UNIVERSITASEnero-junio de 2006

SCIENTIARUM
Revista de la Facultad de Ciencias
Edición especial, Vol. 11, 61-72

INCREMENTO EN INVERNADERO DE LA CALIDAD

Y CANTIDAD DEL FOLLAJE DE LA ALFALFA
(Medicago Sativa L.) VARIEDAD FLORIDA 77
CAUSADO POR LA COMBINACIÓN
DE FERTILIZACIÓN BIOLÓGICA Y QUÍMICA
EN UN SUELO DE LA SERIE BERMEO DE
LA SABANA DE BOGOTÁ

J. Tovar-Franco

Departamento de Nutrición y Bioquímica, Facultad de Ciencias,

Pontificia Universidad Javeriana, Cra. 7ª No. 40-62, Bogotá, Colombia
[email protected]

RESUMEN
En la Sabana de Bogotá existe la necesidad de incrementar la producción de forrajes que den buen rendimiento,
con alta calidad nutricional y que podrían ser un aporte al desarrollo de la industria de concentrados de animales.
El objetivo de este trabajo fue establecer el efecto de la inoculación rizobio-hongo micorriza arbuscular (MA)
sobre la fijación simbiótica de nitrógeno, la absorción de fósforo y el porcentaje de micorrización en alfalfa
(Medicago sativa L.) en un suelo andept de la serie Bermeo de la Sabana de Bogotá. Se seleccionó la variedad de
alfalfa Florida 77 por su adaptabilidad a las condiciones del suelo, la cepa de Rhizobium (Sinorhizobium) meliloti
GR-4 por su habilidad para mejorar el rendimiento y estimular la fijación simbiótica de nitrógeno en esta variedad
y el hongo MA Archaeospora leptoticha por su habilidad para mejorar el rendimiento y estimular la fijación de
fósforo en esta leguminosa.
La inoculación dual (rizobio-hongo MA) demostró eficacia de la fertilización biológica, al incrementar significa-
tivamente (p<0.05) los efectos del encalado y la fertilización química, aumentando el rendimiento en 26% y al
mejorar en el follaje el contenido de nitrógeno (32%) y fósforo (28%). Estos resultados destacan el estímulo de los
dos microsimbiontes en el aprovechamiento de la fertilización química.
La inoculación dual también estimuló la fijación biológica de nitrógeno incrementándose los efectos de la inocu-
lación rizobial al aumentar el rendimiento en 25% y el contenido de nitrógeno del follaje en 22% (p<0.05).
También superó el efecto de la inoculación fúngica aumentando el rendimiento en 31% (p<0.05) y la cantidad de
fósforo absorbido en 34% (p<0.05), demostrándose así los beneficios de la simbiosis tripartita alfalfa-rizobio-
hongo MA en este Andisol.
Palabras clave: Archaeospora leptoticha, alfalfa, andisol, micorriza arbuscular, Rhizobium meliloti.

ABSTRACT
In the savanna of Bogotá there is a need to increase the production of forage that gives a good yield with high
nutritional quality that could contribute to the development of the animal concentrates industry. The objective of
this project was to establish the effect of the dual inoculation (rhizobium-fungi AM) on symbiotic nitrogen fixation,
absorption, and the percentage of mycorhizobial infection in alfalfa (Medicago sativa L.) in an andept soil of the

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Bermeo series from the Savanna of Bogotá. The alfalfa variety, Florida 77, was selected for its adaptability to the
soil conditions, the strain, Rhizobium (Sinorhizobium) meliloti GR-4, for its ability to improve the yield and to
stimulate symbiotic nitrogen fixation in this variety of alfalfa and the arbuscular mycorrhiza (AM) fungus,
Archaeospora leptoticha, for its ability to improve the yield and to stimulate phosphorus fixation in this leguminous
plant (lucerne).

This dual inoculation demonstrated the effectiveness of biological fertilization to increase (p < 0.05) the effects
of lime and chemical fertilization significantly, increasing the yield by 26% while improving the nitrogen (32%)
and phosphorus (28%) content in the foliage. These results underline the ability of the two microsymbionts to
stimulate the utilization of chemical fertilizers.

