Alburqueque & Gusqui: Eficacia de fungicidas químicos para el control in vitro de diferentes fitopatógenos en condiciones controladas

Arnaldoa 25 (2): 489-498, 2018 ISSN: 1815-8242 (edición impresa)

http://doi.org/10.22497/arnaldoa.252.25209 ISSN: 2413-3299 (edición online)

Eficacia de fungicidas químicos para el

control in vitro de diferentes fitopatógenos en
condiciones controladas

Effectiveness of chemical fungicides for in vitro

control of different phytopathogens in controlled
conditions

Diana Alburqueque Andrade & Roberto Gusqui Mata

Especialidad de Manejo Integrado de Plagas, Escuela de Posgrado, Universidad Nacional Agraria La Molina.
Av. La Molina s/n, La Molina, Lima, PERÚ
diana_16065@hotmail.com; robertogm_83@yahoo.es

25 (2): Mayo - Agosto, 2018 489

Alburqueque & Gusqui: Eficacia de fungicidas químicos para el control in vitro de diferentes fitopatógenos en condiciones controladas

Recibido 20-IV-2018; aceptado: 28-V-2018; publicado online: 30-VII-2018; publicado impreso: 30-VIII-2018
Resumen
El Perú presenta un alto potencial productivo debido a las condiciones climáticas idóneas y
un suelo favorable para el cultivo de diferentes productos de agroexportación, pero los problemas
fitosanitarios causados por distintos patógenos en las diferentes etapas fenológicas del cultivo
generan mermas de importancia en calidad y cantidad de producto cosechado en campo y
en poscosecha. Por ello, esta investigación tuvo como objetivo medir la eficacia de productos
químicos mediante la prueba de alimento envenenado in vitro. Se probaron siete ingredientes
activos: tiabendazol, azoxistrobin, carbendazim, sulfato de cobre pentahidratado, fosfito de cobre,
clorotalonil y extracto de Melaleuca alternifolia. Para ello, se evaluó el porcentaje de inhibición de
crecimiento de micelio (PICM); en esta prueba in vitro se obtuvo un 100 % PICM para: R. solani con
sulfato de cobre pentahidratado; P. infestans y S. sclerotiorum con azoxistrobin; R. solani, F. oxysporum,
L. theobromae, S. sclerotiorum, C. gloeosporoides y Penicillium spp. con carbendazim; F. oxysporum, B.
cinerea, L. theobromae, S. sclerotiorum con fosfito de cobre; R. solani, F. oxysporum, L. theobromae y
Penicillium spp. con tiabendazol. El extracto de Melaleuca alternifolia presentó el menor PICM para F.
oxysporum y R. solani con una inhibición del patógeno del 69,50 y 64,75 % respectivamente.

Palabras clave: tiabendazol, azoxistrobin, carbendazim, sulfato de cobre pentahidratado, fosfito

de cobre, clorotalonil, in vitro, R. solani, P. infestans, S. sclerotiorum, F. oxysporum, L. theobromae, C.
gloeosporoides, B. cinerea, Penicillium spp.

Abstract
Peru has a high productive potential due to ideal climatic conditions and a favorable soil for
the cultivation of different agricultural export products, but the phytosanitary problems caused
by different pathogens in the different phenological stages of the crop generate significant losses
in quality and quantity of product harvested in the field and after harvest. Therefore, this research
aimed to measure the effectiveness of chemical products through the poisoned food test. In vitro,
seven active ingredients were tested: tiabendazole, azoxystrobin, carbendazim, copper sulfate
pentahydrate, copper phosphite, chlorothalonil and extract of Melaleuca alternifolia. For this, the
percentage of inhibition of mycelial growth (PIMG) was evaluated. In this in vitro test, 100 % PIMG
was obtained for: R. solani with copper sulfate pentahydrate; P. infestans and S. sclerotiorum with
azoxystrobin; R. solani, F. oxysporum, L. theobromae, S. sclerotiorum, C. gloeosporoides and Penicillium
spp. with carbendazim; F. oxysporum, B. cinerea, L. theobromae, S. sclerotiorum with copper phosphite;
R. solani, F. oxysporum, L. theobromae and Penicillium spp. with tiabendazole. The extract of Melaleuca
alternifolia had the lowest PIMG for F. oxysporum and R. solani with an inhibition of the pathogen of
69.50 and 64.75 % respectively.

