIÓN
Laboratorio de Química
Espectrofotómetro UV-VIS GENESYS 10S UV-VIS
Ambiental CCQ – UMSA
SPECTROQUANT ® Laboratorio de Productos

Espectrofotómetro UV-VIS
PHARO 300 Naturales CCQ-UMSA
Balanza analítica SPAN
pH-metro HACH
Multiparámetro HACH
Espectrómetro de PERKIN ELMER Laboratorio de Química

Absorción Atómica ANALYST 200 Ambiental CCQ – UMSA
THERMO SCIENTIFIC Laboratorio de Química

Cromatógrafo de Iones
ICS-1100 Ambiental CCQ – UMSA
MATERIALES CARACTERÍSTICAS UBICACIÓN
2 Matraces aforados de Laboratorio de Química

Tipo A
1000 Ml Ambiental CCQ – UMSA
1 Matraz aforado de 500 Ml Tipo A
1 Matraz aforado de 250 Ml Tipo A
1 Matraz aforado de 100 Laboratorio de Química
Tipo A
mL Ambiental CCQ – UMSA
43
MATERIALES CARACTERÍSTICAS UBICACIÓN
12 Matraces aforados de 25 Laboratorio de Química

Tipo A
mL Ambiental CCQ – UMSA
12 Vasos de precipitados de Laboratorio de Química
Pyrex
50 mL Ambiental CCQ – UMSA
Micro pipeta de 100 µL EPPENDORF
Puntas para micropipetas de Laboratorio de Química
EPPENDORF
100, 1000 y 5000 µL Ambiental CCQ – UMSA
Bureta de 50 mL Tipo A
Tabla 2 Reactivos utilizados en el desarrollo del trabajo
REACTIVOS CARACTERÍSTICAS APLICACIÓN
Verificación del
Dicromato de potasio NIST (Standard Reference
espectrofotómetro UV-VIS,
p.a. Material) 935a
curva de Calibración
Sulfato de cobre FISCHER SCIENTIFIC Verificación del
pentahidratado p.a. COMPANY espectrofotómetro UV-VIS
Ácido fosfórico
EMSURE ISO Preparación de la muestra
concentrado p.a.
Ácido sulfúrico
EMSURE ISO Preparación de la muestra
concentrado p.a.
44
REACTIVOS CARACTERÍSTICAS APLICACIÓN
1,5 Difenilcarbazida FISCHER SCIENTIFIC

Preparación de la muestra
(DPC) p.a. COMPANY
Acetona p.a. MERCK Preparación del DPC
Preparación de la solución
Sulfato de Amonio p.a. MERCK
tampón
Preparación de la solución
Hidróxido de Amonio MERCK
tampón
FISCHER SCIENTIFIC
Hidróxido de Sodio Conservación de la muestra
COMPANY
FISCHER SCIENTIFIC
Cloruro de Sodio Pruebas de conductividad
COMPANY
3.6. METODOLOGÍA ANALÍTICA
3.6.1. VERIFICACIÓN DEL ESPECTROFOTÓMETRO GENESYS 10S
UV-VIS
3.6.1.1. Evaluación de la exactitud de Longitud de onda
La evaluación de la exactitud de longitud de onda se la realizó con el estándar de la

NIST, SRM 935a, que consta de cristales de dicromato de potasio que tiene una pureza
del 99,97% el cual es estable indefinidamente. (NIST, 2000).
El uso de 935a SRM requiere una cuidadosa preparación de las soluciones de la fracción
de masa conocida, en ácido perclórico 0,001 N. No se requiere secado en la preparación
del uso de este material y debe utilizarse a medida que se lo necesite. Todas las
soluciones de dicromato de potasio se preparan, y se expresan, sobre una base de
fracción de masa. Cada solución se prepara individualmente. Se preparó un blanco de
disolvente diluyendo 1 mL de 1 N de ácido perclórico a 1 L con agua desionizada.
45
Para verificar la exactitud de longitud de onda se preparó por pesada una solución de 40
mg/kg y se realizó un barrido espectral por triplicado durante una semana, los valores
obtenidos para los máximos y mínimos de absorción se comparan con valores de
referencia que se muestran en la Tabla 3.
Tabla 3 Valores de longitud de onda de referencia, del espectro de absorción de la

solución de Dicromato de potasio 0,040 mg/kg en ácido perclórico 0,001 N.
Valores de Referencia
Longitud de Onda λ
Valle 235
Pico 257
Valle 313
Pico 350
Fuente: (R.W. Burke and R. Mavrodineanu, 1977)
3.6.1.2. Evaluación de la exactitud fotométrica en el rango Visible
Se hizo la evaluación de la exactitud fotométrica en el rango Visible porque es la región

de trabajo, para ello se preparó una solución de Sulfato de Cobre pentahidratado
( ) en ácido sulfúrico.
Se disolvió en un vaso de precipitado 20,0 g del sulfato de cobre pentahidratado de una

pureza del 99,9% en suficiente agua desionizada y se adicionó con cuidado 10 mL de
ácido sulfúrico concentrado p.a. y se trasvasó cuantitativamente a un matraz aforado de
1 L, se enraso al aforo con agua desionizada.
Se realizó la lectura de esta solución a 4 diferentes longitudes de onda simultáneamente

por triplicado durante una semana, los valores obtenidos se comparan con valores de
referencia. Esta verificación es útil para el rango de 400-800 nm.
En la Tabla 4 se muestran los valores de referencia establecidos:
46
Tabla 4 Absorbancias de referencia de la solución de Sulfato de cobre pentahidratado
0,08 mol/L en ácido sulfúrico.
Valor de referencia
λ Absorbancia
600 0,068
650 0,224
700 0,527
750 0,817
Fuente: (VI IBEROLAB, 2015)
3.6.2. DETERMINACIÓN DE CR (VI) POR ESPECTROSCOPIA UV-
VIS
Con este procedimiento se mide únicamente el cromo hexavalente, la reacción de éste

con la difenilcarbazida es una reacción redox en la cual el Cr (VI) se reduce a cromo
trivalente y el reactivo se oxida a difenilcarbazona en solución ácida, es éste compuesto
el que forma el complejo de color rojo-violeta con el cromo trivalente naciente que
absorbe a 540 nm que se muestra en la Figura 16. (Gloria Heredia, et al., 2013)
FIGURA 16 Reacción de la difenilcarbazida con el Cr (VI)
Fuente: (Gloria Heredia, et al., 2013)
47
3.6.2.1. Interferencias del método
 La reacción con la difenilcarbazida es prácticamente específica para el Cr +6. Las

sales de molibdeno hexavalente y de mercurio reaccionarán para formar color
con el reactivo, pero las intensidades son mucho más bajas que para el cromo
hexavalente al pH especificado. Pueden tolerarse concentraciones de hasta 200
mg/L de Molibdeno o hasta 200 mg/L de Hg.
 El molibdeno, vanadio y cobre en la muestra pueden causar interferencias. El
vanadio interfiere fuertemente, sin embargo en concentraciones de hasta 10 veces
las del Cr+6 no causará problemas.
 Se han identificado muestras de matrices diferentes, las cuales producen un
complejo de color amarillo-naranja que interfiere con la medición. En este caso
el analista debe evaluar el efecto de la matriz con muestras adicionadas.
 Las interferencias de color y turbiedad pueden contrarrestarse con un blanco de
muestra. Éste debe prepararse igual que la muestra pero sin adicionar la 1,5
difenilcarbazida, la absorbancia del blanco de muestra se resta a la de la muestra.
(NORMA MEXICANA, 2015)
3.6.2.2. Preparación de la Solución Tampón
Para la solución tampón se disolvió 16,50 g de sulfato de amonio ( ) en

aproximadamente 40 mL de agua desionizada, enseguida se añadió 3,25 mL de
hidróxido de amonio ( ) y se diluyó a 50 mL.
3.6.2.3. Preparación de la Difenilcarbazida
La disolución de difenilcarbazida (DPC) se preparó al 0,5 % m/v y se disolvió en

acetona p.a. para cada prueba se utilizó una solución de DPC recién preparada en cada
caso sólo se preparó la cantidad necesaria para el análisis.
3.6.2.4. Preparación de las soluciones para la curva de calibración
Inicialmente se preparó una solución madre de 500 mg/L de Cr (VI) a partir de cristales
de Dicromato de potasio ( ) utilizando el SRM 935a mencionado anteriormente,
48
que cuenta con una pureza del 99,97% y el cual para su uso no necesita de un secado
previo.
Para preparar la solución madre de Cr (VI) se pesó 141,4 mg de Dicromato de potasio

( ) en un vaso de precipitado el cual se disolvió y aforó con agua desionizada,
posteriormente se trasvaso la solución más sus lavados a un matraz aforado de 100 mL.
De la solución madre se extrae 1 mL que se transfirió inmediatamente a un matraz
aforado de 100 mL y se disolvió con agua desionizada hasta el aforo, obteniendo así una
concentración en Cr (VI) de 5 mg/L.
Después se preparó a partir de la solución de 5 mg Cr (VI)/L, seis estándares para la

curva de calibración, de las siguientes concentraciones teóricas 0,040 – 0,060 – 0,080 –
0,100 -0,150 – 0,250 mg Cr (VI)/L. Estas soluciones fueron aforadas en matraces de 25
mL con agua desionizada y al seguir el procedimiento de desarrollo de color sufren una
dilución al realizar las correcciones necesarias se obtienen los valores reales de
concentración que son: 0,039 – 0,059 – 0,078 – 0,098 – 0,147 – 0,245 mg Cr (VI)/L.
3.6.2.5. Tratamiento de la muestra para la determinación de Cr (VI)
Una vez recolectadas las muestras se siguió con el procedimiento establecido en el

método 3500-Cr D (APHA-AWWA-WPCF, 2012) para el tratamiento de la muestra que
se detalla a continuación:
 Se filtró a través de un filtro de membrana de 0,45 µm.