The dual inoculation also stimulates biological nitrogen fixation because it increases the effects of the rhizobium
inoculation, increasing the yield by 25% and the nitrogen content of the foliage by 22% (p <0.05). It also surpassed
the effect of the fungal inoculation, increasing the yield by 31% (p < 0.05) and the quantity of absorbed phosphorus
by 34% (p <0.05), thus demonstrating the benefits of the tripartite symbiosis, lucerne-rhizobium-AM fungi, in
this Andept (Andean?) soil.

Key words: Archaeospora leptoticha, andept, arbuscular mycorrhiza, lucerne, Rhizobium meliloti.

INTRODUCCIÓN men total del suelo, cumplen múltiples fun-

ciones que tienen un papel muy importante
Colombia es un país esencialmente agrícola, en la fertilidad, y por tanto, en la producción
porque del campo provienen la mayoría de sus agropecuaria. Las asociaciones simbióticas
recursos económicos. A medida que avanza entre los hongos y las bacterias con la raíz
industrialmente y crece su población, se hace en la planta, se presentan como un mecanis-
más grande la demanda de los productos agrí- mo que contribuye notoriamente a la nutri-
colas. El 25,7% del territorio arable de Co- ción de muchas especies vegetales y que
lombia se dedica al cultivo de pastos ofrecen grandes posibilidades para ser utili-
introducidos y naturalizados (DANE, 2004). zados en la sustitución de fertilizantes (Fitter
Sin embargo, la mayoría de estos terrenos pre- y Garbaye, 1994).
sentan acidez, toxicidad debida al aluminio,
deficiencias de nitrógeno, fósforo y otros Las leguminosas también presentan asociacio-
nutrientes, por estas razones se han hecho una nes tripartitas con Rhizobium y hongos
serie de estudios para la rehabilitación de es- micorriza arbuscular (MA), mejorando el de-
tos suelos usando fertilizantes inorgánicos, sarrollo de los nódulos y la fijación de nitró-
para ayudar a establecer los cultivos y mejo- geno, incrementándose el rendimiento de los
rar la producción, pero el costo de los fertili- cultivos y la eficiencia en el uso de fertilizan-
zantes con frecuencia excede el beneficio que tes (Ferrero y Alarcón, 2001; Hernández y
se le pueda sacar al cultivo utilizando esta clase Hernández, 1996; Kawaii y Yamamoto, 1986;
de suelos. Crush, 1974; Powell, 1976; Daft, 1978). Tam-
bién al mejorar la absorción de fósforo por la
Entre los diversos constituyentes del suelo micorriza se mejora el desarrollo radicular, el
están los microorganismos, los cuales a pe- crecimiento de la planta y se acelera la madu-
sar de representar menos del 1% del volu- ración de las cosechas.

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mente se demostró que la cepa de hongo MA