Keywords: tiabendazole, azoxystrobin, carbendazim, copper sulfate pentahydrate, copper

phosphite, chlorothalonil, in vitro, R. solani, P. infestans, S. sclerotiorum, F. oxysporum, L. theobromae,
C. gloeosporoides, B. cinerea, Penicillium spp.

Citación: Alburqueque, D. & R. Gusqui. 2018. Eficacia de fungicidas químicos para el control in vitro
de diferentes fitopatógenos en condiciones controladas. Arnaldoa 25 (2): 489-498. doi: http://doi.
org/10.22497/arnaldoa.252.25209

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Alburqueque & Gusqui: Eficacia de fungicidas químicos para el control in vitro de diferentes fitopatógenos en condiciones controladas

Introducción L.), Colletotrichum gloeosporoide de “mango”

(Mangifera indica), Sclerotinia sclerotiorum de
En la agricultura mundial los
“pimiento” (Capsicum annum L.), Penicillun
hongos fitopatógenos son causantes de
spp. de “mandarina” (Citrus reticulata)
enfermedades en pre y poscosecha en cultivos
mientras que, para Phythophthora spp. se
de hortalizas, cereales y frutas. Generando
utilizó un cultivo puro aislado previamente
pérdidas económicas cuantiosas (Agrios,
en el laboratorio de fitopatología de la
2005). Una amplia gama de estos hongos
UNALM.
son causantes del deterioro patológico en
una variedad de productos y se estiman Aislamiento e identificación de hongos
perdidas de 5-25% en paises desarrollados patógenos. Las muestras se obtuvieron
y 20-50% en paises en desarrollo (FHIA, del campo del Programa de Frutales y
2007). Las enfermedades en las plantas hortalizas de la UNALM, estas muestras
son una limitante para cualquier cultivo fueron desinfestadas con hipoclorito
(Investigación y Desarrollo, 2010). Los de sodio al 1% por 1 minuto y fueron
hongos de los géneros Phythophthora enjuagadas 3 veces con agua destilada y
spp., Fusarium spp., Colletotrichum spp., secadas en la cámara de flujo laminar por
Rhizoctonia spp., Botrytis spp., Sclerotinia un lapso de 30 minutos. Posteriormente,
spp., Lasiodiplodia spp. y Penicillium spp. se cortaron porciones de tejidos de tallo y
constituyen un grupo de patógenos de ramas con síntomas del patógeno para el
mucha importancia en ocasionar diferentes caso de (L. teobromae, R. solani, F. oxysporum,
enfermedades en cultivos de hortalizas y S. sclerotiorum). Fracciones de micelio para
frutales debido a su gran número y ha su el caso de (B. cinerea, C. gloeosporoides).
enorme capacidad de reproducción (García, Se sembraron en placas Petri con papa,
2004). Los hospederos de estos hongos dextrosa, agar (PDA) + azitromicina y
pueden ser la semilla, la parte vegetativa, colocaron en una incubadora a 25°C hasta
frutos y las malezas adyacentes al cultivo el desarrollo de micelio. Al cabo de tres a
(Dávila, 2000). Por ello, el objetivo de esta siete días después, se obtuvieron colonias
investigación es conocer la eficacia de axénicas y se realizó la identificación
fungicidas químicos para el control de morfológica utilizando la clave de Barnett
hongos que causan enfermedad a diferentes y Hunter (1972). Para el caso de Penicillium
cultivos de exportación. spp. Se realizó un cultivo monospórico.
Phythophthora spp. fue proporcionado por
Materiales y métodos un alumno de Post grado de la especialidad
El presente trabajo de investigación se de Fitopatología de la UNALM. Estos
realizó en el laboratorio de Fitopatología de últimos patógenos fueron sembrados
la Universidad Nacional Agraria La Molina medio PDA, al igual que el resto de hongos
(UNALM). e incubados a la misma temperatura.