 Para preservar las muestras se ajustó el pH entre 9,3 y 9,7 mediante la adición de
1 mL de solución tampón de sulfato de amonio (( ) )/hidróxido de
amonio ( ) y la cantidad necesaria de solución de Hidróxido de sodio
( ) 5N o 1N, por 100 mL de muestra.
 Este procedimiento de preservación debe realizarse dentro de las primeras 24
horas, una vez preservadas las muestras pueden ser analizadas dentro de 28 días
después de la recolección y deben ser almacenadas a 4ºC, en caso de no ajustar el
pH al rango necesario, se debe analizar dentro de las primeras 24 horas desde su
recolección.
49
Para la determinación de Cr (VI) se tomó una alícuota 20 mL de muestra y se siguió el
procedimiento para el desarrollo de color y para expresar la concentración hacer una
corrección para 25.5 mL.
3.6.2.6. Desarrollo de color y medición
En el presente trabajo se realiza una adecuación del método colorimétrico para la

determinación de Cr (VI) 3500-Cr D (APHA-AWWA-WPCF, 2012). Se sigue un mismo
procedimiento para el desarrollo de color en los estándares y muestras, los cuales deben
estar a temperatura ambiente antes del análisis. A continuación se detalla los pasos a
seguir:
 Añadir 1 gota de ácido fosfórico concentrado.

 Añadir 3 mL de ácido sulfúrico 0,2 N para ajustar la solución a pH 2,0 ± 0,5
aforar a 25 mL con agua desionizada y agitar.
 Añadir 0,5 mL de solución de difenilcarbazida, mezclar y dejar reposar 15
minutos para el desarrollo de color.
 Transferir una cantidad adecuada de la solución a una celda de 1 cm y medir su
absorbancia a 540 nm, usando agua de reactivo como referencia. A partir de la
absorbancia corregida, determinar el cromo Cr (VI) presente por referencia a la
curva de calibración.
Se trabajó con matraces aforados de 25 mL y se debe realizar una corrección de

concentración debida a la cantidad añadida de DPC después del aforo tanto en los
estándares como en las muestras.
3.6.3. DETERMINACIÓN DEL RANGO ÓPTIMO DE pH PARA EL
DESARROLLO DEL COMPLEJO Cr (VI)-DPC
La reacción del Cr (VI) con el DPC debe realizarse en medio ácido. El rango de pH
establecido en el procedimiento usado es de 2,0 ± 0,5. Para comprobar que éste sea el
rango óptimo de pH y estudiar si existe la formación del complejo a valores más altos de
pH se prepararon ocho réplicas del estándar de concentración 0,098 mg (VI)/L a
50
diferentes valores de pH. Se ajustó el pH con ácido fosfórico concentrado y solución de
ácido sulfúrico 0.2 N.
3.6.4. DETERMINACIÓN DEL EFECTO DE LA CONDUCTIVIDAD
SOBRE LA FORMACIÓN DEL COMPLEJO Cr (VI)-DPC
Debido a que la conductividad de muestras de aguas residuales es alta, se evaluó la

formación del complejo a diferentes valores de conductividad. Se preparó tres réplicas
del estándar de concentración 0,098 mg (VI)/L a diferentes valores de conductividad.
Se ajustó el valor de conductividad con una solución de cloruro de sodio (NaCl) 0,01 M.
3.6.5. DETERMINACIÓN DEL TIEMPO DE FORMACIÓN DEL
COMPLEJO Cr (VI)-DPC
Para la formación del complejo entre el Cr (VI) y el DPC se debe esperar un lapso de
tiempo, que en las diferentes bibliografías señalan un tiempo de espera de 5 a 15
minutos, para determinar el tiempo óptimo para la formación del color se realizó un
estudio de cinética en tres niveles de concentración (0,020 – 0,078- 0,245) mg/L durante
60 minutos.
3.6.6. DETERMINACIÓN DE LA LINEALIDAD
Para determinar la linealidad del método se realizó los siguientes procedimientos:
 Se prepararon seis curvas de calibración de un rango de concentración (0.039 –

0.245 mg/L), con el objetivo de obtener un coeficiente de correlación mayor o
igual a 0,999.
 Se consideró los criterios de evaluación del parámetro de linealidad y se realizó
seis réplicas en cada nivel de concentración preparadas de forma independiente
con lecturas por triplicado.
 Se evaluó la presencia de valores anómalos con el test de Grubbs, se calculó el
coeficiente de correlación, intercepto y pendiente y se evaluó los resultados con
el test de Cochran y la prueba T-student para el coeficiente de correlación y
comprobar que existe correlación en los resultados obtenidos al Nivel de
Confianza del 95%.
51
3.6.7. DETERMINACIÓN DEL LÍMITE DE DETECCIÓN Y LÍMITE
DE CUANTIFICACIÓN
Se determinó el límite de detección y el límite de cuantificación mediante dos métodos

los cuales son:
 Tomando en cuenta los datos del estudio de linealidad se usó las ecuaciones 14 y
15.
 Mediante la evaluación de muestras blanco, se preparó siete réplicas y se hizo la
lecturas por triplicado se determinó los resultados con las ecuaciones 10 y 11.
3.6.8. DETERMINACIÓN DE LA SELECTIVIDAD
La selectividad del método se evaluó en la matriz de agua natural y agua residual en

cada caso se utilizó un procedimiento específico que se detalla a continuación.
3.6.8.1. Selectividad en Agua natural
La muestra de agua natural se recolecto como se mencionó anteriormente de la vertiente

de la gruta de la Virgen de Lourdes que se encuentra ubicada entre la avenida del Poeta
y la avenida del Libertador, en la zona sur de la ciudad de La Paz. En la cual se
determinó que no hay presencia de Cr (VI).
Cómo la matriz no tiene presencia del analito se preparó dos grupos de muestras de
prueba, una con matriz y otra sin matriz, en dos niveles de concentración (0,098 y 0,245
mg Cr (VI)/L), en cada nivel se prepararon 3 réplicas individuales con lecturas por
triplicado.
Para evaluar la selectividad en esta matriz se realizó el test F que evalúa la

homogeneidad de varianzas y el test T-student para comparación de medias al Nivel de
confianza del 95%.
3.6.8.2. Selectividad en Agua residual
La muestra de agua residual se recolecto del curso de agua del Río Seco en los puntos
mencionados. En la cual se determinó que si hay presencia de Cr (VI) por la actividad de
curtiembres artesanales en cercanías del río.
52
Debido a que en la matriz hay presencia del analito, la selectividad es validada por la
comparación de las pendientes de las curvas de adición de patrón, de la siguiente forma:
Se preparó dos grupos de muestras con la misma adición de analito para cada nivel de
concentración. Un grupo contiene la matriz de agua residual y otro grupo no incluye la
matriz, preparando tres réplicas en cada nivel de concentración para el grupo que
contiene la matriz de agua residual y para el grupo que no contiene la matriz se usó los
datos del estudio de linealidad.
Para la verificación se realizó una prueba T-student para comparación de inclinaciones

al Nivel de confianza del 95%.
3.6.9. DETERMINACIÓN DE LA PRECISIÓN
La precisión del método se evaluó en condiciones de repetibilidad, precisión intermedia

y reproducibilidad en cada caso se detalla el procedimiento a continuación:
Para la determinación de la repetibilidad se consideró misma muestra, método,

laboratorio, reactivos, condiciones ambientales, diferentes días y el mismo analista. Se
comparó los resultados obtenidos para el nivel de concentración de 0,245 mg Cr (VI)/L,
para la verificación se realizó una prueba F (Fischer) al Nivel de confianza del 95%.
Para la determinación de la precisión intermedia se consideró misma muestra, método,

laboratorio, reactivos, condiciones ambientales, diferentes días y dos analistas. Se
comparó los resultados obtenidos para el nivel de concentración de 0,245 mg Cr (VI)/L,
para la verificación se realizó una prueba F (Fischer) al Nivel de confianza del 95%.
Para la condición de reproducibilidad se comparó los resultados obtenidos para la curva

de calibración en dos equipos de diferentes laboratorios: Laboratorio de Química
Ambiental y Laboratorio de Productos Naturales del CCQ-UMSA, utilizando el mismo
método, reactivos, condiciones ambientales, diferentes días y mismo analista
Para la verificación se realizó una prueba T-student para comparación de inclinaciones

de las rectas obtenidas en los dos equipos al Nivel de confianza del 95%.
53
3.6.10. DETERMINACIÓN DE LA EXACTITUD
Debido a la imposibilidad de disponer de un MRC de Cr (VI), y aunque de menor

jerarquía metrológica se efectuaron ensayos de recuperación con agregados de patrón de
concentración 0,059 mg Cr (VI)/L sobre dos muestras recolectadas del Río Seco el
análisis se realizó por triplicado.
Se calculó el porcentaje de recuperación de las muestras con la ecuación 24 y se

comparó con los valores establecidos por la AOAC que establece un rango del 80-110%
de recuperación para determinaciones a nivel de concentración de mg/L. (TOLA, 2016)
3.6.11. DETERMINACIÓN DE LA ROBUSTEZ
En el estudio de Robustez se procede a desafiar al método realizando variaciones al

proceso analítico y evaluando el efecto de tales variaciones sobre la exactitud del
método. Se aplicó el diseño experimental de Plackett-Burman en el que se desarrollan
ocho experimentos para evaluar el efecto de siete variables o menos.
Las variables tomadas en consideración fueron:
 Tiempo de reacción del Cr (VI) y el DPC

 Analista
 Presencia de ácido fosfórico
 Volumen de ácido sulfúrico
 Volumen de DPC
54
CAPÍTULO IV
4. RESULTADOS Y DISCUSIONES
4.1. VERIFICACIÓN DEL ESPECTROFOTÓMETRO UV-VIS (GENESYS

