Membrana de base BD Matrigel ™Matrix es un sótano solubilizado.

preparación de membrana
extraídadel Engelbreth-Holm-SwarmSarcoma de ratón (EHS), un tumor rico enproteínas de la
matriz extracelular para incluirlaminina (un componente importante), colágenoIV, proteoglicanos
de sulfato de heparano, yentactin / nidogen.1,2 BD Matrigel MatrixTambién contiene TGF-beta,
epidérmico.factor de crecimiento, crecimiento similar a la insulinafactor, factor de crecimiento de
fibroblastos, tejidoActivador de plasminógeno, 3,4 y otros.factores de crecimiento que ocurren
naturalmente enEl tumor de EHS.

BD Matrigel ™ Basement Membrane Matrix es eficaz para la unión y diferenciación de epitelioides

dependientes del anclaje normal y transformado y otros tipos de células. Estas incluyen neuronas,
5,6 células de Sertoli, 7 lentes de pollo, 8 y células endoteliales vasculares, 9 y hepatocitos.10
Matrigel Matrigel BD influirá en la expresión de genes en hepatocitos de rata adulta 11, así como
en cultivo tridimensional en ratón12-15 y humano16, 17 células epiteliales mamarias. Apoyará la
regeneración de nervios periféricos in vivo, 18-20 se puede usar para estudios de metabolismo y
toxicología, 21,22 y es la base para varios tipos de ensayos de invasión de células tumorales. 23,24
BD Matrigel Matrix proporciona el sustrato necesario para el estudio de la angiogénesis tanto in
vitro 25,26 como in vivo.27-29. BD Matrigel Matrix también admite la propagación in vivo de
tumores humanos en ratones inmunodeprimidos. 30-32

Factor de crecimiento de matriz de matriz de BDReducido (GFR) es adecuado para aplicaciones

donde se desea una preparación de membrana basal más definida. Disponible en formatos
estándar de GFR, Alta concentración (HC) y Phenol Red-Free.

BD Matrigel Matrix High Concentrationes adecuado para aplicaciones in vivo donde una alta
concentración de proteínas aumenta el crecimiento de tumores. La alta concentración de
proteínas también permite que el Matrigel Matrix Plug de BD mantenga su integridad después de
la inyección subcutánea en ratones. Disponible en los formatos Estándar, Factor de crecimiento
reducido (GFR) y Sin fenol rojo.

¿Qué es la matriz BD Matrigel?La matriz BD Matrigel ™ es una preparación de membrana basal

reconstituida que se extrae del sarcoma de ratón Engelbreth-Holm-Swarm (EHS), un tumor rico en
proteínas de la matriz extracelular. Este material, una vez aislado, es aproximadamente 60% de
laminina, 30% de colágeno IV y 8% de entactina. La entactina es una molécula puente que
interactúa con la laminina y el colágeno IV y contribuye a la organización estructural de estas
moléculas de matriz extracelular. La matriz BD Matrigel también contiene heparina sulfato
proteoglicano (perlecán), TGF-β, factor de crecimiento epidérmico, factor de crecimiento similar a
la insulina, factor de crecimiento de fibroblastos, activador del plasminógeno tisular y otros
factores de crecimiento que ocurren naturalmente en el tumor de EHS. También hay
metaloproteinasas de matriz residual derivadas de las células tumorales.

¿Por qué mi matriz Matrigel BD es de diferentes colores?Las variaciones de color pueden ocurrir
en los viales congelados o descongelados de la matriz de BD Matrigel, desde amarillo pajizo hasta
rojo oscuro debido a la interacción del dióxido de carbono con el tampón bicarbonato y el rojo
fenol. El rojo fenol es amarillo brillante por debajo de -20 ° C o pH ácido, inactivo entre -20 ° C y 0 °
C, y es rojo a pH fisiológico y por encima de 0 ° C.La variación en el color es normal, no afecta la
eficacia del producto y desaparecerá al equilibrarse con 5% de CO2

¿Cuál es la apariencia normal de la matriz BD Matrigel descongelada?Se espera una gama de

colores rojo-rosa para los productos descongelados que contienen fenol rojo. El material del frasco
debe ser transparente (que contiene rojo fenol y libre de fenol). Los productos de concentración
estándar deben fluir libremente (no gelificarse). Los productos de Alta Concentración (HC) son
viscosos.¿Cuánto tiempo lleva descongelar la matriz de BD Matrigel?El producto debe
descongelarse durante la noche en hielo en un refrigerador de 2 ° C a 6 ° C (en la parte posterior) o
en una habitación fría. Puede tardar más en descongelarse si la concentración de proteína es alta.

