Evaluacion de La Actividad Insecticida in Vitro Sobre Larvas de - plFPo4C PDF

"Año del Centenario de Machu Picchu para el Mundo"
UNIVERSIDAD NACIONAL DE SAN ANTONIO ABAD DEL CUSCO
FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS, FÍSICAS, MATEMATICAS,

FARMACIA E INFORMATICA
CARRERA PROFESIONAL DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA
EVALUACIÓN DE LA ACTIVIDAD INSECTICIDA IN VITRO SOBRE LARVAS DE

Aedes aegypti (vector de la Fiebre Amarilla y dengue) Y DETERMINACIÓN DEL
EFECTO ANTIBACTERIANO FRENTE A CEPAS DE Salmonella typhi spp. DE
LAS ACETOGENINAS OBTENIDAS A PARTIR DE EXTRACTOS ETANOLICOS
DE SEMILLAS DE Annona muricata L. (Masasamba).
Presentado por:
Br. JUDITH CALLO CONDORI
Br. KAROL EDUARDO FARFÁN
BARRIENTOS.
Asesora:
M.cs. Carla del Carpio Jimenez
Co- Asesores:
M.cs. Erick Yabar Landa
M.cs. Yanet Mendoza Muñoz
Mgt. Carlos Serrano Flores.
cusca -2o11
Tesis auspiciada por el Centro de Investigación de la UNSAAC.
(]YE/DI CJl CJ'O(í?]Jl
Primero quiero dedicar este fogro a CJ)ios,
por estar siempre conmigo 6rindándome
fortafeza frente a todas {as ad'Versúfades
que nos presenta {a 'Vúfa, por i{uminar mi
camino todos fos áías áe mi 'Viáa, por ser mi
guia en todos fos pasos que doy y lia6erme
dado {a 6endición de lia6er concretado uno
de fos oójetiVos más importantes tfe mi
'Vúfa. JI_ mi querúfo y eJ(J:rañadó papito P.múio
que descansa en paz a fado de nuestro

padre (])ios, por ser e{ ánge{ que me cuúfa y
ser fa motivación para safir adefante y
afrontar con perse'Verancia nue'Vos retos.
)'l mi mamita Simona por ser mi ejempfo de
'Vúfa, por sus concejos sa6ios, por su
comprensión, por todo e{ esfuerzo y
sacrificio que rea{ízó en su 'Vúfa para darme
{o mejor y {fe'Varme liasta a donde aliora me
encuentro. Gracias mamita. )'l mis liermanos Vicente, P.dwin y P.múio
por ser mis concejeros, mis otros moti'Vos de
{uc/ia, mis ejempfos y por lía6erme 6rindado
todo su cariño, su amor; su paciencia, su
comprensión y apoyo durante todo este
tiempo. JI_ effos gracias por ser fos mejores
liermanos de{ mundo.
JI_ {a persona muy especial de mi 'Vúfa:
Jeason, por regafarme su amor

incondicionaC por escucliarme, por sus
pafa6ras estimufándome a no caer y
afcanzar mis metas, por ser mi apoyo y
estar a mi fado en fos momentos más
dificifes siendo una 6endición en mi 'Vúfa.
r;¡racias amorcito.
_7uáitli caffo c.
(lJPlD1CJl TOCJ?]Jl
)I CDios por áanne fa viáa, guianne,

cuúfanne, ifuminanne y pennitinne áar este
gran paso en mi viá~ gracias ([)ios mío por
toáo tu amor y tu peráón, esto no liu6iese
súfo posi6fe sin tu presencia en toáo
momento.
)I mi queriáo paáre Luis P.áuaráo Paifán

León por su apoyo, comprensúJn, por animanne
siempre a wgrar mis metas, por sus acertaáos
consejos y por ser mi paáre; para ti viejito
fináo.
)I mi amaáa maáre 1?,s>sario (}3arrientos (}3ravo

/ por su amor; por su preocupación áe que
nunca me JaCte naáa, por su esperanza puesta
en mí y por lia6enne traíáo a{ munáo y ser una
6enáición en mi 'Viáa; con muclio amor para ti
queriáa mamá.
)I toáos mis liennanos: Luis P., IJ{Jt6en ([),

Ju{io C )Ina ~ 'MÍfjue{ )I y CDaviá )I. por
apoyanne en toáas mis áecisiones y por
siempre áanne sus consejos y qperiencias
viviáas; va para Vás. queriáos liennanos
)I{ amor áe mi viáa que siempre está a mi faáo

animánáome y áánáome momentos fináos en
mi viáa gracias por compartir tu viáa con fa
mía, por soportanne y comprenáenne y so6re
toáo por amanne; para ti 'Yéssica z. Cli. te
quiero muclio.
~ P.áuaráo Paifán (}3.
AGRADECIMIENTOS
A dios por su amparo, protección y fortaleza en todo lugar y momento.
A la Universidad Nacional de San Antonio Abad del Cusco por habernos acogido en
sus aulas e inculcado conocimientos durante nuestro desarrollo profesional.
Al instituto de investigación de la UNSAAC por el apoyo para la realización del

trabajo de tesis.
A nuestra asesora M.C.s. Carla del Carpio ]imenez, por su apoyo incondicional, por
su atención, sus consejos, orientaciones y confianza puesta en nosotros durante
todo el proceso de ejecución de la tesis.
Al Mgt. Carlos Serrano Flores por su tiempo, paciencia, conocimientos, alegrias y

vivencias compartidas en la realización de nuestra tesis, a usted un especial
reconocimiento porque la realización de este trabajo se lo debemos a usted.
A la M. Cs. Yanet Mendoza Muñoz por sus conocimientos y facilitarnos el

laboratorio a su cargo necesario para la ejecución del trabajo de tesis.
A los biólogos Henry Yañez Trujillano y Luis León Olayunca por su apoyo
incondicional, sus conocimientos, sus consejos, su tiempo, su amistad y los
hermosos momentos vividos durante el viaje a la localidad de Camanti para la
ejecución de la segunda parte de la tesis.
A todo el personal del centro de salud Quincemil- Camanti quienes nos acogieron,
ayudaron y brindaron su amistad durante nuestra estadia en la localidad de
Quincemil y ejecución del trabajo de tesis.
A Jorge y Nancy encargados de/laboratorio de control de calidad (HPLC), darles las

gracias por el apoyo, los conocimientos y su tiempo en la identificación de nuestros
compuestos.
A nuestras queridas familias por todo su apoyo incondicional y por el esfuerzo

realizado para que nosotros lleguemos a concluir nuestra carrera profesional.
A nuestras queridas amigas Betty, Carmen, Deris y amigos por su compañia,

amistad sincera, enseñanzas y vivencias que nos recordaban lo bello que es la vida.
Finalmente, pero no con menor reconocimiento, queremos agradecer a cada una de

las personas que intervinieron, aportaron y acompañaron durante la formulación,
ejecución y sustentación del trabajo, quienes amablemente e incondicionalmente
nos ayudaron, gracias por sus sugerencias y experiencias compartidas.
JudiyP.áu.
INDICE GENERAL
ABREVIATURAS
RESUMEN
ASTRACT
INTRODUCCIÓN
CAPITULO 1
1. GENERALIDADES ............................................................................................................................................... 1
1.1. PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA............................................................................................ 1
1.2. FORMULACION DEL PROBLEMA.................................................................................................. 3

1.3. OBJETIVOS ..................................................................................................................................................... 3
1.3.1. OBJETIVOS GENERALES .......................................................................................................... 3
1.3.2. OBJETIVOS ESPECIFICOS ....................................................................................................... 4

1.4. JUSTIFICACION E IMPORTANCIA ................................................................................................ S
1.5. HIPOTESIS....................................................................................................................................................... 6
1.6. LIMITACIONES DE LA INVESTIGACION ................................................................................... 6
CAPITULO 11
2. MARCO TE O RICO ............................................................................................................................................... 7
2.1. VISION HISTORICA ................................................................................................................................... 7

2.2. ANTECEDENTES ........................................................................................................................................ 8
2.2.1. ANTECEDENTES INTERNACIONALES ............................................................................ 8

2.2.2. ANTECEDENTES NACIONALES ......................................................................................... 11
2.2.3. ANTECEDENTES LOCALES .................................................................................................. 11
2.3. ESTADO DE LA CUESTIÓN ............................................................................................................. 11
2.4. BASES TEÓRICO CIENTÍFICAS ................................................................................................... 12
2.4.1. ASPECTOS DESCRIPTIVOS DE LA ESPECIE VEGETAL Annona

muricata L ......................................................................................................................................................... 12
2.4.1.1. Nombre científico de la especie vegetal ............................................................ 12
2.4.1.2. Nombres Populares ............................................................................................................ 12
2.4.1.3. Origen de la especie vegetal ....................................................................................... 13
2.4.1.4. Clasificación taxonómica de la especie vegetal .......................................... 13
2.4.1.5. Descripción Botánica ........................................................................................................ 14
2.4.1.6. Composición química y valor nutricional del fruto .................................... 14

2.4.1.7. Componentes químicos de la semilla ................................................................... 15
2.4.1.8. Usos en la medicina tradicional... ............................................................................. 16
2.4.1.9. Acetogeninas .......................................................................................................................... 17

2.4.2. DEL EFECTO INSECTICIDA................................................................................................... 21
2.4.2.1. Fiebre Amarilla ....................................................................................................................... 21

2.4.2.2. Dengue......................................................................................................................................... 23
2.4.2.3. Vector de la fiebre amarilla y dengue mosquito Aedes aegypti....... 24
2.4.2.4. Biopesticida.............................................................................................................................. 26
2.4.2.5. Insecticida utilizado como patrón (TEMEFÓS) .............................................. 28
2.4.3. DEL EFECTO ANTIBACTERIANO ...................................................................................... 29
2.4.3.1. Fiebre tifoidea ......................................................................................................................... 29
2.4.3.2. Salmonella typhi ................................................................................................................... 30

2.4.3.3. Crecimiento de las poblaciones bacterianas ................................................. 33
2.4.3.4. Curva de crecimiento bacteriano ............................................................................. 34
2.4.3.5. Actividad antimicrobiana in vitro ............................................................................. 36
2.4.3.6. Actividad Antimicrobiana .............................................................................................. 37
2.4.3.7. Medición de la actividad antimicrobiana ............................................................ 40
2.4.3.8. Interpretación del antibiograma ............................................................................... 43
2.4.3.9. Control microbiológico .................................................................................................... 43
2.4.3.1 O. Fármaco patrón (CIPROFLOXACINO) ............................................................... 44
2.5. GLOSARIO DE TÉRMINOS .............................................................................................................. 49

CAPITULO 111
3. MATERIALES Y METODOS ....................................................................................................................... 53
3.1. MATERIALES BIOLÓGICOS .......................................................................................................... 53
3.1.1. MUESTRA VEGETAL ................................................................................................................... 54
3.1.2. MUESTRAS BIOLÓGICA.......................................................................................................... 54
3.1.3. MUESTRA MICROBIANA.......................................................................................................... 54
3.2. MATERIALES, INSTRUMENTOS Y EQUIPOS..................................................................... 54
3.2.1. MATERIALES Y EQUIPOS DE LABORATORIO ....................................................... 54
3.2.2. SOLVENTES Y REACTIVOS .................................................................................................. 56
3.2.3. MEDIOS DE CULTIVO ................................................................................................................. 56
3.2.4. OTROS MATERIALES................................................................................................................. 56
3.3. DE INFRAESTRUCTURA.................................................................................................................... 57
3.4. DISEÑO METODOLÓGICO DE LA INVESTIGACIÓN ..................................................... 58
3.4.1. DISEÑO METODOLÓGICO...................................................................................................... 58
3.4.1.1. Tipo de investigación ........................................................................................................ 58
3.4.2. DISEÑO DE LA INVESTIGACIÓN ....................................................................................... 58
3.4.2.1. Ensayo de la actividad insecticida .......................................................................... 58
3.4.2.2. Ensayo de la actividad antibacteriana ................................................................. 61
3.5. IDENTIFICACIÓN, DEFINICIÓN Y OPERACIONALIZACIÓN DE

VARIABLES ........................................................................................................................................................... 62
3.5.1. VARIABLES IMPLICADAS....................................................................................................... 62
3.5.1.1. De la actividad insecticida ............................................................................................ 63
3.5.1.2. De la actividad antibacteriana .................................................................................... 64
3.5.2. VARIABLES NO IMPLICADAS .............................................................................................. 65
3.5.2.1. Variables intervinientes ................................................................................................... 65
3.5.3. CRITERIOS DE SELECCIÓN .................................................................................................. 66
3.5.3.1. Del material vegetal ............................................................................................................ 66
3.5.3.2. De las larvas ............................................................................................................................ 66
3.5.3.3. Del material microbiológico ......................................................................................... 67

3.6. TÉCNICAS E INSTRUMENTOS DE RECOLECCION DE DATOS: ......................... 67
3.7. PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL. .......................................................................................... 67
3.7.1. EXTRACCIÓN Y ESTUDIO FITOQUIMICO DE LAS ACETOGENINAS DE

Annona murícata L. (Masasamba) .................................................................................................. 67
3.7.1.1. Recolección de la especie vegetal Annona muricata L.

(Masasamba) .............................................................................................................................................. 67
3. 7.1.2. Selección y Desecación de la muestra ................................................................ 70
3. 7.1.3. Determinación del Porcentaje de Humedad .................................................... 71
3. 7.1.4. Molienda ..................................................................................................................................... 73
3.7.2. OBTENCIÓN DE LOS EXTRACTOS ETANOUCOS DE Annona muricata

L. (Masasamba) ............................................................................................................................................. 73
3.7.3. OBTENCIÓN DE ACETOGENINAS A PARTIR DEL EXTRACTO

ETANOLICO DE SEMILLAS DE Annona muricata L. ........................................................ 74
3.7.3.1 Procedimiento.......................................................................................................................... 77
3.7.4. DETERMINACIÓN DEL PORCENTAJE DE EXTRACCIÓN ............................... 80
3.7.5. ANÁLISIS FISICO-QUIMICO DEL CONCENTRADO DE

ACETOGENINAS .......................................................................................................................................... 80
3. 7.5.1. Características Organolépticas ................................................................................. 80
3.7.5.2. Ensayos Físicos: ................................................................................................................... 81
3.8. DE LA DETERMINACION DE LA ACTIVIDAD INSECTICIDA ................................... 87
3.8.1. METODOLOGÍA PARA LA DETERMINACIÓN DEL EFECTO

INSECTICIDA.................................................................................................................................................. 87
3.8.1.1. Recolección de la especie insectil Aedes aegypti...................................... 87
3.8.1.2. Identificación de la muestra insectil ...................................................................... 93
3.8.2. DETERMINACIÓN DEL EFECTO INSECTICIDA EN LARVAS DE LOS

MOSQUITOS DE Aedes aegypti........................................................................................................ 98
3.8.2.1. Bioensayo del efecto insecticida: ............................................................................ 98
3.8.2.2 Análisis Estadístico: ..........................................................................................................104
3.9. ESTUDIO MICROBIOLÓGICO ......................................................................................................105
3.9.1. CONTROL MICROBIOLÓGICO DEL CONCENTRADO DE

ACETOGENINAS DE Annona muricata L. (Masasamba) .......................................... 105
3.9.2. DETERMINACIÓN DE LA ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA ........................... 109
3.9.2.1. Activación e identificación de Salmonel/a typhi spp. ........................... 109

3.9.2.2. Estandarización de la curva de crecimiento de salmonella
typhi spp.................................................................................................................................................112
3.9.2.3. Estandarización de la concentración antibacteriana del

concentrado de Acetogeninas de Annona muricata L. (Masasamba) por el
método de difusión disco en placa ........................................................................................114
CAPITULO IV
4. ANÁLISIS Y DISCUSIÓN DE LOS RESULTADOS ................................................................... 121
4.1. RESULTADOS DEL ESTUDIO FITOQUÍMIC0 ................................................................... 122
4.1.1. DETERMINACIÓN DEL PORCENTAJE DE HUMEDAD DE LAS

SEMILLAS DE Annona murícata L. (Masasamba) ............................................................ 122
4.1.2. DETERMINACIÓN DEL PORCENTAJE DE EXTRACCIÓN DE LAS

SEMILLAS DE Annona muricata L. (Masasamba) ............................................................ 123
4.1.3. ANÁLISIS FISICOQUÍMICO DEL CONCENTRADO DE

ACETOGENINAS ........................................................................................................................................124
4.1.3.1. Características organolépticas: .............................................................................. 124
4.1.3.2. Pruebas de solubilidad de las Acetogeninas de las semillas de

Annona muricata L. (Masasamba) ...........................................................................................124
4.1.3.3. Análisis cromatográfico: .............................................................................................. 126
4.2. RESULTADOS DE LA DETERMINACIÓN DEL EFECTO INSECTICIDA DE

LAS ACETOGENINAS DE Annona muricata l. (Masasamba) FRENTE A
LARVAS DE Aedes aegypti.....................................................................................................................13 6
4.2.1. OBSERVACIONES EN El ANÁLISIS ............................................................................. 136
4.2.2. RESULTADOS GENERALES DEL EFECTO INSECTICIDA............................ 139
4.2.3. ANÁLISIS ESTADÍSTICO DEL EFECTO INSECTICIDA .................................... 142
4.3. RESULTADOS DEL EFECTO ANTIBACTERIANO ........................................................ 160
4.3.1. DEL CONTROL MICROBIOLÓGICO DE LAS ACETOGENINAS

AISLADAS A PARTIR DE EXTRACTOS ETANÓLICOS DE SEMILLAS DE
Annona muricata L. (MasasambaJ ..............................................................................................160
4.3.2 RESULTADOS DE LA CURVA DE CRECIMIENTO DE Sa/monella typhi

spp........................................................................................................................................................................161
4.3.3. DEL ENSAYO DEL EFECTO ANTIBACTERIAN0 ................................................. 164
4.4.3.1. De la prueba piloto ............................................................................................................164
4.3.3.2. De la estandarización de las concentraciones antibacterianas ..... 165

4.3.3.3. Del ensayo de la actividad antibacteriana con las concentraciones
estandarizadas.......................................................................................................................................16 7
4.3.4. ANÁLISIS ESTADÍSTICO DE LA ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA .......... 168
CONCLUSIONES .......................................................................................................176
SUGERENCIAS Y RECOMENDACIONES ............................................................ 178
BIBLIOGRAFÍA...........................................................................................................179
ANEXOS .............................................................................................................................187
ABREVIATURAS:
DH:Dengue Hemorrágico
DC:Dengue Clásico
OPS: Organización Panamericana de la Salud

HPLC:Cromatografía Líquida de Alta E:ficacia
CMI:Concentración Mínima lnhibitoria
OMS:Organización Mundial de la Salud
INS:Instituto Nacional de Salud
THF:Tetrahidrofurano
MINSA:Ministerio de Salud
C: Carbono.
OH: Hidroxilo (grupo funcional)
NADH:Nicotinamida Adenina Dinucleótido reducido.
ATP: AdenosinTri Fosfato

DEN1: Dengue serotipo 1
ACB: Agentes de Control Biológico

KOH: Hidroxido de Potasio (fórmula química)
PH: Potencial de Hidrogeniones.
SH2: Sulfuro de Hidrogeno (fórmula química)

ARN: Acido Ribonucleico.
ARNr:ARN ribosómico
ADN: Acido Desoxirribonucleico.
UFC:Unidades Formadoras de Colonia
SNC: Sistema Nervioso Central
QP: Químicamente Puro.
DIGESA:Dirección General de Salud Ambiental

DIRESA: Dirección Regional de Salud.
RELCOV: Red Latinoamericana de Control de Vectores.
PPM: Partes Por Millon.
Mg: Miligramos.
MI: Mililitros.
tJI: Microlitros
BHI: Infusión Cerebro Corazón.
nm: Nanómetros.
mm: Milímetros.
RESUMEN
El presente trabajo evaluó el efecto insecticida y efecto antibacteriano de las

Acetogeninas extraídas a partir de extractos etanólicos de semillas de Annona
muricata L. (Masasamba), el desarrollo de la investigación fue llevado a cabo
en diferentes escenarios de la región Cusca (provincias de la Convención,
Cusca, Quispicanchis).
La obtención del concentrado de Acetogeninas se realizó por extracción por

maceración etanólica al 70% hasta la obtención del extracto etanólico crudo,
posteriormente se realizó un proceso de extracción por decantación con
solventes de diferente polaridad. El concentrado de Acetogeninas fue sometido
a análisis fisicoquímico y determinación de la composición química mediante
cromatografía liquida de alta resolución (HPLC), determinándose con mucha
probabilidad de que la Acetogenina denominada squamostatin D sea el
componente mayoritario del concentrado de Acetogeninas obtenida a partir de
las semillas de Annona muricata L. (43.1206% ), al comparar los resultados con
los de otros estudios de la especie vegetal se determinó que nuestra muestra
de Acetogeninas posee mayor cantidad de squamostatin D,
Posteriormente se determinó el efecto insecticida de las Acetogeninas frente a

larvas de Aedes aegypti con soluciones preparadas a diferentes
concentraciones (10 000, 5000. 500 y 50 ppm), obteniendo resultados de gran
interés, siendo la concentración de 1O.OOOppm la que demostró mayor efecto
insecticida frente a las demás concentraciones de experimentación, y en
relación con el insecticida patrón (Temefós) presentó un efecto insecticida
similar al matar el mismo número de larvas en un periodo de tiempo
aproximado.
Se determinó la actividad antibacteriana de las Acetogeninas frente a cepas

bacterianas de Salmonella typhi spp mediante la técnica de Kirby Bawer para lo
cual se utilizaron concentraciones estandarizadas (100, 123.97, 153.69,
190.52, 236.19, 292.81, 362.99 y 450mg) obtenidas a partir de una prueba
piloto. Encontrándose que a partir de 1OOmg se produce inhibición del
crecimiento bacteriano, valor que es considerado como la concentración
mínima inhibitoria (CIM), y el mayor efecto antibacteriano se produjo a la
concentración de 450mg con un halo de inhibición en promedio de 31.67mm la
cual superó al halo de inhibición del medicamento patrón (Ciprofloxacino)
utilizado la cual fue de 27.67mm en promedio.
Palabras claves: Annona muricata L., Acetogeninas, actividad insecticida,

Aedes aegypti, efecto antibacteriano, Salmonella typhi.
SUMMARY
The present work evaluated the insecticide effect and anti-bacterial effect of the
Acetogeninas extracted as from abstracts Annona's muricata L. ( Masasamba ),
etanólicos of seeds the development of investigation was accomplished at
different scenes of the region Cusca ( the Convention's provinces, Cusca,
Quispicanchis ).
The obtaining of Acetogeninas's concentrate the raw etanólico sold off to the 70
% to the obtaining of the abstract for extraction for maceration etanólica, at a
later time a process of extraction for decanting with solvents of different polarity
carne true. Acetogeninas's concentrate went submitted to physicochemical
analysis and determination of the chemical intervening composition
cromatografía sells out of high resolution ( HPLC ), to found with a lot of
probability of than the named Acetogenina squamostatin, the O be the majority
component of Acetogeninas's concentrate obtained as from Annona's seeds
muricata L. ( 43,1206 % ), when the results compared to give them another
studies of the vegetable sort were determined that our Acetogeninas's sign
possesses bigger squamostatin's quantity O,
At a later time determined insecticide effect of the Acetogeninas Aedes's

aegypti with solutions arranged for to different concentrations in front of larvae
itself ( 1O 000, 5000. 500 and 50 ppm ), getting results from great interest, being
the concentration of 1O.OOOppm her that bigger insecticide effect in front of them
demonstrated concentrations of experimentation besides, and ( Temefós ) you
presented an insecticide similar effect when the same larvae's number in an
approximate period of time killed relating to the insecticide employer.
determined Salmonella's Typhi anti-bacterial activity of the Acetogeninas in front

of bacteria! ancestries itself intervening spp Kirby Bawer's technique for which
they utilized standardized concentrations ( 100, 123,97, 153,69, 190,52, 236,19,
292,81, 362,99 and 450mg ) obtained as from a pilot proof. Meeting than
inhibition of the bacteria! growth that is considered like the minimal inhibitory
concentration, value are produced as from 1OOmg ( CIM ), and the bigger anti-
bacterial effect produced to the concentration of 450mg with a halo of inhibition
in average of 31.67mm which ( Ciprofloxacino ) the utilized employer proved
better than the medication's halo of inhibition which went from 27.67mm on the
average.
Key words: Annona muricata L, Acetogeninas, insecticida activity, Aedes
aegypti, anti-bacterial effect, Salmonella typhi.
INTRODUCCIÓN
En el Perú, existe una gran variedad botánica con posibles usos medicinales;
en base a conocimientos empíricos sobre su uso terapéutico. Estos
conocimientos para ser validados deben ser probados experimentalmente y ello
conlleva un proceso científico.
La importancia de las plantas medicinales, ha sido apoyada frecuentemente por

diversas organizaciones internacionales como la asamblea Mundial de la Salud
y la organización Mundial de la salud quienes con el proyecto "Salud y
Medicina Tradicional" han dado mucho valor a los remedios fitoquímicos el 80%
de la población mundial usa plantas como fuente primaria de agentes
medicinales, en muchos países del mundo existen sistemas bien establecidos
de medicina tradicional, en donde los remedios naturales están recopilados por
lo que las plantas continúan siendo una fuente mayoritaria de productos
naturales biológicamente activos, que puedan servir como entidades
comercialmente significativas o suministrar estructuras que sirven de blanco
para el desarrollo de derivados modificados que poseen toxicidad reducida y
mejorada actividad ( 1).
Las plantas, en conjunto, producen más de 100.000 sustancias de bajo peso

molecular conocidas también como metabolitos secundarios. Estos son,
normalmente, no-esenciales para el proceso metabólico básico de la planta.
Entre ellos se encuentran terpenos, lignanos, alcaloides, azúcares, asteroides,
ácidos grasos, etc. Semejante diversidad química es consecuencia del proceso
evolutivo que ha llevado a la selección de especies con mejores defensas
contra el ataque microbiano, o la predación de insectos y animales. Hoy en día
se sabe que estos metabolitos secundarios tienen un rol importante en el
mecanismo defensivo de las plantas. Por lo tanto en los últimos años se está
retornando al uso de las plantas como una alternativa fuente de
antiespasmódicos, analgésicos, antibacterianos, pesticidas, etc. más seguros
para la salud humana y el medio ambiente(2).
La Annona muricata L. es un árbol que ha sido utilizado por culturas

antiquísimas entre ellas la Chimú (pre Inca) con fines medicinales y alimento.
Todas las partes de la planta se utilizan con fines terapéuticos ampliamente
comprobados desde la década de 1940. Su uso en la medicina tradicional se
debe por sus propiedades beneficiosas las que se mencionan como protector,
eleva el sistema inmunológico hasta en un 50%, presenta Propiedades
rejuvenecedoras y antioxidantes, Antitumorales, antirreumático, antiartrítico,
antidiabético, anti inflamatorio, endocrinológico, sedativo, anti diarreico,
fungicidas y antimicóticas, antipsoriacicas, antiparasitarias, antibacterianas,
antihistamínicas e insecticidas (3).
Históricamente, las campañas de control de los mosquitos han tenido éxito en

la eliminación de Aedes aegypti, el vector urbano de la fiebre amarilla en la
mayoría de los países continentales de Centroamérica y Sudamérica (4). Sin
embargo, los mosquitos de esta especie han recolonizado las zonas urbanas
de la región y vuelven a suponer un riesgo de fiebre amarilla urbana. Por este
motivo surge la opción de utilizar agentes del entorno las cuales son de fácil
acceso por los pobladores para poder controlar la proliferación de los
mosquitos (5).
El dengue y la fiebre amarilla en la actualidad son Arbovirosis humanas de

mayor importancia en salud pública, enfermedades víricas que mayormente
están distribuidas en países en vías de desarrollo, donde la peligrosa
combinación del abandono de condiciones ambientales, los factores
climatológicos y el alto índice de pobreza dificultan la erradicación del mosquito
Aedes aegypti que actúa como vector. Así como también las enfermedades
entéricas causadas por infecciones bacterianas que ocasionan una gran parte
de carga de morbilidad y mortalidad en niños, en países en vías de desarrollo
nos llevan a buscar nuevas alternativas para evitarlas.
En tanto una amplia variedad de antimicrobianos naturales, han sido

desarrollados a partir de microorganismos, plantas y animales, muchos de los
cuales, ya han sido empleados para la conservación de la salud y otros vienen
siendo investigados.
CAPITULO 1
1. GENERALIDADES
1.1 PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA
La fiebre amarilla también llamada Plaga Americana, es una enfermedad vírica

aguda e infecciosa causada por el virus de la fiebre amarilla transmitida por
mosquitos infectados del genero Aedes. Es una causa importante de
enfermedad hemorrágica en muchos países de África y Sudamérica, a pesar
de la existencia de una vacuna efectiva como medida de profilaxis.
Se calcula que cada año se producen en el mundo 200 000 casos de fiebre
amarilla que causan unas 30 000 muertes. El virus es endémico en las zonas
tropicales de África y América Latina, con una población de más de 900
millones de habitantes, de ahí surge la importancia en el manejo adecuado de
medidas de control de los mosquitos infectados en zonas latentes a estas
infestaciones (1 )(6).
En todo el continente americano, se han notificado 2395 casos entre 1985 y

1999, con un total de 1764 muertes por fiebre amarilla. Más del 80% de estos
casos provinieron de Bolivia y de Perú (6).
La mayoría de los brotes en Sudamérica ocurren entre personas que trabajan
en las selvas tropicales lluviosas, convirtiéndose por ello, en esas localidades,
en una enfermedad ocupacional (6).
El Dengue en la actualidad es una de las enfermedades víricas humana de

mayor importancia en salud pública, resultando endémico en muchas regiones
tropicales y subtropicales del mundo. Anualmente, en el mundo, se reportan
aproximadamente 50-100 millones de casos de dengue clásico (OC) y 250 000
a 500 000 casos de dengue hemorrágico (DH), constituyéndose está
enfermedad en la principal causa de hospitalización y muerte entre los niños
(6).
Dos quintas partes de la población mundial viven en áreas de riesgo para

dengue, mayormente distribuidas en países en vías de desarrollo como el Perú,
donde la peligrosa combinación del abandono de condiciones ambientales, los
1
factores climatológicos y los índices crecientes de pobreza dificultan la
erradicación del Aedes aegyptí que actúa como vector. (7)
En el Perú, los primeros casos de dengue en forma epidémica fueron

reportados en la Amazonia (!quitos, Pucallpa y Tarapoto) en 1990 (7 858 casos
en total) desde entonces, el dengue se ha extendido en el país desde el oriente
hacia el occidente y de norte a sur. En 1991, se notificaron epidemias en Tingo
María y chanchamayo; en 1992, en Tumbes; y en 1993; en Piura. (7)
En la región de Cusco los casos reportados de dengue al sistema de vigilancia

epidemiológica de la DIRESA durante los tres últimos años (2009, 201 O y 2011)
fueron en total 57 siendo el 2011 el año donde se reportó todos los casos. Por
otra parte los casos reportados de fiebre amarilla al sistema de vigilancia
epidemiológica de la DIRESA durante los años 2000 al 2011 en la región de
Cusco fueron de 38 casos en total teniendo una incidencia mayor en los 5
últimos años con 18 casos (ANEXO N° 13). (8)
Muchas personas que habitan áreas endémicas, utilizan como medio de

tratamiento la medicina tradicional como complemento a los tratamientos
médicos, dentro de estas enfermedades encontramos en nuestro país
enfermedades como la fiebre amarilla, producida por un virus cuyo vector es el
mosquito Aedes Aegypti que ha sido fuente de epidemias devastadoras en el
pasado (7).
Para lograr disminuir la diseminación de esta enfermedad se observo que la

única forma de controlarlas es mediante la erradicación o reducción a niveles
extremadamente bajos del vector, utilizando insecticidas químicos Por esta
razón, la OPS (2001 ), propuso el llamado control selectivo de vectores, que
involucra el uso de recursos disponibles en un determinado territorio y al
alcance de la comunidad, con el propósito de adaptarlos y adecuarlos como
medidas para el control de vectores (7).
A su vez los desórdenes gastrointestinales son causa importante de

enfermedad de la población en general; los más frecuentes son las diarreas
infecciosas y el dolor abdominal en niños, el estreñimiento y gastritis en
2
adultos. La epidemiología de estas enfermedades se agrava por la transmisión
feco-oral muchas veces como consecuencia de la falta de agua potable y
deficientes sistemas de eliminación de excretas. Estas enfermedades se dan
por diferentes patógenos entre ellas las que destaca en nuestro medio es
Salmonella la cual es un microorganismo procariota unicelular considerado
patógeno para el ser humano (9).
En la región Cusca la fiebre tifoidea tiene una incidencia elevada reportándose

según la información recogida del MINSA en el año 2009 se registraron
9,037casos, en el año 2010 se registraron 7,427 casos (anexo N°14) (10).
Por lo que se decidió realizar este estudio sobre la actividad insecticida y

antibacteriana In Vitro de esta especie, los cuales proporcionarán una validez
científica que será necesaria para garantizar su eficacia en el tratamiento y
control de manera informada de los vectores de la fiebre amarilla y su uso
como un antibacteriano frente a una determinada especie bacteriana (8).
1.2. FORMULACION DEL PROBLEMA
¿Presentaran las Acetogeninas presentes en las semillas de Annona muricata

L. (Masasamba) obtenidas de extractos etanólicos efecto insecticida sobre
larvas de Aedes aegypti (vector de la fiebre amarilla y dengue)?
¿Presentarán las Acetogeninas obtenidas del extracto etanólico de las semillas
de Annona muricata L. (Masasamba), actividad antibacteriana sobre bacterias
de Sa/monella typhi spp, responsable de infecciones diarreicas agudas en
nuestra comunidad?
1.3. OBJETIVOS
1.3.1 OBJETIVOS GENERALES
1. Determinar la actividad insecticida de las Acetogeninas aisladas a partir de
extractos etanólicos de semillas de Annona muricata L. frente a larvas de
Aedes aegypti (vector de la fiebre amarilla y dengue).
3
2. Determinar la actividad antibacteriana in vitro de las Acetogeninas aisladas a
partir de extractos etanólicos de semillas de la especie vegetal Annona
muricata L. "Masasamba" frente a cepas de Salmonella Typhi spp.
1.3.2 OBJETIVOS ESPECIFICOS

• Obtener los extractos etanólicos al 70% de las semillas de la especie
vegetal Annona muricata L. "Masasamba".
• Obtener las Acetogeninas presentes en los extractos etanólicos al 70% de
las semillas de la especie vegetal Annona muricata L. "Masasamba"
mediante técnicas de extracción por solventes.
• Realizar los ensayos fitoquímicos preliminares de los extractos etanólicos

al 70% de las semillas de la especie vegetal Annona muricata L.
(Masasamba) tales como: porcentaje de humedad, porcentaje de
extracción y pruebas de solubilidad.
• Realizar el análisis fisicoquímico del concentrado de acetogeninas
mediante cromatografía en capa delgada y cromatografía de líquidos de
alta resolución (HPLC).
• Recolectar e identificar larvas de Aedes aegypti mediante técnicas

estandarizadas.
• Comparar la actividad insecticida in vitro de las Acetogeninas obtenidas del

extractos etanólicos al 70% a partir de semillas de la especie vegetal
Annona muricata L (Masasamba) con un insecticida estándar (Temefós).
• Obtener cepas de cultivos de Salmonella typhi spp. para la determinación

del efecto antibacteriano de las Acetogeninas obtenidas a partir de
extractos etanólicos al 70% de semillas de Annona muricata L.
(Masasamba).
• Realizar el control microbiológico de las Acetogeninas obtenidas a partir de

extractos etanólicos al 70% de Annona muricata L.
4
• Determinar la concentración mínima inhibitoria (CMI), de las Acetogeninas
obtenidas de los extractos etanólicos al 70% de semillas de Annona
muricata L. (Masasamba) frente a cepas de salmonella typhi spp.
• Comparar la actividad antibacteriana in vitro de las Acetogeninas obtenidas
del extractos etanólicos al 70% a partir de semillas de la especie vegetal
Annona muricata L (Masasamba) con un antibacteriano estándar
(Ciprofloxacino).
• Realizar el análisis estadístico de los datos obtenidos en cada ensayo de la
presente investigación.
1.4. JUSTIFICACION E IMPORTANCIA
En el conocimiento:
El empleo de las plantas medicinales para el tratamiento de diversas
enfermedades que afectan a la población, es cada vez más frecuente y la
Masasamba, una planta que crece en la zona tropical de la sierra peruana
(Quillabamba- Cusca) posee numerosas cualidades entre las que destacamos
su efecto insecticida y antibacteriana.
La fiebre amarilla y el dengue son enfermedades transmitidas por un vector, de
gran importancia en salud pública. La prevalencia de estas enfermedades
víricas está asociada a su principal vector Aedes aegypti (Linnaeus), es
endémica en más de 100 países y unos 2.500 millones de personas están
ahora en riesgo de contraer la enfermedad. Según la Organización mundial de
la salud (O.M.S) pueden presentarse unos 50 millones de infecciones cada
año. En el año 2002 se presentó la cifra más alta de casos de fiebre
hemorrágica en América latina, 1'019.196 casos fueron registrados, de los
cuales 17.363 fueron fiebre amarilla hemorrágica, presentándose 225 muertes
(1 ). Durante el año 2001, el Instituto Nacional de Salud (INS) recibió un total de
6,072 muestras procedentes de 16 departamentos del Perú, determinándose
1593 casos positivos a dengue por serología, que representa 6,8% de los
casos reportados como probables en el mismo año. (7)
La fiebre tifoidea es una enfermedad infecciosa intestinal, grave y aguda que

constituye un problema severo de sal~d pública en casi todo el mundo, aunque
S
su incidencia ha disminuido en países con mejores niveles de higiene y
saneamiento ambiental, en nuestro país aun se presentan casos en los
establecimientos de salud debido a las condiciones higiénicas en la que la
mayoría de población está sometida. (8)
En prioridad:
Muchas especies vegetales, especialmente de las Annonaceaes, han mostrado
tener bioactividades, en especial la insecticida así como también la
antibacteriana (Aiali et al., 1999). Sin embargo, poco se ha investigado dentro
de los programas de salud pública local y nacional, la manera de controlar los
altos niveles de resistencia fisiológica alcanzados a causa de los insecticidas
sintéticos actualmente en uso (OMS, 1992). Por este motivo y con la
perspectiva de incorporar un recurso alternativo para el control de los
mosquitos A. aegypti, en beneficio de la salud humana y controlar epidemias
de fiebre amarilla y dengue en zonas latentes se desea realizar esta
investigación dentro de un manejo racional de nuestro medio ambiente (1 ).
La salmonelosis es una enfermedad que afecta esencialmente a los seres
humanos, es transmitida al ingerir alimentos contaminados por lo que la
población es muy susceptible a contraerla, por este motivo se busca incorporar
a la especie vegetal como una alternativa de tratamiento.
Por lo que el presente trabajo de investigación pretende dar una nueva
alternativa de tratamiento de origen natural, con menor toxicidad y de bajo
costo, en vista que la especie vegetal crece de forma silvestre, lo que facilita a
la población su fácil acceso a las plantas para un tratamiento adecuado. (9)
1.5. HIPOTESIS
1.- Las Acetogeninas obtenidas de extractos etanólicos a partir de semillas de