10S)
4.1.1. Evaluación de la Exactitud de Longitud de onda
Se determinó la exactitud de longitud de onda con el SRM 935a, comparando los

resultados experimentales con los valores de referencia como se observa en la tabla 5.
Tabla 5 Datos experimentales de la solución de Dicromato de potasio 0,040 mg/L

preparada con el SRM 935a.
Promedio Error absoluto Error relativo

λ E %E
234 1 0,426
257 0 0,000
313 0 0,000
350 0 0,000
Fuente: Elaboración propia
4.1.2. Evaluación de la exactitud fotométrica en el rango Visible
Se determinó la exactitud fotométrica con la solución de Sulfato de cobre

pentahidratado, comparando los valores experimentales con los valores de referencia que
se encuentran en la tabla 6.
55
Tabla 6 Datos experimentales de la solución de Sulfato de cobre pentahidratado
Longitud de onda Promedio Error relativo

Λ Absorbancia %E
600 0,062 9,150
650 0,206 7,937
700 0,477 9,572
750 0,748 8,391
4.2. CONDICIONES EXPERIMENTALES PARA LA DETERMINACIÓN

ESPECTROFOTOMÉTRICA DE CR (VI)
4.2.1. Variación del pH
Se prepararon soluciones del estándar de 0,098 mg Cr (VI)/L a diferentes valores de pH

y se comprobó que el rango óptimo para la formación del complejo de Cr (VI)-DPC es
de 2 ± 0,5. En la Tabla 7 se muestran los valores obtenidos y en la Figura 17 se observa
el gráfico obtenido.
Tabla 7 Valores de absorbancia del estándar de 0,098 mg Cr (VI)/L a diferentes valores

de pH.
0,098 mg Cr (VI)/L
pH Absorbancia
1,44 0,08
1,68 0,096
1,85 0,101
2,37 0,092
3,08 0,063
4,04 0,009
5,13 0,005
7,60 0,002
56
0,12
0,10
0,08
Absorbancia 0,06
0,04
0,02
0,00
0 1 2 3 4 5 6 7 8
pH
FIGURA 17 Formación del complejo Cr (VI)-DPC a diferentes valores de pH

4.2.2. Variación de la Conductividad
Para determinar si la conductividad afecta a la formación del complejo de Cr (VI)-DPC,

se preparó el estándar de 0,098 mg Cr (VI)/L a tres valores de conductividad, no se
afecta la formación del complejo, pero a altos valores de conductividad existe mayor
error como se muestra en la Tabla 8.
Tabla 8 Resultados experimentales de la variación de la conductividad
0,098 mg Cr(VI)/L
Conductividad mg Error relativo
Absorbancias Promedio
µS/cm Cr(VI)/L %E
125,6 0,083 0,080 0,083 0,082 0,095 3,45
504,0 0,089 0,088 0,088 0,088 0,102 4,44
1168 0,092 0,090 0,093 0,092 0,106 8,60
57
4.2.3. Tiempo de reacción del complejo Cr (VI)-DPC
Se realizó pruebas de cinética de reacción en tres niveles de concentración para

determinar el tiempo de espera para la formación del complejo de Cr (VI)-DPC y
también observar por cuanto tiempo el complejo es estable, los datos obtenidos se
muestran en el Anexo 9 y los gráficos obtenidos se presentan en las Figuras 18,19 y 20.
0,026
0,024
0,022
Absorbancia
0,020
0,018
0,016 0,020 mgCr(VI)/L
0,014
0,012
0 20 40 60 80
Tiempo (min)
FIGURA 18 Cinética de reacción de la solución de 0,020 mg Cr (VI)/L
0,080
0,075
0,070
Absorbancia
0,065
0,060
0,055
0,078 mgCr(VI)/L
0,050
0,045
0,040
0 10 20 30 40 50 60 70
Tiempo (min)
58
0,210
0,200
0,190
Absorbancia
0,180
0,170
0,160
0,245 mgCr(VI)/L
0,150
0,140
0 10 20 30 40 50 60 70
Tiempo (min)

Se puede observar que el tiempo promedio para el desarrollo del color es de 12-15 min y
que el complejo es estable por unos 40 minutos después de la formación del complejo
como se observa en la Figura 21.
0,250
0,200
0,150 0,25 ppm

0,08 ppm
0,100 0,02 ppm
0,050
0,000
0 10 20 30 40 50 60 70
FIGURA 21 Cinética de reacción de los tres niveles de concentración estudiados.
59
4.3. PARÁMETROS DE LA VALIDACIÓN DEL MÉTODO
4.3.1. Linealidad
Para la evaluación de la linealidad se prepararon soluciones de siete concentraciones

(0,020-0,040-0,060-0,080-0,100-0,150-0,250) mg Cr (VI)/L a seis réplicas individuales
por cada concentración y lecturas por triplicado, a estas soluciones se agregan 0,5 mL de
DPC se agita y se espera 15 min para leer a una longitud de onda de 540 nm. Se corrigen
las concentraciones por efecto de la dilución.
En la tabla 9 se muestran los resultados obtenidos:
Tabla 9 Datos experimentales para determinar la linealidad del sistema
Desviación
Concentración Promedio Promedio
Absorbancia Estándar CV
mg Cr(VI)/L Parcial Total
(S)
0,019 0,020 0,019 0,019
0,024 0,024 0,024 0,024
0,032 0,030 0,030 0,031
0,020 0,023 0,005 20,165
0,018 0,018 0,019 0,018
0,025 0,026 0,025 0,025
0,020 0,020 0,021 0,020
0,038 0,037 0,037 0,037
0,039 0,039 0,039 0,039
0,045 0,041 0,041 0,042
0,039 0,039 0,004 9,241
0,035 0,035 0,034 0,035
0,045 0,045 0,042 0,044
0,036 0,036 0,037 0,036
0,055 0,053 0,053 0,054
0,059 0,052 0,050 0,052 0,051 0,055 0,005 8,293
0,057 0,057 0,056 0,057
60
0,052 0,052 0,049 0,051
0,066 0,063 0,060 0,063
0,053 0,053 0,052 0,053
0,070 0,068 0,069 0,069
0,072 0,070 0,072 0,071
0,088 0,085 0,084 0,086
0,078 0,074 0,006 8,350
0,074 0,075 0,076 0,075
0,075 0,076 0,075 0,075
0,069 0,070 0,069 0,069
0,090 0,085 0,085 0,087
0,100 0,097 0,100 0,099
0,097 0,092 0,092 0,094
0,098 0,091 0,006 6,327
0,087 0,088 0,081 0,085
0,094 0,095 0,094 0,094
0,085 0,085 0,086 0,085
0,129 0,126 0,125 0,127
0,131 0,129 0,131 0,130
0,140 0,133 0,133 0,135
0,147 0,131 0,005 3,432
0,137 0,132 0,129 0,133
0,135 0,136 0,138 0,136
0,125 0,125 0,126 0,125
0,205 0,202 0,201 0,203
0,210 0,207 0,210 0,209
0,216 0,211 0,211 0,213
0,245 0,209 0,004 2,021
0,214 0,209 0,206 0,210
0,215 0,213 0,213 0,214
0,205 0,205 0,206 0,205
A partir de los resultados obtenidos se puede observar que el primer nivel de

concentración (0,020 mg Cr (VI)/L) tiene un coeficiente de variación de 20,165%
61
mayor al 10% que se considera como aceptable en el presente trabajo. Por lo cual se
decide eliminar ese nivel de concentración en adelante.
4.3.1.1. Evaluación de los resultados experimentales con el Test de
Grubbs (G-test)
Para identificar y eliminar la presencia de valores anómalos se realizó el test de Grubbs,

hallando el estadístico G con la ecuación 4 y los resultados se muestran en la Tabla 10.
| ̅|
Tabla 10 Datos experimentales de absorbancia para cada nivel de concentración.

Cálculo del estadístico (G).
Promedios
Concentración Promedio Desviación G G Evaluación
Parciales de
mg Cr(VI)/L Total Estándar calculado tablas Ccal˂Ctab
Absorbancia
0,037 0,448 1,887 ACEPTADO
0,039 0,015 1,887 ACEPTADO
0,042 0,942 1,887 ACEPTADO
0,039 0,039 0,004
0,035 1,189 1,887 ACEPTADO
0,044 1,405 1,887 ACEPTADO
0,036 0,726 1,887 ACEPTADO
0,054 0,213 1,887 ACEPTADO
0,051 0,771 1,887 ACEPTADO
0,057 0,505 1,887 ACEPTADO
0,059 0,055 0,004
0,051 0,851 1,887 ACEPTADO
0,062 1,782 1,887 ACEPTADO
0,053 0,452 1,887 ACEPTADO
0,069 0,851 1,887 ACEPTADO
0,078 0,071 0,074 0,006 0,475 1,887 ACEPTADO
0,086 1,836 1,887 ACEPTADO
62
0,075 0,116 1,887 ACEPTADO
0,075 0,170 1,887 ACEPTADO
0,069 0,797 1,887 ACEPTADO
0,087 0,706 1,887 ACEPTADO
0,099 1,442 1,887 ACEPTADO
0,094 0,513 1,887 ACEPTADO
0,098 0,091 0,006
0,085 0,939 1,887 ACEPTADO
0,094 0,629 1,887 ACEPTADO
0,085 0,939 1,887 ACEPTADO
0,127 0,988 1,887 ACEPTADO
0,130 0,173 1,887 ACEPTADO
0,135 0,938 1,887 ACEPTADO
0,147 0,131 0,005
0,133 0,346 1,887 ACEPTADO
0,136 1,160 1,887 ACEPTADO
0,125 1,284 1,887 ACEPTADO
0,203 1,461 1,887 ACEPTADO
0,209 0,039 1,887 ACEPTADO
0,213 0,908 1,887 ACEPTADO
0,245 0,209 0,004
0,210 0,197 1,887 ACEPTADO
0,214 1,145 1,887 ACEPTADO
0,205 0,829 1,887 ACEPTADO
La evaluación del estadístico (G) (tabla 9) muestra que el (G) calculado es menor al (G)
de tablas a un Nivel de confianza del 95%, indicando que no se detectan valores
discrepantes o alejados de su valor medio, por lo tanto son aceptados y pertenecen al
conjunto de la muestra estadística.
63
4.3.1.2. Evaluación de los resultados experimentales para la
determinación de la linealidad según el Test de Cochran
El cálculo del estadístico (C) se realiza en todos los niveles de concentración para
evaluar la homogeneidad de varianzas, con la ecuación 5 y los resultados se muestran en
la Tabla 11.
Tabla 11 Datos experimentales de absorbancia para cada nivel de concentración.

