Interacciones microbianas

Nikoll Bautista Rodriguez(1) , Valentina Tibaduisa (2)

nxbautista@correo.co, atibaduisa@unbosque.edu.co
1-2: Estudiantes facultad de ingenieria , programa ingenieria ambiental-Universidad el
Bosque

I. Resumen
Entre los géneros de los microorganismos considerados antagonistas de patógenos de las plantas se
encuentran Actinomycetes Y Trichoderma, empleados frecuentemente en la agroindustria como
alternativa a plaguicidas inmersos en un contexto de control biológico, el cual se basa en las relaciones
negativas que establecen los microorganismos a partir de una interacción en un hábitat. Debido a esto,
el objetivo de este informe es identificar los posibles biocontroladores y las interacciones que
establecen por medio de técnicas in vitro, para ello se efectuaron las siguientes: enfrentamiento dual ,
Igarashi y Gauze. Se evaluó competencia por nutrientes y espacio, micoparasitismo y porcentaje de
inhibición del crecimiento radial (PICR), en un lapso de 8 dìas a 22 ºC. Como resultado en cuanto a
hongos se obtuvo la inhibición de crecimiento de Fusarium oxysporum, no obstante en la prueba
Igarashi con el agar PDA se observa un pequeño halo de crecimiento del patógeno. Respecto a las
bacterias en la prueba de Gauze, se evidencio el control total de crecimiento sobre E. coli, mientras
que Bacillus sp.reflejo cierta resistencia por Streptomyces spp, por otra parte se obtuvo que S.aureus
no presentó un aparente crecimiento, no obstante dicho efecto del controlador biológico sobre la
bacteria se contrasta con revisión bibliográfica ya que la muestra se contaminó con Trichoderma.
Finalmente se concluye que las relaciones presentes en las pruebas corresponden a las negativas,
denominadas amensalismo, competencia. arreglar

II. Introducción
Los organismos y microorganismos están presentes en todos los ambientes de la naturaleza , dentro
de los que estos realizan diferentes interacciones ; estas pueden ser de dos tipos negativas que se
dividen en el amensalismo: relación entre especies en la que una de las dos resulta perjudicada por la
relación y la otra no experimenta ninguna alteración, es decir que le resulta neutra y la competencia
donde la aptitud o adecuación biológica de uno de los organismos es reducida a consecuencia de la
presencia del otro, en esta existe una limitación de la cantidad de los recursos usados por ambos
organismos o especies . Las interacciones positivas se representan por el mutualismo en la cual los
organismos se benefician mutuamente y logran coexistir en el mismo ambiente y con los mismos
recursos. (Ingraham & Ingraham, 2004)
Las interacciones negativas son las de mayor estudio en la rama de la ingeniería debido a que se usan
como control biológico en diferentes sobre especies patógenas que usualmente generan afectaciones ,
lo que se pretende con este método es tener un mayor control de plagas y enfermedades basado en
interferir su ciclo biológico mediante el uso de sus depredadores, otros organismos o productos
derivados de los mismos. En el desarrollo de esta práctica de laboratorio se pretende realizar pruebas
in vitro en diferentes medios: agar de avena y PDA para determinar el tipo de interacción que efectúan
los microorganismos de diferentes especies , se busca identificar cual es el microorganismo patógeno
y antagonista en cada una de las pruebas. Sin embargo se sabe

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 III. Materiales y Métodos
La práctica de laboratorio se divide en tres partes:
- Enfrentamiento dual
Para esta prueba se hace uso de Trichoderma harzianum y Fusarium oxysporum , inicialmente se
marcan por el reverso de la caja de agar PDA los puntos para la siembra ubicados a 3 cm de distancia
entre ellos y de los bordes , seguidamente haciendo uso de la pipeta se toma un disco de cada
microorganismo y con ayuda de la aguja de disección se siembra en cada uno de los puntos
previamente marcados verificando que el crecimiento del microorganismo quedara en contacto con el
agar , finalmente la muestra se pasa a la incubadora por 7 días a 22°C