Un sistema de inoculación que incluye una que mejor funcionó, aun compitiendo con la
mezcla de hongos MA con rizobios que se cepa nativa, fue la Archaeospora leptoticha
adhieren a las semillas como las de trébol, (Tovar, 1988).
alfalfa y otras leguminosas forrajeras, aumen-
ta la tasa de germinación en el campo, don- El suelo utilizado no había sido cultivado ni
de una gran proporción de semilla se pierde fertilizado y pertenece al orden Inceptisol;
debido a su pequeño tamaño. Para una re- suborden Andept; gran grupo Dystrandept;
gión en estudio, en este caso la Sabana de subgrupo Andic dystropept de la serie Bermeo.
Bogotá, hay que considerar los siguientes El contenido de humedad (Pw) para el suelo
factores: fertilidad del suelo, dependencia de empleado dio un valor de 23.9 que se consi-
la planta del hongo MA y del rizobio intro- dera alto y explicable por el alto contenido de
ducido, población de hongos MA y rizobios materia orgánica. El porcentaje de nitrógeno
nativos, eficiencia de las cepas rizobiales y orgánico (método Kjeldahl) dio un valor de
micorrizógenas para que, una vez evalua- 1,06% y la relación C/N fue 15,15. Estos da-
dos estos factores, el método de inoculación tos indican un buen contenido de nitrógeno
sea compatible con las prácticas culturales orgánico debido al alto contenido de materia
vigentes y para que el proceso sea econó- orgánica, evidenciando una avanzada
micamente viable. humificación. Por lo tanto, no se espera bue-
na disponibilidad de este nitrógeno ya que la
El objetivo de este trabajo fue establecer, en mineralización en estos suelos andisólicos es
invernadero, el efecto de la inoculación dual lenta debido al alto contenido de material
(rizobio-hongo MA) sobre la fijación alofánico y a la acidez del suelo (Benavides,
simbiótica de nitrógeno, la absorción de fós- 1977). Por esta razón, se decidió adicionar
foro y el porcentaje de micorrización en al- nitrógeno en la forma de (NH4)2SO4 a razón
falfa (Medicago sativa L.): variedad Florida de 180 kg de N/Ha teniendo en cuenta el peso
77 en un suelo andisólico de la serie Bermeo por hectárea correspondiente a un suelo con
de la Sabana de Bogotá. Se seleccionó la cepa densidad aparente de 0.9 g/cm3 (Forsythe y
de Rhizobium (Sinorhizobium) meliloti GR-4 Díaz, 1969; Benavides, 1977).
y el hongo MA Archaeospora leptoticha si-
nónimo de Acaulospora appendícula La determinación de la necesidad de cal se
(Alarcón, 2001) por su habilidad para mejo- hizo por el método de Dunn (Olarte 1979) y
rar el rendimiento en esta variedad y estimu- demostró que el suelo presenta una buena ca-
lar la fijación simbiótica de nitrógeno y fósforo pacidad buffer, porque la adición de 8 T/Ha
respectivamente. de CaCO3 sólo logró elevar el pH de 5.3 (1:1)
hasta 6. Esta capacidad se explica por el alto
MATERIALES Y MÉTODOS contenido de material orgánico del suelo y en
función de estos resultados, se decidió agre-
En ensayo de invernadero se evaluaron los gar cal en los experimentos posteriores, a ra-
efectos de la inoculación dual con Rhizobium zón de 5.4 T/Ha de CaCO3 para llevar el pH a
(Sinorhizobium) meliloti GR-4 y el hongo MA 5.7, buscando eliminar la toxicidad del alu-
Archaeospora leptoticha para la variedad de minio (2.3 meq/100 g) con un mínimo de 4.6
alfalfa Florida 77 en un andisol proveniente T/ha y una reacción del suelo favorable al
de la hacienda Yerbabuena del municipio de desempeño del Rhizobium, del hongo MA y
Subachoque de la Sabana de Bogotá. En tra- la alfalfa, pero sin elevar demasiado los cos-
bajos previos se demostró que esta cepa GR- tos de fertilización química. El calcio inter-
4 presentó el mejor rendimiento y mayor cambiable se aumentó de 11.2 a 18.7 me/100g
eficiencia para esta variedad de alfalfa, igual- de suelo, incrementando la saturación de cal-