Cálculo del estadístico (C).
Concentración C C Evaluación
Absorbancia S S2
mg Cr(VI)/L calculado tablas Ccal˂Ctab
0,038 0,037 0,037 0,001 3,333E-07

0,039 0,039 0,039 0,000 0,000E+00
0,045 0,041 0,041 0,002 5,333E-06
0,035 0,035 0,034 0,001 3,333E-07
0,039 0,571 0,616 ACEPTADO
0,045 0,045 0,042 0,002 3,000E-06
0,036 0,036 0,037 0,001 3,333E-07
5,333
Varianza Máx. Suma 9,333E-06
E-06
0,055 0,053 0,053 0,001 1,333E-06
0,052 0,050 0,052 0,001 1,333E-06
0,057 0,057 0,056 0,001 3,333E-07
0,052 0,052 0,049 0,002 3,000E-06
0,059 0,587 0,616 ACEPTADO
0,066 0,063 0,060 0,003 9,000E-06
0,053 0,053 0,052 0,001 3,333E-07
9,000
E-06
0,070 0,068 0,069 0,001 1,000E-06
0,078 0,072 0,070 0,072 0,001 1,333E-06 0,520 0,616 ACEPTADO
0,088 0,085 0,084 0,002 4,333E-06
64
0,074 0,075 0,076 0,001 1,000E-06
0,075 0,076 0,075 0,001 3,333E-07
0,069 0,070 0,069 0,001 3,333E-07
4,333
E-06
0,090 0,085 0,085 0,003 8,333E-06
0,100 0,097 0,100 0,002 3,000E-06
0,097 0,092 0,092 0,003 8,333E-06
0,087 0,088 0,081 0,004 1,433E-05
0,098 0,413 0,616 ACEPTADO
0,094 0,095 0,094 0,001 3,333E-07
0,085 0,085 0,086 0,001 3,333E-07
1,433
E-05
0,129 0,126 0,125 0,002 4,333E-06
0,131 0,129 0,131 0,001 1,333E-06
0,140 0,133 0,133 0,004 1,633E-05
0,137 0,132 0,129 0,004 1,633E-05
0,147 0,398 0,616 ACEPTADO
0,135 0,136 0,138 0,002 2,333E-06
0,125 0,125 0,126 0,001 3,333E-07
1,633
E-05
0,205 0,202 0,201 0,002 4,333E-06
0,210 0,207 0,210 0,002 3,000E-06
0,216 0,211 0,211 0,003 8,333E-06
0,214 0,209 0,206 0,004 1,633E-05
0,245 0,485 0,616 ACEPTADO
0,215 0,213 0,213 0,001 1,333E-06
0,205 0,205 0,206 0,001 3,333E-07
1,633
E-05
65
Los valores del estadístico (C) calculados son menores al (C) de tablas a un Nivel de
confianza del 95% indicando una condición de Homocedasticidad, que confirma la
tendencia lineal del rango de trabajo.
Una vez realizados los test de Grubbs y Cochran, se procede a calcular la recta de
regresión lineal, por el método de mínimos cuadrados. En la Tabla 12 se muestra el
resumen de los datos experimentales y los resultados obtenidos y en la Figura 22 se
observa el gráfico obtenido.
Tabla 12 Resumen de datos experimentales para determinar la linealidad del sistema
Concentración
Nivel Absorbancia
mg Cr(VI)/L
1 0,039 0,039
2 0,059 0,055
3 0,078 0,074
4 0,098 0,091
5 0,147 0,131
6 0,245 0,209
Pendiente (b) 0,8251
Intercepto (a) 0,0081
Coeficiente de correlación ( r ) 0,9996
66
0,250
0,200
Absorbancias
0,150
0,100
y = 0,8251x + 0,0081
0,050 R² = 0,9992
0,000
0,000 0,050 0,100 0,150 0,200 0,250 0,300
mg Cr(VI)/L
FIGURA 22 Linealidad del sistema
En el Anexo 10 se muestran los resultados obtenidos del análisis de mínimos cuadrados

para la evaluación del sistema.
4.3.1.3. Test de T-student para el coeficiente de correlación ( r ) test
de grado de relación entre la concentración y la respuesta
Para demostrar que existe una pendiente significativamente distinta de cero se realizó la
prueba t-student, para n-2 grados de libertad = 34 en un nivel de confianza del 95% a
dos colas, el valor crítico en la tabla de la distribución t-student es ttab= 2,032
Hipótesis
Ho: r = 0 No Existe correlación entre X y Y Sí texp ˂ ttab
H1: r ≠ 0 Existe correlación entre X y Y Sí texp ˃ ttab
67
Se calcula el texp con la ecuación 9:
| |√
√( )
P= Indica el número de niveles de concentración usados en el trabajo, en este caso es 6
Reemplazando datos en la ecuación se obtiene un valor de: = 69,59, cómo este valor
es mayor al ttab se acepta la hipótesis alterna, comprobando que existe correlación entre
X y Y.
4.3.2. Límite de Detección y Límite de Cuantificación
4.3.2.1. Recta de calibración
A partir de la pendiente de la recta de calibración (b) y de la desviación estándar de la

respuesta (Sa) se calculan los límites de detección y cuantificación con las ecuaciones 14
y 15, los resultados obtenidos se muestran en la Tabla 13.
∑ ( )
√
∑
√
∑ ( ̅)
68
Tabla 13 Límite de detección y límite de cuantificación, hallados a partir de los datos de
linealidad del sistema.
Concentración
Nivel Absorbancia
mg Cr(VI)/L
1 0,039 0,039
2 0,059 0,055
3 0,078 0,074
4 0,098 0,091
5 0,147 0,131
6 0,245 0,209
Pendiente (b) 0,8251
Intercepto (a) 0,0081
Coeficiente de correlación ( r ) 0,9996
Desviación estándar del
0,0016
intercepto (Sa)
Límite de detección (LD) 0,006
Límite de cuantificación (LC) 0,020
4.3.2.2. Muestras blanco
A partir de la medición de una matriz sin analito (muestra blanco) se determinó el LD y

LC, se realizaron siete réplicas individuales con lecturas por triplicado. Se obtienen los
resultados a partir de las ecuaciones 10 y 11, los resultados obtenidos se muestran en la
Tabla 14.
69
Tabla 14 Límite de detección y límite de cuantificación a partir de la lectura de muestras
blanco
Concentración
Muestra Absorbancias Promedio
mg Cr(VI)/L
Blanco-1 0,006 0,007 0,009 0,007 -0,001
Blanco-2 0,006 0,007 0,007 0,007 -0,002
Blanco-3 0,009 0,008 0,007 0,008 0,000
Blanco-4 0,009 0,009 0,012 0,010 0,002
Blanco-5 0,009 0,009 0,012 0,010 0,002
Blanco-6 0,007 0,007 0,007 0,007 -0,001
Blanco-7 0,008 0,008 0,006 0,007 -0,001
Concentración promedio 0,000
Desviación estándar 0,002
Límite de detección (LD) 0,005
Límite de cuantificación (LC) 0,017

En la Tabla 15, se muestra los resultados obtenidos mediante dos métodos de

determinación del límite de detección y el límite de cuantificación.
Tabla 15 Resumen de los valores obtenidos para el límite de detección y el límite de

cuantificación.
Límite de detección Límite de cuantificación

Método
mg Cr(VI)/L mg Cr(VI)/L
Recta de calibración 0,006 0,020
Muestras Blanco 0,005 0,017
Se tiene en promedio al límite de detección del método LD como 0,006 mg Cr (VI)/L y

el límite de cuantificación LC 0,019 mg Cr (VI)/L.
70
4.3.3. Selectividad del Método
Para evaluar la selectividad del método se hicieron pruebas con grupos de muestras de
agua natural y residual, sin presencia de analito y con analito, a continuación se detallan
los resultados obtenidos.
4.3.3.1. Pruebas de selectividad en Agua Natural
Se preparó dos grupos de muestras de prueba una con matriz y otra sin matriz en dos
niveles de concentración (0,098-0,245 mg Cr (VI)/L) se realizó la prueba (F) para
comparar las varianzas. Los resultados se muestran en la Tabla 16 y 17.
Hipótesis
Ho: = No existe diferencia significativa entre las varianzas Sí Fcalc˂ Ftab
H1: ≠ Existe diferencia significativa entre las varianzas Sí Fcalc ˃ Ftab
Se calcula el estadístico (F) con la ecuación 16.
analito, al nivel de concentración 0,098 mg Cr (VI)/L y cálculo del estadístico F.
0,098 mg Cr(VI)/L
Sin Matriz Con Matriz
Absorbancias mg/L Absorbancias mg/L

0,084 0,097 0,084 0,097
0,083 0,096 0,082 0,095
0,083 0,096 0,083 0,096
0,085 0,098 0,083 0,096
0,085 0,098 0,084 0,097
0,084 0,097 0,084 0,097
0,084 0,097 0,083 0,096
71
0,083 0,096 0,084 0,097
0,084 0,097 0,083 0,096
PROMEDIO 0,097 0,096
DESVIACIÓN 0,001 0,001
VARIANZA 9,12112E-07 7,46273E-07
Fcal 1,22
Ftab 3,44
El estadístico (F) calculado a partir de los datos de la tabla 17 es menor al valor crítico
Ftab= 3,44 a un nivel de confianza del 95%, lo que indica que no hay diferencia
significativa entre las varianzas, por lo tanto la matriz no tiene efecto importante sobre la
precisión del método en el intervalo de concentración de estudio.
Adicionalmente se realizó la prueba t-student para medias emparejadas y de esta manera

comparar las medias obtenidas con los dos grupos de muestras.
Hipótesis
Ho: ̅ = ̅ Las medias son estadísticamente iguales Sí tcalc˂ ttab
H1: ̅ ≠ ̅ Las medias no son estadísticamente iguales Sí tcalc ˃ ttab
El valor del estadístico t se calcula con las ecuaciones 17 y 18.
(̅ ̅ )
[( ) ( ) ]
√
( )
Reemplazando valores en las ecuaciones de obtiene un tcalc= 1,58 que es menor al t de

tablas a un nivel de confianza del 95% ttab= 1,75 lo que indica que las medias son
estadísticamente iguales, es decir, la matriz no tiene efecto significativo sobre los
resultados del ensayo.
72
analito, al nivel de concentración 0,247 mg Cr (VI)/L y cálculo del estadístico F.
0,245 mg Cr(VI)/L
Sin Matriz Con Matriz
Absorbancias mg/L Absorbancias mg/L