- Técnica de Gauze
En esta técnica se hace uso de Streptomyces sp y de Bacillus sp, E.coli , S.aureus. Inicialmente se
marcan tres puntos equidistantes por el reverso de la caja , posteriormente se realiza la siembra
masiva de Streptomyces sp en el agar de avena , seguidamente se deben extraer 3 discos de Bacillus
sp, E.coli , S.aureus con ayuda de la boquilla de la pipeta diferente para cada microorganismo , con
ayuda de una aguja de disección se depositan de forma inversa a los puntos previamente marcados
para finalmente pasarlos a la incubadora por 7 días a 22°C

- Técnica de Igarashi

Para la realización de esta técnica se hace uso de Trichoderma harzianum y Fusarium oxysporum .
Inicialmente se debe marcar un cuadro de 3cm de lado en el centro de la parte del reverso de la caja
de petri; la siembra se realiza en el agar de PDA y Avena. Se realiza la siembra masivamente
Trichoderma harzianum teniendo en cuenta que no se pasa de los límites del cuadrado, seguidamente
en el centro de esté , haciendo uso de la pipeta y la aguja de disección se coloca un disco de
Fusarium oxysporum para finalmente incubar a 22°C por 7 días.

De acuerdo a la metodología que describe Barbosa y Meza en su trabajo, la competencia por

nutrientes y espacio se valoró comparando la velocidad del crecimiento, para esto, se midieron los
radios de crecimiento del patógeno (RCP) y de los antagonistas (RCA), conjuntamente, se evaluó el
porcentaje de inhibición de crecimiento radial (PICR), empleando la fórmula de Ezziyyani et al. (2004),
PICR = (R1 – R2)/ R1 x 100, donde R1 es el radio del patógeno testigo y R2 es el radio del patógeno
en enfrentamiento. Para indicar el micoparasitismo (MICMO)se realizaron observaciones
macroscópicas de los cultivos duales, tomándose como índice de micoparasitismo, la invasión del
antagonista sobre la superficie del micelio patógeno, teniéndose en cuenta la escala de la Tabla 1
creada por Elías y Arcos (1984) citada en el trabajo de Barbosa y Mesa (2009)

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Tabla No. 1 Escala de capacidad antagónica

IV. Resultados

1. Enfrentamiento dual

Porcentaje de inhibición de crecimiento radial

𝑃𝑃𝑃𝑃𝑃𝑃𝑃𝑃𝑃𝑃𝑃 𝑃𝑃𝑃𝑃𝑃 – 𝑃𝑃𝑃𝑃𝑃𝑃𝑃𝑃𝑃𝑃𝑃 𝑃𝑃𝑃𝑃𝑃 𝑃𝑃 𝑃𝑃𝑃𝑃𝑃𝑃𝑃𝑃𝑃ó𝑃

𝑃𝑃𝑃𝑃 = ∗ 100
𝑃𝑃𝑃𝑃𝑃𝑃𝑃𝑃𝑃𝑃𝑃 𝑃𝑃𝑃𝑃𝑃 𝑃𝑃 𝑃𝑃 𝑃𝑃𝑃𝑃𝑃𝑃𝑃

42𝑃𝑃 – 0
𝑃𝑃𝑃𝑃 = ∗ 100
42𝑃𝑃

𝑃𝑃𝑃𝑃 =100%

Microorganismo Crecimiento libre (mm) Crecimiento influenciado

(mm)

Fusarium oxysporum No aplica 0

Trichoderma harzianum Tamaño del control( diametro No aplica

caja de petri)
Tabla No.2 Resultados de enfrentamiento dual

Imagen No.1 Anverso T.enfrentamiento dual en PDA Imagen No.2 Reverso T.enfrentamiento dual en PDA

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 2. Técnica de Gauze
Microorganismo Halos de inhibición Halos de inhibición Halos de inhibición
en mm de E. coli en mm de Bacillus en mm de S. aureus
sp.