Annona muricata L (Masasamba) poseen actividad insecticida frente a larvas
de Aedes aegypti. Mosquito catalogado como vector responsable de
enfermedades endémicas en nuestro país como son la Fiebre Amarilla y
Dengue.
6
2.- Las Acetogeninas obtenidas a partir de extractos etanólicos de semillas de
Annona muricata L "Masasamba" posee actividad antibacteriana frente a
bacterias del genero Salmonella, en particular Salmonella Typhi spp. Agente
causal de diarreas agudas en nuestra comunidad.
1.6. LIMITACIONES DE LA INVESTIGACION
La temporada de recolección del fruto de Annona muricata L (Masasamba) que

contiene las semillas sólo se da entre los meses de febrero a mayo por lo que
la accesibilidad a las zonas donde se encuentra se ve dificultada por las lluvias
de temporada que causan problemas en las vías de transporte para acceder a
las zonas donde se desarrolla la planta, debido a esto su recolección es
limitada.
Las condiciones medio ambientales de las zonas de recolección de larvas de
Aedes aegypti.
La obtención de cepas puras de bacterias de salmonella typhi ATCC por la falta
de proveedores.
La obtención del medio de cultivo Bismuto Sulfito según Wilson Blair la cual se
utiliza para la diferenciación de Salmonella typhi frente a otras salmonellas.
Estos puntos se convierten en limitaciones de la investigación debido además a
diversos factores como de viaje, pedido de la cepa de bacterias a una entidad
reconocida, factores económicos, desconocimiento de las zonas de
recolección, etc.
7
CAPITULO 11
2. MARCO TEORICO
2.1. VISION HISTORICA

El bagaje de conocimiento sobre el uso de las plantas de las culturas andinas
es enorme. La información etnobotánica andina existente está catalogada de
acuerdo al momento histórico en que fue obtenida, los tipos de usos atribuidos
a las plantas y los grupos humanos involucrados.
La Masasamba es comúnmente conocida como guanábana su origen no se
conoce con certeza sin embargo, actualmente se cultiva en América tropical, el
sudeste Asiático y en las islas Filipinas. Ha sido introducida en muchos países
y es considerada la más tropical de las anonas.
Fue cultivado en el Perú prehispánico. Su fruto se encuentra representado con
frecuencia en la cerámica precolombina de la costa peruana, conforme lo
testimonia la existencia de varias piezas de cerámica de la Cultura Chimú en la
que está representada con exactitud. (12)
Los indígenas cultivaron cuidadosamente muchas especies de la familia
Annonaceae en Mesoamerica, los valles interandinos, Amazonia y otros
lugares. (12)
Dentro de la medicina tradicional los indígenas usaban las hojas en infusión
como antidiarreicas y como digestivas. Aplicadas localmente como cataplasma,
lo empleaban en el caso de las paperas. Las flores eran usadas en casos de
gripe y catarro bronquial. (13)
En los últimos años, el extracto de guanábana ha llegado a ser ampliamente
aclamado por tener supuestas propiedades altamente potentes para combatir
diversas enfermedades. Los usos más comunes de esta planta van desde el
cultivo de sus frutos, la obtención de aceites para perfumería y el interés de las
propiedades de dureza y elasticidad que presenta su madera. (13)
Históricamente, las campañas de control de los mosquitos han tenido éxito en
la eliminación de Aedes aegypti, el vector urbano de la fiebre amarilla y dengue
en la mayoría de los países continentales de Centroamérica y Sudamérica. Sin
embargo, los mosquitos de esta especie han recolonizado las zonas urbanas
de la región y vuelven a suponer un riesgo de estas enfermedades.
8
Desde el comienzo de los años en el que se ha tratado de erradicar a los
mosquitos causantes de la fiebre amarilla se observo que se estaba dando a
lugar la resistencia de los mosquitos, vectores de enfermedades metaxénicas a
los insecticidas químicos la cual se ha incrementado en los últimos años.
Frente a esta realidad, se está realizando la búsqueda de métodos alternativos.
2.2. ANTECEDENTES
2.2.1. ANTECEDENTES INTERNACIONALES

DEL ESTUDIO FITOQUIMICO:
Figueroa, et al., 1995 "propiedades antibacterianas, antimicóticas e
insecticidas de aceites esenciales de especies vegetales aromáticas
nativas" revista BIOFARBO; Instituto De Investigaciones Fármaco
Bioquímicas, Facultad de Ciencias Farmacéuticas y Bioquímicas Universidad
Mayor de San Andrés-Bolivia (14).
Menciona que las semillas, las raíces y las hojas de Annona muricata L.
(Masasamba), presentan una composición compleja, presenta más de 30
componentes principales, los componentes mayormente presentes son
Lactonas como Annohexocina, Annomuricina A, B, C y E, Annomutacina,
Annopentocinas A, By C, Muricoreacina, Gigantetronemina, Murihexocina A y
C, Javoricina; lípidos como Acido gentísico, Acido lignocérico, Acido linoleico,
Acido esteárico e lsoquinolinas como Anonaine, Anonine, Atherospermine,
Coreximine.
Por todo ello tiene actividad antibacteriana de amplio espectro, actividad
antimicótica contra saprofitos y un efecto repelente contra vectores de la fiebre
amarilla (14).
Robinan, et al., 1986 "SEMINARIO TRAMIL No. 2. Investigación Científica y
Uso Popular de Plantas Medicinales en el Caribe". Menciona que las
diferentes partes del vegetal presenta diversas propiedades medicinales las
cuales son utilizadas por los lugareños donde habita la planta de diferentes
maneras y de acuerdo a sus conocimientos como: Antibacteriana (Corteza),
Antiparasitario (Semillas y corteza), Antiulceroso (Corteza), Galactogogo
(Fruto), Antiespasmódico (Hojas), Sedativo (Hojas), Antimalárico (Hojas),
9
Antidiabético (Hojas), Vasodilatador (Hojas), Pectoral (Flores), Amebicida
(Corteza), Vermífugo (Corteza y hojas), Insecticida (Hojas y raíz) (15).
Murillo et, al., 2001 "las Annonaceae de colombia" pag 49-58: Menciona el
estudio sobre la medicina tradicional como fuente que conduce al
descubrimiento de nuevos agentes antiparasitarios, ha encontrado que plantas
de la familia Annonaceae son utilizadas por comunidades colombianas como
antiparasitarias. Algunas especies de esta familia presentan interesantes
metabolitos con actividad biológica: polifenoles, aceites esenciales, terpenos
compuestos aromáticos, Acetogeninas particularmente activas, moléculas con
un amplio espectro de acción antibacteriana, antiparasitaria e insecticida y los
alcaloides de tipo bencilisoquinolinicos. (16).
Escobar, T. Zarate, R. Bastidas, A., 1994 "Biología floral y polinización
artificial del guanábano Annona muricata J. en condiciones del valle del
Cauca Colombia" .pp. 7-20.
Menciona que Annona muricata por sus componentes activos posee
propiedades insecticidas debido a la presencia de compuestos como los
alcaloides muricina y muricinina, Acetogeninas, flavonoides entre otros. Las
semillas pulverizadas son utilizadas para matar piojos, chinches, polillas y
cucarachas. ( 17)
DEL ESTUDIO FARMACOLOGICO:
Montoya, et, al., Acetogeninas de Annonaceae como pesticidas naturales
sobre larvas del cogollero del maíz Spodoptera frugiperda (lep:
noctuidae). Boletín del museo de Entomología de la Universidad del Valle,
32-40.2005.
Realizaron un estudio que demuestra la eficiencia de las Acetogeninas
Annonaceae encontradas en extractos es una alternativa ecológica en el
manejo integrado de plagas, debido a la abundancia de Annona muricata. (18)
Marmara et. al., veinte plantas medicinales, instituto de ciencia y
tecnología agrícola, publicaciones recursos naturales, 28-35.2004.
Realizaron una evaluación de dos acetogeninas de Annonaceae y sus efectos
insecticidas y mutagénico sobre diferentes especies con distintos hábitos
alimenticios. (19)
10
Me. Lughlin, 1.; zeng, N.H. Oberlies, G-X; Zhao, Z-M. Recent avances in
phytochemistry. Mata, R and Romeo, J.T Plenum Pres, 249-310.1995.
Mencionan que las plantas de la familia Annonaceae como la A. muricata, A.
cherimolia y otras presentan Acetogeninas en las raíces como en las semillas
de los frutos las cuales son compuestos naturales que presentan una extensa
gama de actividad biológica, antitumoral, citotóxica, antimicrobiana, plaguicida,
anti protozoario y antihelmíntico (20).
Romain, A.D.; Poupon, E.; Romero, V.; E.; Peris, E.; Lewin, G.; Cortes, D,;
Brandt, V.; Hocquemiller, R. 62,;6248-6257.
Menciona que las Acetogeninas son compuestos de estructura característica
como la Escuamocina; Acetogenina bis-THF, Annonacina; acetogenina mono-
THF dihidroxilada presentes en semillas de plantas de la familia Annonaceae
como A. murícata A. cherimo/ía, A. esquamosa y de otras Anonáceas. El
interés surge por algunos estudios que sugieren que ciertas Acetogeninas de la
Annona muricata (Masasamba) y de otras Annonaceaes presentan un
excelente potencial como Biopesticidas. (21)
Cave, A., Figadere, B., Laurens. A. and Cortes, D. 1997. "Acetogenin from
Annonaceae progress in the chemistry of organic natural Springer''. 81-
287; 1997.
Realizaron un estudio con Acetogeninas evaluando su actividad antibacteriana
e insecticida. La actividad antibacteriana fue evaluada frente a bacterias Gram
positivas ( Staphilococcus aureus, Bacillius sp) y bacterias Gram negativas (E
coli, entre otras enterobacterias). Los resultados mostraron sensibilidad
bacteriana a dichos compuestos.
Mientras que en el estudio insecticida mostraron efectos positivos contra
insectos como el mosquito transmisor de la fiebre amarilla, las cucarachas,
Drosophila melanogaster y algunas especies de arañas. (22)
Pereira, A.M.;Ferro D. monografía de diez plantas medicinales. p7- 2008.

Mencionan que los extractos metanolicos, hexánicos producidos a partir de
semillas, hojas y corteza presentan actividad antibacteriana frente a E.coli,
Pseudomonas aeruginosa, Shigella flexeri, Staphylococcus aureus, S. albus.
(23)
11
2.2.2. ANTECEDENTES NACIONALES
Tapia~ Mario: "Semillas Andinas". Concytec. 1993. Estudio que demuestra
la presencia de compuestos con potente actividad anticancerígena las cuales a
su vez presentan actividad potente contra los vectores de la fiebre amarilla
siendo las siguientes: Bullatacin, Bullatacinone, Muricoreacin, Murihexocin C,
Annomuricin A, Annomuricin 8, Muricatocin A, Muricatocin C, Muricapento c.
(24).
2.2.3. ANTECEDENTES LOCALES
Actualmente no existe ningún estudio de Annona muricata L. sobre el efecto
insecticida sobre algún vector en nuestra localidad.
2.3. ESTADO DE LA CUESTIÓN

Según la OMS el número de casos de fiebre amarilla ha aumentado en los dos
últimos decenios debido a diversos factores como a la disminución de la
inmunidad de la población. Hay varias especies diferentes de mosquitos Aedes
y Haemogogus que transmiten el virus (1 ).
Según el MINSA los mosquitos se crían cerca de las casas (domésticos), en el
bosque (salvajes) o en ambos hábitats (semidomésticos) en nuestra zona
tropical del Perú. El control de los mosquitos es fundamental hasta que la
vacunación haga efecto. El riesgo de transmisión de la fiebre amarilla en zonas
urbanas puede reducirse eliminando los potenciales criaderos de mosquitos y
aplicando insecticidas al agua donde se desarrollan en sus estadios más
tempranos (6).
Estudios realizados en Colombia sobre Annona muricata L. (Masasamba),
mencionan que los componentes presentes en las semillas, hojas, raíz, tallo,
fruto hacen posible· la determinación de diversos efectos farmacológicos como
citotóxico, antimicrobiano (antibacteriano), antiparasitario e insecticida
(larvicida) frente al vector de fiebre amarilla. Las Acetogeninas presentes en la
semilla de Annona muricata L. son responsables de la actividad plaguicida (9).
Según la unidad de estadística e informática del Hospital de Apoyo
Departamental Cusco en el año 201 O se han reportado 74 casos de fiebre
tifoidea de los cuales 18 han sido hospitalizados por el cuadro agresivo que
presentaron los pacientes, en el año 2011 desde Enero hasta la fecha se han
12
reportado 31 casos de fiebre tifoidea de los cuales 01 caso fue derivada a
hospitalización. (25)
2.4. BASES TEÓRICO CIENTÍFICAS.
2.4.1. ASPECTOS DESCRIPTIVOS DE LA ESPECIE VEGETAL Annona

muricata L.
2.4.1.1. Nombre científico de la especie vegetal.
Annona muricata L. pertenece a la familia Annonaceae es conocida en América

con el nombre graviola y sursop en idioma inglés. Sus sinónimos son: Annona
bonplandiana (Kunth), Annona cearensis (Barb. Rodr), Annona macrocarpa
(Wercklé ), Annona muricata (var. Borinquensis Morales) y Guanabanus
muricatus (M. Gómez). (26)
2.4.1.2. Nombres Populares
La Annona muricata L. es conocida popularmente con los nombres como

guanábana, graviola, masasamba, carasol, chachiman, huana-huana. Su
origen no se conoce con certeza, sin embargo, actualmente se cultiva en
América tropical, el sudeste asiático y las islas filipinas (26).
2.4.1.3. Origen de la especie vegetal
El guanábano (Annona muricata L.) es una planta cuyo centro de origen es la

parte tropical de Sudamérica pero ha sido introducida en muchos países. Crece
óptimamente entre los 0- 1,000 m.s.n.m. Es considerada la más tropical de las
annonas, pues no resiste el frío (26).
13
2.4.1.4. Clasificación taxonómica de la especie vegetal.
Reino Plantae
Phyllum Spermatophyta
Subphyllum Magnoliophytina
Clase Magnoliopsida
Subclase Magnolidas
Orden Magnoliales
Familia Annonaceae
Género Annona
Especie: Annona muricata.
Fuente: Comisión Nacional Forestal (26)
FIGURA N° 1: Fruto de Annona muricata L.

Fuente: Annona muricata L. (1753). (26).
2.4.1.5. Descripción Botánica
Árbol pequeño que llega a alcanzar hasta 1O metros de altura, de follaje

compacto, hojas simples, coriáceas verde oscuro, grandes y brillantes; flores
bisexuales solitarias o en pares en tallos cortos que brotan de las ramas viejas;
cáliz con 3 sépalos diminutos e inconspicuos de color verde; corola con 6
pétalos de color amarillo; fruto baya colectiva o sincarpo, de forma
acorazonada u ovoide, con pericarpio (cáscara) verdoso con tubérculos
14
espiniformes carnosos, la pulpa es blanca y jugosa de sabor agridulce; las
semillas de color negro lustroso o castaño (27).
FIGURA N° 2: Características botánicas de la especie

vegetal (Annona muricata L).
Fuente: Annona muricata L. (1753). (26)
2.4.1.6. Composición química y valor nutricional del fruto.

(100 gramos de fruta fresca)
• Humedad 80,6 %
• Fibra 1,63 %
• Cenizas 0,73%
• Grasa 0,31 %
• Proteína 1 ,22 %
• Almidón 1,62%
• Vitamina C 0,021 %
• Azúcares ( Glucosa, Fructosa) 15,63 %
• Potasio 45,8 mg
• Sodio 23 mg
• Magnesio 23,9 mg
• Fósforo 26,0 mg
• Hierro 0,47 mg
• Citrulina (proteína).
• Arginina (aminoácido).
• Acido caproico (lípido).
15
• Anonaine (isoquinolina).
• Anoniine (isoquinolina).
• Asimilobine (isoquinolina).(27)
2.4.1.7. Componentes químicos de la semilla
• Lactonas.
• Annomonicina.
• Annomontacina.
• Annonacina.
• Annomuricatina.
• Annonacinona.
• Javoricina.
Contiene además:
• Annomuricatina (proteína).
• Acido linoleico (lípido).
Fuente: Monografía Sobre Pruebas de Actividad Biológica (27).
2.4.1.8. Usos en la medicina tradicional.
Dentro de la medicina tradicional las hojas se usan en infusiones como

antidiarreicas y digestivas. Aplicadas localmente como cataplasma son
antiinflamatorias, y se han usado en el caso de las paperas. Las flores son
pectorales y febrífugas, se usa en casos de gripe y catarro bronquial, poseen
propiedades astringentes, colagogas digestivas y también vermífugas.(27)
16
TABLA 1: Propiedades medicinales de cada parte de la especie vegetal
(Annona muricata L).
Anticancerí geno Hojas y brotes tiernos

Antibacteriana Corteza y semillas
Antiparasitario Semillas y corteza
Antiulceroso Corteza
Galactogogo Fruto
Antiespasmódico Hojas
Sedativo Hojas
' Antimalárico Hojas
Antidiabético Hojas
Pectoral flores
Amebicida corteza
Vermífugo Corteza y hojas
Insecticida Hojas, semillas y raíz
Fuente: biopesticidas de origen vegetal (28).
2.4.1. 9. Acetogeninas.
Las Acetogeninas presentes en las Annonaceae son un grupo de sustancias

conformadas por una cadena larga de C-32 o C-34 de ácidos grasos que
pueden estar combinadas con una unidad 2-propanol en el C-2 para tomar una
y-Lactona, las cuales presentan diferentes bioactividades como antitumoral,
inmunosupresiva, pesticida, antiprotozoaria y antimicrobiana. (29)
Clasificación de las Acetogeninas de Annonaceae.

Las Acetogeninas de Annonaceae se clasifican según la cantidad de anillos
que tengan en su estructura, así se tiene:
•!• Mono-Tetrahidrofurano (THF).

•!• Adyacentes bis-THF.
•!• No adyacentes bis-THF.
•!• sin anillo mono-THF.
17
Estas estructuras también poseen hidroxilos laterales las cuales pueden estar a
uno u otro lado de la estructura, seguida por una subclasificación de las y-
Lactonas o sustituidas por cetolactonas. (29)
o R
Donde:
R=OHóH
GRAFICO N° 1: Estructura general de las Acetogeninas.
Fuente: Aislamiento y caracterización estructural de Acetogeninas obtenidas de
semillas de Annona muricata y Annona cherimolía. (29)
18
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GRAFICO N°2: Clasificación de Acetogeninas según su estructura.
Fuente: Flórez L - Extractos Bioactivos (30)
19
Relación estructura actividad.
Diversos estudios han sugerido una relación entre la estructura de las
Acetogeninas y la actividad biológica al considerar las siguientes
características.
• Las Acetogeninas que contienen en su estructura dos anillos de
Tetrahidrofurano (THF) adyacentes en su estructura son las que han
presentado mayor actividad biológica. Los estudios realizados han sugerido
que la función del anillo de THF sea anclar la Acetogenina a la región que
contiene el glicerol en la membrana liposomal.
• La y-Lactona terminal es esencial para la actividad, ya que una reducción del
doble enlace de la y-Lactona a,~-insaturado reduce la actividad. Las
cetolactonas son menos potentes que las y-Lactonas a,~-insaturada.
• El número de grupos hidroxilo presentes a lo largo de la cadena también

está relacionado con la actividad, presentando mayor actividad aquellas
Acetogeninas que poseen un mayor número de grupos OH.
• Un grupo hidroxilo en C-4 es esencial para la actividad.
• Acetogeninas con grupo Ceto a lo largo de la cadena alifática son menos
activas que aquellas que presentan grupos hidroxilo.
• La presencia de dobles enlaces o de diales vecinales a lo largo de la cadena
hidrocarbonada aumenta la actividad.
• La longitud de la cadena C-35 o c-37 es la ideal para que se presente la
actividad.
• Otro factor que afecta la actividad biológica es la distancia entre los grupos
funcionales presentes en las Acetogeninas.
• Se presenta una mayor actividad cuando la distancia entre la y-Lactona y el
THF es de trece carbonos. Las Acetogeninas que presentan un hidroxilo en
C-9 presentan actividad considerable, así como aquellas que presentan
anillos de THF flanqueados por OH. (30)
Mecanismo de acción de las Acetogeninas.

Una serie de experimentos están demostrando que las Acetogeninas de las
Annonaceae son inhibidoras de la enzima NADH en el complejo 1de la cadena
respiratoria mitocondrial. Se encontró que inicialmente la toxicidad presentada
20
por la exposición de insectos a las Acetogeninas de las Annonaceae, incluye
una disminución lenta en la movilidad y crecimiento antes de la muerte. Tales
síntomas son normalmente atribuidos a los bajos niveles de ATP causados por
los inhibidores respiratorios, sin embargo se requiere estudios futuros para
conocer el tipo de organismo susceptible a estos componentes, incluyendo
mamíferos. (30)
2.4.2. DEL EFECTO INSECTICIDA.
La actividad insecticida asociada con esta familia radica en su importancia en

el tratamiento tradicional para enfermedades como la malaria (31)
Los vectores que transmiten la fiebre amarilla son ciertas especies de Aedes, el
aegypti el más común, con un ciclo de vida único: hombre - A aegypti -
hombre. El ciclo de vida comprende varios estadios: huevo, cuatro estadios
larvales, pupa y adulto. Este último se asocia a las actividades del hombre por
sus características de reproducción y alimentación. La importancia de la
especie vegetal Annona muricata (Mazasamba) radica en que las Acetogeninas
presentes en esta especie vegetal presentan actividad insecticida frente al
vector de la fiebre amarilla y dengue denominado Aedes aegypti.
2.4.2.1. Fiebre Amarilla
La fiebre amarilla, conocida también como mal de Siam o fiebre de Barbados,

es una enfermedad infecciosa aguda, de rápida evolución, que se transmite por
la picadura de mosquitos. Su gravedad puede ser muy variable.
Independientemente de su intensidad, una vez padecida se adquiere la
inmunidad de por vida. Se manifiesta generalmente en brotes epidémicos de
alta mortalidad en las regiones de África, América Central y del Sur. (32)
Causas
Es una enfermedad vírica trasmitida por mosquitos Aedes aegypti.
Síntomas de Fiebre amarilla
Sólo en los casos más graves aparece la clásica triada de síntomas: ictericia,
hemorragia, fiebre y albuminuria intensa. Durante la incubación, que dura entre
21
tres y seis días, el virus permanece inactivo. La primera fase, que dura entre
tres y cuatro días, se caracteriza por fiebre, escalofríos, dolores musculares,
cefaleas, pérdida de apetito, náuseas, vómitos y el signo de Faget, frecuencia
cardiaca normal en presencia de fiebre elevada. Pasado este periodo el
paciente mejora y los síntomas desaparecen. (32)(33)
Aproximadamente el 15 por ciento de los enfermos desarrolla la fase tóxica, en

la que la mayoría de los órganos fallan. Esta fase se caracteriza por la
reaparición de los síntomas: fiebre, ictericia (tinte amarillo de piel y mucosas),
dolor abdominal, vómitos, hemorragias nasales, conjuntivales y gástricas. La
presencia de la albúmina en la sangre (albuminuria) indica que los riñones
comienzan a fallar, hasta que se produce un fracaso renal completo con la no
emisión de orina (anuria). Esto provoca la muerte en unos diez o catorce días
en ·la mitad de los pacientes que entran en esta fase. El resto se recupera sin
secuelas. (33)
Prevención
La vacunación es la medida más eficaz contra el contagio, por lo que la OMS la

recomienda para cualquier viaje fuera de áreas urbanas en países situados en
zonas de América Central y del Sur y parte del África Subsahariana. Debe ser
administrada en los centros oficiales de vacunació~ acreditados por la OMS.
1
Una dosis proporciona inmunidad durante diez años a partir del décimo día de
administración. Provoca efectos adversos, como dolor local, dolores
musculares o dolores de cabeza y también puede aparecer fiebre. Está
contraindicada durante el embarazo, en las personas alérgicas al huevo, en
inmunodeprimidos y en niños menores de nueve meses. Otras medidas de
prevención son evitar la picadura de los mosquitos y controlar su reproducción
(33).
Tratamiento
No existe un tratamiento específico. Se deben de controlar los síntomas y

mantener las funciones de los órganos vitales cuando comiencen a fallar, así
como los volúmenes de líquidos y la concentración de electrolitos corporales.
22
Está contraindicado el uso de ácido acetil salicílico. La fiebre debe ser tratada
con paracetamol y la deshidratación leve con sales de rehidratación oral, bajo
la supervisión de un médico. (33)
2.4.2.2. Dengue.
El dengue es una enfermedad causada por un virus que es transmitido a través

de la picadura de mosquitos infectados. Los viajeros pueden infectarse durante
visitas a países tropicales y subtropicales. La enfermedad ocurre en la mayor
parte de los países tropicales en Asia, las Islas del Pacífico, las islas del
Caribe, México, Sur y Centro América y África.
El virus del dengue es un flavivirus que incluye 4 serotipos (DEN1, DEN2,
DEN3 y DEN4). Cualquiera de estos serotipos puede producir la enfermedad.
El más frecuente en el dengue clásico es el serotipo 1, que es también el
menos frecuente en el dengue hemorrágico. (34)
Causas
Es una enfermedad vírica trasmitida por mosquitos hembra de Aedes aegypti,
es un flavivirus que incluye 4 serotipos (DEN1, DEN2, DEN3 y DEN4). (34)
Síntomas del Dengue
En el Dengue clásico, los síntomas son semejantes a los de una gripe fuerte:
fiebre alta de aparición brusca, dolor intenso de cabeza y detrás de los ojos,
dolores musculares y de las articulaciones, nauseas, vómitos y erupción de la
piel.
El Dengue hemorrágico, es menos frecuente, pero puede aparecer como una
enfermedad severa y a veces mortal. A los síntomas anteriores se le agrega
sangrado en distintas partes del cuerpo (tendencia a tener fácilmente
moretones, distintos tipos de hemorragias en la piel, nariz, encías e internas).
(35)
Prevención.
La única manera de prevenir el contagio del dengue es eliminar al mosquito

transmisor, básicamente a través de la eliminación de los criaderos de sus
larvas, que se reproducen en recipientes con agua tanto en domicilios como en
espacios públicos. Sin el mosquito que la transmite, no hay dengue.
23
A nivel individual, se debe evitar la picadura de los insectos. Para ello se
recomienda usar ropa de algodón de colores claros que cubra brazos y piernas,
y usar repelentes en forma prudente y sin excesos. (35)
Tratamiento
No existe un tratamiento específico. Se deben de controlar los síntomas y

mantener las funciones de los órganos vitales cuando comiencen a fallar, así
como los volúmenes de líquidos y la concentración de electrolitos corporales.
Está contraindicado el uso de ácido acetil salicílico. La fiebre debe ser tratada
con paracetamol y la deshidratación leve con sales de rehidratación oral, bajo
la supervisión de un médico. (35)
2.4.2.3. Vector de la fiebre amarilla y dengue mosquito Aedes aegypti.
Los mosquitos Aedes aegypti son vectores del dengue, fiebre hemorrágica del
dengue y de la fiebre amarilla.
El género Aedes comprende muchas especies de distribución cosmopolita,
viven en agujeros en los árboles, o en estanques transitorios de agua dulce o
corrientes. Muchas especies de Norte América producen picaduras molestas.
Ciertas especies pueden actuar como transmisoras de fiebre amarilla, dengue,
wucheriasis y encefalitis viral.
Se caracteriza por sus hábitos intradomiciliarios, asociado directamente al
hombre. (36)
Clasificación científica.
'Reino Animalia
Filo. Arthropoda
Clase In secta
Orden Diptera
Familia Culicidae
Género Aedes
Subgénero Stegomyia
Especie: Aedes aegypti

Fuente: parasitología clínica. (36)
24
Características descriptivas de Aedes aegypti.
Aedes aegypti pertenece al orden dípteros y de la familia culicidae, que se
caracteriza por su pequeño tamaño, con abdomen delgado, a las estrechas,
antenas largas y extremadamente plumosas en los machos; presentan un
aparato bucal adaptado para picar, con una trompa o pico largo y no articulado,
constituido por el labio inferior, por lo que son chupadores labiales. El pico les
sirve a los machos para chupar el jugo o néctar de los vegetales y a las
hembras que son hematófagas, para chupar la sangre de los vertebrados. (36)
FIGURA N° 3: Mosquito hembra Aedes aegypti.
Fuente: Especies Vegetales Promisorias de los Países del Convenio Andrés Bello (36).
Ciclo biológico de Aedes aegypti.

El ciclo de vida de los mosquitos se desarrolla en cuatro etapas que son:
./Huevo:
Está encerrado en una cubierta de tres capas con un pasaje en forma de
embudo que facilita la entrada de espermatozoides. Los huevos son
depositados en el agua. (37)
./Larva:
Alargada, sin patas con pelos enrollados y ramificaciones transversales o
simples, distribuidos en todo su cuerpo, pasa a través de cuatro etapas
hasta alcanzar la longitud de un adulto. Nadan desordenadamente
alcanzando la superficie para respirar. (37)
25
./ Pupa: Megalocéfala, curva, que asemeja un signo de puntuación coma, la
pupa se sumerge rápidamente con una sucesión de saltos como respuesta a
estímulos. (37)
./Adulto:
Al madurar la pupa la membrana es rota por la vesícula aérea y la actividad
del insecto adulto para escapar. (37)
1 ~U'---LT0---.=1
1+----------~LZ'r ~
1 a 2 días después ocurre la ovipostura
GRÁFICO N° 03: Esquema general del ciclo biológico de Aedes aegypti.
Fuente: Evaluación de la actividad larvicida de extractos polares y no polares de Acetogeninas

(36).
2.4.2.4. Biopesticida.
Los biopesticidas o agentes de control biológico (ACB) son productos que

contienen un ingrediente activo o bien se extraen de un ser vivo mediante
procedimientos que no alteran su composición química. Pueden estar
constituidos por toda o una parte de la sustancia extraída, concentrada o no,
adicionada o no a sustancias coadyuvantes. (38)
Una gran variedad de biopesticidas naturales se han desarrollado y aprobado
para el control de plagas de insectos, pestes y enfermedades bacterianas,
estos nuevos derivados botánicos resultan menos dañinos para el medio
ambiente, y además se pueden convertir en una herramienta útil para los
cultivos de alimentos donde no se puedan fumigar (38).
26
Características de los biopesticidas
Los biopesticidas son un grupo de pesticidas que pueden reducir el riesgo del
uso de pesticidas.
Los biopesticidas en general:
• Tienen un espectro de acción muy limitado y un modo de acción especifico.

• Actúan lentamente.
• Tienen tiempos críticos de aplicación.
• Suprime, no elimina la población de la plaga.
• Tienen una persistencia limitada en el campo y tienen una vida de almacén
limitada.
• Son más seguros a los humanos y al medio ambiente que los pesticidas
convencionales.
• No presentan problemas residuales.
Ventajas:
1. La especificidad en su actuación.
2. Respeto al medio ambiente.
3. Los patógenos tienden a desarrollar menor resistencia a productos
microbianos que a productos químicos. (38)
Desventajas:
1. Una efectividad de control en general menor que los productos químicos.

2. Generalmente su acción no es inmediata.
3. Dificultades de producción a nivel comercial.
4. Necesidad de resolver problemas técnicos como la sensibilidad a factores
ambientales (temperatura, radiación UV, humedad) que presentan la
mayoría de estos productos. (38)
Clasificación de Biopesticidas.
Los Biopesticidas se clasifican de acuerdo al agente contra el que es usado
entre estas se encuentran (ver tabla N°2)
27
TABLA N°2: Clases de biopesticidas
Clases Acción
Bioinsecticidas Sobre insectos
Biofungicidas Sobre hongos
Bioherbicidas Sobre hierbas
Biobactericidas Sobre bacterias
Bionematicidas Sobre nematodos
Fuente: Aislamiento y caracterización estructural de Acetogeninas obtenidas de

semillas de Annona muricata y Annona cherimolia. (38)
2.4.2.5. Insecticida utilizado como patrón (TEMEFÓS)
Comúnmente conocido por una de sus fórmulas comerciales de nombre Abate

(grado técnico 98% ), es el plaguicida que ha tenido mayor uso en las Américas,
particularmente en programas de salud pública para el control de las larvas del
mosquito Aedes aegypti, transmisor del dengue y fiebre amarilla.
Temefós es un plaguicida organofosforado no sistémico que actúa por contacto
e ingestión. Interfiere la transmisión de los impulsos nerviosos por inhibición de
la colinesterasa. Se utiliza principalmente como larvicida e insecticida.(39)
Nombre químico
Su nombre químico es 0,0,0,0'-tetrametil-0,0'-tio-di-p-fenileno.
Fórmula global C1sH2oOsP2S3. Peso molecular: 466.48.
Estructura química.
S
\oJ1 'o·~.
o?'··. s . . ·~.
.· . 1 1 .
S
ti
. .·~ ·o'' ..,p,o/
-o . . o-
GRAFICO N° 4: Estructura química de Temefós
Fuente: Red de Acción en Plaguicidas y sus Alternativas de América Latina. (39)
28
FIGURA N° 5: Estructura tridimensional de Temefós
Fuente: Red de Acción en Plaguicidas y sus Alternativas de América Latina. (39)
Clasificación
En función de sus efectos agudos, la EPA clasifica al Temefós en el Grupo 111,
"ligeramente peligroso". Por su parte, la Organización Mundial de la Salud
(OMS) lo clasifica en la categoría U, según la cual "es improbable que presente
riesgo agudo si se usa en forma normal".
En México está clasificado en el tipo toxicológico IV. (39)
2.4.3 DEL EFECTO ANTIBACTERIANO.
2.4.3.1. Fiebre tifoidea.
La fiebre tifoidea se adquiere por la ingestión de alimentos contaminados con

Sa/monella typhi. Con inóculos de 1x109 tiene una incubación de 10 a 14 días
(40).
Síntomas
En la primera semana presenta fiebre, malestar general, mialgias, cefalea,
anorexia y dolor abdominal, puede haber también dolor a la palpación
abdominal, hepatomegalia, esplenomegalia, linfadenopatia generalizada,
inyección conjuntiva!, piel reseca y letargia; en la segunda semana constipación
o diarrea, tos y síntomas respiratorios, roséola tifoídica. Las complicaciones
más comunes son la hemorragia intestinal o perforación intestinal, colecistitis,
hepatitis, artritis, osteomielitis, miocarditis, neumonía, parotiditis, pielonefritis,
orquitis, amigdalitis, meningitis, linfadenitis supurativa y pancreatitis (40).
Agente causal.
La fiebre tifoidea es causada por Salmonella typhi, Salmonella penetra al
humano por vía oral, llega al intestino, se adhiere a la mucosa y producen
patrón secretor y un patrón invasor. Los serotipos de Salmonella no tifoidítica
29
causan gastroenteritis aguda sin invasión. Salmonella pasa a través de la capa
de células epiteliales hacia la lámina propia, donde provocan edema de la
mucosa e inflamación, producen pequeñas cantidades de endotoxinas que
actúan como pirógenos. Posteriormente se diseminan por vía hematógena y
llegan a varios órganos, aparatos o sistemas del cuerpo (40).
Distribución geográfica.
La fiebre tifoidea se encuentra en todas las latitudes y en todos los países del
mundo, con mayor incidencia en la edad escolar. La infección por Salmonella
typhi es más común en individuos entre 5 y 25 años de edad; la transmisión es
por la ingestión de alimentos o agua contaminados con heces humanas.
2.4.3.2. Salmonella typhi.
Responsable de fiebres intestinales, intoxicaciones alimentarias y septicemias,

tras la introducción de gérmenes por vía oral. (41)
Clasificación científica.
Reino Procarionte.
División Bacterias.
Sección Anaerobias facultativas.
Familia Enterobacteriaceae.
Género Salmonella.
Especie: Salmonella typhi.
Fuente: Microbiología médica (41)
V /
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'
,),1
FIGURA N° 4: Bacteria Salmonella typhi.