0,204 0,244 0,203 0,242
0,203 0,242 0,204 0,244
0,204 0,244 0,204 0,244
0,203 0,242 0,203 0,242
0,205 0,245 0,204 0,244
0,205 0,245 0,204 0,244
0,205 0,245 0,203 0,242
0,205 0,245 0,205 0,245
0,205 0,245 0,204 0,244
PROMEDIO 0,244 0,243
DESVIACIÓN 0,001 0,001
VARIANZA 1,119E-06 6,634E-07
Fcal 1,69
Ftab 3,44
El estadístico (F) calculado a partir de los datos de la Tabla 17 también es menor al valor
crítico Ftab= 3,44 a un nivel de confianza del 95%, lo que confirma que no hay
influencia de la matriz sobre la precisión del método en el intervalo de concentración de
estudio.
De la misma forma que en el otro nivel de concentración se realizó la prueba t-student

reemplazando valores en las ecuaciones 17 y 18 el t calculado= 1,52 es menor al t de
tablas.
73
4.3.3.2. Características Físico-químicas de la matriz
Los resultados obtenidos de las mediciones de parámetros físico-químicos se muestran

en la Tabla 18.
Tabla 18 Valores de los parámetros físico-químicos de la matriz
MUESTRA DE
PARÁMETROS
AGUA NATURAL
pH 7,94
Conductividad (µS/cm) 816
OD (mg/L) 7,49
Alcalinidad CaCO₃ (mg/L) 87,5
Sodio (mg/L) 220,17
Potasio (mg/L) 38,16
Calcio (mg/L) 50,25
Magnesio (mg/L) 26,381
Sulfato (mg/L) 129,58
Nitrato (mg/L) 53,31
Cloruro (mg/L) 32,86
Cromo (VI) (mg/L) ˂LD
4.3.3.3. Prueba de selectividad en Agua residual
La selectividad es evaluada por comparación de las inclinaciones de las curvas de

adición patrón, se utilizó el test t-student para igualdad de inclinaciones los valores
obtenidos se muestran en las Tablas 19,20, el análisis de mínimos cuadrados se
encuentran en los Anexos 11 y 12. En la Figura 23 se muestra el gráfico obtenido.
Hipótesis
Ho: = Las inclinaciones son estadísticamente iguales Sí tcalc˂ ttab
H1: ≠ Las inclinaciones no son estadísticamente iguales Sí tcalc ˃ ttab
74
Se calcula el estadístico t a partir de las ecuaciones:
| |
( ) ( )
√
∑( ̅)
̂)
√(
Tabla 19 Datos experimentales para la prueba de selectividad del método utilizando

matriz con analito.
Concentración Absorbancias
mg Cr(VI)/L Agua+Patrón Matriz + Patrón
0,039 0,037
0,097
0,039 0,039
0,039 0,042
0,097
0,039 0,035
0,039 0,044
0,096
0,039 0,036
0,059 0,054
0,108
0,059 0,051
0,059 0,057
0,107
0,059 0,051
0,059 0,063
0,108
0,059 0,053
75
0,078 0,069
0,122
0,078 0,071
0,078 0,076
0,123
0,078 0,075
0,078 0,075
0,123
0,078 0,069
0,098 0,087
0,135
0,098 0,099
0,098 0,094
0,136
0,098 0,085
0,098 0,094
0,135
0,098 0,085
0,147 0,127
0,173
0,147 0,130
0,147 0,135
0,174
0,147 0,133
0,147 0,136
0,175
0,147 0,125
0,245 0,203
0,245
0,245 0,209
0,245 0,213
0,245
0,245 0,210
0,245 0,214
0,245
0,245 0,205
Pendiente (b) 0,8251 0,7322
Intercepto (a) 0,0081 0,0656
Coeficiente de
0,9996 0,9996
correlación ( r )
76
0,300
0,250 Recta con matriz
0,200 y = 0,7322x + 0,0656

R² = 0,9992
Absorbancia
0,150
0,100 y = 0,8251x + 0,0081

R² = 0,9992
0,050
Recta sin matriz
0,000
0,000 0,050 0,100 0,150 0,200 0,250 0,300
mg Cr (VI)/L
FIGURA 23 Selectividad del método de determinación de Cromo (VI)

Para el cálculo del estadístico t se hace un análisis de mínimos cuadrados, con n1=36 y
n2=18 con datos totales ntotal=54 y los grados de libertad (n-2) GL1= 34 y GL2=16 con
grados de libertad totales GLtotal= 50 a un nivel de confianza del 95%el valor crítico en
la tabla de la distribución t-student es ttab= 1,676. Los resultados obtenidos se muestran
en las siguientes tablas.
Tabla 20 Resumen de los resultados obtenidos
ESD 0,029
tcalc 0,772
ttab 1,676
Como el tcalc= 0,772 es menor al ttab= 1,676 se acepta la hipótesis nula, comprobando
que las pendientes son iguales, que no hay efecto de matriz y el método es selectivo.
4.3.3.4. Características Físico-químicas de la matriz
Los resultados de los parámetros físico-químicos se muestran en la Tabla 21.
77
Tabla 21 Valores de los parámetros físico-químicos de la matriz
PUNTO 1 PUNTO 2 PUNTO 3

PARÁMETROS
(Río seco 1) (Río seco 2) (Río seco 3)
pH 9,03 9,16 8,1

Conductividad (µS/cm) 1053 1012 2111
OD (mg/L) 7,02 6,81 5,46
Alcalinidad CaCO₃ (mg/L) 87,8 82,8 173,7
Sodio (mg/L) 214,82 213,25 349,19
Potasio (mg/L) 32,81 31,26 26,19
Calcio (mg/L) 69,84 77,16 57,36
Magnesio (mg/L) 29,109 26,319 21,21
Sulfato (mg/L) 296,02 (*) (*)
Nitrato (mg/L) 7,086 (*) (*)
Cloruro (mg/L) 55,93 (*) (*)
Cromo (VI) (mg/L) 0,031 0,035 0,118
(*) Debido a la alta conductividad de estas muestras no se pudo analizar los aniones
mayoritarios en el cromatógrafo de iones.
4.3.4. Precisión
La precisión se evaluó en términos de repetibilidad, precisión intermedia y

reproducibilidad.
4.3.4.1. Condición de Repetibilidad (Sr)
Se realizó lecturas del estándar de 0,245 mg Cr (VI)/L en diferentes días, para evaluar si
hay diferencias entre las varianzas se utilizó la prueba (F). Para el cálculo del estadístico
(F) se utilizó la ecuación 16. En la Tabla 22 se muestran los resultados obtenidos.
78
Tabla 22 Datos experimentales para la evaluación de la precisión en condiciones de
repetibilidad y cálculo del estadístico F.
0,245 mg Cr(VI)/L
Día 1 Día 2
Absorbancia mg/L Absorbancia mg/L
0,204 0,244 0,204 0,244

0,205 0,245 0,204 0,244
0,205 0,245 0,204 0,244
0,204 0,244 0,203 0,242
0,205 0,245 0,205 0,245
0,205 0,245 0,204 0,244
0,204 0,245 0,205 0,245
0,205 0,245 0,206 0,246
0,206 0,246 0,206 0,246
0,205 0,245 0,205 0,245
0,206 0,246 0,205 0,245
0,203 0,242 0,206 0,246
Promedio 0,245 Promedio 0,245
Desviación Desviación
0,001 0,001
Estándar Estándar
CV 0,418 CV 0,482
Varianza 1,046E-06 Varianza 1,390E-06
F cal 1,33
F tab 2,82
79
El estadístico (F) calculado a partir de los datos de la tabla 24 Fcal=1,33 es menor al
valor crítico Ftab=2,82 a un nivel de confianza del 95%, lo que indica que no hay
diferencia estadísticamente significativa entre las varianzas y hay concordancia entre los
resultados de mediciones obtenidos en días diferentes. Por lo tanto se pueden combinar
las Repetibilidades, usando la ecuación 23 y en la Tabla 23 se muestran los resultados
obtenidos.
( ) ( )
√
Tabla 23 Resumen de los cálculos para obtener una repetibilidad combinada
Combinando Repetibilidades
0.245 mg/L n-1 s2 n-1*s2
Día 1 11 1,861E-06 2,047E-05
Día 2 11 2,908E-06 3,199E-05
Sumatoria 22 Sumatoria 5,2455E-05
Sr 0,002
El método presenta un valor de repetitividad combina de Sr = 0,002
4.3.4.2. Condición de Precisión intermedia (Srw)
Para evaluar la precisión intermedia se comparó los valores de lecturas obtenidas por dos
analistas para el estándar 0,245 mg Cr (VI)/L de igual manera se comprobó si existen
diferencias entre las varianzas por la prueba (F) utilizando la ecuación 16. En la Tabla
24 se observa los resultados obtenidos.
80
Tabla 24 Datos experimentales de dos analistas para la evaluación de la precisión en
condiciones de precisión intermedia y cálculo del estadístico F.
0,245 mg Cr(VI)/L
Analista 1 Analista 2
Absorbancia mg/L Absorbancia mg/L
0,202 0,241 0,204 0,244
0,203 0,242 0,206 0,246
0,204 0,244 0,207 0,247
0,203 0,242 0,202 0,241
0,205 0,245 0,203 0,242
0,206 0,246 0,202 0,241
0,205 0,245 0,201 0,240
0,206 0,246 0,202 0,241
0,206 0,246 0,201 0,240
0,205 0,245 0,203 0,242
0,205 0,245 0,201 0,240
0,206 0,246 0,203 0,242
Promedio 0,244 Promedio 0,242
Desviación Desviación
0,002 0,002
Estándar Estándar
CV 0,685 CV 0,972
Varianza 2,804E-06 Varianza 5,5518E-06
F cal 1,98
Ftab 2,82
Srw 0,002
Como el Fcal=1,98 es menor al Ftab=2,82 se comprueba que no hay diferencia