¿Realmente necesito enfriar mis puntas y tubos de pipeta cuando uso la matriz Matrigel de BD?Sí.
Dado que la matriz BD Matrigel ™ comenzará a formar un gel por encima de 10 ºC, recomendamos
el uso de pipetas, puntas y tubos preenfriados al manipular la matriz BD Matrigel.¿Qué tan rápido
se polimeriza la matriz BD Matrigel?La matriz de BD Matrigel se gelificará rápidamente de 22 ° C a
35 ° C.¿Por qué usaría la matriz de matriz de BD sin fenol rojo?La matriz de matriz de matriz BD sin
rojo de fenol se recomienda para ensayos que requieren detección de color. Por ejemplo, cuando
se usa un tinte fluorescente o un reactivo de Drabkins para cuantificar la tubulogénesis de células
endoteliales in vivo. Para los cultivos de endometrio, debe usar un medio sin fenol rojo.

Además, el rojo fenol exhibe efectos estrogénicos. El rojo de fenol tiene un parecido estructural
con algunos estrógenos no esteroideos y tiene una actividad estrogénica significativa.Además, es
un potencial compuesto de alteración endocrina que puede tener la capacidad de interferir con la
producción natural y el metabolismo de las hormonas en el cuerpo de un animal experimental.

¿Cómo recupero mis células de la matriz BD Matrigel? ¿Cómo elijo entre BD Dispase y la solución
de recuperación de células BD?Se recomienda la solución de recuperación de células BD ™ Dispasa
o BD ™ para recuperar células cultivadas en matriz de BD Matrigel.

BD Dispase producirá una suspensión celular única más suave y eficazmente que la tripsina, la
colagenasa u otras enzimas proteolíticas, ya que no dañará las células ni escindirá las proteínas de
la superficie celular. Por lo tanto, BD Dispase no dañará las células que se recolectan para
subcultivación o bioensayos. Además, la BD Dispasa se puede usar para la disociación de tejidos.La
solución de recuperación de células BD se recomienda para experimentos de metabolismo y
recuperación de ARN. Este reactivo permite la recuperación celular mediante un procedimiento no
enzimático a 4 ° C. Dado que el ARN está presente en la matriz de BD Matrigel, se debe incluir una
muestra de control negativo (BD Matrigel incubada en ausencia de células) al realizar el análisis de
ARN.

Otras posibilidades alternativas para recuperar células de la matriz de BD Matrigel incluyen:

• Bajar la temperatura entre 4 ° C y 6 ° C para despolimerizar la matriz de la matriz de BD. Esto

lleva tiempo y no es adecuado para todas las aplicaciones.

• Centrifugación para romper la matriz de BD Matrigel

¿Cuánto tiempo puedo guardar una placa después de que esté cubierta con la matriz de matriz de
BD?

Siempre es mejor usar las placas recubiertas con matriz BD Matrigel el mismo día, pero depende
de la aplicación. Las placas recubiertas se pueden almacenar en la incubadora a 37 ° C durante
hasta una semana en medios sin suero.

¿Qué tipos de ensayos se recomiendan para BD Matrigel matrix HC?La matriz BD Matrigel, alta
concentración (HC) es adecuada para aplicaciones in vivo donde una alta concentración de
proteínas aumenta el crecimiento de tumores. La alta concentración de proteínas también
permite que el tapón de matriz BD Matrigel mantenga su integridad después de la inyección
subcutánea en ratones. Esto mantiene las células tumorales inyectadas y / o los compuestos
angiogénicos localizados para análisis in situ y / o escisión futura.