Fuente: Presentación de un caso atípico de fiebre tifoidea (42).
30
Nombres científicos de Salmonella typhi.
Bacillus typhosus, Bacillus typhi abdominalis, Bacterium typhi, Eberthe/la typhi,
Salmonella typhosus, Bacterium typhosum, Eberthella typhosa. (42).
Distribución y transmisión.
La Salmonella Typhi, está muy difundida por todo el mundo, pero abunda más
en los países en que se previene escasamente la contaminación de los
suministros de agua y alimentos (42).
El gérmen se transmite de todas las personas infectadas a las sanas por
cualquier medio que pueda ser contaminado por materiales fecales. En cierta
época, el principal origen de la infección era el enfermo, pero en la actualidad
tiene la máxima importancia el portador resistente. Petruschky dio a conocer,
en 1898 que los gérmenes tíficos persisten en la orina de los enfermos de tifus
durante meses posteriormente se demostró también que se encuentra en las
heces y que el 2.3% de las personas infectadas son portadores durante toda su
vida (42).
El gérmen se transmite a los alimentos por medio del agua contaminada que se
pone directamente en contacto con ellos o con los utensilios empleados para el
manejo de los mismos. Los dedos del portador pueden transmitir el gérmen a
utensilios y alimentos. Otro tanto pueden realizar las moscas. Aunque el agua
es el vehículo de transmisión más frecuente, la leche es un alimento importante
que puede contaminarse (42).
Morfología y tinción.
Salmonella typhi es un bacilo grueso y corto de 0'5-0'8~ de diámetro 1-3~ de
longitud. Algunas bacterias aisladas y ciertos cultivos pueden ser alargados y
filiformes. Es muy móvil gracias a sus flagelos peritrícos. No tiene cápsulas ni
forma de esporas (42).
Se tiñe fácilmente por métodos de coloración habituales y es Gram negativa.
Las bacterias Gram negativas no contiene ribonucleato de magnesio, son
menos sensibles a los colorantes de trifenil metano, sensibles a la
estreptomicina, son disueltos por KOH al 1%, su isoeléctrico entre pH 4 a 5 la
mayor parte son bacilos espirilos y cocos que no forman esporas, producen
endotoxinas (42).
31
Características y necesidades de cultivo.
En agente de tifus es aerobio y anaerobio facultativo, creciendo bien en medios
a base de infusión de carne a pH 7.2 y temperatura optima de 36.5°C.
En superficie de Agar forma colonias pequeñas, grises y transparentes, que se
vuelven opacas cuando el cultivo envejece, crecen en medio diferencial de SS
en caldo produce turbidez uniforme y raramente película en superficie, el
crecimiento en papa es fino y brillante, limitándose a una estrecha faja (42).
Resistencia.
Mueren rápidamente por la acción de los desinfectantes superficiales ordinarios

tales como el cloro a 200 p.p.m. El calentamiento a 60.5°C durante 30min, o a
71.1 oc durante quince segundos, mata el germen. En consecuencia, las
temperaturas de pasteurización de la leche son una importante salvaguardia de
la salud pública (42).
Propiedades químicas.
Salmonella Typhi produce ácido, galactosa, xilosa, maltosa, rafinosa, dextrina,
glicerina, manito! y sorbitol. No fermenta la lactosa, sacarosa, inulina,
rhamnosa, inositol, salicina ni, generalmente, la arabinosa y el dulcitol,
producen SH 2 . Reduce los nitratos a nitritos. No forma indol, ni licúa la gelatina.
Produce ligera acidificación inicial de la leche tornasolada aumentando la
alcalinidad a medida que el cultivo envejece (41 ).
32
TABLA N° 3: Enfermedades clínicas producidas por Salmone//as
Fiebres Septicemias Gastroenteritis
intestinales.
Período de 7 a 20 días Variable 8-48 horas

incubación
Iniciación Insidiosa Súbita Súbita
Fiebre Gradual, después Ascenso Generalmente

una "meseta" alta rápido, baja
con estado después
"tifoideo" temperatura
en agujas
"séptica"
Duración de la Varias semanas Variable 2 a 5 días

enfermedad
Síntomas A menudo A menudo no Náuseas, vómitos,

gastrointestinales constipación hay diarrea al
temprana, más comienzo
tarde, diarrea
sanguinolenta
Hemocultivo Positivo durante la Positivo Negativo

primera y la durante la
segunda semana fiebre alta
de la enfermedad
Coprocultivo Positivo de la Pocas veces Después del

segunda semana es positivo comienzo,
en adelante, rápidamente
negativo al principio positivo
de la enfermedad
Fuente: Romero Cabello Raúl- Microbiología y Parasitología Humana (40).
33
2.4.3.3. Crecimiento de las poblaciones bacterianas.
Se entiende como crecimiento o desarrollo al aumento ordenado de todos los

componentes químicos de una célula. Por tanto, el aumento del tamaño que
resulta cuando de una célula capta agua o deposita lípidos o polisacáridos no
es un crecimiento verdadero. La multiplicación celular es una secuencia del
crecimiento; en microorganismos unicelulares, es la multiplicación, aumenta la
cantidad de individuos y da lugar a una población o cultivo. (43)
Nutrición microbiana
Las células están fundamentalmente compuestas de macromoléculas y de
agua. Las macromoléculas se componen de unidades más pequeñas
denominadas monómeros, en esencia, la nutrición microbiana consiste en
suministrar a las células ingredientes químicos que constituirán monómeros.
Estos compuestos químicos son denominados nutrientes.
De acuerdo a la naturaleza y característica de los microorganismos estos
requieren diferentes tipos de nutrientes y a menudo suelen ser específicas. (43)
Medios de cultivo
Los medios de cultivo son las soluciones nutritivas que se usan en el
laboratorio para el cultivo de microorganismos. En microbiología se usan dos
tipos generales de medios de cultivos; los químicamente definidos y los
complejos o no definidos. Los medios definidos de preparan añadiendo
cantidades precisas de compuestos orgánicos o inorgánicos purificados en un
volumen de agua destilada. Por lo tanto se sabe la composición química exacta
de un medio definido. Sin embargo en muchos casos la composición exacta de
un medio no es importante. (43)
Cultivo de microorganismos en el laboratorio
Una vez que ha sido preparado un medio de cultivo puede ser inoculado es
decir se le añaden microorganismos y a continuación es incubado en
condiciones que favorezcan el crecimiento microbiano. En general se tratara de
un cultivo anéxico o puro, esto es, de un cultivo que contiene solo un único tipo
de microorganismo. Para mantener un cultivo puro es esencial evitar la entrada
de otros organismos. Un método importante para obtener cultivos puros y para
34
asegurar la pureza de un cultivo es el uso de medios sólidos en placas petri.
(43)
2.4.3.4. Curva de crecimiento bacteriano.
Si la bacteria crece en un medio líquido, en la mayoría de los casos las células

que se producen en cada división continúan su vida independientemente
formándose una suspensión de células libres.
El crecimiento en un sistema cerrado de este tipo está sometido a leyes que
son válidas para los organismos unicelulares y pluricelulares. En la práctica la
curva presenta cuatro fases: (44)
Si se introduce en un medio de cultivo liquido una población bacteriana
(inoculo), procedente toda ella de la misma célula madre (cultivo puro), y el
sistema es cerrado, es decir, ni se añaden ni se eliminan sustancias de
desecho, se genera una curva de crecimiento con las etapas que se indican a
continuación. (44)
Latencia.
Está determinada por el tiempo que las bacterias requieren para reorganizar
sus sistemas enzimáticos. La duración depende de la cantidad del inoculo y de
lo parecido que sea el medio del que proviene al nuevo, al que durante este
periodo tendrán que adaptarse. (41)
Aunque no hay multiplicación como tal, si existe una intensa actividad
enzimática preparatoria de lo que ocurrirá en la siguiente fase. (41)
Crecimiento exponencial o logarítmico.
Al disponer de los nutrientes necesarios, el número de bacterias comienza a
aumentar sensiblemente. Las bacterias alcanzan su ritmo máximo de
duplicación (el tiempo de generación se acorta), la actividad metabólica es
intensa y la síntesis de elementos estructurales se acelera. De acuerdo con lo
expuesto, se trata de una fase que en representación logarítmica es una recta.
(41 ).
Equilibrio o estacionaria.
Se van agotando los nutrientes, se acumulan sustancias toxicas y la actividad
metabólica y el ritmo de división disminuyen (el tiempo de generación se
alargan); en definitiva, existe un equilibrio entre las células viables y las que no
lo son. (41)
35
Muerte o declive logarítmico
El incremento de las circunstancias adversa determina que el equilibrio anterior
se rompa a favor de la perdida de la viabilidad de las células. Esto trae consigo
la caída de la curva de crecimiento. (41)
Esta curva ideal puede modificarse según el tipo de bacterias y dependiendo
de que para crecer exista una dependencia de varios nutrientes o estos se
agoten en tiempos distintos. (41 )
LogDeLa
Concentración
Bacteriana
Tiempo
Fase Log (A), Fase Exponencial (B), Fase Estacionaria (C) y Fase de Muerte (O)
GRÁFICO N° 05: Curva de crecimiento bacteriano.
Fuente: Jawetz, Melnick, Adelberg "Microbiología Médica" 2005. (41)
2.4.3.5. Actividad antimicrobiana in vitro
Medición del crecimiento microbiano.

Para seguir el curso del crecimiento es necesario efectuar mediciones
cuantitativas que pueden ser su actividad metabólica, por conteo directo o
indirecto, de modo que para determinar la velocidad de crecimiento puede
utilizarse la medición de cualquier propiedad de la biomasa, que son
habitualmente la masa celular o el número de células. (44)
No es necesario para el conteo de células microbiales estimar su número. En la
ciencia y en la industria, los números microbiales y la actividad son
determinados por métodos indirectos, uno de estos métodos son la turbidez, la
36
rapidez de medida de la misma en instrumentos sensibles como un
espectrofotómetro o un colorímetro pueden servir una turbidimetria que permite
que siga la densidad del cultivo a medida que este crece. La turbidez se
expresa en unidades de absorbancia. Para los organismos unicelulares, la
absorbancia es proporcional a la cantidad de células, así como su peso, por lo
que las lecturas de turbidez se pueden utilizar como un sustituto de la cuenta.
(44)
El cálculo de número de células que existen en una suspensión se puede llevar
a cabo mediante el recuento celular (microscopia, número de colonias), la
masa celular (peso seco, medida del nitrógeno celular, turbidimetria) o actividad
celular (grado de actividad bioquímica con relación al tamaño de la población).
Todos estos métodos se clasifican en:
• Métodos directos.
• Métodos indirectos.
TABLA N° 4: Medición del crecimiento bacteriano
METODOS DIRECTOS METODOS INDIRECTOS

1
Recuento del número de Recuento de colonias en placa.
células en una cámara toma.
Peso seco celular. Recuento sobre filtro de
membrana.
Determinación de nitrógeno o Consumo de oxigeno.
de proteínas totales.
Determinación de DNA. Liberación de dióxido de carbono.
Concentración de una enzima.
Incorporación de precursores
radioactivos.
Medida de turbidez.
Fuente: Lastra Jorge; Arias Edison. (45).
37
2.4.3.6. Actividad Antimicrobiana.
Un agente con capacidad antimicrobiana es una sustancia química que mata o

inhibe el desarrollo de los microorganismos, esa sustancia puede ser sintética o
natural. Los agentes que matan organismos se llaman agentes "cidas", con un
prefijo que indica la clase del organismo al que matan. Así, tenemos agente
bactericida, fungicida y algicida. (46)
Los agentes que no matan, sino que solamente inhiben el crecimiento se
llaman agentes "estáticos" y podemos hablar de agentes bacteriostáticos,
fungistáticos y algistaticos.
La distinción entre un agente "estático" y un "cida", es a menudo arbitraria,
pues un agente es "cida", a altas concentraciones y puede ser "estático" a
concentraciones menores. Para ser efectivo, un agente "estático" debe estar
presente continuamente ya que si se elimina o se neutraliza su actividad, el
organismo presente puede iniciar su desarrollo, si las condiciones son
favorables. (46)
Efecto de los agentes antimicrobianos sobre el crecimiento
Los agentes antimicrobianos afectan el crecimiento en varias formas y el
estudio de la acción de estos agentes, en relación con la curva de crecimiento,
es una ayuda considerable para comprender sus modos de acción y se
clasifican en:
../ Agentes antibióticos.

Los antibióticos son compuestos químicos derivadas o producidos por
microorganismos (bacterias, hongos, actinomicetos) capaces de inhibir el
crecimiento e incluso destruir especies microbianas de forma específica a bajas
concentraciones y sin toxicidad (o muy baja) para el organismo humano. (46)
../ Quimioterápicos.
Son agentes químicos antibacterianos, producidos en forma sintética, en el
laboratorio bioquímico farmacológico. (46)
../ Bacteriostático.
Sustancia que a concentraciones alcanzadas en el plasma y tejidos solo son
capaces de inhibir el desarrollo y la multiplicación bacteriana, las cuales se
reanudan una vez que se suspende el tratamiento. Los antibióticos
38
bacteriostáticos resultan ser eficaces por que las bacterias cuyo crecimiento se
inhibe morirán con el tiempo o bien serán atacadas por los mecanismos de
defensa del huésped. (46)
./ Bactericida.
Se denomina así aquella sustancia que tiene la capacidad para destruir la
bacteria, su acción terapéutica es, por tanto, irreversible. El prototipo de este
grupo lo constituyen los fármacos que actúan sobre la pared o la membrana
citoplasmática. (46)
Modo y mecanismo de acción de los antimicrobianos.
Los antibióticos actúan inhibiendo diversos procesos metabólicos que son
esenciales para la supervivencia de los microorganismos. La especificidad de
acción depende de que el fármaco bloquee una enzima o sustrato no presente
en las células eucariotas humanas o suficientemente distintas .
./ Inhibición de la síntesis de la pared celular.
El componente esencial de la pared es un mucopeptido (peptidoglucano) cuya
síntesis es impedida por el antibiótico por inhibición de los sistemas
enzimáticos correspondientes, la droga se fija en la pared celular y cuando se
produce la división de la bacteria aparecen efectos en dicha pared, el
microorganismo se hace osmóticamente sensible, penetra liquido en el interior,
estalla y se lisa. Las penicilinas, cefalosporinas y vancomicina actúan de esta
manera. (47)
./ Lesión de la membrana celular
Las bacterias Gram positivas tienen una cubierta de peptidoglucano gruesa

situada por fuera de la membrana citoplasmática.
Las bacterias Gram negativas poseen también una capa de peptidoglucano,

más fina que de las Gram positivas, pero disponen además de una membrana
exterior de composición asimétrica. La lámina interna de esta membrana está
constituida por fosfolípidos, mientras que la externa contiene un lípido
glucosilado especial denominado lipopolisacárido o endotoxina.
Varios derivados de naturaleza lipopeptídica tienen la capacidad de insertarse

en las membranas lipídicas.
39
Este mecanismo de acción es completamente distinto al de otros antibióticos y,
por tanto, no hay resistencia cruzada. (47)
../ lnhibidores de la síntesis proteica.
Varios antibióticos inhiben la síntesis proteica y la mayoría lo hacen uniéndose
a distintas bases nitrogenadas del ARN ribosómico (ARNr) que forman parte
del centro de decodificación, del centro de formación de enlaces peptídicos
(peptidiltransferasa) o de la región próxima de la entrada al túnel de salida del
péptido recién sintetizado.
En el ribosoma bacteriano, el centro de decodificación se halla en una pequeña

región del ARNr 168 de la subunidad 308, mientras que el lugar de formación
de péptidos y la entrada al túnel de salida de la proteína recién formada están
constituidos por nucleótidos contenidos en un bucle del dominio V del ARNr
238 de la subunidad 50S. (47)
./ Inhibición de la síntesis o función de los ácidos nucleicos.

Los antibióticos pueden ejercer esta acción mediante tres mecanismos:
• Inhibiendo la replicación del ADN.
• Impidiendo la transcripción.
• Inhibiendo la síntesis de metabolitos esenciales (bloqueo de la formación
de bases purinas y pirimidinas). (47)
ADN girasa
PARED CELULAR:
ACIOOS Peptidoglicano
NUCLEICOS . · . /
'---~----
ARN-polimerasa
w-"-XC ~ .
1 n
0~(~'=-
- T 1 '
SiNTESIS
PROTEINAS
MEMBRANA
FIGURA N° 5: Blancos de algunos agentes antimicrobianos.

Fuente: J.A. Martínez y F. Sánchez. (48).
40
2.4.3.7. Medición de la actividad antimicrobiana
La actividad antimicrobiana se mide por la determinación de la cantidad menor

del agente necesario para inhibir el desarrollo de un organismo de prueba, un
valor llamado concentración inhibitoria mínima (CIM).
Método de difusión en Agar.
Un procedimiento utilizado para estudiar la acción antimicrobiana es el método
de difusión en Agar. Se prepara una placa petri con un medio de Agar
inoculado de modo uniforme con el organismo de prueba. La placa de prueba
se puede inocular vertiendo una capa sobrenadante de Agar que contenga el
organismo de prueba, o cubriendo la superficie del medio con un cultivo del
organismo de prueba en caldo. Se adicionan cantidades conocidas del agente
antimicrobiano a discos de papel filtro colocados sobre la superficie del Agar.
Durante la incubación, el agente se difunde desde el papel filtro hacia el Agar,
cuanto más lejos llegue el papel filtro, menor será la concentración del agente.
A cierta distancia del disco se alcanzara la CIM. Pasado este punto se presenta
el crecimiento, pero más cerca del disco no hay crecimiento. Así se crea una
zona de inhibición y su tamaño se mide con una regla; el diámetro será
proporcional a la cantidad del agente antimicrobiano adicionada al disco y a la
efectividad general del agente. (37) (38)
Tan pronto como el disco impregnado en antibiótico se pone en contacto con la
superficie húmeda del Agar, el agua es absorbida por el papel filtro y el
antibiótico difunde en el medio que lo rodea. A medida que aumenta la
distancia de difusión del antibiótico, se produce una reducción logarítmica de la
concentración del antibiótico.
41
Placa con A2ar
8 Disco impregnado con el antimicrobiano
GRÁFICO No 6: Difusión del principio activo en el agar.

Fuente: Diagnostico Microbiológico de koneman Elmer W., Stephen D. Aller. (38)
Dilución en Agar.
Es considerado el método de referencia. En este método, placas conteniendo
una determinada concentración de un antibiótico son inoculadas con el
microorganismo en estudio y luego son incubadas. Después de la incubación,
se examina si el microorganismo crece o no en cada una de las placas, con lo
cual de determina la concentración mínima inhibitoria (CIM) para el antibiótico.
(49)
Dilución en caldo.
En este caso, tubos (macro dilución) o micro placas (micro dilución), contienen
concentraciones crecientes de un determinado antibiótico. El organismo en
estudio es inoculado en los diferentes tubos o pocillos de la micro placa y la
CIM es determinada después de la incubación, de la misma forma descrita
anteriormente para el método de la dilución en Agar. (49)
E- test.
Este método ha sido descrito más recientemente y representa una sofisticada
combinación de métodos descritos anteriormente. El E -test es más simple
que otros métodos para obtener una CIM. Utiliza una tira de plástico que
contiene concentraciones crecientes de un determinado antibiótico que van
42
desde 0.016ug/ml esta tira se pone sobre una placa, se forma un área de
inhibición de forma elíptica, en el cual la CIM puede ser leída directamente. (49)
Métodos automatizados.
En este método existen varios sistemas que ofrecen diferentes niveles de
automatización para el estudio de la susceptibilidad. Utilizan una medición de
turbidimetria o fluorometrica para detectar crecimiento bacteriano en un medio
liquido. La mayoría de ellos emplea el método de micro dilución y periodos de
incubación menores que las habituales. Estos métodos son bastante confiables
para el estudio de Enterobacterias y otros gérmenes de crecimiento rápido,
pero generalmente no son los adecuados para los de crecimiento lento o con
requerimientos especiales. (50)
2.4.3.8. Interpretación del antibiograma.
Susceptible: significa que la infección causada por un organismo puede ser

apropiadamente tratada con las dosis habituales del antibiótico estudiado. (48)
Sensibilidad intermedia: esta categoría incluye organismos que son inhibidos
por concentraciones del antibiótico que están muy cercanas a las alcanzadas
en el plasma, por lo que pueden responder probablemente a la terapia. Esta
categoría, además, implica que el antibiótico utilizado puede ser usado si la
infección está localizada en sitios donde el fármaco es fisiológicamente
concentrado (quinolonas en vías urinarias), o cuando pueden ser usadas altas
dosis (ej. Penicilinas). (50)
Resistente: significa que el organismo no sería inhibido por el antibiótico en las
dosis habituales o que el organismo tiene mecanismos de resistencia contra el
antibiótico utilizado. (50)
2.4.3.9. Control microbiológico.
Los criterios para el control microbiológico recomendados por la organización

mundial de la salud (OMS) y la organización panamericana de la salud (OPS),
son los siguientes:
•!• Criterio imperativo.

•!• Criterio indicativo de higiene.
•!• Criterio de alerta o límites críticos. (51)
43
TABLA N° 5: Criterios de control microbiológico.
PESO CANTIDAD
CRITERIOS EXACTO BACTERIAS PERMISIBLE
Criterio imperativo: este

microorganismo no debe
presentarse. La presencia 10g salmonella Ausente.
de este indica un riesgo
elevado.
Criterio indicativo de
higiene: la presencia
excesiva de este indica
que la higiene en el
10g Coliformes Ausente
proceso ha sido deficiente.
fecales rango
Por lo que el producto no
(E. coli) aceptado
debe exceder los limites
10 • 102 UFC.
especificados en este
rubro.
Criterios alerta o limites Aerobios 5X10:.- 5X10"

críticos: significa que el mesofilos. ufc/g.
producto no debe exceder 10g
los límites especificados 102 -103 ufc/g.
Hongos y
en este rubro.
levaduras.
Fuente: DIGESA. Dirección General de Salud "Criterio de Calidad Sanitaria e inocuidad de

alimentos (51)
Donde:
UFC: unidades formadoras de colonia.
44
2.4.3.10. Fármaco patrón (CIPROFLOXACINO).
El ciprofloxacino es un principio activo del grupo de las quinolonas. Estos

compuestos se conocen también con el nombre de la girasa. Es un agente
antibacteriano de acción bactericida y de efecto rápido, que no presenta
resistencia cruzada con las penicilinas, tetraciclinas, aminoglucósidos.
Generalmente los organismos resistentes a estos antibióticos son sensibles al
ciprofloxacino. Se ha demostrado que cuando se combina con otros agentes
antibacterianos se presentan efectos aditivos. (47)
Mecanismo de acción:
El Ciprofloxacino inhibe la lectura a partir del cromosoma de la información
necesaria para el metabolismo normal de la bacteria. De esta manera se
reduce rápidamente la capacidad reproductora de las bacterias. Actúa
intracelularmente por inhibición de la DNA girasa, un tipo 11 de topoisomerasa
que es esencial para el enrollamiento del ATP dependiente del ADN bacteriano;
posibilitando que se replique y que forme parte de ambas células hijas; el
Ciprofloxacino inhibe la relajación del DNA enrollado y promueve el
rompimiento del DNA de doble cadena. (47)
[_~i_NTESIS DE ACIDOS NUCLEIC~~
~ ........._..(_/
o
Muerte celular
MECANISMO DE ACCION DE LAS QUINOLONAS
FIGURA N° 6: Mecanismo de acción de las Quinolonas
Fuente: Red de Salud de Cuba INFOMED (52).
45
Farmacocinética:
En los lugares de infección, es decir, en líquidos y tejidos corporales, la

concentración de Ciprofloxacino es más elevada que en el suero.
• Absorción: Rápida y bien absorbida del tracto gastrointestinal, después de la

administración oral. La absorción demora en presencia de alimentos.
• Distribución: Ampliamente distribuida a través del cuerpo; las
concentraciones tisulares generalmente exceden a las concentraciones del
suero, especialmente en los riñones, vesícula biliar, hígado, pulmones,
tejidos ginecológicos y tejido prostático; se distribuye a la saliva, secreciones
nasales, humor acuoso, esputo, linfa, fluido peritoneal, bilis, secreciones
prostáticas, fluidos de ampollas de piel; también se distribuye a la piel, grasa,
músculo, hueso y cartílago; fluido cerebroespinal que alcanza un pico sérico
máximo (10 %) en las meninges no inflamadas, y un 14-37 % en las
meninges inflamadas.
• Unión a proteínas: Baja (20-40 %).
• Metabolismo: Hepático.
• Eliminación: Renal: Aproximadamente del 50-70% de la dosis parenteral se
excreta inalterada en la orina. Biliar/Fecal: Pequeñas cantidades se excretan
en la bilis; aproximadamente un 15 % de la dosis parenteral se excreta en
las heces en 5 días. Tras una infusión intravenosa un 75 % de la dosis
administrada se elimina con la orina y un 14 % con las heces. Más del 90 %
de la eliminación se efectúa en las primeras 24 horas. (52)
46
Espectro antibacteriano:
TABLA N°6: Espectro antibacteriano del ciprofloxacino
Microorganismos aeróbicos Gram Microorganismos aeróbicos
positivos Gram negativos
• Enterococcus faecalis • Campylobacter jejuni

• Staphylococcus aureus (susceptible • Citrobacter diversus
a la meticilina) • Citrobacter freundii
• Staphylococcus epidermidis • Enterobacter cloacae
• Staphylococcus saprophyticus • Escherichia coli
• Streptococcus pneumoniae • Haemophilus influenzae
• Streptococcus pyogenes • Haemophilus
parainfluenzae
• Klebsiella pneumoniae
• Moraxella catarrhalis
• Morganella morganii
• Neisseria gonorrhoeae
• Proteus mirabilis
• Proteus vulgaris
• Providencia rettgeri
• Providencia stuartii
• Pseudomonas aeruginosa
• Salmonella typhi
• Serratia marcescens
• Shigella boydii
• Shigella dysenteriae
• Shigella flexneri
• Shigella sonnei
• Vibrio cholerae
• Vibrio parahaemolyticus
• Yersenia enterocolítica
Fuente: Red de Salud de Cuba (52)
47
Indicaciones:
El Ciprofloxacino es un anti infeccioso de amplio espectro, activo frente a un
gran número de organismos Gram-positivos y Gram-negativos. Se emplea en
el tratamiento de las siguientes infecciones causadas por gérmenes sensibles:
• Infecciones de la piel y tejidos blandos: úlceras infectadas, quemaduras
infectadas. Infecciones osteoarticulares: osteomielitis, artritis séptica.
• Infecciones de vías respiratorias: bronquitis aguda, reagudización de
bronquitis crónica y fibrosis quística, bronquiectasias, empiema, neumonía
por bacterias gram-negativas.
• Infecciones del tracto genito-urinario: uretritis complicadas y no complicadas,
cistitis, pielonefritis, prostatitis, epididimitis, gonorrea.
• Infecciones gastrointestinales: fiebre entérica, diarrea infecciosa.
• Infecciones del oído medio y de los senos paranasales.
• Infecciones de boca, dientes y mandíbulas. Infecciones de las vías biliares.
Sepsis (septicemia).
• Infecciones del peritoneo (peritonitis).
• Infecciones de los ojos, Infecciones o posibilidad de infección inminente
(profilaxis) en pacientes con sistema inmunitario debilitado.
Reacciones Adversas:
Se han observado ocasionalmente los siguientes efectos secundarios:
náuseas, vómitos, dolor abdominal, diarrea, vértigo, cefaleas, insomnio,
agitación, temblor, reacciones de hipersensibilidad (erupciones cutáneas y muy
raramente dolores musculares y articulares). Efecto sobre los parámetros de
laboratorio y sangre. Muy raras veces: colitis seudomembranosa; convulsiones,
reacciones psicóticas y otras del SNC; reacciones anafilácticas incluido shock,
síndrome de Stevens-Jonhson, nefritis intersticial, trastornos hepáticos graves,
incluyendo necrosis hepática, fotosensibilidad; disturbios de la función renal
incluyendo fallo renal pasajero, trastornos de la vista, pérdida pasajera del
sentido del oído. (52)
48
Efectos secundarios
• Reacciones de hipersensibilidad: se han reportado reacciones sistémicas
serias y ocasionalmente fatales.
• Efectos neurológicos: cefalea, inquietud; en < 1% de pacientes se ha
observado convulsiones, incremento de la presión intracraneal, psicosis
tóxica, vértigo, confusión, temblor, alucinaciones, depresión, pensamientos
o actos suicidas. Si estas reacciones ocurren la droga debe ser
discontinuada.
• Efectos respiratorios: en < 1% de pacientes disnea, epistaxis, edema
pulmonar, embolismo pulmonar.
• Efectos cardiovasculares: en < 1% de pacientes ocurre palpitaciones,
fibrilación auricular, latidos ectópicos ventriculares, síncope, hipertensión,
angina de pecho, paro cardíaco, trombosis cerebral.
• Efectos gastrointestinales: náusea, vómito, diarrea, dolor abdominal, colitis
pseudomembranosa; en < 1% de pacientes ocurre candidiasis oral, disfagia,
perforación intestinal, sangrado digestivo, ictericia colestásica.
• Efectos renales: en < 1% de pacientes, nefritis intersticial.
• Otros efectos: ruptura del tendón de Aquiles u otros tendones, fototoxicidad,
rash, artralgias.
• Órganos de los sentidos: visión doble, visión borrosa, trastorno en la
percepción del color (más brillante) disminución de la agudeza visual y
auditiva, diplopía, dolor en el globo ocular, tinitus. (52)
49
2.5. GLOSARIO DE TÉRMINOS.
EXTRACTO: Es una sustancia, normalmente es un ingrediente activo de una

planta o tejido animal, que se prepara utilizando disolventes o evaporación,
para separar la sustancia del material original.
ACETOGENINAS: Compuestos activos que afectan la producción de trifosfato
de Adenosina (ATP) en la mitocondria. El ATP es la fuente principal de energía
de la célula. Las Acetogeninas modulan selectivamente la producción de ATP
afecta la viabilidad de células específicas y el crecimiento de vasos sanguíneos
que los nutren.
ACTIVIDAD BIOLÓGICA: Expresión que describe los efectos beneficiosos o
nocivos de una droga en la materia viva. Cuando la droga es una mezcla
química compleja, esta actividad es ejercida por el ingrediente activo o el
farmacóforo de la sustancia pero se puede modular por los otros componentes
de la sustancia. La clase principal de actividad biológica es toxicidad de una
sustancia.
INGREDIENTE ACTIVO: Es la parte biológicamente activa del producto
fitosanitario presente en una formulación.
ANNONACEAE: Familia de plantas dicotiledóneas, arbóreas o arbustivas, a
menudo trepadoras, propia de las zonas tropicales e intertropicales, con las
hojas alternas, simples y enteras, flores casi axilares, solitarias o en manojo y
fruto simple o compuesto, seco o carnoso con pepitas duras y frágiles.
CULICIDOS: (latín Culicidae) son mosquitos, insectos pertenecientes al orden
de los dípteros; sus géneros incluyen Anopheles, Culex, Psorfora, Oclerotatus,
Aedes, Stegomyia, Sabetes, Culiseta y Haemagoggus. Existen 35 géneros en
total con más de 2700 especies reconocidas. Son insectos voladores, que
poseen un cuerpo delgado y patas alargadas; el tamaño de los adultos varia de
especie a especie, pero rara vez superan los 15mm. Las larvas se desarrollan
en el agua.
LARVA: Animal en estado de desarrollo, cuando ha abandonado las cubiertas
del huevo y es capaz de nutrirse por sí mismo, pero aun no ha adquirido la
forma y la organización propia de los adultos de su especie.
OVIPARO: Un animal ovíparo es un animal cuya modalidad de reproducción
incluye el depósito de huevos en el medio externo, donde completar su
50
desarrollo antes de la eclosión. Son ovíparos la mayoría de los insectos, los
peces, los anfibios y los reptiles, así como la totalidad de las aves.
OVOVIVIPARIDAD: Un animal es ovovivíparo (de/latin ovum, "huevo", vivus,
"vivo", y pariré, "parir'? cuando los huevos permanecen dentro del cuerpo de la
hembra hasta su eclosión. Esta puede producirse inmediatamente antes de lo
que vendrá a ser un parto, o inmediatamente después de la puesta.
DENGUE: Enfermedad producida por un virus transmitido por mosquitos de
América central y zonas calurosas de Asia y Australia, también llamada la
fiebre de los siete días.
FARMACOLÓGICO: Ciencia que trata de los medicamentos, sus propiedades
y su composición.
FISIOLÓGICO: Que posee una función normal dentro del organismo.
ANTIHELMÍNTICO: Drogas que expulsan a los helmintos y gusanos parásitos
del cuerpo, matándolos o expulsándolos vivos. Los remedios tradicionales de
este tipo se llaman vermífugos.
ANTIMICROBIANO: Que impide el desarrollo de los microbios.
MICROORGANISMO: organismos microscópicos pertenecientes por regla
general a virus, bacterias, algas, hongos o protozoos.
APOPTOSIS: Muerte celular programada, un proceso que juega un importante
papel desde el desarrollo temprano hasta el envejecimiento. Tiene especial
importancia en el cáncer y es objeto de un estudio intenso dado que es una
solución tentadora, por otro lado, puede interferir en los tratamientos
terapéuticos.
BIOPESTICIDA: Pesticida hecho a base de recursos biológicos, es decir, de
toxinas que se producen naturalmente.
PLAGUICIDA: Sustancia u organismo capas de exterminar toda vida animal o
vegetal que pueda afectar la salud, la alimentación o a la economía del
hombre.
Entre los plaguicidas se encuentran los insecticidas, acaricidas, herbicidas y
fungicidas. Se trata de sustancias mayormente destinadas a la protección
vegetal o productos fitosanitarios principalmente de origen químico para
combatir y controlar plagas y/o transmisores de enfermedades bacterianas o
virales de los cultivos y productos que controlan a algunas especies vegetales
51
que compiten con los cultivos. Estos productos también pueden ser utilizados
para el control de vectores de enfermedades humanas y animales en áreas
abiertas o dentro del domicilio. A estas sustancias también se las llama
ocasionalmente biocidas.
BACTERIAS: Microorganismo celular, sin núcleo definido por una membrana.
Interviene en procesos como la fermentación, y puede ser la causa de
enfermedades tales como el tifus, el cólera, afecciones venéreas, etc.
PROTOZOARIOS: Organismos unicelulares microscópicos flagelados.
BIOTOPO: Región de caracteres climáticos y geográficos definidos que es
ocupada por una biocenosis o comunidad de especies animales y vegetales.
BIOTERÍO: Conjunto de instalaciones, muebles e inmuebles destinados al
alojamiento y manutención de animales de laboratorio durante una o varias
fases de su ciclo vital; esto es, nacimiento, crecimiento, reproducción y muerte.
CEPA: En microbiología, conjunto de bacterias, virus u hongos que tienen el
mismo patrimonio genético.
ANTIBACTERIANO.- Relativo a una sustancia que destruye las bacterias o
que inhiben su crecimiento o replicación.
ANTIBIOGRAMA.- Consiste en el estudio de la sensibilidad o resistencia de
determinados microorganismos (o grupos de ellos), a varios antibióticos. Se
puede utilizar para tratar u patógeno, añadir a alimentos, en definitiva para
saber cómo se comporta un germen frente a un determinado antibiótico.
A TÓXICO: Que no es venenosos.
CEPAS.- Es un subgrupo taxonómico de una determinada especie
CONCENTRACIÓN MÍNIMA INHIBITORIA.- Es la concentración mínima
inhibitoria de un fármaco presente en la sangre capaz de frenar una infección.
CULTIVO.- En microbiología, es una prueba de laboratorio que implica el
cultivo de células o de microorganismos en un medo específico de crecimiento.
DOSIS LETAL MEDIA (DLso).- Es la dosis única que, obtenida por estadística,
de una sustancia de la que puede esperarse que produzca la muerte del 50%
de los animales a los que se haya administrado. El valor de la DL50 se expresa
en peso de la sustancia por unidad de peso del animal (miligramos por kilo,
mg/kg).
52
DOSIS EFECTIVA D5o: En farmacología, se entiende por dosis efectiva de un
medicamento a la dosis mínima capaz de producir el efecto deseado de la
droga.
La droga que produce el efecto deseado en el 50% de la población se conoce
como dosis efectiva 50%, o por sus siglas en ingles DE-50
INHIBICIÓN.- Restricción o detención de la función de una célula por estimulo
de una sustancia la cual evita el desarrollo de la célula.
RESISTENCIA.- Oposición a la acción de una fuerza, es la oposición que
presenta la bacteria de ser eliminada frente a los antimicrobianos.
SOLUBILIDAD.- Calidad de soluble. Extensión en la que una sustancia que
vendría a ser el soluto, se disuelve en un líquido que vendría a ser el solvente
que no necesariamente es el agua.
TÓXICO: Veneno y/o cualquier sustancia que incorporada al organismo es
capaz de producir graves alteraciones orgánicas o funcionales.
53
CAPITULO 111
3. MATERIALES Y M E TODOS
3.1 . MATERIALES BIOLÓGICOS.
3.1.1 MUESTRA VEGETAL.
• Frutos de la especie Annona muricata L. (Masasamba), que fueron

recolectados durante el mes de Abril del 2011 , la cantidad de 50 kilógramos
de muestra fresca en la localidad de Collpani, provincia de "La Convención",
en el departamento de Cusca, a 1050 m.s.n.m.
3.1.2 MUESTRAS BIOLÓGICA.
• Larvas de Aedes aegypti
3.1.3 MUESTRA MICROBIANA.
• Cepas de Salmonella typhi spp tipificadas por el laboratorio de Microbiología

de la Facultad de Medicina Humana de la Universidad Nacional de San
Antonio Abad del Cusca.
3.2. MATERIALES, INSTRUMENTOS Y EQUIPOS.
3.2.1. MATERIALES Y EQUIPOS DE LABORATORIO.
A.- MATERIALES DE CAMPO.