estadísticamente significativa entre las varianzas y hay concordancia entre los resultados
81
de mediciones obtenidos por dos analistas, por lo cual también se procede a combinar las
desviaciones estándar hallando un valor de:
Srw=0,002
4.3.4.3. Condición de Reproducibilidad
Para evaluar la precisión en condiciones de reproducibilidad se realizó las medidas de

los estándares de trabajo en un segundo equipo con las mismas características del equipo
de trabajo ver Anexo 6 obteniendo los resultados de la Tabla 25 y la gráfica obtenida se
la muestra en la Figura 24.
Tabla 25 Datos experimentales obtenidos de la recta de calibración en dos equipos
EQUIPO 1 EQUIPO 2
Concentración Concentración
Nivel Absorbancia Absorbancia
mg Cr(VI)/L mg Cr(VI)/L
1 0,039 0,039 0,039 0,032
2 0,059 0,055 0,059 0,050
3 0,078 0,074 0,078 0,068
4 0,098 0,091 0,098 0,089
5 0,147 0,131 0,147 0,131
6 0,245 0,209 0,245 0,217
Pendiente (b) 0,8251 (b) 0,8977
Intercepto (a) 0,0081 (a) -0,0019
Coeficiente de correlación
0,9996 (r) 0,9997
(r)
82
0,250
y = 0,8251x + 0,0081
R² = 0,9992
0,200 Equipo 1
Absorbancia
0,150
Equipo 2
0,100
y = 0,8977x - 0,0019
0,050
R² = 0,9994
0,000
0,000 0,050 0,100 0,150 0,200 0,250 0,300
mg Cr (VI)/L
FIGURA 24 Curvas de calibración realizadas en los dos equipos

Al graficar las rectas de calibración obtenidas en los dos equipos, podemos observar que
no hay diferencia significativa entre ambas rectas. Para comprobar que no existe
diferencia entre las inclinaciones se realizó la prueba t-student para comparación de
pendientes, mencionada anteriormente en la evaluación de la selectividad del método.
Utilizando las ecuaciones 19, 20, 21 y 22, y con los valores de la tabla 26 se calculó el
estadístico t obteniendo el siguiente resultado:
tcalc=2,06
El resultado es menor al valor crítico es ttab=2,306, lo que indica que estadísticamente

las pendientes son iguales y por tanto el método es reproducible.
83
4.3.5. Exactitud
Se evaluó la exactitud del método en función al porcentaje de recuperación, según la

AOAC al nivel de concentración de ppm el rango de porcentaje de recuperación debe
estar entre el 80-110% ver Anexo 5.
Para hallar el porcentaje de recuperación se midió el contenido de Cr (VI) por triplicado

en dos muestras reales tomadas en el rio seque ver Anexo 7. Posteriormente se fortifico
con 0,059 mg Cr (VI)/L a dichas muestras por triplicado y se calculó el porcentaje de
recuperación con la ecuación 24. Los resultados se muestran en la Tabla 26.
[ ]
Tabla 26 Datos experimentales para determinar el porcentaje de recuperación.
Muestra
mg MUES+STAD % de
Muestra Absorbancia +STD Sesgo
Cr(VI)/L (mg/L) Recuperación
Absorbancia
punto 1 0,024 0,024 0,069 0,079 0,002 91,6
punto 1 0,025 0,025 0,070 0,080 0,000 91,6
punto 1 0,026 0,026 0,072 0,082 -0,002 93,7
Promedio 0,025 Promedio 0,080 0,000 92,3
punto 2 0,027 0,027 0,075 0,086 0,000 97,7
punto 2 0,028 0,029 0,077 0,089 0,002 99,8
punto 2 0,028 0,029 0,074 0,085 0,002 93,7
Promedio 0,028 Promedio 0,086 0,001 97,1
Valor
91,6
Min.
Valor
99,8
Máx.
84
Como se observa en la tabla 27 los valores de porcentaje de recuperación están en un
rango del 91,6-99,8% que se encuentran dentro el rango considerado para niveles de
concentración en mg/L, por tanto se considera que el método es exacto.
4.3.6. Robustez
Para poder determinar posibles factores que afecten al método, se aplicó el Test de
Plackett-Burman, el cual permite evaluar el efecto de siete parámetros o menos a través
de tan sólo ocho experimentos, desafiando de esta manera al método al realizar
variaciones en el proceso analítico. El símbolo “-“indica el valor nominal y el “+” indica
el valor modificado.
Se evaluaron los efectos producidos por cinco variaciones realizadas durante el proceso
analítico, se trabajó con el nivel de concentración de 0,098 mg Cr (VI)/L. En la Tabla 30
se muestra las variables que se tomaron en cuenta, con los respectivos valores
modificados y en la Tabla 27 el diseño de experimentos.
Tabla 27 Valores de las variables modificadas en el estudio de la robustez.
VALOR
VARIABLES
Nominal Variación
- 15 min + 5 min
A Tiempo de reacción
- A + B
B Analista
- SI + NO
C Ác fosfórico
- 3 mL + 1 mL
D Volumen de Ác. Sulfúrico
- 0.5 mL + 0.3 mL
E Volumen de DPC
85
Tabla 28 Diseño de Plackett-Burman, que resume los ocho experimentos
Parámetro A B C D E Resultado
1 - - - - - S
2 - - + - + T
3 - + - + + U
Experimento
4 - + + + - V
5 + - + + + W
6 + + + - - X
7 + + - - + Y
8 + - - + - Z
Fuente: (IBMETRO, 2018)
Tomando en cuenta las variables establecidas y el diseño de experimentos mostrada en

la Tabla 28 se obtuvieron los resultados de la Tabla 29.
Tabla 29 Diseño de Plackett-Burman, que resume los ocho experimentos
0,098 mg Cr(VI)/L
Resultado
Experimento Absorbancias mg/L
1 0,098 0,109 s
2 0,085 0,093 t
3 0,083 0,091 u
4 0,084 0,092 v
5 0,060 0,063 w
6 0,080 0,087 X
7 0,085 0,093 Y
8 0,089 0,098 Z
El efecto producido por la variación de un parámetro en particular se calcula hallando la

diferencia entre el promedio de los valores nominales y el promedio de los valores con
modificación, por ejemplo, para el parámetro “A” se tiene:
86
( ) ( )
Una vez calculada la diferencia para cada parámetro, se compara la diferencia con
√ , en donde Sr es la desviación estándar del método en condiciones de
repetibilidad. Entonces sí: | | √
El parámetro modificado tiene un efecto significativo, a un nivel de confianza del 95%.

En la Tabla 30 se muestran los resultados obtenidos.
Tabla 30 Resumen de los valores obtenidos para evaluar el criterio de Robustez.
Sr 0,002
Promedio
Promedio
con
Variable nominal Diferencia Criterio de Evaluación
variación
mg/L
mg/L
NO
A 0,096 0,085 0,011 0,002 Sensible a la variable
ACEPTADO
No Sensible a la
B 0,091 0,091 0,000 0,002 ACEPTADO
variable
NO
C 0,098 0,084 0,014 0,002 Sensible a la variable
ACEPTADO
NO
D 0,096 0,086 0,010 0,002 Sensible a la variable
ACEPTADO
NO
E 0,097 0,085 0,012 0,002 Sensible a la variable
ACEPTADO
En tabla 31se observa que los parámetros de: tiempo de reacción, presencia de ácido
fosfórico, volumen de ácido sulfúrico y volumen de DPC tienen un efecto significativo
sobre el proceso analítico, por lo cual no se deben alterar los valores nominales. El
parámetro de cambio de analista no afecta al proceso analítico.
87
4.3.7. Determinación de Cr (VI) en muestras reales
Se determinó el contenido de Cr (VI) en las muestras recolectadas en el Río Seco

detalladas anteriormente, utilizando el método planteado en el presente trabajo. Los
resultados obtenidos se muestran en la Tabla 31.
Tabla 31 Resultados obtenidos de la determinación de Cr (VI) en muestras reales.
PUNTO 1 Cr (VI)
Cr (VI)
Río seco corregido
ABS mg/L mg/L
0,024 0,024 0,030
0,025 0,025 0,031
0,026 0,026 0,033
Promedio 0,031
Desviación 0,002
PUNTO 2 Cr (VI)
Cr (VI)
Río seco corregido
ABS mg/L mg/L
0,027 0,027 0,034
0,028 0,029 0,036
0,028 0,029 0,036
Promedio 0,035
Desviación 0,001
PUNTO 3 Cr (VI)
Cr (VI)
Río Seco corregido
ABS mg/L mg/L
0,080 0,092 0,115
0,082 0,095 0,118
0,083 0,096 0,120
Promedio 0,118
Desviación 0,002
Se calcula el intervalo de confianza con la ecuación:
̅ Ecc.27
√
Los resultados de mg Cr (VI)/L con intervalo de confianza al 95% son: Punto

