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    Tecnica de Analisis

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    katheryn pilco
    Este documento presenta una guía de práctica de laboratorio para estudiantes de la carrera de Laboratorio Clínico e Histopatológico de la Universidad Nacional de Chimborazo. La guía describe una práctica sobre técnicas de análisis cuantitativos, con objetivos de conocer las técnicas cinéticas multipunto y de punto final. Explica los fundamentos teóricos de estos métodos, los materiales y procedimientos requeridos, y concluye resumiendo las diferencias entre las técnicas.

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    Este documento presenta una guía de práctica de laboratorio para estudiantes de la carrera de Laboratorio Clínico e Histopatológico de la Universidad Nacional de Chimborazo. La guía describe una práctica sobre técnicas de análisis cuantitativos, con objetivos de conocer las técnicas cinéticas multipunto y de punto final. Explica los fundamentos teóricos de estos métodos, los materiales y procedimientos requeridos, y concluye resumiendo las diferencias entre las técnicas.

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    UNIVERSIDAD NACIONAL DE CHIMBORAZO

    FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD


    CARRERA DE LABORATORIO CLÍNICO E
    HISTOPATOLÓGICO

    {GUÍA DE PRÁCTICA DE LABORATORIO


    PERÍODO ACADÉMICO OCTUBRE 2019 - MARZO 2020
    ASIGNATURA ANÁLISIS CLÍNICO SEMESTRE: 6to PARALELO: Único
    NOMBRE DEL DOCENTE MGS. ELENA BRITO
    FECHA 29 de Octubre del 2019
    NÚMERO DE PRÁCTICA 03 HORA: 18H00-21H00 DURACIÓN: HORAS
    GRUPO 1 GRUPO 2
    1. ALVAREZ ANA 15. VALLE ARIEL
    2. SARSOZA JENIFFER 16. GILER CARLOS
    3. PACHECO SEBASTIAN 17. IBARRA ANGEL
    4. ARÉVALO JOSELINE 18. GOMEZ SHIRLEY MARIELA
    5. BARRAGÁN JOSELYN 19. LUPERA JEAN
    6. GUERRA MÓNICA 20. LUNAVICTORIA JULIO
    NOMBRE DE LOS 7. CHIMBOLEMA ERIKA GRUPO 3
    ESTUDIANTES. 8. ERAZO CARLOS 21. CAIZA KATHERINE BRIGGITH
    9. LOMBEIDA KATHERINE 22 CUNALATA EVELYN
    10. OBANDO JOSELYN 23. CHIMPANTIZA JOSELYN
    GRUPO 2 24 CUNALATA ANA ELIZABETH
    11. ALCOSER ODALIS 25. ROMERO ERIKA ESTHEFANÍA
    12. CUJIGUALPA KAREN 26. PAZMIÑO ERICK ANDRÉS
    13. LÓPEZ MIREYA 27. LOMBEIDA XAVIER
    14. GUALÁN MARTHA
    LUGAR DE LA PRÁCTICA LABORATORIO E200
    TÍTULO DE LA UNIDAD UNIDAD 1.
    TEMA DE LA PRÁCTICA TÉCNICA DE ANALISIS

    RESULTADO DE APRENDIZAJE.
    Aplica conocimientos teórico-prácticos mediante procedimientos y técnicas manuales y/o automatizadas de análisis de laboratori
    en las diferentes áreas: Hematología, Bioquímica, Serología e Inmunología, Uroanálisis, Microbiología, Parasitología, Toxicología
    Terapia Transfusional, Citología y Técnicas Histológicas, Técnicas forenses y Biología molecular en muestras biológicas para forma
    profesionales competitivos.

    OBJETIVO GENERAL Conocer las diferentes técnicas de análisis cuantitativos

     Conocer el fundamento de las técnicas cinética multipunto


    Objetivos específicos
     Conocer el fundamento de las técnicas cinética punto aparte

    FUNDAMENTO TEÓRICO:
    Métodos cinéticos
    Consisten en medir la absorbancia varias veces con intervalo de minutos. Permite comprobar que realmente estas en la zona linea
    de la curva, zona ideal para la determinación. Si se detectan desvíos de la linealidad se puede despreciar alguna de las medidas finale
    de la absorbancia. En muchas reacciones enzimáticas participan como cofactores los complejos NAD- NADH o NADP – NADPH
    y en esta participación se basan muchos métodos analíticos
    Métodos a punto final.
    Se ponen en contacto los reactivos que aportan al sustrato y la amuestra biológica que aporta el enzima y tras un periodo de incubació
    que supere el periodo de retardo se mide la absorbancia.
    Al cabo de un tiempo establecido se detiene la reacción y se vuelve a medir la absorbancia. No es frecuente este tipo de técnica a
    presentar los inconvenientes de suponer que la reacción es lineal y la cinética de orden cero, para que la velocidad no dependa de l
    concentración de sustrato, lo que no ocurre siempre.
    Se incuba la muestra y el reactivo durante un tiempo determinado y a una temperatura determinada para que se complete totalment
    la reacción, de tal forma que la sustancia que buscamos debe consumirse totalmente. Si no fuera así y quedase parte de la sustanci
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    FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD
    CARRERA DE LABORATORIO CLÍNICO E
    HISTOPATOLÓGICO