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cio después de la fertilización y encalado de sacarosa (1:1). Se centrifugó por cuatro mi-
13 a 23%, dando calcio disponible en un va- nutos a 2.000 rpm y se retiró la capa interme-
lor siete veces mayor al fijado como mínimo dia del gradiente entre el agua y la solución
para la variedad Florida 77 (Horner y Ruelke, de azúcar con una jeringa, se pasó al tamiz
1982). fino (40 µm) para lavar las esporas con agua
corriente. Se recogieron en caja de Petri con
El inóculo de Archaeospora leptoticha se pro- líneas paralelas y se contaron las esporas en-
pagó en potes plásticos, previamente esterili- tre las líneas de la caja. Se hace una observa-
zados con solución de hipoclorito de sodio ción al estereoscopio del sedimento de los
(2%) y lavados con agua destilada. Se selec- tubos para verificar la eficacia de la separa-
cionó como hospedero de reproducción del ción (aumento de 40X).
hongo MA al maíz (Zea mays L.) para dismi-
nuir el peligro de patógenos para legumino- El cálculo de las esporas de Archaeospora
sas que pueden ser iguales o muy parecidos leptoticha se hizo con base a 100 g de suelo
(Sieverding 1984), adicionalmente, el maíz es seco. El número de esporas en 100 g de suelo
de rápido crecimiento y desarrolla una abun- seco es igual al número de esporas en 10 g de
dante raíz que es rápidamente infectada por suelo húmedo dividido por los gramos de sue-
hongos MA (Hayman, et al., 1976; Owusu- lo seco en 10 g de suelo húmedo. Como crite-
Bennoah y Mosse, 1979; Skipper y Smith, rio de calidad del inóculo se tomó el número
1979). Se sembraron cinco semillas de maíz de esporas por gramo de suelo seco
desinfectadas superficialmente con una solu- (Sieverding, 1983) de la siguiente manera: >
ción de HgCl2 ácida (0,1%)(Vincent, 1975). 10 esporas/g de suelo seco (alto); 1-10 espo-
Se llevaron controles del inóculo observando ras/g de suelo seco (mediano); < 1 espora / g
la infección a un mes y dos meses después de de suelo seco (bajo). Se utilizó inóculo de
la siembra, utilizando la técnica de clareado Archaeospora leptoticha con más de 19 es-
con KOH y tinción con azul de tripano poras/g de suelo seco (alto). Se hizo también
(Roncadori y Hussey, 1982). recuento de las esporas del andisol, para veri-
ficar la cantidad de esporas y las posibles es-
El inóculo de Archaeospora leptoticha para pecies de hongos MA nativos que dio 6
los ensayos con alfalfa consistió de suelo y esporas/g de suelo seco (mediano).
las raíces de maíz infectadas finamente corta-
das, provenientes de plantas con 4 meses de Se empleó un diseño al azar con cinco
crecimiento. Los potes se mantuvieron en in- replicaciones (5 potes) que incluyó los si-
vernadero, con humedad del 60% de la capa- guientes tratamientos: un testigo sin encala-
cidad de campo con agua destilada. Para do, ni fertilización basal y sin inocular (T);
evaluar el inóculo una vez homogeneizado, un testigo con encalado, con fertilización basal
se le hizo un conteo de esporas (Abbot y y sin inocular (EF); un control con encalado,
Robson, 1985). Las esporas se separaron del con fertilización basal, con adición de nitra-
suelo y las raíces de acuerdo al método de tos (200 kg de N/Ha) como NaNO3 (C); un
Ohms y Jenkins (Smith y Skipper, 1979; inoculado con encalado, con fertilización
Sieverding, 1983). Se utilizó 50 g del inóculo basal y la cepa de Rhizobium (Sinorhizobium)
de hongo MA, se licuó con agua por tres mi- meliloti GR-4 (Rz); un inoculado con enca-
nutos, el sobrenadante se volcó a una serie lado, con fertilización basal y Archaeospora
de tamices de 315, 125, 63 y 40 µm. Para leptoticha (MA) y un inoculado con encala-
eliminar la materia orgánica, las esporas se do, con fertilización basal y la inoculación
pasaron con aproximadamente 30 ml de agua dual con la cepa de Rhizobium (Sinorhizo-
al tubo de centrifugación, después se inyectó bium) meliloti GR-4 y el inóculo de Ar-
al fondo del tubo 25 ml de una solución de chaeospora leptoticha (D).

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coloreadas escogidas al azar, las cuales fue-