• Bolsas de papel y de polietileno.
• Tijeras podadoras.
• Cámara fotográfica.
• Cuaderno de campo.
• Papel Kraff.
• Sacos.
• Lapiceros.
B.- MATERIALES DE LABORATORIO.

• Tubos de ensayo.
• Vasos de precipitado de 100 y 200m l.
• Placas petri.
• Baguetas.
54
• Pipetas.
• Micropipeta calibrada.
• Embudos.
• Fiolas de 100 y 200m!.
• Matraz de 200 y 500ml.
• Probetas de 100 y 250m l.
• Balones de 100 y 500ml.
• Pera de decantación 1OOOml.
• Goteros.
• Trompo Econofiltro 0.451-Jm.
• Piezas de metal: Soporte universal, espátula, etc.
• Papel filtro.
• Papel secante.
• Papel aluminio.
• Algodón.
• Botellas de vidrio de color oscuro de 4 a 5 litros de capacidad.
• Frascos de vidrio 1OOml.
• Micro-pipetas.
• Asas de siembra.
• Mecheros Bunsen.
• Pinzas.
• Gradillas.
• Jeringas descartables de 1mi, 5ml, 1Omi, 20m l.
C.- EQUIPOS DE LABORATORIO.

• Balanza analítica electrónica de sensibilidad 0.001g.
• Balanza analítica electrónica Howk ANO GR-200
• Estufa de cultivo Fanem modelo 002CB.
• Autoclave. Modelo LS-BOSI-1. Pres. max. 0.22Mpa; T 0 max 134°C
• Espectrofotómetro clinicon Mannheim-6MBH (340-620nm).
• Refrigeradora marca coldex.
• Cocinilla eléctrica.
SS
• Rotavapor R-215 BUCHI.
• Cromatoplacas de silicagel C18 soportadas en aluminio de 3.5 x 4.6cm.
• cocinilla eléctrica.
• Horno Pasteur Memmert. T0 max. 220°C.
• Baño maria.
• Lámpara de luz UV.
• Campana de extracción.
• Baño de ultrasonido 117VAC 3510 Branson.
• Bomba de vacio MEDI PUMP 1633-6116
3.2.2. SOLVENTES Y REACTIVOS.
• Etanol de 70°
• Metano! de 70°.
• Agua destilada Q.P.
• Éter.
• Cloroformo Q.P.
• Acetona.
• Acetato de etilo.
• Bencina.
• Hexano.
• Sulfato de sodio.
• Acido 3,5 dinitrobenzoico al 2%.
• Hidróxido de potasio (KOH) al 5, 7%.
• Dimetisulfoxido.
3.2.3. MEDIOS DE CULTIVO.
• Agar Mueller Hilton.

• Agar Bismuto sulfito según Wilson Blair.
• Caldo infusión cerebro corazón (BHI).
• Agar saboudaud.
• Agar Plate Count.
• Agar Me Conkey.
• Agar Hectoen.
56
3.2.4. OTROS MATERIALES.
• Discos de Ciprofloxacino Sug.

• Mandil o guardapolvo.
• Gorros.
• Barbijos o mascarillas.
• Guantes.
• Gafas de protección.
• Cajas de tecnopor.
• Cubetas de plástico.
• Materiales de escritorio.
• Tijera estéril.
• Cúter estéril.
• Ligas
• Plumón marcador.
• Papel kraff.
• Papel aluminio.
• Papel filtro.
• Papel secante.
• Detergente.
• Lejía.
• Molino manual.
• Regla milimetrada
• Agujas descartables.
• Cámara fotográfica.
• Jeringas descartables de 1mi, 3ml, Sml, 20m l.
3.3 DE INFRAESTRUCTURA.
• Laboratorio de Microbiología de la Facultad de Medicina Humana de la

Universidad Nacional de San Antonio Abad del Cusco.
• Laboratorio de Farmacología de la Carrera Profesional de Farmacia y
Bioquímica de la Universidad Nacional de San Antonio Abad del Cusco.
57
• Laboratorio de Farmacognosia de la carrera profesional de Farmacia y
Bioquímica de la Universidad Nacional de San Antonio Abad del Cusca.
• Laboratorio de Entomología de la carrera profesional de Biología de la
Universidad Nacional de San Antonio Abad del Cusca.
• Laboratorio de Fitoquímica de la facultad de Química de la Universidad
Nacional de San Antonio Abad del Cusca.
• Laboratorio de cromatografía de la Universidad Nacional de San Antonio
Abad del Cusca.
3.4. DISEÑO METODOLÓGICO DE LA INVESTIGACIÓN.
3.4.1. DISEÑO METODOLÓGICO.
3.4.1.1. Tipo de investigación.
La investigación en el cuál se realizaron los estudios de Actividad

antibacteriana y actividad insecticida de las Acetogeninas son estudios de tipo
cuasi-experimental porque se manipula deliberadamente, al menos una
variable independiente (se analizan si una o más variables independientes
afectan a una o más variables dependientes y porqué lo hacen), prospectivo
(por el tiempo de ocurrencia de los hechos), transversal (por el periodo y
secuencia del estudio). (53)
En los diseños cuasi-experimentales los sujetos no se asignan al azar a los
grupos ni se emparejan, sino que dichos grupos ya están formados antes del
experimento, son grupos intactos (la razón por la que surgen y la manera como
se forman fueron independientes o aparte del experimento) (53)
La variable independiente (concentración de las Acetogeninas obtenidas a
partir de extractos etanólicos de semillas de Annona muricata L.) resulta ser la
razón de estudio ya que es la variable que se hipotetiza, que será una de las
causas que produce el efecto supuesto, para obtener evidencia de esta
relación causal supuesta, el investigador manipula la variable independiente y
observa si la dependiente varía o no. (53).
58
3.4.2. DISEÑO DE LA INVESTIGACIÓN.
3.4.2.1. Ensayo de la actividad insecticida
Para determinar la actividad insecticida de las Acetogeninas obtenidas a partir

del extracto etanólico de semillas de Annona muricata L (Masasamba}, se
siguió el diseño de Post Prueba y Grupo control.
•!• Ensayo de la actividad insecticida para las Acetogeninas obtenidas a

partir de los extractos etanólicos de semillas de Annona muricata L.
(Masasamba).
Para determinar la actividad insecticida del concentrado de Acetogeninas

obtenidas a partir de extractos etanólicos al 70% de semillas de Annona
muricata L. (Masasamba) se realizó un estudio cuasi experimental' con diseño
post-prueba y grupo control siguiendo el procedimiento del laboratorio UNAL-
Departamento de Química (59}, grupo de productos naturales con
modificaciones de acuerdo al protocolo propuesto por la Red Latinoamericana
de Control de Vectores (35) (ciudad lguazú, 23 de octubre de 2005), como
sigue:
TABLA N°7: Diseño experimental del efecto insecticida.
GRUPO TRATAMIENTO MEDICION DE LA ·

EXPERIMENTAL PRUEBA
G1 X1 01, 07, 013, 019 ...
G2 X2 02, Os, 014, 02o ...
G3 X3 03, Os, 01s, 021 ...
G4 X4 04, 010, 016, 022 ...
Gs Xs Os, 011, 011, 023 ...
Gs Xs 06; 012, 018, 024 ...
59
Donde:
• G1, G2, G3, G4: Grupos de larvas de Aedes aegypti (vector de la fiebre amarilla)
que serán sometidas al concentrado de Acetogeninas a diferentes
concentraciones, por triplicado.
• Gs: Grupo de larvas de Aedes aegypti (vector de la fiebre amarilla) que será
sometida a un insecticida comercial usado contra este vector propuesto por la
Red Latinoamericana de Control de Vectores (grupo patrón).
• Gs: Grupo de larvas de Aedes aegypti (vector de la fiebre amarilla) que no será
sometida a ninguna sustancia (grupo control negativo).
• X11 X2, X3, ~: Son las diferentes concentraciones de Acetogeninas diluidas en un
solvente, las que serán aplicadas a los grupos de experimentación.
Donde: x1: 10000ppm/50ul X2: 5000ppm/50ul X3 : 500ppm/50ul

~: 50ppm/50ul
• Xs: Concentración de Temefós (1g/10L) (Grupo patrón)

• Xs: Agua (Grupo blanco)
• 0 11 02, 03, 04, Os, Os: Observación del efecto insecticida (muerte) a 1 hora.
• 01, Os, 09, 01o. 0111 012: Observación del efecto insecticida (muerte) a las 2
horas.
• 013, 014, 01s, 016, 011, 01s: Observación del efecto insecticida (muerte) a las 3
horas.
• 019, 02o, 021, 022, 023, 024: Observación del efecto insecticida (muerte) a las 4
horas.
• 02s, 02s, 021, 02s, 0 29, 03o: Observación del efecto insecticida (muerte) a las 5
horas.
• 031, 032, 033, 034, 03s, 03s: Observación del efecto insecticida (muerte) a las 6
horas.
• 031, 03s, 039, 04o, 041, 042: Observación del efecto insecticida (muerte) a las 7
horas.
• 043, 044, 04s, 04s, 047, 04s: Observación del efecto insecticida (muerte) a las 8
horas.
• 049, Oso, Os11 Os2, Os3, 054: Observación del efecto insecticida (muerte) a las 9
horas.
• Oss, Oss, Os1, 058, Os9, Oso: Observación del efecto insecticida (muerte) a las 10
horas.
. 60
• Osh Os2, Os3, 064, Oss, Oss: Observación del efecto insecticida (muerte) a las 11
horas.
• Os1, Osa, Oss, 01o, 01h On: Observación del efecto insecticida (muerte) a las 12
horas.
• 013, 074, 01s, 076, On, 01s: Observación del efecto insecticida (muerte) a las 13
horas.
• 01s, Oso, Os1, Os2, 083, Os4: Observación del efecto insecticida (muerte) a las 14
horas.
• Oss, Oss, Oa1, Osa, Oss, Oso: Observación del efecto insecticida (muerte) a las 15
horas.
• Ou, Ov, Ow, Ox, Oy, Oz: Observación del Efecto insecticida, al tiempo en el que
todos los individuos de experimentación murieron.
3.4.2.2. Ensayo de la actividad antibacteriana.
Para determinar la CMI de la actividad antibacteriana de las Acetogeninas

obtenidas a partir del extracto etanólico de semillas de Annona muricata L, se
siguió el diseño de Post Prueba y Grupo control.
•!• Ensayo de la actividad antibacteriana para las Acetogeninas obtenidas

a partir del extracto etanólico de semillas de Annona muricata L
Para el estudio de la actividad antibacteriana de las Acetogeninas obtenidas a

partir del extracto etanólico de semillas de Annona muricata L. (Masasamba).
Se siguió el siguiente diseño experimental aplicado a cepas de Salmonella
typhi spp. tipificadas por el laboratorio de Microbiología de la Facultad de
Medicina Humana de la Universidad Nacional de San Antonio Abad del Cusca,
como sigue:
61
TABLA N°8: Diseño experimental del efecto antibacteriano
GRUPO TRATAMIEMTO MEDICION DE
LA PRUEBA
EXPERIMENTAL
G1 x1 01
G2 x2 02
G3 x3 03
.
G1s X1s 019
G2o X2o 020
G21 X21 021
G22 X22 022
Donde:
• G11 G2, G3, .. G2o, G211 G22: Cepas de bacterias spp. Salmonella typhi, que serán
sembradas en las placas petri por triplicado.
• X1 , X2, X3, ... X20 : Son las diferentes concentraciones de las acetogeninas
obtenidas a partir del extracto etanólico de semillas de Annona muricata en
discos que fueron usados.
Donde: X1: 5mg/disco X2: 1Omg/disco Xa: 15mg/disco ){,¡: 20mg/disco
Xs: 30mg/disco Xs: 40mg/disco X1: 50mg/disco Xs: 60mg/disco
Xg: 70mg/disco X1o: 80mg/disco X11: 90mg/disco X12: 100mg/disco
X13: 150mg/disco X14: 200mg/disco X1s: 250mg/disco X1s: 300mg/disco
X11: 350mg/disco X1s: 400mg/disco X19: 450mg/disco X2o: 500mg/disco
• X21 : Concentración de discos de Ciprofloxacino 5ug (Grupo patrón)

• X22 : Dimetilsufoxido (Grupo blanco y/o control negativo)
• 01, 0 2, 03... 02o: Observación y medición de los halos de inhibición producidas por
las Acetogeninas obtenidas a partir del extracto etanólico de semillas de Annona
muricata L. (Masasamba).
• 0 21 : Observación de los halos de inhibición representada por el grupo del Fármaco
patrón (Ciprofloxacino)
62
• 0 22 : Observación de los halos de inhibición representada por el Dimetilsufoxido
(Grupo blanco).
3.5. IDENTIFICACIÓN, DEFINICIÓN Y OPERACIONALIZACIÓN DE

VARIABLES.
3.5.1. VARIABLES IMPLICADAS.
3.5.1.1. De la actividad insecticida.
Variable independiente.
Concentración de las Acetogeninas obtenidas a partir de extractos etanólicos
de semillas de Annona murícata L. (Masasamba).
• Definición conceptual: se define como cantidad de sustancia obtenida por
procesos de extracción y purificación con actividad biológica disueltas en una
cantidad de solvente.
• Definición operacional:
./ Naturaleza : Cuantitativa
./ Medición :Directa
./ Escala : De razón o proporción .
./ Instrumento de medición : Balanza analítica de precisión 0.001 g .
./ Indicadores: Peso del concentrado de Acetogeninas expresado en
milígramos
./ Procedimiento de medición: Se procedió a pesar el concentrado de
Acetogeninas (mg) en una balanza analítica de alta sensibilidad y
posteriormente se prepararon las diferentes soluciones por diluciones
consecutivas en agua en mi.
./ Expresión final : mg/ml
Variables Dependientes
Actividad insecticida.
• Definición conceptual: Se define como una sustancia con capacidad
inherente de origen natural o sintético destinada a controlar plagas y
enfermedades.
63
v' Naturaleza : Cuantitativa

v' Medición :Directa
v' Escala :Razón.
v' Instrumentos de medición: Fichas de recolección de datos del número
de muertes de los individuos de experimentación.
v' Indicador : Número de larvas de experimentación
muertas en relación a las vivas con la administración de las
Acetogeninas a diferentes concentraciones.
v' Procedimiento de medición: Se adicionan diferentes concentraciones
de Acetogeninas obtenidas por dilución a partir de una solución madre
sobre cada grupo de larvas de experimentación para posteriormente
observar cuantos individuos de experimentación murieron en cada grupo
experimental.
v' Expresión final : Número de larvas de experimentación muertas en
relación a las vivas con la 1 administración de las diferentes
concentraciones de Acetogeninas obtenidas de semillas de Annona
3.5.1.2. De la actividad antibacteriana.
Variable Independiente.
Concentración de las Acetogeninas obtenidas a partir de extractos etanólicos
de semillas de Annona muricata L. (Masasamba).
• Definición conceptual: se define como cantidad de sustancia obtenida por

procesos de extracción y purificación con actividad biológica disueltas en una
cantidad de solvente.

v' Medición : Directa
v' Escala : De razón o proporción.
v' Instrumento de medición : Balanza analítica de precisión 0.001 g.
64
v' Indicadores: Peso del concentrado de Acetogeninas expresado en
milígramos
v' Procedimiento de medición: Se procedió a pesar el concentrado de
Acetogeninas (mg) luego se realizaron las diluciones en Dimetilsufoxido
en mi y se tomaron una cantidad adecuada con una micropipeta
respectivamente.
v' Expresión final : mg/ml
Variable Dependiente
Actividad antibacteriana.
• Definición conceptual: Acción de una sustancia o agente de origen natural
o sintético el cual destruye o suprime el crecimiento o reproducción de las
bacterias, las cuales pueden ser "cidas", y/o agente "estático".

v' Medición :Directa
v' Escala : De razón o proporción.
v' Instrumentos de medición : Regla milimetrada
./ Procedimiento de medición: Una vez inoculado las bacterias y puestas
las diferentes concentraciones de los extractos de las especies en
estudio se midió el halo de inhibición resultante.
v' Indicador: Diámetro del halo de inhibición del crecimiento bacteriano.
v' Expresión final :mm.
3.5.2 VARIABLES NO IMPLICADAS
3.5.2.1. Variables intervinientes
De la planta:
• Estadio de crecimiento (La especie vegetal Annona murícata L.
"Masasamba" se recolectaron durante la etapa final de maduración del fruto.
• Lugar de recolección. (Se eligió para la recolección de la especie en
estudio la localidad de Collpani, de la Provincia de la Convención ubicada en
el departamento del Cusca.)
65
• Altitud de recolección. (La especie vegetal Annona muricata L.
"Masasamba" se recolectaron a 1050m.s.n.m)
• Temporada de recolección. (La especie vegetal Annona muricata L.
"Masasamba" fue recolectada durante el mes de Abril)
• Parte de la planta a estudiar. (En estudio las semillas de la especie vegetal
Annona muricata L. "Masasamba")
De las bacterias:
• Estado de crecimiento. (Fase logarítmica de la curva de crecimiento
analizado por lectura de la densidad óptica en espectrofotómetro a 670nm)
• bacterias aisladas. (Cepas bacterianas, identificadas y viables que se
observaron en placas petri después de la activación)
• Medio de cultivo. (Se usaron medios de cultivo: Caldo Cerebro Corazón,
Agar Bismuto sulfito según Wilson Blair, Agar Mueller Hinton, Agar
saboudaud y Agar Plate Count preparadas de acuerdo a las especificaciones
del fabricante en condiciones asépticas).
De las larvas:
• Especie. (Larvas de la especie Aedes aegyptt)
• Edad (Larvas de la especie Aedes aegypti en estadio larval 111 tardío y IV
temprano).
• Estado de nutrición. (Las larvas de la especie Aedes aegypti serán
alimentados bajo las condiciones de su medio natural para no alterar su
desarrollo).
3.5.3. CRITERIOS DE SELECCIÓN
3.5.3.1. Del material vegetal
Se incluyen:
• frutos sanos y homogéneos de la especie vegetal Annona muricata L.

(Masasamba).
66
Se excluyen:
• frutos dañados o parasitadas o contaminadas por insecticidas de la especie
vegetal Annona muricata L. (Masasamba).
3.5.3.2. De las larvas.
Se Incluyen:
• Larvas de la especie Aedes aegypti con una edad comprendida entre la fase
larvallll y IV, que mantengan su morfología completa.
Se Excluyen:
• Larvas de la especie Aedes aegypti que no se encuentren sanos, o no
cumplan con las especificaciones del experimento.
3.5.3.3. Del material microbiológico
Se incluyen:
• Cepas bacterianas de: Salmonella typhi spp. en buen estado de
conservación y viabilidad.
Se excluyen:
• Las cepas bacterianas que no estén en buenas condiciones (contaminación)
o que no cumplan con las características básicas de las cepas.
3.6. TÉCNICAS E INSTRUMENTOS DE RECOLECCION DE DATOS:

• Para la determinación del efecto insecticida: los datos se recolectaron
mediante la técnica de observación en el laboratorio; y los
instrumentos utilizados fueron las fichas estructuradas para la
recolección de datos de la evaluación del efecto insecticida (ANEXO
N°6).
• Para la determinación del efecto antimicrobiano: los datos se
recolectaron mediante la técnica de observación en el laboratorio; y
los instrumentos utilizados fueron la regla, fichas estructuradas para la
recolección de datos de la evaluación del efecto antibacteriano
(ANEXO N°9 y 10).
67
3.7. PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL
PRIMERA PARTE
3.7.1. EXTRACCIÓN Y ESTUDIO FITOQUIMICO DE LAS ACETOGENINAS
DE Annona muricata L. (Masasamba).
3.7.1.1. Recolección de la especie vegetal Annona muricata L.
(Masasamba).
Todo el material vegetal de Annona murícata L. fue recolectada en la zona
tropical de la región Cusca, ciudad de Quillabamba, localidad de Collpani, en el
departamento de Cusca, a 1050 m.s.n.m. en el mes de Abril (24/04/11) a horas
3:00pm; la recolección del material vegetal fue realizada con la ayuda de los
pobladores de la zona. El material vegetal fue cosechado del árbol con un
dispositivo casero que consistía en un palo largo de 1Om aproximadamente con
una bolsa en el extremo superior, el cual fue facilitado por los pobladores de la
zona.
Se recolectaron los frutos maduros, sanos y libres de contaminación, luego de
ser recolectados los frutos, fueron almacenados adecuadamente en bolsas de
papel con la finalidad de evitar algún deterioro por el cambio de temperatura y
para su adecuado transporte hasta la ciudad del Cusca, y proceder a la
siguiente fase de la investigación.
Laflecha señala la ubicación geográfica de Quillabamba,

lugar de recolección de la especie vegetal en estudio.
FIGURA N°7: Ubicación geográfica del lugar de recolección

Fuente: Instituto Nacional de Estadística e Informática INEI-2006. (56).
68
FIGURA N°8: fotografía de la especie vegetal a 1050msnm
Fuente: Callo J y Farfán K.E.
La flecha señala como el dispositivo casero

toma el fruto oara ser retirado del árbol.
FIGURA N°9: fotografía del proceso de recolección de la

especie vegetal Annona muricata L. (Masasamba).
69
FLUJOGRAMA No 01: Preparación de la muestra para la obtención del
extracto etanólico a partir de semillas de Annona muricata L.
r-----------.,
: Identificación :
--------· -----· : de la especie :
:_~:_!!~~a~·------
r-----------------1 ------------------¡
: Obtención de semillas 1
: Recolección del fruto :
: de Annona muricata L.
: de Annona muricata L. : 1
~-----------------1
------------------~ 1
1
t
--.---------
~----------------------,
1
1
Secado de semillas de Annona
: muricata L. durante 10 días
~-----------------,
' bajo sombra. 1
1 Determinación de : ~--------,-------------1
1 1
1 porcentaje de humedad 1
1
•------------------'
,---------------------.
: Molienda de semillas secas de 1
1
1-------------¡ : la especie vegetal en estudio. 1

1
L - - - - - - - - - - -¡- - - - - - - - - - -
: Porcentaje de 1
·------------- 1
•
1
1 rendimiento
-------------
1
: Extracción con etanol durante 10

: días a T0 A y agitación constante.
1 1
1-------------------------1
1
'Y
~----------~----------------.,
1
: Obtención de extracto Etanólico de
: semillas de Annona muricata L. 1
,_-- - - ---- - - - - - - - - ---- - - - --- _,
Fuente: elaboración propia.
70
3. 7.1.2. Selección y Desecación de la muestra.
Los frutos una vez que han sido recolectados fueron almacenados en
condiciones óptimas hasta el momento de su empleo, es necesario eliminar la
tierra o sustancias extrañas que puedan ir acompañando a la especie vegetal.
Así mismo la desecación consiste en eliminar el agua de la vegetación sin
alterar los principios activos de la droga.
Procedimiento experimental: Una vez obtenido el fruto en estudio se
procedió a la selección y limpieza de los frutos de la especie vegetal Annona
muricata L. (Masasamba), de las cuales cuidadosamente se retiraron las
semillas que se encuentran dentro del fruto con la ayuda de un cuchillo limpio,
posteriormente estas semillas se extendieron en papel Kraff para su secado la
cual se realizó en un lugar fresco, limpio, ventilado, en sombra y a temperatura
ambiente durante 7 días.
r-------~.,---_ ----. ---- ~
f
1
1
)
1
l' - - - - - - - - - - - - ------- ------·
Los frutos después de haber sido seleccionados y limpiados

fueron cortados con la ayuda de un cuchillo limpio para retirar
las semillas luego extenderlas y secarlas en un lugar ventilado
y a temperatura ambiente.
FIGURA N°1 0: fotografías: Izquierda: Corte del fruto de Annona muricata L

Derecha: Semillas extendidas de Annona muricata
71
3. 7 .1.3. Determinación del Porcentaje de Humedad.
Método Gravimétrico: Determinación de la pérdida de agua por

desecación en una estufa.
Este método consiste en calentar una muestra vegetal homogénea,
previamente triturada y pesada a una temperatura de 50°C durante un tiempo
de secado en una estufa y se deja secar hasta peso constante, es decir que
entre dos pesadas consecutivas realizadas tras un tiempo de desecación
determinado no exista una diferencia mayor de O.Smg/g. de sustancia
analizada. (57)
Procedimiento experimental: A una parte de las semillas frescas
seleccionadas se les determinó el porcentaje de humedad, de la siguiente
manera: Se colocó aproximadamente 1Og de las semillas frescas en tres
placas Petri cada una, previamente pesadas, estas se llevaron a una estufa a
una temperatura de 50°C hasta obtener un peso constante respectivamente.
Esta operación se realizó por triplicado.
Para la determinación del porcentaje de humedad se aplicó la siguiente
fórmula:
M 1 -M
%H = s xlOO
M¡
Donde:
%H: Porcentaje de humedad.
Mr: Peso de la muestra fresca.
Ms: Peso de la muestra seca.
72
FIGURA N°11 : fotografía del procedimiento para determinar porcentaje de
humedad de las semillas de Annona muricata L.
3. 7 .1.4. Molienda.
Los principios activos a extraer se encuentran disueltos en el citoplasma de la
célula vegetal o formando sales que se encuentran incrustados en las células
con el fin de facilitar la extracción de los mismos por ello la muestra es
sometida a un proceso de molturación o troceado que destruye las estructuras
que contienen mejorando así el rendimiento de la extracción. (57)
Procedimiento experimental: Una vez secas las semillas se procedieron a

molerlas en un molino manual de granos previamente desinfectado, luego se
tamizó la muestra obtenida para obtener un producto relativamente
homogéneo. Al finalizar esta operación las semillas molidas se envasaron en
recipientes de vidrio oscuro (color ámbar) y/o recipientes forrados con papel
oscuro, los recipientes previamente limpios con tapa hermética.
3.7.2. OBTENCIÓN DE LOS EXTRACTOS ETANOLICOS DE Annona

La extracción es un proceso de interacción de la droga con el solvente (57),

para ello las semillas secas, molidas y envasadas se sometieron a extracción
por maceración con Etanol 70° según el objetivo de la presente investigación.
73
El proceso se llevó a cabo en el laboratorio de Farmacobotánica de la carrera
profesional de Farmacia y Bioquímica así como en el laboratorio de Fitoquímica
de la Facultad de Química de la Universidad Nacional de San Antonio Abad del
Cusca, para realizar la extracción con etanol las semillas secas molidas de
Annona muricata L."Masasamba" se llevaron a macerar con 41itros de etanol al
70°, durante 1O días. Pasado este tiempo se procedió a filtrar los macerados
para separar restos vegetales. Los productos filtrados se llevaron
inmediatamente a evaporar utilizando el Rotaevaporador R-215 BUCHI. El
extracto crudo etanólico se obtuvo después de evaporar el disolvente en el
Rotaevaporador a presión reducida al vacío, presión que es establecida para el
solvente según las especificaciones del instrumento y a una temperatura de
60°C.
....._>
1) Pesado de semillas secas 2) Material vegetal en proceso
molidas de Annona muricata. de maceración.
4) Extracto Etanólico de semillas

3) Filtración del extracto Etanólico
de Annona muricata L.
para su posterior evaporación.
FIGURA N°12: fotografías del procedimiento de obtención del extracto

etanólico de Annona muricata L.
74
3.7.3. OBTENCIÓN DE ACETOGENINAS A PARTIR DEL EXTRACTO
ETANOLICO DE SEMILLAS DE Annona muricata L.
El proceso se llevó a cabo en el laboratorio de Fitoquímica de la Facultad de

Química de la Universidad Nacional de San Antonio Abad del Cusca. Para
realizar la extracción de las Acetogeninas a partir del extracto etanólico de
semillas de Annona muricata L. (Masasamba), se siguió el método sugerido
por la Escuela Nacional de Ciencias Biológicas del Instituto Politécnico
Nacional de México. (58)
La flecha indica el extracto etanólico de

semillas de Annona muricata L.
concentrado por el Rotaevaporador
antes de ser sometido al proceso de
extracciones por solventes orgánicos y
obtener.l(}s,(\cetpgenin.as pres~ntes en
las semjllas:d~.~~&9~a m~}lcdtqc . ·
FIGURA N°13: fotografía del Rotaevaporador R-215 BUCHI

a lado el extracto Etanólico de semillas
de Annona muricata L. (Masasamba).
75
FLUJOGRAMA No 02: OBTENCION DE ACETOGENINAS A PARTIR DEL
EXTRACTO ETANOLICO.
Extracto etanólico
Concentración en ROTAEVAPORADOR R-215 BUCHI
1
Fraccionamiento con hexano X 10 veces : Hexano
1 recuperado
/
fl ~-----------)
/
/
/
/
,-----------------------~
:, ________________________
Fracción acuosa de la extracción ¡:
Fraccionamiento con cloroformo x 8 veces
1 ----------------------, 1
: Fracción clorofórmica de la 1
: extracción
1 \ 1
1 ----------------------~
V
,-------------,
: Cloroformo :
1
:, _____________
recuperado /
,
76
,----------------------~
: Fracción clorofórmica del
: fraccionamiento.
\ 1
----------------------~
,----------------, '
Agregamos NazS04 1
1
1
1 para eliminar trazas de
1
1 agua
\
'----------------~
,-----------------,
: Filtramos la solución :
: para eliminar el NazS04 :
1 1
~-----------------~
1 Concentramos en
1
1 Rotavapor BUCHI R-215
1
'-------------------
,---------------------,
1 l
1 El concentrado se traslada a 1
: un frasco limpio y pesado. :

1 1
'---------------------~ r---------------------- 1
: • Determinación de pruebas 1
1
de solubilidad. 1
• Propiedades fisicoquímicas
1
~---------------------, 1
: Obtención de concentrado de : - -. .·~: • Porcentaje de extracción.

: Acetogeninas.
: • Efecto insecticida.
1 • Efecto antibacteriano
Fuente: instituto politécnico nacional México (58) 1 • Cromatografía por HPLC

1¡ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _1
77
3. 7 .3.1 Procedimiento.
Extracción por solventes orgánicos: El extracto etanólico obtenido, fue

llevada a un proceso de extracción por decantación con solventes de diferentes
grados de polaridad, según el protocolo seguido para la obtención de
Acetogeninas.
El proceso de extracción por decantación fue realizada en dos fases:
•!• Primera fase:
El extracto crudo etanólico en una primera fase fue sometida a extracción con
50ml de Hexano QP durante diez veces consecutivas.
La fracción hexánica es retirada de la pera de decantación quedando
solamente la fracción Acuosa, la cual es de nuestro interés, logrando recuperar
hexano.
La fracción acuosa fue sometida a una segunda fase de extracción con un
solvente más apolar según el protocolo establecido.
La fracción acuosa obtenida fue llevada a concentrar en el Rotaevaporador R-
215 BUCHI con la finalidad de retirar trazas de hexano QP que pudiera haber
quedado.
•!• Segunda fase:
La fracción acuosa concentrada fue llevada nuevamente a un proceso de

extracción por decantación utilizando como solvente cloroformo QP. El
procedimiento fue realizado por 8 veces consecutivas utilizando en cada
operación 50ml de cloroformo.
Posterior a este procedimiento la fracción clorofórmica fue retirada de la pera
de decantación; recuperando de esta manera cloroformo quedando solo la
fracción de nuestro interés.
La fracción de nuestro interés y que contiene las Acetogeninas fueron
concentradas en el Rotaevaporador R-215 BUCHI con la finalidad de eliminar
trazas de cloroformo. Esta fracción fue denominada fracción Bioactiva, la cual
es de nuestro interés en la presente investigación.
78
Primera fase de Concentración y Producto final de las
extracción. Las flechas evaporación de la muestra extracciones consecuti-
indican las fracciones en extracción en el vas con diferentes
formadas: rotaevaporador R-215 solventes orgánicos. En
BUCHI a una r de 60°C con esta fase ya se lograron
• Fase Hexánica
la finalidad de pasar a la extraer Acetogeninas
• Fase acuosa segunda fase de extracción presentes en Annona
en la cual se utilizo muricata.
cloroformo.
FIGURA N°14: fotografías del proceso de extracción de Acetogeninas.
Desecación de la fracción Bioactiva: La fracción Bioactiva (concentrado de

Acetogeninas), se procedió a desecar con sulfato de sodio anhidro (NaSo4),
con la finalidad de eliminar trazas de agua, para luego ser filtrado. El
concentrado de Acetogeninas se depositó en un balón y fue llevado al
Rotavapor R-215 BUCHI a una temperatura de 60°C y una presión al vacio de
474 mbar.
79
Desecación del concentrado Filtrado del concentrado de
de Acetogeninas con sulfato Acetogeninas para retirar el
de sodio anhidro para sulfato de sodio. La flecha indica
eliminar trazas de agua. el sulfato de sodio retenido en el
embudo.
FIGURA N°15: fotografías del proceso de desecación de Acetogeninas

Etiquetado y almacenamiento: Posterior a la desecación el concentrado de

Acetogeninas se envasó en un frasco de vidrio limpio y previamente pesado
dejándolo en la campana extractora para eliminar el exceso de cloroformo
concentrado. El concentrado de Acetogeninas obtenido se almaceno bajo
sombra y a temperatura ambiente en el laboratorio de Fitoquímica hasta su
posterior uso.
Con el concentrado de Acetogeninas obtenidas se realizaron los siguientes

ensayos:
3.7.4. DETERMINACIÓN DEL PORCENTAJE DE EXTRACCIÓN.

Para determinar el porcentaje de extracción se tomó en cuenta el volumen
peso del concentrado de Acetogeninas extraído hasta agotamiento de la
muestra y se correlaciono con la cantidad de extracto crudo etanólico que se
obtuvo en un inicio. Para calcular el porcentaje de extracción se usó la
siguiente fórmula: (61)
80
p
%E _!_X 100
P. 1
Donde:
%E: Porcentaje de extracción.
P¡: Peso de la muestra molida.
Pt: Peso del extracto seco.
3.7.5. ANÁLISIS FISICO-QUIMICO DEL CONCENTRADO DE

ACETOGENINAS
El concentrado de Acetogeninas de Annona muricata L (Masasamba) fue

sometido a las siguientes pruebas:
3. 7.5.1. Características Organolépticas

A través de este análisis se observó y determinaron características en cuanto a
su aspecto, color, olor y sabor.
3.7.5.2 Ensayos Físicos:
Pruebas de Solubilidad del concentrado de Acetogeninas de Annona

Por la naturaleza de las Acetogeninas se puede deducir que son parcialmente
solubles en agua, sin embargo se verá el comportamiento de estas sustancias
en diferentes solventes de diferente polaridad como alcohol, cloroformo, éter de
petróleo y benceno.
•!• Procedimiento:
Para el ensayo de solubilidad se pesó 1Omg aprox. del concentrado de
Acetogeninas en varios tubos de ensayo, luego se agregaron a cada uno de
ellos 2-3 mi. de un solvente de diferente polaridad.
81
TABLA N° 9: Polaridad de algunos solventes.
! SOLVENTE POLARIDAD
H20 78.5
Acetonitrilo 36.2
Metanol 32.6
Etanol 24.3
Acetona 20.7
Diclorometano 8.9
Acido acético 6.2
Acetato de etilo 6.0
Clorobenceno 5.6
Cloroformo 4.7
Eter dietílico 4.3
Benceno 2.3
Hexano 1.9
Fuente: (Sharapin, 2000) (60)
Análisis cromatográfico
La cromatografía agrupa un conjunto importante y diverso de métodos, que
permite separar componentes estrechamente relacionados en mezclas
complejas, lo que en muchas ocasiones resulta imposible por otros medios. En
todas las separaciones cromatográficas, la muestra se desplaza con una fase
móvil, que puede ser un gas, un líquido o un fluido supercrítico. Esta fase móvil
se hace pasar a través de una fase estacionaria con la que es inmiscible, y que
se fija a una columna o una superficie sólida. Las dos fases se eligen de tal
forma que los componentes de la muestra se distribuyen de modo distinto entre
la fase móvil y estacionaria. Aquellos componentes que son fuertemente
retenidos por la fase estacionaria se mueven lentamente con el flujo de la fase
móvil; por el contrario, los componentes que se unen débilmente a la fase
estacionaria, se mueven con rapidez (61 ).
82
Cromatografía en capa fina:
La cromatografía en capa fina es un procedimiento rápido y sencillo para
separar mezclas de sustancias, identificar, caracterizar o determinar
semicuantitativamente componentes individuales.
Esta separación se consigue mediante la diferencia entre las fuerzas de
adhesión de las moléculas de los componentes a la fase móvil (normalmente
un disolvente) y a la fase estacionaria (la llamada capa fina, que puede ser
papel o silicagel).
Esta diferencia se traduce en un mayor o menor desplazamiento o movilidad de
cada componente individual, lo cual permite su separación e identificación. Las
separaciones se realizan por el procedimiento "ascendente", introduciendo el
borde inferior de la placa cromatográfica en el solvente, que será succionado
por acción de las fuerzas capilares del recubrimiento de la superficie de la
placa.(61)
Reveladores: los reveladores son reactivos apropiados que se usan cuando las
sustancias separadas en las placas de silicagel no son coloreadas con esta
operación se vuelven visibles logrando identificarlas. (61)
•!• Procedimiento:
1.- Se emplearon placas de Silicagel 60. Sobre una placa de silicagel se
aplican 1O JJI del concentrado de Acetogeninas se procedió a secar con una
secadora con la finalidad de que la muestra se fije de mejor manera a la placa
de silicagel.
2.- Por otro lado se preparó el líquido desarrollador que consiste en la mezcla
de los siguientes solventes orgánicos Cloroformo: Acetato de etilo: Metano! en
las siguientes proporciones (6:3:1) respectivamente.
3.- El líquido desarrollador se introdujo en la cámara desarrolladora.
4.- La placa de silicagel que contiene la muestra es introducida a la cámara
desarrolladora y se deja que el líquido desarrollador suba por la placa hasta su
límite superior.
83
Cámara
cromatog
ráfica
/
Fase móvil Placa de Silicagel
GRAFICO N°8: Representación grafica de cromatografía en capa fina

Fuente: Florez, L. (extractos bioactivos) (55)
La cromatografía en capa fina se realizo en la campana de

extracción. En la figura se puede observar la placa de Silicagel
posterior a la interacción entre la muestra y el líquido
desarrollador.
FIGURA N°16: Fotografía del proceso de cromatografía en capa fina.