    sin consumir, al medir el producto, estaríamos midiendo menos cantidad de la que realmente hay. Por lo tanto se mide al final de u
    tiempo fijo de incubación.
    La concentración de una sustancia es igual a la absorbancia por un factor llamado “Factor de Calibración (K)”, que coincide con l
    pendiente de la recta de calibración
    Un método frecuentemente usado para la corrección de la interferencia espectral es la medición de una típica reacción de punto fina
    como lo es la reacción cinética de dos puntos. Si se monitorea la absorbancia de una reacción colorimétrica no instantánea en funció
    del tiempo, se observa una curva de reacción. Una reacción de punto final se monitorea a un solo punto de tiempo, cuando la reacció
    casi se ha completado .Si no hay interferencias espectrales, la curva de reacción debería pasar por el origen. Si existe este tipo d
    interferencia, la curva será paralela a la original, pero sesgada hacia valores más elevados debido al color endógeno de la muestra
    Si se usa un blanco de muestra para restar el color endógeno, se obtendrá una línea idéntica a la de la muestra que no contien
    interferencias. En un ensayo cinético de dos puntos, la absorbancia es medida a dos puntos diferentes de tiempo; cuando (1) e
    desarrollo final de color no ha ocurrido y de hecho puede ser pequeño y, (2) cuando la respuesta de absorbancia versus tiempo e
    todavía lineal. La lectura inicial se toma realmente cuando casi no ha ocurrido formación de color. De esta manera, cualquie
    absorbancia a este tiempo es principalmente ocasionada por interferentes espectrales endógenos. Después de un tiempo corto se tom
    una segunda lectura cuando se ha formado solamente una pequeña cantidad de color y la respuesta de absorbancia versus tiempo e
    todavía lineal .Esta absorbancia por lo tanto incluye la del color endógeno original y la del color producido debido a la reacció
    analítica específica. Al substraer la primera lectura de la segunda, la delta de absorbancia calculada (DA) es causada solamente po
    el color específico formado por la reacción analítica. En la curva estándar basada en los análisis cinéticos se grafica el cambio en l
    absorbancia (DA) versus la concentración .En esta curva estándar la presencia de un interferente coloreado, no reactivo, endógeno
    no tiene efecto. Por consiguiente no se necesita hacer una medición separada de blanco de muestra; una reacción cinética de do
    puntos es por sí misma un blanco cuando no hay cambio en la naturaleza del interferente durante la reacción. Esta es una técnic
    importante cuando se están desarrollando análisis químicos automatizados en un gran número de muestras.

    MATERIALES Y MÉTODOS
    Equipos Materiales Reactivos
    Espectrofotómetro Tubos de ensayos Colesterol
    suero
    PROCEDIMIENTO / TÉCNICA:
    ESQUEMA DE PIPETEO CINETICA PUN TO FINAL (COLESTEROL)

    RESULTADO (Gráficos, cálculos, etc.)

    OBSERVACIONES

    CONCLUSIONES
     La técnica cinectica multipunto consisten en medir la absorbancia varias veces con intervalo de minutos. Permite comproba
    que realmente estas en la zona lineal de la curva, zona ideal para la determinación. Si se detectan desvíos de la linealidad s
    puede despreciar alguna de las medidas finales de la absorbancia.
     Una reacción de punto final se monitorea a un solo punto de tiempo, cuando la reacción casi se ha completado .Si no ha
    interferencias espectrales, la curva de reacción debería pasar por el origen. Si existe este tipo de interferencia, la curva ser
    paralela a la original, pero sesgada hacia valores más elevados debido al color endógeno de la muestra.
    .
    RECOMENDACIONES

    CUESTIONARIO:
    1. Por qué se llama técnica cinética punto final?
    2. En las técnicas cinéticas multipunto como se determina que la misma se encuentra fuera de linealidad?

    BIBLIOGRAFÍA

    1. Contreras, J. (s.f). Espectrofotometria. Disponible en: https://jorge-contreras.webs.com/guia


    espectrofotometria.pdf
    2. file:///C:/Users/Usuario/Downloads/Guia_TP_2_Quimica_II_2010.pdf
    3. De la Torre, F. Apuntes de espectofotometria. Disponible en
    http://www.bioquimica.ucv.cl/paginas/central/bioquimica%20clinica/apuntes%20de%20espectrofotometria.pd
    UNIVERSIDAD NACIONAL DE CHIMBORAZO
    FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD
    CARRERA DE LABORATORIO CLÍNICO E
    HISTOPATOLÓGICO

    DIRECTOR/A DE CARRERA DOCENTE RESPONSABLE DEL LABORATORIO


    Mgs. Ximena Robalino Mgs. Elena Brito Lic. Franklin Ramos

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