En los tratamientos inoculados con Archaeos- ron montadas en lactofenol y wallerita. Se
pora leptoticha, se agregó 20 g de inóculo buscó la presencia de diferentes estructuras
por pote (>400 esporas). El inóculo se es- intraradiculares (hifas, vesículas, arbúsculos y
parció a 5 cm de la superficie y se cubrió esporas) y se calculó en porcentaje de infec-
con suelo. El rizobio empleado fue pasado ción como el número de campos infectados
por planta in vitro y aislado del nódulo. En por 100 dividido por el número de campos
los tratamientos con rizobio, las semillas de totales. La intensidad de la micorrización se
alfalfa se desinfectaron superficialmente y se estimó por el método de Kormanic (Roncadori
inocularon sumergiéndolas una hora antes de y Hussey, 1982) así: categoría 1, para raíces con
sembrar, en un cultivo de rizobio suspendi- pequeños puntos de colonización ampliamente
do en líquido Byma cuyo recuento en placa separados; categoría 2, para colonizaciones
fue de 11x109 células viables/ml (Vincent, mayores más uniformemente distribuidas en
1975). Una vez sembradas las semillas (7 por la raíz, pero poco agregadas; categoría 3, cuan-
pote) se les adicionó 10 ml del mismo culti- do las raíces son abundante y uniformemente
vo, a los 15 días se dejaron cinco plantas por colonizadas.
pote haciéndose el control de malezas ma-
nualmente. El análisis estadístico incluye un análisis
multivariado, MANOVA (Morrison, 1976), un
Las plantas crecieron 90 días en invernadero, análisis de rango múltiple de Duncan y se
a temperatura ambiente (14°C) y humedad busca correlación entre los diferentes
relativa del 80%, manteniendo la humedad del parámetros de medida.
suelo al 60% de la capacidad de campo, con
agua corriente. Posteriormente, la parte aérea RESULTADOS Y DISCUSIÓN
se secó a 60°C durante 24 horas para deter-
minar el rendimiento (mg/tratamiento), con- Efecto de la inoculación dual sobre la
secutivamente se molió y se digirió por el infección micorrizal
método micro Kjeldahl Gunning (Le Poidevi
y Robinson, 1964) para determinar el nitró- Las observaciones y los resultados de la de-
geno en la materia seca total (NitT) por el terminación de la infección micorrizal a los
método de micro Kjeldahl (Vincent, 1975) y 90 días, se presentan en la tabla 1. La pobla-
el fósforo en la materia seca total (PhoT) por ción micorrizal nativa fue abundante y activa
el método de Fogg y Wilkinson (Fogg y como puede comprobarse del porcentaje de
Wilkinson, 1958). Los resultados se expresan infección 83% y la intensidad 2, del tratamien-
en miligramos de nitrógeno o de fósforo por to testigo sin fertilización ni encalado (T). Por
tratamiento. Los porcentajes de nitrógeno o otro lado, el tratamiento encalado y fertiliza-
de fósforo se expresan en función de los do (EF) no causó variaciones; sin embargo,
miligramos de la parte aérea. en el tratamiento con adición de nitratos (C)
el porcentaje de infección bajó en un 19% con
A las raíces se les hizo un conteo de nódulos, respecto a T y la intensidad que se redujo a 1.
posteriormente se clarearon y tiñeron para Este efecto detrimente de la fertilización
determinar el porcentaje de infección del hon- nitrogenada sobre la micorrización es bien
go. El porcentaje de infección se hizo por ob- conocido y reportado en la bibliografía
servación al microscopio de campo claro con (Chambers, 1980; Lopes, et al., 1983). Los
un aumento de 100X por el método de tratamientos de inoculación con rizobio (Rz)
Nicolson y Baylis (Saif, 1984) cuantificándose y el de inoculación con hongo MA (MA), in-
el número de campos infectados sobre un to- crementaron ligeramente (10%) la infección
tal de 30 por lámina, con 10 pedazos de raíces con respecto al T reflejándose en la intensi-

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dad de la micorrización que subió a 3. El tra- portado por la literatura para la variedad
tamiento con la inoculación dual rizobio y Aragón (5.53%), para suelos neutro-alcalinos
Archaeospora leptoticha (D) causó un 14% (Azcon-Aguilar, 1981) y la variedad European
más de infección con respecto a T, mejorando (3,7%) en un suelo ácido y con bajo fósforo
la intensidad a 3. Como se mostrara más ade- disponible (8-14 ppm)(Owusu-Bennoah y
lante el efecto fue apreciable sobre la canti- Mosse, 1979). El porcentaje bajo de nitróge-
dad de fósforo absorbido por la planta con no en el follaje es explicable debido a que no
incremento del 46%. se observó nodulación, posiblemente por la
falta de una población nativa infectiva, mos-
Se debe destacar que en cinco tratamientos se trando la necesidad de fertilización química o
observaron escasas esporas intrarradiculares, biológica, como se demostró en el porcentaje
debido probablemente al poco avance de la de nitrógeno en los tratamientos C y Rz, en
micorrización. No se observó expresión de una los que sí se incrementó. Aunque en el trata-
población rizobial nativa, ni abundante, ni miento T el porcentaje de infección micorri-
efectiva, puesto que no se encontró nodulación zal fue alto (83,3%), el porcentaje de fósforo
en los tratamientos T, EF y C. (%P) en la parte aérea (0,22%), no se eviden-
ciaron diferencias estadísticamente significa-
tivas con los demás tratamientos. No obstante,
Efecto sobre el rendimiento, cantidad de el%P es mayor que el reportado para otras va-
nitrógeno y cantidad de fósforo riedades, de 0,16 a 0,18% en tres andisoles
Los resultados se presentan en la tabla 2. En (Philippe, et al., 1985) y 0,17% para alfalfa
el tratamiento T, el porcentaje de nitrógeno micorrizada y 0,09% para plantas no micorri-
(2.44%), fue significativamente inferior al de zadas crecidas en un suelo turboso (Hayman,
los otros tratamientos y más bajo que el re- 1985). Se ha reportado que el%P en la parte

