Este documento describe un experimento para determinar el efecto de la luz ultravioleta sobre el crecimiento de bacterias. Se expondrán placas de agar inoculadas con bacterias a la luz UV por periodos de 10 segundos, 30 segundos, 1 minuto y 2 minutos. Luego se incubarán las placas y se observarán las colonias para determinar si la luz UV tuvo un efecto bactericida. El objetivo es evaluar cómo la luz UV afecta la replicación bacteriana al dañar el ADN a través de la formación de dímeros de
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Este documento describe un experimento para determinar el efecto de la luz ultravioleta sobre el crecimiento de bacterias. Se expondrán placas de agar inoculadas con bacterias a la luz UV por periodos de 10 segundos, 30 segundos, 1 minuto y 2 minutos. Luego se incubarán las placas y se observarán las colonias para determinar si la luz UV tuvo un efecto bactericida. El objetivo es evaluar cómo la luz UV afecta la replicación bacteriana al dañar el ADN a través de la formación de dímeros de
Este documento describe un experimento para determinar el efecto de la luz ultravioleta sobre el crecimiento de bacterias. Se expondrán placas de agar inoculadas con bacterias a la luz UV por periodos de 10 segundos, 30 segundos, 1 minuto y 2 minutos. Luego se incubarán las placas y se observarán las colonias para determinar si la luz UV tuvo un efecto bactericida. El objetivo es evaluar cómo la luz UV afecta la replicación bacteriana al dañar el ADN a través de la formación de dímeros de
Este documento describe un experimento para determinar el efecto de la luz ultravioleta sobre el crecimiento de bacterias. Se expondrán placas de agar inoculadas con bacterias a la luz UV por periodos de 10 segundos, 30 segundos, 1 minuto y 2 minutos. Luego se incubarán las placas y se observarán las colonias para determinar si la luz UV tuvo un efecto bactericida. El objetivo es evaluar cómo la luz UV afecta la replicación bacteriana al dañar el ADN a través de la formación de dímeros de
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Laboratorio de Microbiología General
Semestre 2019-2
LABORATORIO DE MICROBIOLOGÍA GENERAL
PRÁCTICA #9 CONTROL DE MICROORGANISMOS MEDIANTE EL EMPLEO DE LUZ ULTRAVIOLETA
INTRODUCCIÓN El control de microorganismos es imprescindible para llevar a cabo un adecuado desempeño en el laboratorio, n este sentido, se aplican métodos químicos y/o físicos que permitan lograr dicho objetivo. La radiación es un método físico para el control de microorganismos, específicamente a una longitud de onda por debajo de los 300 nm, por ejemplo, rayos x, ramos gamma y luz ultravioleta. Las radiaciones cuya longitud de onda sea mayor, no tienen suficiente energía para producir un efecto letal sobre las células.
La luz ultravioleta es capaz de producir un efecto letal cuando se aplica en un
rango de 210 a 300 nm. Los componentes celulares capaces de absorber la luz ultravioleta son los ácidos nucleicos, específicamente las pirimidinas. Lo anterior promueve la formación de dímeros de timina (unión covalente de dos moléculas adyacentes de timina). La formación de dichos dímeros distorsiona la configuración de los ácidos nucleicos, como es el caso del ADN, ocasionando una interferencia con su replicación y transcripción durante la síntesis de las proteínas.
El efecto letal depende de factores tales como la densidad de la suspensión
bacteriana, la naturaleza del medio donde se encuentra, así como el tipo y estado fisiológico de la célula. La radiación por luz ultravioleta debido a su baja capacidad de penetración no puede utilizarse como medio de esterilización, por lo que su aplicación se limita a superficies y aire.
OBJETIVO Determinar el efecto de la luz ultravioleta sobre el crecimiento de bacterias.
METODOLOGÍA
Muestra
Cepas bacterianas
Licenciatura de Químico en Alimentos Responsable: Dra. María J. Moreno Vásquez
Laboratorio de Microbiología General Semestre 2019-2
Material
Mechero bunsen 1 asa bacteriológica con punta redonda 1 matraz de 500 mL 1 probeta de 100 mL 1 piseta 5 Placas con agar nutritivo (por equipo).
Procedimiento Analítico
Preparación de medio de cultivo agar nutritivo
1. Calcular el volumen necesario de medio de cultivo.
2. Revisar las instrucciones de preparación, para pesar la cantidad correcta de medio deshidratado e incorporar a un matraz erlenmeyer. 3. Agregar el volumen de agua necesario al matraz con el medio de cultivo. 4. Disolver con ayuda de mechero bunsen hasta que observe el medio de cultivo completamente claro y sin restos en la pared del matraz. NOTA: Utilice guante de asbesto. 5. Colocar el matraz en la autoclave y esterilizar durante 15 minutos a 121°C. 6. Dejar enfriar hasta alcanzar 45 – 50°C. 7. Rotular las placas de la siguiente manera. a. Control b. 10 segundos c. 30 segundos d. 1 minuto e. 2 minutos 8. Servir en placas petri. 9. Dejar solidificar.
Inoculación de Medio de Cultivo (Agar Nutritivo)
1. Tomar muestra del tubo con la cepa con ayuda del asa con punta redonda. 2. Inocular masivamente la superficie de ambas placas petri con agar nutritivo (Figura 1).
Tratamiento con Luz Ultravioleta
1. Colocar la placa petri “UV” en la campana de bioseguridad.
2. Retirar la tapa. 3. Exponer a luz ultravioleta durante 10 seg, 30 seg, 1 minuto y 2 minutos. NOTA: Durante la exposición de las placas a la luz ultravioleta no debemos estar frente a la campana de bioseguridad.
Licenciatura de Químico en Alimentos Responsable: Dra. María J. Moreno Vásquez
Laboratorio de Microbiología General Semestre 2019-2
4. Posterior al tiempo de exposición tapar las placas.
5. Incubar a 37°C durante 24 horas. 6. Anotar observaciones.
Figura 1. Inoculación masiva de placas.
TAREA 1. Definir los siguientes conceptos: a. Esterilización b. Desinfección c. Limpieza d. Antiséptico e. Bactericida f. Bacteriostático g. Bacteriolítico
Licenciatura de Químico en Alimentos Responsable: Dra. María J. Moreno Vásquez
