JORGE ANDRES ROZO TORRES

SISTEMAS DE SIEMBRA PARA HONGOS Y BACTERIAS

OBJETIVO GENERAL

• Familiarizar al estudiante con técnicas de siembra para el aislamiento y mantenimiento tanto de

hongos como de bacterias.

MARCO TEÓRICO

Colonia de microorganismo – Cultivo puro.

Un cultivo puro es aquel que contiene un solo tipo de microorganismo, su manejo es vital cuando se
pretende caracterizar algún tipo de microorganismo y se obtiene mediante el uso de técnicas de
aislamiento. El siguiente diagrama le permite diferenciar que tipo de colonias podrá observar en sus
resultados. En términos muy generales las bacterias son de apariencia cremosa al igual que los
hongos levaduras mientras los hongos miceliales tienen una apariencia algodonosa, aterciopelada o
granulosa.

Algunas formas macroscópicas (colonias) de hongos levaduras, hongos miceliales y bacterias.

Modificada de: http://www.healthproo2.com/test-results.html (Agosto 5 de 2009)

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Siembra o Cultivo de Microorganismos.

La siembra es el proceso mediante el cual se toma una porción de una población de

microorganismos, denominada inoculo, y se lleva a un medio de cultivo para que prolifere.
Los medios de cultivo sólidos y líquidos son los más utilizados en los diferentes tipos de
siembra (siembra por aislamiento, siembra masiva, siembra en fondo, siembra en
superficie, etc..).

En el caso de esta práctica nos enfocaremos en algunas técnicas en donde no solo se logran
mantener a los microorganismos sino también llegar a tener colonias aisladas para
posteriormente lograr un cultivo puro. Estas técnicas serán la de “Agotamiento por
Estrías” para bacterias y levaduras junto con la de “Punción Central” para hongos
miceliales. En estas técnicas, los microorganismos generan colonias separadas, ya que se
parte de un cultivo ya crecido, en donde varias células (microorganismos) van siendo
separadas hasta quedar muy pocas o una sola, la cual en condiciones optimas de
crecimiento se reproducirá y originara la forma macroscópicamente denomina colonia
aislada. Al ser una célula la que origina la colonia, se denomina Unidad Formadora de
Colonia (UFC). Dicha colonia contiene gran número de individuos, los cuales al tener la
particularidad de provenir de un solo microorganismo, son genéticamente similares entre sí.

La siembra en medio líquido (caldo) sirve para mantener a los microorganismos pero no
permite lograr un aislamiento debido a la imposibilidad de ver colonias formadas.

PROCEDIMIENTO

MATERIALES Y REACTIVOS

Cultivo de levadura.
Cultivo hongo micelial.
Cultivo de bacteria
Asa redonda.
Asa recta gruesa.
Asa recta delgada.
Cajas de agar Nutritivo o PC.
Cajas de agar OGYE, YGC o PDA.
Tubos con caldo BHI.
Tubos inclinados de agar Nutritivo o PC.
Tubos inclinados de agar OGYE, YGC o PDA.
Mechero.

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Como primera medida lávese las manos y tenga puesto los elementos de protección. Desinfecte el
área de trabajo y finalizado el laboratorio desinfecte de nuevo. Tenga en cuenta que nunca debe
abrirse la caja de Petri más de un tercio y debe trabajar siempre cerca al mechero.

A continuación se le explicar los tipos de siembra que va a realizar. Antes de iniciar determine
cuales medios de cultivo va a sembrar y para que microorganismo van dirigidos. Marque cada
presentación de medio de cultivo (caja de Petri, tubo inclinado, tubo recto y caldo) con el tipo
microorganismo que va a sembrar, el tipo de siembra y el asa que debe utilizar.

1. SIEMBRA DE BACTERIAS.

1.1. SIEMBRA DE ESTRÍAS POR AGOTAMIENTO.

Este es un procedimiento para aislar fácilmente bacterias ya que su propósito es el de obtener, a

partir de un elevado número de bacterias, una cantidad reducida de estas, separadas sobre la
superficie del medio de cultivo. Si lo desea realice para guiarse una plantilla en una hoja copiando
la circunferencia de la base de una caja de Petri y dibujando el esquema de siembra (Figura 3).

Figura 3. Esquema de siembra de estrías por agotamiento (Izquierda. Fuente: propia). Proceso de siembra. Tomado de:
http://www.unmsm.edu.pe/veterinaria/laboratorios/LMYP/images/siembra%20bacteriana.jpg (Derecha. Septiembre 20 de 2015)

Ponga la plantilla bajo la base de la caja con medio de cultivo en caja de Petri que va a sembrar. El
procedimiento para este tipo de siembra es el siguiente:

Usando un asa redonda, previamente calentada en la llama del mechero y enfriada

posteriormente en el borde de la caja o en el tubo del cultivo bacteriano suministrado, tome
una muestra de la bacteria.

Esparza suavemente la bacteria que quedo en el asa sobre un medio de cultivo en caja de
Petri, realizando tres o cuatro líneas paralelas en una sola dirección 1

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Caliente nuevamente el asa en la llama del mechero y enfríela en el borde de la caja que
está sembrando. Dese cuenta que ya no debe volver a tomar bacteria del cultivo
suministrado.

Realice un nuevo grupo de líneas paralelas atravesando las anteriormente realizadas 2

Caliente nuevamente el asa en la llama del mechero y enfríela en el borde de la caja que
está sembrando.

Realice un nuevo grupo de líneas paralelas atravesando las anteriormente realizadas 3

Caliente nuevamente el asa en la llama del mechero y enfríela en el borde de la caja que
está sembrando.