Tabla 1
Micorrización de Medicago sativa L. variedad florida 77 en respuesta a la inoculación de
Rhizobium sp. y Archaeospora leptoticha a los 90 días de crecimiento. Se presentan los
resultados promedio ± SEM provenientes de 30 contajes por tratamiento. Hf = hifas; V =
vesículas; A = arbúsculos; E = esporas; los N = nódulos son provenientes del contaje de 25
plantas por tratamiento. *Tratamientos encalados y con fertilización basal. La intensidad se
calculó de acuerdo al método de Kormanic (Roncadori y Hussey, 1982).

Observaciones
%
Tratamiento infección H V A E N Intensidad
Testigo 83 ± 12 a + + + 0 2
Encalado y fertilizado* 87 ± 6 a + + + + 0 2
Control con nitratos* 64 ± 17 b + + + 0 1
Rhizobium* 94 ± 3 a + + + + 12 ± 4 3
Hongo MVA* 93 ± 5 a + + + + 0 3
Rhizobium + Hongo MVA* 97 ± 3 a + + + 16 ± 4 3
Valores con la misma letra no son significativamente diferentes (P<0.05).

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aérea de la planta en etapa de floración con 1977). La cantidad de fósforo absorbido en

síntomas de deficiencia entre 0,14-0,17% y el follaje de todos los tratamientos presentó
un rango intermedio entre 0,22-0,24% diferencias estadísticas significativas inferio-
(Chapman, 1966). El%P en la variedad Flori- res al determinado en el tratamiento de ino-
da 77 es aproximadamente el doble de la de- culación dual (D).
terminada para la variedad AS-13 (0,1-0,4%),
en el mismo suelo en el mismo período de El tratamiento EF, sólo produjo un incremen-
tiempo (Tovar, 1988), indicando que la po- to en el rendimiento no significativo respecto
blación fungal nativa es eficiente. Sin embar- a T del 7%. El encalado que sólo subió el pH
go, el%P podría explicar la falta de a 5.7, podría explicar porqué no se incrementó
nodulación, recordemos que se ha sugerido aun más el rendimiento. La adición extra de
que%P inferiores a 0,2% en alfalfa causan nitratos en el tratamiento C incrementó el ren-
nodulación despreciable (Barea et al., 1980). dimiento respecto a T en un 13% no signifi-
Los efectos detrimentes sobre la nodulación cativo, aunque sus efectos sí fueron
y la fijación por la alfalfa en suelos con bajo significativos en cantidad de nitrógeno. Sin
pH aun en la ausencia de niveles tóxicos de embargo, alcanzó a inhibir significativamen-
aluminio y manganeso han sido demostra- te la infección micorrizal en 20%. Es necesa-
dos en experimentos de campo (Rice et al., rio recalcar aquí, que la fertilización se calculó

Tabla 2
Efecto de la inoculación de Rhizobium sp. y Archaeospora leptoticha sobre el rendimiento,
la absorción de N y P en Medicago sativa variedad Florida 77 a los 90 días. Se presentan los
resultados promedio provenientes de 5 réplicas por tratamiento. (*) T = testigo sin
inocular; EF = encalado y fertilizado; C = control con nitratos; Rz = inoculado con
rizobio; MA = inoculado con Micorriza; D = inoculación dual.

Tratamiento T* EF* C* Rz* MA* D*

Rendimiento de la parte 1007,9 b 1082,0 b 1142,5 b 1094,5 b 1016,2 b 1468,0 a

aérea (mg/tratamiento)
Rendimiento relativo al 100 107 113 109 101 146
testigo (%)
% nitrógeno en el follaje 2,41 c 2,46 bc 2,97 a 2,80 ab 2,72 abc 2,68 bc
Cantidad de nitrógeno 24,3 c 26,6 bc 33,9 ab 30,7 bc 27,7 bc 39,4 a
(mg/tratamiento)
Absorción relativa de 100 109 139 126 114 162
nitrógeno (%)
% fósforo en el follaje 0,22 a 0,23 a 0,24 a 0,24 a 0,23 a 0,24 a
Cantidad de fósforo 2,2 b 2,5 b 2,7 b 2,6 b 2,3 b 3,5 a
absorbido (mg/tratamiento)
Absorción relativa de 100 114 123 118 104 159
fósforo (%)