Especies de hongos y origen. Se aisló Pruebas de eficacia de fungicidas

Lasiodiplodia teobromae de “palto” (Persea químicos. Se empleó la técnica de alimento
americana Will), Rhizoctonia solani de “frijól” envenenamiento (Dhingra & Sinclair, 1985)
(Phaseolus vulgaris L), Fusarium oxysporum que consistió en, colocar discos de 5 mm de
de “tomate” (Solanum licopersicum Will), diámetro con micelio del patógeno al centro
Botrytis cinerea de “fresa” (Fragaria vesca de la placa Petri contenido con medio
agar papa dextrosa (PDA) más fungicida

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Alburqueque & Gusqui: Eficacia de fungicidas químicos para el control in vitro de diferentes fitopatógenos en condiciones controladas

a la dosis comerciales (Tabla 1). Como control del patógeno, se expresó como el
testigo se empleó discos del patógeno porcentaje de inhibición del crecimiento
sobre medio PDA sin fungicida. Todas las micelial (PICM). Para esto se empleó la
placas sembradas fueron incubadas a 25°C fórmula de Pandey et al. (1982) que se
y se evaluaron diariamente midiéndose el muestra a continuación.
crecimiento radial del patógeno en (mm)
Donde:
de los 4 cuadrantes trazados en la parte
posterior de las placas Petri. La evaluación
R1 − R2
concluyó cuando el micelio del patógeno I= ∗ 100
cubrió totalmente la placa del tratamiento
R1
testigo. La eficacia de los fungicidas en el

Tabla 1: Fungicidas químicos utilizados en las prueba de alimento envenenado.

Grupo químico Ingrediente activo Dosis comercial

Benzimidazoles Tiabendazol 200 cc/cilindro
Estrobirulinas Azoxistrobin 200 g/cilindro
Benzimidazoles Carbendazim 300 cc/cilindro
Inorgánico Sulfato de cobre 5 H2O 500 cc/cilindro
Inorgánico Fosfito cobre 2 lt/cilindro
Cloro nitrilo Clorotalonil 500 cc/cilindro
Hidrocarburos terpenicos Extracto de Melaleuca 500 cc/cilindro
alternifolia

Diseño Experimental. Se empleó un diseño completamente al azar (DCA), el cual tuvo

07 tratamientos (con fungicida), 01 testigo (sin fungicida) y cada tratamiento con 05
repeticiones. Se utilizó el programa estadístico SAS versión 9,1 para procesar los datos y se
analizaron mediante un ANOVA y comparación de medias a través de la prueba de Tukey
(α≤0.05).

Resultados y discusión
Tabla 2. Porcentaje de Inhibición de crecimiento micelial (PICM) in vitro en medio
envenenado

Mela-
Car- Tia-
Sulfato Azoxis- Cloro- leuca Fosfito
Tratamiento(*) ben- ben-
cobre 5 trobin talonil alter- cobre
dazim dazol
H2O nifolia
T1: Rhizoctonia 25.25 e 52.25 c 65.25 d 64.75 a 100 a 36.00 b 100 a
solani
T2: Fusarium 72.25 c 100 a 93.00 ab 69.50 a 100 a 100 a 100 a
oxysporum

492 25 (2): Mayo - Agosto, 2018

Alburqueque & Gusqui: Eficacia de fungicidas químicos para el control in vitro de diferentes fitopatógenos en condiciones controladas

T3: Botrytis
67.5 c 49 c 51.25 e 35.00 d 23.50 c 100 a 37.25 b
cinerea
T4:Lasiodiplodia 73.75 c 70.25 b 61.00 d 5.75 e 100 a 100 a 100 a
theobromae
T5: Sclerotinia 26.75 e 100 a 96.25 a 47.75 c 100 a 100 a 94.50 a
sclerotiorum
T6:Colletotrichum 57.25 d 56.50
75.25 b 81.00 c 100 a 28.50 c 97.50 a
gloeosporoides bc
T7: Penicillium
81.2 b 99.5 a 86.50 bc 59.75 b 100 a 34.25 bc 100 a
spp.
T8: Phythophthora 100 a 34.75 d 100 a 38.00 d 68.25 b 10.25 c
infestans
C.V (%) 4.5 4.78 4.92 19.13 1.59 3.96 3.67

(*) Cifras con la misma letra son estadísticamente iguales (Tukey, α ≤ 0.05)

En la tabla N°2 se observa el porcentaje de inhibición del crecimiento micelial de los

diferentes patógenos en los cuales para el análisis de varianza realizado para un alfa de
0,05 se observa que existen diferencias significativas para cada uno de los tratamientos.