Streptomyces sp 0 20 0
Tabla No.3 Resultados para técnica de Gauze

Imagen No.3 Anverso Técnica de Gauze en avena Imagen No.4 Reverso Técnica de Gauze en avena

3. Técnica de Igarashi
Microorganismo mm en crecimiento radial mm en crecimiento radial
agar avena agar PDA

Fusarium oxysporum (RCP) 0 15 mm

Tabla No.4 Resultados para técnica Igarashi

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Imagen No.5 Anverso Técnica Igarashi en agar avena Imagen No.6 Reverso Técnica Igarashi en agar avena

Imagen No.7 Anverso Técnica Igarashi en agar PDA Imagen No.8 Reverso Técnica Igarashi en agar PDA

V. Discusión

En la primera parte de este trabajo se evidencia la eficiencia de trichoderma como microorganismo

antagónico, ya que controló efectivamente el crecimiento de fusarium spp tanto en el enfrentamiento
dual como en la técnica de igarashi, lo anterior se puede evidenciar en las imágenes nº 1, 5 y 7. Esto
se debe esencialmente al tipo de interacción que se dio entre los participantes. Para comprender
dichos resultados es preciso tener en cuenta los mecanismos de acción que ejerce frente al patógeno;
competencia, micoparasitismo y antibiosis.

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La competencia se ve favorecida por las características del agente control biológico como plasticidad
ecológica, velocidad de crecimiento y desarrollo, y por otro lado por factores externos como tipo de
suelo, pH, temperatura, humedad, entre otros. La presencia de forma natural de Trichoderma en
diferentes suelos (agrícolas, forestales, en barbechos), se considera una evidencia de la plasticidad
ecológica de este hongo y de su habilidad como excelente competidor por espacio y recursos
nutricionales. Trichoderma está biológicamente adaptado para una colonización agresiva de los
sustratos y en condiciones adversas para sobrevivir, fundamentalmente, en forma de clamidosporas.
La alta velocidad de crecimiento, abundante esporulación y la amplia gama de sustratos sobre los que
puede crecer, debido a la riqueza de enzimas que posee, hacen que sea muy eficiente como saprófito
y aún más como agente de control biológico.
En cuanto al micoparasitismo, las especies de Trichoderma durante el proceso de micoparasitismo
crecen quimiotrópicamente hacia el hospedante, se adhieren a las hifas del mismo, se enrollan en ellas
frecuentemente y las penetran en ocasiones. La degradación de las paredes celulares del hospedante
se observa en los estados tardíos del proceso parasítico, que conlleva al debilitamiento casi total del
fitopatógeno y finalmente la antibiosis es la acción directa de antibióticos o metabolitos tóxicos
producidos por un microorganismo sobre otro sensible a estos, muchas cepas de Trichoderma
producen metabolitos secundarios volátiles y no volátiles, algunos de los cuales inhiben el desarrollo
de otros microorganismos con los que no hacen contacto físico. Tales sustancias inhibidoras son
consideradas "antibióticos".Infante, D., Martínez, B., González, N., & Reyes, Y. (2009)

Respecto a la prueba de cultivo dual se tiene en cuenta el mecanismo, el cual consiste en el

enfrentamiento del patógeno y el antagonista en una placa de petri, analizando el crecimiento de
ambos que se compara con los controles de crecimiento de cada una de las cepas enfrentadas
consigo mismas. Negrete, P. S. (2012). Teniendo claro lo anterior, el porcentaje de inhibición radial del
patógeno en contraste al reportado en el estudio de Guédez, C., Cañizalez, L., Castillo, C., & Olivar, R.
(2012), es mayor en un 27%, no obstante, dicha comparación solo se efectúa con el fin de realizar un
acercamiento a las posibles aplicaciones de esta práctica ya que no se realizó repetidas veces. Este
resultado se atribuyen a la antibiosis tal como lo describen Vargas-Hoyos, H. A., & Gilchrist-Ramelli, E.
(2015) en su estudio: la actividad enzimática de hongos del género Trichoderma ha sido ampliamente
evaluada y reportada (Busto et al., 1996; Rana et al., 2003; Djonovic et al., 2007; Lopes et al., 2012),
se establece que este hongo es capaz de inhibir el crecimiento de fitopatógenos porque produce
numerosos antibióticos como la trichodermina, la suzukacilina, la alameticina, la dermadina, la
penicilina, los trichotecenos, las trichorzianinas, entre otros (Durán et ál., 2003), probablemente estos
aislamientos antagónicos utilizaron este método de supresión contra el patógeno.