Valores con la misma letra no son significativamente diferentes (p<0,05)

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para llenar las necesidades mínimas para el miento, cantidad de nitrógeno y cantidad de
cultivo de alfalfa, pero sin que se llegaran a fósforo con valores significativamente supe-
inhibir los procesos simbióticos microbianos. riores (p<0.05) que los demás tratamientos.
Este tratamiento aumentó el rendimiento en
En el tratamiento de inoculación con la cepa 31% con respecto a T y en 22% respecto al
de Rhizobium (Sinorhizobium) meliloti GR-4 tratamiento C. Estos datos demuestran cómo
(Rz), se produjo una nodulación escasa, de 2 la fertilización biológica incrementa los efec-
nódulos por planta en promedio, con poco tos de un encalado y fertilización química. La
desarrollo y escasa coloración rosada, aunque cantidad de nitrógeno en el follaje fue supe-
el porcentaje de nitrógeno fue alfo y signifi- rior en un 38% respecto al tratamiento T y en
cativamente superior al del tratamiento T e 32% respecto al tratamiento EF. La cantidad
igual al C. La cantidad de nitrógeno en el fo- de fósforo fue mayor en un 37% que en trata-
llaje se incrementó en forma significativa e miento T y en un 28% que el EF. Estos son
igual a lo logrado por la fertilización los resultados del estímulo de la inoculación
nitrogenada inorgánica en el tratamiento C y dual sobre los efectos de un encalado y ferti-
su efecto fue un 67% del logrado por ésta. Una lización basal. Aunque la nodulación fue es-
explicación a la escasa nodulación, podría casa, 3 nódulos/planta en promedio, hubo
darse en el hecho de que el pH del suelo (5.7) estímulo de la micorriza introducida causan-
afectó la sobrevivencia del rizobio, que se ha do el mayor rendimiento y contenido de
reportado, es muy susceptible a valores de pH nutrientes y en consecuencia mejorando la
inferiores a 6 (Rice 1977; Wagner, 1978; FAO, calidad del follaje. Probablemente los resul-
1984). Sería conveniente en trabajos futuros, tados de la inoculación dual habrían sido aun
experimentar a pHs superiores y determinar mayores si se hubiera logrado un pH más ele-
la infectividad, efectividad y sobrevivencia de vado en el suelo que hubiera favorecido una
la misma cepa en este suelo. Este tratamiento nodulación más abundante.
(Rz) no produjo incrementos significativos ni
en la infección micorrizal, ni en la cantidad
En otro trabajo con alfalfa la variedad Aragón
de fósforo en el tejido.
fue inoculada con Glomus mosseae y
Rhizobium meliloti 203, se mostró que cuan-
La inoculación con Archaeospora leptoticha
do el fósforo es el factor limitante de la acti-
(MA) causó un rendimiento que fue signifi-
vidad rizobial, las plantas no responden a la
cativamente igual a los demás tratamientos
inoculación con rizobio a menos que fueran
excepto al tratamiento D. El porcentaje de
inoculadas con micorriza. En este caso la ino-
nitrógeno fue también significativamente
culación dual produjo el doble de rendimien-
igual a los C y Rz, hecho que se explica por-
tos que en el tratamiento sin inoculación
qué los hongos MA también absorben otros
(Halos, et al., 1982; Azcon-Aguilar y Barea,
nutrientes, en este caso nitrógeno, como se
1981; Azcon-Aguilar y Barea, 1985). Los
reporta en la literatura para la alfalfa (Saif,
mismos autores en otro trabajo sobre suelos
1984). En cuanto a la infección micorrizal y
fijadores de fosfatos, lograron incrementos del
cantidad de fósforo fueron iguales a los de-
40% en rendimiento, 37% en cantidad de ni-
más tratamientos (p<0.05) demostrando, la
trógeno y 44% en la cantidad de fósforo en la
poca competencia con las cepas nativas. Las
alfalfa crecida 7 semanas (Azcon-Aguilar et
cantidades de nitrógeno y fósforo fueron sig-
al., 1979). Estos resultados son muy simila-
nificativamente menores que las obtenidas por
res a los reportados en este artículo.
el tratamiento D.