Sulfato de cobre pentahidratado.

El mejor control fue para el tratamiento yor PICM fueron: T2 (F. oxysporum), T5 (S.
T8 (P. infestans) el mismo que presento sclerotiorum) y T7 (Penicillum spp.), con un
100% de PICM. Seguido de los tratamientos valor superior a 99,5 % los mismos que no
T7 (Penicillium spp.) y los tratamientos presentaron diferencias significativas entre
T2, T3 y T4 (F. oxyxporum, B. cinerea y L. sí. Los tratamientos: T4 (L. theobromae), T6
theobromae) respectivamente, estos últimos (C. gloeosporoides) no presentaron diferen-
no presentaron diferencias significativas cias significativas entre sí con un PICM de
entre sí, y los tratamientos que presentaron 70,25% y 75,25% respectivamente, lo propio
menor PICM fueron los tratamientos T6 ocurrió con los tratamientos T1 (R. solani),
(C. gloeosporoides) y el T1 (R. solani). El T3 (B. cinerea), que no tuvieron diferen-
coeficiente de variación para esta prueba cia significativa entre si y presentaron un
fue de 4,5 %. El fungicida sulfato de cobre PICM de 52,25% y 49% respectivamente.
penta-hidratado resulto ser el mejor Estos últimos cuatro tratamientos tuvieron
tratamiento para el control de P. infestans in un control parcial de los diferentes patóge-
vitro. Pertenece al grupo químico inorgánico nos. El tratamiento T8 (P. infestans) presen-
y actúa por contacto en varios sitios (FRAC, tó un menor PICM con un valor de 34,75%.
2016). Inhibiendo la germinación de El coeficiente de variación para esta prue-
esporas, intoxicación y bloqueo de procesos ba fue de 4,78%. La acción antifúngica del
respitarios, disminuye la biosíntesis de Azoxystrobin se vio reflejada en el control
proteínas de los hongos (Herrero, 2005). in vitro de F. oxysporum, S. sclerotiorum y Pe-
nicillium spp. Dejando que estos patógenos
Azoxistrobin. Los tratamientos con ma-
no se desarrollen en el medio envenenado.

25 (2): Mayo - Agosto, 2018 493

Alburqueque & Gusqui: Eficacia de fungicidas químicos para el control in vitro de diferentes fitopatógenos en condiciones controladas

Este fungicida pertenece al grupo químico presentó en los tratamientos T7 (Penicillium