Asimismo, se ha descrito el papel que desempeña durante el proceso de micoparasitismo,

Trichoderma sp. secreta gran cantidad de enzimas degradadoras de pared celular las cuales actúan
directamente sobre los hongos fitopatógenos facilitando la entrada del microorganismo antagonista,
quién obtiene los nutrientes y degrada el microorganismo invadido .Se ha encontrado que las
quitinasas y glucanasas están directamente relacionadas en los mecanismos de micoparasitismo de
las especies de Trichoderma sp, La quitinasa ha sido propuesta como regulador de las reacciones
metabólicas relacionadas con el crecimiento y desarrollo en el micoparásito. Labavitch, J. M. (2011).
Según la tabla No. 1 y de acuerdo a las observaciones macroscópicas registradas en la bitácora se
estima que trichoderma tanto en el enfrentamiento dual como en igarashi, la invasión de la superficie

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de la colonia del hongo del patógeno fue total, lo cual califica a trichoderma en un grado antagónico
tres.

Para la prueba con igarashi se estimó RCA Y RCP en un lapso de 8 días en los dos agares, el valor de
RCA se tomaba como un valor similar al aislamiento de control o testigo, ya que como se observa en
las imágenes 5 y 7, fusarium solo en PDA cuenta con un pequeño halo de crecimiento, es decir que el
resto del medio se encontraba invadido por el antagónico. A partir de ello se determinó la competencia
por nutrientes y espacio, donde se encontró que los aislamientos de Trichoderma se desarrollaron a
una velocidad superior a la de F. oxysporum. En general para las dos pruebas, el crecimiento de
trichoderma correspondía a una estructura micelial donde tanto el anverso como el reverso presenta
una textura pulverulenta.

Finalmente, la técnica de gauze permitió evidenciar la efectividad de Streptomyces

VI. Conclusiones

VII. Referencias bibliográficas

● Negrete, P. S. (2012). Análisis del modo de acción de la capacidad antagónica de Trichoderma
asperellum sobre Colletotrichum gloesporioides y Fusarium sp. Tumbaga, 2(7), 3.
● Infante, D., Martínez, B., González, N., & Reyes, Y. (2009). Mecanismos de acción de Trichoderma
frente a hongos fitopatógenos. Revista de protección vegetal, 24(1), 14-21.
● Ingraham, J., & Ingraham, C. (2004). Introduction to microbiology. Australia: Brooks/Cole.335-338
● Vargas-Hoyos, H. A., & Gilchrist-Ramelli, E. (2015). Producción de enzimas hidrolíticas y actividad
antagónica de Trichoderma asperellum sobre dos cepas de Fusarium aisladas de cultivos de tomate
(Solanum lycopersicum). Revista mexicana de micología, 42, 9-16.
● Paredes Escalante, J. E., Carrillo Facio, J. A., Sañudo Barajas, J. A., Allende Molar, R., García Estrada,
R. S., Gregori, R., & Labavitch, J. M. (2011). Enzimas Líticas Producidas por Trichoderma spp. y su
Correlación con la Inhibición in vitro de Patógenos Causantes de la Pudrición de la Raíz del Garbanzo.
Revista mexicana de fitopatología, 29(1), 73-75.
● Guédez, C., Cañizalez, L., Castillo, C., & Olivar, R. (2012). Evaluación in vitro de aislamientos de
Trichoderma harzianum para el control de Rhizoctonia solani, Sclerotium rolfsii y Fusarium oxysporum
en plantas de tomate. Revista de la Sociedad Venezolana de Microbiología, 32(1), 44-49.
● Meza, C. L. S., Barbosa, R. J. F., Valero, N. O., Carrillo, R. M. G., & Redondo, A. R. P. (2009).
Antagonismo in vitro de Trichoderma harzianum Rifai sobre Fusarium solani (Mart.) Sacc., asociado a
la marchitez en maracuyá. Revista Colombiana de Biotecnología, 10(2), 35-43.
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