5.- Como las sustancias separadas en la placa de silicagel no son coloreadas

se procedió a rociarlas con un revelador, para la cual se uso el reactivo de
Kedde mediante esta operación se pudo identificarlas y ponerlas en evidencia.
Reactivo de Kedde: El reactivo de Kedde es una solución al 2% (p/v) de ácido
3,5-dinitrobenzoico en etanol denominada fracción A y una fracción 8 que la
constituye hidróxido de potasio (KOH) al 6% en etanol. La reacción consiste en
84
poner en contacto un pequeño volumen de la fracción A sobre la muestra a
ensayar la cual previamente se puso en contacto con la fracción B. La aparición
de una coloración de rosa a violeta - intenso, delata la presencia en la muestra
a ensayar de una molécula con un resto y -lactónico.(72)
6.-Procedimiento del revelado: La placa de silicagel de la cromatografía en
capa delgada fue revelada con el reactivo de Kedde, para lo cual primero fue
rociada con la fracción A, se dejo actuar por un minuto para posteriormente ser
rociada con la fracción 8.(62)(72)
Análisis cromatografico por HPLC (High Performance Liquid
Chromatography).
Denominada también como Cromatografía líquida de alta eficacia, es un tipo de
cromatografía en columna utilizada frecuentemente en bioquímica y química
analítica. El HPLC es una técnica utilizada para separar los componentes de
una mezcla basándose en diferentes tipos de interacciones químicas entre las
sustancias analizadas y la columna cromatográfica el compuesto pasa por la
columna cromatográfica a través de la fase estacionaria (normalmente,· un
cilindro con pequeñas partículas redondeadas con ciertas características
químicas en su superficie) mediante el bombeo de líquido (fase móvil) a alta
presión a través de la columna. La muestra a analizar es introducida en
pequeñas cantidades y sus componentes se retrasan diferencialmente
dependiendo de las interacciones químicas o físicas con la fase estacionaria a
medida que adelantan por la columna. (61)
•!• Aparato
El equipo consiste en un Desgasificador, Bomba binaria de dos cabezales
encargada de succionar los solventes y mezclarlas, puerto de inyección o
Autosampler, un horno o compartimento termostatizado que contiene la
columna cromatográfica, un detector DAD (detector por arreglo de diodos) y un
sistema de adquisición de datos. La muestra en estudio atraviesa por la
columna con un caudal y una presión controlada y seguidamente pasa a través
del detector. La cromatografía se realiza a temperatura constante utilizando un
programa dado.
85
• Procedimiento:
El análisis cromatográfico por HPLC fue realizado en el laboratorio de

cromatografía de la facultad de Ciencias Químicas, Físicas, Matemáticas,
Farmacia e Informática de la Universidad Nacional de San Antonio Abad del
Cusca. El análisis consiste en equilibrar la columna, la cámara de inyección y el
detector a la temperatura caudal de la muestra especificada en la monografía.
Preparamos la solución problema, para lo cual se utilizó 1OOmg de muestra
aproximadamente diluida en metanol HPLC. Se tuvo en cuenta en esta prueba
que la solución de la muestra debe estar exenta de partículas sólidas.
--
-- -
T~'
l.
, ..., - _.¡g;:_ _ .
_,.,.
El análisis cromatográfico por HPLC de fase reversa se llevo

a cabo en un modelo GC-MS AGILENT TECHNOLOGIES
.12005 instalado a un sistema de columna Zorbax eclipse
XOB-C18 ANALITYCAL con 250mm de largo reticulado,
4.6mm de diámetro y S~m de espesor de película. La
temperatura fue de 30°C y se mantuvo constante durante
todo el proceso cromatográfico. La detección se realizo a
220nm.
FIGURA N°17: Fotografía del equipo de HPLC.

86
Acetogeninas
deAnnona
muricata.
la muestra de Acetogeninas (1.0 microlitro)

fue inyectada como solución al 1% en
metanol. los componentes fueron
identificados por comparación de sus
espectros de masa y tiempos de retención
utilizando como referencias una colección de
datos de la INTERNATIONAL JOURNAL of
BIOMEDICAL SCIENCE.
FIGURA N°18: Fotografía del concentrado de

Acetogeninas en el Autosampler
del equipo de HPLC.
• Especificaciones del análisis cromatográfico de las Acetogeninas de

Annona muricata L.
Se siguieron los siguientes criterios para el análisis cromatográfico:
./ Columna: C-18 (250 mm x 4.6 x 51Jm) .

./ Detección: 220nm .
./ Temperatura: 30°C constante .
./ Fase móvil: A: Agua
8: Metanol 85% .
./ Gradiente: 1o: O - 40min 85% B
2°: 40 - 60min 85%- 95% B.

./ Flujo: 1ml/min.
Fuente: Yang, lntemational Joumal ofBiomedical Science (63)
87
SEGUNDA PARTE
3.8. DE LA DETERMINACION DE LA ACTIVIDAD INSECTICIDA
3.8.1 METODOLOGÍA PARA LA DETERMINACIÓN DEL EFECTO

INSECTICIDA.
3.8.1.1 Recolección de la especie insectil Aedes aegypti.
El ciclo de vida de los mosquitos Aedes aegypti se desarrolla en cuatro etapas

las que son huevo, larva, pupa y adulto; para el ensayo insecticida se
colectaron larvas de 4mm aproximadamente correspondientes al estadio larval
111 tardío o IV temprano aproximadamente cuatro días después de su eclosión
de ser huevo. Estas larvas fueron recolectadas en las localidades de Quince
mil, Huacyumbre, Limonchayoc y san Lorenzo del distrito de Camanti a
643msnm, provincia de Quispicanchis, región Cusca durante el mes de Julio
del2011.
La vegetación de la zona de recolección está constituida por matorrales,
arbustos, bosques de árboles frutales y madereros. La zona se caracteriza por
un clima caliente con una temperatura comprendida entre 24 °C a 26°C en esta
época del año, abundante humedad comprendida entre 85 % a 90%, lluvias
continuas leves y torrenciales según las condiciones del tiempo. A su vez
existen numerosos ríos y riachuelos que recorren por estas zonas siendo un
hábitat ideal para numerosos insectos así tenemos: cigarras, libélulas,
mariposas, chinches, moscas comunes, simúlidos, reptiles pequeños, anfibios
y otras especies.
88
Cusca
'
}
/
)
\/
r::: __ ' /
La flecha indica la provincia de Quispicanchis dentro de la región Cusca.
Quispicanchi
... $ 1
Q
La flecha indica la ubicación geográfica del distrito de Camanti ubicada

dentro de la provincia de Quispicanchis-Cusco
FIGURA N°19: Ubicación geográfica del lugar de recolección de larvas de

Aedes aegypti.
Fuente: Instituto Nacional de Estadística e Informática INEI-2006 (56)
89
Se recolectaron insectos de Aedes aegypti en su fase larval en
las zonas urbanas, que comprenden viviendas que fueron
seleccionada al azar con un criterio de delimitación de 200m a
la redonda.
FIGURA N° 20: fotografía vista general del área de recolección

de larvas de Aedes aegypti.
El proceso de recolección de larvas empezaba de 8:00am - 13:00pm y de

14:00pm - 17:00pm horario que fue establecido y sugerido por el Entomólogo
de la unidad de saneamiento ambiental y control vectorial; responsable de la
coordinación de vigilancia entomológica DIRESA- Cusca (Dirección Regional
de Salud), en coordinación con el Entomólogo responsable de vigilancia
Entomológica de la Red de Servicios de Salud Cusca Sur y Bióloga
Responsable de Laboratorio y Vigilancia Entomológica del centro de salud
Quincemil.
Método de colecta de larvas de Aedes aegypti:
La recolección se realizó siguiendo las pautas recomendadas por el manual de
campo para la vigilancia Entomológica, 2001; elaborado por la DIGESA
(Dirección General de Salud Ambiental) (64).
De acuerdo al manual de campo para la vigilancia entomológica antes de
realizar la colecta de larvas (procedimiento denominado larveo), primero es
necesario realizar un mapeo, reconocimiento y sectorización de las localidades
90
pertenecientes a una determinada zona a inspeccionar intradomiciliaramente y
peridomiciliariamente (en nuestro caso el distrito de Camanti), la cual nos fue
facilitada por la Bióloga Responsable de Laboratorio y Vigilancia Entomológica
del centro de salud Quincemil. El reconocimiento de la zona a inspeccionar
toma como criterio delimitar y dividir la zona en fragmentos de zona que
considera viviendas que estén comprendidas dentro de un área circular de 200
m de radio y serán inspeccionadas las casa más representativas y/o
sospechosas.
El manual menciona que la búsqueda de larvas se realiza casa por casa, en
todos los recipientes de agua, sea para consumo humano, para animales de
corral, para regar; en los lugares de clima tropical y lluvioso, es importante
buscar en cualquier recipiente u objeto que pudiera contener agua,
especialmente aquellos denominados inservibles., y eliminarlos (a la basura) o
poniéndolos boca abajo, también se recomienda utilizar una picota para
agujerear los recipientes inservibles. Los criaderos de Aedes aegypti son
usualmente los recipientes de agua artificiales de uso doméstico, como
floreros, baldes, pozos o tanques de agua de consumo humano o para los
animales. También es posible hallarlos en floreros, cementerios, llantas en
desuso, y en zonas lluviosas, es importante la búsqueda en los llamados
inservibles como latas vacías, botellas, etc.
Se requieren los siguientes materiales: Cucharón para colecta de larvas,
Goteros o pipetas, Viales con tapa etiquetado, Lápiz y Formato de Inspección
domiciliar para Aedes aegypti.
La búsqueda se hace utilizando el cucharón para tomar una muestra, se puede
vaciar el contenido del recipiente (si es posible) en una bandeja o balde, o
simplemente usando un gotero, para colectar los ejemplares y ponerlos en un
vial etiquetado; a medida que se van registrando todos los recipientes de agua
se van apuntando en la hoja de inspección domiciliaria; se hace la búsqueda en
todos los recipientes de la casa, sin excepción.
Todo lo recomendado en el manual de campo para la vigilancia Entomológica,
2001; (64 ).fue seguido exactamente en nuestro investigación. El mapeo fue
asignado por barrios de la zona a los cuales les denominamos con letras
mayúsculas en el presente estudio.
91
Se recolectaron larvas de Aedes aegypti en las viviendas donde se
encontraron depositados generalmente en recipientes de uso domestico
que contienen agua de lluvia y abundante material orgánico, así como en
los llamados inservibles (llantas, latas vacías, botellas, etc). La búsqueda se
realizó utilizando un cucharon con el cual cogíamos muestras biológicas de
diferentes recipientes encontrados en la zona cuyo contenido fueron
vaciados en una bandeja. Fueron recolectados en horas donde las
temperaturas fluctuaban entre 23 -25 ºC y 78-82% de humedad relativa,
esto sucedió a las 9:00-17:00 horas.
FIGURA N° 21: fotografía general del procedimiento de recolección

de larvas de Aedes aegypti en zonas urbanas.
Fuente: Callo J v Farfán K.E.
Con la ayuda de una pipeta Pasteur de material de plástico con punta de

boca ancha se procedió a succionar las larvas de diferentes mosquitos de
los recipientes donde fueron encontrados ( llantas, material domestico en
desuso, botellas, latas, etc ), luego fueron almacenadas y rotuladas en
recipientes limpios de material de plástico de fácil manipulación debido a
las caminatas, las cuales contenían agua del mismo recipiente de
recolección con la finalidad de darles las mismas condiciones del hábitat
donde se las encontró.
FIGURA N°22: Fotografía de recolección, almacenamiento y transporte

de larvas de Aedes aegypti.
92
El material biológico recolectado fue debidamente rotulado según la zona
donde fueron recolectados con la finalidad de llevar un control adecuado
del vector para nuestro estudio, DIRESA Cusco y la Red de Servicios de
Salud Cusco Sur.
FIGURA N°23: fotografías de recipientes con larvas rotuladas por cada

zona de recolección.
Material domestico Material de construcción Llantas
Los mosquitos hembras de Aedes aegypti ovopositan sus huevos en estos

recipientes, las que generalmente contienen agua por las lluvias continuas en la
zona dándole un hábitat adecuado oara su ciclo biológico .
•• .J. u • -~ -
FIGURA N°24: fotografías de recipientes en los que se encontraron

larvas de Aedes aegypti.
93
3.8.1.2. Identificación de la muestra insectil
La identificación de la muestra insectil se realizó en el laboratorio del área de

entomología del centro de salud de Quincemil perteneciente a la Red de
Servicios de Salud Cusca Sur, la identificación fue realizada por el especialista
Entomólogo de la Dirección Regional de Salud Cusca, personal de salud del
centro de salud de Quincemil del área encargada del control del vector Aedes
aegypti y nosotros como ejecutores de la investigación.
Del material biológico que se obtuvo se

procedió a identificarlos con la ayuda
de un microscopio ya que las
características de las larvas no se
aprecian a simple vista y es necesario
realizarlo microscópicamente para
lograr identificarlos y diferenciarlos de
otros mosquitos pertenecientes a la
misma familia y que también se
encuentran en la zona.
FIGURA N°25: fotografía de larvas recolectadas.

Características de larvas de Aedes aegypti para su identificación:
Presentan las siguientes características:

• Fase acuática, alimentación y crecimiento.
• Cabeza, tórax y 9 segmentos abdominales.
• Sifón respiratorio cortó por el cual respira y se mantiene en la superficie
casi vertical.
• Poseen 4 espinas torácicas, dos a cada lado.
• 8vo segmento con una hilera de 7-12 dientes.
• Tiene un movimiento serpenteante.
Estas características las diferencian de otros mosquitos que pertenecen a la

misma familia quienes presentan el mismo ciclo de vida. (64)
94
LARVAS Las larvas de los mosquitos en
este estadio evolutivo se
)~~J ~
alimentan vorazmente con su
~-«.r· ·~
' \- ~ aparato bucal masticador se
caracterizan:
~ ~
1~ ji~
i'?
t .. Anopheles: ausencia de sifón
,, ·-~ respiratorio, presenta una
~~ placa con aberturas
~·-
¡!
espiraculares.
~,
~\
Aedes: sifón respiratorio
~-
cortó, presenta cuatro espinas
en el tórax.
Culex: sifón respiratorio largo

Culex Anoe_hefes Aedes
FIGURA N°26: Diferencia de Aedes frente a otros géneros de mosquitos.

Fuente: Florez, L. Pruebas de Actividad biológica (47)
Identificación de Aedes aegypti en laboratorio

Una vez obtenida el material biológico fue transportada al laboratorio para su
identificación, la cual se realizó de la siguiente manera:
• se eligieron 1-2 larvas de cada recipiente previamente rotulado
correspondiente a una determinada zona de recolección.
• Las larvas se someten a etanol 70 ° para matarlas con la finalidad de evitar
movimiento de estas al ser observadas en el microscopio.
• Las larvas muertas son preparadas en láminas porta objetos para su
identificación en el microscopio con un objetivo de 1OX.
95
--, !
--\
!
1 .~
De todos los grupos de material biológico recolectado se escogieron al azar

dos larvas, las que presentaban completas todas las partes de su cuerpo.
Una vez seleccionadas las larvas se procedió a observarlos en el
microscopio a un objetivo de lOX.
FIGURA N°27: Fotografía de preparación de material biológico para

su identificación.
De los grupos de material biológico que fueron recolectados y tras un

exhaustivo proceso de identificación se logró tipificar e identificar en el grupo
"E" larvas de Aedes aegypti, con la ayuda de un microscopio a un objetivo de
1OX, siguiendo las claves taxonómicas propuestas y presentadas en el "Manual
of Neartic Diptera" (McAipine, 1981) y manual de campo para la vigilancia
Entomológica, 2001 elaborado por la DIGESA (Dirección General de Salud
Ambiental) (55).
Los demás grupos fueron identificados como larvas del mosquito del genero
Culex los cuales no son de mucho interés en el área de salud y fueron
debidamente descartados bajo la supervisión del personal de DIRESA Cusca y
personal de Red de Servicios de Salud Cusca Sur.
96
Fig. B: sifón respiratorio corto
La observación, el análisis e
identificación de la muestra
insectil (larvas), se fundamento
básicamente en las características
morfológicas que presenta el
insecto Aedes aegypti en su
estadio larval como se muestran
en las figuras No28, mencionadas
características confirmaron la
presencia de larvas de Aedes
Fig. C: cuerpo arqueado y cabeza aegyptí.
pegada al tórax
FIGURA N°28: Fotografías de las características de Aedes aegypti

identificadas en laboratorio.
97
FLUJOGRAMA N° 3: Procedimiento para la evaluación del efecto
insecticida contra larvas de Aedes aegypti.
Recolección de material biológico

(larvas de Aedes aegypfl)
Reconocimiento e identificación de larvas

del mosquito Aedes aegypti del estadio 111
tardío o IV temprano.
Preparación de soluciones de Acetogeninas

con diferentes concentraciones en agua a
ensayar (tratamientos).
1"
Soluc1'ónde Soluci ón de grupo

grupo eontrol <!==1 ~ patrón 1mgj10ml
"AG UA" ~ 7 'TEMEFOS"

1
\1
l Soluciones experimentales a diferentes concentraciones de Acetogeninas l
! ! ! l
10.000 5000 500 so
ppm pprri ppm ppm
Adicionar 10 larvas de Aedes aegypti a todos

los grupos. Realizar pruebas por triplicado.
Realizar el
Observar muerte de larvas de Aedes aegypti a las 1,
análisis
2, 3, 4,S .....horas y realizar recuento de individuos estadístico de
muertos en cada hora respectivamente. ·Jos resultados.
Fuente: Elaboración propia.
98
3.8.2 DETERMINACIÓN DEL EFECTO INSECTICIDA EN LARVAS DE LOS
MOSQUITOS DE Aedes aegypti.
3.8.2.1. Bioensayo del efecto insecticida:
Los bioensayos se realizaron en un ambiente acondicionado en el centro de

salud Quincemil distrito Camanti perteneciente a la Red de Servicios de Salud
Cusco Sur.
El centro de salud Quincemil, se encarga de llevar un adecuado control

y vigilancia de la población del mosquito Aedes aegypti (vector del
dengue y fiebre amarilla). Así como también se encarga de
erradicarlos cuando su población aumenta con la finalidad de evitar
focos de infección de fiebre amarilla y dengue, por tal motivo nos
facilitaron un ambiente para poder realizar el presente estudio.
Modelo biológico: Los bioensayos contemplaron el uso de larvas de Aedes

aegypti de 4mm aproximadamente correspondientes al estadio larvallll tardío o
IV temprano, ya que estas son fácilmente manipulables y vistas al ojo del
observador.
Se siguió el modelo propuesto por la RELCOV (Red Latinoamericana en

Control de Vectores)(39), con algunas adaptaciones según la UNAL- Colombia
(56).
99
Las larvas que se lograron
identificar como Aedes aegypti
fueron sometidos a pruebas de
actividad biológica frente a
Acetogeninas a diferentes
concentraciones obtenidas de
Annona muricata para determinar
actividad biopesticida para lo cual
se trabajo Según el protocolo
propuesto por la RELCOV con
algunos acondicionamientos según
la universidad tecnológica de
Pereira- Colombia.
FIGURA N°29: Aedes aegypti en su estado evolutivo de larva.

Tratamientos: en los bioensayos se evaluaron 6 tratamientos que consistieron

en soluciones a base de Acetogeninas de Annona muricata L. (Masasamba) a
diferentes concentraciones (1 O.OOOppm, S.OOOppm, 500ppm, 50ppm), un
insecticida comercial denominado Temefós recomendado por la RELCOV (red
latinoamericana de control de vectores) y agua de lluvia contenidas en
recipientes donde se encontraron las larvas como control negativo, ya que esta
no produce efecto insecticida. Cada tratamiento se repitió tres veces en el
tiempo para disminuir el error experimental (Park et al.- 2004).
Procedimiento:
Para la evaluación de la actividad insecticida se utilizó el bioensayo de
respuesta a estimulo físico el cual se basa en la determinación de respuesta
que es expresada en el movimiento de las larvas sometidas a experimentación
al ser tocadas con un puntero romo en la región cervical. Después de cada
hora de exposición a las Acetogeninas se realiza el conteo de larvas muertas y
moribundas (no pueden nadar normalmente) en todos los grupos de
experimentación. Se consideran muertas cuando no reaccionan al momento de
ser tocadas con un puntero romo en la región cervical y en todos los grupos las
larvas moribundas se contabilizan como muertas.
Las pruebas para determinar el efecto insecticida fueron conducidas según el
método propuesto por la RELCOV (red latinoamericana de control de vectores),
100
con algunas adaptaciones según la universidad de Quindío - Colombia. Se
utilizaron viales de vidrio con capacidad de 20ml de volumen, con una altura de
5.8 cm y un diámetro de 2.8 cm. Medidas que fueron recomendadas por la
UNAL - Colombia.
Las pruebas de actividad

biológica se desarrollaron
por triplicado para cada
grupo experimental. Las
pruebas se realizaron en
viales de vidrio estéril,
aséptico y libre de
contaminación con
sustancias extrañas.
FIGURA N°30: fotografía de los grupos de experimentación.
Los diferentes tratamientos con Acetogeninas a diferentes concentraciones

fueron preparados en viales estériles de la siguiente manera:
• preparación de solución de Acetogeninas de diferentes
concentraciones:
./primero se preparó una solución con una concentración de Acetogeninas

de 10.000ppm disueltos en 10ml de agua, la cual fue denominada
solución madre, de la cual se realizaron diluciones para preparar las
siguientes concentraciones utilizadas.
Cálculos para preparar las soluciones de Acetogeninas:
1ppm = 1mg/L, entonces:
1O.OOOppm =1 O.OOOmg/L; se debe de preparar en 1Oml de agua, para lo cual

la cantidad en peso de Acetogeninas a usar es la siguiente:
10g - - - - • 1000ml
X 10ml
x = 0.1 g de Acetogeninas
101
0.1 g de Acetogeninas se pesaron para ser disueltas en 1Oml de agua y dar
lugar a una solución de 1O.OOOppm, la cual fue denominada solución
madre. De esta solución se realizaron diluciones para obtener las demás
soluciones con las concentraciones deseadas que fueron utilizados en el
bioensayo; esta operación se realizo de la siguiente manera:
C1. V1 = C2.C2
(10.000ppm)(Xml) =(5000ppm)(10ml)
x =O.Sml
Se sacaron O.Sml de la solución madre y se llevo a aforar con agua hasta el

volumen de 1Oml para obtener una solución de 5000ppm.
Bajo este procedimiento se obtuvieron soluciones con concentraciones de

5.000ppm, 500ppm y 50ppm requeridas para el bioensayo. En el ensayo
experimental cada concentración fue designada a un grupo experimental
de la siguiente manera:
Grupo 1: solución de Acetogeninas con concentración de 10.000ppm.
Grupo 11: solución de Acetogeninas con concentración de 5.000ppm.
Grupo 111: solución de Acetogeninas con concentración de 500ppm.
Grupo IV: solución de Acetogeninas con concentración de 50ppm.
Grupo V: solución de insecticida patrón "Temefós" 1mg/1 Oml
Grupo VI: agua.
102
r
Sol.I: 10.000ppm . 1 Sol.lll: SOOppm

. , . , , . , . , _ " " " " " '_ _.,.{O,~=·····=•·~~"''rc••••-,••··---"·'·--d '·"·-~•-uM-.0==-·-·-·==·-"
l
''
Sol.IV: 50ppm
,,,., = ".. , · ,
FIGURA N°31: fotografía de soluciones de Acetogeninas a
diferentes concentraciones en ppm.
• Adición de larvas Aedes aegypti:
Se introduce 1Oml de agua a los viales que están agrupados de a tres

seguidamente se les adiciono las soluciones de Acetogeninas de la siguiente
manera:
Grupo 1 : Agua 1Oml + SOul de solución 1

Grupo 11 : Agua 1Oml + SOul de solución 2
Grupo 111: Agua 1Oml + SOul de solución 3
Grupo IV: Agua 1Omi + SOul de solución 4
Grupo V: Agua 10ml + SOul de solución de insecticida patrón "Temefós"
Grupo VI: únicamente agua.
Una vez listas los grupos experimentales se adicionaron 1O larvas de Aedes

aegypti a cada vial. La mortalidad de las larvas se observo a cada hora para
cada grupo experimental. En el transcurso del ensayo se mide la
temperatura y la humedad relativa dentro y fuera del ambiente de
experimentación con la finalidad de llevar un control adecuado de las
condiciones ambientales.
103
Con la ayuda de una pipeta
Pasteur de plástico se
adicionaron 10 larvas a cada
grupo experimental, se tomo
·~· en cuenta la hora inicial de

exposición de los grupos
experimentales a las
diferentes concentraciones de
Acetogeninas, así como el
grupo control positivo y grupo
control negativo.
FIGURA N°32: fotografía de adición de larvas a los grupos experimentales.

Fuente: Callo J v Farfán K.E.
Todos los grupos experimentales contienen 10 larvas de Aedes

aegypti. Cada grupo experimental fue evaluado cada hora, el ensayo
biológico se realizo a una Temperatura ambiente que variaba entre
22.3°C a 25°C y una humedad relativa entre 77% a 89%. Esto sucedía
a las 8:00pm, el14 de julio del 2011.
FIGURA N°33: Fotografía de los grupos experimentales

• Análisis de mortalidad de las larvas:
Las lecturas de mortalidad se realizaron a cada hora en un lapso de 43

horas, tiempo en el que todas las larvas de los grupos experimentales
expuestos murieron (grupo 1, grupo 11, grupo 111, grupo IV, grupo V), con
excepción del grupo control negativo (grupo VI), el cual no fue sometido a
104
ningún agente. Las larvas se consideran muertas cuando no reaccionan al
momento de ser tocadas con un puntero romo en la región cervical. Los
datos fueron registrados en número de larvas que murieron a un tiempo
determinado.
3.8.2.2 Análisis Estadístico:

Los datos de recuento se analizaron estadísticamente por medio de un test
ANOVA (análisis de la varianza factorial), y las diferencias de medias por la
prueba Post Hoc o Post Test Scheffe. (63)
105
TERCERA PARTE
3.9. ESTUDIO MICROBIOLÓGICO
3.9.1 CONTROL MICROBIOLÓGICO DEL CONCENTRADO DE

ACETOGENINAS DE Annona muricata L. (Masasamba).
Con la finalidad de comprobar la ausencia de microorganismos contaminantes

en el concentrado de Acetogeninas, se procedió a su determinación de acuerdo
a los siguientes criterios:
TABLA N°10: CRITERIOS DE CONTROL MICROBIOLOGICO.
CRITERIO MICROORGANISMO NUMERO PERMISIBLE
IMPERATIVO Salmonella Ausente

INDICATIVO DE Coliformes fecales
HIGIENE (Escherichia co/i) Ausente
DE ALERTA O - Aerobios Mesófilos ./ 104 - 105 UFC/g
LIMITES CRITICOS - Hongos y Levaduras ./ 102 - 103 UFC/g
Fuente: DIGESA. Dirección General de Salud "Criterio de Calidad Sanitaria e

inocuidad de alimentos (51).
El control microbiológico del concentrado de Acetogeninas se llevó a cabo en el

laboratorio de microbiología de la Facultad de Medicina Humana de la
Universidad Nacional de San Antonio Abad del Cusca, como se muestra a
continuación en los siguientes flujogramas.
106
FLUJOGRAMAS DE CONTROL MICROBIOLÓGICO.
FLUJOGRAMA N°4: Control microbiológico del concentrado de
acetogeninas obtenidas del extracto etanólico de las semillas de Annona
muricata L. (Masasamba) "criterio imperativo - investigación de
Salmone/la"
En tubos de ensayo preparar el Agar

Bismuto Sulfito según Wilson Blair.
Obtener un inoculo del concentrado

de Acetogeninas de la muestra
madre.
Cultivar en Agar Bismuto Sulfito

. según Wilson Blair..
,------------------,
1
1
Incubar a 37°C x 24 :
1 horas. :
'------------------~
Presencia de colonias Ausencia de colonias
Resultado Positivo Resultado Negativo
Fuente: Manual de medios de cultivo (66)
107
FLUJOGRAMA N°5: Control del concentrado de Acetogeninas obtenidas
del extracto etanólico de las semillas de Annona muricata L. (Masasamba)
"criterio indicativo de higiene - investigación de coliformes fecales (E.
co/1)''
En placas petri preparar Agar Me

Conkey.
Diluir 1mi del concentrado de

Acetogeninas en caldo BHI.
Cultivar 0.5ml de la muestra en Agar Me

Conkey por saturación con asa de Digraski.
,------------------
: Incubar a 37°C x 24 :
' horas. :
\------------------~
Presencia de colonias Ausencia de colonias
Resultado Positivo Resultado Negativo
Fuente: Manual de medios de cultivo (66)
108
FLUJOGRAMA No 6: control microbiológico del concentrado de
Acetogeninas obtenidas del extracto etanólico de las semillas de Annona
muricata L. (Masasamba) "criterios de alerta o límites críticos -
investigación de mesófilos viables, hongos y levaduras"
MESÓ FILOS VIABLES HONGOS Y LEVADURAS
Concentrado de Acetogeninas
) Concentrado de Acetogeninas
~~ ~1
Realizar dilución del concentrado de Realizar dilución del concentrado de
Acetogeninas Acetogeninas
:0:
Cultivo en placas petri estériles.
JL
Cultivo en placas petri estériles las que
J contienen previamente con Agar Sabouraud.
jJ
Adicionar 15 mi. de Agar Plate Count y Adicionar 1 mi. de la solución de
mantener a 3rc Acetogeninas.
~J
Homogenizar el inóculo con el medio de Homogenizar el inóculo con el medio de
cultivo cultivo
, -------------
D
1
Dejar solidificar ' 1
1
1
\
_____________ ;\l 1
1
Incubar a 3rc por 24h Incubar a 37 °C por 24-48h.
Realizar el recuento y expresar como UFC/g Realizar el recuento y expresar como UFC/g
~
(~---Res-ul~d-os.__~J (~---Res-ul~d-os.__~]
Fuente: Manual de medios de cultivo 109
(66)
3.9.2. DETERMINACIÓN DE LA ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA.
3.9.2.1. Activación e identificación de Salmonella typhi spp.
Las cepas de salmonella fueron activadas e identificadas en el laboratorio de

microbiología de la Facultad de Medicina Humana de la Universidad Nacional
de San Antonio Abad del Cusco siguiendo un protocolo.
Se trabajaron con 1O muestras tipificadas por el laboratorio de microbiología de
la Facultad de Medicina Humana de la Universidad Nacional de San Antonio
Abad del Cusco que se encontraban refrigeradas en agar Wilson Blair y agar
Hectoen (ANEXO N°11 ), realizaron las siguientes pruebas:
Activación: se tomó un inoculo del tubo que contenía a la bacteria en estudio y

se inoculo a un tubo que contenía caldo BHI, se incubo durante 24h a 37ac,
posteriormente se tomo una muestra del caldo y se sembró en agar Hectoen
(ANEXO N°11) se incubo por 24 horas a 37ac y se observó el crecimiento de la
bacteria.
La flecha roja (arriba) señala cepas de Salmonel/a typhi spp en tubos

con agar Bismuto Sulfito según Wilson Blair. Las colonias son de
coloracion negra característico de S. typhi en este medio de cultivo.
Mientras que la flecha azul (abajo) señala colonias de Salmonella
typhi spp en agar Hectoen (anexo Nº4).
FIGURA N°34: Activación de las cepas de Salmonel/a typhi spp.

110
Identificación: para la identificación se procedió según el "Manual de
Laboratorio para la Identificación y Prueba de Susceptibilidad a los
Antimicrobianos de Patógenos Bacterianos de Importancia para la Salud
Publica en el Mundo en Desarrollo" (67).
• Serología en lámina para la identificación de S. Typhi spp.
Las pruebas de aglutinación serológicas se realizaron en una placa de Petri o

en una lámina de cristal limpia.
Se tomaron 1 a 2 colonias de Sa/monella typhi spp del

Agar Hectoen correspondientes a las diferentes muestras
y se emulsionaron con 3ml de suero fisiológico en
diferentes viales como se muestra en la figura N°35.
FIGURA N° 35: Preparación de la muestra bacteriana

para la prueba de aglutinación.
111
S.a...
r~lol6gko
Antlf;Uf'JO
/
/ CJ o 1 L'>c;c//
Se utilizaron los antígenos O (somático) y el
H (flagelar).
GRÁFICO N°9: Representación de la prueba

de aglutinación.
Fuente: (67)
.,. ~.· .· . .· ·. ·. Jtl!

l.··~./
•• •
..
••
·.·I ..
Cada muestra se mezcló con los dos antígenos en una placa rotulada, se dejó
reaccionar y se observo la aglutinación en todas las muestras pero la muestra W4 dio
una aglutinación más vistosa como se aprecia en la figura W36 de lado derecho.
FIGURA N°36: Fotografía de la prueba de aglutinación para la tipificación de

Sa/monella typhi spp.
Una vez confirmada la identificación de las cepas de Salmonella typhi se eligió

la muestra N°4 para cultivarla en un medio selectivo (Wilson Blair (ANEXO N°
11 ) y trabajar la parte antibacteriana con muestras de bacterias fresca.
112
3.8.2.2. Estandarización de la curva de crecimiento de sa/monella typhi
spp.
FUJOGRAMA N°7: estandarización de la curva de crecimiento de

Salmonel/a typhi spp.
Cepas del cultivo inicial de

salmonella typhí spp.
Inocular una azada en Sml

de caldo BH l.
Incubar por 24 horas a 37°C
Colocar 1mi de cultivo

anterior en 99ml de caldo
BHI.
\.
Leer las densidades ópticas

durante los intervalos de
media hora.
\.
Incubar a 37°C durante toda

la prueba.
Graficar la curva de
crecimiento
Fuente: (68).
113
Procedimiento:
Del cultivo inicial de salmone/la typhi spp, se propagó con ayuda de una asa de
siembra un inoculo en 5 mi. de caldo de cultivo BHI por 24 horas a 37°C,
transcurrido ese tiempo se tomó 1 mi de este caldo con bacterias y se traspasó
a un matraz con 99 mi de caldo BHI puro incubándose a 37°C por 24 horas.
La evaluación del crecimiento bacteriano se determinó haciendo lectura de la
densidad óptica del cultivo a una longitud de onda de 670 nm en el
espectrofotómetro con intervalos de media hora. (68).
--,
¡¡ ,,
11: '' ~
;~.-, ____ _
Luego de las 24 h de incubación se tomó Seguidamente se introduce la cubeta en

una alícuota del cultivo de bacterias en el casillero del espectrofotómetro,
las cubetas del espectrofotómetro para previamente encendido y calibrado, y se
su posterior lectura realiza la lectura correspondiente.
FIGURA N°37: Fotografías de la estandarización de la curva de crecimiento.
Fuente: Callo J y Farfán K. E.
114
3.9.2.3 Estandarización de la concentración antibacteriana del concentrado de
Acetogeninas de Annona muricata L. (Masasamba) por el método de difusión
disco en placa.
FUJOGRAMA N°8: Proceso del ensayo de la actividad antibacteriana in

vitro.
Cepas tipificadas de Sembrar un inoculo

salmonella typhi spp. fresco en 5ml de caldo
de un cultivo inicial. BHI.
Preparar placas Incubar a 37oc por 3

estériles con Agar horas.
Mueller Hinton
\.
Sembrar por agotamiento Tomar 0.1 mi de caldo

con asa de Oigraski en BHI con Salmonella
placas con Agar Mueller typhi spp.
Hinton.
Colocar los discos de

Incubar durante 0.5 hora
a3rc. :>
l ......
sensibilidad
con
preparados
Acetogeninas a
diferentes concentraciones.
Medir halos de inhibición, Incubar a 3rC por 24

análisis y discusión de horas.
resultados.
Fuente: Elaboración Propia.
115
Prueba piloto.
La prueba piloto se realizó para determinar las concentraciones máxima y
mínima del concentrado de Acetogeninas de Annona muricata L. obtenida a
partir del extracto etanólico, para la bacteria Salmonella typhi spp. Con la
finalidad de realizar una estandarización de las concentraciones
antibacterianas. Para este ensayo se utilizaron diferentes concentraciones de
Acetogeninas; los cuales se presentan a continuación.
TABLA N°11: Concentraciones usadas en las pruebas piloto

Concentraciones para la actividad antibacteriana in vitro de
Acetogeninas en (mg/disco)
5 10 15 20 30 40 50 60 70 80
Concentraciones para la actividad antibacteriana in vitro de

Acetogeninas en (mg/disco)
90 100 150 200 250 300 350 400 450 500
Fuente: datos expenmentales.
Donde:
mg: miligramos
./ Preparación de los discos de sensibilidad.
Para la preparación de discos de sensibilidad, se procedió a disolver diferentes

concentraciones del concentrado de Acetogeninas de Annona muricata L.
(Masasamba), obtenida a partir de extracto etanólico en 100 ¡..JI. de
dimetilsufoxido, con la ayuda de una jeringa de tuberculina, se aplicó las
diferentes disoluciones en discos de papel filtro blanco de 0.6mm. de espesor y
6mm. de diámetro, se llevó a secar a 40°C en una estufa y se almacenaron en
recipientes estériles hasta el momento de su análisis.
116
La flecha señala las diferentes
soluciones de Acetogeninas
preparadas a diferentes
concentraciones que van desde
Smg hasta SOOmg. Estas
concentraciones fueron inyectadas
cuidadosamente a cada disco de
sensibilidad con la ayuda de una
jeringa de tuberculina. Los discos
una vez inyectados de las
concentraciones fueron secados
en una estufa a 40°C.
La figura W38 muestra los discos de

sensibilidad preparados con
Acetogeninas secos y rotulados y
almacenados en frascos de vidrio
estériles. Los discos secos preparados
con las diferentes concentraciones de
Acetogeninas fuerón almacenados
~1 bajo sombra y a temperatura
ambiente hasta el momento del
•:lo ,, j
análisis del efecto antibacteriano.
FIGURA N°38: Fotografías de la obtención de discos de sensibilidad a

diferentes concentraciones de Acetogeninas.
./ Procedimiento de la prueba piloto.

