Universidad de Panamá

Facultad de Odontología
Cirugía Dental

Laboratorio

“SENSIBILIDAD ANTIMICROBIANA DE ESTREPTOCOCOS DE BIOFILM DENTAL A

PASTAS DENTALES DE USO COMÚN”.

Microbiología Bucal

Grupo 6:
Barba, Maytte 9-756-1376
Guevara, Raychelle 6-723-2362
Machuca, Ana 9-758-486
Pitti, Mareybis 8-967-2192
Prado, Glorisel 2-744-1406
Rodriguez, Yara 8-970-2315
Roski, Isabella 8-965-72
Trejos, Meliza 8-998-625
Zambrano, Euclides 7-709-2143

Profesora:
Dra. Ana María Rodríguez

Fecha de entrega:
21 de noviembre del 2019

1
 INTRODUCCIÓN

“La prueba de Sensibilidad Antimicrobiana es evaluar en el laboratorio la respuesta de un microorganismo

a uno o varios antimicrobianos, traduciendo, en una primera aproximación, su resultado como factor
predictivo de la eficacia clínica.” (García R, J. 2013)

El laboratorio Sensibilidad Antimicrobiana ha sido realizado con el propósito de analizar y determinar la

acción antimicrobiana de las pastas de dientes que usualmente utilizan las personas en su vida diaria para
su aseo bucal como pasta con extractos naturales que nombraremos como pasta 1, pasta 2 y pasta 3 sobre
algunas bacterias del grupo Streptococcus spp. que constantemente se encuentran en distintas partes de la
cavidad oral.

Es de nuestro interés conocer cada componente de las pastas utilizadas en el experimento los cuales son
principalmente:
● Fluoruro de sodio: Es el principal componente de las pastas dentales; actúa como un auxiliar
químico y en el proceso de desmineralización del esmalte, reduce su solubilidad. En consecuencia,
los dentríficos son considerados la razón principal para la disminución de caries dental. Los iones
de fluoruro son antimicrobianos, pero el principal efecto anti-descomposición es relacionado a la
prevención en contra de la desmineralización del esmalte y a la acción hacia la remineralización.
El fluoruro se concentra en los huesos y en los dientes en desarrollo de los niños, fortalece el
esmalte de los dientes de los bebés antes que erupcionen y en adultos, trabaja en procesos de
desmineralización y remineralización. Cuando el flúor llega a los dientes y es absorbido por el
esmalte, ayuda a reparar el esmalte reponiendo calcio y fósforo perdidos. Según estudios
realizados repetidas veces, si se agrega fluoruro a los depósitos de agua de la comunidad, el
número de incidencias por caries disminuye.
● Citrato de zinc: Es insoluble en agua, pero puede solubilizarse en presencia de arginina y volverse
biodisponible. Por lo tanto, puede considerarse un "depósito" de zinc adicional
● Óxido de zinc: Es una fuente de zinc biodisponible y soluble en agua. Esto significa que es un
compuesto activo que el cuerpo puede usar fácilmente para una acción inmediata. El citrato de
zinc es muy conocido por controlar el sarro dental. La biodisponibilidad es una forma activa de
un material o compuesto que el cuerpo puede usar fácilmente para realizar una función prevista.
● Glicerina: El glicerol es un compuesto químico básico obtenido principalmente como coproducto
en la industria oleoquímica, mientras que la glicerina es el nombre comercial que reciben las