1=0,031±0,003, Punto 2= 0,035±0,002 y Punto 3=0,118±0,003
88
CAPÍTULO V
5. CONCLUSIONES
 Se verificó la eficiencia del espectrofotómetro Genesys 10S tomando en cuenta
dos criterios: exactitud de longitud de onda y exactitud fotométrica. En la
verificación de la exactitud de longitud de onda se determinó que el error
absoluto es de ±1 que está dentro de los estándares establecidos para este criterio.
En la verificación de la exactitud fotométrica se determinó que el error relativo
varía de un 9,150 % a 7,937% que son menores al 10%, valor que se considera
aceptable en el presente trabajo.
 Se determinó las condiciones experimentales óptimas para la determinación
espectrofotométrica de Cr (VI) confirmando que el rango de pH óptimo para la
formación del complejo de Cr (VI)-DPC es de 2±0,5.
 La variación de la conductividad de la solución, con valores que van desde 100,
500 y 1000 µS/cm, no interfiere la formación del complejo Cr (VI)-DPC, pero si
evidencia mayor desviación de los resultados a conductividades altas.
 Se determinó mediante estudios de cinética de reacción que el tiempo óptimo
para la formación del complejo mencionado es de 12 a 15 min permaneciendo
estable al menos 40 min.
 Se validó el método de análisis para la determinación de concentración de Cr
(VI) mediante la técnica espectrofotométrica en agua natural y residual. Cuyos
resultados se detallan a continuación.
o Se obtuvo un valor de coeficiente de correlación de 0,9996 en un rango
de concentración de (0,039-0,245) mg Cr (VI)/L determinándose que hay
correlación lineal en el método analítico.
o Se determinó el límite de detección (LD) a partir de la pendiente de la
recta de calibración y la desviación estándar de la respuesta (Sa): también
se determinó el LD mediante la lectura de muestras blanco, el resultado
obtenido es de 0,006 mg Cr (VI)/L concentración mínima detectable.
o Se determinó el límite de cuantificación (LOQ) a partir de la pendiente de
la recta de calibración y la desviación estándar de la respuesta (Sa) y
89
también mediante la lectura de muestras blanco, el resultado obtenido es
de 0,019 mg Cr (VI)/L que es la cantidad mínima de Cr (VI) que se puede
cuantificar.
o Se determinó la selectividad del método en agua natural y en agua
residual. Para la matriz de agua natural se preparó dos grupos de muestra
una con matriz y una sin matriz, en dos niveles de concentración 0,098 y
0,245 mg Cr (VI)/L en ambos casos se realizó pruebas de comparación de
varianzas (Prueba F) y comparación de medias (Prueba T-student), los
estadísticos calculados son menores a los valores de tablas en cada caso,
por lo cual se concluye que la matriz no tiene efecto estadísticamente
significativo sobre la precisión y resultados del método. El método es
selectivo en agua natural.
o La selectividad en agua residual, se evaluó por la comparación de las
pendientes de las curvas de adición patrón, para la evaluación se utilizó la
prueba de t-Student para igualdad de inclinaciones, en el resultado del
estadístico t es menor al de tablas, comprobando que las pendientes son
iguales y no hay efecto estadísticamente significativo de la matriz. El
método es selectivo en agua residual.
o Se evaluó la precisión del método en condiciones de repetibilidad,
precisión intermedia y reproducibilidad. Se determinó que la desviación
estándar del método en condiciones de repetibilidad es de 0,002 y se
verificó que no hay diferencias estadísticamente significativas cuando se
emplea el método en diferentes días, con diferente analista y con
diferente equipo que tenga características similares de instrumentación.
o Se evaluó la exactitud del método calculando el porcentaje de
recuperación de dos muestras reales, los resultados varían de 91,6 a
99,8% estos valores se encuentran dentro el rango de aceptación
establecido de 80 a 110%.
o En la evaluación de la robustez se observó que la alteración de los
parámetros de tiempo de reacción, presencia de ácido fosfórico, volumen
de ácido sulfúrico y volumen de DPC tiene un efecto significativo sobre
90
el proceso analítico, por lo tanto no se deben alterar los valores
nominales, el parámetro de cambio de analista no afecta al proceso
analítico.
91
CAPÍTULO VI
6. RECOMENDACIONES
 Los reactivos químicos empleados en el desarrollo del método deben ser de
grado analítico, las soluciones deben ser preparadas en pequeños volúmenes y
almacenar los residuos generados con precaución.
 Las muestras para el análisis de Cr (VI) deben ser analizadas en lo posible dentro
de las primeras 24 horas después de su recolección, aun si fueron preservadas,
mantenerlas fuera del alcance de la luz.
 Para contar con resultados confiables, se debe trabajar con mucha precaución y
realizar periódicamente una calibración de los materiales volumétricos y la
verificación de la eficiencia de los equipos de medición.
 Es necesario, realizar un estudio del grado de contaminación del Río Seco,
tomando en cuenta diferentes parámetros entre ellos el Cr (VI), por la actividad
industrial que existe en cercanías del río que van desde curtiembres artesanales,
lavados de autos, mataderos clandestino entre otras actividades humanas que
llegan a contaminar el río y de esta forma realizar una evaluación del impacto
ambiental.
 Se debe formular alternativas de reciclaje o recuperación de los licores de cromo
que se generan en el proceso de curtido, beneficiando de esta forma a las
pequeñas empresas dedicadas al curtido artesanal y también se reduciría el daño
al medio ambiente.
92
CAPÍTULO VII
7. BIBLIOGRAFÍA
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8. ANEXOS
ANEXO 1
Valores críticos para la distribución t-student
97
ANEXO 2
Valores críticos para la distribución de test “F”
98
ANEXO 3
Valores tabulados de “C” para el test de Cochran a 1% y 5% de probabilidad
99
ANEXO 4
Valores tabulados de “G” para el test de Grubb al 1% y al 5 % de probabiliad
100
ANEXO 5
Valores establecidos por la AOAC para porcentajes de recuperación
101
ANEXO 6
EQUIPOS UTILIZADOS
CARACTERÍSTICAS DEL ESPECTROFOTÓMETRO GENESYS 10 S
102
CARACTERÍSTICAS DEL ESPECTROFOTÓMETRO SPECTROQUANT ®
PHARO 300
103
ESPECTROFOTÓMETRO GENESYS 10S
ESPECTROFOTÓMETRO ESPECTROQUANT PHARO 300
104
BALANZA DIGITAL SPAN
MULTIPARÁMETRO HACH
105
ANALYST 200 PERKIN ELMER
SRM 935a NIST
106
ANEXO 7
RECOLECCIÓN DE LA MUESTRA
MEDICIÓN DE PARÁMETROS FÍSICO-QUÍMICOS IN SITU
FILTRACIÓN DE LA MUESTRA
107
ANEXO 8
PROCESO DE VALIDACIÓN
CURVA DE CALIBRACIÓN SIN MATRIZ
CURVA DE CALIBRACIÓN CON MATRIZ
108
ANEXO 9
DATOS DE LA CINÉTICA DE REACCIÓN
Concentración 0,020 mgCr(VI)/L 0,078 mgCr(VI)/L 0,245 mgCr(VI)/L
Tiempo (min) Absorbancias

0 0,014 0,047 0,144
1 0,016 0,062 0,179
2 0,017 0,066 0,187
3 0,017 0,067 0,190
4 0,018 0,068 0,191
5 0,018 0,068 0,192
6 0,018 0,068 0,192
7 0,018 0,069 0,193
8 0,019 0,069 0,193
9 0,019 0,069 0,194
10 0,019 0,069 0,195
11 0,019 0,069 0,195
12 0,020 0,069 0,195
13 0,020 0,069 0,196
14 0,020 0,070 0,196
15 0,020 0,070 0,196
16 0,020 0,070 0,197
17 0,020 0,070 0,197
18 0,020 0,070 0,198
19 0,020 0,070 0,198
20 0,020 0,071 0,198
21 0,020 0,071 0,199
22 0,021 0,071 0,199
23 0,021 0,071 0,199
24 0,021 0,071 0,199
25 0,021 0,071 0,200
26 0,021 0,071 0,200
27 0,021 0,071 0,200
28 0,021 0,072 0,200
29 0,021 0,072 0,201
30 0,022 0,072 0,201
31 0,022 0,072 0,201
32 0,022 0,072 0,201
33 0,022 0,072 0,201
109
34 0,022 0,072 0,202
35 0,022 0,073 0,202
36 0,022 0,073 0,202
37 0,022 0,073 0,202
38 0,022 0,074 0,202
39 0,022 0,073 0,203
40 0,023 0,073 0,203
41 0,022 0,073 0,203
42 0,023 0,073 0,203
43 0,023 0,073 0,203
44 0,023 0,073 0,203
45 0,023 0,074 0,204
46 0,023 0,074 0,204
47 0,023 0,074 0,204
48 0,023 0,073 0,204
49 0,023 0,074 0,204
50 0,023 0,074 0,204
51 0,024 0,074 0,205
52 0,024 0,074 0,205
53 0,023 0,074 0,205
54 0,024 0,074 0,205
55 0,024 0,074 0,205
56 0,024 0,074 0,205
57 0,025 0,074 0,205
58 0,025 0,074 0,205
59 0,025 0,074 0,205
60 0,024 0,074 0,206
110
ANEXO 10
Análisis de los mínimos cuadrados para la linealidad del sistema
Concentración
Absorbancia
mg Cr(VI)/L ( ̅) ( ̅) ( ̅) ( ̅)
Yi
Xi
0,039 0,037 0,0052 0,0039 0,0000202 0,002
0,039 0,039 0,0052 0,0037 0,0000191 0,002
0,039 0,042 0,0052 0,0033 0,0000171 0,002
0,039 0,035 0,0052 0,0042 0,0000220 0,002
0,039 0,044 0,0052 0,0031 0,0000161 0,002
0,039 0,036 0,0052 0,0040 0,0000209 0,002
0,059 0,054 0,0027 0,0021 0,0000057 0,003
0,059 0,051 0,0027 0,0023 0,0000063 0,003
0,059 0,057 0,0027 0,0019 0,0000050 0,003
0,059 0,051 0,0027 0,0024 0,0000064 0,003
0,059 0,063 0,0027 0,0014 0,0000037 0,003
0,059 0,053 0,0027 0,0022 0,0000060 0,003
0,078 0,069 0,0011 0,0009 0,0000010 0,006
0,078 0,071 0,0011 0,0008 0,0000009 0,006
0,078 0,086 0,0011 0,0002 0,0000002 0,006
0,078 0,075 0,0011 0,0006 0,0000007 0,006
0,078 0,075 0,0011 0,0006 0,0000007 0,006
0,078 0,069 0,0011 0,0009 0,0000010 0,006
0,098 0,087 0,0002 0,0002 0,0000000 0,010
0,098 0,099 0,0002 0,0000 0,0000000 0,010
0,098 0,094 0,0002 0,0000 0,0000000 0,010
0,098 0,085 0,0002 0,0002 0,0000000 0,010
0,098 0,094 0,0002 0,0000 0,0000000 0,010
0,098 0,085 0,0002 0,0002 0,0000000 0,010
111
0,147 0,127 0,0013 0,0007 0,0000009 0,022
0,147 0,130 0,0013 0,0009 0,0000012 0,022
0,147 0,135 0,0013 0,0013 0,0000016 0,022
0,147 0,133 0,0013 0,0011 0,0000014 0,022
0,147 0,136 0,0013 0,0013 0,0000017 0,022
0,147 0,125 0,0013 0,0007 0,0000008 0,022
0,245 0,203 0,0180 0,0106 0,0001901 0,060
0,245 0,209 0,0180 0,0119 0,0002142 0,060
0,245 0,213 0,0180 0,0127 0,0002289 0,060
0,245 0,210 0,0180 0,0121 0,0002169 0,060
0,245 0,214 0,0180 0,0130 0,0002329 0,060
0,245 0,205 0,0180 0,0111 0,0002001 0,060
0,111 0,100 0,1704 0,1167 0,0014441 0,614
̅ ̅ 𝚺( ̅) 𝚺( ̅) 𝚺( ̅) ( ̅) 𝚺
3,996 3,592
Σ Σ
15,968 12,900
( ) ( )
112
ANEXO 11
Análisis de los mínimos cuadrados de los datos sin matriz.
Concentración Absorbancia Concentración