¿Cómo se usa la matriz de BD Matrigel para la cultura 3D? ¿Cómo se hace un gel en 3D? ¿Necesita
incrustar las células en la matriz de BD Matrigel?Se puede usar un gel espeso para el cultivo de
células en 3D en la matriz BD Matrigel. Las células se pueden incrustar dentro de la matriz de BD
Matrigel o sembrar sobre la capa de matriz de BD Matrigel (método de superposición). Consulte
las Pautas de uso de la matriz de matriz de BD y la Nota de aplicación 476, que se pueden
encontrar en línea para obtener información útil sobre el método de superposición.

¿Cuándo podemos usar gel fino, gel espeso o un método de cultivo 3D usando¿Matrigel matriz
BD?El gel fino es para la adhesión y proliferación celular. Para aplicaciones como la propagación de
células primarias que solo necesitan una capa de proteína y no una matriz de proteína, se debe
usar el método de capa delgada (gel delgado).El gel grueso se utiliza para aplicaciones de cultivo
celular en 3D, como la diferenciación del tejido de la aorta de rata en estructuras similares a
capilares (Ensayo en anillo) o ensayos de invasión celular.Para aplicaciones en las que se desee un
entorno 3D para estudiar las interacciones entre células o estructuras complejas similares a
tejidos, se debe utilizar un método de cultivo 3D. Consulte las Directrices de BD Biosciences para el
gel de matriz BD Matrigel.

¿Qué concentración de recubrimiento debo usar para estudiar el tubo endotelial?¿formación?Para

la formación del tubo endotelial, la concentración de matriz de matriz de BD debe ser de al menos
10 mg / ml. Para un revestimiento de placa de 24 pocillos, recomendamos 0.289 ml de matriz de
Matrigel BD enfriada (10 mg / ml) por pocillo.

¿Todos los tipos de matriz de BD Matrigel son compatibles con la cultura hESC?No siempre. BD
Biosciences ofrece una matriz de Matrigel ™ para BD certificada por el HESC (número de cat. De
BD 354277) que ha sido probada para el mantenimiento del hESC para garantizar la consistencia,
la reproducibilidad y la confiabilidad en el rendimiento. Este producto ha sido calificado para su
uso con el medio mTeSR®1 de StemCell Technologies. Las células madre embrionarias humanas se
cultivaron en mTeSR1 en placas de matriz matriculada BD Matrigel calificadas por hESC para cinco
pases y permanecieron indiferenciadas por la morfología estándar y la expresión del marcador de
superficie.Además, las placas de matriz de 6 pocillos de BD BioCoat Matrigel (BD n. ° de catálogo
354671) están listas para usar y BD ofrece una consistencia de lote a lote para el cultivo de células
ES humanas mientras mantiene su capacidad de auto renovación y pluripotencia.Si bien la matriz
de Matrigel BD no calificada para hESC puede funcionar para esta aplicación, los resultados
pueden variar cuando el producto no está calificado para su uso con celdas hES.

¿Qué cantidad de matriz de BD Matrigel necesito para recubrir el software de cultivo?para un

ensayo de invasión?Para recubrir un formato de placa de inserción de 24 pocillos, recomendamos
0,1 ml (200-300 µg / ml) de matriz de matriz de BD (BD n. ° 354234, 354230) por inserción.¿Cuál es
la concentración más baja de matriz de BD Matrigel que formará un gel?La concentración óptima
de proteínas depende de la aplicación. Determine el rango de concentración de proteínas que
funciona mejor para su aplicación. La matriz de BD Matrigel diluida a una concentración de 3 mg /
ml formará un gel. No diluir por dilución en pliegue; diluir a una concentración específica (mg /
ml).Para evitar la formación incompleta de gel para aplicaciones in vivo, no diluya la matriz de BD
Matrigel a una concentración final por debajo de 4 mg / ml.

¿Cuánto tiempo durará un tapón de matriz BD Matrigel in vivo?Un tapón de matriz BD Matrigel
durará al menos una semana in vivo.