2
 mezclas con alto contenido de glicerol. La glicerina es una sustancia versátil y, debido a su
combinación única de propiedades físicas y químicas, ha tenido más de 1.500 usos finales.
● Sílica hidratada: Se utiliza como mineral abrasivo en productos para el cuidado dental. Limpia
los dientes de manera suave y meticulosa.
● Lauril sulfato de sodio: Es un detergente aniónico que es efectivo tanto en medio ácido como en
medio básico y también en agua dura. Soluble parcialmente al etanol, insoluble al cloroformo,
ligeramente soluble en agua, dando una solución opalescente. es un polvo de color blanco a crema,
fluido.
● Arginina: La L-arginina, o arginina para abreviar, se considera un aminoácido "semi-esencial".
Los aminoácidos semi-esenciales tienen que consumirse en la dieta bajo ciertas circunstancias, por
ejemplo en los bebés los aminoácidos esenciales deben ser suministrados externamente, ya que el
cuerpo no puede producirlos por sí mismos. La arginina está involucrada en muchos procesos
metabólicos, el mantenimiento de la función inmune, hormonal, estimulación en la reparación de
tejidos y otros, si se utiliza como un suplemento dietético.
● Poloxamero 407: Es un tensioactivo no iónico hidrófilo de la clase más general de copolímeros
conocidos como poloxámeros
● Pirofosfato tetrasodio: fosfato empleado como agente dispersante, emulsificante y espesante. Es
soluble en agua.
● Alcohol bencílico: El alcohol bencílico es un líquido incoloro con un aroma suave agradable.
● Sorbitol: Es un endulzante muy usado en la industria no sólo alimentaria sino también, cosmética
y farmacéutica. Es un polialcohol o azúcar alcohol junto al xilitol y maltitol; de allí su alta
estabilidad ante temperaturas elevadas o el calor, así como resistente a acción de diferentes
microorganismos, razón por la cual tiene mayor vida útil que el azúcar.
● Ácido benzoico: Es un ácido carboxílico aromático que tiene un grupo carboxilo unido a un anillo
fenílico. En condiciones normales se trata de un sólido incoloro con un ligero olor característico.
Es poco soluble en agua fría pero tiene buena solubilidad en agua caliente o disolventes orgánicos.
● Azul 1: Es un colorante se emplea en la industria alimentaria como aditivo capaz de teñir los
alimentos de color azul, su código es el E 133. Se emplea en la tinción de helados y en repostería.
● Amarillo 5: También conocido como tartracina, es un aditivo colorante orgánico del tipo nítrico
(denominados azoicos) de tono amarillo cítrico, autorizado para su uso en la industria alimentaria,
que se obtiene sintéticamente como un polvo.
● Extractos naturales: contiene aceite de jengibre y extracto de coco. Sus combinaciones únicas
de ingredientes naturales ayudan a remover bacterias que pueden causar mal aliento, caries o
problemas de encías con el cepillado regular.

3
Para el experimento utilizamos 6 platos de Agar Selectivo Mitis Salivarius para obtener cultivos de
Streptococcos, muestras obtenidas de los pacientes de nuestro grupo de laboratorio. Posteriormente
tomadas las muestras, incubamos en anaerobiosis los agares y se mantuvieron en la incubadora por cuatro
días formándose las colonias antes de colocar las pastas dentales y los discos para observar los halos de
inhibición causados por la pasta.

Durante 72 horas se mantuvieron los agares dentro de la incubadora; se retiraron para observarlos y medir
el diámetro de los halos los cuales tuvieron un promedio de 3.1 cm en la primera pasta, 2.5 cm en la
segunda pasta y 2.1 cm en la tercera pasta lo que hace muy notablemente que la pasta 1 con extractos
naturales fue la que obtuvo un mayor valor en cuanto a su acción inhibidora. Además, realizamos tinción
de Gram para todas las muestras y poder observar las bacterias de manera microscópica.

Este laboratorio sobre Sensibilidad Antimicrobiana es una prueba para examinar las distintas pastas que
utilizan las personas en su vida diaria y qué tan eficiente son, lo que nos podría llevar a diferentes
conclusiones comparando las pastas utilizadas como cuáles de las más vendidas en el mercado son
realmente efectivas probando su acción inhibidora antimicrobiana sobre algunas bacterias encontradas en
la cavidad bucal.

4
 OBJETIVOS GENERALES

● Determinar el efecto antimicrobiano de tres diferentes pastas de dientes sobre los Estreptococos
spp. de biofilm dental.

OBJETIVOS ESPECÍFICOS

● Realizar métodos de cultivo de bacterias a partir de muestras de microbiota oral

● Observar muestras de microorganismos a partir de técnicas histoquímicas realizadas en el

laboratorio.

● Plantear los fundamentos de las pruebas realizadas, analizando los resultados obtenidos.

5
 METODOLOGÍA

A. Materiales

❖ Guantes
❖ Bata
❖ Mascarillas
❖ Alcohol
❖ Papel toalla
❖ Toallas de clorox
❖ Pastas dentales
❖ Hisopos estériles
❖ Mechero de alcohol
❖ Asa microbiológica
❖ Portaobjetos y cubreobjetos
❖ Discos de papel filtro

6
INFORMACIÓN DE DENTÍFRICOS UTILIZADOS

Pastas Pasta 1 (E) Pasta 2 (T) Pasta 3 (C)

Ingredientes fluoruro de sodio fluoruro de sodio 0.32% Fluoruro de sodio:

activos 0.32% (1450 ppm de (1450 ppm de flúor), 0.24% (1100 ppm de
flúor), citrato de zinc, citrato de zinc, óxido de flúor)
óxido de zinc. aceite zinc
de jengibre y extracto
de coco