La inoculación dual con rizobio y hongo MA Los valores de rendimiento de la parte aérea
(D), mostró su efectividad sobre el rendi- correlacionaron significativamente (p<0.001)

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 Enero-junio de 2006

con las cantidades de nitrógeno (r = 0.87) y sugerencias, al señor Raúl Torres por su cola-
de fósforo (r = 0.85) y éstas a su vez boración en la consecución de los inóculos de
correlacionadas entre sí (r = 0.79). Estos re- hongos MA y a Guillermo Sarmiento Lozano
sultados indican que el rendimiento es fun- por su colaboración en la consecución del sue-
ción de estos dos elementos limitantes en este lo empleado.
suelo. El análisis multivariado MANOVA,
confirmó alta interacción entre las variables LITERATURA CITADA
de respuesta (rendimiento, nitrógeno y fósfo-
ro), según criterio de Wilkinson (P = 0.009), ABBOT, L. y ROBSON, A. 1985. The effect of
Pillai’s trace (P = 0.0032) y Hotelling Lawley mycorrizhae on plant growth. VA
trace (p = 0.0003). Mycorrizhae. Powell, C. y Bagyaraj, D.
Boca Ratón, Florida. CRC Press, Inc.
113-130.
CONCLUSIONES
ALARCÓN, A. 2001. Comentario: Actualización
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con Rhizobium (Sinorhizobium) meliloti, cepa al editor. Terra. 19 (1):103-104.
GR-4 y con el inóculo con hongo MA
Archaeospora leptoticha, demostró la efica- AZCON-AGUILAR, C.; AZCON, R. y BAREA, J.
cia de la fertilización biológica, al incremen- 1979. Endomycorrhizal fungi and Rhizo-
tar los efectos del encalado y fertilización bium as biological fertilizer for Medicago
química, aumentando el rendimiento y al me- sativa in normal cultivation. Nature (Lon-
jorar en el follaje el contenido de nitrógeno y don) 279: 325.
fósforo. Destacándose el estímulo de los dos
microsimbiontes en el aprovechamiento de la AZCON-AGUILAR, C. y BAREA, J. 1981. Field
fertilización basal. inoculation of Medicago with VA-myc-
orrhiza and Rhizobium in phosphate fix-
La inoculación dual también estimuló la fija- ing agricultural soil. Soil Biol Biochem
ción simbiótica de nitrógeno porque 13: 19-22.
incrementó los efectos de la inoculación
rizobial al aumentar el rendimiento y el con- AZCON-AGUILAR, C. y BAREA, J. 1985. The role
tenido de nitrógeno del follaje. También su- of vesicular arbuscular mycorrhiza in N2-
peró el efecto de la inoculación fungal fixed by legume-Rhizobium systems in
aumentando el rendimiento y la cantidad de phosphate fixing agricultural soils. In:
fósforo absorbido, demostrándose así los be- Nuclear techniques to study the role
neficios de la simbiosis tripartita alfalfa- of mycorrhiza in increasing food crop
Rhizobium-hongo MA. production. IAEA-TECDOC-338 Viena
133-152.

AGRADECIMIENTOS AZCON, R.; RUBIO, R. y BAREA, J. 1991. Se-

lective interactions between different
Este estudio fue realizado en los Laboratorios species of mycorrhizal fungi and Rhizo-
de Química de Suelos de la Universidad Na- bium meliloti strains, and their effects on
cional de Colombia, gracias al proyecto mul- growth, N2-fixation (15N) and nutrition of
tinacional de Química de la Organización de Medicago sativa L. New Phytol 117, 399-
los Estados Americanos (OEA) y fue dirigido 404.
por la doctora Nery Mora de González. Tam-
bién expresar nuestro agradecimiento a doc- BAREA, J.; ESCUDERO, J. y AZCON-AGUILAR, C.
tor Ewald Sieverding por sus comentarios y 1980. Effect of introduced and indig-

69
Universitas Scientiarum - Edición especial, Vol 11, 61-72

enous VA-mycorrhizal fungi on nodu- FOGG, D. y WILKINSON, N. 1958. Colorimetric

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