Cultivo celular general: los ejemplos incluyen cultivos 2D y 3D, angiogénesis y ensayos de invasión
celular. Concentración estándar Los productos de matriz Matrigel ™ BD también pueden usarse in
vivo dependiendo de la concentración de proteína requerida.

Libre de rojo de fenol: los ejemplos incluyen ensayos de angiogénesis in vivo cuando se usa un
tinte fluorescente o un reactivo de Drabkins para cuantificar la formación de vasos.

GFR: los ejemplos incluyen estudios relacionados con la señalización, elucidación del papel de los
factores de crecimiento y estudios de expresión génica.

Matriz de matriz de BD HC: la formulación de HC también se puede utilizar como alternativa a la

matriz de matriz de matriz de BD estándar hasta la concentración adecuada.

¿Cómo se diluye la matriz de BD Matrigel?Diluya la matriz de BD Matrigel con medio sin suero y
sin suero o solución salina tamponada con fosfato (PBS), pH 7.4.

¿Cómo pipete mi matriz BD Matrigel?Use una pipeta o jeringa de desplazamiento positivo para
obtener un pipeteado preciso. Dado que la matriz BD Matrigel puede adherirse al interior y al
exterior de pipetas o jeringas calientes, se recomienda encarecidamente el uso de pipetas o
jeringas refrigeradas.

Trucos de dispensación: No vaya al fondo del frasco. No "sople" la pipeta o la punta.

Para pipetas: dispense de 6 a 1 durante 5 ml.

Para Pipetman: Presione la segunda parada para aspirar. Presione hasta la primera parada para
dispensar.

¿Por qué mi matriz BD Matrigel es tan viscosa?

Cuanto mayor sea la concentración de proteínas mayor será la viscosidad. Las concentraciones
superiores a 13.0 mg / ml pueden ser muy espesas. Los productos de matriz de BD Matrigel
siempre exhibirán una viscosidad extrema y no fluirán libremente hasta que se diluyan. BD
Matrigel matrix HC puede usarse sin diluir con células o para inyección, o puede diluirse en
cualquier rango de proteínas y usarse como cualquier producto de matriz de BD Matrigel de
concentración estándar. La concentración óptima de proteínas depende de la aplicación.

La viscosidad también depende de la temperatura de almacenamiento. Es importante almacenar

la matriz de BD Matrigel en un congelador “sin congelación”. Si se almacena IMPROPIAMENTE en
un congelador “libre de heladas”, el producto estará expuesto a ciclos de congelación y
descongelación y puede volverse “grumoso”. Los congelamientos y descongelamientos deben
minimizarse mediante la alícuota en alícuotas de uso único. Si el producto se congela mientras
está gelificado, podría descongelarse irreversiblemente al descongelarse. Después de descongelar,
el producto debe mantenerse en hielo.

¿La matriz de BD Matrigel induce la diferenciación de las células ES / iPS?

Sí, la matriz BD Matrigel se ha utilizado para estudiar la diferenciación de las células ES / iPS.

¿Por qué el gel de matriz BD Matrigel a 37 ° C, pero se vuelve líquido a 4 ° C?

La matriz BD Matrigel es una membrana basal reconstituida extraída de un tumor de ratón EHS.
Cuando el material se extrae del tumor, contiene laminina, colágeno IV, entactina, proteoglicano
de sulfato de heparano y factores de crecimiento que ocurren naturalmente en el tumor de EHS.
Estas proteínas tienen múltiples dominios funcionales que interactúan con la laminina, el colágeno
IV y la proteína de unión a la heparina que contribuye a la organización estructural de la matriz de
BD Matrigel. Entre 22 ° C y 37 ° C hay suficiente energía para que se formen los enlaces y los geles
de matriz de Matrigel BD. A 4 ° C no hay suficiente energía para formar los enlaces que
contribuirían a la organización estructural de la matriz de matriz de BD, por lo que la matriz de
matriz de BD licua o se convierte en una solución a esta temperatura.