El efecto antibacteriano se demostró utilizando una ·modificación del método de
difusión en placas de agar; el procedimiento originalmente descrito por Bauer y
colaboradores. (35)
Primero se inoculó en tubos de caldo BHI una colonia fresca de la bacteria
Salmonella typhi spp. y se incubaron a 37°C. durante 3 horas según el
117
crecimiento de la bacteria hasta lograr su fase exponencial y dar turbidez en el
caldo BHI.
Luego esta suspensión estandarizada se sembró por inundación en la
superficie de placas que contiene agar Mueller Hinton (ANEXO N° 11) con
asas de Digraski estériles y atáxicos, el cultivo se dejó secar durante 30
minutos en la incubadora a 37°C, posteriormente con una pinza estéril se
colocaron los discos de sensibilidad impregnados con la solución de las
diferentes concentraciones de Acetogeninas, se realizó una ligera presión en
los discos para garantizar el contacto con el agar y se llevó a incubar a 37°C
durante 24 horas.
Se sembró un inoculo de Las placas se llevaron a incubar

bacterias del caldo BHI (0.1ml). a 3rc por un periodo de
en placas con agar Mueller tiempo de 30m in.
Hinton (anexo Nº 11) con la
avuda de una asa de Digraski.
FIGURA N°39: fotografías de la prueba de sensibilidad bacteriana en la

prueba piloto.
118
\
La adición de discos de sensibilidad a las
placas con agar Mueller Hinton (anexo
Nº 11) se realizo con la ayuda de una
pinza estéril.
GRÁFICO N°10: representación grafica de la adición

de discos en el agar Mueller Hinton.
Fuente: (67)
Placas impregnadas con discos de sensibilidad de las

diferentes concentraciones de Acetogeninas. Se
llevarán a incubar a 3rc durante 24h.
FIGURA N°40: Fotografia: placa de agar Mueller Hinton con discos

de sensibilidad de diferentes concentraciones de
Acetogeninas.
119
Pasada las 24 horas se observó qué concentración de Acetogeninas produjo
inhibición del crecimiento bacteriano, para que a partir de ella se estandaricen
las concentraciones.
Los discos con concentraciones de 5, A partir de la concentración de

10,15,20,30,40, 50,60, 70,80 y 90mg 100 mg hasta la concentración de
de Acetogeninas no presentaron 500mg se observaron halos de
halos de inhibición sobre Salmonella inhibición sobre Salmonella typhi
tvohi soo. 500.
FIGURA N°41: Fotografía de los halos de inhibición obtenidas en la prueba

piloto.
Estandarización de la concentración antibacteriana.

Las concentraciones se determinaron hallando el factor de incremento de la
bacteria en estudio, teniendo en cuenta las concentraciones máxima y mínima
que serán obtenidas de la prueba piloto, así:
P=
Donde:
F= factor de incremento
1= concentración máxima
Concentración mínima
r = N-1 numero de dosis en la serie logarítmica.
N = n° de concentraciones con las que se trabajo
120
Para determinar las concentraciones con las que se trabajó se procedió de la
siguiente manera:
TABLA N°12: Determinación de las concentraciones estandarizadas para

el ensayo de la actividad antibacteriana de Acetogeninas aisladas de
semillas de Annona muricata L. (Masasamba).
OPERACION N° DE CONCENTRACION
Concentración mínima Concentración 1
Concentración 1 x F Concentración 2
Concentración 2 x F Concentración 3
concentración 3 x F Concentración 4
concentración máxima Concentración 8
Fuente: datos experimentales
Una vez calculadas las concentraciones estandarizadas se elaboraron discos

con estas concentraciones de Acetogeninas. Para la determinación del efecto
antibacteriano con estas concentraciones se realizaron los mismos
procedimientos como en la prueba piloto.
Los halos se midieron con

ayuda de una regla
milimetrada, se considero todo
el diámetro del hallo de
inhibición, la fotografía
muestra los halos de inhibición
generados por Acetogeninas
sobre Salmonella typhi spp. en
placas con agar Mueller Hinton
(anexo Nº11)
FIGURA N°42: Fotografía de los halos de inhibición producidos por las diferentes
concentraciones de Acetogeninas sobre Salmonel/a typhi spp.

121
Ensayo con el fármaco patrón.
Para el ensayo se utilizó un agente antibacteriano de acción bactericida y de
efecto rápido denominado Ciprofloxacino. En este caso se usaron discos de de
sensibilidad de Ciprofloxacino 5ug.
A lado derecho la flecha nos señala el halo generado por el

disco de ciprofloxacino. Al lado izquierdo se aprecia el
disco del grupo control negativo correspondiente a
dimetilsulfoxido la cual no género halo de inhibición por lo
f111P nn ;:¡fprtn PI rrPrimiPntn h;:¡rtPri;:¡nn
FIGURA N°43: Fotografía del halo de inhibición generado por el grupo

control positivo (ciprofloxaciono 5J.1g) y grupo control
negativo .(dimetilsulfoxido) sobre Salmonella typhi spp.

CAPITULO IV
4. ANÁLISIS Y DISCUSIÓN DE LOS RESULTADOS
PRIMERA PARTE
4.1. RESULTADOS DEL ESTUDIO FITOQUÍMICO
4.1.1. DETERMINACIÓN DEL PORCENTAJE DE HUMEDAD DE LAS

SEMILLAS DE Annona muricata L. (Masasamba).
Se obtuvieron los siguientes resultados.
TABLA N°13: Determinación del porcentaje de humedad.
NÚMERO DE PESO DE LA PESO DE LA PORCENTAJE

DETERMINACIONES MUESTRA MUESTRA DE HUMEDAD
FRESCA SECA
1 8.6 g 2.9 g 66.28%

2 8.6 g 2.8 g 67.44%
3 8.6 g 2.8 g 67.44%
PROMEDIO 67.05%
Fuente: datos experimentales
Dónde:
g= gramos
Análisis y discusión.
El proceso de deshidratación, permite disminuir el agua libre presente en la
muestra vegetal, el proceso de secado es muy importante porque interrumpe
los procesos de degradación metabólicos catalizados por enzimas y alteración
de metabolitos presentes en la muestra vegetal.
El porcentaje de humedad promedio obtenido para las semillas de Annona
muricata L. (Masasamba), fue de 67.05%. Como se puede observar, presentó
un alto porcentaje de humedad, por lo tanto el secado y la conservación de
esta especie vegetal es dificultosa e importante, y la hace· propensa a que se
produzcan reacciones de hidrólisis, oxidación o deshidrogenación y
condensación o polimerización. De esta manera las semillas de la especie
123
vegetal corren el riesgo de sufrir diversas contaminaciones por bacterias y
hongos en especial por estas últimas ya que proliferan en lugares donde hay
humedad.
Gracias a este dato se pudo tomar las medidas adecuadas y necesarias para
realizar el secado de las semillas de la especie vegetal, y con este
procedimiento se pudo obtener una muestra adecuada para el estudio.
4.1.2. DETERMINACIÓN DEL PORCENTAJE DE EXTRACCIÓN DE LAS

SEMILLAS DE Annona muricata L. (Masasamba).
El porcentaje de extracción por maceración y extracción por decantación, hasta

la obtención de Acetogeninas mostro los siguientes resultados.
TABLA N°14: Porcentaje de extracción de Acetogeninas de las semillas de

Annona muricata L. (Masasamba).
MASA DE MASA($)) %DE MASA (g) %DE

SEMILLAS FRACCION RENDIMIENTO FRACCION RENDIMIENTO
(g) 1 (EtOH) FRACCION 1 2 (CH3CI) FRACCION 2
1116 46.56 4.1720 22.0412 47.34
Fuente: Datos expenmentales.
Donde:
• g =gramos
• EtOH: etanol
• CH3CI: cloroformo.
Análisis y discusión
El porcentaje de extracción de Acetogeninas a partir de semillas de Annona
muricata L. (Masasamba) mediante el método de extracción por solventes de
diferente polaridad es de 47.34%.
Gracias a este resultado se pudo determinar la cantidad de material vegetal
adecuada, para obtener el concentrado de Acetogeninas necesario para la
realización de la presente investigación, además nos facilita información que
permite determinar si la especie vegetal en estudio es buena materia prima o lo
124
contrario. Por el porcentaje de extracción determinado que es de 47.34%
podemos concluir que las semillas de Annona muricata L. presentan un buen
porcentaje de extracción por lo que también se puede concluir que son buena
materia prima.
4.1.3. ANÁLISIS FISICOQUÍMICO DEL CONCENTRADO DE

ACETOGENINAS.
El concentrado de Acetogeninas de Annona muricata L. (Masasamba), fue
sometido a las siguientes pruebas:
4.1.3.1. Características organolépticas:

Las características del concentrado de Acetogeninas de Annona muricata L.
(Masasamba), son las siguientes:
TABLA N°15: Resultados de las caracteñsticas organolépticas del

concentrado de Acetogeninas de Annona muricata L. (Masasamba).
ASPECTO :Oleoso
COLOR : Café acaramelado
OLOR : Ligeramente aromático
SABOR : Ligeramente dulce
Fuente: datos experimentales.
125
4.1.3.2. Pruebas de solubilidad de las Acetogeninas de las semillas de
Annona muricata L. (Masasamba).
Para las pruebas de solubilidad de las Acetogeninas se utilizó diferentes
solventes de diferente polaridad, obteniéndose los siguientes resultados.
TABLA N°16: Resultados de la pruebas de solubilidad de las

Acetogeninas de las semillas de Annona muricata L. (Masasamba).
SOLVENTE GRADO DE SOLUBILIDAD
Agua ( H20) ++
Acetonitrilo +++
Metanol +++
Etanol70% +++
Etanol96% +++
Acetona +++
Acido acético +++
Acetato de etilo +++
Cloroformo +++
Eter di etílico ++
Hexano
-
Fuente: Datos experimentales
Donde:
• +++ : totalmente soluble
• ++ : parcialmente soluble
• + : poco soluble
• - : insoluble.
126
La tabla N°16 muestra los resultados de la prueba de solubilidad de las
Acetogeninas presentes en las semillas de Annona muricata L. (Masasamba)
frente a diferentes solventes de polaridad decreciente. Se observa que las
Acetogeninas son parcialmente soluble en Agua y en éter dietílico,
completamente solubles en metano!, etanol 70%, etanol 96%, acetona, ácido
acético, acetato de etilo y cloroformo. Mientras que en hexano es
completamente insoluble. Según estos resultados las Acetogeninas presentes
en las semillas de Annona muricata L. (Masasamba), tienen una naturaleza
medianamente polar.
Se realizó una prueba de solubilidad adicional con dimetilsulfoxido, ya que en
uno de los ensayos biológicos fue usado como solvente para el concentrado de
Acetogeninas dando como resultado completamente soluble.
4.1.3.3. Análisis cromatográfico:

Cromatografía en capa fina
La cromatografía en capa fina se realizó como un análisis preliminar con la

finalidad de identificar, caracterizar o determinar semicuantitativamente los
componentes Acetogénicos presentes en el concentrado de Acetogeninas
obtenido a partir de semillas de Annona muricata L. (Masasamba).
Se llevó a cabo la caracterización química de las Acetogeninas en placas
cromatográficas de Silicagel obtenidas a partir de semillas de Annona muricata
L. (Masasamba), utilizando un revelador universal y específico para
Acetogeninas como es el reactivo de Kedde en aerosol.
Reactivo Kedde: Conformado por:

Fracción A: solución al 2% (p/v) de ácido 3,5-dinitrobenzoico en etanol.
Fracción 8: hidróxido de potasio (KOH) al 6% en etanol. Obteniéndose el
siguiente resultado:
Análisis y discusión:
En el anexo N° 15 (fotografía N° 2) se puede apreciar una coloración de rosa

sobre la placa de Silicagel usada en el análisis cromatográfico en capa delgada
127
la cual nos indica resultado positivo para Acetogeninas y se delata la presencia
en la muestra de una molécula con un resto y - lactónico. Este análisis
preliminar nos lleva a deducir cualitativamente que la muestra en estudio
Annona murícata L. (Masasamba), si presenta Acetogeninas la cual es de
nuestro interés para desarrollar los objetivos de la presente investigación. En
este análisis no fue posible identificar las Acetogeninas por sus Rf, pues la
aparición de manchas continúas muestra la alta complejidad de estas
sustancias y la posible existencia de Acetogeninas isoméricas de diversas
polaridades.
Cromatografía de líquidos de alta resolución (HPLC).

Para este análisis no se utilizaron estándares la comparación se realizó por
referencias bibliográficas de estudios realizados por organismos
internacionales.
128
UAU: A, :ll;g•;t;AI,.!I P!•l•utl • ..-.~.:. ror-..H::.fUNA!:IACc tO-Ut:NIN ... t:t_.tJ 1
f.t;sin't.
~'1!ll!l.'i
·.•lú
·.. 2D
1 I)U-
iíil-
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o'JÚ
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j ,~~-":;,h·...-1l j :iiil -:l!::if:l~. .;uoliJ~
..:zo
~-----------~
11 .;, ~(¡ :o! U '11.1 ~1 tf
.. - 1
FIGURA N°44: Cromatograma del concentrado de Acetogeninas.

129
En la figura N°44, se muestra el cromatograma realizado para las
Acetogeninas obtenidas de extractos etanólicos a partir de semillas de Annona
muricata L. (Masasamba) se puede observar la presencia de 32 compuestos,
de los cuales posiblemente solo 8 corresponden a Acetogeninas de Annona
muricata L. (Masasamba) teniendo en cuenta el rango de los espectros UV en
el cual se absorben Acetogeninas de Annonaceae al revisar estudios ya
realizados basados en los espectros UV de estas sustancias. Las señales que
se detectan en longitudes de onda entre 254nm y 280nm, corresponden a
compuestos como: alcaloides bencilisoquinolínicos 225-280nm, flavonoides
entre 240nm a 285nm, fenoles a 270nm entre otros; y por eso no se tendrán en
cuenta para realizar la cuantificación. Tomándose en cuenta los compuestos
que presentan longitudes de onda entre 200nm+/- 15nm según bibliografía.
(53)(56)
TABLA N°17: Resultados del cromatograma del concentrado de
Acetogeninas.
PICO TIEMPO -DE RETENCION (A)MAXIMO %AREA

(m in)
11 9.104 201 1.2107
18 17.625 205 7.2367
19 18.469 202 2.2883
24 24.985 210 43.1206
26 28.966 211 6.9241
27 30.600 210 2.2712
28 35.721 200 0.9546
30 53.471 203 0.5279
Fuente: datos e~penmentales.
130
En la tabla N°17 se muestran valores de los criterios que se toman en cuenta
en el análisis por cromatografía de líquidos de alta resolución (HPLC). Este
ensayo se fundamentó en el tiempo de retención de algunos componentes
mediante un detector DAD; luego mediante estándares conocidos se determinó
la composición cuali-cuanti centesimal de ocho posibles Acetogeninas.
El cromatograma del análisis por HPLC demostró la presencia de 32
compuestos, los 32 compuestos mostraron picos que fueron analizados uno a
uno para determinar su UV máximo, es decir el rango del espectro UV en el
que son absorbidos y tiempos de retención. Posterior al análisis realizado de
todos los picos se llegó a la conclusión de que solo ocho corresponden
posiblemente a Acetogeninas de Annona muricata L. (Masasamba) teniendo en
cuenta el rango de los espectros UV en el cual se absorben las Acetogeninas
de Annonaceae. De esto decimos que el concentrado de Acetogeninas
obtenidas a partir de semillas de Annona muricata L. (Masasamba) se
encuentran posiblemente ocho Acetogeninas, las cuales por sus valores UV
máximos y tiempos de retención podrían ser las que a continuación se
muestran en la tabla:
TABLA N°18: Resultados del análisis del cromatograma visualizando

posibles Acetogeninas.
TIEMPO DE A. MAX. POSIBLE ACETOGENINA o/oAREA

PICO RETENCIÓN (MIN)
11 9.104 201 12, 15, cis-squamostatin 1.2107

18 17.625 205 Squamostatin A 7.2367
19 18.469 202 Bullatacina 2.2883
24 24.985 210 Squamostatin D 43.1206
26 28.966 211 Squamocina 6.9241
27 30.600 210 lso-desacetiluvaricina 2.2712
28 35.721 200 Asimicina. 0.9546
30 53.471 203 Desacetiluvaricina. 0.5279
Fuente: (63),(69),(70),(71),(72),(73),(74),(75),(76),(77),(78).
131
El análisis cualitativo de los principales componentes y porcentajes del
concentrado de Acetogeninas de Annona murícata L. (Masasamba) se muestra
en la tabla N° 18, en el que ocho componentes fueron estudiados e
identificados por comparación de espectros con los datos de biblioteca
(lnternational Journal of Biomedical Science) y por la combinación de los datos
de espectros de masas y los índices de retención.
En el estudio comparativo realizado se llegó a determinar que posiblemente
Squamostatin D es el componente principal del concentrado de Acetogeninas
de Annona murícata L. (43.1206%); Squamostatin A (7.2367%); Squamocina
(6.9241 %); Bullatacina (2.2883%) , lso-desacetiluvaricina (2.2712%), Asimicina
(0.9546%) y Desacetiluvaricina (0.5279%) en menor proporción, los que
representan el 64.5341% del total del concentrado de Acetogeninas de Annona
murícata L. y el 35.4659% restante representa a las sustancias no identificadas
por la base de datos.
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FIGURA N°45: Espectros UV en 30 del concentrado de Acetogeninas

(vista frontal)
Fuente: Datos experimentales.
132
FIGRURA N°46: Espectros UV en 30 del concentrado de Acetogeninas
(vista desde otro ángulo).
133
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SEGUNDA PARTE
4.2 RESUL TACOS DE LA DETERMINACIÓN DEL EFECTO INSECTICIDA
DE LAS ACETOGENINAS DE Annona muricata L. (Masasamba) FRENTE A
LARVAS DE Aedes aegypti.
La administración de las diferentes concentraciones de Acetogeninas
asignadas a los diferentes grupos conformados (cada grupo conformado por 1O
larvas de Aedes aegyptí) provocó la muerte de todos los individuos de
experimentación a diferentes tiempos proporcionalmente a la concentración de
la solución de Acetogeninas sometidas.
4.2.1 OBSERVACIONES EN EL ANÁLISIS.

Se hicieron dos observaciones en la especie insectil como criterios de análisis
del efecto de las Acetogeninas sobre estas; las cuales fueron:
1. Coloración adquirida por las larvas de Aedes aegypti por contacto con la
solución de Acetogeninas de Annona murícata L. (Masasamba).
2. Movimiento de la especie insectil de cada grupo (grupo 1, grupo 11, grupo 111,
grupo IV, grupo V) en cada hora de observación. Este criterio es considerado
el más importante ya que mediante ella se logró determinar la mortalidad de
la especie insectil en estudio. El criterio consiste en que las larvas de Aedes
aegyptí se consideran muertas cuando no reaccionan al momento de ser
tocadas con un puntero romo en la región cervical lo cual se ve reflejada en
su movimiento como respuesta al estímulo recibido.
137
Observación N° 1 :
El criterio número 1 fue observado con la ayuda de una lupa para todos los
grupos de experimentación.
larva de Aedes aegypti antes de larva de Aedes aegypti después

ser expuesto a Acetogeninas. de ser expuesto a Acetogeninas.
Las larvas normales presentan Después de someterlas a la

él cuerpo arqueado, son soluciones de Acetogeninas las
semitransparentes y tienen la larvas se rigidizan, la cabeza se
cabeza pegada al tórax. separa del tórax y la infección
por la sustancia ennegrece su
cuerpo.
FIGURA N°48: Fotografía: diferencias en coloración de larvas de

Aedes aegypti adquirida por contacto con
solución de Acetogeninas.
La figura N° 53 muestra la observación número 1 como un criterio de análisis

de la presente investigación, la cual se observó progresivamente en cada grupo
de larvas que fueron sometidos a diferentes concentraciones de solución de
Acetogeninas.
138
Observación N° 2:
La observación número 2 fue realizada a cada hora con la ayuda de un puntero
romo en todos los grupos de experimentación. Esta observación fue
considerada el de mayor interés puesto que mediante este criterio se pudo
determinar la mortalidad de la especie insectil en estudio. Los resultados se
muestran a continuación en la siguiente tabla:
TABLA N°19: Movimiento de larvas en cada grupo experimental por cada
hora de observación.
MOVIMIENTO DE LARVAS
Grupo 1 Grupo 11 Grupo 111 Grupo IV Grupo V Grupo VI

T
A B e A B e A B e A B e A B e A B e
1 * + * + + + + + + + + + * * * + + +
2 * * * + + + + + + + + + * * * + + +
3 * * * + + + + + + + + + * * * + + +
4 * * * * * + + + + + + + * * * + + +
5 * * * * * * + + + + + + * * * + + +
6 * * * * * * + + + + + + * * * + + +
7 * ** * * * * + + + + + + ** ** "'* + + +
8 *"' "'* "'"' "' "' "' * * + + + + *"' *"' "'"' + + +
9 *"' "'* "'"' * * "' * "' "' + + + "'* *"' "'* + + +
10 *"' ** "'"' * "' * "' * "' * "' "' "'* "'* *"' + + +
11 ** "'* ** * *"' * "' "' "' "' "' + + +
"' - - -
12 "'* *"' *"' "' *"' *"' "' "' "' "' "' "' + + +
13 *"' "'* *"' "'* *"' "'"' * * * * * * + + +
14 - ** ** ** * * * * * * + + +
- -
15 ** ** ** * * * * * * + + +
16 ** ** ** * * * * * * + + +
17 ** ** * ** * * * + + +
- -
18 ** ** ** * * * + + +
-
19 ** ** ** * * "' + + +
20 ** ** ** * * * + + +
.
S1gue ....
139
Continuación de tabla N°19:
MOVIMIENTO DE LARVAS

T
21 ** ** ** * * * + + +
22 ** ** ** * * * + + +
23 ** ** ** * * * + + +
24 ** ** ** * * * + + +
25 ** ** ** * * * + + +
26 ** ** ** * * * + + +
27 ** ** ** * * * + + +
28 ** ** ** * * * + + +
29 ** ** ** * * * + + +
30 ** ** ** * * * + + +
31 ** ** ** * * * + + +
32 ** ** ** ** * ** + + +
33 ** ** ** ** ** ** + + +
34 ** ** ** ** ** ** + + +
35 ** ** ** ** ** ** + + +
36 ** - ** ** ** ** + + +
37 - - ** ** ** + + +
38 ** ** ** + + +
39 ** ** ** + + +
40 ** ** ** + + +
41 ** ** ** + + +
42 ** ** - + + +
43 - - + + +
Fuente: Datos expenmentates.
Donde:
+:Movimiento normal.
*:Movimiento lento.
**:Movimiento muy lento.
_:No existe movimiento (larvas muertas).
T: Tiempo en horas,
A, B, e: Subgrupos de cada grupo experimental (cada grupo por triplicado).
140
4.2.2 RESULTADOS GENERALES DEL EFECTO INSECTICIDA
TABLA N°20: Resultados de la actividad insecticida en los diferentes

grupos de experimentación.
NUMERO DE LARVAS MUERTAS POR CADA HORA DE EXPOSICION A
ACETOGENINAS A DIFERENTES CONCENTRACIONES.

T
A 8 e A 8 e A 8 e A 8 e A 8 e A 8 e
1 1
2 2 3 3
3 2 2 3 2
4 3 1 3 4 4 3
5 3 5 4 4
6 2 4 5 5 5
7 4 5 3 3 6 6 6
8 7 8 6 7 7 7
9 7 4 5 7 8 8 8
10 8 9 7 9 9 9
11 9 8 8 8 10 10 10
12 9 5
13 6
14 10 10 10 7 1
15 8 9 9
16 9
17 10 10 1
18 10 1 2 1
19
20 2
21 2 3
22 3
23
Sigue ....
141
Continuación de la tabla N°20
- ·-
NÚMERO DE LARVAS MUERTAS POR CADA HORA DE EXPOSICIÓN A
ACETOGENINAS CON DIFERENTES CONCENTRACIONES.

T
24 3 4 4 1 1 1
25 2
26 4 5 5 2
27 3
28 6 2
'29 5 3
30 6 7 6 3 4
31 7 4 4
32 7 8 5
33 8 5 5
34 8 9 6
35 9 6 6
36 9 10 7
37 10 10 7 7
38 8
39 8 8
40 9
41 9 9
42 10
43 10 10 a a a
Fuente: Datos experimentales
Donde:
T: tiempo en horas
A, B, C: Subgrupos de cada grupo experimental (cada grupo por triplicado).
a: Adultos.
La tabla N°20 muestra el número de larvas de Aedes aegypti muertas en t9dos

los grupos experimentales a un determinado tiempo que en todos los casos
142
fueron positivos, lo que nos indica que el concentrado de Acetogeninas
obtenidas a partir de extractos etanólicos de semillas de Annona muricata L.
presenta EFECTO INSECTICIDA, a excepción en el grupo VI donde el valor es
aproximadamente cero en el cual las larvas llegaron a completar su ciclo de
vida hasta llegar a ser adultos puesto que en mencionado grupo no se
administró ninguna sustancia y nos sirvió como grupo control negativo la que
nos indica que el tratamiento es neutro al ser comparado con el grupo control
positivo.
Respecto al efecto insecticida de todos los grupos experimentales en
comparación con el insecticida patrón "TEMEFÓS" grupo control positivo se
puede decir que el grupo 1, en el cual la concentración de Acetogeninas
administradas fue de 10.000 ppm, presenta un efecto insecticida parecido al
grupo control positivo teniendo en cuenta el número de larvas que murieron en
un tiempo muy próximo al del grupo control positivo cuya diferencia en horas es
de 3 horas.
El grupo 11 en el cual la concentración de Acetogeninas administradas fue de
5000 ppm, presenta un efecto insecticida medio con respecto al grupo control
positivo teniendo en cuenta el número de larvas que murieron en un tiempo
moderadamente diferente con respecto del grupo control positivo la cual se
diferencia aproximadamente en 6 horas.
El grupo 111 en el cual la concentración de Acetogeninas administradas fue de
500 ppm, se puede observar que el efecto insecticida es baja con respecto al
grupo control positivo teniendo en cuenta el número de larvas que murieron con
respecto del grupo control positivo la cual se diferencia por aproximadamente
en aproximadamente 25 horas.
El grupo IV en el cual la concentración de Acetogeninas administradas fue de
50 ppm, se puede observar que el efecto insecticida es mínima con respecto al
grupo control positivo teniendo en cuenta el número de larvas que murieron con
respecto del grupo control positivo; la cual se diferencia por aproximadamente
en 32 horas.
Estos resultados obtenidos del proceso experimental fueron llevados a análisis

estadístico.
143
4.2.3. ANÁLISIS ESTADÍSTICO DEL EFECTO INSECTICIDA
TABLA N°21: Distribución numérica de las medias de tendencia central y

dispersión de la cantidad de larvas muertas de las diferentes
concentraciones de Acetogeninas, grupo control positivo (Temefós) y
grupo· control negativo (agua) durante las seis primeras horas de
exposición.
95%DE
INTERVALO DE
CONFIANZA
HORADE MEDIA O DESVIACIÓN
CONCENTRACIÓN PARA LA
MEDICIÓN PROMEDIO TÍPICA
MEDIA
LIMITE LIMITE
INF. SUP
10000 ppm 4 1 3,064 4,936
w (/)
5000 ppm 2 2 1,064 2,936
1-co~cn
2
cnw~ 500 ppm o o o o
~:52~ 50 ppm o o
o
o o
o ~ TEMEFOS(1 mg/1 Oml) 5 4,064 5,936
AGUA o o o o
Fuente: F1cha de recolección de datos.
P: 23 +/- 3°C. N° de individuos: 1O larvas/concentración

HR: humedad relativa: 82 +/- 5% N° de ensayos: triplicado/concentración
Donde:
ppm: partes por millón.
mi: mililitro.
La tabla N° 21 representa la distribución de las medias de tendencia central y
de dispersión durante las seis primeras horas del proceso de experimentación
a distintas concentraciones de Acetogeninas así como el grupo control positivo
(Temefós) y grupo control negativo (Agua).
La media para la concentración de 10.000ppm (grupo 1) es de 4, representa el
número de larvas muertas en promedio por cada subgrupo que se formaron
dentro de cada grupo experimental (cada grupo experimental se ensayó por
triplicado).
Para la concentración de 5000ppm la media es de 2 lo cual significa que dentro
de las seis primeras horas el promedio de mortalidad en los subgrupos
experimentales fue de 2 larvas lo cual es menor en comparación del grupo l. La
media para las concentraciones de SOOppm, 50ppm y agua es de cero lo cual
144
significa que no hubo muerte de larvas hasta las seis horas del proceso de
experimentación.
Se aprecia que para el grupo control positivo (grupo V) la media es de 5
durante las seis primeras horas lo cual refleja que el Temefós produjo la mayor
cantidad de muertes en promedio en todos los subgrupos del grupo
experimental durante este intervalo de tiempo.
La desviación típica de la cantidad de larvas muertas en cada grupo
experimental es una medida de dispersión de los datos. En los grupos 1 y 11
(10.000ppm y 5000ppm respectivamente) en las que hubo mortalidad la
desviación típica es de 1 y 2 respectivamente de la cual se interpreta no existió
mucha variabilidad de los datos con respecto a la mortalidad en cada subgrupo
experimental. En los demás grupo experimentales no hubo muertes de ahí el
valor de cero sin embargo en el grupo control positivo también es de cero esto
se explica debido a que en todos los subgrupos el número de larvas muertas
fue constante.
S --------J-----
--------J---------J----------L-----------1
1 1 1 ' 1
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1 ' 1 ' 1
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1 1 1 1 1
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1
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·-------~------·_!!_ ________ J_________._ ---

o -----:--------- : ~ 1 :
10000 ppm 5000 ppm 500 ppm so ppm Temefos 1g/101 agua ·
GRAFICO N°11: Distribución numérica de las medias de tendencia central y

dispersión de la cantidad de larvas muertas de las diferentes concentraciones
de Acetogeninas, grupo control positivo (Temefós) y control negativo (agua)
durante las seis primeras horas de exposición.
Fuente: Ficha de recolección de datos.
El gráfico N° 11 representa la distribución de larvas muertas durante las

primeras seis horas del proceso experimental sometidas a distintas
concentraciones de Acetogeninas así como grupo control positivo y grupo
control negativo. En este gráfico se aprecia la mortalidad de los diferentes
145
grupos experimentales en un tiempo inicial con el número mínimo de larvas que
murieron hasta el efecto máximo así como el número máximo de muertes
durante este periodo de tiempo en todos los grupos de experimentación. En los
grupos donde no se aprecia gráfico de cajas la mortalidad fue de cero así como
para el grupo control positivo en donde fue constante el número de muertes.
TABLA N° 22: Distribución numérica de las medias de tendencia central y

grupo control negativo (agua) durante la séptima a la duodécima horas
de exposición.
95%DE
INTERVALO DE
HORADE MEDIA O DESVIACI6N CONFIANZA PARA
CONCENTRACI6N
MEDICI6N PROMEDIO TIPICA LA MEDIA
LIMITE LIMITE
-
INF. SUP
C'J
10000ppm S 1 4,064 S,936
~
SOOOppm S 2,64 4,064 S,936
SOOppm o o o o
SOpp_m o o o o
.
C'.l
"""'
t-.
TEMEFOS(1 Omg/1 Omi) 5 o 4,064 S,936
AGUA
.'
o o o o
Fuente: F1cha de recolecc10n de datos.
ro: 23 +/- 3°C. N° de individuos: 1o la!Vas/concentración

Dónde:
mi: mililitro.
de dispersión durante la séptima a la duodécima horas del proceso de
experimentación a distintas concentraciones de Acetogeninas así como el
grupo control positivo (Temefós) y grupo control negativo (agua).
La media para la concentración de 1O.OOOppm (grupo 1) es de 5, representa el
. número de larvas muertas en promedio por cada subgrupo formado dentro de
cada grupo experimental (cada grupo experimental se ensayó por triplicado).
146
Para la concentración de 5000ppm la media es de 5 lo cual significa que dentro
de la séptima a la duodécima horas el promedio de mortalidad en los
subgrupos experimentales fue de 5 siendo el periodo de tiempo en el que
murieron mayor número de larvas para esta concentración. La media para las
concentraciones de 500ppm, 50ppm y agua es de cero lo cual significa que
hasta este momento no hubo muertes de larvas para estos grupos.
Para el grupo control positivo (grupo V) la media es de 5 durante este periodo
de tiempo lo cual refleja que el Temefós mantiene constante el número de
larvas que mata en comparación con los demás grupos experimentales y sigue
siendo el grupo que produce el mayor número de muertes de larvas en
comparación con los demás grupos experimentales.
Con respecto a la desviación típica para los grupos 1 y 11 (1 O.OOOppm y
5000ppm respectivamente), grupos donde existen muertes el valor es de 1 y
2.64 respectivamente la cual se interpreta como la existencia de una mínima
variación de los datos con respecto al número de muertes en cada subgrupo
experimental. En los grupos experimentales 111, IV y VI no hubo muertes de ahí
que el valor es de cero; sin embargo el grupo control positivo tiene una
desviación típica de cero esto se explica debido a que en todos los subgrupos
el número de larvas muertas es constante en este grupo experimental.
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1
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1
1
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10000 ppm 5000 ppm 500 ppm SO ppm Temefo& 1g/.101 agua
GRÁFICO N°12: Distribución numérica de las medias de tendencia

central y dispersión de la cantidad de larvas muertas de las diferentes
concentraciones de Acetogeninas, grupo blanco y control durante la
séptima a la duodécima horas de exposición.
147
El gráfico N° 12 representa la distribución de larvas muertas durante la séptima
a la duodécima horas del proceso experimental sometidas a distintas
concentraciones de Acetogeninas así como grupo control positivo y grupo
control negativo. En este grafico se aprecia la mortalidad de los diferentes
grupos experimentales en un tiempo inicial con el número mínimo de larvas que
murieron hasta el efecto máximo y el número máximo de muertes durante este
periodo de tiempo en todos los grupos experimentales. En los grupos donde no
se aprecian grafico de cajas la mortalidad fue de cero; sin embargo en el grupo
control positivo (Temefós) no se aprecia un gráfico de cajas puesto que la
mortalidad fue constante razón por la cual el valor de la media es de 5.

trigésima a la decimoctava horas de exposición.
95% DE INTERVALO
DE CONFIANZA PARA
HORADE MEDIAD DESVIACIÓN
CONCENTRACIÓN LA MEDIA
LIMITE LIMITE
INF. SUP
V) 10000ppm 1 o 0,64 1,936
~ SOOOppm 3 1,73 2,064 3,936
~ SOOppm 1 o 0,64 1,936
co
'1""1
SOppm o o o o
c.; TEMEFOS(1mgj10ml) ~ ~ ~ ~
'1""1
AGUA 0,33 0,577 0,0602 1,269
T0 : 23 +/~ 3°C. N° de individuos: 1o larvas/concentración

HR: humedad relativa: 82 +/~ 5% N° de ensayos: triplicado/concentración
Dónde:
mi: mililitro.