Ingredientes glicerina, agua, sílica glicerina, agua, sílica Sorbitol, agua, sílice
inactivos hidratada, lauril sulfato hidratada, lauril sulfato hidratada, pirofosfato
de sodio, arginina, de sodio, arginina, disódico, lauril sulfato
aroma, de celulosa, aroma, de celulosa, de sodio, hidróxido de
óxido de zinc, óxido de zinc, sodio, alcohol (0.9%),
poloxamero 407, poloxamero 407, goma de xantan,
pirofosfato tetrasodio, pirofosfato tetrasodio, sacarina sódica,
citrato de zinc, alcohol citrato de zinc, alcohol glicerina, carbomero,
bencílico, goma bencílico, goma xantan, poloxamero 407,
xantan, cocamidopropil betaína, polisorbato 80,
cocamidopropil cloruro de sodio, benzoato de sodio,
betaína, cloruro de sacarina sódica, ácido cloruro de cetil
sodio, sacarina sódica, fosfórico, sucralosa, piridina, ácido
ácido fosfórico, dióxido de titanio (cl. benzoico, dióxido de
sucralosa, dióxido de 77891). titanio, azul 1,
titanio (cl. 77891). amarillo 5.

7
MEDIOS DE CULTIVOS

1. Agar mitis salivarius: Se usa para diferenciar entre las

especies de Streptococcus y el género muy cercano
Enterococcus que son flora en la boca. Estos
organismos son muy comunes en la boca y se han
asociado con caries dental, así como con agentes de
endocarditis. Los azúcares en este medio son la
sacarosa y la glucosa, así como los tintes azules de
triptano y violeta cristal. El azul tripán es absorbido por las colonias bacterianas, lo que hace que
se vuelvan azules. El cristal violeta, junto con el 1% de telurito agregado a este medio, inhibe las
bacterias gram, así como muchas otras bacterias gram +. Algunas colonias también pueden tener
una gota de líquido sobre su superficie. Los Streptococcus mutans aparecen en el agar azul como
pequeñas colonias azules de diámetro menor a 1 mm, mientras que los Lactobacilos crecen en el
agar transparente como colonias blancas. La comparación correspondiente permite evaluar el
riesgo de caries, siendo de relevancia clínica la diferenciación de “riesgo de caries alto o bajo”.

2. Agar Mueller-Hinton: Es un medio de cultivo microbiológico utilizado comúnmente para

realizar la prueba de susceptibilidad a antibióticos. Contiene:

● 300 ml de extracto de carne

● 17.5 g de hidrolizado de caseína
● 1.5 g de almidón
● 10 g de agar
● Disueltos en 1 litro de agua destilada
● pH ajustado a 7.3 ± 0.1 a 25°C.

Además, tiene varias propiedades que lo hacen ideal para el uso de antibióticos sobre él. En primer
lugar, es un medio no selectivo y no diferencial, lo que significa que prácticamente todos los
microorganismos cultivados crecerán en su superficie. Por otra parte, es un agar suelto, lo que
permite una mejor difusión de los antibióticos (a diferencia de en otros medios con mayor
proporción de agar), por lo que se observarán las zonas de inhibición verdaderas. Además, contiene
almidón, que absorberá las toxinas liberadas por las propias bacterias, de modo que no interfieran
con los antibióticos.

8
BIOSEGURIDAD

Las normas de bioseguridad para el laboratorio son reglas básicas de comportamiento destinadas a
prevenir factores de riesgo laborales procedentes de agentes biológicos, físicos o químicos. El personal
de los laboratorios debe incorporar estas normas en todos los procesos que se realicen en el laboratorio
que lo pongan en contacto con algún tipo de reactivo, microorganismo o sustancia que pueda ser nocivo
para la salud.

Las normas de bioseguridad no eliminan el riesgo de un accidente; están elaboradas para prevenir posibles
accidentes en el laboratorio. Su conocimiento disminuye significativamente la probabilidad de que ocurra
un accidente y establece los procedimientos a seguir en caso de que éste ocurra.

