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    Fundamentos y Tipos de ELISAs

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    El documento describe los fundamentos y tipos de ensayos inmunoabsorbentes ligados a enzimas (ELISAs). Los ELISAs se basan en la unión de antígenos o anticuerpos a una enzima, permitiendo la detección de la unión a través de la adición de un sustrato. Existen dos grandes grupos de ELISAs: los que detectan antígenos (ELISAs sándwich) y los que detectan anticuerpos (ELISAs indirectos). Dentro de estos grupos se incluyen varios tipos específicos como

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    El documento describe los fundamentos y tipos de ensayos inmunoabsorbentes ligados a enzimas (ELISAs). Los ELISAs se basan en la unión de antígenos o anticuerpos a una enzima, permitiendo la detección de la unión a través de la adición de un sustrato. Existen dos grandes grupos de ELISAs: los que detectan antígenos (ELISAs sándwich) y los que detectan anticuerpos (ELISAs indirectos). Dentro de estos grupos se incluyen varios tipos específicos como

    Descripción original:

    descripción de los diferentes tipos de inmunoensayos

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    El documento describe los fundamentos y tipos de ensayos inmunoabsorbentes ligados a enzimas (ELISAs). Los ELISAs se basan en la unión de antígenos o anticuerpos a una enzima, permitiendo la detección de la unión a través de la adición de un sustrato. Existen dos grandes grupos de ELISAs: los que detectan antígenos (ELISAs sándwich) y los que detectan anticuerpos (ELISAs indirectos). Dentro de estos grupos se incluyen varios tipos específicos como

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    El documento describe los fundamentos y tipos de ensayos inmunoabsorbentes ligados a enzimas (ELISAs). Los ELISAs se basan en la unión de antígenos o anticuerpos a una enzima, permitiendo la detección de la unión a través de la adición de un sustrato. Existen dos grandes grupos de ELISAs: los que detectan antígenos (ELISAs sándwich) y los que detectan anticuerpos (ELISAs indirectos). Dentro de estos grupos se incluyen varios tipos específicos como

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    Fundamentos y Tipos de ELISAs.

    El ELISA se basa en el uso de antígenos o anticuerpos marcados con una enzima, de forma
    que los conjugados resultantes tengan actividad tanto inmunológica como enzimática. Al estar
    uno de los componentes (antígeno o anticuerpo) marcado con una enzima e insolubilizado sobre un
    soporte (inmunoadsorbente) la reacción antígeno-anticuerpo quedará inmovilizada y, por tanto,
    será fácilmente revelada mediante la adición de un substrato especifico que al actuar la enzima
    producirá un color observable a simple vista o cuantificable mediante el uso de un
    espectrofotómetro o un colorímetro.

    Este método ha tenido una enorme aplicación en todos aquellos campos en los que se precisaba la
    cuantificación de productos mediante anticuerpos: diagnóstico clínico, detección viral, clasificación
    de anticuerpos en isotipos, búsqueda de anticuerpos monoclonales, etc.

    Todos los tipos de ELISAs descritos se pueden resumir en dos grandes grupos:

    •ELISAs para detectar antígenos: ELISAs sándwich.

    •ELISAs para detectar anticuerpos: ELISAs indirecto

    Los diferentes tipos de ELISA son los que se enumeran a continuación:

    •Anticuerpos marcados:

    -ELISA Directo

    -ELISA Indirecto

    .ELISA sándwich:

    -Doble (DAS)

    -Heterólogo (HADAS)

    •Antígeno marcado

    -ELISA competitivo

    Pasos generales de un ELISA

    1. Tapizado del pocillo con el antígeno o anticuerpo


    2. Adición de la muestra problema con la mezcla de antígenos o anticuerpos
    3. Unión del antígeno o anticuerpo específico al anticuerpo o antígeno tapizado en el pocillo.
    4. Lavado del pocillo para eliminar el exceso de anticuerpo o antígeno no unido
    5. Adición del anticuerpo secundario marcado con la enzima
    6. Unión del anticuerpo secundario al antígeno o anticuerpo
    7. Lavado del pocillo para eliminar el exceso de enzima no unida
    8. Adición del sustrato
    9. Unión del sustrato a la enzima
    10. Desarrollo del color
    ELISA directo: es la forma más básica de realizar la técnica. Consiste en recoger una muestra a
    estudiar y ponerla en un pocillo (un recipiente pequeño) en frente de una muestra igual pero
    contaminada con el germen a estudiar, y otra muestra en la que se sabe que no hay germen. Se
    aplica el anticuerpo con la enzima en los tres pozos y se compara la muestra a estudio con las otras
    dos.