Metoxi-acrilatos. Inhibe la respiración mi- spp.) y T6 (C. gloeosporoides) que son
tocondrial en las células de los patógenos estadísticamente similares, a su vez el
(FRAC, 2016). Detiene la transferencia de T6 (C. gloeosporoides) es estadísticamente
electrones entre el citocromo b al c1, en el similar al T5 (S. sclerotiorum) y este último
sitio de oxidación del ubiquinol, causando tratamiento es estadísticamente diferente
la no formación de ATP, energía para el tra- al T7 (Penicillium spp). Los tratamientos
bajo celular en el complejo III del citocromo con menor grado de PICM fueron: T8
bc1 (ROTAM, 2016). Puede ser transporta- (P. infestans), T3 (B. cinerea) y T4 (L.
do acropetalmente y de forma translaminar theobromae) con valores de 38%, 35% y
dentro de las hojas. Debido a este particu- 5,75% respectivamente. Cabe destacar que
lar debe ser aplicado de manera preventiva entre los tratamientos T8 (P. infestans) Y T3
(SYNGENTA, 2017). (B. cinerea) no hay diferencias significativas
entre sí. El coeficiente de variación para
Clorotalonil. Presentó mayor control
esta prueba fue de 19,13%. En la prueba de
en los tratamientos T8 (P. infestans), T5
efectividad del extracto de M. alternifolia
(S. sclerotiorum) con un PICM de 100% y
se observó mayor control para R. solani y
96,25% respectivamente. El tratamiento T2
F. oxysporum. Mediante la inhibición del
(F. oxysporum) es estadísticamente similar
desarrollo de la germinación de esporas,
al T7 (Penicillium spp.) y a su vez este
inhibición del crecimiento del micelio
tratamiento es estadísticamente similar
(SYNGENTA, 2017).
al T6 (C. gloeosporoides), pero este último
tratamiento es estadísticamente diferente Carbendazim. El mejor control se
al T2 (F. oxysporum). Los tratamientos con presentó en los tratamientos: T1 (R. solani),
menor PICM fueron los tratamiento T4 (L. T2 (F. oxysporum), T4 (L. theobromae), T5
theobromae) y T3 (B. cinerea) con valores (S. sclerotiorum), T6 (C. gloeosporoides) y
de 61% y 51,25% respectivamente. El T7 (Penicillium spp.) con un PICM del
coeficiente variación para este esta prueba 100% para cada tratamiento, cabe destacar
fue de 4,92%. Este fungicida inhibió el que en todos estos tratamientos no hubo
crecimiento de P. infestans, S. sclerotiorum diferencias estadísticas entre sí. Un control
en alimento envenenado en las pruebas in parcial se observó en el T8 (P. infestans)
vitro. La acción anti fúngica es por contacto con un PICM de 68,25%. El menor control
con actividad multisitio (FRAC, 2017). El se observó en el tratamiento T3 (B. cinerea)
producto inhibe la respiración de las células con un PICM de 23,50%. El coeficiente de
del hongo, debido a que las moléculas del variación para esta prueba fue de 1,59%. La
Clorotalonil se unen a grupos sulfhidrilo de efectividad de este fungicida en la prueba
los aminoácidos. Las enzimas que afectan al de alimento envenenado in vitro arrojo
ciclo de Krebs se desactivan y no se produce los mejores resultados para R. solani, F.
ATP (ARISTA, 2017). oxysporum, L. theobromae, T5 S. sclerotiorum,
C. gloeosporoides y Penicillium spp. El
Melaleuca alternifolia. El mayor PICM
carbendazin pertenece al grupo químico de
se presentó en los tratamientos T1 (R. solani)
los benzimidazoles. Inhibe el ensamble de
y T2 (F. oxysporum) que presentaron valores
la Beta-tubulina en la mitosis (FRAC, 2017).
de 64,75% y 69,50% respectivamente, en
También Inhibe la formación del apresorio,
estos dos tratamientos no hubo diferencias
el crecimiento y desarrollo del micelio de
estadísticas entre sí. Un PICM parcial se

494 25 (2): Mayo - Agosto, 2018

Alburqueque & Gusqui: Eficacia de fungicidas químicos para el control in vitro de diferentes fitopatógenos en condiciones controladas

los patógenos (SILVESTRE, 2017). oxysporum, L. theobromae y Penicillium spp.