Algunas de las medidas de seguridad que se deben tener en el laboratorio son:

❖ Usar bata, debe usarse abrochada para prevenir la contaminación de la ropa de calle.
❖ Mantener el cabello recogido o protegido con un gorro o red limpio.
❖ Evitar entradas y salidas en el laboratorio con una frecuencia innecesaria.
❖ Lavarse siempre las manos al llegar y antes de abandonar el laboratorio.
❖ Desinfectarlas cuando sea necesario. Para secar, usar toallas desechables o aire caliente seco.
❖ Las superficies donde se trabaja deben ser descontaminadas antes y después de hacer el trabajo.
❖ Utilizar guantes para prevenir la propagación de microbios y proteger de infecciones
❖ En la toma de las muestras es importante rotularlas para evitar confusión y al terminar el
procedimiento se debe desechar todo lo que se ha utilizado para evitar el riesgo de contagio
previamente en una bolsa roja.
❖ Los residuos biopatogénicos: se colocarán en bolsas rojas; estos pueden transmitir enfermedades,
incluyen:
❏ Todo material orgánico que provenga del paciente: Sangre y derivados. Otros fluidos orgánicos,
tejidos u órganos humanos.
❏ Materiales que hayan estado en contacto real o potencial con fluidos del paciente: Instrumental
punzocortante, material y equipo de laboratorio, jeringas, sondas, gasas, apósitos, guantes, etc.
❏ Estos residuos, a la vez se clasifican en: SÓLIDOS: heces. LÍQUIDOS: sangre, orina, vómito,
líquido amniótico, líquido cefalorraquídeo, drenajes, secreciones nasales, bronquiales o vaginales.
❏ Residuos especiales: Químicos y radioactivos: Pueden causar enfermedades por sus propiedades
físicas o químicas. Ej.: ácidos fuertes, sustancias volátiles, citotóxicos, elementos radioactivos.

9
 Son los provenientes de los servicios de radiología, radioterapia, bomba de cobalto y otros
emisores de radiación.
❏ Químicos: Residuos tóxicos farmacéuticos, sustancias inflamables, diluyentes, corrosivos,
reactivos, etc.

10
B. PROCEDIMIENTOS
1. Toma de la muestra:

❖ Enumerar cada medio de cultivo, el cual inicialmente conteniene el agar Mitis Salivarius,
con el número correspondiente a cada paciente (seis en total).
❖ Tomar con un hisopo estéril muestra de la biopelícula presente en superficies vestibulares
y linguales de placas dentales específicas. Dos pacientes por cada zona.

DATOS DEL PACIENTE

Número del Frecuencia de Consumo de Última profilaxis Conocimiento de

paciente cepillado azúcar caries

P1

P2

P3

P4

P5

P6

DATOS DE LA MUESTRA

Número de paciente Pieza dental Superficie

P1 y P2

P3 (ortodoncia)

P4

P5 y P6

11
2. Cultivo de la muestra:

❖ Colocar en el medio de cultivo M. Salivarius mediante un estriado completo.

❖ Incubación:
❏ Colocar los medios de cultivo uno encima de otro en una jarra de anaerobiosis
junto con un generador de anaerobiosis.
❏ Guardar la jarra en una incubadora a temperatura ambiente (37°C) durante 4 días.

A. Agar mitis salivarius: Observación de las colonias

B. Pruebas de sensibilidad antimicrobiana

● Toma de la muestra:
❖ Obtener 6 nuevos medios de cultivos con agar Müller-Hinton. Nuevamente, con un
hisopo estéril hacer un hisopado completo intentando tomar la mayor cantidad de
muestra presente en el agar M. Salivarius para lograr el hisopado completo en el agar
Müller-Hinton.
❖ Hacer el estriado, enumerar los medios de cultivos en su cara externa, rotular tres
números en distintas zonas, colocar el antimicrobiano, en este caso, las pastas dentales.

● Aplicación del antimicrobiano:

❖ Posicionar tres cortes circulares y pequeños de papel filtro estéril sobre cada número con
las distintas pastas dentales en ellos.

● Cultivo:
❖ Colocar los medios de cultivo en en la jarra de anaerobiosis y sobre ellos la bolsa de
anaerobiosis. Por último, introducirlo a la incubadora a 37°C durante cuatro días.

C. Medición de los halos de inhibición:

❖ Medir (en cm) los halos de inhibición de cada pasta en el medio de cultivo con una regla.
❖ Limpiar con alcohol cada portaobjetos y enumerar cada uno.
❖ Con el asa microbiológica, tomar levemente muestra de las colonias presentes en el agar
Müller-Hinton, sin tocar los halos de inhibición colocarla en el espacio previsto con una

12
 pequeña gota de agua destilada. Repetir proceso con cada medio de cultivo en cada
portaobjetos.
❖ Realizar el proceso de fijación pasando el portaobjeto rápidamente sobre un mechero de
alcohol, con ayuda de una pinza, y por último aplicar la técnica de tinción de gram.