de dispersión durante la trigésima a la decimoctava horas de exposición a las
distintas concentraciones de Acetogeninas así como para el grupo control
positivo (Temefós) y grupo control negativo (agua).
148
La media para la concentración de 1O.OOOppm (grupo 1) es de 1, Para la
concentración de SOOOppm la media es de 3 lo cual significa que dentro de la
trigésima a la decimoctava horas el promedio del número de larvas muertas en
los subgrupos experimentales fue de 3 larvas. La media para la concentración
de SOOppm es de 1 es decir que en todos los subgrupos de este grupo
experimental el promedio del número de larvas muertas es de 1 larva, así como
también se puede deducir que en este periodo de tiempo empezó la muerte de
larvas evidenciándose con el valor de la media. La media para la
concentración de 50ppm sigue siendo igual a cero de la que afirmamos que no
existen muertes.
En el grupo experimental control negativo (grupo VI) se observó un valor de la
media de 0.33 para este intervalo de tiempo, valor numérico que representa la
muerte de una larva en uno de los subgrupos de todo el grupo experimental, la
cual es irracional y sin lógica puesto que el grupo control negativo (grupo VI) no
fue sometido a ninguna sustancia, por lo que se presume que la muerte sea por
algún factor externo (condiciones del medio ambiente, alimentación, estrés etc.)
que pudo haber afectado las condiciones de supervivencia de la larva. Este
valor de 0.33 para la media en este intervalo de tiempo fue despreciado y
considerado un acontecimiento casual, puesto que los demás individuos de
experimentación perteneciente al mismo grupo experimental no murieron y en
condiciones óptimas con un movimiento normal.
Se aprecia que para el grupo control positivo (grupo V) la media no está
representada por un valor numérico esto se explica a que en este periodo de
tiempo en este grupo ya no existen larvas vivas ya todos murieron en el
anterior periodo de tiempo.
149
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10000 ppm 5000 ppm soo ppm SOppm agua
GRAFICO N°13: Distribución numérica de las medias de tendencia

central y dispersión de la cantidad de larvas muertas de las diferentes
concentraciones de Acetogeninas y grupo control negativo (agua)
durante la trigésima a la decimoctava horas de exposición.
Fuente: Ficha de datos experimentales.
El gráfico N° 13 representa la distribución de larvas muertas durante la

trigésima a la decimoctava horas del proceso experimental sometidas a
distintas concentraciones de Acetogeninas y grupo control negativo. En este
gráfico se aprecian que los grupos experimentales sometidos a una
concentración de 1O.OOOppm y SOOppm de Acetogeninas el número de larvas
muertas se mantiene constante, mientras que para el grupo control negativo se
aprecia un gráfico de caja en un tiempo inicial con el número mínimo de larvas
que murieron hasta el efecto máximo y el número máximo de muertes y una
media de 0.333. El grupo control positivo no figura en este gráfico debido a que
para este periodo de tiempo ya no existen larvas vivas.
150
grupo control negativo (agua) durante la decimonovena a la
vigesimocuarta horas de exposición.
95% DE INTERVALO
DE CONFIANZA PARA
CONCENTRACIÓN LAMED/A
LIMITE LIMITE
JNF. SUP
~ 10000ppm - - - -
~ 5000ppm - - - -
~ 500ppm 2,667 0,57 1,731 3,602
~ 50ppm 1 0,57 0,64 1,936
~ TEMEFOS(1mgj10ml) - - - -
Q\
"'"" AGUA o o o o
Fuente: Ftcha de recolecctón de datos.
T0 : 23 +/- 3°C. N° de individuos: 1o larvas/concentración

Donde:
mi: mililitro.

de dispersión durante la decimonovena a la vigesimocuarta horas de
exposición a las distintas concentraciones de Acetogeninas, grupo control
positivo (Temefós) y grupo control negativo (agua).
La media para la el grupo experimental sometida a una concentración de
Acetogeninas de 500ppm (grupo 111) es de 2.667, es decir que dentro de la
decimonovena a la vigesimocuarta horas el promedio del número de larvas
muertas en los subgrupos experimentales fue de aproximadamente 3 larvas,
valor que aumento considerablemente con respecto al anterior período de
tiempo. Las concentraciones de 1O.OOOppm, 5000ppm y grupo control positivo
(Temefós) las medias no están representadas por un valor numérico esto se
explica a que en este período de tiempo en estos grupos ya no existen larvas
vivas ya todas murieron en el período de tiempo anterior.
151
En el grupo experimental control negativo (grupo VI) se observa que el valor de
la media es de O valor numérico que representa que todas las larvas en
experimentación están vivas.
3,0
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500 ppm so ppm agua
GRAFICO N°14: Distribución numérica de las medias de tendencia

central y dispersión de la cantidad de larvas muertas de las
diferentes concentraciones de Acetogeninas, grupo control negativo
(agua) durante la decimonovena a la vigesimocuarta horas de
exposición.
El gráfico N° 14 representa la distribución de larvas muertas durante

decimonovena a la vigesimocuarta horas del proceso experimental sometidas
a distintas concentraciones de Acetogeninas y grupo control negativo. En este
gráfico se aprecia que el grupo experimental sometido a una concentración de
Acetogeninas de 500ppm el número de larvas muertas es variable en cada
subgrupo donde el número de individuos muertos mínimo es de 2 y el máximo
es de 3 larvas siendo el promedio 2.667, el grupo experimental sometido
50ppm de solución de Acetogeninas el número de larvas muertas es
constante, mientras que en el grupo control negativo no se manifiestan
muertes.
152
grupo control negativo (agua) durante la vigesimoquinta a la trigésima
horas de exposición.
95% DE INTERVALO
DE CONFIANZA PARA
MEDICIÓN PROMEDIO T[PICA
LIMITE LIMITE
INF. SUP
~ 10000ppm - - - -
~ SOOOppm - - - -
~ SOOppm 2,667 0,57 1,731 3,602
Q
C't)
SOppm 2,333 0,57 1,398 3,269
~' TEMEFOS(1mgj10ml) - - - -
~
AGUA o o o o
Fuente: F1cha de recolecc1ón de datos.
T0 : 23 +/- 3°C. N° de individuos: 1O larvas/concentración

Dónde:
mi: mililitro.

de dispersión durante la vigesimoquinta a la trigésima horas de exposición a
dos distintas concentraciones de Acetogeninas, grupo control positivo y grupo
control negativo.
La media para el grupo experimental sometido a una concentración de 500ppm
(grupo 111) es de 2.667, valor que se mantiene constante en comparación con el
anterior período de tiempo analizado, de lo cual se deduce que el número de
larvas muertas sigue siendo la misma que en el anterior período de tiempo.
La media para el grupo experimental que fue sometido a una concentración de
50ppm (grüpo IV) es de 2.33, valor nümérico de la cual concluimos que en este
periodo de tiempo el número de larvas muertas aumento.
Las concentraciones de 1O.OOOppm, 5000ppm y grupo control positivo
(Temefós) las medias no están representadas por un valor numérico esto se
153
explica a que en este período de tiempo en estos grupos ya no existen larvas
vivas en experimentación.
En el grupo experimental control negativo (grupo VI) se observa que el valor de
la media es de O valor numérico que representa que todos los individuos de
experimentación están vivas.
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500 ppm 50 ppm agua
GRAFICO N°15: Distribución numérica de las medias de

tendencia central y dispersión de la cantidad de larvas
muertas de las diferentes concentraciones de Acetogeninas y
grupo control negativo (agua) durante la vigesimoquinta a la
trigésima horas de exposición.
El gráfico N° 15 representa la distribución de larvas muertas durante

vigesimoquinta a la trigésima horas del proceso experimental sometidas a dos
grafico de cajas se observa que los grupos experimentales sometidos a
SOOppm y SOppm de solución de Acetogeninas el número de larvas muertas
para ambos grupos se asemejan además que para este periodo de tiempo en
el grupo experimental IV el número de larvas muertas ha aumentado. El grupo
control positivo se mantiene constante.
154
dispersión de la cantidad de larvas muertas a las diferentes
trigésima a la trigésimo sexta horas de exposición.
95% DE INTERVALO
DE CONFIANZA PARA
LIMITE LIMITE
INF. SUP
1:1') 10000ppm - - - -
~ SOOOppm - - - -
~ SOOpp_m 3 0,35 2,064 3,936
\C SOppm 3 1 2,064 3,936
~
• TEMEFOS(1mnL10ml) - - - -
"'~"" AGUA o o o o
Fuente: Frcha de recoleccrón de datos.
P: 23 +/- 3°C. N° de individuos: 1O larvas/concentración

Donde:
mi: mililitro.

de dispersión durante la trigésima a la trigésimo sexta horas de exposición a
distintas concentraciones de Acetogeninas, grupo control positivo y grupo
control negativo.
La media para las concentraciones de 500ppm y 50ppm (grupo 111 y grupo IV
respectivamente) son de 3, es decir que dentro de la trigésima a la trigésimo
sexta horas el promedio del número de larvas muertas en los subgrupos
experimentales fue de 3 larvas, así como también el número de larvas muertas
para ambos grupos experimentales ha ido incrementándose en este período de
tiempo. En el grupo experimental control negativo (grupo VI) se observa que el
valor de la media es de O valor numérico que representa que todos los
individuos de experimentación están vivas.
155
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500 ppm so ppm agua
GRÁFICO N°16: Distribución numérica de las medias de

tendencia central y dispersión de la cantidad de larvas muertas
de las diferentes concentraciones de Acetogeninas, grupo
blanco y control durante la trigésima a la trigésimo sexta horas
de exposición.
El gráfico N° 16 representa la distribución de larvas muertas durante la

trigésima a la trigésimo sexta horas del proceso experimental sometidas a dos
grafico se observa que el grupo experimental sometido a una concentración de
Acetogeninas de 500ppm el número de larvas muertas es constante en todos
los subgrupos experimentales. El grupo experimental sometido a una
concentración de Acetogeninas de 50ppm el número de larvas muertas es
variable en cada subgrupo teniendo como promedio de larvas muertas a 3
larvas, también se observa que en este período de tiempo el número de larvas
muertas aumentó. El grupo control negativo se mantiene constante.
156
dispersión de la cantidad de larvas muertas a las diferentes
grupo control negativo (agua) durante la trigésimo sexta a la
cuadragésimo segunda horas de exposición.
95% DE INTERVALO
DE CONFIANZA PARA
CONCENTRACIÓN LAMED/A
MEDICIÓN PROMEDIO TiPICA
LIMITE LIMITE
INF. SUP
10000ppm - - - -
SOOOppm - - - -
~~ SOOppm 1 0,001 0,64 2,146
t.:.. o
co.,::: SOppm 3,667 0,577 2,731 4,602
TEMEFOS(1 mn/1 Oml)_ - - - -
AGUA
o'
o o o o
Fuente: Frcha de recoleccron de datos.
T0 : 23 +/- 3°C. N° de individuos: 1O larvas/concentración

Dónde:
mi: mililitro.

de dispersión durante la trigésimo sexta a la cuadragésimosegunda horas de
exposición a distintas concentraciones de Acetogeninas grupo control positivo y
grupo control negativo.
La media para la concentración de 500ppm es 1, valor numérico que disminuyó
con respecto al tiempo, es decir que dentro de la trigésimo sexta a la
cuadragésimo segunda horas el promedio del número de larvas muertas en los
subgrupos experimentales fue de 1 larva; esto se explica debido a que en este
período de tiempo el número de larvas muertas se encuentran cercanas a
completar el total de larvas en experimentación en todos los subgrupos
pertenecientes a este grupo experimental. La media para la concentración de
50ppm es 3.667 valor numérico que muestra un incremento lo cual nos lleva a
concluir que en este periodo de tiempo el número de larvas muertas ha sido
mayor en este grupo experimental. En el grupo experimental control negativo
157
(grupo VI) se observa que el valor de la media es de O valor numérico que
representa que todos los individuos de experimentación están vivas.
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500 ppm 50 ppm agua
GRÁFICO N°17: Distribución numérica de las medias de

tendencia central y dispersión de la cantidad de larvas
muertas de las diferentes concentraciones de
Acetogeninas, grupo blanco y control durante la trigésimo
sexta a la cuadragésimosegunda horas de exposición.
El gráfico N° 17 representa la distribución de larvas muertas durante trigésimo

sexta a la cuadragésimosegunda horas del proceso experimental sometidas a
dos distintas concentraciones de Acetogeninas y grupo control negativo. En
este grafico se observa que el grupo experimental sometido a una
constante en cada subgrupo y para el grupo experimental sometido a una
variable en cada subgrupo teniendo una media de 3.667 además se observa
que en este período de tiempo el número de muertes aumento. El grupo control
positivo se mantiene constante.
158
TABLA N° 28: Anova factorial (análisis de la varianza factorial) para la
comparación del efecto larvicida de las diferentes concentraciones de
Acetogeninas, grupo control positivo (Temefós) y grupo control negativo
(agua).
SUMATORIA SIGNIFICACIÓN
GRADOS DE
DE ESTADÍSTICO F ASINTÓTICA
LIBERTAD
CUADRADOS (P)_
GRUPOS EN
5 7,036 10,742 0,000
COMPARACIÓN
HORADE LA
5 38,935 59,445 0,000
MEDICIÓN
ERROR 57 0,655 -
Fuente: f1cha de recolecc16n de datos.
TD: 23 +/- 3°C. HR: humedad relativa: 82 +/- S%. P<O.OS
(P): Significancia (sig) donde:
Sig: >0.05, no existe diferencia significativa entre los grupos experimentales.
Sig: :50.05, existe diferencia significativa entre los grupos experimentales.
En la tabla N° 28 se observan los grados de libertad la cual hace referencia a la
cantidad de grupos formados que son 6 (las distintas concentraciones que son
4, además le sumamos el grupo control positivo y grupo control negativo en
total son 6) a esto se le resta una unidad y se tiene los grados de libertad.
En el caso de las horas de medición se formaron 6 grupos menos 1 en total los
grados de libertad son 5, en la segunda y tercera columna tenemos la suma de
cuadrados y el estadístico F de Fisher respectivamente, estos dos valores son
importantes para el cálculo de la significancia asintótica o "p".
En la última columna se observa que la significancia asintótica "p" en ambos
casos tanto para los grupos en comparación (distintas concentraciones), así
como para las distintas horas de medición es p=O.OOO, esto significa que
cuando la p <0.05 se concluye que existen diferencias estadísticamente
significativas al comparar la cantidad de larvas muertas por cada grupo de
medición (distintas concentraciones y distintas horas).
159
TABLA N°29: Prueba post hoc o post test Scheffe para la comparación
del efecto larvicida de las diferentes concentraciones de Acetogeninas,
grupo control positivo (Temefós) y grupo control negativo (Agua).
INTERVALO DE
CONFIANZA AL 95% PARA
SIGNIFICACIÓN
DIFERENCIA LA DIFERENCIA DE
GRUPOS EN COMPARACIÓN ASINTÓTICA
DEMEDIAS MEDIAS
(P)
LIMITE LIMITE
INFERIOR SUPERIOR
CONCENTRACIÓN A
0,00 1,00 -1,32 1,32
~ SOOOppm
~ CONCENTRACIÓN A
'Q 1,83 0,00 0,71 2,95
ti[ SOOppm
~~
Eo-;c;::,
CONCENTRACIÓN A
1,90 0,00 0,79 3,02
50ppm
~~
~""4
TEMEFOS
-1,67 0,016 -3,14 -0,20
(1m,qj10ml)
8 AGUA (GRUPO
3,29 0,000 2,17 4,40
BLANCO)
CONCENTRACIÓN A
~ 1,83 0,00 0,71 2,95
'Q SOOppm
ti E CONCENTRACIÓN A
~~
~Q
SOppm
1,90 0,00 0,79 3,02
TEMEFOS
~·~ (1mgL10miJ
-1,67 0,016 -3,14 -0,20
~~
AGUA(GRUPO
8 BLANCO)
3,29 0,000 2,17 4,40
CONCENTRACIÓN A
0,07 1,00 -0,80 0,94
~~ SOppm
~ ~ [ TEMEFOS
-3,50 0,000 -4,86 -2,28
~ ~ ~ {1mgj10ml)
'0 AGUA {GRUPO
8ti BLANCO)
1,45 0,000 0,52 2,24
TEMEFOS
CONCENTRA -3,57 0,000 2,28 4,86
(1mn/10ml)
CIÓNASO
AGUA (GRUPO
ppm 1,38 0,000 3,66 6,24
BLANCO)
TEMEFOS AGUA(GRUPO
4,95 0,000 -6,24 -3,66
(1G/10L} BLANCO}
Dónde:
ppm: partes por millón
mi: mililitro.
La presente tabla de post test o post hoc compara cada uno de los grupos
formados simultáneamente, en la primera columna se observa la diferencia de
medias esto significa que se ha restado la media de los grupos experimentales.
Los resultados son diversos en esta diferencia desde cero que significa que las
160
medias son iguales hasta valores positivos como 1,83 lo cual indica que la
media de la concentración mayor fue mayor que las de menor concentración,
también se observa valores negativos, en la segunda columna se observa la
significancia asintótica o p, cuando la p es menor a 0,05 se dice que existe
diferencias estadísticamente significativas de lo contrario no.
En la última columna se observa el intervalo de confianza para la diferencia de
medias su intención consiste en determinar un posible rango de valores o
intervalo, en los que pueda precisarse con una determinada probabilidad que el
valor de un parámetro se encuentra dentro de estos límites.
TABLA N°30: Subconjuntos para la comparación a un nivel de

significancia de 0,05.
SUB CONJUNTO PARA ALFA= 0~05

GRUPOS EN COMPARACIÓN N
1 2 3 4
GRUPO BLANCO (AGUA) 21 O~ OS
CONCENTRACIÓN A SO ppm 21 1,43
CONCENTRACIÓN A 500
21 1,50
ppm
3,33
ppm
9 3,33
ppm
PATRÓN TEMEFOS 9 5,00
Donde:
Sig: >0.05, no existe diferencia significativa entre los grupos experimentales.
Sig: ~0.05, existe diferencia significativa entre los grupos experimentales.
En la tabla N° 30 se observan subconjuntos formados para la comparación a un

nivel de significancia de 0,05, con la finalidad de generar grupos o de agrupar a
los grupos que son similares y de separar a los que son distintos, esto con la
finalidad de que al comparar los grupos experimentales con los demás se
observa que existen diferencias estadísticamente significativas.
161
TERCERA PARTE
4.3. RESULTADOS DEL EFECTO ANTIBACTERIANO.
4.3.1. DEL CONTROL MICROBIOLÓGICO DE LAS ACETOGENINAS
AISLADAS A PARTIR DE EXTRACTOS ETANÓLICOS DE SEMILLAS DE
Annona muricata L. (MasasambaJ.
TABLA N°31: Resultados del control microbiológico de las Acetogeninas

aisladas a partir de extractos etanólicos de semillas de Annona muricata
L. (MasasambaJ.
CRITERIOS BACTERIAS CANTIDAD

PERMISIBLE
CRITERIO IMPERATIVO: la
presencia de este
Salmonella Negativo
microorganismo indica
riesgo elevado, la prueba
debe de resultar negativa.
CRITERIO INDICATIVO DE
HIGIENE: su presencia
Coliformes fecales Negativo
indica la deficiente higiene
del producto y por lo tanto ( Escherichia coli)
puede rechazarse.
CRITERIOS DE ALERTA O
LIMITES CRITICOS: el
• Aerobios mesófilos. Negativo
producto no debe de
exceder los límites ~Hongos y levaduras.
específicos.
Fuente: Datos expenmentales
162
En la tabla N°31 se observan los resultados del control microbiológico realizado
al concentrado de Acetogeninas las que fueron aisladas a partir de extractos
etanólicos de semillas de Annona muricata L. (Masasamba).
Los resultados nos indican que el concentrado de Acetogeninas se encuentra
libre de contaminación por Salmonella, coliformes fecales (Escherichia co/i),
aerobios mesófilos, hongos y levaduras lo que nos permitió seguir con el
desarrollo de la evaluación de la actividad antibacteriana "in vitro"; ya que de
haber resultado positivo en alguno de los controles se detenía la determinación
del efecto antibacteriano porque nos podía dar resultados falsos positivos.
4.3.2. RESULTADOS DE LA CURVA DE CRECIMIENTO DE Sa/monella

typhispp.
TABLA N°32: Resultados de la curva de crecimiento de Salmonella typhi
spp.
TIEMPO (HORAS) ABSORVANCIA (A 670 nm)
o 0.025
1 0.041
1.5 0.079
2 0.179
2.5 0.435
3 0.865
3.5 1.294
4 1.418
4.5 1.444
5 1.452
5.5 1.390
6 1.251

Dónde:
nm: nanómetros.
163
1,6
1,4
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tiempo en horas
··--·-----·----·
GRAFICO N°19: Curva de crecimiento de Salmonella typhi spp

El gráfico N°19 muestra la curva de crecimiento bacteriano de Salmonella typhi
spp, en donde se puede apreciar las 4 fases típicas del crecimiento bacteriano
como son: fase de latencia, fase exponencial, fase estacionaria y fase de
muerte.
En la curva se observa que la fase de latencia o log dura aproximadamente 2
horas y media, lo cual indica que en esta fase las bacterias de Salmonella typhi
spp se estuvieron adaptando. a su nuevo ambiente; la fase exponencial
logarítmica del crecimiento está entre segunda y quinta hora, en esta fase la
bacteria logra adaptarse a su nuevo medio por lo que presenta un crecimiento
exponencial, según Brokc, un inóculo tomado en el punto medio de esta fase
son indicadas para la realización de diferentes estudios; a partir de la quinta
hora la bacteria entra en fase estacionaria; esto debido a que los nutrientes del
medio de cultivo se estaban agotando y además se está desarrollando la
acumulación de desechos metabólicos de la bacteria; la fase de muerte
empieza a partir de sexta hora la que se evidencia por un descenso en las
lecturas.
164
La curva del crecimiento bacteriano de Salmonella typhi spp. se obtuvo
graficando la absorbancia vs tiempo con los datos que se obtuvieron en el
ensayo realizado.
Gracias a los resultados de la curva de crecimiento podemos decidir en qué
tiempo es necesario realizar las pruebas se sensibilidad antimicrobiana
tomando como punto de partida la fase logarítmica o de crecimiento
exponencial.
165
4.3.3. DEL ENSAYO DEL EFECTO ANTIBACTERIANO
4.4.3.1. De la prueba piloto
TABLA N° 33: Resultados de los diámetros de los halos de inhibición de la

actividad antibacteriana de las Acetogeninas aisladas a partir de extractos
etanólicos de semillas de Annona muricata L. (Masasamba) obtenidos en
la prueba piloto.
N°de Concentración Diámetro del Halo de inhibición (mm) en cepas de

de
disco
Acetogeninas Salmonella typhi spp.
(mg/disco) IG IIG Promedio
1 5 0.00 0.00 o
2 10 0.00 0.00 o
3 15 0.00 0.00 o
4 20 0.00 0.00 o
5 30 0.00 0.00 o
6 40 0.00 0.00 o
7 50 0.00 0.00 o
8 60 0.00 0.00 o
9 70 0.00 0.00 o
10 80 0.00 0.00 o
11 90 0.00 0.00 o
12 100 13 12.5 12.75
13 150 17.5 17.8 17.65
14 200 19.5 19.5 19.5
15 250 24 24.5 24.25
16 300 26.8 26.5 26.65
17 350 27.5 27.5 27.5
18 400 30 30.5 30.25
19 450 32 32 32
20 500 29 28.5 28.75
Fuente: Ficha de recopilación de los diámetros de los halos de inhibición (Anexo N° 9).
Leyenda:
IG: primer grupo de placas.
IIG: segundo grupo de placas.
mm: milímetros.
166
En la tabla N°33 se encuentran los resultados de los diámetros de los halos de

inhibición obtenidos en la prueba piloto, se observa que las Acetogeninas
aisladas a partir de extractos etanólicos de semillas de Annona muricata L.
(Masasamba) POSEE ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA "in vitro" sobre cepas de
Salmonella typhi spp.
En la tabla podemos observar que las Acetogeninas presentan un halo mínimo
de inhibición de 12.75 mm en promedio a una concentración de 1OOmg/disco y
un halo máximo de inhibición de 32.0 mm en promedio a una concentración de
450mg/disco. Con estas dos medidas promedio de halos de inhibición se
realizó la estandarización de las concentraciones antibacterianas de las
Acetogeninas aisladas a partir de extractos etanólicos de semillas de Annona
muricata L. (Masasamba) con la finalidad de seguir con la siguiente fase de la
investigación.
4.3.3.2. De la estandarización de las concentraciones antibacterianas
Cálculos:
Reemplazando valores con los datos obtenidos en la prueba piloto se tiene:
450
1= · r=8-1 =7
100
P= v-:;, = 1.2009
Como se observa en la fórmula el factor de incremento F, obtenido es de

1.2009 con este dato se realizó la estandarización de las concentraciones
procediendo según la tabla N°34.
167
TABLA N°34: Determinación de las concentraciones estandarizadas para
el ensayo de la actividad antibacteriana de las Acetogeninas aisladas a
partir de extractos etanólicos de semillas de Annona muricata L.
(Masasamba).
OPERACION N° DE CONCENTRACION RESULTADO

mg/disco
Concentración mínima Concentración 1 100
Concentración 1 x F Concentración 2 123.97
Concentración 2 x F Concentración 3 153.69
concentración 3 x F Concentración 4 190.52
concentración 6 x F . Concentración 7 362.99
concentración máxima Concentración 8 450

Fuente: Datos expenmentales.
En la tabla N°34 se muestran los valores de las concentraciones
antibacterianas estandarizadas las cuales fueron determinadas después de
hallar el valor del factor de incremento con los datos obtenidos en la prueba
piloto.
Con estas concentraciones se realizó un nuevo ensayo de la actividad
antibacteriana "in vitre".
168
4.3.3.3. Del ensayo de la actividad antibacteriana con las concentraciones
estandarizadas.
TABLA N°35: Resultados de los diámetros de los halos de inhibición de de las
concentraciones estandarizadas de Acetogeninas de Annona muricata L.
(Masasamba), fármaco patrón (ciprofloxaciono) y dimetilsulfoxido (grupo
"blanco") sobre cepas de Salmonel/a typhi spp.
N°de concentración de Diámetro del Halo de inhibición (mm) en cepas de

Acetogeninas
disco (mg/disco), Salmonel/a typhi spp.
ciprofloxacino 5J.1Q, DMS PROMEDIO
IG IIG IIIG
1 100 13.0 12.5 13.0 12.83
2 123.97 13.5 14.0 14.0 13.83
3 153.69 17.50 18.50 18.0 18.0
4 190.52 20.0 19.50 20.0 19.83
5 236.19 22.50 21.0 22.0 21.83
6 292~81 25.0 26.0 26.0 25.67
7 362.99 27.50 28.50 28.0 28.0
8 450 32.0 31.0 32.0 31.67
9 ciprofloxacino 28 28 27 27.67
10 DMS ·o o o o
., ... ,
Fuente: ficha de recop1lac16n de los d1ametros de los halos de mh1b1aon (Anexo N° 09).
Dónde: DMS: Dimetilsulfoxido; mg: miligramos; mm: milímetros;
IG, IIG, IIIG: grupos.
En la tabla N° 35 podemos observar los diámetros de los halos de inhibición
que resultaron con las concentraciones estandarizadas. Se observa que al
incrementarse la concentración de Acetogeninas el diámetro del halo de
inhibición se incrementa. Así como también se puede observar los diámetros
de los halos de inhibición del fármaco patrón (ciporfloxacino 5¡.Jg) teniendo este
un diámetro promedio de 27.67mm, en el caso del dimetilsulfoxido (grupo
blanco) no genero inhibición lo que descarta la posibilidad de que los halos
generados por las Acetogeninas se vea influenciado por el dimetilsulfoxido que
se utilizó como solvente para la preparación de los discos de sensibilidad.
Esta tabla también se aprecia que las concentraciones de 362.99 y la de 450
mg/disco generan un diámetro mayor de inhibición sobre el crecimiento de
Salmonella typhi spp. en comparación con el diámetro del ciprofloxacino.
169
4.3.4. ANÁLISIS ESTADÍSTICO DE LA ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA
TABLA N°36: Distribución numérica de las medidas de tendencia central y

dispersión de la dimensión de los halos de inhibición.
MEDIAD
95% DE INTERVALO DE
COCENTRACIÓN DE PROMEDIO DE DESVIACIÓN
CONFIANZA PARA LA MEDIA
ACETOGENINAS LOS HALOS DE TiPICA
INHIBICIÓN
LIMITEINF. LIMITESUP
lOOmg/lOOul 12,60 0,173 12,17 13,03
123197mg/100ul 13,833 0,288 13,116 14,550

153169mg/100u/ 18 0,50 16,758 19,242
190152mg/100ul 19,833 0,288 19,116 20,550
236119mg/100ul 21,833 0,763 19.936 23,731

292181mg/100ul 25,667 0,577 24,232 27,101
362199mg/100ul 28 0,50 26,758 29,242

450mg/100ul 31,667 0,577 30,232 33,101
ciprofloxacino 27,667 0,577 26,232 29,101
dimetilsulfoxido o o o o
Fuente: f1cha de recolecc16n de datos
Donde:
~1: microlitros.
En la presente tabla se puede observar la media (promedio) de los halos de
inhibición de las diferentes concentraciones de Acetogeninas, del fármaco
patrón (ciprofloxacino) y del grupo blanco (dimetilsulfoxido); así como también
la desviación típica que en todos los grupos experimentales es menor a la
unidad lo cual significa que en cada grupo las medidas de los diámetros de los
halos de inhibición para cada concentración, fármaco patrón y grupo control
negativo fueron de igual o cercano diámetro, es decir que las tres mediciones
de los diámetros del halo de inhibición para cada concentración fueron casi
constantes; en la última columna de la tabla se muestra los intervalos de
confianza de cada concentración, que se interpreta como los límites entre los
170
que se encuentra la media de los diámetros de los halos de inhibición y que la
probabilidad de que estén fuera de este intervalo es del 5% solamente.
35 -- ¡-- -,~-- ~ --- ~ - 1 ¡- -- ~ -¡ 1 -¡-

1
1
1
1 1 1
1
1
1
1 1
1 66'
CJ 31, 7
1
1
3o ---t-----~-----~-----~-----t-----t-----t--~--r-----t-----~--
1 1 1 1 1 1 E3 28 1 ,...-!--, 27 ,66·7
1 1 1 1 1 1 1 1 '--' 1
25 ---~-----~-----~-----~-----~----~-25,6~~----~-----~-----~--
l 1 1 1 1 2183' 1 1 1 1
: : : : El , : : : : :
20 --- t------ t------ t----- c::::::,19-83· t------ t------ t----- - t------ t------ t---
1 1 E3'18 1 , 1 1 1 1 1 1
1 1 • 1 1 1 1 1 1 1
1 1 1 1 1 ; 1 1 1 1
15 ---~-----~-----~-----~-----~-----~-----~-----~-----~-----~--
1 12 6c::::::, 13,833 1 1 1 1 1 1 1
=:=-,: : : : : l l : l
10 ---~-----~-----~-----t-----t-----f-----r-----r-----r-----r--
1 1 1 1 1 1 1 1 1 1
1 1 1 1 1 1 1 1 1 t
5 ---r-----r-----r-----r-----r-----r-----r-----r-----r-----r--
: : : : : : l 1 : fl
o ---~-----~-----~-----~-----~-----~-----~-----~-----~-----:---
1 1 f t f 1 1
GRÁFICO N°20: Gráfico de cajas de los diámetros de los halos de inhibición de

las concentraciones estandarizadas de Acetogeninas, ciprofloxacino y
dimetilsulfoxido.
Fuente: ficha de recolección de datos
El grafico N° 20 muestra los diferentes diámetros de los halos de inhibición de

las concentraciones estandarizadas de Acetogeninas, Ciprofloxacino y
dimetilsulfoxido, apreciándose que a medida que se incrementa la
concentración aumenta el diámetro del halo e incluso las concentraciones de
362.99 y 450mg/disco generan un mayor diámetro de halo de inhibición
comparado con el del fármaco patrón (ciprofloxacino). De aquí y comparando
con datos bibliográficos se puede afirmar que el concentrado de Acetogeninas
a 362.99 y 450 mg/disco tiene una buena actividad antibacteriana frente a
Salmonella tipi spp y según la tabla N°37 Salmonella typhi spp. es susceptible
171
cuando el diámetro del halo es :::: 21 mm, intermedia cuando va de 16 - 20m m y
es resistente cuando el diámetro del halo es :::; a 15mm, estos datos
corresponden al Ciprofloxacino, y haciendo una comparación con los diámetros
de los halos generados por las diferentes concentraciones estandarizadas de
Acetogeninas podemos decir que la bacteria Salmonella typhi spp. es
susceptible a las Acetogeninas cuando el diámetro del halo es :::: 28mm,
intermedia cuando va de 19 - 20mm y es resistente cuando el diámetro del
halo es :::; a 18mm.
TABLA N°37: Interpretación estándar del tamaño del diámetro de la zona

de inhibición para enterobacteriaceae (para ciertos discos de
antimicrobianos para la prueba de Salmonella ser. typhi)
límites del.. ·
diámetro de la zona
Diámetro de la .zona de inhibición (mm} (mm) ¡para la cepa
.Agente · :Potencia Susceptible ,Jntermediate Re.sistant CCdeNCCLS·
antimiaobiano deli disco {pg) [et¡uirCI!rt] [equwaM.J [equi¡• a'd.] I..cofi ATCC 25922
Ampidlina 10pg ·~ l!7mm 14-16mm sBrnm 16-.2lmm
(sBpglmV (16pg/ml} (;~dlpg!mQ
(hforamphenicol 30pg 2l8mm 13-17mm s12mm 21-.27mm

(sBpg/mQ (16pg!m0 (2!3lpg!m0
Trimetoprima- 1,25/23,75 pg ~ 16mm 11-15mm slOmm 23-19mm
sulfameto,xazol (s ]J38pg!mV (4Pópg!mQ (:1!!8/1SlpglmQ
(cotrimoxazo'l)
Arido nalidí1ico 30pg 219mm 14-18mm sBmm 21-18mm
{s8pg!mQ (l6pg!mQ (2!3lpglmV
Gprofloxacino 5pg 221mm 16-20mm s15mm 30-40mm
{s 1pg/ml} (lpglmQ (2!4mg/m1}
Fuente: Manual de Laboratorio para la Identificación y Prueba de Susceptibilidad a los

Antimicrobianos de Patógenos Bacterianos de Importancia para la Salud Publica en el Mundo
en Desarrollo (59).
172
TABLA N°38: ANOVA (Análisis de la Varianza) para la comparación de las
medias de los halos de inhibición
COMPARACIÓN ENTRE GRADOS

ESTAD(STICO F SIGNIFICACIÓN
GRUPOS EN DE
{FISHER} ASINTÓTICA {P}
EXPERIMENTACIÓN LIBERTAD
Halos de inhibición 9 263,699 0,000

..
Fuente: F1cha de recolecc1on de datos
Leyenda:
Sig: >0.05, no existe diferencia significativa entre los halos de
inhibición.
Sig: ::;0.05, existe diferencia significativa entre los halos de inhibición
La tabla N°38 muestra los resultados arrojados por el ANOVA donde compara
los diámetros de los halos de inhibición de las diferentes concentraciones de
Acetogeninas, ciprofloxacino (fármaco patrón) y dimetilsulfoxido (grupo blanco),
la comparación es entre grupos generándose así 9 grados de libertad y a raíz
de esto se produce un "F" de Fisheer de 263.699. El Análisis de la Varianza
(ANOVA) da una significancia (P) de 0.000 lo que nos indica que existen
diferencias estadísticamente significativas entre los diámetros de los halos de
inhibición generados por las diferentes concentraciones de Acetogeninas,
Ciprofloxacino y dimetilsulfoxido.
173
TABLA N°39: Distribución numérica de las medidas de tendencia central y
dispersión de la dimensión de los halos de inhibición
INTERVALO DE
CONFIANZA AL 95%
SIGNIF/CACIÓ
DIFERENCIA PARA LA DIFERENCIA
GRUPOS EN COMPARACIÓN N ASINTÓTICA
DEMEDIAS DEMEDIAS
(P}
LIMITE LIMITE
INFERIOR SUPERIOR
l23,97mg/100ul -1,23 0,399 -3,04 0,576
-c5
(;)
l53,69mg/l00ul
l90,52mg/l00ul
236,l9mg/l00ul
-5,40
-7,23
-9,23
0,000
0,000
0,000
-7,209
-9,043
-11,04
-3,591
-5,424
-7,424
~
el 292,8lmg/l00ul -13,06 0,000 -14,876 -11,257
~
(;)
362,99mg/l00u/ -15,40 0,000 -17,209 -13,591
""4 450mg/l00ul -19,06 0,000 -20,876 -17,257
ciprofloxacino -15,06 0,000 -16,876 -13,257
dimetílsulfoxido
l53,69mg/l00ul
12,60
-4,1667
. 0,000
0,000
10,791
-5,976
14,409
-2,357
-c5
(;)
190,52mg/l00ul
236,l9mg/l00ul
-6
-8
0,000
0,000
-7,809
-9,809
-4,191
-6,191
'
~
tll
0'1
~
292,8lmg/l00ul
362,99mg/l00ul
450mg/l00ul
-11,83
-14,166
-17,83
0,000
0,000
0,000
-13,643
-15,976
-19,643
-10,024
-12,357
-16,024
f"'
""4 ciprofloxacino -13,83 0,000 -15,643 -12,024
dimetilsulfoxido -13,83 0,000 12,024 15,643
-c5
(;)
l90,52mg/l00u/
236,l9mg/l00u/
-1,833
-3,833
0,045
0,000
-3,643
-5,643
-,024
-2,024
292,8lmg/l00ul -7,667 0,000 -9,476 -5,857
'~
tll
f'l\'
362,99mg/l00ul
450mg/l00ul
ciprofloxacino
-10,0
-13,66
-9,66
0,000
0,000
0,000
-11,809
-15,476
-11,476
-8,191
-11,857
-7,857
ll\
""4
dimetilsulfoxido 18 0,000 16,191 19,809
236, l9mg/l00ul -2 0,022 -3,809 -,191
292,8lmg/l00ul -5,83 0,000 -7,643 -4,024
l90,52mg/l 362,99mg/100ul -8,166 0,000 -9,976 -6,357
OOul 450mg/l00ul -11,83 0,000 -13,643 -10,024
ciprofloxacino -7,83 0,000 -9,643 -6,024
dimetílsu/foxido 19,83 0,000 18,024 21,643
292,8lmg/l00ul -3,833 0,000 -5,643 -2,024
362,99mg/l00ul -6,16 0,000 -7,976 -4,357
236,l9mg/l
450mg/l00ul -9,83 0,000 -11,643 -8,024
OOul
ciprofloxacino -5,83 0,000 -7,643 -4,024
dimetilsuljoxido 21,83 0,000 20,024 23,643
362,99mg/l00ul -2,33 0,005 -4,143 -0,524
292,Blmg/l 450mg/l00ul -6 0,000 -7,809 -4,191
OOul ciprojloxacino -2 -3,809 -0,191
dimetilsulfoxido 25,66
. 0,022
0,000 23,857 27,47
Fuente: ficha de recolección de datos
174
En la tabla N°39 se puede apreciar los grupos experimentales en comparación;
los grupos experimentales a diferentes concentraciones de Acetogeninas , así
como también con el ciprofloxacino (grupo control positivo) y dimetilsulfoxido
(grupo control negativo), donde se observa la diferencia de medias de las
concentraciones comparadas, se puede apreciar que esta diferencia es
negativa para todos los casos excepto cuando las concentraciones se
comparan con el dimetilsulfoxido, el valor negativo resulta porque se resta un
valor menor (diámetro del halo de una concentración) con un valor mayor
(diámetro del halo de una concentración sometida a comparación). Para el
caso del dimetilsulfoxido que no genera halo de inhibición la diferencia de la
media es positiva porque todos las concentraciones, incluido el ciprofloxacino,
generan halo de inhibición, y es lógico que la diferencia sea positiva.
La tabla también muestra la significancia asintótica que compara los diámetros

de los halos y da como resultado si existe o no diferencias estadísticamente
significativas entre los grupos comparados según la significación sea ::s; ó ~ a
0.05 respectivamente, vemos que solo para un caso no existe diferencia
estadísticamente significativa ( 1OOmg/1 OOul- 123, 97mg/1 OOul) que significa que
a estas dos concentraciones se produce un halo de inhibición de parecido
diámetro. Las demás comparaciones dan una significancia ::s; a 0.05 lo que nos
da a entender que existen diferencias estadísticamente significativas entre los
diámetros de halos de inhibición generados.
En la última columna de la tabla se muestra los intervalos de confianza de la
diferencia de medias de las concentraciones que se interpreta como los límites
entre los que se encuentra la diferencia de medias de los diámetros de los
halos de inhibición y que la probabilidad de que estén fuera de este intervalo es
del 5% solamente.
175
CONCLUSIONES
1. Las Acetogeninas aisladas a partir de extractos etanólicos de semillas de