Y predicho Residuo Residuo^2
mg Cr (VI)/L Yi Real Xi
0,039 0,037 0,035 0,040 -0,0029 0,000009
0,039 0,039 0,037 0,040 -0,0013 0,000002
0,039 0,042 0,042 0,040 0,0021 0,000004
0,039 0,035 0,032 0,040 -0,0056 0,000031
0,039 0,044 0,044 0,040 0,0037 0,000014
0,039 0,036 0,034 0,040 -0,0039 0,000015
0,059 0,054 0,055 0,057 -0,0031 0,000010
0,059 0,051 0,052 0,057 -0,0054 0,000029
0,059 0,057 0,059 0,057 -0,0001 0,000000
0,059 0,051 0,052 0,057 -0,0058 0,000033
0,059 0,063 0,067 0,057 0,0062 0,000039
0,059 0,053 0,054 0,057 -0,0041 0,000017
0,078 0,069 0,074 0,072 -0,0034 0,000012
0,078 0,071 0,077 0,072 -0,0011 0,000001
0,078 0,086 0,094 0,072 0,0132 0,000175
0,078 0,075 0,081 0,072 0,0026 0,000007
0,078 0,075 0,082 0,072 0,0029 0,000008
0,078 0,069 0,074 0,072 -0,0031 0,000010
0,098 0,087 0,095 0,089 -0,0023 0,000005
0,098 0,099 0,110 0,089 0,0101 0,000101
0,098 0,094 0,104 0,089 0,0047 0,000022
0,098 0,085 0,094 0,089 -0,0036 0,000013
0,098 0,094 0,105 0,089 0,0054 0,000029
0,098 0,085 0,094 0,089 -0,0036 0,000013
0,147 0,127 0,144 0,129 -0,0027 0,000007
113
0,147 0,130 0,148 0,129 0,0010 0,000001
0,147 0,135 0,154 0,129 0,0060 0,000036
0,147 0,133 0,151 0,129 0,0033 0,000011
0,147 0,136 0,155 0,129 0,0070 0,000048
0,147 0,125 0,142 0,129 -0,0040 0,000016
0,245 0,203 0,236 0,210 -0,0076 0,000057
0,245 0,209 0,244 0,210 -0,0012 0,000002
0,245 0,213 0,248 0,210 0,0024 0,000006
0,245 0,210 0,244 0,210 -0,0006 0,000000
0,245 0,214 0,249 0,210 0,0034 0,000012
0,245 0,205 0,239 0,210 -0,0049 0,000024
SUMA 0,000820
RSD1 0,004910
114
ANEXO 12
Análisis de los mínimos cuadrados de los datos con matriz.
Concentración Absorbancia Concentración

Y predicho Residuo Residuo^2
mg Cr (VI)/L Yi real Xi
0,039 0,097 0,043 0,094 0,0028 0,000008
0,039 0,097 0,043 0,094 0,0028 0,000008
0,039 0,096 0,041 0,094 0,0018 0,000003
0,059 0,108 0,058 0,109 -0,0008 0,000001
0,059 0,107 0,056 0,109 -0,0018 0,000003
0,059 0,108 0,058 0,109 -0,0008 0,000001
0,078 0,122 0,077 0,123 -0,0008 0,000001
0,078 0,122 0,077 0,123 -0,0008 0,000001
0,078 0,123 0,078 0,123 0,0002 0,000000
0,098 0,135 0,095 0,137 -0,0024 0,000006
0,098 0,136 0,096 0,137 -0,0014 0,000002
0,098 0,135 0,095 0,137 -0,0024 0,000006
0,147 0,173 0,147 0,173 -0,0003 0,000000
0,147 0,174 0,148 0,173 0,0007 0,000001
0,147 0,175 0,149 0,173 0,0017 0,000003
0,245 0,245 0,245 0,245 0,0000 0,000000
0,245 0,245 0,245 0,245 0,0000 0,000000
0,245 0,245 0,245 0,245 0,0000 0,000000
0,111 0,147 SUMA 0,000042
RSD2 0,001620
115

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UNIVERSIDAD MAYOR DE SAN ANDRÉS

FACULTAD DE CIENCIAS PURAS Y NATURALES

TRABAJO PARA OPTAR AL GRADO DE LICENCIADO EN CIENCIAS QUÍMICAS

VALIDACIÓN DEL MÉTODO

POR: KARINA HUAYHUA LLUSCO

amor a mis queridos hermanitos: Juanjo y Aleyda.

Espero pueda servirles en un fututo.

adelante y estuvieron presentes en cada momento siempre pendientes de mi bienestar.

Muchas gracias por llenarme de tanto amor.

Al Laboratorio de Química Ambiental de la CCQ-UMSA, por permitirme desarrollar mi

proyecto y brindarme todo el apoyo necesario.

A mis tutores: Dr Rigoberto Choque y Dr Mauricio Ormachea, por su gran apoyo,

paciencia, enseñanza, consejos y asesoramiento que me brindaron durante todo el

tiempo dado para la mejora de este proyecto.

A la Unidad de análisis de Calidad Ambiental del que fue el Instituto de Investigación

Choque por la disciplina de trabajo que me transmitió.

1.1. ANTECEDENTES ....................................................................................... 4

1.2. PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA .................................................... 5

1.3. OBJETIVOS ................................................................................................ 6

1.3.1. OBJETIVO GENERAL ........................................................................... 6

1.3.2. OBJETIVOS ESPECIFICOS ................................................................... 6

1.4. JUSTIFICACIÓN ........................................................................................ 7

2. MARCO TEÓRICO ............................................................................................ 8

2.1. GENERALIDADES DEL CROMO ............................................................ 8

2.2. FUENTES DE CROMO EN AGUA ........................................................... 8

2.3. QUÍMICA DEL CROMO EN AGUA ......................................................... 9

2.4. CROMO EN EL PROCESO INDUSTRIAL DE CURTIEMBRES ......... 11

2.5. TOXICIDAD DEL CROMO ..................................................................... 12

2.6. ESPECTROSCOPIA UV-VIS ................................................................... 13

2.6.1. LEY DE LAMBERT-BEER .................................................................. 14

2.6.2. DESVIACIONES REALES ................................................................... 15

2.6.3. DESVIACIONES INSTRUMENTALES .............................................. 15

2.6.4. DESVIACIONES QUÍMICAS .............................................................. 16

2.6.5. COMPONENTES DE UN ESPECTROFOTÓMETRO ........................ 16

2.7. CALIBRACIÓN Y/O VERIFICACIÓN DE LA EFICIENCIA DE

2.7.1. EXACTITUD DE LONGITUD DE ONDA ......................................... 18

2.8. VALIDACIÓN DE MÉTODOS ANALÍTICOS ....................................... 19

2.8.1. IMPORTANCIA DE VALIDAR UN MÉTODO ANALÍTICO ........... 19

2.8.2. CUANDO REALIZAR UNA VALIDACIÓN ...................................... 20

2.9. PARÁMETROS DE VALIDACIÓN ........................................................ 20

2.9.1. LINEALIDAD Y RANGO DE TRABAJO ........................................... 20

2.9.2. LÍMITE DE DETECCIÓN Y LÍMITE DE CUANTIFICACIÓN ......... 24

2.9.3. SELECTIVIDAD ................................................................................... 26

2.9.4. PRECISIÓN ........................................................................................... 29

2.9.5. EXACTITUD ......................................................................................... 30

2.9.6. ROBUSTEZ ........................................................................................... 32

CAPÍTULO III ............................................................................................................ 35

3. METODOLOGÍA EXPERIMENTAL .............................................................. 35

3.1. TIPO DE INVESTIGACIÓN .................................................................... 35

3.2. ZONA DE ESTUDIO ................................................................................ 35

3.2.1. AGUA NATURAL ................................................................................ 35

3.2.2. AGUA RESIDUAL ................................................................................ 37

3.3. TOMA Y CONSERVACIÓN DE LA MUESTRA ................................... 40

3.3.1. TIPOS DE MUESTRAS ........................................................................ 41

3.3.2. CONSERVACIÓN DE LA MUESTRA ................................................ 41

3.4. DETERMINACIÓN DE PARÁMETROS FÍSICO-QUÍMICOS ............. 42

3.5. EQUIPOS, MATERIALES Y REACTIVOS ............................................ 42

3.6. METODOLOGÍA ANALÍTICA ............................................................... 45

3.6.1. VERIFICACIÓN DEL ESPECTROFOTÓMETRO GENESYS 10S UV-