13
3. Observación microscópica: Tinción de gram

Materiales:
❏ Colorante de cristal violeta o violeta de genciana
❏ Lugol
❏ Alcohol Acetona
❏ Colorante de safranina

Procedimiento:
❏ Cubrir con violeta cristal durante 1 minuto la zona señalada en el portaobjetos.
Lavar la muestra con una leve cantidad de agua.
❏ Agregar lugol a la muestra y se deja durante 1 minuto.
❏ Lavar nuevamente con una leve cantidad de agua.
❏ Añadir alcohol-acetona que funciona para decolorar la muestra. Colocar solamente
durante 5 segundos.
❏ Cubrir la muestra con safranina y dejar reposar de 1 a 2 minutos.
❏ Por último, enjuagar la placa con una leve cantidad de agua.

14
 RESULTADOS

A. Primera parte: Toma de la muestra

DATOS DEL PACIENTE

Número del Frecuencia de Momentos de Última profilaxis CPOD

paciente cepillado azúcar

P1 2 veces al dia +4 veces al 5 meses Ninguna

día(alto)

P2 2 veces al dia +4 veces al día 6 meses Ninguna

(alto)

P3 3 veces al dia 2-3 veces al día 3 meses Ninguna

(medio)

P4 3 veces al dia 2-3 veces al día 3 meses Ninguna

(medio)

P5 2-3 veces al dia +5 veces al 6 meses 2 restauraciones.

día(alto)

P6 2-3 veces al dia +5 veces al día 6 meses Ninguna

(alto)

DATOS DE LA MUESTRA

Número de paciente Pieza dental Superficie

P1 y P2 31 Lingual

P3 (ortodoncia) 26 Vestibular

P4 36 Vestibular

P5 y P6 48 Oclusal

15
 CULTIVO EN AGAR MITIS SALIVARIUS

Ubicación Paciente Imagen Descripción

Colonias
abundantes
P1
tamaño
mediano, de
color azul

31 lingual

P2

Colonias
grandes, de
color azul

16
 Colonias
medianas, de
26 vestibular P3
color azul
ortodoncia

Colonias
medianas, de
color azul
36 P4

Vestibular

Colonias
abundantes
48 P5
medianas, de

Oclusal color azul

17
 Colonias
pequeñas, de
P6
color azul

Diámetro de halo en cm

Paciente Resultado
Pasta 1 Pasta 2 Pasta 3

N°1

31 lingual 2.6 cm 3.0 cm 2.0 cm

18
 N°2 2.6 cm 2.5 cm 1.9 cm

31 lingual

N°3

36 3.5 cm 2.6 cm 2.8 cm

vestibular
ortodoncia

N° 4

26
vestibular
3.2 cm 2.8 cm 2.0 cm

19
 N° 5

48 oclusal 3.8 cm 2.1 cm 1.9 cm

N° 6

48 oclusal 3.0 cm 2.0 cm 2.0 cm

20
RESULTADO DE TINCIÓN DE GRAM

Todas las muestras se observaron en un microscopio, se utilizó aceite de inmersión para lograr enfocar
con el objetivo de 100x.
Todas las muestras presentan cocos (forma esférica) gram positivos por su pigmentación violeta,de
acuerdo a su morfología se considera que son estreptococos ya que se agrupan en forma de hileras.

Placa Resultado de tinción Observación

P1

P2 Cocos Gram +

21
P3 Cocos Gram +

P4 Cocos Gram +

22
P5 Cocos Gram +

P6 Cocos Gram +

23
 DISCUSIÓN

Sensibilidad antimicrobiana
Los dentífricos tienen una amplia gama de ingredientes, además de diversas sales de fluoruro como
agentes terapéuticos. Asimismo, contienen abrasivos que pueden interferir con la acción anticaries del
fluoruro utilizado. Para que un dentífrico tenga efecto anticaries, es necesario al menos 1000 ppm de
fluoruro soluble. En general, los fabricantes añaden 1500 ppm para compensar la cantidad de fluoruro
que podría inactivarse por su combinación con el abrasivo durante el almacenamiento del producto.
Para realizar este laboratorio utilizamos tres pastas dentales diferentes, nuestro objetivo era medir su
capacidad antimicrobiana, tomando en cuenta los ingredientes de cada una de ellas.
Para llevar a cabo la demostración del informe, nombraremos las pastas dentales como: Pasta 1, Pasta 2
y Pasta 3; respetando las políticas de derecho de autor.

1. Pasta 1 (E):
Ingredientes activos: fluoruro de sodio 0.32% (1450 ppm de flúor), citrato de zinc, oxido de
zinc.
Ingredientes inactivos: glicerina, agua, silica hidratada, lauril sulfato de sodio, arginina, aroma,
de celulosa, óxido de zinc, poloxamero 407, pirofosfato tetrasodio, citrato de zinc, alcohol
bencílico, goma xantan, cocamidopropil betaína, cloruro de sodio, sacarina sódica, ácido
fosfórico, sucralosa, dióxido de titanio (cl 77891).