Evitando el crecimiento de los patógenos
Fosfito de cobre. El mejor control
en la prueba de alimento envenenado in
se presentó en los tratamientos T2 (F.
vitro. Este fungicida pertenece al grupo
oxysporum), T3 (B. cinerea), T4 (L. theobromae)
químico de los benzimidazoles. Su modo
y T5 (S. sclerotiorum) con un PICM del
de acción es sistémico, protector y curativo.
100% para cada tratamiento, cabe destacar
Inhibe la mitosis, afectando el crecimiento y
que no hubo diferencias estadísticas entre
desarrollo del patógeno (FRAC, 2017).
estos tratamientos. Un control parcial se
observó en los tratamientos T1 (R. solani) y Conclusiones
T7 (Penicillium spp.) con un PICM de 36%
y 34,25% respectivamente, cabe mencionar Para la prueba de inhibición del
que estos tratamientos son estadísticamente crecimiento micelial (PICM) se concluyó lo
similares, a su vez el tratamiento T7 siguiente:
(Penicillium spp.) es estadísticamente similar Los ingredientes activos eficientes
al tratamiento T6 (C. gloeosporoides), pero el para el control de Rhizoctonia solani in vitro
T6 (C. gloeosporoides) es estadísticamente fueron Carbendazim, Fosfito de cobre y
diferente al T1 (R. solani). El coeficiente de Tiabendazol.
variación para esta prueba fue de 3,96%. Se
Para el control in vitro Fusarium
observó mayor eficacia del fosfito de cobre
oxysporum se encuentran los ingredientes
sobre F. oxysporum, B. cinerea, L. teobromae y S.
activos Azoxystrobin, Carbendazim, Fosfito
sclerotiorum. Este ion compite con el fósforo
de cobre, Tiabendazol y Clorotalonil
en diversas rutas metabólicas catalizadas
por diversas enzimas fosforilativas. Para el control in vitro de Botrytis cinerea
Obstruye los procesos implicados en se encuentra únicamente el Fosfito de cobre.
transferencia energética del hongo, sufren
Para el control in vitro Lasidoplodia
un considerable retraso e incluso pueden
theobromae se encuentran los ingredientes
llegar a bloquearse (Alfaro, 2011).
activos Carbendazim, Fosfito de cobre y
Tiabendazol. Los mejores controles con Tiabendazol
un 100 % PICM se observó en los tratamientos
Para el control in vitro Sclerotinia
T1 (R. solani), T2 (F. oxysporum), T4 (L.
sclerotium se encuentran los ingredientes
theobromae) y T7 (Penicillium spp.) A su vez,
activos Azoxystrobim, Clorotalonil,
los tratamientos T5 (S. sclerotiorum) y T6 (C.
Carbendazim, Fosfito de cobre y
gloeosporoides) presentan un PICM de 94,50 y
Tiabendazol.
97,50 % respectivamente. Cabe destacar que
estos tratamientos no presentan diferencias Para el control in vitro de Colletotrichum
significativas entre sí. En los tratamientos gloeosporoides se encuentran únicamente
T3 (B. cinerea) y T8 (P. infestans) se observó el ingrediente activo Fosfito de cobre y
un control deficiente de los patógenos con Tiabendazol.
un PICM de 37,25 y 10,25 respectivamente. Los ingredientes activos eficientes
Estos dos últimos tratamientos presentan para el control de Penicillum spp in vitro
diferencias significativas entre sí. El fueron Carbendazim, Tiabendazol, y
coeficiente de variación para esta prueba Azoxystrobim.
fue de 3,67 %. La mayor eficacia de este
fungicida se observó en R. solani, F. Los ingredientes activos eficientes para

25 (2): Mayo - Agosto, 2018 495

Alburqueque & Gusqui: Eficacia de fungicidas químicos para el control in vitro de diferentes fitopatógenos en condiciones controladas

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496 25 (2): Mayo - Agosto, 2018

Alburqueque & Gusqui: Eficacia de fungicidas químicos para el control in vitro de diferentes fitopatógenos en condiciones controladas

Anexos

Fig. 1. Materiales utilizados para la investigación. A. Guantes, placas Petri, tijeras, pinzas,
estilte, mecheros, cultivos axénicos; B. Fungicidas de diferentes ingredientes activos utili-
zados.

25 (2): Mayo - Agosto, 2018 497

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A B C

D E F

G H

Fig. 2. Instalación y evaluación de la investigación. A. Preparación del medio envenenado

(PDA + fungicida); B. Plaquado con el medio envenenado; C. Marcado de los discos en
el cultivo axénico de los patógenos; D. Siembra del cultivo del patógeno en el medio
envenenado; E. Micelio de uno de los patógenos (Rhizoctonia solani) despues de cortar los
discos; F. Marcado de las placas Petri en cuatro cuadrantes; G. Medición al primer día del
crecimieto de los patógenos en medios envenenados; H. Mediciones del crecimiento del
patógeno.

498 25 (2): Mayo - Agosto, 2018