Annona muricata L si presentan actividad insecticida frente a larvas de
Aedes aegypti mosquito vector de la fiebre amarilla y dengue lo que indica
que sería posible el aprovechamiento de las semillas para la obtención de un
biopesticida.
2. Las Acetogeninas aisladas a partir de extractos etanólicos de semillas de la
especie vegetal Annona muricata L. "Masasamba" si presentan efecto
antibacteriano frente a cepas de Salmonella Typhi spp agente causal de
enfermedades diarreicas agudas en nuestra comunidad.
3. En la presente investigación se obtuvo los extractos etanólicos al 70% de las
semillas de la especie vegetal Annona muricata L. "Masasamba" mediante
el método de maceración con un rendimiento de 4. 1720%
4. Se obtuvo las Acetogeninas presentes en los extractos etanólicos al 70%
de las semillas de la especie vegetal Annona muricata L. "Masasamba"
mediante el método de extracción por solventes de diferente polaridad con
un rendimiento de 47.34%.
5. Se caracterizó las propiedades fisicoquímicas del concentrado de

Acetogeninas aisladas a partir de extractos etanólicos al 70% de las
semillas de Annona muricata L. (Masasamba) mediante la cual concluimos
que las Acetogeninas presentes en Annona muricata L. son medianamente
polares, a su vez se realizó el análisis cualitativo mediante cromatografía en
capa delgada y cromatografía de líquidos de alta resolución (HPLC) siendo
el componente mayoritario squamostatin D con un 43.1206%.
6. Se recolectaron e identificaron larvas de Aedes aegypti en el distrito de

Camanti de la provincia de Quispicanchis - cusco. La identificación fue
realizada por el responsable de la unidad de saneamiento ambiental
vigilancia entomológica y control de vectores de la DIRESA - Cusco,
mediante técnicas estandarizadas.
7. Se comparó la actividad insecticida in vitro de las Acetogeninas obtenidas de

extractos etanólicos al 70% a partir de semillas de de Annona muricata L
176
(Masasamba) con el insecticida estándar Temefós, insecticida recomendado
por la red latinoamericana de control de vectores. El efecto insecticida de las
Acetogeninas de Annona muricata L. se demostró notablemente en los
grupos que fueron sometidos a altas concentraciones de Acetogeninas
mostrando un efecto insecticida parecido al estándar Temefós.
8. Se obtuvieron cepas de bacterias Sa/monella typhi spp. para la

determinación del efecto antibacteriano de las Acetogeninas obtenidas a
partir de extractos etanólicos al 70% de semillas de Annona muricata L.
(Masasamba).
9. Se realizó el control microbiológico de las Acetogeninas obtenidas a partir

de extractos etanólicos al 70% de Annona muricata L. reportándose libres
de agentes contaminantes y en óptimas condiciones para la determinación
del efecto antibacteriano.
1O. Se determinó la concentración mínima inhibitoria (CMI), de las
Acetogeninas obtenidas a partir de extractos etanólicos al 70% de semillas
de Annona muricata L. (Masasamba) frente a cepas de salmonella typhí
spp. siendo la concentración de 1OOmg del concentrado de Acetogeninas a
partir de la cual se produce inhibición del crecimiento bacteriano.
11. Se comparó la actividad antibacteriana in vitro de las Acetogeninas
obtenidas de extractos etanólicos al 70% a partir de semillas de la especie
vegetal Annona murícata L (Masasamba) con un antibacteriano estándar
(Ciprofloxacino). El efecto antibacteriano fue muy marcado en dos
concentraciones estandarizadas (362.99 mg y 450mg) con respecto al
antibacteriano estándar generando un halo de inhibición mayor que esta.
12. Se realizó el análisis estadístico de los datos obtenidos en cada ensayo.
Mediante este análisis de los datos se corroboro que las Acetogeninas de
Annona muricata L. presentan actividad insecticida frente a larvas de
Aedes aegypti y antibacteriana frente a bacterias de salmonella typhi spp.
objetivos principales de la presente investigación.
177
SUGERENCIAS Y RECOMENDACIONES
• Realizar proyectos de investigación de diversas especies vegetales con

actividad insecticida que ayuden a sostener el medio ambiente y disminuir la
contaminación por insecticidas sintéticos.
• Realizar bioensayos con otros organismos vectores de enfermedades para
Confirmar la actividad biológica que poseen las semillas de Annona muricata
L. y comparar esos resultados, con los obtenidos en esta investigación frente
a Aedes aegypti.
• Continuar con estudios de fraccionamiento, identificación y separación de
los diferentes componentes de los extractos de las semillas de Annona
muricata L. para evaluar su actividad individual y en mezclas.
• Evaluar la actividad biológica de los extractos de las hojas, flores, tallo y
raíz de la Annona muricata L. para elegir los extractos con mayor actividad
para su aplicación como biopesticida.
• Realizar estudios con otras enterobacterias para confirmar la actividad
antibacteriana que poseen las semillas de Annona muricata L. y comparar
esos resultados, con los obtenidos en esta investigación frente a cepas de
salmonella typhi spp.
• Realizar estudios con cepas ATCC de salmonel/a typhi con la finalidad de
comparar los resultados obtenidos en la presente investigación de la
actividad antibacteriana de las Acetogeninas de Annona muricata L. frente a
cepas de salmonella typhi spp
• Fomentar la investigación para poner en práctica los conocimientos
adquiridos durante nuestra formación profesional.
• Realizar convenios con instituciones que se dediquen a prevenir y controlar
problemas de salud en nuestra localidad.
178
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186
ANEXOS
187
ANEXO N°1 CERTIFICACIÓN DE LA ESPECIE VEGETAL EN ESTUDIO.
CERTIFICACION.
El que suscribe, Profesor Investigador Asociado al Herbario Vargas (CUZ);

certifica, que el Señorita Judith Callo Condori y el Señor Harol Eduardo
Farfán Barrientos, Bachilleres de la Carrera Profesional de Farmacia y
Bioquímica, Facultad de Ciencias Químicas Físicas y Matemáticas de la
Universidad Nacional de San Antonio Abad del Cusca; han presentado a éste
Herbario una muestra botánica, para su determinación taxonómica, la que al
ser diagnosticada utilizando bibliografía especializada y comparar con muestras
del Herbario; corresponde a la siguiente especie: Annona muricata Linnaeus
y cuya posición taxonómica de acuerdo al Sistema de Arthur Cronquist (1988) ·.
compatibilizado con las propuestas de Judd, Campbell, Kellog y Stevens
(1999), es la siguiente:
División : Magnoliophyta (=Angiospermas)

Clase : Magnoliopsida (= Dicotiledoneas)
Subclase : Magnolidae ( =Tricolpados- Eudicotiledoneas
·Super Orden : Magnolianae
Orden : Magnoliales
Familia : Annonaceae
Género : Annona
Especie : Annona muricata Linnaeus
Sinonimias :
Annona bomplandiana H.B.K.
Annona cearensis Barbosa Rodrigues.
Annona macrocarpa Wercklé.
Annona muricata var. borinquensis Morales.
Guanabanus murica tus (L.) Gómez.
Nombres comunes : "masa samba"; "guanábancf, "huanábano";

r.
Se les expide la presente certificación, para los fines que vieran por
conveniente los .interesados.
ANEXO N°2 CERTIFICACION DEL ANALISIS CROMATOGRÁFICO.
UNIVERSIDAD NACIONAL DE SAN ANTONIO ABAD DEL CUSCO
FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS, FfsiCAS, MATEMÁTICAS,

FARMACIA e INFORMÁTICA
LABORATORIO DE CONTROL DE CALIDAD· ÁREA DE CROMATOGRAFfA
CONSTANCIA
Los que suscnben, Responsables del Laboratorio de Cromatografla de la Facultad De

Ciencias Químicas, Ffsicas, Matemáticas, Fannacia e Infonnática de la Universidad
Nacional San Antonio Abad del Cusco, dejan Constancia.
Que los Bachilleres: ,JlJ.PlTJI CAlLO CONDOJ,.q Y KAROL EDUARDO

FARFÁN BA.RRIENT9S, de la Carrera Profesiónat de.Fann~cia y Bioqufmica, han
presentado al Labótatorio de · Cromatografla una muestra de concentrado de
acetogeninas de Annona mu'ricqta...,.l..:._P!Nl:la~ ~eterización e identificación de
componentes acetogénicos. Dicho .material ha ·sido caracteri23do utilizando el
Cromatógrafu líquido Agilent 1200- acoplado a un detector de arreglo de diodos. La
identificación se baSó en la comP{If'8ción de Jos tíeinpos de retenc~ón de los picos del
cromatograma con referencias bibliogndicas detemíinados bajo las mismas condiciones. ·
Del análisis efectuado se repordn 8 posibles 'acetogeninas .de 32 CÓmponentes
detenninados paráJos cuaJes se indican los tiempos de retención Y,:ta longitud de onda
máxima ! ·
PICO TIEMPO DE RETlNCION A. POSIBLE

(MIN) MAX. ACETOGENINA
11 9.104 ! ,,
12,15, cis-sqWllilostatin A
"' 201
18 17.625 205 Squamostatin
\ ..
A
'
19 \ <.,_ ~. 18.469 202 ~ Bullatacina
;
24 24.985 210 Squamostatin D
26 ,28.966 211 Squamocina
27 30.600 210
. • Iso-desacetiluvaricina
28 35.721 200 · Asimicina.
30
- 53:471 203 · besacetiluvaricina
Se expide ia siguiente constancia a solicitud de los interesados para los .fines que vieran por
conveniente.
Cusoo, 12 de Setiembre del 201 1.
······················v ············· .......................... .

Qco. orge Choquenalra Parí Mgt. an Accostupa Quispe
Analista del Laboratorio de Cromatografla- Analista Laboratorio de Cromatografia-
UNSAAC. UNSAAC.
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FORMATO 1: INSPECCIÓN DE VIVIENDAS PARA LA VIGILANCIA Y CONTROL
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INSPECCIOH DE VIVIENDAS PARA LA VIGILANCIA YCONTROL DE Aedts aegypti
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DIRECCION DE SALUD /DIRECCIÓN
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.REGIONAL DE SALUD; PROVINCIA: DISTRITO LOCALIDAD: Z!":'
FECHA DE T~RMINO: ~::!!
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FECHA DE INICIO:
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yotros identifiCados l0a1lmente i INSPECCIONADOS P POSITIVOS T TRATADOS O DESTRUIDOS (1) o
Los nombres de los recipientes se VIVIENDAS: SI la vivienda no se pudo inspeccionar cons~nar C, RoDsegún corresponda a.Z
pueden adaptar al uso local
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FICHA DE ENVIO DE MUESTRAS PARA CONTROL DE CALIDAD
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FECHA EE.SS. PROVINCIA DISTRITO LOCALIDAD ESPECIE ESTADO TOTAL
13/07/2011 QUINCE Mil QUISPICANCHIS CAMANTI QUINCE MIL Aedes aegypti lARVA 190
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O :::E:
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COLECTORES: •'
Blgo. Henrry Yañez TrJII!ano DIRESA Cusca Ce
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Blgo. Luis lean Olayunca Red Sur
Bach. Judith Callo Condori UNSAAC r-Z
Bach. Eduardo Farfan Barrientos UNSAAC -<
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2 3 JUL. 2011
ANEXO N°6: FICHA DE RECOLECCION DE DATOS PARA LA EL ENSAYO
INSECTICIDA.
NUMERO DE LARVAS MUERTAS POR CADA HORA DE EXPOSICION A

ACETOGENINAS A DIFERENTES CONCENTRACIONES.

,T
10000ppm 5000ppm 500ppm 50ppm temefos agua
A 8 e A 8 e A 8 e A 8 e A 8 e A 8 e
1
2
,J
4
5
6
7
8
9
, 10
11
12
13
14
15
·16
• 17
18
19
1
20
21
22
23
ANEXO N°7: CONTROL MICROBIOLOGICO DEL CONCENTRADO DE
ACETOGENINAS EXTRAIDAS A PARTIR DE EXTRACTOS ETANOLICOS AL 70% DE
SEMILLAS DE Annona muricata L (MASASAMBA)
FACULTAD DE MEDICINA HUMANA
LABORATORIO DE MICROBIOLOGÍA MÉDICA

CONTROL MICROBIOLÓGICO DEL CONCENTRADO DE ACETOGENINAS
EXTRAIDAS A PARTIR DE EXTRACTOS ETANOLICOS AL 70% DE SEMILLAS DE
Annona muricata (Masasamba).
SOLICITANTES: Br. Judith Callo Condori.

Br. karol Eduardo Farfan Barrientos
PARA: Tesis de Investigación
MUESTRA: Concentrado de Acetogeninas extraídas a partir de extractos etanolicos al
70% de semillas de Annona muricata (Masasamba).
FECHA: 25/06/2011
RESULTADOS DEL CONTROL MICROBIOLOGICO.
Cuadro N° 1: Reporte De Resultados Del Control De Calidad Microbiológico del
Concentrado de Acetogeninas extraídas a partir de extractos etanolicos al 70%
de semillas de Annona muricata (Masasamba).
NMPCT NMPC Investigación RHYL

(ufc)/ml Termotolerantes de (ufc)/ml
1 Salmonella
Ausente
¡Ausente. Ausente Ausente Ausente
l
Donde:
Los indicadores microbiológicos tomados en cuenta· para el análisis de la muestra en

estudio son:
RMAMV =RECUENTO DE MICROORGANISMOS AEROBIOS MESOFILOS VIABLES

NMPCT = NUMERO MAS PROBABLE DE COLIFORMES TOTALES
NMPC =NUMERO MAS PROBABLE DE COLIFORMES TERMOTOLERANTES
R H Y L = RECUENTO DE HONGOS Y LEVADURAS.
Ufc/ml = UNIDADES FORMADORAS DE COLONIAS POR MILILITRO.

METODOLOGiA
Se siguió la metodología recomendada por el Centro Latinoamericano de Enseñanza
e Investigación de Bacteriología Alimentaria (CLEIBA).
CONCLUSION:
Por los resultados obtenidos, se tiene que la muestra cumple con los valores guía de
la OMS, sobre calidad microbiológica:
El concentrado de Acetogeninas extraídas a partir de extractos etanolicos al 70% de
semillas de Annona muricata (Masasamba), se encuentra libre de contaminación por
gérmenes patógenos por lo que permite realizar la investigación correspondiente, sin
ningún tipo de alteración microbiología en los procedimientos a ensayar.
Interpretación de los resultados:
• Los microorganismos de salmonella, al no encontrarse en la presente muestra

indica materias primas no contaminadas, limpieza y desinfección correcta.
• Los microorganismos de Coliformes totales, al no encontrarse en la presente
muestra indica materias primas no contaminadas, limpieza y desinfección
cotrecta.
• Los microorganismos aerobios mesófilos, al no encontrarse en la presente
muestra indica materias primas no contaminadas, limpieza y desinfección
correcta condicione adecuadas de tiempo y temperatura durante la producción
o conservación.
• Al recuento de hongos y levaduras, indica que las condiciones de
almacenamiento y conservación así como la sanitización de equipos y la
calidad higiénica sanitaria del producto es buena.
BIBLIOGRAFiA:
DIGESA (1999) dirección general de salud "Criterios de Calidad Sanitaria e Inocuidad
de Alimentos'; Cusca~ Perú.
_:;,(_-
:~;r rarut ~iiili};/iifiiJz

CBP N" 2617
ES!"COAUDAOES ANAt.ISIS &a.OGICOS
EfJIJC.ICIÓN UNIYE~ARIA EINVE$TtGAOON
li~S~~G 1:J.t<"<AC MEOJC~t¡A;;~N.A
ANEXO N°8: FICHA DE RECOLECCION DE DATOS PARA LA CURVA DE
CRECIENTO BACTERIANO DE Sa/monella typhi spp
TIEMPO (HORAS) ABSORVANCIA (A 670 nm)
., .
Fuente: Elaborac1on propia para reg1stro de datos expenmentales
ANEXO N°9: FICHA DE RECOLECCION DE DATOS DE LA PRUEBA
ANTIBACTERIANA
N°de concentración Diámetro del Halo de inhibición (mm) en cepas de

de
disco Sa/monella typhi spp.
Acetogeninas
(mg/disco) IG IIG Promedio
1 5
2 10
3 15
4 20
5 30
6 40
7 50
8 60
9 70
10 80
11 90
12 100
13 150
14 200
15 250
16 300
17 350
18 400
19 450
20 500
-,
Fuente: Elaborac1on prop1a para registro de datos expenmentales
ANEXO N°1 0: FICHA DE RECOLECCION DE DATOS DE LA PRUEBA
ANTIBACTERIANA CON CONCENTRACIONES ESTANDARIZADAS.
N°de concentración Diámetro del Halo de inhibición (mm) en cepas de

de
disco Salmonella typhi spp.
Acetogeninas
(mg/disco),
IG IIG IIIG PROMEDIO
ciprofloxacino
1 100
2 123.97
3 153.69
4 190.52
5 236.19
6 292.81
7 362.99
8 450
9 ciprofloxacino
10 DMS
· . Fuente: Elaboración propia para reg1stro de datos expenmentales
ANEXO N°11 MEDIOS DE CULTIVO
AGAR BISMUTO SULFITO SEGÚN WILSON y BLAIR
Indicaciones:
Selectivo para aislamiento y diferenciación de Sa/mone//a typhi y otras Salmonellas, a

partir de material clínico y otras clases.
Características:
El verde brillante y el bismuto inhiben considerablemente a los gérmenes de

acompañamiento. Las colonias de salmonellas H2S positivas presentan
ennegrecimiento debido al sulfuro de hierro. La reducción de los iones bismuto a bismuto
metálico produce brillo metálico alrededor de las correspondientes colonias.
Composición (g/litro):
• Extracto de carne 5,0
• Peptona de ca me 10,0
• O(+)- Glucosa 5,0
• Di-sodio hidrogenofosfato 4,0 .
• Hierro (11) sulfato 0,3
• Verde brillante 0,025 .
• Indicador bismuto sulfito 8,0 .
• Agar- agar 15,0 .
Preparación:
Disolver 47 g/L calentando durante unos 30 minutos en baño maría hirviente o a vapor
fluyente, no esterilizar al autoclave. Tras la distribución homogénea del precipitado
producido se vierte en placas, en capa gruesa.
Este medio de cultivo, turbio debe presentar un color verde pálido. En caso de coloración
parduzca el medio de cultivo no es utilizable.
AGAR PLATE COUNT
Indicaciones:
Medio de cultivo exento de sustancias inhibidoras y de indicadores, concebido

predominantemente para la determinación del número total de gérmenes en leche,
productos lácteos, agua y otros materiales.
Características:
Se utiliza para el reconocimiento de gérmenes caseoliticos, puede añadirse leche

descremada o caseinato.
Composición (gllitro):
• Peptona de caseína 5,0.
• Extracto de levadura 2,5
• O(+) glucosa 1,0.
• Agar- agar 14,0
Preparación:
Disolver 22,5 g/L y esterilizar al autoclave. Eventualmente incorporar - antes de

esterilización - 1O mi/litro de leche descremada, o bien, 1,O g/litro de leche descremada
en polvo. PH: 7,0 ±O, 1.
AGAR MC CONKEY
Indicaciones:
Agar selectivo para aislamiento de Salmonella, Shigella y bacterias coliformes, a partir de

heces, orina, alimentos, aguas residuales, etc.
Características:
Las sales brillantes y el violeta cristal inhiben considerablemente a la flora gran-positiva.

La lactosa junto con el indicador de pH rojo neutro, sirve para la comprobación de la
degradación de dicho azúcar.
• Peptona de caseína 17 ,O
• Peptona de carne 3,0.
• Cloruro de sodio 5,0.
• Lactosa 10,0.
• Mezcla de sales biliares 1,5.
• Rojo neutro 0.03.
• Violeta cristal 0,001.
• Agar - agar 13,5.
Preparación:
Disolver 50,0 g/L esterilizar al autoclave y verter en placas. PH: 7,1 ±O, 1.
AGAR MUELLER HINTON
Indicaciones:
Para el ensayo de la sensibilidad, para ensayos de resistencia de agentes patógenos,

clínicamente importantes frente a antibióticos y sulfamidas, para la realización del ensayo
de difusión en placas, para mejorar de forma considerable el crecimiento de
microorganismos exigente, puede añadirse sangre al agar Mueller Hinton.
Características:
La composición de estos medios de cultivo garantiza, por una parte, condiciones

favorables de crecimiento y por otra parte, cuenta con la ausencia, muy considerable, de
antagonistas de las sulfamidas.
Composición:
• Infusión de carne 2.0

• Caseína hidrolizado 17.5
• Almidón 1.5
• Agar-agar 13.0
Preparación:
Disolver 34 gr en 1OOOml de agua destilada, esterilizar con cuidado en autoclave durante

15 minutos a 122°C, enfriar eventualmente a 45-50°C posteriormente verter en placas
petri dejar enfriar y endurecer. Para pruebas de control de calidad de la muestra, incubar
a 37°C por 24 horas, posteriormente queda listo para ser utilizada. PH 7.4 más menos 0.2.
AGAR HECTOEN
Indicaciones:
Agar selectivo para demostración y para aislamiento de bacterias intestinalespatógenas,

inclusive Shigella, a partir de los más diversos materiales, como heces, alimentos, etc.
Frente a otros medios de cultivo selectivos, como por ejemplo agar SS, agar PBL y agar
bismuto sulfito, el agar Hectoen ejerce escasa inhibían de Salmonellas y Shiguellas y, por
tanto permite la obtención de altos rendimientos de estos germenes.
Características:
Debido a ambos indicadores (azul de bromotimol y fucsina acida), las colonias lactosa-
positivas muestran una expresiva diferencia frente a las colonias lactosa-negatibas. Igual
ocurre en el caso de colonias que fermentan lentamente la lactosa y fácilmente la
sacarosa y la salicina (sustancias reaccionables fermentables con facilidad), lo que impide
hallazgos patógenos falsamente positivos. La combinación de tiosulfato como sustancia
reacciónate y una sal de hierro como indicador, presenta coloración negra a las colonias
H2S-positivas. Una mezcla de sales biliares reprime a una gran parte de flora de
acompañamiento.
• Proteosa-pectona 12,0
• Cloruro de sodio 5,0
• Extracto de levadura 3,0 .
• Levadura 12,0
• Lactosa 12,0 .
• Salicina 2,0
• Sodio tiosulfato 5,0
• Amonio y hierro (111) citrato 1,5 .
• Mezcla de sales biliares 9,0 .
• Azul de bromotimol 0,064 .
• Fucsina acida 0,04 .
• Agar-agar 13,5 .
Preparación:
Disolver 75g/L, no esterilizar al autoclave.

CALDO BHI
Indicaciones:
Para cultivo de diversos microorganismos patógenos exigentes.
Características:
Este medio de cultivo es apropiado para el cultivo de muchas bacterias exigentes como
estreptococos, pneumococos, meningococos y otros.
El caldo cerebro-corazon es especialmente adecuado para el cultivo de estafilococos

destinados al ensayo de plasmacoagulasa y para la realización de hemocultivos. El
crecimiento de germenes anaerobios o microaerofilos resulta decisivamente mejorado por
la adicion de pequeñas cantidades de agar agar.
• lnfusion de cerebro 12,5.
• Infusión de corazón 5,0.
• Proteosa-peptona 10,0
• D (+)glucosa 2,0.
• Cloruro de sodio 5,0.
• Di-sodio hidrogenofosfato 2,5.
Preparación:
Disolver 37 g/L y esterilizar al autoclave.

ANEXO N°12: CROMATOGRAMA DE ACETOGENINAS EN SEMILLAS DE
ANNONA SQUAMOSA COMPARADO CON EL CROMATOGRAMA DE
ANNONA MUR/CATA L. BAJO LAS MISMAS CONDICIONES DE ANÁLISIS.
lB
!MU o Mtl1 ¡1, 81Jom.4~ Ql(m!Mt.:4-iU7$~.t>) L l2,15-cis~A
2.·~
.soo 4
3.~A
400 4.~
300 5.~0
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16 1
.
~·
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O l.r...l-~~_.__'--.1.-"o'. •
! . . - 9.llllllisoün
lO.de~~-w.m
La figura N°49 muestra elcromatograma realizado en un estudio por la lnternational

Journal of Biomedical Science por Haijun Yang y colaboradores este análisis se realizó
bajo las mismas condiciones ensayadas con nuestra muestra.
Fuente: Yang, H. (lntemational Joumal of Biomedical Science) (61).

ANEXO N° 13: REPORTE DE CASOS DE DENGUE Y FIEBRE AMARILLA EN LA REGION CUSCO.
DIRECCIÓN REGIONAL DE SALUD

DIRECCIÓN DE INTELIGENCIA SANITARIA
DIRECCIÓN DE EPIDEMIOLOGIA
CASOS REPORTADOS DE DENGUE AL SISTEMA DE VIGILANCIA EPIDEMIOLÓGICA DIRESA CUSCO 2009-2011
2009 2010 2011
< < <

DEPARTAMENTO PROVINCIA DISTRITO z~j ~
z~<
~~
~
z~<
~~ z~~
o~<
¡:.;¡
~
....::!
o~
¡:.;¡ ~
a5.z c'i.i.z riLz ~ u•z
¡:.;¡ ¡:.;¡ ¡:.;¡ e!) E-<
rJJ¡:il rJJ¡:il rJJ¡:il rJJ¡:il
o o o o
e useo QUISPICANCHI CAMANTI 57 57
MADRE DE DIOS MANU HUEPETUHE 1 4 1 5
MADRE DE DIOS MANU MADRE DE 1
MADRE DE DIOS MANU MANU 1 1
MADRE DE DIOS TAHUAMANU IBERIA 1 1 2
MADRE DE DIOS TAHUAMANU TAHUAMANU 1 1
MADRE DE DIOS TAMBOPATA INAMBARI 1 13 1 14
MADRE DE DIOS TAMBOPATA LABERINTO 3 1 4
MADRE DE DIOS TAMBOPATA TAMBOPATA 1 9 30 5 1 36
Total General 1 12 110 8 2 120
CASOS REPORTADOS DE FIEBRE AMARILLA AL SISTEMA DE VIGILANCI EPIDEMIOLÓGICA
DIRESA CUSCO 2000- 2011
DEPARATAMENTO PROVINCIA DISTRITO 2000 2002 2003 2004 2006 2007 2008 2009 2010 2011
e useo LA CONVENCION ECHARATE 7 4 1 3 4 1 1 3
e useo LA CONVENCION VILCABAMBA 2 6 5
e useo PAUCARTAMBO KOSÑIPATA 1
JUNIN CHAMCHAMAYO PICHANAQUI 1
JUNIN SATIPO PANGOA 1
MADRE DE DIOS TAMBOPATA TAMBOPATA 1
Total General 1 7 6 2 4 10 1 1 5 1
ANEXO N°14: CASOS REGISTRADOS DE FIEBRE TIFOIDEA Y PARA TIFOIDEA EN CONSULTA EXTERNA, POR AÑO,
SEGÚN REGIÓN: 2002- 2010
Casos registrados de fiebre tifoidea y paratifoidea en consulta externa, por año, según región: 2002-2010
Región 2002 2003 2004 2005 2006 2007 2008 2009 2010
Total 49,108 51,349 44,996 51,099 49,266 52,792 51,872 47,210 39,213
Amazonas 4,243 4,832 3,858 3,929 4,749 4,490 6,835 4,896 4,017
Ancash 1,029 1,414 1,367 1,089 927 996 844 801 612
Apurímac 583 508 728 1,048 954 904 939 677 552
Arequipa 1,896 1,814 1,569 1,835 1,464 1,515 1,172 1,080 777
Ayacucho 7,408 9,185 9,278 10,294 9,037 10,218 9,943 8,170 6,719
Cajamarca 10,862 11,057 10,406 10,996 10,854 10,570 8,702 7,094 5,241
Callao 1,254 1,125 660 431 304 373 462 414 423
Cusco 3,515 4,645 3,646 6,489 6,108 7,706 8,661 9,037 7,427
Huancavelica 223 171 213 227 206 328 241 371 257
Huánuco 938 832 748 691 632 1,059 738 663 1,006
lea 707 738 538 774 874 798 892 916 951
Junin 1,283 1,163 1,068 1,253 1,411 1,354 1,060 1,120 1,196
La Libertad 2,503 2,160 1,781 2,358 2,267 2,349 2,071 1,841 1,175
Fuente: MINSA
Elaboración: MVCS- O GEl- Unidad Estadística
PERÚ:Casos registrados de fiebre tifoidea y paratifoidea en consulta externa
(2002. 2009)
51,349 52.792 51,872
2002 2003 2004 2005 2006 2007 2008 2009 2010

Fuente: Ministerio de Salud
Elaboración: MVCS- OGEI -Unidad Estadfstica
ANEXO N°15: ARCHIVO FOTOGRAFICO DE RESULTADOS.
En esta figura se aprecia el

resultado final de todo el
1
proceso de extracción con
solventes de diferente
polaridad hasta obtener las
, Acetogeninas (producto
final}, cuyas características
organolépticas son
corroborados con
___ __j bibliografía.
Fotografía N°01 concentrado de Acetogeninas de Annona muricata L.

(Masasamba).
El resultado después del análisis
'
cromatográfico en capa fina de la muestra
en análisis dió resultado positivo al reactivo
de Kedde. la flecha indica la coloración
rosa tenue que es apreciable a lo largo de
la cromatoplaca ensayada en las tres
corridas simultáneas realizadas, lo cual
indica la presencia de Acetogeninas en la
muestra extraída de semillas de Annona
muricata l. (Masasamba}.
---.-
Fotografía N°02:placa de Silicagel revelada con reactivo de Kedde

En la siguiente figura se muestran los resultados de las pruebas de
solubilidad que se le realizó al concentrado de Acetogeninas, para lo
cual se usaron solventes de diferente polaridad como se aprecia en la
tabla N° 16 que va en orden decreciente de polaridad desde el
solvente mas polar como es el Agua hasta el solvente más apolar como
es el Hexano.
Fotografía N°03: Resultados de las pruebas de solubilidad de las

Acetogeninas de las semillas de Annona muricata L. (Masasamba).
Fuente: Callo J y Farfán K.E

En esta figura se aprecia momentos en el que el sistema
de adquisición de datos del equipo de cromatografía
muestra los espectros UV de las sustancias presentes
en el concentrado de Acetogeninas después de
culminar su análisis.
Fotografía N04: Equipo de HPLC mostrando los espectros UV del

concentrado de Acetogeninas.
Durante la experimentación
se hicieron observaciones
continuas en todos los grupos
experimentales en cuanto a su
movimiento y color que
adquieren progresivamente
las larvas al ser expuestas a las
Fotografía N° 05 de las observaciones del efecto insecticida.

En esta figura se puede observar
.) claramente la diferencia de mortalidad
¡·;n .; J existente entre el grupo experimental
que no fue sometido a ninguna
sustancia (grupo control negativo} y el
grupo experimental 1que fue sometido
a una concentración de Acetogeninas
de 10.000ppm. Se aprecia claramente
la muerte en el grupo experimental
sometido a Acetogeninas, mientras
que en el grupo control negativo las
larvas continúan vivas.
Fotografía N°06: Análisis comparativo de larvas muertas del grupo control

negativo frente al grupo experimental 1 (concentración de Acetogeninas de
10000ppm).
los diferentes criterios

de evaluación del control
microbiológico
resultaron negativos,
evidenciándose en cada
caso la ausencia de
crecimiento
microbiológico en los
respectivos medio de
cultivo.
Fotografía N°07: Control microbiológico del concentrado de Acetogeninas de

Annona muricata L. (Masasamba)
Fuente: Callo J. y Farfán K.E.

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"Año del Centenario de Machu Picchu para el Mundo"

UNIVERSIDAD NACIONAL DE SAN ANTONIO ABAD DEL CUSCO

FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS, FÍSICAS, MATEMATICAS,

CARRERA PROFESIONAL DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA

EVALUACIÓN DE LA ACTIVIDAD INSECTICIDA IN VITRO SOBRE LARVAS DE

que descansa en paz a fado de nuestro

Jeason, por regafarme su amor

)I CDios por áanne fa viáa, guianne,

)I mi queriáo paáre Luis P.áuaráo Paifán

)I mi amaáa maáre 1?,s>sario (}3arrientos (}3ravo

)I toáos mis liennanos: Luis P., IJ{Jt6en ([),

)I{ amor áe mi viáa que siempre está a mi faáo

Al instituto de investigación de la UNSAAC por el apoyo para la realización del

Al Mgt. Carlos Serrano Flores por su tiempo, paciencia, conocimientos, alegrias y

A la M. Cs. Yanet Mendoza Muñoz por sus conocimientos y facilitarnos el

A Jorge y Nancy encargados de/laboratorio de control de calidad (HPLC), darles las

A nuestras queridas familias por todo su apoyo incondicional y por el esfuerzo

A nuestras queridas amigas Betty, Carmen, Deris y amigos por su compañia,

Finalmente, pero no con menor reconocimiento, queremos agradecer a cada una de

1.1. PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA............................................................................................ 1

1.2. FORMULACION DEL PROBLEMA.................................................................................................. 3

1.3.2. OBJETIVOS ESPECIFICOS ....................................................................................................... 4

1.6. LIMITACIONES DE LA INVESTIGACION ................................................................................... 6

2. MARCO TE O RICO ............................................................................................................................................... 7

2.1. VISION HISTORICA ................................................................................................................................... 7

2.2.1. ANTECEDENTES INTERNACIONALES ............................................................................ 8

2.2.3. ANTECEDENTES LOCALES .................................................................................................. 11

2.3. ESTADO DE LA CUESTIÓN ............................................................................................................. 11

2.4. BASES TEÓRICO CIENTÍFICAS ................................................................................................... 12

2.4.1. ASPECTOS DESCRIPTIVOS DE LA ESPECIE VEGETAL Annona

2.4.1.5. Descripción Botánica ........................................................................................................ 14

2.4.1.6. Composición química y valor nutricional del fruto .................................... 14

2.4.1.9. Acetogeninas .......................................................................................................................... 17

2.4.2.1. Fiebre Amarilla ....................................................................................................................... 21

2.4.3. DEL EFECTO ANTIBACTERIANO ...................................................................................... 29

2.4.3.1. Fiebre tifoidea ......................................................................................................................... 29

2.4.3.2. Salmonella typhi ................................................................................................................... 30

2.4.3.8. Interpretación del antibiograma ............................................................................... 43

2.4.3.9. Control microbiológico .................................................................................................... 43

2.4.3.1 O. Fármaco patrón (CIPROFLOXACINO) ............................................................... 44

2.5. GLOSARIO DE TÉRMINOS .............................................................................................................. 49

3. MATERIALES Y METODOS ....................................................................................................................... 53

3.1. MATERIALES BIOLÓGICOS .......................................................................................................... 53

3.1.1. MUESTRA VEGETAL ................................................................................................................... 54

3.1.2. MUESTRAS BIOLÓGICA.......................................................................................................... 54

3.1.3. MUESTRA MICROBIANA.......................................................................................................... 54

3.2. MATERIALES, INSTRUMENTOS Y EQUIPOS..................................................................... 54

3.2.1. MATERIALES Y EQUIPOS DE LABORATORIO ....................................................... 54

3.2.2. SOLVENTES Y REACTIVOS .................................................................................................. 56

3.2.3. MEDIOS DE CULTIVO ................................................................................................................. 56

3.2.4. OTROS MATERIALES................................................................................................................. 56

3.4. DISEÑO METODOLÓGICO DE LA INVESTIGACIÓN ..................................................... 58

3.4.1. DISEÑO METODOLÓGICO...................................................................................................... 58

3.4.1.1. Tipo de investigación ........................................................................................................ 58

3.4.2. DISEÑO DE LA INVESTIGACIÓN ....................................................................................... 58

3.4.2.1. Ensayo de la actividad insecticida .......................................................................... 58

3.4.2.2. Ensayo de la actividad antibacteriana ................................................................. 61

3.5. IDENTIFICACIÓN, DEFINICIÓN Y OPERACIONALIZACIÓN DE

3.5.1. VARIABLES IMPLICADAS....................................................................................................... 62