2. Pasta 2 (T):
Ingredientes activos: fluoruro de sodio 0.32% (1450 ppm de flúor), citrato de zinc, oxido de
zinc.
Ingredientes inactivos: glicerina, agua, silica hidratada, lauril sulfato de sodio, arginina, aroma,
de celulosa, óxido de zinc, poloxamero 407, pirofosfato tetrasodio, citrato de zinc, alcohol
bencílico, goma xantan, cocamidopropil betaína, cloruro de sodio, sacarina sódica, ácido
fosfórico, sucralosa, dióxido de titanio (cl 77891).

3. Pasta 3 (C):
Ingredientes activos: Fluoruro de sodio: 0.24% (1100 ppm de flúor)
Ingredientes inactivos: Sorbitol, agua, sílice hidratada, pirofosfato disódico, lauril sulfato de
sodio, hidróxido de sodio, alcohol(0.9%), goma de xantan, sacarina sódica, glicerina, carbomero,

24
 poloxamero 407, polisorbato 80, benzoato de sodio, cloruro de cetilpiridinio, ácido benzoico,
dióxido de titanio, azul 1, amarillo 5.

La pasta E y la pasta T presentan la misma concentración de fluoruro de sodio (0.32%) (1450 ppm),
superior a la concentración de fluoruro de sodio de la pasta C cuya concentración fue de 0.243%; sin
embargo los halos de inhibición de la pasta E y la pasta T presentan diferencias en su radio de alcance
en donde la pasta E presenta mayor halo de inhibición con un radio aproximado de 0.6 de diferencia.
No se evidenció ningún tipo de resistencia microbiana por parte de los estreptococos a las pastas
dentales, lo que confirma su acción inhibidora de placa dental.

Los resultados obtenidos, se basaron en la acción de los dentífricos, los cuales liberan el fluoruro en el
medio oral, al momento del cepillado.

Los fluoruros han sido reconocidos por mucho tiempo como inhibidores enzimáticos, por lo cual se trata
de explicar el efecto anticariogénico de los fluoruros.

El pH intracelular de las bacterias se considera mayor que la del ambiente extracelular. Si el pH de un

medio que contiene F- disminuye, algunos de los iones F- son convertidos en la molécula no-ionizable
HF (ácido fluorhídrico) los cuales difunden hacia la célula debido a que la membrana celular es
permeable a este compuesto. Esta es una explicación de la gran sensibilidad de las bacterias a los
fluoruros a pH bajos. El sitio de mayor inhibición del F en las bacterias es la enzima enolasa, la que
convierte PG (fosfoglicerato) a PEP (fosfoenolpiruvato). Cuando esta reacción es bloqueada se acumula
PG y no se forman los productos de cadena, PEP y ácido láctico. Esto trae diferentes consecuencias a la
bacteria como la disminución en la formación de ácidos, lo cual hace que disminuya su capacidad para
producir caries.

Los fluoruros, al reducir la producción de PEP e inhibir la extrusión de protones interfieren con la
incorporación de glucosa a la bacteria por mecanismos independientes, lo que trae como consecuencia la
disminución pronunciada de la actividad metabólica de la bacteria y su posible muerte.

Los fluoruros son considerados como la piedra angular de la prevención de la caries dental, por los cual
es de suma importancia conocer los ingredientes de los dentífricos que utilizamos en nuestro diario
vivir.

Se conoce en la actualidad la existencia de un gran número de bacterias que se encuentran en la cavidad

bucal, entre ellos se localizan los microorganismos del género Streptococcus.

25
Al realizar nuestro experimento esperábamos según la literatura y la referencia de salud bucal de los
pacientes, el crecimiento de organismos del grupo de los Streptococcus lo cuales representan un amplio
grupo de microorganismos: algunos forman parte de la microbiota normal y otros por el contrario se
comportan como saprofitos, comensales e incluso patógenos que son los causantes de diversas infecciones
en el hombre. Como era de esperar hubo crecimiento de colonias de Streptococcus, y lo corroboramos
pues hicimos los cultivos en Agar mitis-salivarius (MSA), el cual es un medio de cultivo utilizado para
obtener colonias de Streptococcus mutans.