Realice una línea en zigzag atravesando las líneas anteriormente realizadas 4

Cierre la caja, caliente nuevamente el asa en la llama del mechero para eliminar residuos de
bacterias y aliste la caja para incubación (30° C por 72 horas). Una vez incubada evalúe la
técnica y pureza de la siembra.

1.2. SIEMBRA POR PUNCIÓN Y ZIGZAG EN TUBO INCLINADO

Este es un procedimiento apropiado para mantener cepas de microorganismos al ocupar poco

espacio (Figura 4).

Figura 4. Esquema de siembra por punción y zigzag en tubo inclinado.

Tomado de http://mediateca.educa.madrid.org/imagen/ver.php?id_imagen=376z2nfjrrswn9hl ((Septiembre 20 de 2015)

En el caso de los tubos debe flamear en la llama del mechero la boca del tubo, al inicio
cuando quite la tapa y al finalizar el procedimiento antes de taparlo nuevamente.

Usando un asa recta delgada, previamente calentada en la llama del mechero y enfriada
posteriormente en el borde de la caja o en el tubo del cultivo bacteriano suministrado, tome
una muestra de la bacteria.

Introduzca el asa con la bacteria en el fondo del tubo con el agar inclinado (punción) y una
vez lo saque realice un zigzag sobre la parte plana del medio.

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Tape el tubo, caliente nuevamente el asa en la llama del mechero para eliminar residuos de
bacterias y alístelo para incubación (30° C por 72 horas). Una vez incubada evalúe la
técnica y pureza de la siembra.

1.3. SIEMBRA EN MEDIO LÍQUIDO (CALDO)

Este es un procedimiento fácil de realizar pero al no permitir visualizar colonias no se puede saber
si esta puro a simple vista por lo que requeriría cerciorarse haciendo una tinción para visualizarla al
microscopio.

En el caso de los tubos debe flamear en la llama del mechero la boca del tubo, al inicio
cuando quite la tapa y al finalizar el procedimiento antes de taparlo nuevamente.

Usando un asa redonda o recta delgada, previamente calentada en la llama del mechero y
enfriada posteriormente en el borde de la caja o en el tubo del cultivo bacteriano
suministrado, tome una muestra de la bacteria.

Introduzca el asa con la bacteria en el caldo y revuelva.

Tape el tubo, caliente nuevamente el asa en la llama del mechero para eliminar residuos de
bacterias y alístelo para incubación (30° C por 72 horas). Una vez incubada evalúe si hubo
crecimiento (turbidez).

2. SIEMBRA DE HONGOS LEVADURIFORMES (LEVADURAS).

Debido a que este microorganismo en forma y apariencia de las colonias es similar a las bacterias,
debe sembrarlo por la técnica de Estrías por Agotamiento (1.4) y por Punción y Zigzag en tubo
inclinado (1.5) en los medios para hongos suministrados.

3. SIEMBRA DE HONGOS MICELIALES

3.1. SIEMBRA POR PUNCIÓN CENTRAL.

Este es un procedimiento para aislar fácilmente hongos miceliales. Seleccione un tipo de hongo con
las características de tipo micelial, evite escoger una colonia que este sobrelapada con otra para así
lograr un cultivo puro.

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Usando un asa recta gruesa, previamente calentada en la llama del mechero y enfriada
posteriormente en el borde de la caja o en el tubo del cultivo de hongo suministrado, tome
una muestra del hongo cortando con el asa un trozo (3 x 3 mm) con todo y agar.

Coloque el trozo del hongo en el centro de un medio de cultivo en caja de Petri con agar
para hongos

Cierre la caja, caliente nuevamente el asa en la llama del mechero para eliminar residuos de
hongo y aliste la caja para incubación (25° C por 8 días). Una vez incubada evalúe la
técnica y pureza de la siembra.

3.2. SIEMBRA POR PUNCIÓN CENTRAL EN TUBO INCLINADO

Este es un procedimiento apropiado para mantener cepas de microorganismos al ocupar poco

espacio (Figura 5).

Figura 5. Esquema de siembra por punción central en tubo inclinado.

Tomada de http://mediateca.educa.madrid.org/imagen/ver.php?id_imagen=xl5b2kx7vkrftz7i (Septiembre 20 de 2015)

Seleccione un tipo de hongo con las características de tipo micelial, evite escoger una colonia que
este sobrelapada con otra para así lograr un cultivo puro.

Usando un asa recta gruesa, previamente calentada en la llama del mechero y enfriada
posteriormente en el borde de la caja o en el tubo del cultivo de hongo suministrado, tome
una muestra del hongo cortando con el asa un trozo (3 x 3 mm) con todo y agar.

Coloque el trozo del hongo en el centro de la parte plana del tubo inclinado.

Tape el tubo, caliente nuevamente el asa en la llama del mechero para eliminar residuos de
bacterias y alístelo para incubación (25° C por 8 días). Una vez incubada evalúe la técnica y
pureza de la siembra.

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BIBLIOGRAFIA

Pitt JI, & Hocking AD. (1997). Fungi and Food Spoilage. 2º ed. Blackie Academic &
Professional, London. Cap. 4.

Textos Relacionados:

Madigan, M ; Martinko, J & Parker, J. (2004). Brock: Biología de los Microorganismos.

10° edición. Prentice Hall.

Rodríguez, F (2010). Prácticas de Microbiología. Licenciatura de Farmacia. Universidad

Miguel Hernández. Páginas 18 – 19.