    ELISA indirecto: se realiza de forma similar al ELISA directo, pero en este caso se añade primero un
    anticuerpo sin enzima y después uno con enzima. De esa forma, la señal que emite el enzima es
    mucho más potente y la prueba es más sensible.

    Por medio de ELISA indirecto puede detectarse anticuerpo o determinarse de modo cuantitativo.
    Suero o alguna otra muestra que contenga el anticuerpo primario (Ab1) se añade a un foso de
    microtítulo recubierto con antígeno y se permite que reaccione con el antígeno unido al foso.
    Después de eliminar por lavado cualquier Ab1 libre, la presencia de anticuerpo unido a antígeno se
    detecta mediante la adición de un anticuerpo secundario (Ab2) conjugado con enzima, que se une
    al anticuerpo primario. A continuación se elimina por lavado cualquier Ab2 libre y se añade un
    sustrato para la enzima. La cantidad de producto de la reacción de color que se forma se mide con
    lectores espectrofotométricos de placa especializados, que pueden medir la absorbancia de la
    totalidad de los fosos de una placa de 96 fosos en segundos.

    El ELISA indirecto es el método de elección para detectar la presencia de anticuerpos séricos contra
    el virus de la inmunodeficiencia humana (VIH), agente causante del síndrome de inmunodeficiencia
    adquirida (SIDA). Según esta técnica, proteínas recombinantes de la envoltura y el núcleo del VIH se
    absorben como antígenos en fase sólida a los pocillos. Las personas afectadas de VIH producen
    anticuerpos séricos contra epítopos en estas proteínas víricas. En general, el ELISA indirecto permite
    detectar anticuepos séricos contra VIH desde las primeras seis semanas de una infección.

    ELISA sándwich: en este caso en los pocillos primero se añade un anticuerpo y después la muestra,
    para que los antígenos queden ya retenidos en el fondo del pozo. Después se añade el anticuerpo
    con la enzima. Es la forma más eficaz de realizar la prueba.

    Es posible detectar o medir antígeno mediante ELISA en sándwich. En esta técnica, el anticuerpo (en
    lugar del antígeno) se inmoviliza en un foso de microtítulo. Se añade una muestra que contiene
    antígeno y se deja reaccionar con el anticuerpo inmovilizado. Después de lavar el foso, se agrega un
    segundo anticuerpo ligado a enzima específico para un epítopo distinto del antígeno y se permite
    que reaccione con el antígeno unido. Tras eliminar cualquier segundo anticuerpo libre mediante
    lavado, se añade sustrato y se mide el producto de la reacción de color.

    ELISA COMPETITIVO:

    En este método, el anticuerpo de la muestra va a competir con el conjugado por un número


    limitado de sitios de unión del antígeno. Habrá ausencia de color en una muestra positiva debido a
    que el sustrato no encontrará a la enzima porque el conjugado ha sido desplazado por el anticuerpo
    presente en la muestra.

    El método de ELISA competitivo es otra variante para medir cantidades de antígeno. En esta técnica
    se incuba primero anticuerpo en solución con una muestra que contiene antígeno. Después la
    mezcla de antígeno y anticuerpo se añade a un foso de microtítulo recubierto con antígeno. Cuanto
    más antígeno se encuentra en la muestra, tanto menos anticuerpo libre está disponible para unirse
    al foso recubierto con antígeno. La adición de un anticuerpo secundario (Ab2) conjugado con la
    enzima específica para el isotipo de un anticuerpo primario puede utilizarse para determinar la
    cantidad de anticuerpo primario unido al foso como en un ELISA indirecto. Sin embargo, en la prueba
    competitiva cuanta más alta es la concentración de antígeno en la muestra original tanto más baja
    es la absorción.

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