La cavidad bucal está compuesta de muchas superficies, cada una de ellas recubierta por una gran cantidad
de bacterias, la biopelícula bacteriana proverbial. Algunas de estas bacterias han sido implicadas en
enfermedades bucales como la caries y la periodontitis, que están entre las infecciones bacterianas más
comunes en los seres humanos.Es ampliamente aceptado que los microorganismos bucales causan
enfermedades principalmente por una forma sinérgica o cooperativa, y las interacciones entre especies
dentro de la comunidad por vía oral juegan un papel crucial en la determinación de si la microbiota bucal
provoca enfermedades o no. Entender el microbioma bucal es una tarea compleja, debido a la gran
variedad de hábitats dentro de la cavidad bucal y esto depende de las concentraciones de oxígeno, la
disponibilidad de nutrientes, la temperatura, la exposición a factores inmunológicos y las características
anatómicas.
Las especies del género Streptococcus se encuentran en una alta proporción en tejidos blandos, saliva y
en la lengua(Las especies más importantes en el ser humano son Streptococcus mutans y Streptococcus
sobrinus, estos se han caracterizado como colonizadores secundarios del biofilm que rodea a los dientes
y su patogenicidad se ha demostrado en relación a la producción de caries del esmalte, debido a la
capacidad que poseen para producir ácidos a partir de la sacarosa), es aquí donde radica la importancia
de realizar las pruebas en estos organismos, ya que al conocer la capacidad antimicrobiana que ejerce las
pastas dentales sobre ellos podemos tener en cuenta sus resistencia a tratamientos y de esta manera
prevenir su proliferación y crecimiento y por ende mejorar la salud bucal de los pacientes.

La microflora de la cavidad bucal consiste en bacterias, levaduras, algunos hongos, micoplasma,

protozoarios y virus. Cuando hablamos de placa bacteriana dental, el grupo bacteriano más alto
encontrado es el de los cocos gram positivos, los bacilos largos y cortos gram positivos, bacterias
filamentosas y levaduras; mientras que en menor proporción tenemos los cocos gram negativos y los
bacilos gram negativos.

26
Consideramos que sí es importante e interesante realizar las pruebas en bacilos, pues como hemos visto
estos organismos también forman parte fundamental de la flora bacteriana, y sería de gran interés conocer
su resistencia a los dentífricos.

El resultado en general nos dio los cultivos esperados en el agar selectivo mitis salivarius y agar Müller-
Hinton en el tiempo estipulado, se evidenció en qué lugares de la cavidad bucal existe más crecimiento
de la placa dental dando como resultado la cara oclusal de terceras molares donde las colonias obtenidas
tenían menor tamaño en comparación con la cara lingual de incisivos centrales donde obtuvimos tamaños
más grandes de colonias, también nos arrojó evidencias de la inhibición de las pastas en el cultivo de
estreptococos, con halos de inhibición entre 1.9 a 3.8 cm.

27
 CONCLUSIÓN

El microbioma oral humano presenta cuantiosas especies de bacterias, virus y hongos. Debido a la gran
diversidad de microorganismos en la cavidad oral, lo más apropiado es trabajar con especies del mismo
género. A fin de realizar un cultivo selectivo se realizó en los Agar Mitis Salivarius, que al someterse a
un ambiente anaerobio y temperatura de 37°C permitió el crecimiento exclusivo de Estreptococos.

Para realizar la prueba de sensibilidad antimicrobiana con las colonias resultantes utilizamos como medio
de cultivo los Agar Müller-Hinton donde se colocaron tres discos de papel filtro con pastas dentífricas
distintas: Colgate® Natural Extracts Detox, Colgate® Total 12 y Crest Complete para ver el efecto
inhibidor de las mismas. En un laboratorio clínico de Microbiología, uno de los aspectos que mejor debe
vigilar, son las pruebas de sensibilidad a los agentes aislados por medio de técnicas de cultivo. La
información derivada de una prueba de sensibilidad bien realizada y en un tiempo aceptable, es muy
importante y le permite al clínico tomar una serie de decisiones vitales para el buen manejo del paciente.

La información derivada de la prueba de sensibilidad antimicrobiana manifestó que la tendencia en el halo

de inhibición de mayor diámetro fue la crema dental #1, cabe destacar que la eficacia con respecto a los
datos experimentales es comprobada en el género Streptococcus, más no tenemos evidencia de su acción
en otros microorganismos presentes en la cavidad oral.

La importancia de este laboratorio es determinar la resistencia que presentan algunas bacterias a ciertos
dentífricos y a la vez observar la eficacia de los mismos a través de la medición de los halos de inhibición.
Interpretando su poder de inhibición por el disco con dentífrico que presentó más veces inclinación a la
formación de un halo de mayor tamaño en su periferia. A su vez, se conoció y practicó el manejo de
técnicas histoquímicas para lograr un estudio profundo del tema; conociendo los distintos organismos
pertenecientes a la cavidad oral y como principal, los Estreptococos que fueron estudiados. Cabe destacar
que los resultados obtenidos no forman parte de un criterio integral respecto a los productos utilizados
para mantener la limpieza oral; en todo caso, nos muestra el comportamiento de este tipo de bacterias
frente a los agentes antibacterianos

Un aspecto importante, es que la condición clínica es la que manda y no un reporte de laboratorio. Aun
cuando, una cepa demuestra ser sensible en condiciones de laboratorio, esto puede no verse reflejado en
una acción terapéutica adecuada. 24 a 48 horas después de iniciar terapia; el uso de dentífricos diariamente
forma parte del mantenimiento de una buena salud oral.

28
Las recomendaciones a los pacientes es utilizar la pasta de su preferencia siempre y cuando tener presente
que dentro de la experiencia en el laboratorio la pasta 1 tiene más efecto antimicrobiano, sin embargo
no es recomendable eliminar toda la microbiota oral o provocar una disbiosis tomando en cuenta que
muchas bacterias ayudan a combatir microorganismos patógenos. La técnica de cepillado es otro aspecto
importante sobre todo en aquellos lugares donde la placa dental es más difícil de remover y por supuesto
no olvidar cepillarse 3 veces al día.

29
 Bibliografía

1. CHÁVEZ HIDALGO, D. A. (2017).

6. https://es.wikibooks.org/wiki/Microbiolog%
EVALUACIÓN DEL EFECTO INHIBIDOR
C3%ADa/Bioseguridad
DE PASTAS DENTALES. LIMA – PERÚ.
2. Rosales*1, J. C. (2014). Dentífricos
fluorurados: composición. © VERTIENTES
Revista Especializada en Ciencias de la 7. https://www.who.int/topics/medical_waste/
Salud, 114-119. manual_bioseguridad_laboratorio.pdf
3. Maria del Rosario Pascual Anderson, V. C.
8. https://www.google.com/url?q=https%3A%
(2000). Microbiologia Alimentaria:
2F%2Fwww.actaodontologica.com%2Fedic
Metodologia Analitica para Alimentos y
iones%2F2008%2F4%2Fart-
Bebidas. Madrid: Diaz de Santos, S.A.
21%2F&sa=D&sntz=1&usg=AFQjCNEaoIt
4. (Anonimo, 2011)
dVv0WklKUXHMQaxZijH0PqA
https://feriadelasciencias.unam.mx/anteriore
s/feria20/feria370_01_microflora_bacteriana 9. http://seer.uftm.edu.br/revistaeletronica/inde
_de_la_cavidad_bucal_gram_neg.pdf x.php/refacs/article/view/1978/2010

5. file:///C:/Users/Biblioteca/Downloads/Sensi
bilidad%20Antimicrobiana%20TITULO%2
0-
%20Chavez%20Hidalgo,%20Diego%20An
dres.pdf

27
 Bibliografía

1.CHÁVEZ HIDALGO, D. A. (2017). 6.https://es.wikibooks.org/wiki/Microbiolo

EVALUACIÓN DEL EFECTO
INHIBIDOR DE PASTAS g%C3%ADa/Bioseguridad
DENTALES. LIMA – PERÚ.
7.https://www.who.int/topics/medical_was
2.Rosales*1, J. C. (2014). Dentífricos te/manual_bioseguridad_laboratorio.pdf
fluorurados: composición. ©
VERTIENTES Revista Especializada 8.https://www.google.com/url?q=https%3
en Ciencias de la Salud, 114-119.
A%2F%2Fwww.actaodontologica.com%2
Fediciones%2F2008%2F4%2Fart-
3.Maria del Rosario Pascual Anderson, 21%2F&sa=D&sntz=1&usg=AFQjCNEao
V. C. (2000). Microbiologia ItdVv0WklKUXHMQaxZijH0PqA
Alimentaria: Metodologia Analitica
para Alimentos y Bebidas. Madrid: 9.http://seer.uftm.edu.br/revistaeletronica/i
Diaz de Santos, S.A.
ndex.php/refacs/article/view/1978/2010
4.(Anonimo, 2011)
https://feriadelasciencias.unam.mx/ant
eriores/feria20/feria370_01_microflor
a_bacteriana_de_la_cavidad_bucal_gr
am_neg.pdf

5.file:///C:/Users/Biblioteca/Downloa
ds/Sensibilidad%20Antimicrobiana%
20TITULO%20-
%20Chavez%20Hidalgo,%20Diego%
20Andres.pdf

27